JPH06506909A - 血清における高コレステロールレベルを低めるための物質及びその物質を調製するための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 血清における高コレステロールレベルを低めるための物質及びその物質を調製す るための方法 血清における高コレステロールレベルは、脂肪の腸内代謝を変えることによって 効果的に低められ得る。この場合、その目的は、トリグリセリド、コレステロー ル又は胆汁酸の吸収を妨げることであり得る。一定の植物ステロール、たとえば β−シトステロール（２４−エチル−５−コレステノー３β−オール）及びその 硬化された形、β−シトスタノール（２４−エチル−５α−コレスタン−３β− オール）は、腸からの食物性コレステロールの吸収を減じることによって血清コ レステロールレベルを低めることが多くの研究において観察されている（１〜２ ５）。植物ステロールの使用は、植物ステロールが植物脂肪及び油の天然成分で あるので、安全であると思われる。

植物ステロール自体は腸から吸収されず、又はそれらはひじょうに低い濃度で吸 収される。冠状動脈血栓症の低められた発生率は、血清コレステロール、特にＬ ＤＬコレステロールの低下に明白に関連している。高血清コレステロール値は、 冠状動脈血栓症の危険性の最っとも有意な単一の指示体である。

コレステロール吸収の程度は、遺伝的特性、すなわちアポタンパクｉＥ−表現型 に依存する。アポタンパク質Ｅは、血清脂肪タンパク質に属し、そしてシステム 中でのコレステロールの輸送に関与するタンパク質である（２Ｇ）。アポタンパ ク質Ｅ、すなわち吸収に影響を及ぼすリポタンパク質の合成に関連する対立遺伝 子中で、ランダムに対で組合している機知の３種の型、すなわちｅ２．ｅ３及び ｅ４が存在する。対立遺伝子は、合計６種の異なった組合せで形成できる。副指 数の合計が高いほど、血清における、コレステロールの吸収性がより良好で且つ コレステロール、特に悪いＬＤＬコレステロールのレベルが高い（２７）。ｅ４ 対立遺伝子は、フィンランド人の遺伝的因子間で過剰表現され、その結果、その 割合は、多くのヨー口・ンパ人集団に比較してほとんど２倍である（２８）。フ ィンランド人は、食物性欠陥及び脂肪並びに高−コレスチロール食物に対して実 際、例外的に敏怒である。

血清コレステロールレベルは、食物手段により、消化される脂肪の量及びタイプ 及びコレステロール摂取の量に注意することによって下げられ得る。しかしなが ら、実際、それらの手段は必ずしも満足する最終結果を導びくものではない。現 在のコレステロールレベルよりも低い血清コレステロールレベルを達成するため に、全人口のために適切な他の方法が研究されるべきである。食物の繊維含有率 を高めることは、制限された効果の方法である。食物における可溶性繊維のコレ ステロール低下効果は、胆汁酸の結合及び除去に基づいている。コレステロール の吸収は血清におけるコレステロールレベルの調節において基本的な有意さのも のであるので、コレステロールの吸収が阻止され又は減じられ得る方法を開発す ることを目的とすることが不可避である。

Ｐｏ１ｌａｋは、摂取された植物ステロールがヒトにおいて血清コレステロール のレベルを低めたことを示した（１）。同しことが実験動物においても以前に観 察されている（２．３）。多量の投与量の植物ステロールが血清コレステロール のレベルを最良でも１０〜２０％低めることが多くの研究において観察されてい る（４．５）。それらの実験においては、結晶形での多量の、たとえば２．４ｇ ／日までのβ−シトステロールが使用された（６）。ある実験においては、血清 コレステロールレベルが低い量の投与量によってさえ、有意に低められた（７） 。但し、脂肪酸エステルの形で投与される少量の可溶性シトステロールは血清コ レステロールをひじょうに効果的に低めるとは思われなかった（８）、シトステ ロール調製物は、一般的に長期使用に十分に耐えられた（９）。

天然の植物ステロールは、それらの構造においてコレステロールに類似する。コ レステロール分子と植物ステロール分子との間の差異は主に、基本骨格の側鎖の 構造において見出される。日常の飲食物は、植物ステロール１００〜３００　ｍ ｇ１日を含む。飲食物における植物ステロールのほとんどはβ−シトステロール であり、そして約１／３がカンペステロールである。少量の飽和５α−シトステ ロールがまた食物に存在する。通常、特に血清中のカンペステロール濃度は、コ レステロールの吸収の程度に影響を与える（１０．１１．１２）　。

飲食物における植物ステロールの量の変動は血清コレステロールレベルに影響を 与えるが、しかしこれは、多くは研究されていない分野である。植物ステロール は腸からはほとんど吸収されない、植物システム中にかろうじて吸収される植物 ステロール（ステロールの１０％以下）　（３０，３１，３２）は、胆汁に及び それを通して便に排泄される。現在、ガスクロマトグラフィ一方法により食物、 血清又は便サンプルからステロールレベルを測定することは容易である。血清中 のレベルは、飲食物に由来する植物ステロール量に及びステロールの吸収の有効 性に一部依存する。一般的に、血清中の植物ステロールレベルは血清コレステロ ールレベルの１　／３００以下で存続する。

なぜならば、吸収された植物ステロール画分は胆汁にシステムから排泄されるか らである。

さらに多くの摂取された用量の植物ステロールは血清中に植物ステロールレベル を示さない。その値は、ヒトにおいて、植物ステロール吸収容量が急速に飽和さ れるので、正常なレベルで存続する。

血清植物ステロールレベルは、冠状動脈血栓症に関係するある疾病、たとえば脳 讃黄色腫症及びシトステローレミア（３３，３４，３５）において有害レベルま で高まる。それらの疾病の発生率は、百万人の人口当たり最大でも数人である。

それらの疾病の１人のケースもフィンランドにはまだ観察されていない。高い植 物ステロール値は、ある肝疾患を有する患者において時々観察される（３６）。

コレステロールの代謝の研究は、シトステロールが腸からの内因性及び食物性コ レステロールの両者の吸収を阻害することを示した（１３．１４）。この結果と して、便における中性ステロイドの排泄が高まり、これは肝臓におけるコレステ ロールの欠乏を導びき、そしてそれを通して、低められた血清コレステロールレ ベルを導びく。

他方、シトステロールは胆汁酸の吸収に影響を与えない（１３）。

動物に対する実験に基づけば、シトステロールの作用は胆汁酸ミセルに食物コレ ステロールを移動させるその能力に基づいていると思われる（１５．１６．１７ ）。類似する結果がヒトにおいても得られた（３７）　、種々の植物ステロール は、コレステロールの吸収に異なった手段で影響を与えることが示されている（ １９．３８）。実験動物に対して行なわれたこれまでの研究は、シトスタノール がコレステロール吸収の最っとも効果的なインヒビターであり（３Ｂ）　、そし てそれ自体はとんど非吸収性である感じを与える。さらに、６種の対象に対する 未制限研究は、遊離シトステロール（１，５ｇ／日）が４週で血清コレステロー ル（主にＬＤＬコレステロール）を１５％はど低めたことを示した。２週間の中 断の間、コレステロール値は前のレベルに戻った（２０）　、はとんどの植物ス テロール調製物は、多くの異なった植物ステロールを含む。コレステロールの吸 収に対する植物ステロール混合物の効果は、それら自体の吸収と同じように変化 する（２１．２２．２３）。

これまで行なわれて来た研究は、投与される植物ステロールのどの形（結晶、懸 濁液、顆粒）が、血清コレステロールレベルを低めることにおいてそれらの効力 に影響を及ぼすかの研究に主に集中して来た。結晶性植物ステロールは、食物管 においてミセル相で有意な程度、溶解せず、そして従って、コレステロール吸収 を効果的に阻害することができない。油及び脂肪は、遊離ステロールを制限され た程度まで溶解することができる。溶解された形においてのみ、ステロールはコ レステロールの吸収を阻害する。Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ及び共同研究者（２４）に よれば、シトスタノールは、侵入実験において、コレステロール８２％の吸収を 阻害し、そしてシトステロールは吸収を５０％阻害した。

ある研究においては、シトステロールの脂肪酸エステル、たとえば脂肪に溶解さ れているシトステロールアセテート又はオレエート、又はスチグマステロールオ レエートが使用された。ラットに対する実験において、８％までのステロール濃 度を有するこのタイプの“油”は、コレステロールの吸収を２０〜４０％滅じた （２２）。高コレステロールの食事（５００ｍｇ　７日）の間、脂肪に溶解され るシトステロールオレエート（２ｇ７日）が試験対象におけるコレステロールの 吸収性を平均３３％減じた（２５）。同じ研究において、食物と低用量（１ｇ／ 日）で混合されるシトステロールは、コレステロールの吸収を４２％滅じた。

ドイツ特許（Ｄｅｕ　ｔｓｃｈｅｓの特許、公開筒２０３５０６９号／１月２８ 日、１９７１）は、ヒトにおける血清コレステロールレベルを下げる目的で、植 物ステロール脂肪エステルの調理用油への添加に関する。前記特許は、遊離ステ ロールのエステル化に使用するために、食品種の製品の調製のための必要条件を 決して満たさない方法を提案する。その特許によれば、エステル化は遊離ステロ ールと脂肪酸無水物との油で行なわれ、そして過塩素酸が触媒として作用する。

使用される触媒及び試薬は、食物工程に許容され得る。さらに、前記特許は、天 然の植物ステロールの脂肪酸エステルのみを言及する。

食品として又は食品のための添加剤として向けられる製品の製造のために許容さ れ得ない多くのｔｊ：薬が、ステロール脂肪酸エステルの調製に使用されて来た 。たとえば塩素（３９）　、臭素（４０）　、塩化チオニル（４１ン又は脂肪酸 の無水誘導体の使用が通常である。これまで特許された方法のうち、化学的エス テル変換技法により油及び脂肪に存在するステロールのエステル化についてのＢ ａ　Ｉ　ｔｅａ　（Ｄｅｕ　ｔｓｃｈｅｓＰａｔｅｎｔａｍｔ、　Ｏｆｆｅｎｌ ｅｇｕｎｇｓｓｃｈｒｉｆｔ　２２４８９２１／Ａｐｒｉｌｌ　１１＋　１９７ ４）の方法のみが、食品加工の基準を満たす。前記特許においては、遊離ステロ ール及び過剰の脂肪酸エステルが油又は脂肪の混合物に添加され、その後、その 全脂肪混合物が通常知られているエステル交換技法によりエステル交換される。

本発明は、血清中のコレステロールレベルを下げるために完全に異なったタイプ のステロールの使用に関する。包含されるものは、５α−飽和スチロールの脂肪 酸エステル、特にシトスタノール脂肪酸エステル（シトスタノール＝２４−エチ ル−５α−コレスタン−３β−オール）であり、これは特定の効能で血清中のコ レステロールレベルを低めることが観察されている。前記エステルはそれだけで 調製され又は使用され得、又はそれらは食品、特に食品の脂肪部分に添加され得 る。シトスタノール脂肪酸エステル混合物は、市販のβ−シトステロール混合物 （シトステロール−２４−エチル−５−コレステノー３β−オール）を硬化する ことによって調製される。

β−シトスタノールは、有機溶媒中、Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下でβ−シトステロー ルを硬化することによる従来のコレステロール硬化技法により調製され得る（４ ３）。この混合物は、ＦＤへの認可を有する（Ｃｙｔｅｌｌｉｕ、　Ｅｌｉ　Ｉ ｊｌｌｙ）、　９９％以上の硬化度がその反応において達成される。その硬化に 使用される触媒は膜フィルターにより除去され、そして得られたシトスタノール は結晶化され、洗浄され、そして乾燥せしめられる。本発明によれば、カンベス タノール約６％を含むβ−シトスタノール混合物は、通常知られている化学的エ ステル変換技法により異なった脂肪酸エステル混合物によりエステル化される（ ４４．４５．４６）　、いづれがの植物油の脂肪酸のメチルエステル混合物が、 その反応に使用され得る。１つの例はナタネの種子油及びメチルエステルの混合 物であるが、しがし約２〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸は使用できない。ステ ロール脂肪酸エステルの調製のための本発明の方法は、遊離スタノール以外の物 質、すなわち脂肪酸エステル又は脂肪酸エステル混合物、及び触媒がエステル化 反応に使用されないこれまで特許された方法とは好都合には異なる。

使用される触媒はいづれかの知られたエステル交換触媒、たとえばＮａ−エチレ ートであり得る。

上記に言及されるＢａ　１　ｔｅｓの方法とは異なって、本発明で使用される方 法においては、脂肪自体がエステル交換されないこともまた注目される。この場 合、脂肪調製物又はある他の食品の脂肪部分はその天然の性質を保持するであろ う。エステル交換混合物は脂肪含有食品に直接的に添加され得、又はそれ自体使 用され得ることがさらに注目されるべきである。その混合物のスタノール部分は 非吸収性であるので、ステロール脂肪酸エステル混合物のエネルギー含有率は、 脂肪酸組成物に依存して、従来の油又は脂肪のエネルギー含有率のたった２０〜 ４０％である。従って、その混合物は、食品のエネルギー含有率を下げる物質と しても都合良く使用され得る。

コレステロール吸収及ヒ血清コレステロールレベルに対スるβ−シトスタノール 脂肪酸エステルの作用はこれまで研究されたことがない、この研究は、血清中の 植物ステロール濃度が、ナタネ種子油に溶解される、シトステロール（＆ｌｌ成 ：β−シトスタノール９４％及びカンペステロール６％）及びシトステロールの 硬化形（両者はａ）遊離形及びｂ）脂肪酸エステルの形で存在する）にＪりいか に影響されるかについて調べた。この研究の試験配置は、追加ｌの流れ図１に示 される。すべてのグループのための第１段階は、対照のグループのためのナタネ 種子油介在（５０ｇ／ｄ）、試験の接続期間のためのナタネ種子油介在及び他の グループのための、ナタネ種子油に添加される試験配置スクムに従っての化合物 であった。

追加２における表２は、食品中のβ−シトスタノール濃度の上昇が血清中のβ− シトステロール及びカンペステロールの両者の濃度を下げるが、しかし血清β− シトスタノール濃度の明白な変化を生成しなかったことを示す。その結果はまた 、可溶性形、すなわち脂肪酸エステルの形でのβ−シトスタノールの摂取が同じ 用量で摂取される遊離β−シトスタノールよりもより効果的に植物ステロールの 吸収を減じたことを示す。β−シトスタノールの脂肪酸エステルに関しては、明 白な用量応答がさらに観察される。β−シトスタノールはまた、それらの濃度の 低下につれて見出され得る、β−シトステロール及びカンペステロールの吸収を 阻害することが明らかである。

それぞれ、合計の及びＬＤＬ血清コレステロール濃度及びコレステロール吸収に おけるスタノール添加により引き起こされる変化がまた測定された。対照グルー プは、スタノールの添加を伴わないで通常のナタネ種子油を消費した。追加３に おける表２は、コレステロール吸収が、スタノール摂取が比較的低く、すなわち ８９５ｍｇ／日であっても、β−シトスタノール脂肪酸エステル混合物（２７， ４％）により効果的に滅しられたことを示す。対照グループのコレステロール吸 収は変化しなかった。対照グループに比較して、血清中のコレステロール濃度に 対する遊離β−シトスタノール及びβ−シトスタノール脂肪酸エステル混合物の 作用が追加４の表３に与えられる。

β−シトスタノール脂肪酸エステル混合物は、遊離及びβ−シトスタノールより もより効果的に合計コレステロール及びＬＤＬコレステロールの両者を低めた。

ナタネ種子油に溶解されるβ−シトスタノール脂肪酸エステル混合物（３，２ｇ のβ−シトスタノール／日）は、ナタネ種子油のみよりも、合計コレステロール を９．５％、及びＬＤＬコレステロールを１１．６％減じた。それぞれ、ＩＩＤ Ｌ／ＬＤＬコレステロールの割合が０．３２から０．５２に有意に上昇した。

行なわれた研究は、たとえば食品脂肪へのβ−シトスタノール脂肪酸エステルの 添加により、有意な利点が天然の栄養物において及び高コレステロール症の処理 において達成され得ることを明白に示す、なぜならば１）前記混合物が血清中の コレステロール値を下げ、２）混合物が血清植物ステロール濃度を高めず、３） 混合物が通常の食物を調理することにおいて、脂肪置換体として多量（０，２〜 ２０ｇ　／　ｄ　）に毎日使用され得、それによって脂肪からのエネルギーの摂 取が低下するからである。

研究において観察される、β−スタノール脂肪酸エステルにより引き起こされる 脂質変化は、健康の観点からひじように有意であると思われる。その結果の有意 性は、通常の調理法及び通常の飲食物の部分として食物調製物と共に前記化合物 を使用する可能性により強調される研究結果は、介在飲食の間、血清中のステノ ール化合物が上昇せず、そして血清中の他の植物ステロールのレベルが低下する ことを示す、従って、前記β−スタノールエステル混合物はまた、すべてのステ ロールを容易に吸収し、又はステロール排泄に障害を有する少数の個人のために も安全である。さらに、毎日の脂肪置換は個人のエネルギー供給を低める。なぜ ならば効果的なステノール化合物は吸収されず、すなわちそれは脂肪の非エネル ギー合成部分として作用するからである。脂質可溶性ビタミンの吸収又は血清中 のビタミンレベルを妨げる前記β−スタノールエステル混合物の証拠は存在しな い。

脂肪含有製品において種々の脂肪及び油の一部としてのシトスタノール脂肪酸エ ステル混合物の使用は広範である。なぜならばその混合物の物性が、その混合物 中の脂肪酸組成を変えることによって容易に変性され得るからである。この他に 、β−スタノール脂肪酸エステル混合物の脂肪酸組成が多量の七ツマ−及びポリ エンを含むように選択され、それによって血清中のコレステロール吸収ルを低め ることにおけるその効能が高められるからである。

β−シトスタノール脂肪酸エステル混合物は通常の食物に属する生原料及び食品 産業において一般的に使用される製造方法を用いて調製されるので、化合物の製 造及び使用に対して障害は存在しない。

β−シトスタノールエステル混合物を、パイロット規模で調製した。６０゛Ｃで 一晩乾燥されたβ−シトスタノール６ｋｇを、ナタネ種子油メチルエステル混合 物８．６ｋｇによりエステル化した。そのエステル化を次のようにして行なった ： β−シトスタノール及びナタネ種子油脂肪酸メチルエステルの混合物を、９０〜 １２０°Ｃで及び５〜１５ｍｍＨＨの真空下で反応容器において加熱した。その 乾燥を、１時間続け、ナトリウムエチレート１２ｇを添加し、そしてその反応を 約２時間続けた。触媒を、混合物に水を添加することによって破壊した。相分離 の後、油相を真空下で乾燥せしめた。

９８％の転換率がその反応で達成された。得られたエステル混合物を、脂肪にお ける添加剤として使用できる。

ナタネ種子油脂肪酸エステルの混合物の代わりに、反応において、メチルエステ ル又はいづれかの植物油の脂肪酸、特に約２〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸の メチルエステル混合物を使用することが可能である。

桝ｌ ナタネ種子油の蒸気ブローの前、例１で調製されたβ−シトスタノールエステル 混合物を、ナタネ種子油に３．６及び１３重量％で添加した。前記脂肪混合物を ６５％で含むマヨネーズを調製した。

マヨネーズ　％ 脂肪混合物　６５．０ 増粘剤　２．０ 酢（１０重量％）３．０ 合計　ｉｏｏ、。

マヨネーズを、Ｋｏｒｕｍａホモナイザーを用いて、機知態様による均質化によ り調製した。

マヨネーズの調製には問題はなく、そして知覚により試験されるそれらの性質は 、従来のマヨネーズの性質とは異ならなかった。

■ユ 油の蒸気ブローの前、例１で調製されたβ−シトスタノールエステル混合物を、 ナタネ種子油に３及び６重量％で添加した。

エステル混合物が添加されたナタ不種子油は、室温で透明のまま存続し、そして それが冷蔵庫温度で貯蔵される場合、永久的な濁りはそれに観察されなかった。

肛 他の油、たとえばヒマワリ、ダイズ、オリーブ及びコーン油をまた、例２及び３ に従って、製品に油として使用できる。

例１で調製されたβ−シトスタノールエステル混合物を、脂肪混合物の蒸気ブロ ーの前、従来のソフトマーガリン（組成ニ一部硬化されたダイズ油３５％、ココ ナツツ油５％、ナタネ種子油６０％）の脂肪部分に添加した。

混合物のＤＰ　（滴点）及びＮＭＲ値を分析した。

ｌ）混合物 ２）混合物＋１０％でのエステル混合物３）混合物＋２０％でのエステル混合物 混合物ＯＰ　ＮＭＲ値（％） （”Ｃ）　１０°Ｃ２０″Ｃ３０°Ｃ３５°Ｃ４０°Ｃ４５”ＣＩ）３１．９　 ２４．２　１１．６　２．７　０．７　０．０　０．０２）３０．４　２１．４ 　１０．０　１．８　０．２　０．０　０．０３）２９．６　２５．４　９．２ 　２．０　０．６　０．０　０．０脂肪８０％を含むマーガリンを、一般的に知 られている方法により調製した。マーガリンの物性及び知覚できる性質は、従来 のマーガリンの性質に対応した。

流れ図１ 介在研究の試験配置。

試験グループ 初期　実験期　継続期間 表１ 実験期間中、ナタネ種子油に添加されたβ−シトスタノールにより血清中の植物 ステロールレベルに引き起こされる変化率（％）、及び継続期間中、β−シトス タノールエステルにより引き起こされる変化率（％） ナタネ種子油に　添加により引き起こされる変化（％）１添加されるスタノール （ｍｇ／ｄ）　カンベ　β−シト　β−シトステロール　ステロール　スタノー ル Ｉ）前記表の変化率は、ナタネ種子油を受けた対照グループにおける％変化によ り修正された。

２）遊離スタノールの量。

Ｘ）変化率は、対照グループの変化率と比較して有意である、Ｐ　＜０．０５゜ 表２ ナタネ種子油及びそれに溶解されるβ−シトスタノールエステルのコレステロー ルの吸収に対する効果 対照　ナタネ種子油　ナタネ種子油 ２９．４　３０．４　＋　３．４ Ｘ）変化率は有意である、Ｐ＜０．０５゜ｔ）変化率は、対照グループの変化率 と比較して有意である、Ｐ　＜０．０５゜ ｌ）遊離スタノールの量。

表３ ナタネ種子油に添加されるβ−シトスタノールの血清におけるコレステロールレ ベルに対する効果 １）変化率は、ナタネ種子油を受けた対照グループにおける％変化率により修正 された。

Ｘ）変化率は有意である、ｐ　＜ｏ、ｏｓ。

ｔ）変化率は、対照グループの変化率と比較して有意である、Ｐ＜０．０５゜ １）Ｐｏｌｌａｋ、ｏ、Ｊ、、Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｃｈｏ ｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｉｎ　ｍａｎ。

Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、７．７０２−７０６．　（１９５：ｌ）。

２）Ｐｅｔｅｒｓｏｎ、　Ｄ＋Ｗ、、　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　５ｏｙｂｅａｎ　 ５ｔｅｒｏｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｅｔ　ｏｎｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　１ｉｖ ｅｒ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｉｎ　ｃｈｉｃｋｓ、　Ｐｒ１ｃ、Ｓｏｃ＋Ｅ ｘｐ。

Ｂｉｏｌ、　Ｍａｄ、、　７８．　１４１−１４７．　（１９５１）。

３）Ｐｏｌｌａｋ、　Ｏ＋Ｊ−、５ｕｃｃｅｓｆｕｌ　ｐｒｅｖａｎｔｉｏｎ　 ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｈｙｐｅｒ−ｃｈｏｌｅｓｔａｒｏｌａｍｉ ａ　ａｎｄ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｅｓ　ｉｎ 　ｔｈｅｒａｂｂｉｔ、　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、　７．　６９６−７０１． 　（１９５３）。

４）Ｆａｒｑｕｈａｒ、　Ｊ、Ｗ、　ａｎｄ　Ｓｏｋｏｌｏｗ、　Ｍ、、　Ｒｅ ５ｐｏｎｓｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　１ｉｐｉｄｓａｎｄ　１ｉｐｏｐｒｏｔｅｉ ｎｓ　ｏｆ　ｍａｎ　ｔｏ　ｂｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｓａｆ ｆｌｏｗｅｒｏｉｌ　−Ａ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍ　５ｔｕｄｙ、　Ｃ１ｒｃｕｌ ａｔｉｏｎ、１７．８９０．　（１９５６）　。

５）Ｇｒｕｎｄｙ、　Ｓ、Ｍ、、　Ａｈｒａｎｓ、Ｅ、Ｈ，Ｊｒ、、　ａｎｄ　 Ｄａｖｉｇｎｏｎ、　Ｊ、、　Ｔｈｅｉｎｔａｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌ ｅｓｔｅｒｏｌ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈｏｌ＠５ｔｅｒｏｌｓｙ ｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｍａｎ、　Ｊ、　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、、１０．３０４ ．　（：Ｌ９６９）。

６）Ｏｓｔｅｒ、Ｐ、、５ｃｈｌｉｅｒｆ、Ｇ　、、Ｈｅｕｃｋ、Ｃ，Ｃ，、Ｇ ｒｅｔｅｎ、Ｈ−。

Ｇｕｎｄｅｒｔ−Ｒｅｍｙ、　Ｕ、、　Ｈａａｓｅ、　Ｗ、、　Ｋｌｏｓｅ、　 Ｇ、、　Ｎｏｔｈｅｌｆｅｒ、　Ａ、。

Ｒａｅｔｚｅｒ、　Ｈ，、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇ、　Ｂ、　ｕｎｄ　Ｓｃｈ ｍｉｄｔ−Ｇａｙｋ、　Ｈ，。

５ｉｔｏｓｔｅｒｉｎ　ｂｅｉ　ｆａｍｉｌｉＭｒｅｎ　Ｈｙｐｅｒｌｉｐｏｐ ｒｏｔｅｉｎＭｍｉｅ　Ｔｙｐエエ、　Ｅｉｎａｒａｎｄｏｍｉｓｉｅｒｔａ　 ｇｅｋｒｅｕｚｔｅ　Ｄｏｐｐｅｌｂｌｉｎｄｓｔｕｄｉｅ、　Ｄｔｓｃｈ、　 Ｍａｄ。

Ｗｓｃｈｒ、ｔ　ユＯＸ、１３０Ｂ−４３１１，（１９７６）。

７）Ｇｒｕｎｄｙ、Ｓ、Ｍ−ｒ　Ｄｉｅｔａｒｙ　ａｎｄ　ｄｒｕｇ　ｒｅｇｕ ｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｍ ａｎ、　ｐｐ、１２７−１５９　ｉｎ　”　Ｌｉｐｉｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ ｇｙ、　Ｖｏｌエエ”、Ｅｄｓ：　Ｐａｏｌｅｔｔｉ、　Ｒａｎｄ　Ｇｌｕｅｃ ｋ、　Ｃ−Ｊ、、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、ＮｅｗＹＯｒｋ、１９７６ ゜ ８）Ｌｅｅｓ、Ａ、Ｍ、、Ｍｏｋ、Ｈ，Ｙ−工、、ＭｃＣ１ｕｓｋｅｙ、Ｍ、Ａ 、、Ｇｒｕｎｄｙ、Ｓ、Ｍ、。

Ｐｌａｎｔ　５ｔｅｒｏｌｓ　ａｓ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｌｏｗｅｒｉｎ ｇ　ａｇｅｎｔｓ：　ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ 　ｗｉｔｈ　ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ　ａｎｄ　５ｔｕｄｉ ｅｓ　ｏｆｓｔｅｒｏｌ　ｂａｌａｎｃｅ、Ａｔｈａｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、 ２８．　３２５−３３８．　（１９７７）。

９）Ｓｃｈｗａｒｔｚｋｏｐｆ、Ｗ、ａｎｄ　Ｊａｎｔｋｅ、Ｈ，−Ｊ、、Ｄｏ ｓｉｓｗｉｒｋｓａｍｋｅｉｔ　ｖｏｎＢｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｉｎ　ｂｅ ｉ　Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｉｎｅｍｉｅｎ　ｄｅｒ　ＴｙｐｅｎエエＡ ｕｎｄ　エより、Ｍｕｎｃｈ、Ｍｅｄ、Ｗｓｃｈｒ、、１２０．１５７５．（１ ９６９）。

１０）Ｔｉｌｖｉｓ、　Ｒ，Ｓ、、　Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ、　Ｔ、Ａ、、　Ｓｅ ｒｕｍ　ｐｌａｎｔ　５ｔｅｒｏｌｓ　ａｎｄｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　 ｔｏ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ、　Ａｐｒ、　Ｊ、　Ｃ １１ｎ。

Ｎｕｔｒ、、４コ、９２−９７．　（１９８６）。

１：Ｌ）Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ、　Ｔ、Ａ、、　Ｔｉ１ｖｉｓ、　Ｒ，Ｓ、、　Ｋ ａｓＭｎｉｅｍｉ、　Ｙ、Ａ、、　Ｓｅｒｕｍｐｌａｎｔ　５ｔｅｒｏｌｓ　ａ ｎｄ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ　ｒｅｆｌｅｃｔ　ｃｈ ｏｌａｓｔｅ−ｒｏｌ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　 ｉｎ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｏｆ　ａ　ｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄ　 ｍａｌｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ、　Ａｍ−Ｊ、　Ｅｐｉｄｅｍ−、１３１，（ １）、２０−３１゜（］−９９０）。

１２）ＦＭｒｋ）ｃｉｌＭ、　Ｍ、Ａ、、　Ｔｉ１ｖｉｓ、　Ｒ，Ｓ、、　Ｍｉ ｅｔｔｉｎｅｎ、　Ｔ、Ａ、、　Ｒａｇｕｌａ−ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ 　ｐｌａｎｔ　５ｔａｒｏｌｓ　１ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉ ｔｈ　ｇｕｔｒｅｓｅｃｔｉｏｎｓ、５ｃａｎｄ、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｌａｂ、■ｎ ｖｅｓｔ、、４８．１５−７２２゜（１９８Ｂ）。

１１）Ｇｒｕｎｄｙ、Ｓ、Ｍ、、Ｍｏｋ、Ｈ，Ｙ、工、、Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ 　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｐｈｙｔｏ−５ｔｅｒｏｌ　Ｓ　Ｏｎ　Ｃｈ　０１　ｅＳ 　ｔｅｒ　０１　ａ　ｂＳ　０ｒｐｔ１０ｎ　ｌｎ　ｍａｎ　ｔ　ｐｐ　−１１ ２−１１８１ｎ”Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ”、Ｅｄ、Ｇ ｒｅｔｅｎ、　Ｈ，、Ｂｅｒｌｉｎ、　Ｈｅｉ　−ｄｅｌｂａｒｇ、Ｎｅｗ　Ｙ ｏｒｋ：　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１９７６１４）Ｋｕｄｃｈｏｄ） ｃａｒ、Ｂ、Ｊ、、）（ｏｒｌｉｃｋ、Ｌ、、５ｏｄｈｉ、Ｈ，Ｓ、、Ｅｆｆｅ ｃｔｓ　ｏｆｐｌａｎｔ　５ｔｅｒｏｌｓ　ｏｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｍ ｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｍａｎ。

Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、２３，２３９．（１９７６）。

１５）Ｉｋｅｄａ、工、、Ｔａｎａｋａ、に、、Ｓｕｇａｎｏ、Ｍ、、Ｖａｈｏ ｕｎｙ、Ｇ、Ｖ、、Ｇａ１ｌ。

ニーＬ−，工ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｂｓｏｒ ｐｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｂｙ　ｐｌａｎセ５ｔｅｒｏｌｓ、Ｊ、Ｌｉｐｉ ｄ　Ｒｅｓ、、２９，１５７１−１５８２．（１９８Ｂ）。

１６）工ｋｅｄａ、工、、Ｔａｎａｋａ、に一、Ｓｕｇａｎｏ、Ｍ、、Ｖａｈｏ ｕｎｙ、Ｇ、Ｖ、、Ｇａ１ｌｏ。

工、Ｌ、、Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅ ｒｏｌ　ａｎｄ　５ｉｔｏｓｔａｒｏｌ　ｆｏｒａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｎ　 ｒａｔｓ、Ｊ、Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、、２９．１５８３（５９２，（１９８８） 。

１７）工ｋｅｄａ、　１．、　Ｔａｎａｂｅ、　Ｙ、　ａｎｄ　Ｓｕｇａｎｏ、 　Ｍ、、　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　５ｉｔｏ−ｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　５ｉｔｏ ｓｔａｎｏｌ　ｏｎ　ｍ１ｃａｌｌａｒ　５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｏ ｌａｓｔ＠−ｒｏｌ、　Ｊ、　Ｎｕｔｒ、　Ｓｃｉ、　Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ、、 　３５．３６１−：１６９．　（１９８９）。

Ａｔｈａｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、　３０．２２７．　（１９７Ｂ）。

ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔａｒｏｌｅｍｉａ、　Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉ ｓ、　６４．２１９−２２３．　（１９８６）。

Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａ ｇ、　１９７６゜ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、　Ｊ、　Ｎｕｔｒ、、　１０７．　 ｕ３９　（１４６，（１９７７）。

Ａｃｔｉｏｎｓ　（Ｓｕｐｐｌ）、　２６．１１７−１２２．　（１９８８）。

ｃｏｌ、、　４０５ｕｐｐ１．１．５５０−５６３．　（１９９１）。

ｍａｎ、　Ａｍ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎｕｔｒ、、　３５．６９７−７００． 　（１９Ｂ２）。

Ｅ　ｐｈｅｎｏｔ’ｙｐｅ、　Ｌａｎｃｅｔ、　２．１２６１．　（１９８８） 。

３０）Ｇｏｕｌｄ、　Ｇ、、　Ａｂｓｏｒｂａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｂｅｔａ− ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ、　Ｔｒａｎｓ、　Ｎ、Ｙ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　２．１２９．　（１９５５）。

Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、　１８．６５２−６６２．　（１９６９）。

Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、、　２６．２０３−２０９．　（１９８５）。

］−３３０，（１９Ｂ９）。

３９）］Ｋｕｋｓｉｓ、　Ａ、、　Ｂｅｖｅｒｉｄｇｅ、　Ｊ、Ｍ、Ｒ，、Ｊ、 　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　２５：１２０９゜ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、　 １６．１４２３（４：ｔｏ、　（１９８６）。

４１）Ｐｒａｂｈｕｄｅｓａｉ、　Ａ、Ｖ、、　Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ｍｅｔｈｏ ｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　 ｅｓｔｅｒｓ、　Ｌｉｐｉｄｓ、１２．２４２−２４４．　（１９７７）。

４２）Ｌｅｎｔｚ、　Ｂ−Ｒ，、Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ、　Ｙ、、　Ｔｈｏｍｐｓ ｏｎ、　Ｔ、Ｅ、、　Ａ　ｓｉｍｐｌｅｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　５ｙｎ ｔｅｓｉｓ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｅｓｔｅｒｓ　ｉｎ　ｈｉｇｈｙ ｉｅｌｄ、　Ｃｈａｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｃｓ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄ ｓ、　１５．２１６−２２１゜（１９７５）。

４：３）Ａｕｇｕｓｔｉｎａ、　Ｒ，Ｌ、　ａｎｄ　Ｒｅａｒｄｏｎ　Ｊｒ、、 Ｅ、＋７．、　Ｔｈａ　ｐａｌｌａｄｉｕｍｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｈｙｄｒｏｇ ａｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、　Ｏｒｇａｎｉｃ　ｐｒｅｐ ａ−ｒａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　１（２）、　１０７−１ ０９．　（１９６９）。

４４）Ｓｒｅｅｎｉｖａｓａｎ、　Ｂ、、工ｎｔｅｒａｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉ ｏｎ　ｏｆ　ｆａｔｓ、　Ｊ、　Ａｍ、　ＯｉｌＣｈｅｍｉｓｔｓ’　Ｓｏｃ、 、５５，７９６−８０５．（１９７８）。

４５）Ｌｏ、　Ｙ−Ｃ，ａｎｄ　Ｈａｎｄｅｌ、　Ａ、Ｐ、、　Ｐｈｙｓｉｃａ ｌ　ａｎｄ　ｃｈａｍｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｓ’　Ｓｏｃ、、６０，８４５− ８１８．（１９８：１）Ｓｏｃ、、５４．４７−５０　（１９７７）。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年１１月　２日

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．β−シトスタノール脂肪酸エステル又はβ−シトスタノール脂肪酸エステル 混合物を含むことを特徴とする、血清中のコレステロールレベルを低めるための 物質。
2. ２．前記混合物の脂肪酸が２〜２２個の炭素原子を含むことを特徴とする請求の 範囲第１項記載の物質。
3. ３．脂肪酸エステル又は脂肪酸エステル混合物により遊離β−シトスタノールを エステル化することによって、脂肪に溶解性の形にせしめられることを特徴とす る請求の範囲第１〜２のいづれか１項記載の物質。
4. ４．前記物質が脂肪調製物又は他の食物に添加されることを特徴とする請求の範 囲第１〜３のいづれか１項記載の物質。
5. ５．必須脂肪成分又は脂肪置換体として使用されることを特徴とする請求の範囲 第１〜３のいづれか１項記載の物質。
6. ６．調理用油、マーガリン、バター、マヨネーズ、サラダドレッシング、ショー トニング、等に使用されることを特徴とする請求の範囲第５項記載の物質。
7. ７．飲食物の一部として、それ自体消費され得ることを特徴とする請求の範囲第 １〜３のいづれか１項記載の物質。
8. ８．請求の範囲第１項記載の物質の調製方法であって、遊離β−シトスタノール がエステル交換触媒の存在下で脂肪酸エステル又は脂肪酸エステル混合物により エステル化されることを特徴とする方法。
9. ９．前記反応が、約９０〜１２０℃の温度及び約５〜１５ｍｍＨｇの真空下で行 なわれることを特徴とする請求の範囲第８項記載の方法。