JPH06509063A - 診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用・用途 - Google Patents

診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用・用途

Info

Publication number
JPH06509063A
JPH06509063A JP4510139A JP51013992A JPH06509063A JP H06509063 A JPH06509063 A JP H06509063A JP 4510139 A JP4510139 A JP 4510139A JP 51013992 A JP51013992 A JP 51013992A JP H06509063 A JPH06509063 A JP H06509063A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
nucleic acid
pna
acid analog
analog
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP4510139A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3982828B2 (ja
Inventor
ブカルト、オーレ
エグホルム、ミカエル
ニールセン、ピーター・アイギル
ベルク、ロルフ・ヘンリク
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27220741&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH06509063(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from DK98791A external-priority patent/DK98791D0/da
Priority claimed from DK98691A external-priority patent/DK98691D0/da
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of JPH06509063A publication Critical patent/JPH06509063A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3982828B2 publication Critical patent/JP3982828B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • C07K14/003—Peptide-nucleic acids (PNAs)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6832—Enhancement of hybridisation reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyamides (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 但し上式において： Ｘは、０、Ｓ、　Ｓｅ、　ＮＲ’、　ＣＨ，またはＣ（ＣＨｓ）！である；Ｙは 、−重結合、０、ＳまたはＮＲ’である；ｐおよびｑのそれぞれは、１から５ま での整数であり、ｐ＋ｑの和は、１０以下である； ｒおよびＳのそれぞれは、ゼロまたは１から５までの整数であり、ｒ＋８の和は 、ＩＯ以下である： Ｒ’およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシもしくルコキシもしくは アルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ１−アルキル、ヒドロキシ、アルコキ シ、アルキルチオ、アミノおハロゲンから構成される群から選択される；またＲ １およびＲ４のそれぞれは独立して、水素、（Ｃ，−Ｃ，）アルキヒドロキシも しくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換された（Ｃ，−Ｃ４）アルキル、 ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオおよびアミノから構成される群から選択 される：Ｂ’　−Ｂ’のそれぞれは、ＮまたはＲ”Ｎ”であり、ここにおいてＲ ３は上記において定義された通りである； ｃ’−ｃ″′のそれぞれは、ＣＲ’　Ｒ’、ＣＨＲ’　ＣＨＲ’またはＣＲ’　 Ｒ’　ＣＨ，であり、ここにおいてＲ６は水素でありまたＲ７は、天然のアルフ ァアミノ酸の側鎖から構成される群から選択され、またはＲ６およびＲ７ハ独立 して、水素、（Ｃ，−Ｃ，）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール 、ヒドロキシ、（Ｃ，−Ｃ，）アルコキシ、（Ｃ，−Ｃｓ）アルキルチオ、Ｎ　 Ｒ”　Ｒ’およびＳＲ’から構成される群から選択されるが、ここにおいてＲ３ およびＲ４は、上記において定義された通り’？’アｌ）、Ｒ６は水素、（ＣＩ −ｃｌｌ）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはアルキルチオで置換され た（Ｃ，−Ｃ，）アルキルであ′またはＲ＠およびＲ７とは一緒になって、指環 系または異項環系酸する。
Ｄ’　−Ｄ”のそれぞれは、ＣＲ’　Ｒ’、ＣＨ２Ｒ’　ＣＨＲ’またはＣＨＲ ’　Ｃであり、ここにおいてＲ８およびＲ７は、上記において定義され−１−３ ＯＮＲ”−または−３ＯａＮＲ”４って、ナオココニオイテＲｓは、上記におい て定義した通りである；Ｑは、−ＣＯ，Ｈ，−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−５Ｏ，Ｈもし くは一５ｏ！ＮＲ７Ｒ’ｔ　ｆ：　バー　ＣＯ，Ｈもしくは一３Ｏ，Ｈの活性化 誘導体である。またｌは、−ＮＨＲ”　’Ｒ”　”またバーＮＲ”Ｃ（０）　Ｒ ””　ｔ’あり、１．−１＋においてＲｏ、Ｒｏ、Ｒｏ”およびＲ１は独立して 、水素、アルキル、アミノ保護基、リポータリガンド、挿入基、キレート化剤、 ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、オリゴヌクレオチドなら びに可溶および不溶のポリマーである。
３、以下の一般式を有する、請求の範囲第２項において請求されたペプチド核酸 ： なお本式において： Ｌはそれぞれ独立して、水素、フェニル、例えば一つ、二つまたは三つのリング の異項環、天然の核酸塩基および非天然の核酸塩基から成る群から選択される： Ｒ７はそれぞれ独立して、水素および天然のアルファアミノ酸の側鎖から成る群 から選択される； ｎは、１から６０までの整数である； に、ｌおよびｍのそれぞれは独立して、ゼロまたは■から５までの整数である、 好ましくは、ｋとｍとの和は１または２であり、最も好ましくはｌである： Ｒｈは、ＯＨ，ＮＨ，または−Ｎ　ＨＬ　ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈｚである；およびＲ１ はＨまたはＣ０ＣＨ，である。
４、以下の一般式を有する、請求の範囲第３項において請求された核酸類縁体： なお本式において。
Ｌはそれぞれ独立して、核酸塩基であるチミン、アデニン、シトシン、グアニン およびウラシルから成る群から選択される；Ｒ７′はそれぞれ、水素である：お よびｎは、１から３０までの整数である。
５、検出可能な標識を導入したまたは検出可能な標識に接合された、請求の範囲 第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された核酸類縁体。
６前記標識が、放射性同位元素標識、酵素標識、ビオチン、発蛍光団、化学発光 標識、抗原、抗体またはスピン標識である、請求の範囲第５項において請求され た標識された核酸類縁体。
７、一つまたはそれ以上の化学的または微生物的個体単位についてその捕捉、認 識、検出、同定または定量化を行うために、請求の範囲第１項から第６項までの 内の何れか一項において定義された核酸類縁体を使用すること。
８、核酸を捕捉するに際して、固体支持体に固定化した、請求の範囲第１項から 第６項までの内の何れか一項において請求された核酸類縁体にハイブリッド形成 条件下において前記核酸を接触させることから成る、核酸を捕捉する方法。
９、捕捉された前記核酸が、前記固定化された核酸類縁体に結合された状態にあ る核酸認識薬剤で処理することによって検出され、認識され、定量化されまたは 同定される、請求の範囲第８項において請求された方法。
ｌＯ捕捉された該核酸が、前記固定化された核酸類縁体にハイブリッドされた第 一の領域およびそのようにハイブリッドされて以いない第二の領域であって、該 第二の領域の少なくとも一部にハイブリッドする様に適合せしめられている標識 核酸または核酸類縁体で処理された第二の領域を有しており、かつ前記標識が検 出される、請求の範囲第９項において請求された方法。
１１前記固定化された核酸類縁体が、加水分解してｍＲＮＡのボＩＪ　Ａ尾部を 生じ、その結果前記ｍＲＮＡを捕捉することが可能である逐次リガンドから成る 、請求の範囲第９項において請求された、ｍＲＮＡを捕捉する方法。
１２、ｚｅｎｋｉ逐次リガンドがチミンである、請求の範囲第１１項において請 求された方法。
１３、一旦捕捉された前記核酸が、前記固定化された核酸類縁体と捕捉された核 酸とを脱ハイブリッド化する条件に供することによって該固定化核酸類縁体から 開放・放出される、請求の範囲第８項、１１項また第１２項の内の何れか一項に おいて請求された方法。
１４、固体支持体に固定化された、請求の範囲第１項から第６項までの内の何れ か一項において請求された核酸類縁体。
１５、アフィニティ捕捉カラムに導入された、請求の範囲第１４項において請求 された固定化された核酸類縁体。
１６、ハイブリッド化する条件下においてハイブリッドするに充分に相補的な配 列を有する、請求の範囲第５項または第６項で請求された標識した核酸類縁体に 標的をハイブリッドさせ、かつ前記標的にハイブリッドさせた該核酸類縁体の前 記標識を検出するかまたは定量化することから成る、標的核酸を認識、検出また は定量化する方法。
１７、前記標的核酸が前記ハイブリダイゼーションに先だって支持体に固定化さ れる、請求の範囲第１６項において請求された方法。
１８、前記標的核酸が、前記支持体に固定化されるに際して、その第一の領域を 、捕捉された核酸または核酸類縁体であって、ハイブリッドするに充分に前記第 一の領域に相補的である配列を有しかつそれ自体が前記支持体に固定化されてい る該捕捉核酸または核酸類縁体にハイブリダイゼーションさせ、かつ前記標識さ れた核酸類縁体が前記標的の第二の領域にハイブリッドする、請求の範囲第１７ 項において請求された方法。
１９、核酸二重らせんから一本鎖を置換する方法において、前記二重らせんに対 して、前記核酸のもう一方の鎖に対するアフィニティーが前記一本鎖を置換する ことが可能である程に充分であるような核酸類類縁体をハイブリッドさせること から成る前記置換方法。
２０、二本鎖標的核酸を検出し、同定しまたは定量化する方法において、置換さ れない鎖が置換核酸類縁体に相補的な配列を有する二本鎖標的から一本鎖を置換 することができる置換核酸類縁体を該標的核酸にハイブリッドさせるに際して、 前記置換核酸類縁体の配列が、自らにハイブリッドするに充分に相補的あって、 その結果、一本鎖の形態において前記標的の一本鎖を置換するものであって、か つその後に前記置換された一本鎖を存在を検出するかまたは定量化することから 成る、前記検出、同定または定量化する方法。
２１、置換された鎖をフラグメントに切断しかつ前記フラグメントの存在を特徴 する請求の範囲第２０項において請求された方法。
２２前記置換された鎖がヌクレアーゼの攻撃によって切断される、請求の範囲第 ２１項において請求された方法。
２３請求の範囲５項または第６項ににおいて請求された少なくとも一つの標識さ れた核酸類縁体および前記標識された核酸類縁体を検出する少なくとも一つの検 出試薬とから構成される、診断方法において使用されるキット。
２４請求の範囲第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された核酸 類縁体を更に固体支持体に固定化されて成る、請求の範囲第２３項において請求 されたキット。
２５請求の範囲第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された固定 化された核酸類縁体と、前記核酸類縁体によって捕捉された核酸の存在を検出す る少なくとも一つの核酸認識薬剤とを組合せて成るキット。
２６前記核酸認識薬剤が、標識された核酸または標識された核酸類縁体である、 請求の範囲第２５項において請求されたキット。
明細書 診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用・用途本発明は、診断薬の分野 において、例えば一つまたはそれ以上の化学的または微生物学的個体単位につい てその捕捉、認識、検出、同定または定量化などを行うために幾つかの核酸類縁 体を使用することに関する。
オリゴジオキシリボヌクレオチド（オリゴ−ＤＮＡ類）は、診断薬の手法におい てますます頻繁に用いられおり、例えば、特異的な微生物の確認を行う試験、例 えば疾病など一般的な素因を確認するための試験、法医学分野および微生物学全 般などにおいて用いられている。このような分野におけるオリゴ−ＤＮＡ類の用 途は、当然のことながら、かかるオリゴ−ＤＮＡ類が相補的核酸の塩基配列とバ イブリドを形成することができる能力に依拠している。例として挙げれば、標識 したオリゴ−ＤＮＡプローブは、固定化した標的ＤＮＡ類を探索して特異的な塩 基配列の存在を確認するためのハイブリダイゼーション測定法に用いられている 。増幅操作法においては、オリゴ−ＤＮＡ類の有するこのようなハイブリダイゼ ーション特性を利用して、増幅するべき鋳型分子にオリゴ−ＤＮＡプライマーを ハイブリッドさせでいるのである。
長さが１００塩基対に達するオリゴ−ＤＮＡ類は現在、固体支持体法を用いて合 成されており、完全自動合成装置が幾つか市販されている。しかしながら、これ まで注目が払われてきたのは、塩基配列に特異的に天然ＤＮＡとバイブリド形成 しながら、なおりＮＡそれ自体とは有利に異なる化学的特性を有する能力がある 合成りＮＡ類縁体を構築・構成することが出来るか否かということであった。
このような研究は大半は、”アンチセンス”治療薬にこのような化合物が用いる 可能性があるのではないかという動機の基づいているのであるが、この場合従来 のオリゴ−ＤＮＡ類を使用すると幾つかの困難が伴うのである。その理由は、こ のような非修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼが天然に存在するため生体 内（インビボ）で半減期が短く、また量の多少を問わず製造コストが高くしかも 細胞膜透過性能が劣るからである。
例えば、国際特許出願（ＰＣＴ）　ＷＯ３６１０５１８号において、おそらくは 天然の核酸と塩基配列に特異的にハイブリダイゼーションする能力を有するリガ ンドの、典型的にはヌクレオチド塩基の配列を有する主鎖を持ったＤＮＡ類縁体 が開示されており、また主ず、請求されている化合物のＤＮＡに対する親和性を 示すデータも体から成る診断薬試薬および診断薬システムを特許請求している料 たる種々の構成単位に基づいたオリゴヌクレオチド類縁体が記施例は全くなく、 従ってこのような類縁体の有する性能についてを若干低下させたハイブリッドを 得るために、このような修飾は薬または分析に使用することに関する。
本発明は、一つまたはそれ以上の化学的または微生物学的個体単位についてその 捕捉、認識、検出、同定または定量化を行うために使用する核酸類縁体であって 、かかる類縁体が以下であるも（ＰＮＡ）において、前記リガンドがそれぞれ独 立して天然の核酸塩基、非天然の核酸塩基または核酸塩基結合基であり、前記リ ガンドは各々前記主鎖の窒素原子に直接または間接に結合せしめられ、かつ前記 リガンドが４つから８つまでの介在する原子によって前記主鎖のなかで相互に分 離された窒素原子を有するものである、性に対する安定性がより高いハイブリッ ドを形成する能力を有す記した間隔においてカウントしない。
但し上式において。
結合基である； Ａ’　−Ａ’のそれぞれは、−重結合、メチレン基または式（Ｉｌａ）まｐおよ びｑのそれぞれは、■から５までの整数であり、ｐ＋ｑのにおいでＲ′、Ｒ”、 Ｒ′”およびＲ１は独立して、水素、アルキル、アミノ保護基、リポータリガン ド、挿入基、キレート化剤、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイ ド、オリゴヌクレオチドならびに可溶および不溶のポリマーである。または、Ｃ およびＤは、ＣＨＲ’　（ＣＨ２）、ＣＨＲ’−ｃあッテもよいが１．：：、： 　テＳ　ｌｅｔ、ｏから２までであ第１ばよい。
好ましいペプチド核酸は、以下の一般式（ＩＩＩ）を有する：なお本式において Ｉ、はそれぞれ独立して、水素、フェニル、例えば一つ、二つまたは三つのリン グの異項環、天然の核酸塩基および非天然の核酸塩基から成る群から選択される ； Ｒ７はそれぞれ独立して、水素および天然のアルファアミノ酸の側鎖から成る群 から選択される： ｎは、１から６０までの整数である： ｋ、１およびｍのそれぞれは独立して、ゼロまたは１から５までの整数である： 好ましくは、ｋとｍとの和は１または２であり、最も好ましくは１である； Ｒ’は、０Ｈ１Ｎ　Ｈ，または−Ｎ　ＨＬ　ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈ，である：およびＲ １はＩ］または（：　ｏ　ＣＨｌである。
特に好ましいのは、式（ＩＩＩ）においてＬが独立して、核酸塩基であるチミン （Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ ）とから成る群から選択され、特にチミンであり、またｎが１から３０　までの 整数であり、特に４から２０までの整数である化合物である。このような化合物 の一例は第１図に示しであるが、この図によれば、かかる化合物と一本鎖ＤＮＡ との間の構造上の類似性が明らかである。
本発明のペプチド核酸類は、溶液中または固相上の何れかで標準ペプチド合成方 法を採用して合成してもよい。用いたこれらのシントンは、特別に設計したモノ マーアミノ酸またはそれらの活性化誘導体であって、標準的な保護基で保護され たものであればよい。このようなオリゴヌクレオチド類縁体はまた、相当する二 酸とジアミンを用いることによって合成することもできる。
即ち、本発明に使用する化合物を得るために用いたモノマーシントンは、以下の 一般式で表されるアミノ酸、二酸およびジアミンから成る群から選択されてもよ い。
（ＩＶ）　（Ｖ）　（Ｖｌ） 本式においてり、　Ａ、　Ｂ、　ＣおよびＤは、上記のいて定義した通りである 。但し、本式におけるアミノ基は全て、アミノ保護基によって保護されていても よい；Ｅは、Ｃ００Ｈ１Ｃ３ＯＨ，５ＯＯＨ。
ＳＯ，ＯＨまたはこれらの活性化された誘導体であればよい；およびＦは、ＮＨ Ｒ”またはＮＰｇＲ’であり、ここにおいてＲ３は上記において定義された通り であり、Ｐｇはアミノ保護基である。
好ましいモノマーシントンは、以下の式（Ｖｌｌ）を有するアミノ酸である： またはアミノ−保護酸および／またはこれらの末端活性化誘導体であるが、ここ においてＬは、水素、フェニル、異項環、天然の核酸塩基、非天然の核酸塩基お よびこれらの保護された誘導体から成る群から選択される：およびＲ１は独立し て、水素および天然のアルファアミノ酸の側鎖から成る群から選択される。特に 好ましいのは、式（４）においてＲｒが水素でありかつＬは核酸塩基であるチミ ン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（ Ｕ）ならびに来れれあの保護された誘導体から成る群から選択されるシントンで ある。
本発明に従えば、一つまたはそれ以上の化学的または微生物学的個体単位につい てその捕捉、認識、検出、同定または定量化などを行うために上記において定義 された核酸類縁体を使用することが包含される。検出されるかかる固体単位とし ては先ず第一に、核酸でありかつ前記固体単位はハイブリダイゼーションによっ てその特異的な核酸塩基配列を経由して検出されることが、通常は意図される。
前記において定義された核酸類縁体は、固体支持体に固定化された本発明におい て用いられる核酸類縁体にハイブリッド形成条件下で核酸に接触せしめることか ら成る核酸を捕捉する方法において、該固定化核酸類縁体が、補足されるべき前 記核酸または核酸類縁体とハイブリッド形成に適したりガントの配列を有してい る前記核酸捕捉方法に使用してもよい。
該固体支持体は、親和性捕捉に使用する従来公知のオリゴヌクレオチドを固定化 することに関連して公知である種々の形態を取ってもよい。固体支持体は例えば 、プレート、フィルター、マルチウｓ、　／レプレートまたはディツプスティッ クであればよく、またヒーズのような個別の粒子の形状を取ってもよく、かかる 粒子はカラムに保持し、次いで核酸を含有する溶液をこのカラムに流して所望の 種を溶液から捕捉させればよい。
捕捉された核酸は、極めて多くの方法によって認識され、検出され、同定されま たは定量化されることが出来る。洗浄後はかかる捕捉された核酸は系内に残留す る唯一の核酸であり得るので、捕捉された配列に特異的か否かを問わず、核酸の 存在を証明するのＩご適した試薬系であれば如何なるものによっても検出され得 る。即ち、例として挙げれば、捕捉された核酸がＤＮＡでありかつ比較的短いＰ ＮＡによって一本鎖の形態で捕捉された場合、懸垂状態の一重鎖ＤＮＡは、ヌク レアーゼによって消化してもよく、かつこのような消化物は通常の方法に依って 検出すればよい。このＤＮＡが二本鎖でありかつ該ＰＮＡが再び比較的短い場合 は、該ＤＮＡのうち当初の二本鎖の形態で残留している（即ち、ＰＮＡによって 変位・置換されていない）部分は、ＰＮＡ−ＤＮＡ二重らせんには結合しない通 常のり、ＮＡ挿入基によって検出することが出来る。核酸を認識する抗体を、固 定化した核酸類縁体に結合せしめた核酸（ＲＮＡ、ｄｓＤＮＡまたは５ｓＤＮＡ ）を検出するために使用してもよい。
同体支持体に固定化した通常のオリゴヌクレオチドを用いて核酸種のアフィニテ ィー（親和性）捕捉を行うに際しては、標的核酸を生成することが通常は必要で ある。試料中に含まれてもよいヌクレアーゼは、固定化した核酸を攻撃する傾向 がある。実際においては、非特異性が極めて高い結合を用いると、特定な結合は 殆ど得られない。更には、当該捕捉が生起しないうちに、かかるＤＮＡを一本鎖 にまで編変性ゼることが必要である。
上記式Ｉの核酸類縁体は、ヌクレアーゼの攻撃を受けにクク、典型的には相補的 配列の核酸に対する親和性が高いため、固定化した種として通常のオリゴヌクレ オチドを用いて得た場合よりもより高度の特異的結合を与えるのである。更には 、本発明に従って使用された核酸類縁体は定型的には、相補的配列の核酸とハイ ブリッドを形成する能力を有しているが、かかる核酸を先ず一本鎖に変性せしめ ることはない。一旦標的核酸が捕捉されると、固定化された核酸類縁体および捕 捉された核酸を例えば加熱とジメチルホルムアミドなどのような脱ハイブリダイ ゼーションの条件に供することによって、固定化された核酸類縁体から開放・放 出させればよい。
例として挙げれば、かかる固定化した核酸類縁体は、ｍＲＮＡのポリ八尾部とハ イブリッド形成可能であってかくして当該ｍＲＮＡを捕捉する、例えばチミンな ど連続リガンドから構成されていればよい。
本発明は、上記したような固定化した核酸類縁体から構成される親和性捕捉カラ ムを包含する。
すなわち、本発明はまた、固相生化学（例えば、”５ｏｌｉｄ　−ＰｈａｓｅＢ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ａｎｄ　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ 　Ａｓｐｅｃｔｓ”、Ｗ、Ｈ，５ｃｏｕｔｅｎ編著、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆ 　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。
１９８３を参照）、特に固相バイオシステム、特にバイオアッセイまたは種々の 固相技法であって、診断的検出／定量化または相補的核酸の親和性生成に関する もの（例えば、”Ａｆｆｎｉｔｙ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Δ　Ｐｒａ ｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ″、Ｐ、Ｄ、Ｇ、　ＤｅａｎＳＷ、Ｓ、Ｊｏｈ ｎｓｏｎａｎｄ　Ｆ、Ａ、　Ｍｉｄｄｌｅ編著、ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ、 、０ｘｆｏｒｄ　１９８６　；　”Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｈｙｂｒｉｄｉ ｚａｔｉｏｎ　−Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ’ｓＢ、Ｄ、　Ｈ ａｒｎｅｓ　ａｎｄ　Ｓ、Ｊ、　Ｈｉｇｇｉｎｓ、、ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔ ｄ、、０ｘｆｏｒｄ１９８７を参照）に係ることが、理解可能であろう。かかる バイオアッセイまたは精製法を実行する今日的方法は、セルロース、気孔率をコ ントロールしたものを含むガラスピーズ（ＭｉｚｕｔａｎｉＳｅｔａｔ、。Ｊ、 　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、、１９８６．３５６．２０２）ビードにした固体支持 体、”５ｅｐｈａｄｅｘ”、”５ｅｐｈａｒｏｓｅ”、アガロース、ポリアクリ ルアミド、多孔性粒状アルミナ、メタアクリル酸ヒドロキシアルキルエステルの ゲル、ジオール結合シリカ、多孔性セラミック、またはナイロンやニトロセルロ ースのフィルターディスクなどの連続材料に物理的に吸着させたかまたは実質的 に永久的な共有結合によるアンカリング結合を介して結合させた”通常の“また は若干修飾したオリゴヌクレオチドを用いるのが殆ど専らである。一つの例にお いて、ｍＲＮＡを含むポリＡテイルを親和性単離するためのセルロースビーズ上 でオリゴ−ｄＴを化学的に合成することを用いている（’Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ 　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”におけるＧ１１ｈａｒｌ、Ｌ、　Ｇｒｏｓｓｍａｎｎ およびに、　Ｍｏｌｄａｖｅ編著、２１巻、ｐａｒｔ　Ｄ、ベージ１９１、Ａｃ ａｄｅｍｉｃ　ＰｒｅｓｓＳＮｅｗ　Ｙｏｒｋ　ａｎｄ　Ｌｏｎｄｏｎ。
法には、固定化した分子の内のいくつかがハイブリダイゼーションまたは親和性 過程において洗い流され得る（脱着される）という欠点があるからである。すな わち、支持体材料の表面に吸着された種は、支持体が当該バイオアッセイ／精製 方法の過程においめである（Ｂｅａｕｃａｇｅ　ａｎｄ　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、 　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９８１．２２．１８５９　；　Ｃａ ｒｕｔｈｅｒｓ、５ｃｉｅｎｃｅ、１９８５．２３２．２８１）。
またこのようなことには、表面／ローディング性能が高い固体支持体に適してい る別のフォスファイトトリエステル法を用いることによって（Ｌｅｔｓｉｎｇｅ ｒ　ａｎｄ　ＭａｈａｄｅｖａｎｌＪ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、のようなＰ ＮＡ種はまた、大量に固体支持体にロードすることが可塩基を認識する試薬は、 ヒトゲノムにおける独自配列の長さに相当するので、特に興味の対象となる。
このようなハイブリダイゼーション反応を溶液中で行うと、該る能力については 、上記において記載した通りである。本発明は、核酸の二重らせんから一本鎖を 置換する方法において、前記二重ラセンから一本鎖を置換することができる程充 分な、前記二重らせんの内のもう一方の鎖に対する親和性を有する上記において 定義した核酸類縁体を前記二重らせんにハイブリッドさせることから成る前記置 換方法を包含する。
本発明は、前記において定義した置換核酸類縁体に相補的な配列を一方の鎖が有 する二本鎖標的から他の一本鎖を置換する能力がある前記核酸類縁体を二本鎖標 的にハイブリッドさせるに際して、前記置換核酸類縁体が、ハイブリダイゼーシ ョンさせるに完成る、二本鎖標的核酸を検出し、同定しまたは定量化する方法を 包含する。
このように置換された一本鎖を断片に破断し、次いで前記斑だ標識を検出するの に使用する検出試薬を少なくとも一種とを含んン緩衝液として溶液状で提供され る。このようなキットは通常は、る物質、例えばアビジンとの間の抱合体を含有 して成るものであってもよい。
該核酸類縁体を直接的または間接的に酵素で標識化した場合は、該キットは、該 酵素によって仲介されるモニター可能な反応を行うに適している該酵素の基質を 包含して成るものであってもよい。
本発明をさらに詳細に記載し、添付した図面を参照して具体的に説明する。なお 、該図面において： 第１図は、天然のデオキシリボヌクレオチド（Ａ）および本発明のペプチド核酸 （ＰＮＡ）　（Ｂ）を示す。
第２図は、ＤＮＡ認識のための天然および非天然の核酸塩基およびリポータ−基 を示す。
第３図は、以下の概略図を示したものである：すなわち、（ａ）　Ａｃｒ’−（ Ｔａｅｇ）＋ｏ　−Ｌｙｓ　−ＮＨ２（ＡｃｒＴ、、Ｌｙｓ　−ＮＨ，）による 光開裂；Ａｃｒ’　、−（Ｔａｅｇ）ｌｏ　Ｌｙｓ　−ＮＨＩのジアゾ−結合ア クリジンによるフォトフットプリントおよび好ましいＫ　Ｍ　ｎ　０４−開裂； および（Ｃ）Ｓｌ−ヌクレアーゼで増進せしめられた開裂と（ｄ）　Ａｃｒ’　 −（Ｔａｅｇ）＋。
−−１−、ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈ２結合部位のミクロコツカスヌクレアーゼによる開裂 。
第４図は、ＰＮＡモノマーシントンのいくつかの例を示す。
第５図は、Ａｃｒ’リガンドおよび一つのＰＮＡであるＡｃｒ’　−（Ｔａｅｇ ）＋。
−Ｉ、ｙｓ−ＮＨｚを示す。
第６図は、モノマーシントンを調製する一般的な概略図である。
第７図は、Ａｃｒ’リガンドを調製する一般的概略図である。
第８図は、線状の美穂ごＰＮＡアミドの調製を図示する固相ＰＮＡ合成の一般的 概略図である。
第９図は、以下の分析ＨＰ　Ｌ　Ｃクロマトグラムを示すものである＝（Δ）Ｈ Ｆ−量刑後の粗製Ｈ［Ｔａｅｇ］＋ｓ　ＮＨｔ　（凍結乾燥前）　；　（Ｂ）Ｈ Ｆ開裂後の粗製Ａｃｒ’−［Ｔａｅｇ］＋ｓ　−ＮＨｚ　（凍結乾燥前）；およ び（Ｃ）精製Ａｃｒ’−［ＴａｅｇＪ、６−　ＮＨ２・緩衝液Ａ、５％ＣＨ，Ｃ Ｎ／９５９６　Ｈ，０１０，０４４５％ＴＦＡ、緩衝液Ｂ、６０％ＣＨ３ＣＮ／ ４０％ｉ（，０１０，０３９０％ＴＦΔ、直線勾配、３０分でＢが０−１００％ 、流量、１　、２　ｍ　ｌ　、／分：カラム、Ｖｙｄａｃ　Ｃ＋＋＋　（５μｍ 、　０．４６　ｘ　２５ｃｍ）。
第１０図は、以下の分析ＨＰＬＣクロマトグラムを示す：すなわち、（Ａ）精製 Ｈ−［ＴａｅｇＪ、、　−Ｌｙｓ−ＮＨ，および（Ｂ）　Ｈ［ＴａＰｇｌｓ−Ｃ ａｅｇ−［ＴａｅｇＪ、　−Ｌｙｓ　−ＮＨ，−第９図におけると同一条件を使 用。
第１１ａ図および第１１ｂ図は、ＡｃｒＴ、、　−ＬｙｓのｄＡ、、・５′−” Ｐで標識したオリゴヌクレオチドへの結合を示す；（１）（５°−ＧＡＴＣＣＡ 、。
Ｇ）をＡｃｒＴ＋。−Ｌｙｓの存在下または不存在下およびオリゴヌクレオチド の存在下または不存在下で培養した。（２）（５’　−ＧＡＴＣＣＡ、。
Ｇ）および試料を”自然の条件”下（第１１ａ図）または”変性条件”下（第１ １ｂ図）でポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）およびオートラジオ グラフィーによって分析した。
第１２ａ−ｃ図は、ｄｓＤＮＡ　−ＡｃｒＴｌｏ　−Ｌｙｓ　−ＮＨｚ錯体につ いての化学的、光化学的および酵素的ブロービングを示す。ｄｓＤＮＡ−Ａｃｒ Ｔｌｏ　−Ｌｙｓ　−ＮＨ２とｄ　Ａｇｏ　／　ｄ　Ｔ１ｏ標識配列を含む”Ｐ 　−ｅｎｄ標識化ＤＮＡフラグメントとの間の錯体を、アフィニティー光開裂（ 第１２ａ図、レーンｌ−３；第１２ｂ図、レーン１−３）、過マンガン酸塩ブロ ービング（第１２ｂ図、レーン４−６）または５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓヌ クレアーゼによるプロービング（第１２ｂ図、レーン８−１０）もしくはヌクレ アーゼＳｌによるプロービング（第１２ｃ図）によってプローブした。Ａ鎖（第 １２ａ図）またはＴ鎖（第１２ｂ図、第１２ｃ図）をプローブした。
第１３図は、保護ＰＮＡシントンを合成する手法を示す。
第１４図は、保護アデニンモノマーシントンを合成する手法を示す。
第１５図は、保護グアニンモノマーンントンを合成する手法を示す。
第１６図は、ＰＮＡ主鎖改変のい（つかの例を示す。
第１７図は、通常のアミノ酸に相当する側鎖を有するチミンモノマーシントンを 合成する手法を示す。
第１８ａ図および第１８図すはそれぞれ、チミンモノマーシントンのアミノプロ ピル類縁体およびプロピオニル類縁体を合成する手法を示す。
第１９図は、チミンモノマーシントンのアミノエチル−β−アラニン類縁体を合 成する手法を示す。
第２０図は、Ｐ　Ｎ　Ａ　ｓ　Ｔ＋ｏ、−Ｔ、Ｃおよび一’Ｌ（４が、高い配列 特異性をもって二本鎖ＤＮＡに結合することを実証するＰＡＧＥライオオートグ ラフを示す。
第２１図は、Ａ１゜／Ｔ、。二本鎖ＤＮＡ標的に結合した長さの異なるＰＮＡ類 の熱安定性を示すＰＡＧＥオートラジオグラフのデンシトメーター走査に基づく グラフである。
第２３図は、ＤＮＡにだ対する制限酵素活性が、ＰＮＡを制限酵素認識部位の近 位に結合させた場合抑制されることを実証する電気泳動ゲル染色を示す。
第２４図は、＋２１１１で標識したＰＮＡ　Ｔ＋。が相補的ｄＡ、、オリゴヌク レオヂドに結合することを実証するＰＡＧＥオートラジオグラフを示す。
第２５ａ図から第２５ｃ図は、固定化したＰＮＡとマツチするまたは塩基一つが ミスマツチしたオリゴ−ＤＮＡ類との間で異なる温度において実現される結合の 百分率を示す。
第２６図は、転写された鎖へのＴＩＯによるＲＮＡポリメラーゼ転写抑制を示す オートラジオグラフである。
第２７図は、標識化プラスミドｄｓＤＮＡ類の一つに相補的である固定化された ＤＮＡに捕捉されかつ異なる温度において洗浄された標識化プラスミドｄｓＤＮ Ａ類の混合物のオートラジオグラフである。
第２８図は、ＰＮＡによる鎖置換を用いたプラスミドｄｓＤＮＡの定量を実証す る臭化エチジウムゲルとそのオートラジオグラフとを組合せたものである。
式■で表されるＰＮＡ類およびその製造に用いたモノマーシントンにおいＣ１リ ガンドＬは主として、自然界において見出される位置、すなわちアデニンまたは グアニンについては９位の位置またアミノまたはントシンについては１位の位置 に結合させた天然の核酸塩基である。その代わりに、これらリガンドＬの内のい くつかはそれぞれ、非天然の核酸塩基（核酸塩基類縁体）、他の塩基結合性原子 部、芳香族原子部、（Ｃ＋−Ｃ４）アルカノイル、ヒドロキシまたは水素であっ てもよい。いくつかの典型的な核酸塩基リガンドおよび具体的な合成リガンドは 、第２図に示しである。更には、Ｌは、Ｉ）ＮＡ挿入基、例えば発蛍光団、ラジ オ標識、スピン標識、ハプテンなどのリポータ−リガンド、またはビオチンなど のタンパク質認職リガントであり得る。
モノマー７ノトンにおいては、■７には、保護基を設けていてもよい。このこと は、第４図に図示しであるが、本図においてＰｇｌは、酸、塩基または例えばｔ −ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍ ｏｃ）まｔこは２−ニトロベンジル（２Ｎｂ）などの水素分解性もしくは光化学 的に開裂可能な保護基である。
結合基Δは、例えば−ＣＲ’Ｒ２Ｃ０−１−ＣＲ’Ｒ”Ｃ３，ＣＲ’Ｒ２ＣＳｅ −１−ＣＲ’Ｒ２ＣＮＨＲ’−１−ＣＲ’Ｒ２Ｃ＝　ＣＨや−ＣＲ’Ｒ”Ｃ＝　 Ｃ（ＣＨｓ）ｓ−１−なおＲ１、Ｒ２およびＲ３は上記において定義した通りで あるーなどの種々の基であり得る。Ａは、メチレンカルボニル（−ＣＨ，Ｃｏ　 −’）である。また、Ａは、プロパノイル、ブタノイルまたはペンタノイルなど のより長鎖の原子部またはそれに相当する誘導体であって、その酸素原子がその 他のＸで表される原子で置換されるかまたはその原子鎖がＲ’　Ｒ”で置換され るかＹを含む不均一であるものであってもよい。さらに、Ａは、（Ｃ２Ｃｓ）ア ルキレン鎖、Ｒ’Ｒ”で置換された（Ｃ，−Ｃ，）アルキレン鎖であってもよく 、またはＹを含む不均一なものであってもよい。場合によっては、Ａは単に一重 結合であればよい。
本発明の好ましい形態においては、Ｂは窒素原子であり、かくしてアキラル主鎖 の可能性が生じる。ＢはまたＲ”Ｎ”一本式においてＲ３は上記において定義し た通りである−であってもよい。
本発明の好ましい形態においては、Ｃは−ＣＲ’　Ｒ’−であるが、また二つの 炭素単位、すなわち−ＣＨＲ’　ＣＨＲ’−または−ＣＲ’　ＣＲ’　ＣＨ。
−一本式において、Ｒ６およびＲ７は上記において定義された通りである−であ ってもよい。Ｒ６およびＲ７はまた、例えばピローロリル、フリル、チオニル、 イミダゾリル、ピリジル、ピリミジニル、インドリルなどのヘテロアリール基で あってもよく、または両者は共同して例えば１．２−シクロブタンジイル、１， ２−シクロペンタンジイルまたは１，２−シクロヘキサンディルなどの指環系を 形成してもよい。
本発明の好ましい形態においては、モノマーシントンにおけるＥはＣ０ＯＨまた はその活性化された誘導体であり、またオリゴマーにおけるＧは、−ＣＯＮＨ２ −である。（好ましくは、式Ｉにおける一Ｒ”　Ｎ　ＯＣの方向において）。上 記において定義したように、Ｅはまた、Ｃ３ＯＨ１ＳＯＯＨ，５Ｏ２０Ｈ，また はそれらの活性化された誘導体であってもよく、またこの時オリゴマーにおける Ｇは、−Ｃ３ＮＲ’−１−３ＯＮＲ’−および−８Ｏ，ＮＲ３−とナル。カカル 活性化は、例えば酸無水物または活性エステル誘導体を用いて行えばよく、この 際Ｅで表される基における水素は、成長する主鎖を精製させるために適した解離 する基によって置換されている。
かかる主鎖を形成するアミノ酸は、同じでもまたは異なっていてもよい。本発明 者らは、２−アミノエチルグリシンに基づいたものが本発明の目的に特に適して いることを見出したのである。
場合によっては、何れかの端末（Ｑ、　Ｉ）においてリガンドを結ＤＮＡ挿入基 または例えばリシンまたはポリリシンなどの、静電的たスチレンをパール重合さ せることによって形成させられたものである。架橋密度・程度として１−２％が 通常は用いられ、かかるマトリックスも、本発明に従って固相ＰＮＡ合成に使用 することがａｎｄ　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｄ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　 Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９７９、カン酸、たとえばＢｏｃ−アミノアシル−４− （オキシメチル）フェニル酢酸などのＢｏｃ−アミノアシル−４−（オキシメチ ル）アリール−低級アルカノン酸、たとえばＮ　−Ｂｏｃ　−ｐ−グルタロイル ベンゾヒドリルアミンなどのＮ　−Ｂｏｃ　−ｐ−アシルベンゾヒドリルアミン 、たとえばＮ　−Ｂｏａ　−４’−メチル−ｐ−グルタロイルベンゾヒドリルア ミンなどのＮ　−Ｂｏｃ　−４’−低級アルキル−ｐ−アシルベンゾヒドリルア ミン、たとえばＮ　−Ｂｏｃ　−４°−メトキシ４〜ヒドロキシメチルフエノキ シ酢酸が挙げられる。本発明の文脈の範囲内において特に該当するスペーサー基 の一種類は、フェニルアセトアミドメチル（Ｐａｍ）　ハンドル（Ｍｉｔｃｈｅ ｌｌ　ａｎｄ　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ。
離の反応性末端にカップリング・結合させることが出来るかまたはスペーサー形 成試薬と反応させることが出来る。スペーサー形ｄｅｔａｃｈａｂｌｅ）”樹脂 （Ｔａｍら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９７９．４９３５および Ｊ、Ａｍ　＞　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９８０．１０２．６１１　；　Ｔａｍ。
Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、１９８５．５０５２９１））であり、この樹脂は、一 つ以上の放出・解離型式が可能であり、かくして合成デザインにおいて一層の柔 軟性をもたらすものである。
Ｎ−保護のための適当な選択束としては、通常は側鎖の保護のためのベンジルに 関連した基と組合せて用いる第三級−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基（Ｃ ａｒｐｉｎｏ、　Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９５７．７９．４４２７； ＭｃＫａｙら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９５７．７９．４６８６　。
Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９５７．７９．６１８ ０）および１９７２．３７．３４０４）である。尤も、通常の固相ペプチド合成 において公知であるその他の多くの可能性がある。すなわち、種々の（Ｓｉｅｂ ｅｒＳＨｅｌｖ、Ｃｈｅｍ、Ａｃｔａ、、１９６８．５１．６１４）、Ｍｃｂ　 ＣＢｒａｄｙら、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、１９７７．４２．１４３）、Ｂｉｃ 　（Ｋｅｐｍら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ。
１９７５．４６２４）、ｏ−ニドＯフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）　（Ｚｅｒ ｖｅｓのが有用である：（１）温和な酸に対する安定性（カルボキシル基によっ て有意に攻撃されない）　；　（２）温和な酸または核試薬に対する安定性（問 題となるアミン基によって有意に攻撃されない）；（３）アセチル化に対する抵 抗性（活性化されたアミノ基によって有意に攻撃されない）：さらに（４）該保 護基は、重大な副反応を伴うことなく定量的な除去可能性に近いものでなくては ならない；および（５）導入されるアミノ酸の光学的完全さが、好ましくはカッ プリングに際して高度に保存されるべきである。最後に、側鎖保護基の選択は一 般的に、側鎖官能性の保護は繰り返されるアミノ脱保護サイクルの条件に耐える ものでなくてはならないので、アミノ保護基の選択に依存して異なる。ＰＮＡを 化学的に構築する全般的な戦略が、たとえばアミノと側鎖保護基の特異的な酸安 定性に依拠しようとも（たとんば」−記した”Ｂｏｃ−ベンジル”の手法）、ま たは直交的な、すなわち化学選択的な保護スキームを用いようとも（たとえば、 」−記した”Ｆｍｏｃ　−ｔＢｕ”手法の当てはまる）、このことは真実である 。
第一のアミノ酸をカップリングさせた後、固相合成の次ぎの工程は、所望するＰ ＮＡ鎖を系統的に合成することである。このような合成は、繰り返し行う脱保護 ／カップリングサイクルを包含する。たとえばＢｏｃやＦｍｏｃ基などの、最後 にカップリングしたアミノ酸の暫定的な保護基は、たとえばＢｏｃの場合はトリ フルオロ酢酸を用いた酸分解、Ｆｍｏｃの場合はピペリジンを用いた塩基処理な どの適当な処理に依って定量的に除去し、かくしてＮ−末端アミン機能を遊離せ しめるのである。
所望−事前のＮ−保護されたアミノ酸は次いで、最後にカップリングさせたアミ ノ酸のＮ−末端にカップリングさせる。アミノ酸のＣ−末端に最後にカップリン グさせたアミノ酸のＮ−末端をこのようにカップリングさせることは、いくつか の方法で行い得る。たとえば、２．４．５−トリクロロフェニルエステル（Ｐｌ ｅｓｓら、Ｈｅ１ｖ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ、１９６３．４６．１６０９）、フタ ルイミドエステル（Ｎｅｆｋｅｎｓら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｃｏ、、１９６ １．８３．１２６３）、ベンタクｏｏフェニルエステル（Ｋｕｐｒｙｓｚｅｗｓ ｋｉ、、Ｒｏｃｚ、Ｃｈｅｍ、、１９６１．３５．５９５）、ペンタフロロフェ ニルエステル（Ｋｏｖａｃｓら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、、　１９６３． ８５．１８３）、ｏ−ニトロフェールエステル（ＢｏｄａｎｚｓｋｙＳＮａｔｕ ｒｅ、　１９５５．１７５．６８５）、イミダゾールニス引ル（Ｌ　ｉら、Ｊ、 Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９７０．９２．７６０８９および３−ヒドロキシ −４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン（Ｄｈｂｔ−ＯＨ）−ｕステル（Ｋ ｏｎｉｇら、Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、、１９７３．１０３．２０２４および２０３４ ）などの活性エステル誘導体を当初に形成させること、またはたとえば対称無水 物などの無水物を当初に形成させることを含む、いくつかの方法の何れを用いで ある形態の導入アミノ酸にカルボキシル基を付与する事によって結合させること が出来る。その代わりに、導入するアミノ酸のカルボキシル基には直接的に、た とえばジシクロへキシルカルボジイミド（Ｓｅｅｈａｎら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ 、Ｓｏｃ、、１９５５．７７．１０７６）またはその誘導体などの縮合試薬を用 いて最後にカップリングしたアミノ酸のＮ一端末と反応させることが出来る。ベ ンゾトリアゾリルＮ−オキシトリス−ジメチルアミノホスホニウム　へキサフル オロホスフェート（ＢＯＰ）、すなわち“カスドロの試薬″（たとえば、Ｒｉｖ ａｉｌｌｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　１９８０．３６．３４１３）が、第 二級アミノ基を含むＰＮＡ分子を構築する場合勧められる。最後に、最近報告さ れたアミノ酸弗化物（Ｃａｒｐｉｎｏ、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９９ ０．１１２．９６５１）　に類似した　活性化ＰＮＡモノマーも、ＰＮＡ合成に おいても使用できる相当な見込みがある。
保護基を含む所望のＰＮＡ鎖を構築した後、次ぎの工程は、通常はＰＮＡ鎖のア ミノ酸部位の脱保護と合成したＰＮＡを固体支持体から開裂させることであろう 。これらのプロセスは、実質的に同時に生起させて、その結果所望の形状で遊離 のＰＮＡ分子を得ることが可能である。その代わりに、これら二つの別々に合成 されたＰＮＡ鎖を縮合させねばならない場合は、合成のスタート時に適当なスペ ーサー基を選択して、かくして所望のＰＮＡ鎮をそれぞれの固体支持体から開裂 させ（両方のペプチド鎖ともなおそれぞれ側鎖保護基を含んでいる）、次いで最 後に、たとえば二つの側鎖保護されたペプチド鎖をカップリングさせた後側鎖保 護基を除去して、かくしてより長いＰＮＡ鎮を形成せしめることによって、この ような反応は可能である。
上記した”Ｂｏｃ−ベンジル“保護スキームにおいて、側鎖の最終的な脱保護お よびＰＮＡ分子の固体支持体からの開放は、たとえば無水ＨＦ　（Ｓａｋａｋｉ ｂａｒａら、Ｂｕｌｌ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｊｐｎ、、１９６５．３８．４９２ １）、トリス（トリフルオロ酢酸）ホウ素（Ｐｒｅｓｓら、Ｈｅ１ｖ。
Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ、　１９７３．４６．１６０９）およびトリフルオロメタン スルホン酸やメタンスルホン酸（Ｙａｊｉｍａら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ 、、Ｃｈ　ｅ　ｍ　、　Ｃｏ　ｍ　ｍ　、、１９７４．１０７）などのスルホン 酸類などの強酸を使用することに依って実施されるのがもっとも多い。このよう な通常の強酸（たとえば、無水ＨＦ）による脱保護方法は、極めて反応性の強い カルボカチオンを生成し、それによってＰＮＡ鎖の中における敏感な残基のアル キル化やアシル化が起きる可能性がある。
このような副反応は、アニソール、フェノール、ジメチルサルファイド・やメル カプトエタノールなどのスカベンジャー（捕捉剤）を存在させることによっては 部分的にしか回避出来ないので、従ってザルファイドを用いた酸加水分解的３． ２脱保護法（Ｔａｍら、Ｊ。
Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、、　１９８３．１０５．６４４２およびＪ、Ａｍ、Ｃ ｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９８６．１０８．５２４２）、所謂°°低い”方法は、有 害なカルボカチオンの前駆体を除いて、不活性なスルフオニウム塩を形成させる のであるが、ペプチドやＰＮＡ合成においては単独でまたは”高い”方法と組合 せて頻繁に用いられる。それ程頻繁ではないが、特別の場合には、脱保護するこ とおよび／またはＰＮＡ−固体支持体との結合を最終的に開裂させるために用い られる方法としては、たとえば、塩基接触アルコール分解（Ｂａｒｔｏｎら、Ｊ 、Ａ　ｍ、ｃｈｅｍ、ｓｏｃ、、１９７３．９５．４５０Ｆ）やアンモニア分解 ならびにヒドラジン分解（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙら、Ｃｈｅｍ、Ｉｎｄ、、１９６ ４．１４２３）、水素分解（Ｊｏｎｅｓ、　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔ、ｔ 、、　１９７７．２８５３および５ｅｈｌａｔｔｅｒら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ ｎ　Ｌｅｔｔ、、１９７７．２８６１）および光分解（Ｒｉｃｈ　ａｎｄ　Ｇｕ ｒｗａｒａ、　Ｊ、Ａｍ。
Ｃｈｅｍ、Ｓｃｏ、１９７５．９７．１５７５）などの方法が挙げられる。
最後に、“通常の“ペプチドの化学的合成と異なって、たとえばアミノエチルグ リシル主鎖単位に基づいたＰＮＡ類などのアキラル１’ＮＡ類の段階的鎖構築は 、かかるカップリング反応はラセミ化を伴わないので、Ｎ一端末またはＣ一端末 の何れかから出発することが出来る。
大半の走査は、固相ペプチド合成の合成サイクルにおけるのと同一である（同相 ＰＮＡ合成についても当てはまるように）事実を認識することに基づいて、新規 のマトリックス、すなわちＰＥＰＳが多数のペプチド類の合成を容易にするため に最近導入された（Ｂｅｒｇら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１９８９．１１ １．８０２４および国際特許出願Ｗ０　９０１０２７４９号）。このようなマト リックスは、長鎖のポリスチレン（ＰＳ）グラフト（１０６のオーダーの分子量 ）をぶら下げたポリエチレン（ＰＥ）フィルムから構成される。このフィルムの ［コーディングの能力は、ヒーズマトリックスと同じ程度に高いが、ＰＥＰＳに は、多段合成に同時に適合させる別の柔軟性がある。すなわち、新規な固相ペプ チド合成方法においては、かかるＰＥＰＳフィルムは、不連続の標識されたシー トに加工されるが、それぞれのシートは、個別の分画部として機能する。このよ うな合成サイクルの同一の工程の全てにおいて、これらのシートは、単一の反応 容器の中において一体に保持され、かくして通常の方法による単一ペプチドの合 成と近似した速度で複数のペプチド合成を同時に実施ゼしめることが可能である 。このＰＥＰＳフィルム支持体は、該当する特殊化学に適合せしめられた結合基 またはスペーサー基を含んで成り、複数のＰＮＡ分子の合成において特に有用で 貴重であるはずと推定された。それというのも、四つの”プソイド−ヌクレオチ ド”単位のそれぞれに対して一つずつ、僅かに四つの異なる反応分画部しか通常 は必要とされないので、概念上合成が簡単であるからである。すなわち、ＰＥＰ Ｓフィルム支持体は、平行したかつ実質的に同時の態様でかす多くのＰＮＡ合成 において試験されて、何れも成功している。ＰＥＰＳから得られた製品の収率と 品質は、伝統的なポリスチレンビーズ支持体を使用することによって得られた収 率と品質に比肩し得るものであった。また、たとえば不織フェルト、編みネット 、スティックまたはマイクロウェルプレートなどその他の外観形状のＰＥＰＳポ リマーを用いた実験の意結果では、合成効率に何等の制限もないことが判ってい る。
多数のペプチドを同時に合成するために提案された他の二つの方法もやはり、多 数の異なるＰＮＡ分子を調製製造するために適用され得る。これらの方法の最初 の方法は（Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｏｒｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　１９８４．８４．３９９８）、アクリル酸グラフ トポリエチレン製ロンドおよび９６個のマイクロリットルウェルのを用いて、成 長するペプチド鎖を固定化しかつ分画化した合成を実施するものである。この方 法は、極めて効率がよいものの、マイクログラムのスケールでのみ適用可能であ るに過ぎない。第二の方法は（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃ ａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　１９８５．８２．５１３１）、伝統的に使用されてき たポリマービーズを用いるものである。その他多重ペプチドまたはＰＮＡ合成の ために提案された方法で、本発明の文脈の範囲内に入る方法には、密度の異なる 二つの相異なる支持体を同時に用いる方法（Ｔｒｅｇａｅｒ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”、Ｊ、Ｍｅｉｅｒｈｏｆ ｅｒ編著、Ａｎｎ　Ａｒｂｏｒ　Ｓｃｉ、Ｐｕｂｌ、、Ａｎｎ　Ａｒｂｏｒ、１ ９７２　ｐｐ、１７５−１７８）、マニホルドを介して異なる反応容器を組み合 わせる方法（Ｇｏｒｍａｎ、　Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９８４．１３６ ．３９７）、マルチカラム固相合成法（たとえば、Ｋｒ５ｃｎａｋら、Ｉｎｔ、 Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、、１９８９．３３．２０９およ びＨｏ１ｍ　ａｎｄ　Ｍｅｌｄａｌ、”Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ 　２０ｔｈ　ＥｕｒｏｐｅａｎＰｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｍｐｏｄｉｕｍ”、Ｇ、Ｊ ｕｎｇおよびＥ、Ｂａｙｅｒ編著、Ｗａｌｔｅｒｄｅ　Ｇｒｕｙｔｅｒ　＆　Ｃ ｏ、、Ｂｅｒｌｉｎ、　１９８９　ｐｐ２０８−２１０）およびセルロースベー パーを使用する方法（Ｅｉｃｈｌｅｒら、Ｃｏ１１ｅｃｔ、Ｃｚｅｃｈ。
Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍｕｎ、、１９８９．５４．１７４６）がある。
従来からある架橋スチレン／ジビニルベンゼンコポリマーマトリックスおよびＰ ＥＰＳ支持体が目下とのところ固相ＰＮＡ合成の文脈において好ましいのである が、該当し得る固体支持体の例として、これに限定されないリストには以下のも のが含まれる：すなわち（１）既知量のＮ−第三級−ブトキシカルボニル−ベー ターアラニル−Ｎ゛−へキサメチレンジアミンを含むＮ、　Ｎ’−ビサクリロイ ルエチレンジアミンで架橋されたジメチルアクリルアミドのコポリマーを用いた 粒子。いくつかのスペーサー分子は、典型的にはベータアラニル基を介して、次 いでアミノ酸残基によって付加される。また、このベータアラニル含有モノマー は、重合過程においてアクロイルサルコシンモノマーで置換して、樹脂ビーズを 形成するのである。かかる重合を行なったあとで、ビーズにエチレジアミンを反 応させて、共有結合で結合させた官能基として一級アミンを含有する樹脂粒子を 形成する。このポリアクリルアミドを用いた支持体は、相対的にポリスチレンを 用いた支持体よりも親水性が高（、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミ ド、Ｎ−メチルピロリドンなどを含む極性の高い、非水性の溶媒とともに通常は 使用される（Ａｔｈｅｒｔｏｎら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９７５． ９７．６５８４、引ｏｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、１９７９．８．３５１およびＪ、Ｃ ，Ｓ、、ＰｅｒｋｉｎＩ、５３８　（１９８１）を参照）　；　（２）第二の固 体支持体のグループは、たとえば、多孔質のガラスピーズやシリカゲルなどのシ リカ含有粒子を用いるものである。一つの例は、Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓｓｏｃｉａ ｔｅｓｌＦｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡがＰＯＲＡＳＩＬ”なる商標で市 販されているトリクロロ−［３−（−クロロメチル）−フェニル］プロピルンラ ンおよび多孔質のガラスピーズとの反応生成物（Ｐａｒｒａｎｄ　Ｇｒｏｈｍａ ｎｎ、　Ａｎｇｅｗ、Ｃｈｅｍ、Ｉｎｔｅｒｎａｌ、Ｅｄ、、１９７２．１１． ３１４を参照）である。同様に、１，４−ジヒドロキシメチルベンゼンとシリカ とのモノエステル（Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓによって”ＢＩＯＰＡ Ｋ’なる商標で販売されている）が、有用であると報告されている（Ｂａｙｅｒ ａｎｄ　ＪｕｎｇｌＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９７０．４５０３ ）　；　（３）有用な固体支持体の三番目の種類は、二種の主要成分を含有して いるという意味で複合物と称することが出来る：すなわち、樹脂および使用した 有機合成反応条件に対して実質的にに不活性であるたの材料である。一つの複合 物の例は（Ｓｃｏｔｔら、Ｊ、Ｃｈｒｏｍ、Ｓｃｉ、１９７１．９．５７７を参 照）、疎水性の架橋処理したクロロメチル基を含むスチレンポリマーで被覆した ガラス粒子を用いたものであり、ＨａｍｄｅｎＳＣＴＳＵＳＡのＮｏｒｔｈｇａ ｔｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、によって製造販売されていたもの である。もう一つの複合物の例は、ポリスチレンがグラフトされているフッ素化 エチレンポリマーのコアーを含有するものである（Ｋｅｎｔ　ａｎｄ　Ｍｅｒｒ ｉｆｉｅｌｄ、　ｌ５ｒａｅｌＪ、Ｃｈｅｍ、、１９７８．１７．２４３および ｖａｎ　Ｒｒｅｔｓｃｈｏｔｅｎ、’Ｐｅｐｔｒｄｅｓ１９７４”、Ｙ、Ｗｏ１ ｍａｎ編著、Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　ＳｏｎｓＳＮｅｗ　Ｙｏｒｋ。
１９７５、ｐｐ、１１３−１１６を参照”）　；　（４）たとえばコドンシート などのＰＥＰＳ以外の同一種に属する固体支持体（Ｌｅｂｌ　ａｎｄ　Ｅｉｃｈ ｌｅｒ。
Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅｓ、、１９８９．２．２３２）およびヒドロキシプロピル アクリレートでコートされたポリプロピレン膜（Ｄａｎｉｅｌｓら、Ｔｅｔｒａ ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、１９８９．４３４５）もＰＮＡ合成に適している。
操作が手動または自動であれ、本発明の文脈における固相ＰＮＡ合或は、通常は バッチ法で行われる。しかしながら、このような合成の大半は、支持体をカラム に充填して（Ｂａｙｅｒら、ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、１９７０．４ ５０３および５ｃｏｔｔら、Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、Ｓｃｉ、、１９７１． ９．５７７）連続フローの型式で同様に実施してもよい。連続フロー固相合成に 関して、硬質のポリ（ジメチルアクリルアミド）−珪藻土（Ｋｉｅｓｅｌｇｕｈ ｒ）支持体（Ａｔｈｅｒｔｏｎら、Ｊ、Ｃｈｅｍ。
Ｓｏｃ、Ｃｂｅｍ、Ｃｏｍｍｕ、、１９８１．１１５１）が、特に成功している ように見えるが、もう一つの有用で貴重な方法は、標準的なコポリ（スチレン− １％−ジビニルベンゼン）支持体のために工夫されたものに関するものである（ Ｋｒｃｈｎａｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９８７．４４６９ ）。
固相方法は目下のところＰＮＡ合成の文脈において好ましいのであるが、その他 の方法論またはたとえばそれらとこのような固相法との組合せも適用される：す なわち、（１）ペプチドの古典的な溶液相法（たとえば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ、 ”Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ’″、Ｓｐ ｒｉｎｇｅｒ　−ＶｅｒｌａｇＳＢｅｒｌｉｎ　−Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋｌ　９８４ 　）であって段階的な構築法によるかまたはセグメント／フラグメント縮合法に よるものが、ＰＮＡ化合物の特に大規模な製造（グラム。キログラムまたはトン までも）を考慮する場合に特別に該当する：（２）所謂”液相”戦略であって、 たとえば線状ポリスチレンなどの溶解性ポリマー支持体（Ｓｈｅｍｙａｋｉｎら 、ＴｅｔｒａｈｄｒｏｎＬｅｔｔ、、１９６５．２３２３）やポリエチレングリ コール（ＰＥＧ）　（Ｍｕｔｔｅｒａｎｄ　Ｂａｙｅｒ、Ａｎｇｅｗ、Ｃｈｅｍ 、、Ｉｎｔ、Ｅｄ、Ｅｎｇｌ、、１９７４．１３．８８）を用いるものが有用で ある：（３）種々の分子量の（”ｐｏｌｙ　−ｄｉｓｐｅｒｓｅ”）ペプチドま たはＰＮＡ分子を生成するランダム重合（たとえば、０ｉｄａｎごＰｒ１ｎｃｉ ｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ−１ＭｃＧｒａｗ　−Ｈｉｌｌ 、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９７０）を参照）抗ウイルス効果のスクリーニングの 目的のために特に該当する；（４）ポリマーに支持されたアミノ酸の活性エステ ル（Ｆｒｉｄｋｉｎら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ。
Ｓｏｃ、１９６５．８７．４６４６）を使用した方法であって、”逆Ｍｅｒｒｉ ｆｉｅｌｄ合成法′または”ポリメリック試薬合成法“とも称される方法には、 中間物の単離および精製ができるという利点があり、従って、中間の大きさの任 意に保護されたＰＮＡ分子で、後刻引き続いてフラグメント縮合してより大きい サイズのＰＮＡ分子に変換することが出来るＰＮＡ　ｂｕｎｓｉを合成するため の特に適した方法を提供し得るものである；（５）ＰＮＡ分子をたとえばプロテ アーゼまたは新規な特異性を有するその誘導体（たとえばタンパク質工学などの 人工的手段によって得られる）を用いて酵素的に構築することが見込まれる。ま た、数多くのＰＮＡフラグメントを縮合して極めて大きなＰＮＡ分子に変えるた めの“ＰＮＡリガーゼを開発することも見込むことが出来る。（６）抗体は、興 味の対象とする実質的に如何なる分子としても生成させることが出来るので、Ｌ ｅｒｎｅｒ　（Ｔｒａｍａｎｔａｎ。
ら、５ｃｉｅｎｃｅ、１９８６．２３４．１５６６）と５ｃｈｕｌｔｚ　（Ｐｏ ｌｌａｃｋら、５ｃｉｅｎｃｅ、１９８６．２３４．１５７０）　）のグループ によって同時に発見された、最近開発された接触抗体（ａｂｚｙｍｅｓ）も、Ｐ ＮＡ分子を構築するための潜在的な候補として考慮されるべきであろう。すなわ ち、アシル−トランスファー反応を接触・触媒するａｂｚｙｍｅｓを産生させる のに顕著な成功が成されている（たとえば、５ｈｏｋａｔら、Ｎａｔｕｒｅ、１ ９８９．３３８．２６９およびそれに引用されている文献を参照）、ｓａｉｇｏ ｎｉ、対細菌ＳｔｅｗａｒＬのグループ（Ｈａｎら、５ｃｉｅｎｃｅ、］９９０ ．２４８．１５４４）によって開拓された完全に人工的な酵素を、ＰＮＡ合成に 適するように開発することも出来るであろう。一般的に適用可能な酵素、リガー ゼおよび接触抗体など、特異的なカップリング反応を仲介することが可能なもの の設計は、”通常の′ペプチド合成よりもＰＮＡ合成のための方がより容易に実 施されるはずである。その理由は、ＰＮＡ分子は、ペプチドを構成する二十個の 天然の（タンパク質生成性−ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ　−）アミノ酸と比較 して、僅か四つの異なるアミノ酸（四つの天然の塩基のそれぞれの一つに対応す るもの）から構成されている場合が多いからである。結論として、特異的なＰＮ Ａ分子を合成するためには単一の戦略では如何なるものも適合することはなく、 従って時にはい（つかの方法の組合せが最善に機能することがあり得るであろう 。
（ａ）モノマー　１のム これらのモノマーは好ましくは、第８図において概略を示した一般的スキームに よって合成される。この合成は、実施例２１−２３において記載した保ｆＩ／脱 保護方法を用いて（Ｂｏｃアミノエチル）グリシンのメチルまたはエチルエステ ルの何れかの製造を包含して成る。チミンモノマーの合成は、実施例２４−２５ において記載されており、また保護されたシトシンモノマーの合成は実施例２６ において記載されている。
保護されたアデニンモノマーの合成（第１４図）は、臭化酢酸エチルによるアル キル化（実施例２７）およびＸ線結晶学を用いた置換位置の確認−所望とする９ 位−を包含して成るものであった。次いでＮ＠−アミノ基をＮ−エチル−ベンジ ルオキシカルボニルイミダゾール　テトラフルオロ硼酸エステル試薬を用いてベ ンジルオキシカルボニル基で保護した（実施例２８）。このエステル生成物を単 に加水分解すると、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボキシメチルア デニンが得られ、これを次ぎに標準方法に用いた（実施例１０−１１、第８図） 。このアデニンモノマーを構築して、二つの異なるＰＮＡ−オリゴマーとした（ 実施例３０および３１）。
保護されたＧ−モノマーの合成を、第１５図において概略を示しである。この出 発物質である２−アミノ−６−クロロプリンを臭化酢酸でアルキル化しく実施例 ３２）、次いでこの塩素原子をペンジルオキシ基で置換した（実施例３６）。得 られた酸を試薬ＰｙＢｒｏｐ“を用いて（Ｂｏｃアミノエチル）グリシンメチル エステル（実施例３６）とカップリングさせ、次いで得られれたエステルを加水 分解した（実施例２３）。この０６−ベンジル基をＰＮＡ−オリゴマーの合成に おいて最終のＨＦ−開裂工程で除去した。開裂は、縮合剤としてジイソプロピル カルボジイミドを用いてＰ−ＮＡ−オリゴマーに組み込んだ場合、最終のｌ）Ｎ Ａ−オリゴマーの予期した量を測定することによって確認した（実施例５２）。
以下に記載する略記号を実験実施例において使用する：ＤＭＦ。
Ｎ５Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＣＣ，Ｎ５Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイ ミド、ＤＣＵＳＮ、Ｎ−ジシクロヘキシル尿素、ＴＨＦ、テトラヒドロフラン； ａｅｇＳＮ−アセチル（２′−アミノエチル）グリツジ；　ｐｆｐ、ペンタフル オロフェニル；　Ｂｏｃ、第三級−ブトキシカルボニル：Ｚ１ベンジルオキシカ ルボニル、ＮＭＲ，核磁気共鳴。
Ｓ、−重項、ｄ、二重項１ｔ、三重項、ｑ１四重項２ｍ、多重項；ｂ１ブロード 、δ、化学ンフト。
ＮＭＲスペクトルは、テトラメヂルシランを内部標準として用いてＪＥＯＬ　Ｆ Ｘ　９０Ｑ　分光計またはＢ　ｒ　ｕ　ｋ　ｅ　ｒ　２５０　Ｍ　Ｈｚで記録し た。質量分光測定は、ＶＧ　ＦＡＢ源およびプローブを備えたＭａｓｓＬａｂＶ Ｇ　１２−２５０四極子装置で行った。融点は、Ｂｕｃ旧融旧劇点測定装置録し 、補正は行わなかった。Ｎ５Ｎ−ジメチルホルムアミドは、４人モレキュラーシ ーブで乾燥し、蒸留し次いで４人モレキュラー７−ブ上で保存した。ピリジン（ ＨＰＬＣグレード）は、４人モレキュラーシーブ」−で乾燥し、保存した。その 他の溶媒は、入手”Ｔ能な最高級品質のものかまたは使用前に蒸留した。ジオキ サンは、使用前に塩基性アルミナを通した。Ｂｏｃ無水物、４−ニトロフェノー ル、臭化酢酸メチル、塩化ベンジルオキシカルボニル、ペンタフルオロフェノー ル を介して入手した。アミノ、ノドシン、アデニンは全て、Ｓｉｇｍａを介して入 手した。
薄層クロマトグラフィー（Ｔｉｃ）は、以下の溶媒系を用いて行った・（１）ク ロロホルム、トリエチルアミン：メタノール、７：１：２　；　（２）塩化メチ レン・メタノール、９　：　１　；　（３）クロロホルム：メタノール　酢酸８ ５　：　１０　：　５。スポットは、ＵＶ　（２５４ｎｍ）によってまたは／お よび１２０℃において５分間加熱後ニンヒドリン溶液（１００ｍｌの１−ブタノ ールおよび３０ｍｌ酢酸中に３ｇニンヒドリン）を噴霧し次いで噴霧後再度加熱 することによって可視化さゼた。
鎖１Ｊ【レムーＬ鎮 グループＡ，ＣおよびＤ（第１６図）の変化は、モノマー構成単位を合成し、Ｐ ＮＡ−オリゴマーに組み入れることによって証明される。
一つの例において、グループＣはＣＨ（Ｃｌ−Ｉｓ）基である。相応するモノマ ーの合成は、第１７図において概略を示すが、Ｂｏｃ−保護された１−アミノ− ２、３−プロパンジオール（実施例３５）の製造を包含して成り、このものは、 過ヨウ素酸塩で開裂してｂｏｃアミノアセトアルデヒドとし、このものを直接法 の反応に用いる。このｂｏｃアミノアセトアルデヒドを種々のアミンと縮合させ ることが出来る，実施例３６において、アラニンエチルエステルを使用した。実 施例１７　−　１９において、相当するチミンモノマー類を調製した。このよう なモノマーは、ＤＣＣ−カップリングプロトコールによって８＝量体に組み入れ た（実施例３０および３１）。
別の例において、第一グループは（ＣＩ（２）Ｓである。相当するモノマーの合 成は、第１８ａ図において概略を示し、かつ実施例４０および４６において記載 しである。
また別の例において、Ｃグループは、（ＣＨ．）、ＣＯ基である。チミンおよび 保護されたシトシンモノマーの合成は、第１９図および実施例４６から５１にま でにおいて概略を示しである。一つのユニットを包含するＰＮＡ−才リゴマ−を 用いたハイブリダイゼーション実験は、実施例６１に記載しており、これによれ ば、親和性が著しく低下しているが特異性は保持されていることが示される。
夾施胴」 ４−ニトロフェニル′″　：　−ブチルエステル炭酸ナトリウム（２９．１４ｇ 　；　０．２７５ｍｏｌ）および４−ニトロフェノール（１２．７５ｇ　：　９ １．６ｍｏ＋）をジオキサン（２５０ｍｌ）と混合した。Ｂｏｃ−無水物（２０ ．０ｇ　：　９１．６ｍｏｌ）をジオキサン（５０ｍｌ）　ｔとともにこの混合 物に移した。この混合物を１時間還流し、０℃にまで冷却し、ろ過し、１／３に まで濃縮し、次いで０℃において水（３５０ｍｌ）に注いだ。１／２時間攪拌し た後、この生成物を濾取し、水で洗浄し、次いで真空下でｓｉｃａｐｅｎｔ上で 乾燥した。収率、２１。
３ｇ　（９７％）。ｍ．ｐ．７３．０　−　７４．５℃（ｌｉｔｔ．７８．５　 −　７９．５℃）。元素分析、Ｃ．、　Ｈ，、　Ｎ　Ｏ．、実験値（理論値）　 Ｃ　：　５５．２０　（５５．２３）　Ｈ　：５、６１　（５．４８）　Ｎ　： 　５．８２　（５．８５）夾施上」 Ｎ’　−　Ｂｏｃ　−　２’−アミノエチル　グリシン　２）表題化合物をＨｅ ｉｍｅｒらによる方法の変法によって調製した。Ｎ−（２−７ミノエチル）グリ シン（１、３．ＯＯｇ　；　２５．４ｍｏｌ）を水（５０ｍｌ）に溶解し、ジオ キサン（５０ｍｌ）を加え、次いでｐＨを２Ｎ水酸化ナトリウムで１１２に調節 した。第三級−ブチル−４−ニトロフェノール炭酸エステル（７．２９ｇ　；　 ３０．５　ｍｍｏｌ）をジオキサン（４０ｍｌ）に溶解し、２時間かけて滴下し たが、この間においてｐＨは２Ｎ水酸化ナトリウムで１１．２に維持した。ｐＩ Ｉは、３時間以上的的に１１。
２に調節し、次いで溶液を一夜放置した。溶液を０℃にまで冷却し、１）　Ｈを 注意深＜　０．５Ｍ塩酸で３．５に調節した。この水溶液を０．５Ｍクロロホル ム（３　ｘ　２００ｍｌ）で洗浄し、ｐ　Ｈを２Ｎ水酸化ナトリウムで９５に調 節し、この溶液を真空下で（１４ｍｍＨｇ）蒸発転用した。残渣をＤＭＦ　（２ ５　＋２ｘｌＯｍｌ）で抽出し、抽出液をろ過して、過剰の塩を除去した。こう することによって、表題化合物の溶液が収率６０％かつｔｌｃ　（溶媒系１、ニ ンヒドリンで可視化した、Ｒｆ＝０．３）による純度が９５９６以上で得られる 。この溶液をこれ以上精製することなく以後のＢｏｃ−ａｅｇの製造に使用した 。
火施上Ｊ Ｎ二１−カルボキシメチルチミン　４）この方法は、文献奇さの方法とは異なる が、より容易簡単であり、高い収率が得られ、製品中に未反応のチミンが残留し ない。ＤＭＦ（９００ｍｌ）中にチミン（３、４０．０ｇ　；　０．３１７ｍｏ ｌ）および炭酸カリウム（８７．７ｇ　；　０．６３４ｍｍｏｌ）を分散させた 分散液に、臭化酢酸メチルエステル（３０．ＯＯｍｌ　：　０．３１７ｍｍｏｌ ）を加えた。この混合物を窒素雰囲気下で一夜激しく攪拌した。この混合物をろ 過し、真空下で蒸発転用した。固形の残渣を水（３００ｍｌ）および４Ｎ塩酸（ １２ｍｌ）で処理し、０℃において１５分間攪拌し、ろ過し、水（２／７５ｍｌ ）で洗浄した。沈殿物を水（１２０ｍｌ）および２Ｎ水酸化ナトリウム（　６　 ０　ｍ　ｌ　）で処理し、１０分間沸騰させた。この混合物を０℃に冷却し、ろ 過し、次いで純粋の表題化合物を４Ｎ塩酸（７０ｍｌ）を添加Ｖることによって 沈殿さゼた。ｓｉｃａｐｅｎｔ上で真空上乾燥させた後での収率、３７．１ｇ　 （６４％）。’Ｈ−　ＮＭＲ　（９０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄｓ）：１１、３３　 ｐｐｍ　（ｓ．ＩＨ　、ＮＨ）　；　７．４９　（ｄ，Ｊ　＝　０．９２Ｈｚ， ＩＨ．ＡｒＨ）　；Ｌ３８　（ｓ．２Ｈ，ＣＨ　；　１．７６　（ｄ，Ｊ　＝　 ０．９２Ｈｚ，Ｔ　−　ＣＨ，）。
夾施漕」 Ｎ−１−カルボキシメチルチミン　ペンタフルオロフェニル　エステル（５） Ｎ−１−カルボキシメチルチミン（４、１０．０ｇ　；　５４．３ｍｍｏｌ）お よびペンタフルオロフェノール（１０．０ｇ　；　５４．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ （１００ｍｌ）中に溶解し、氷水で０℃にまで冷却した。ＤＣＣ　（１３．４５ ｇ　；６５、２ｍｍｏｌ）を次ぎに添加した。温度が５℃以下になったとき、水 浴を取り除き、混合物を常温で３時間攪拌した。沈殿したＤＣＵをろ過して除去 し、ＤＭＦ　（２　ｘ　１０ｍｌ）で二度洗浄した。濾液を合わせてエーテル（ １４００ｍｌ）に注ぎ、０℃にまで冷却した。姓きゅエーテル（１４００ｍｌ） を添加し、混合物を一夜放置した。表題化合物をろ過して単離し、石油エーテル で完全に洗浄した。収率：１４、８ｇ　（７８％）。この製品は、次ぎの反応を 実施する出来るほど純粋であったが、分析用サンプルを２−プロパツールから再 結晶して得た。ｍ．ｐ．２００．５　−　２０６℃。元素分析、Ｃ，ｓ　Ｈｔ　 Ｆ８　Ｎ！　Ｏイ実験値（理論値）　Ｃ：４４．７９　（４４．５９）　Ｈ：２ ．１４　（２．０１）　Ｎ：８．１３　ｃｓ。
００）。ＦＡＢ−ＭＳ　：　４４３　（Ｍ　＋　１＋グリセリン）、３５１　（ Ｍ＋　１）。
Ｈ−ＮＭＲ　（９０ＭＨｚ　；　ＤＭＳＯ　−　ｄｌｌ）　：　１１．５２ｐｐ ｍ　（ｓ，ＩＨ，ＮＨ）　；７、６４　（ｓ，ＬＨ，ＡｒＨ）　；　４．９９　 （ｓ，２Ｈ，ＣＨＸ）　；　１．７６　（ｓ，３Ｈ，Ｃｊｊａ）。
夾１あ」 １−Ｂｏｃ−ｓｅ　チミン　６ ＤＭＦ−溶液に上から、トリエチルアミン（７１０８ｍｌ　；　５０．８ｍｍｏ ｌ）を加え、次いでＮ−１−カルボキシメチルチミン　ペンタフルオロフェニル エステル（５、４．４５ｇ　；　１２．７ｍｍｏｌ）を加えた。生じた溶液は、 １時間攪拌し、０℃に冷却しカチオン交換物質（”Ｄ　ｏ　ｗ　ｅ　ｘ５０ＷＸ −８”、４０ｇ）で２０分間処理した。このカチオン交換物質をろ過して除去し 、ジクロロメタン（２　ｘ　１５ｍｌ）で洗浄し、ジクロロメタン（１５０ｍり を加えた。生じた溶液を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上 で乾燥し、真空下で蒸発転用したが、先ず水アスピレータで、次いでオイルポン プで行った。残渣を水（５０ｍｌ）で振盪し、蒸発転用した。この方法をもう一 度繰り返した。残渣を次いでメタノール（７５ｍｌ）に溶解し、エーテル（６０ ０ｍ）と石油エーテル（１．４Ｌ）に注いだ。−夜攪拌した後で、白色固体をろ 過して単離し、石油エーテルで洗浄した。真空下でｓｉｃａｐｅｎｔ上で乾燥し て、３．５０ｇ　（７１．７％）が得られた。
ｍ．ｐ．１４２−１４７℃。元素分析、Ｃ．、　Ｈ．、　Ｎ．０，、実験値（理 論値）Ｃ：４９、５９　（５０．００）　Ｈ　：　６．４３　（６．２９）　Ｎ 　：　１４．５８　（１４．５８）。’Ｈ−ＮＭＲ　（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ −ｄａ）。二級アミド結合の周囲の回転が限定されているため、シグナルのいく つかが、２：ｌの比率で二重化した（リストにおいて大きい方はｍｊでまた小さ い方はｍｉで示しである）。１２．７３ｐｐｍ　（ｂ，ＩＨ，　−　ＣＯＯＨ） 　；　１１．２７ｐｐｍ　（ｓ，ｍＬ。
イミ　ド）；　１１．２５ｐｐｍ　（ｓ、ｍｉ、、イミ　ド）；　７．３０ｐｐ ｍ　（ｓ、ｍｊ、、ＡｒＨ）；（ｔ、２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣＨ，ＣＨ−）；３．８ ７ｐｐｍ　（’ｑ”、２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣＨｓＣＨａ−）；　１．４４　（ｓ、 ９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。ＦＡＢ　−ＭＳ　：　５５１　（１０；　Ｍ　＋　１）：４ ９５　（１０；Ｍ＋１−ｔＢｕ）；４５１　（８０；　−Ｂｏａ）。
実施１１ Ｎ４−ベンジルオキシカルボニルシトシン　９はぼ１時間かけて、塩化ベンジル オキシカルボニル（５２ｍｌ　；　０゜３６ｍｏ＋）を、乾燥ピリジン（１００ ０ｍｌ）にシトシン（８，２０，０ｇ　。
０．１８ｍｏｌ）を分散させた分散液に０℃において、オーブンで乾燥させた装 置の中で窒素雰囲気中にて滴下した。この溶液を一夜攪拌し、その後このピリジ ン分散液を真空下で蒸発転属させた。水（２００ｍｌ）と４Ｎ塩酸を添加して、 ｐＨ〜１にした。生じた白色沈殿をろ過して除き、水で洗浄し、空気をサクショ ンして部分的に乾燥した。まだ湿潤している沈殿を無水アルコール（５００ｍｌ ）と−緒に１０分間沸騰させ、０℃にまで冷却し、ろ過し、エーテルデで　完全 に洗浄し、真空下で乾燥した。収率、２４゜７ｇ　（５４％）。ｍ。
ｐ、　＞　２５０℃。元素分析、ＣＩ２　Ｈｌｌ　Ｎｘ　Ｏｓ、実験値（理論値 ”）　Ｃ：５８゜５９　（５８，７７）　Ｈ：　４．５５　（４，５２）　Ｎ　 ：　１７．１７　（１７，１３）。ＮＭＲスペクトルは、本製品を溶解出来なか ったため一切記録しなかっｊこ。
実施立」 Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ＋−カルポキシメチルシトシベンジルオキ シ力ルポニル／トシン（９，２１，０ｇ　；　８２．６ｍｍｏ＋）ととを加え、 混合物を０℃で１５分間攪拌し、ろ過し、水（２ｘ　７５ｍ１）し、メタノール （１０００ｍｌ）から再結晶し、よくエーテルで洗浄が判り、淡赤色を呈してい た。ｍ、ｐ、２６６−２７４℃。元素分析、Ｃｌ４５３２）　Ｎ　：　１４．０ ４　（１３，８６）。。’Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ、）　：　８ ．Ｏ２ｐｐｍ　（ｄ、Ｊ　＝　７．３２Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ−６）　；　７．３９　 （ｓ、５Ｈ，Ｐｈ）　；７．０１　（ｄ、Ｊ　＝　７．３２Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ−５ ）　；　５．１９　（ｓ、２Ｈ，ＰｈＣＨ−）　；　４゜５２　（ｓ、２Ｈ）。
ＦＡＢ　−ＭＳ　：　４７０　（Ｍ　＋　１）。
下で蒸発転属したが、先ず最初は水アスピレーター１次ぎにオイ（ｓ、９Ｈ，ｔ Ｂｕ）。ＦＡＢ−ＭＳ：５０４　（Ｍ＋１）　；４４Ｂ　（Ｍ＋１−ｔＢｕ）。
ＦＡＢ−ＭＳ・４７０　（Ｍ　＋　１）。
ン　フルオロフェノールエステル　１３ＦＡＢ　−ＭＳ　＋　４７０　（Ｍ　＋ 　１）。
Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−１−Ｂｏｃ　−ａｅｇ−シトシン（１２、４ ）　本質的の七記酸のスペクトルを示したが、該エステルが加水分解したことに 起因するのが最も可能性が高い。ＦＡＢ−ＭＳ　：　６７０（Ｍ＋１）；６１４ 　（Ｍ＋１−ｔＢｕ）支施ｊけλ （：クロロカノしずキン−９−クロロアクリジン４−カルボキシアクリジン（６ ，２５ｇ　；　２６．１ｍｍｏｌ）、塩化ヂオニ□ル（２５ｍｌ）および４滴の ＤＭＦを、固体の物質が全て溶解するまで窒素を流しながら緩やかに加熱した。
次いでこの溶液を４０分間還流し、過剰の塩化チオニルを真空下で除去した。塩 化チオニルの最後の痕跡量を乾燥ベンゼン（Ｎａ−Ｐｂで乾燥）と−緒に二度蒸 発させて除去した。残留する黄色の粉末を直接次ぎの反応にそまま用いた。
犬施り刀 ６−アミノヘキサノン酸メチル塩酸塩（４，７０ｇ　；　２５．９ｍｍｏｌ）を 塩化メチレン（９０ｍｌ）に溶解し、０℃にまで冷却し、トリエチルアミン（１ ５ｍｌ）を加え、生じた溶液を直ちに酸の塩化物に上から加えた。この酸塩化物 を入れた丸底のフラスコを水浴中で０℃にまで冷却］、た。この混合物を０℃で ３０分間また室温で３時間激しく攪拌し、この混合物をろ過して残留する固形物 除去したが、この固形物を塩化メチレン（２０ｍｌ）で洗浄した。この赤−茶色 の塩化メチレンろ液を飽和重炭酸ナトリウムで二度洗浄しまた飽和塩化すＩ−リ ウムで一度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で蒸発転用した。得られ た油状の物質に、乾燥ベンゼン（３５ｍｌ）およびリグロイン（６０−８０℃、 Ｎａ−Ｐｂで乾燥）を加えた。この混合物を還流するまで加熱した。活性炭およ びセライトを加えて、この混合物を３分間還流した。ろ過した後で、表題化合物 は、磁気攪拌下で冷却すると結晶化した。このものをろ過して単離し、石油エー テルで洗浄した。本品は、固形の水酸化カリウム上で保存した。収率　５．Ｏｇ 　（５０９６）。
実施デュＡ ４−（５−−メ）・キンカルボニルペンチル　アミドカルボニル　−匹二」恒二 ニエ〔−ニトロベンズアミド　へキンルアミノ　−二ノアクリジン ４−（５−−メトキン力ルポニルベンチルアミトカルポニル）−〇−クロロアク リジン（１，３０ｇ　；　３．３８ｍｍｏｌ）およびフェノール（５ｇ）を、窒 素気流下で３０分間で８０℃にまで加熱し、その後６−（４゜−ニトロベンズア ミド）−１−ヘキシルアミン（８９７ｍｇ　；　３，３８ｍｍｏｌ）を加えた。
温度は２時間で１２０”Ｃまで上昇した。反応混合物を冷却し、塩化メチレン（ ８０ｍｌ）を加えた。生じた溶液は２Ｎ水酸化大トリウム（６０ｍｌ）で三度ま た水で一度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で蒸発転用した。得た赤 色オイル（１，８ｇ）を塩化メチレン（４０ｍｌ）に溶解し、０℃にまで冷却し た。エーテル（１２０ｍｌ）を加え、出た溶液を一夜攪拌した。こうすることに よって、固形物質とオイルの混合物が得られた。この固形ブッヲろ過して単離し た。固形物とオイルとを塩化メチレン（８０ｍｌ）に再度溶解し、冷エーテル（ １５０ｍｌ）に滴下した。２０分間攪拌したあと、表題化合物をろ過してオレン ジ色の結晶として単離した。本品をエーテル出洗浄し、水酸化カリウム」二で真 空にて乾燥した。収率：１．６０ｇ　（７７％）。ｍ、ｐ、１４５−１４７℃。
尖１」口上 ４−（５−カルボキシペンチル　アミドカルボニル　−９−６′−４”　−二］ ・ロベンズアミド）へキシルアミノ　−アミノアクリニ ４−（５−メトキシカルボニルペンチル）アミドカルボニル）−９−［６°−（ ４”−ニトロベンズアミド）へキシルアミノ］−アミノアクリジン（５０３ｍｇ 　；　０．８２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（３０ｍｌ）に溶解し、２Ｎ水酸化ナトリ ウム（３０ｍｌ）を添加した。１５分間攪拌した後、２Ｎ塩酸（３５ｍｌ）およ び水（５０ｍｌ）を０℃で加えた。３０分間攪拌したあとで、溶液をデカントし たところ、オイル状の物質が得られ、これを沸騰メタノール（１５０ｍｌ）に溶 解し、ろ過し、１／３の容積にまで濃縮した。このメタノール溶液に、エーテル （１２５ｍｌ）およびエタノールに溶かした塩酸５−６滴を加えた。この溶液を ０℃において１時間攪拌した後でデカントした。オイル状の物質を再びメタノー ル（２５ｍｌ）に溶解し、エーテル（１５０ｍｌ）で沈殿させた。−夜攪拌した 後で表題化合物が黄色結晶として単離された。
収率：４１７ｍｇ　（８０％）。ｍ、ｐ、１７３℃（分解）。
火１」口Ｊ （ａ）４−５−ペンタフルオロフェニルメオシカルポニルペンチル　アミドカル ボニル　−９−６’−（４”　−二トロベンズアＬド）へキシルアミノ　−アミ ノアクリジン　Ａｃｒ１０ｆ上記の酸（３００ｍｇ　；　０．．４８０ｍｍｏり をＤＭＦ　（２ｍｌ）と塩化メチレン（８ｍｌ）に溶解し、ペンタフルオロフェ ノール（９７ｍｇ　；　０゜５３　ｍ　ｍ　ｏ　ｌ　）を２　ｘ　２ｍｌの塩化 メチレンと共に移して添加した。
生じた溶液を０℃まで冷却し、この後ＤＣＣ（１２４ｍｇ　；　０．６０ｍｍｏ ｌ）を加えた。水浴を５分後に取り除き、混合物を一夜攪拌しつつ放置１７た。
沈殿したＤＣＵを遠心分離して除去し、遠心分離液を真空下で蒸発乾個しｊ−が 、先ず水アスピレータで次いでオイルポンプで蒸発転用（７た。残渣を塩化メチ レン（２０ｍｌ）中に溶解し、ろ過し、真空にて蒸発転用した。残渣を再び塩化 メチレンと石油エーテル（１５０ｍｌ）に溶解しｊ−０ｊ−−チル中の５Ｎ塩酸 １ｍｌを添加し、０℃で３０分間攪拌（７た後、溶媒をデカンテーションで除去 した。残留するオイル状物質を塩化メチ１ノン（１００ｍｌ）に溶解し、石油エ ーテルを加え、混合物を一夜攪拌しつつ放置した。翌日、黄色の沈殿結晶物をろ 過しては離し、大量の石油エーテルで洗浄した。収率　３００ｍｇ　（７８％） 、乾燥後。ｍ　、　ｐ　、　９７　、５℃（分解）。全ての試料は、満足するべ き元素分析結果、′Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲおよび質量スペクトルを示した。
（ｂ）ＰＮＡ化合物の合成実験、第８図を参照。
材料・Ｂｏｃ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）、ベンゾヒドリルアミン−、コポリ（スチ レン−１％−ンビニルヘンゼン）樹脂（ＢＨＡ樹脂）およびｐ−メチルへンゾヒ トリルアミンーコボリ（スチレン−１％−ジビニルヘンゼン）樹脂（Ｍ　Ｂ　Ｈ Ａ樹脂）をＰｎｅｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。その 他の試薬および溶媒は、それぞれ以下がら購入した・即ち、Ｂｉｏｇｒａｄｅの トリフルオロ酢酸は、ＨａｌｏｃａｒｂｏｎＰｒｏｄｕｃｔｓ社から、ジイソプ ロピルエチルアミン（９９％；これ以−Ｌ蒸留しなかった）およびＮ−アセデル イミダゾール（９８％）は、Ａｌｄｒｉｃｈ社から；Ｈ２Ｏは、二度蒸留した； 無水ＨＦは、ＵｎｉｏｎＣａｒｂｉｄｅ社から９合成グレードのＮ、Ｎ−ジメチ ルホルムアミドおよび分析グレードの塩化メチレン（これ以上蒸留しながった） は、Ｍ　ｅ　ｒ　ｃ　ｋ社から、ＨＩ）Ｉ−Ｃグレードのアセトニトリルは、Ｌ ａｂ　−５ｃａｎン土から；　ｐｕｒｕｍグレー川・のア用ソール、Ｎ、Ｎ−シ ンクロへキシルカルボジイミドおよびｐｕｒｉｓｓ、グレードの２．２．２−ト リフルオロエタノールは、Ｆｌｕｋａ社から購入した。
（ｂ）一般的方法および注記 別設に特記しない限り、以下を適用する。ＰＮＡ化合物はご一時的な”Ｎ−保護 のためにＴＦＡ−反応活性な第三級−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を用 い（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、　Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、、１９６４．８ ６．３０４）また”永久的な“側鎖保護のためにもっと酸に安定なベンジルオキ シカルボニル（Ｚ）および２−クロロベンジルオキシカルボニル（ＣＩＺ）を用 いて段階的固相方法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ。
Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、、１９６３．８５．２１４９）によって合成した 。Ｃ−末端アミドを得るために、ＰＮＡ類は、ＨＦ−反応活性なりＨＡまたはＭ ＢＨＡ樹脂（このＭＢＨＡ樹脂は、未置換ＢＨＡ樹脂を基準として最終ＨＦ開裂 を受け易い（Ｍａｔｓｕｅｄａら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　１９８Ｌ２．４５）） の上において構築した。全ての反応は（ＨＦ反応を除いて）、粗いガラスフリッ トを備えた、手動操作する標準固相反応容器において行った（Ｍｅｒｒｉｆｉｅ ｌｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１９８２．２１．５０２０）。元来”通 常の”アミノ酸を包含するペプチドのためにＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄおよびその共 同研究者（Ｓａｒｉｎら、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９８１．１１７．１ ４７）によって開発された定量的なニンヒドリン反応が、全ての樹脂に対して” 通常”用いられてきた有効吸光係数ε＝　１５０００Ｍ−’ｃｍ−’を用いると 、うまく適用され、個別のカップリングの完結度ならびに成長するペプチド鎖の 数を測定出来た。カップリング時の残留基ｎの理論的置換度Ｓ。−３は（合成サ イクルの過程において脱保護とカップリングが完璧でありがっＰＮＡの鎖終了も その逸失も一切ないことを前提とする）、以下の式から算定される；３、＝３． −、　ｘ　（１＋　（Ｓ＝−＋　ｘΔＭＷ　ｘ　１０−”　ｍｍｏｌ／ｍｏｌ） ）−’なお本式において、ΔＭＷは、分子量の増大分（［ΔＭＷ］＝ｇ／ｍｏｌ ）であり、またＳ。−１は、先行する残留基ｎ−１のカップリング時の理論的置 換度である（［Ｓ］　＝　ｍｍｏｌ／ｇ）。個別のカップリングの程度の推定値 （％）は、測定した置換度を基準として算出され（Ｓが決定されない限り）かつ 先立つサイクルのあとの残留する遊離アミノ酸基の数について補正はしていない 。ＨＦＨＮＮは、Ｔｏｈ。
Ｋａｓｅｉ　（Ｏｓａｋａ、　Ｊａｐａｎ）製のＤｉａｆｌｏｎＨＦ装置で実施 した。ＶｙｄａｃＣ，、（５ミクロン、０．４６　ｘ　２５ｃｍおよび５ミクロ ン。１　ｘ　２５ｃｍ）逆相カラムは、それぞれ５Ｐ８０００計器において分析 用および半一合成用ＨＰＬＣに用いた。緩衝液液Ａは、１リツトル当たり４４５ マイクロリツトルのトリフルオロ酢酸を含む６０容量％のアセトニトリル／水溶 液であり、また緩衝液Ｂは、１リツトル当たり３９０マイクロリツトルのトリフ ルオロ酢酸を含む６ｏ容量％のアセトニトリル／水溶液である。直線勾配は、３ ０分で０−１００％の緩衝液Ｂで、流速は１．２ｍｌ／分（分析用）と５ｍｌ／ 分（半製造用）であった。溶出液は２１５ｎｍ　（分析用）と２３０ｎｍ　（半 製造用）においてモニターした。ＰＮＡ類の分子量は、最も多い同位元素の平均 値から瀉Ｃｆプラズマ脱着の飛行時間分光測定法によって決定した。
（定量的ニンヒドリン反応によって０．５７ｍｍｏｌ／ＮＨｘ／ｇ含有する旨決 定された）、３．２等量のＢｏｃＴａｅｇ　−０Ｐｆｐをほぼ３３％のＤＭＦ／ ＣＨ，ＣＩ、中で用いて開始した。個別のカップリング反応は、手動操作する、 ６ｍｌの標準固相反応容器内で少なくとも１２時間振盪することによって実施し 、未反応の７ミノ基は、合成の選択された段階でアセチル化することによってブ ロックした。鎖延長の過程は、定量的ニンヒドリン反応によっていくつかの段階 でモニターそれぞれ５．１０および１５の残基を構築した後で取り出した。
Ｉ　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，５０１，３０＜９９．７２　ＢｏｃＴａｅｇ　 ＮＤ　Ｏ，４４１，４３＜９９．９３　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，２９０，３９３， ３３９９，３４ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，２７０，３５＋３．３０　９６．３５　Ｂ ｏｃＴａｅｇ　Ｏ，２６０，３２８，３３＞９９．９６　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ 　Ｏ，３０７，７８＞９９．９７　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，２８１３，８１ ７，２２＜９９．９８　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，２６１４，００＜９９．９ ９　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，２４３０，３３９３，２１０ＢｏｃＴａｅｇ　 Ｏ，１６０，２１＋１．６７　２．６７　＞９９．９１１　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｎ Ｄ　Ｏ，２１４，５８＞９９．９＋２　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，２０４，８ ７＜９９．４１３　ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，１９１，６７＞９９．９＋４　 ＢｏｃＴａｅｇ　ＮＤ　Ｏ，１８１４，０２＜９３．１＋５　ＢｏｃＴａｅｇ　 Ｏ，０７０，１７４，２０３，３３＞９９．９（ｂ）　Ａｃｒ’　−［Ｔａｅｇ Ｌｓ　ＢＨＡ樹脂の合成残留ＢＯＣ−［ＴＢｅｇｌ＋ｓ　−ＢＨＡ樹脂（推定乾 燥重量はほぼ３０ｍｇ　；０．００２ｍｍｏ１成長＃Ｊ１）の脱保護を行ったあ と、３ｍｌの固相反応容器において、Ｈ−［Ｔａｅｇ］ｕ　ＢＨＡ樹脂を６６％ はぼＤ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨ。
ＣＨｚ　Ｉ　ｍ　Ｉ中はぼ５０当量（８０ｍｇ　；　０．１１ｍｍｏｌ）のＡｃ ｒ’　−０Ｐｆｐ（即ち、ペンタフルオロフェノール０．１１Ｍ溶液）に反応さ せた。定量的ニンヒドリン反応によって判定されたように、アクリジン部のカッ プリングはほぼ定量的に近似していた。
（ｃ）　Ｈ［ＴａｅｇＬｇ　ＮＨｔの開裂、精製および同定保護されたＢｏｃ　 −［Ｔａｅｇ］、　−ＢＨＡ樹脂の一部を、塩化メチレン中５０％のトリフルオ ロ酢酸と反応させて、ＨＦ開裂に先だってＮ−末端Ｂｏｃ　（これは、潜在的に 有害な三級−ブチルの前駆体である）を除去した。中和しかつ洗浄しく”合成実 験記録”工程２−４の方法と同様の方法で）次いで真空で２時間乾燥した後、生 じた６７．１ｍｇ　（乾燥重量）のＨ−［ＴａｅｇＬｇ　−ＢＨＡ樹脂を０℃に おいて６０分間攪拌しつつ５ｍｌのＨＦ：アニソールで開裂させた。ＨＦを除去 した後、残渣を乾燥ジエチルエーテル（４ｘ　１５ｍＬそれぞれ１５分間）とと もに攪拌して、アニソールを除去し、フリット処理したガラス漏とで重力ろ過し 、乾燥させた。ＰＮＡを次ぎに６０ｍ１（４ｘ　１５ｍ１．それぞれ１５分間攪 拌）の酢酸水溶液に抽出した。
この溶液のい（つかのアリコートを分析用逆相ＨＰＬＣによって分析して、この 粗製ＰＮＡの純度を測定した。１３．０分における主ピークは、前吸光率のほぼ ９３％を占めていた。残りの溶液は、凍らむ五つのバッチから精製した。この主 ピークは、半合成用逆相カラムを用いて集めた。アセトニトリルをスピードＶａ Ｃで除き、残留溶液を凍結しくドライアイス）、その後凍結乾燥させると、９９ ％以上の純度のＨ［Ｔ　ａ　ｅ　ｇ　］　６　Ｎ　Ｈ２が１３．１ｍｇ得られた 。このＰＮＡ分子は、直ちに水に溶解し、質量分光分析による測定に基づいて正 確な分子量を有していた。（Ｍ　＋　Ｈ）”について、計算したｍ　／　ｚ値は １３４９．３でありまた測定したｍ　／　ｚ値は１３４７．８でありた。
（ｄ）　Ｈ−［Ｔａｅｇ］＋ｏ　ＮＨｔの開裂、精製および同定保護したＢｏｃ −［Ｔａｅｇ］ｔｏ　−ＢＨＡの一部を上記ＣＣ）項において記載したように処 理し、１８．９ｍｇの乾燥Ｈ−［Ｔａｅｇ］、、　−ＢＨＡ樹脂をＨＦ開裂する と１１．０ｍｇの粗製物が得られた。１５．５分における主ピークは、全吸光度 のほぼ５３％を占めていた。はぼ１ｍｇ％を占めるもう少しブロードのティル部 は、繰り返し精製しても除去出来なかった（若干減少しただけ）。質量スペクト ルは正確な分子量のＨ−［Ｔａｅｇ］＋。−ＮＨ２の存在を確認するものであっ たが、そのスペクトルから判定して、このようなテイル現象は、多少とも充分に 定義された、いくつかの凝集／配座状態にある標的分子にＹＰるものである。従 って、この粗製物は、標的分子を上記した５３％以上は含有している可能性があ る。Ｈ［Ｔａｅｇ］＋ｏ　ＮＨ２は、水に容易に溶解する。（Ｍ　＋　Ｈ）’に ついては、計算ｍ　／　ｚ値は２６７９゜６でありかつ測定ｍ／ｚ値は２６８１ ．５であった。
（ｅ）　Ｈ［Ｔａｅｇｌ＋ｓ　ＮＨｔの開裂、精製および同定保護したＢｏｃ　 −［Ｔａｅｇ）、、−ＢＨＡ樹脂の一部を＜ｃ＞項において記載したと同様に処 理して、１３．９ｍｇの乾燥Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇｌ＋ａ−ＢＨＡ樹脂をＨＦ開 裂して３．２ｍｇの粗製物を得た。２２．６分における主ピークは、ブロードな 膨れ部に位置し、全吸光度のほぼ６０％を占めていた（第１２ａ図）。再び（前 項を参照）、この膨れ部は、の物質を得た。（Ｍ　＋　Ｈ）゛については、計算 ｍ　／　ｚ値は４０３３．９でありかつ測定ｍ　／　ｚ値は４０３２．９であっ た。
（ｆ）　Ａｃｒ’　−［Ｔａｅｇ］、、　−ＮＨ，の開裂、精製および同定保護 されたＡｃｒ’　−［Ｔａｅｇ］＋ｓ　−ＢＨＡ樹脂の一部を（ｂ）項において 記載したように処理して２９．７ｍｇの乾燥Ａｃｒ’　［ＴａｅｇＬｇ−ＢＨＡ 樹脂をＨＦ開裂して１４．３ｍｇの粗製物を得た。全て合わせると、２３．７に 分における主ピークおよび２９．２分における“ダイマー”（下記を参照）は、 全吸光度のほぼ４０％を占めていた（第１２ｂ図）。この粗製物を繰り返し精製 して、恐らくは９９％以上の純度のΔｃｒ’　−［Ｔａｅｇコ＋ａ　ＮＨ２２７ ，４分、２９．２分および最後に１００％緩衝液Ｂで溶出する大きく、ブロード な膨れ部として溶出するすると（数時間）成長し、最後に定量的に下降するとい う観察結果と一致する。（Ｍ　十Ｈ）’については、計算ｍ　／　ｚ値は４５９ ３．６でありかつ測定ｍ／ｚ値は４５８８．７であった。
（ｇ）合成実験記録１ （１）　ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ、　（１：　１、ｖ　／　ｖ　）によるＢｏｃ−脱 保護、３ｍｌ、ａｘ１分および１×１０分；　（２）　ＣＨ，Ｃ１，による洗浄 、３ｍｌ、Ｂｘ１分：（３）　ＤＩＥΔ／ＣＨ，Ｃ１２（１：　１９、ｖ／ｖ） による中和、３ｍｌ、３ｘ２分；（４）　ＣＨ，Ｃ１，による洗浄、３ｍｌ、ａ ｘ１分、および１分間のドレーン；（５）２−５ｍｇのＰＮＡ−樹脂試料を取り 出し、完全に乾燥してニンヒドリン定量分析に供して置換度を測定する＋（６） １ｍｌのＣＨ。
Ｃ１，に溶解した３、２当量の（０，１８ｍｍｏｌ　；　１００ｍｇ）　Ｂｏｃ Ｔａｅｇ　−０Ｐｆｐを添加し、次いで０．５ｍｌのＤＭＦ　（最終のペンタフ ルオロフェノール濃度−０，１２Ｍ））を添加する；（７）ＤＭＦによる洗浄、 ３ｍｌ、１ｘ２分；　（８）　ＣＨ，Ｃ１，による洗浄、３ｍｌ、Ｊｘ１分；　 （９）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：　１９、ｖ／ｖ）による中和、３ｍＬ　 ２ｘ２分；　（１０）　ＣＨ。
Ｃ１，による洗浄、３ｍｌ、６ｘ１分；　（１１）　２−５ｍｇの保護ＰＮＡ樹 脂試料を取り出し、迅速ニンヒドリン定量試験に供し、さらに２−５ｍｇをよく 乾燥してニンヒドリン定量分析に供して、カップリング度を測定する（サイクル ７、ＩＯおよび１５の後で、未反応アミノ基を塩化メチレン中でＮ−アセチルイ ミダゾールによるアセチル化を行いブロックした）。
樹脂（０，５７ｍｍｏｌＮＨｚ／ｇ）　１００ｍｇに定量的にローディング（純 ＣＨ，Ｃ１，中での標準的ＤＣＣによるｉｎ　−５ｉｔｕカツプリング）するこ とによって開始した。この保護したＰＮＡ樹脂鎮をさらに延長するために、はぼ ３３％ＤＭＦ／ＣＨ，Ｃ１，中３．２当量のＢｏｃＴａｅｇ　−０Ｐｆｐを用い て、サイクル１から５までおよび１０から１５までについて単一カッブリング（ ”合成実験記録２“）を用いた。サイクル５から１０までは、はぼ３３％Ｓ　Ｍ 　Ｆ　／　ＣＨ２ＣＩ、中遊離の酸ＢｏｃＴａｅｇ　−ＯＨをまた別のストレー トＤＣＣ（即ち、ｉｎ　５ｉｔｕ）カップリングさせる方法を用いた。全てのア カツブリング反応を手動操作式の６ｍｌ標準固相反応容器中において少なくとも １２時間振盪することによって実施した。未反応のアミノ基を、実施例１７にお いて行ったと同様に、この合成の同じ段階においてアエチル化することによって ブロックした。保護したＢｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　− Ｂ　ＨＡ樹脂およびＢＯＣ−［Ｔａｅｇｌ＋。−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ 樹脂を一部ずつ、５およびｌ０ＰＮＡ残基を組み立てた後で取り出した。Ｂｏｃ −［Ｔａｅｇ］＋ｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂の分析用ＨＰＬＣク ロマトグラムから判定して（（ｅ）項を参照）、ＰＮＡ残基５から１０までにさ らに”遊離酸゛カップリングさせても、実施例１７における完全単一　カップリ ングした残基と比較して、合成収率は改善されることはなかった。
（ｂ）　Ａｅｒ’−［Ｔａｅｇ］＋ｏ−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨΔ樹脂の合 成りｏｃ　−［Ｔａｅｇ］＋ｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂の一部を 脱保護した後で（推定乾燥重量はほぼ９０ｍｇ；−０，０１ｍｍｏｌの成長鎖） 、このＨ−［Ｔａｅｇコ、８−ＢＨＡ樹脂に３ｍｌの固相反応容器のおいてほぼ ６６％ＤＭＦ／’ＣＨ，Ｃ１，中はぼ２０当凰の（１４１ｍｇ　；　０．１９ｍ ｍｏｌ）のＡｃｒ’　−０Ｐｆｐを反応させた。定量的ニンヒドリン反応から判 定して、アクリジン部のカップリングは、定量的に近かった。
（ｃ）　Ａｃｒ’　−［Ｔａｅｇ］＋ｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂 の合成残留Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇ］＋ｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂 （推定乾燥重量はほぼ７０ｍｇ　；　”　０．００５ｍｍｏｌ成長鎖）を脱保護 したあとで、このＨ−［Ｔａｅｇ］＋ａ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂 に３ｍｌの固相反応容器のおいてほぼ６６％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨ，Ｃ１，中は ぼ２５当量の（９１ｍｇ　；０　、１２　ｍ　ｍ　ｏ　Ｉ　）のＡｃｒ’　−０ Ｐｆｐを反応さぜた。定量的ニンヒドリン反応から判定しで、アクリジン部のカ ップリングは、定量的に近かった。
（ｄ）　Ｈ［Ｔａｅｇｌｓ　ＮＨｚの開裂、精製および同定保護したＢｏｃ　− ［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂の一部を実施例１７ｃに おいて記載したように処理し、１９．０ｍｇの乾燥Ｈ−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙ ｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂をＨＦ開裂すると８．９ｍｇの粗製物が得られた 。１２．２分における主ピークは（１０％酢酸溶液の代わりに水溶液から注入す ると１４，２分において溶出）、全吸光度のほぼ９０％を占めていた。はぼ２． ２ｍｇの粗製物を精製すると、９９％純度のＨ−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　− ＮＩＬがほぼ１．５ｍｇ得られた。
（ｅ）　Ｈ−［Ｔａｅｇコ＋６　１．ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈ２の開裂、精製および同定 保護したＢｏｃ　−［ＴａｅｇＬｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂の一 部を実施例１７ｃにおいて記載したように処理し、７．０ｍｇの乾燥Ｈ−［Ｔａ ｅｇＬｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂をＨＦ開裂すると１　、７　ｍ 　ｇの粗製物が得られた。１５．１分における主ピークは（１０％酢酸溶液の代 わりに水溶液から注入すると１７．０分において溶出）、全吸光度のほぼ５０％ を占めていた。はぼ１．２ｍｇの粗製物を精製すると、９５％以上の純度のＨ− ［Ｔａｅｇ］＋ｏ　−Ｌｙｓ　−ＮＨｘがほぼ０．２ｍｇ得られた。（Ｍ　＋　 Ｈ）’については、計算ｍ／ｚ値は２８０７．８でありかつ測定ｍ／ｚ値は２８ ０８．２であった。
（ｆ）　Ａｃｒ’−［Ｔａｅｇコ＋ｏ　−Ｌｙｓ　−ＮＨ，の開裂、精製および 同定保護したＢｏｃ　−［ＴａｅｇＬｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂 の９９．１ｍｇ（乾燥重量）を実施例１７ｃにおいて記載したように処理し、４ ２．２ｍｇの粗製物を得た。２５．３分における主ピークは（１０％酢酸溶液の 代わりに水溶液から注入する２３．５分において溶出）、全吸光度のほぼ４５％ を占めていた。８．８７ｍｇの粗製物を精製すると、９７％以上の純度のＨ［Ｔ ａｅｇＬｏ　Ｌｙｓ　ＮＨｘがほぼ５．３ｍｇ得られた。
（Ｍ　＋　Ｈ）”については、計算ｍ　／　ｚ値は２８５０．８でありかつ測定 ｍＺＺ値は２８４９．８であった。
（ｇ）　Ａｃｒ’−［Ｔａｅｇ］、、　−Ｌｙｓ　−ＮＨ，の開裂、精製および 同定保護したＡｃｒ’−［Ｔａｅｇ］＋ｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹 脂の７８゜７ｍｇ（乾燥重量）を実施例１（ｃ）項において記載したように開裂 させ、３４．８ｍｇの粗製物を得た。２３．５分における主ピーク（１０％酢酸 溶液の代わりに水溶液から注入しても同じ溶出時刻において溶出）および２８． ２分における“ダイマー”は、全吸光度のほぼ３５％を占めていた。はぼ４．５ ｍｇの粗製物を精製すると、９５％以上の純度のＨ−［Ｔａｅｇ］、０−　Ｌｙ ｓ−ＮＨｘがほぼ１．６ｍｇ得られた。この化合物は、“ダイマー”ピークを無 くすことは出来ず、酢酸水溶液中に放置すると増大した。
（１１）合成実験記録２ （１）　ＴＦＡ／ＣＨ，Ｃ１２（１：　１、ｖ／ｖ）によるＢＯＣ−脱保護、３ ｍｌ、ａｘ１分およびｌＸ３０分；　（２）　ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄、３ｍＬ 　６！１分；（３）　ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ！　（１：　１９、ｖ　／　ｖ　） による中和、３ｍｌ、３！２分；（４）　ＣＨ，ＣＩ２による洗浄、３ｍｌ、６ ！１分、および１分間のドレーン；（５）２−５ｍｇのＰＮＡ−樹脂試料を取り 出し、完全に乾燥してニンヒドリン定量分析に供する；（６）サイクル１から５ までおよびサイケる１０から１５までに就いては、カップリング反応は、１ｍｌ のＣＨｚ　ＣＩｇに溶解した３、２当量の（０，１８ｍｍｏｌ　；　１００ｍｇ ）　ＢｏｃＴａｅｇ−０Ｐｆｐを添加し、次いで０．５ｍｌのＤＭＦ　（最終の ペンタフルオロフェノール濃度−０，１２Ｍ））を添加することによって実施し た；このカップリング反応は、振盪しつつ全体として１２−２４時時間待さゼた 。サイクル５から１０までは、１．５ｍｌのＤＭＦ／ＣＨ，Ｃ１，（１：２、ｖ 　／　ｖ　）中で０．１２ＭＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨをさらに０．１２ＭＤＣＣで カップリングさせた；　（７）ｏＭｘｒによる洗浄、３ｍｌ、１！２分；（８） ＣＨ，ＣＩ２による洗浄、３ｍｌ、４！１分；　（９）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１ ，（１：　１９、ｖ　／　ｖ　）による中和、３ｍｌ、　２！２分；　（１０） 　ＣＨ，Ｃ１，による洗浄、３ｍｌ、［３！１分；　（１１）　２−５ｍｇの保 護ＰＮＡ樹脂試料を取り出し、迅速ニンヒドリン定量試験に供し、さらに２−５ ｍｇをよく乾燥してニンヒドリン定量分析に供してる（サイクル７．１０および １５の後で、未反応アミノ基を塩化メチレン中でＮ−アセチルイミダゾールによ るアセチル化を行いブロックした）。
火１１０．旦 １二」工ａｅ　−Ｌ’ｓ　」Ｈの　された　ム保護されたＰＮＡをＭＢＨＡ４１ ４脂の上で、前記実施例において使用したＢＨＡ樹脂のローディングのほぼ半分 を用いて構築した。更には、一つのサイクルを除いて全てのサイクルは、カップ リングしないアミン基をアセチル化することによってこれに従った。以下にこの 合成法を詳細に記述する。
（ａ）当初置換度が０．３ｍｍｏｌ／ｇのＢｏｃ　−１，ｙｓ　（ＣＩＺ）　− ＮＨ−ＣＨ（ｐ　−ＣＨ，−Ｃ，Ｈ４）　−Ｃ，Ｈ，樹脂（Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂） の製造Ｂｏｃ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂の所望の置換度は０．２ ５−０゜３０ｍｍｏｌ／ｇであった。この数値を得るために、１．５ｍｍｏｌの ＢｏｃＬｙｓ　（ＣＴＺ）を、６０ｍ１のＣＨ，Ｃ１，中車−ｉｎ　−５ｉｔｕ カツプリング（１，５ｍｍｏｌのＤＣＣ）剤を用いて、中和し、事前に膨潤させ たＭ　Ｂ　ＨΔ樹脂（定量ニンヒドリン反応によって０．６４ｍｍｏｌＮＨｚ／ 　ｇを含有することが測定された）　５．０ｇにカップリングさせた。この反応 は、手動操作式の２２５ｍ１標準固相反応容器の中において３時間振盪すること によって実施した。未反応のアミノ基を無水酢酸。
ピリジン／　ＣＨ２Ｃｌ２　（１：　１　：　２、Ｖ／Ｖ／　Ｖ）　（７）混合 物を用いて１８時間アセチル化してブロックした。中和した樹脂の上での定量的 ニンヒドリン反応を行ったところ、僅か０．０００９３ｍｍｏｌ／　Ｈの遊離ア ミンが残留すること（第１表を参照）、即ち原初のアミノ基の０゜１５が残留し ていることが判った。置換度は、脱保護しニンヒドリン分析して決定したが、中 和したＨ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂について０．３２ｍｍｏ１／ ｇであることが判った。０．３０ｍｍｏｌＢｏｃＬ−Ｌｙｓ（ＣＩＺ）　／ｇ樹 脂なる定量的カップリングに対する最大値０　、２８　ｍ　ｍ　ｏ　１！ｇと充 分に比肩できるものである（第１！表を参照）。
（ｂ）　Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂の 段階的構築 （ａ）項で製造したＨ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂の全バッチをそ のまま（同じ反応容器中において）用いて、２．５当量のＢｏｃＴａｅｇ−０Ｐ ｆｐを純ＣＨ，ＣＩ、中において用いて単一カッブリング（″合成実験記録３” ）によってＢｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂 を構築した。定量的ニンヒドリン反応を、この合成全体にわたって適用した（第 Ｕ表を参照）。
（ｃ）　Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂の 段階的合成 湿潤Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂はぼ４ ．５ｇ（０，３６ｍｍｏｌｏの成長鎖；（ｂ）項において製造した全部で−１９ ｇの湿潤樹脂から取り出した）を、５５ｍ１の５ｐｐｓ反応容器のなかに入れた 。Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂を、はぼ ３０％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨ２ＣＩ、中において２．５当量のＢｏｃＴａｅｇ　 −０Ｐｆｐを用いて単一カップリングじ合成実験記録４”）で構築した。合成の 進行は、全ての段階において定量的ニンヒドリン反応によってモニターした（第 １Ｉ表を参照）。
（ｄ）　Ｂｏｃ　［Ｔａｅｇ］ｔｏ　Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　ＭＢＨＡ樹脂の段階 的構築 湿潤Ｂｏｃ　−［Ｔａｅｇ１３−　Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂はぼＩ ｇ（−０、０９ｍ　ｍ　ｏ　ｌ　ｏの成長鎖；（Ｃ）項におい手製造した全部で 一４ｇの湿潤樹脂から取り出した）を、２０ｍ１の５ＰＰＳ反応容器のなかに入 れた。ＢｏＣ−［Ｔａｅｇｌ＋ｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂を、 はぼ３０％ＤＭＦ／ＣＨ，ＣＩ、中において２．５当量のＢｏｃＴａｅｇ　−０ Ｐｆｐを用いて前記した項において使用した単一カッブリング合成実験記録によ って構築した。反応容量は３ｍｌであった（激しく振盪）。合成は、定量的ニン ヒドリン反応によってモニターした（第１１表を参照）。
合成　カップル　脱保護後の置換　残留アミノ基　推定カッた　ｍｏｌ　ｍｏｌ 　プル　％ 測定値　理論値　単一カップル　アセチル化”Ｏ’　ＢｏｃＬｙｓ　Ｏ，３２０ ，２８０，９３（ＣＩＺ） Ｉ　ＢｏｃＴａｅｇｏ、２３　０．２６　０．９７　０．５４　＜９９．９２　 ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，２１０，２４０，９２０，４６９９，８３ＢｏｃＴａｅｇ 　Ｏ，１９０，２３１，０００，５７９９，７４ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，＋８　０ ．２１　１．８５　９９．３５　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１７０，２０２，０１０ ，１９９９，９６ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１５０，１９、１，６９０，１０９９， ０７ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１１０，１８１，１１０，６６９９，１８ＢｏｃＴａ ｅｇ　Ｏ，＋２　０．１７　１．８２　０．４４　９９．９９　ＢｏｃＴａｅｇ 　Ｏ，１００，１７５，６３０，５６９４，８１０ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１１０ ，１６１，５４０，６７９９，１での９０．１％と用く合致している。７．２ｍ ｇの粗製物を二つのバッチから半合成用逆相カラムを用いて精製した（主ピーク をドライアイス／２−イソプロパツールで冷却したビーカーに集める）。それぞ れは、Ｈ，０１ｍ１中に３．６ｍｇを含有していた。凍結した溶液をそのまま凍 結乾燥して（ｓｐｅｅｄ　ｖａｃにおいてアセトニトリルを予め除去することな り）８２％純度のＨ−［Ｔａｅｇ］、。−Ｌｙｓ　−ＮＨｗがほぼ４．２ｍｇ得 られた。
（ｇ）　Ａｃ　−［Ｔａｅｇコ、。−Ｌｙｓ−ＮＨ，の開裂、精製および同定保 護したＡｃ　−［Ｔａｅｇ］＋ｏ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂の４０ ０゜０ｍｇ　（乾燥重量）を実施例１７ｃにおいて記載したように開裂させたが 、ＴＦＡ処理を行うことはせずに、１１．９ｍｇの粗製物を得た。
１５．８分における主ピークは、全吸光度のほぼ７５％を占めていた。
４．８ｍｇの粗製物を精製すると、９５％以上の純度のＨ−［Ｔａｅｇ］＋。
−Ｌｙｓ　−ＮＨ，がほぼ３．５ｍｇ得られた。（Ｍ　＋　Ｈ）”については、 計算ｍ　／　ｚ値は２８４９．８でありかつ測定ｍ　／　ｚ値は２８４８．８で あった。
（ｈ）合成実験記録３ （１）　ＴＦＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：　Ｌ　ｖ／ｖ）によるＢｏｃ−脱保護、３ ｍｌ、ａｘ１分および１ｘ３０分；　（２）　ＣＨ，Ｃ１，による洗浄、１００ ｍ１．６ｘ１分；　（３）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：　１９、ｖ　／　ｖ 　）による中和、１００ｍ１゜３ｘ２分；　（４）　ＣＨ，ＣＩ、による洗浄、 １００ｍ１、ｅｘ１分、および１分間のドレーン；　（５）２−５ｍｇのＰＮＡ −樹脂試料を取り出し、完全に乾燥してニンヒドリン定量分析に供して、置換度 を測定する；（６）３５ｍｌのＣＨ，Ｃ１，に溶解した２、５当量の（３，７５ ｍｍａｌ　；　２．０６４ｇ）ＢｏｃＴａｅｇ　−０Ｐｆｐを添加（最終ペンタ フルオロフェノールの濃度は〜０．ＩＭ）；カップリング反応は、振盪しつつ合 わせて２０−２４時間進行させた；（７）ＤＭＦによる洗浄、１００ｍ１．１ｘ ２分（ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨの沈殿を除去するため）；　（８）　ＣＨ，Ｃ１１ による洗浄、１００ｍ１、Ｊｘ１分；　（９）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１： 　１９、ｖ　／　ｖ　）による中和、１００ｍ１゜２ｘ２分；　（１０）　ＣＨ ，Ｃ１１による洗浄、１００ｍ１．６ｘ１分；　（１１）　２−５ｍｇの保護Ｐ ＮＡ樹脂試料を取り出し、迅速ニンヒドリン定量試験に供し、さらに２−５ｍｇ をよく乾燥してニンヒドリン定量分析に供してカップリング度を測定；　（１２ ）無水酢酸／ピリジン／ＣＨ。
Ｃ１，（１：１：１、ｖ　／　ｖ　／　ｖ　）の混合液１００ｍ１を用いて２時 間アセチル化を行って未反応アミノ基をブロックする；　（１３）　ＣＨ，Ｃ１ ，による洗浄、１００ｍ１．６ｘ１分；（１４）　２　ｘ　２−５ｍｇの保護Ｐ ＮＡ樹脂試料を取り出し、ＤＩＥＡ／　ＣＨｚＣＩ＊　（１：　１９、ｖ／ｖ） で中和し次いでＣＨｆ　ＣＩｇで洗浄してニンヒドリン定性および定量分析に供 する。
（ｉ）合成実験記録４ （１）　ＴＦＡ／ＣＨ１Ｃ１，（１：　１、ｖ　／　ｖ　）によるＢｏＣ−脱保 護、２５ｍ１゜３ｘ１分および１ｘ３０分；　（２）　ＣＨ，ＣＩ、による洗浄 、２５ｍ１．６ｘ１分；（３）　ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ、　（１：　１９、ｖ／ ｖ）による中和、２５ｍ１．３ｘ２燥してニンヒドリン定量分析に供して、置換 度を測定する；　（６）　６ｍｌのＣＨ，ＣＩ、に溶解した２、５当量の（０， ９２ｍｍｏｌ　；　０．５０６ｇ）　ＢｏｃＴａｅｇ中和し次いでＣＨｆ　Ｃ１ ，で洗浄してニンヒドリン定量分析に供する。
て行った。この合成の進行は、定量的ニンヒドリン反応によって全ての段階でモ ニターした（第１ＩＩ表）。
合成　カップル　脱保護後の置換　残留アミノ基　推定カフした　ｍｍｏｌ　ｍ ｏｌ　プル　％ 測定値　理論値　カップリング　アセチル化−ロ　ニロ ３　０．１９　０．２３　＋、００　０．５７４　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１７０ ，２１４，８８９７，３９７，３５ＢｏｃＣ（Ｚ）０．＋１　０．２０　７０． ２０２７．９８　１．３３　７８．４ａｅｇ　（４８） ６　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，１００，１９２４，７９４，５８２，４０９５，４７ 　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，０９０，＋８　８．５５　１．６１　０．２２　＞９９ ．９８　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，０８０，１７６，５３０，８００，４５９９，０ ９　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，０７０，１６９，２６３，６６０，６１９４，８１０ 　ＢｏｃＴａｅｇ　Ｏ，０７０，１５５，３２ｆ、４８　０．６０　９８．８（ ｂ）　Ｈ−［Ｔａｅｇ］、−Ｃａｅｇ　−［Ｔａｅｇ］、−Ｌｙｓ−ＮＨｗの開 裂、精製および同定 保護したＢｏｃ　−［Ｔａｅｇ］ｓ　−Ｃａｅｇ　−［ＴａｅｇＬ　−Ｌｙｓ　 （ＣＩＺ）−ＢＨＡ樹脂の一部を実施例１の第０項において記載したように処理 し、６６．９ｍｇの乾燥したＨ　−［Ｔａｅｇ］、　−Ｃａｅｇ　−［Ｔａｅｇ ］、　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂をＨＦで開裂させて１４．４ｍｇの 粗製物を得た。１４．５分における主ピークは、全吸光度のほぼ５０％を占めて いた。１００ｍｇの粗製物を精製すると（８バッチ；それぞれ１ｍｌのＨ，Ｏに 溶解）、９６％の純度のＨ−［Ｔａｅｇ］ｓ　−Ｃａｅｇ　−［ＴａｅｇＬ−Ｌ ｙｓ−ＮＨｘがほぼ９．１ｍｇ得られた。（Ｍ　＋　Ｈ）’については、計算ｍ 　／　ｚ値は２７９３．８でありかつ測定ｍ　／　ｚ値は２７９０．６であった 。
実施例２１ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−（ｂｏｃアミノエチル）グリシン アミノエチルグリジン（５２，８６ｇ　；　０．４４７ｍｏｌ）を水（９００ｍ ｌ）に溶解し、ジオキサン（９００ｍｌ）を加えた。このｐＨを２Ｎ　−ＮａＯ ＨでＪｌ、２に調節したａｌ）Ｈを１１２に保持しつつ、三級−ブチル−ｐ−ニ トロフェニル炭酸エステル（１２８，４ｇ　；　０．５３７ｍｏｌ）をジオキづ ン（７２０ｍｌ）に溶解し、２時間かけて滴下した。このｐＨを少なくともさら に３時間保持し、次いで攪拌しつつ一夜放置した。黄色の溶液を０℃に冷却し、 次いでｐＨを２Ｎ−ＨＣＩで３．５に調節した。
混合物をクロロホルム（４ｘ　１００ｍ１）で洗浄し、水相のｐＨを０℃で２Ｎ 　−ＮａＯＨで再び９，５に調節した。塩化ベンジルオキシカルボニル（７３， ５ｍｌ　；　０．５１５ｍ１）を、ｐＨを２Ｎ−ＮａＯＨで９．５に保持し１つ 半時間かけて添加した。このｐＨをこの後４時間頻繁に調節し、この溶液を攪拌 しつつ一夜放置した。翌日、この溶液をエーテル（３ｘ　６００ｍ１）で洗浄し 、そのｐＨを０℃において２Ｎ−、ＨＣＡで１５に調節り、た。表題化合物を酢 酸エチル（５ｘ　１００１００Ｏで抽出して単離した。この酢酸エチル溶液を硫 酸マグネシウムで乾燥］１、真空において蒸発転属した。こうして１３８ｇが得 られたが、こののちをニーデル（３００ｍｌ）に溶解し、石油エーテル（１８０ ０ｍｌ）を加えて沈殿させた。収率・１２４．７ｇ　（７９％）。ｍ、ｐ、６４ ．５−８５℃、’　ＣｎＨｕＮ、０．の元素分析、測定値（理論値）　Ｃ二５８ ．４０　（５７，９４）　；Ｈ：　７．０２　（６，８６）　＋　Ｎ・７．９４ 　（７，９５）。’ｉ（−ＮＭＲ（２５０Ｍｉ４ｚ、　ＣＤＣ１，）７．３３　 ＆　７．３２　（５Ｈ，Ｐｈ）　；５．１５　＆　５．１２　（２Ｈ，ＰｈＣ山 ）　；　４．０３＆　４．０１　（２Ｈ，ＮＣＨＣＯＨ）；３．４６　（ｂ、２ Ｈ，ＢＯＣＮＩ−（Ｃ１，ＣＨ）；３゜２８　（ｂ、２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣＨＣＨ ，）　；　１．４３　＆　１．４０　（９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。ＨＰＬＣ（２６０ｎ ｍ）　２０．７１ｍ１ｎ、（８０，２％）および２１．５７ｍ１ｎ、（１９，８ ％）。
Ｌ、Ｊ　Ｖ−スペクトル（２００ｎｍ−３００ｎｍ）は同一であり、小さいピー クはＢ１５−Ｚ　−ＡＥＧから成ることが明かとな２．ている。
夫１」銭 Ｎ’　−Ｂｏｃ−７Ｅ　／　ｉｆルグリシネチルエ−Ｆｉ＋／Ｎ−ヘンンルオキ シ力ルボニルーＮ’　−（ｂｏｃアミノエチル）グリシン（６０，０ｇ；　０． １７０ｍｏｌ）およびＮ、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（６，００ｇ）を 無水エタノール（５００ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却して、その後にＤＣＣ（４ ２，２ｇ　；　０．２０４ｍｏｌ）を添加した。
５分後に水浴を取り除いて、攪拌をさらに２時間継続した。沈殿したＤＣＵ　（ 乾燥して３２．５ｇ）をろ過して除去し、エーテル（３ｘｌｏｏｍｌ）で洗浄し た。濾液を併せて、希硫酸水素ナトリウム液（２ｘ　４００ｍ１）、希炭酸水素 ナトリウム液（２ｘ　４００ｍ１　および飽和塩化ナトリウム液（１ｘ　４００ ｍ１）で次々に洗浄し　。有機相をろ過し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥し、 真空において蒸発転属し、その結果ＤＣＵを含有するオイル状物質６６．１ｇが 得られた。
この油状物を無水エタノール（６００ｍｌ）に溶解し、パラジムカーボン（６， ６ｇ）を加えた。この溶液を大気圧で水素添加したが、この際保存容器は２Ｎ− 水酸化ナトリウムで満たした。４時間後、４．２Ｌの理論値に比較して、３．３ ■、が費消された。この反応混合物をセライトでろ過し、真空において蒸発転属 したところ、油状物質が３９．５ｇ　（９４％）が得られた。この油状物質１３ ｇ　をシリカゲル（６００ｇ　５ｉＯ２）クロマトグラフィーで精製した。塩化 メチレン中２０％の石油エーテル３００ｍ１で溶出した後で、表題化合物を塩化 メチ１２９５％メタノール１７００ｍ１で溶出させた。溶媒を満足するべき純度 のフラクションから真空において揮散させた。収率は８．４９ｇであった。その 代わりに、粗製物１０ｇをＫｕｇｅｌ　Ｒｏｈｒ蒸留で精製した。’ＨＮＭＲ（ ２５０ＭＨｚ、　ＣＤ５ＯＤ）　４．７７　（ｂ、５ＮＨ）　；４　、１８　（ ｑ　、　２　Ｈ、Ｍ　ｅ　Ｃ山）　；　３　、３８　（ｓ　、　２　Ｈ、Ｎ　Ｃ Ｈｚ　ＣＯａ　Ｅ　ｔ　）　；　３　、１６@（ｔ　。
２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣＨｘＣＨｚ）　：　２．６８　（ｔ、２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣＨ ，ＣＨ，）　；　１．４３　（ｓ。
９Ｈ，ｔＢｕ）および１．２６　（ｔ、３Ｈ，ＣＨ，）、”Ｃ−ＮＭＲ１７１， ４（ＣＯＥｔ）　；１５６．６　（Ｃｏ）　；　７８．３　（（ＣＨ３）　Ｃ） 　；　５９．９　（Ｃｕｔ）　；　４９．０　（ＣＨ，）　；３９．０　（ＣＨ ，）　；　２６．９　（ＣＨ，）および１２．６　（ＣＨＩ）。
夾１を題」 Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチルグリシンエチルエーテルメタノールをエタノール の代わりに変えて、上記した方法を用いた。最終製品は、カラム精製法で精製し た。
実１」口」 １−　（Ｂｏｃ　−ａｅ　チミンエチルエステルＮ’−ＢｏＣ−アミノエチルグ リシンエチルエーテル（１３，５ｇ　；　５４゜８ｍｍｏり、ＤｈｂｔＯＨ（９ ，８４ｇ　；　６０．３ｍｍｏ＋）および１−カルボキシメチルチミン（１１， １ｇ　；　６０，３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（２１０ｍｌ）に溶解した。塩化メチ レン（２１０ｍｌ）を次に加えた。この溶液をエタノール／氷浴で０℃にまで冷 却し、ＤＣＣ（１３，６ｇ　；　６５．８ｍｍｏｌ）を加えた。水浴を１時間後 に取り除き、攪拌をさらに常温で２時間続行した。沈殿したＤＣＵをろ過して除 き、塩化メチレン（２ｘ７５　ｍ　ｌ　）で二度洗浄した。濾液を合わせて、こ れにさらに塩化メチレン（６５０ｍｌ）を加えた。この溶液を稀重炭酸ナトリウ ム液（３ｘ　５００ｍ１）、希硫酸水素ナトリウム液（２ｘ　５００ｍ１）およ び飽和塩化ナトリウム液（１ｘ　５００ｍ１）で連続して洗浄した。若干の沈殿 をろ過して有機相から除去し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空におい て蒸発転属した。オイル状の残渣を塩化メチレン（１５０ｍｌ）に溶解し、ろ過 し、表題化合物を０℃において石油ニーチル（３００ｍｌ）を加えで沈殿させた 。この塩化メチレン／石油エーテルの方法をもう一度繰り返し、これによって物 質１６゜０ｇ　（７１％）が得られたが、これは、ＨＰＬＣによって９９％以上 の純度であった。
犬施ｌＬ剥 １−Ｂｏｃ−ａｅ　チ匠 上記で得た物質をＴＨＦ　（１９４ｍ１．０．２Ｍ溶液が得られる）中に溶解し 、ＩＭの水酸化リチウム水溶液（１１６ｍｌ）を加えた。この混合物を常温で４ ５分間攪拌し、次いでろ過して残留ＤＣＵを除去した。水（４０ｍｌ）をこの溶 液に加え、次に塩化メチレン（３００ｍｌ）で洗浄した。さらに追加の水（３０ ｍｌ）を加え、このアルカリ性の溶液をさらにもう一度塩化メチレン（１５０ｍ ｌ）で洗浄した。この水溶液を０℃にまで冷却し、ｐ　Ｉ−（をＩＮ−ＭＣＩ（ はぼ１１０ｍ１）を滴下して２に調節した。表題化合物を酢酸エチル（９ｘ　２ ００ｍ１）で抽出し、抽出液を併せて、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空中にお いて蒸発転属した。残渣をもう一度メタノールから蒸発させて、−夜乾燥させる と、無色のガラス様の固体が得られた。収率：９．５７ｇ　（６４％）。Ｈ１’ ＬＣ＞　９８％Ｒｔ　＝　１４．８ｍ１ｎ、元素分析、ｃｉｓ）−（、、Ｎ、Ｏ ，・０　、２５　Ｈ２０、実験値（理論値）　Ｃ：　４９．２９　（４９，４２ ）　Ｈ：６．５２　（６，３５）、Ｎ　：　１４．１１　（１４，４１）。二級 アミド結合の周囲の回転が限定されているため、シグナルのいくつかが２：１の 比率で二重化した（リストにおいて大きい方はｍ」でまた小さい方はｍｉで示し である）。、’Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄｓ）　：　１２．７ ５（ｂ、ｓ、ｌＨ，ＣＯ，Ｈ）；　１１．２８　（ｓ、−ＩＨ”１ｍｊ、、１ｍ １ｄｅＮＨ）　；　１１．２６　（ｂ。
ｓ、、ＩＨ，ｃｏ２Ｎ）　；　７．３０　（ｓ、−ＩＨ”、ｍｊ、、Ｔ　Ｈ−６ ）　；　７．２６　（ｓ、”ＩＨ”。
ｍｉ、、Ｔ　Ｉ　−６）　；　６．９２　（ｈ、ｔ、、”ＩＨ−、ｍｊ、、Ｂｏ ｃＮＨ））　；　６．７３　（ｂ。
ｔ、、”ＩＨ”、ｍｉ、、ＢｅｏＮＨ）　）；４．６４　（ｓ、−２Ｈ−１ｍｊ 、、ＣＨｚＣＯＮ）；４゜４６　（ｓ、−２Ｈ”、ｍｊ、、ＣＨｚＣＯＮ）　； 　４．１９　（ｓ、”２Ｈ”、ｍｉ、、ＣＩＩｚＣＯｘＨ）　：３．９７　（ｓ 、”２）（”、ｍｊ、、ＣＩＬＣＯ２Ｈ）　；　３．６３−３．０１　（分解さ れないｍ、水を含む、ＣＨ２ＣＨ，）　；　１．７５　（ｓ、３Ｈ，ＣＩＪａ） および（ｓ、９Ｈ，ｔＢｕ）。
火施」ｇ歪 Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−１−Ｂｏｃ−ａｅ　シトシンＮ’−Ｂｏａ− アミノエチルグリシンエチルエステル（５，００ｇ　；　２０゜３ｍｍｏｌ）、 ＤｈｂｔＯＨ（３，６４ｇ　；　２２．３ｍｍｏｌ）およびＮ４−ベンジルオキ シカルボニル−１−カルボキシメチルシトシン（６，７７ｇ　；　２２３ｍｍｏ ｌ）をＤＭＦ　（１００ｍｌ）に分散させた。塩化メチレン（１００ｍｌ）を次 に加え、この溶液を０℃にまで冷却し、ＤＣＣ（５，０３ｇ　；　２４．４ｍｍ ｏ＋）を添加した。２時間後に氷浴をを取り除き、攪拌を常温でさらに１時間継 続した。この反応混合物を真空において蒸発転属し、残渣をエーテル（１００ｍ ｌ）中に分散させ、３０分間激しく攪拌した。固形物をろ過して単離し、エーテ ル洗浄処理方法を二度繰り返した。
金型炭酸ナトリウム液（はぼ４％溶液、１００ｍ１）とともに１５分間激しく攪 拌し、ろ過して、水で洗浄した。この方法をもう一度繰り返し、乾燥後、放置す ると淡黄色の固体物質が１７．９ｇ得られた。
この固体をジオキサン（２００ｒｎｌ）とともに煮沸し、熱時ろ過した。
冷却後、水（２００ｍｌ）を加えた。沈殿した物質をろ過して単離し、水で洗浄 して、乾燥した。ＨＰＬＣ（２６０ｎｍにおいて観察）によれば、この物質は、 ＤＣＵの他に純度として９９％であった。このエステルをＴＨＦ　（１００ｍｌ ）中に分散させ、０℃にまで冷却して、ｌＮ−ＬｉＯＨ（６１ｍｌ）を加えた。
１５分間攪拌した後で、混合物をろ過し、濾液を塩化メチレン（２ｘ　１５０ｍ １）で洗浄した。このアルカリ性の溶液を０℃にまで冷却し、ｐＨｗｏｌＮ−Ｈ ＣＩで２．０に調節した。表題化合物をろ過して単離して、水で一度洗浄すると 、乾燥後に白色の粉体が１１．３ｇが得られた。この物質を塩化メチレン（３０ ０ｍ　ｌ　）中に懸濁させ、石油エーテル（３００ｍｌ）を加えた。
ろ過し、次いで洗浄すると、乾燥後で７．１ｇ　（６９％）が得られた。
ＨＰ　Ｌ　Ｃの結果、ＲＴ＝１９．５分で純度が９９％でありまた１２．６分に おいて、恐らくはＺ−ｄｅ保護されたモノマーである不純物（はぼ１％）がある ことが判った。元素分析、Ｃ，Ｈ，Ｎ、Ｏ，、実験値（理論値）　Ｃ：５４．１ ６（５４，８７）　Ｈ：５．７６（５，８１）；　Ｎ：１３．６５（１３゜９１ ）。Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄ、）　＋　１０．７８　（ｂ、 ｓ、ＩＨ，ＣＯ。
■）　、　７．８８　（二つのオーバーラツプする二重線、”ＩＨ”、ＣｙｔＨ −５）　；７．４１−７．３２　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）　；　７．０１　（二つの オーバーラツプする二重線、−ＩＨ”、ＣｙｔＨ−５）　；　６．９４　＆　６ ．７８　（ｕｎｒｅｓ、三重線、ＩＨ。
ＢｏｃＮＩｊ）；５．１９　（ｓ、２Ｈ，ＰｂＣｌ２））　；　４．８１　＆　 ４．６２　（ｓ、２Ｈ，Ｃ１ｊｚＣＯＮ）　＋　４．１７　＆　３．９８　（ｓ 、２Ｈ，ＣＨｚＣＯ＝Ｈ）　；　３．４２　３．０３　（ｍ、水を含有、　ｃ　 Ｈ，Ｃ）（２）および１．３８　＆　１．３７　（ｓ、９Ｈ，ｔＢｕ）、”Ｃ− ＮＭＲ。
１５０．８８　；　１２８．５２　、１２８．１８　；　１２７．９６　；　９ ３．９０　、６６．５３　、４９．５８および２８２２゜■Ｒ：周波数、ｃｍ’ （強度）。３４２３　（２６，４，３０３５（５３，２）、２９７８　（４１， ４））、１７３６　（１７，３）、１６５８　（３，８）、１５６３（２３，０ ）、１５０１　（６゜８）および１４５６　（２６，２）大１！μＵ ９−カルボキシメチルアデニンエチルエステルアデニン（１０，０ｇ　；　７４ ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１０，２９ｇ。
７４．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦに懸濁させ、臭化酢酸エチル（８，２４ｍ１　；　 ７４ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を室温で窒素雰囲気下で２．５時間攪拌し 、次いでろ過した。固形の残渣をＤＭＦ　（１０ｍｌ）三酸度洗浄した。濾液を 併せて、真空において蒸発乾個し、黄−オレンジ色の固形物質を水（２００ｍｌ ）に注ぎ、４Ｎ−ＨＣＩをｐＨ〜６になるように加えた。０℃で１０分間攪拌し た後で、固形物をろ過して除き、水で洗浄し、９６％エタノールから再結晶した 。表題化合物をろ過して単離し、エーテルでよく洗浄した。収率：３゜４ｇ　（ ２０％）。ｍ、ｐ、　２１５゜−２２０℃。元素分析、ＱＨ＋＋　ＮｇＯｔ、実 験値（理論値）　Ｃ：　４８．８６　（４８゜６５）　Ｈ：　５．０１　（４， ９１）　；　Ｎ　：　３１．６６　（３１，４２）、　Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨ ｚ。
ＤＭＳＯｄ＝）　＋　（ｓ、２Ｈ，Ｈ２＆　Ｈ８）　ニア、２５　（ｂ、ｓ、、 ２Ｈ，ＮＨｔ）　；５．０６　（ｓ、２Ｈ，ＮＣＲ，））　；　４．１７　（ｑ 、２Ｈ，Ｊ　＝　７．１１Ｈ２，ＯＣＨりおよび１．２１　（ｔ、３Ｈ，Ｊ＝７ ．１３Ｈｚ、ＮＣＨｔ）。”ＣＮＭＲ１１１５２，７０，１４１゜３０．６１． ４１．４３．９７および１４．０？。ＦＡＢ　−ＭＳ、２２２　（ＭＨ＋）。
１２７周波数、Ｃｍ”　（強度）。３８５５　（５４，３）、３２７４　（１０ ，４）、３２４６（１４，０））、３１１７　（５，３）、２９８９　（２２， ３）、２９４０　（３３，９）、２８７６（４３，４）、２７５３　（４９，０ ）、２３４６　（５６，１）、２１０６　（５７，１）、１８９９　（５５゜７ ）、１７６２　（１４，２）、１７４２　（１４，２）、１７４２　（１，０） 、１６７１　（１，８）、１６４４（１０，９）、１６０６　（０，６）、１５ ８２　（７，１）、１５２２　（４３，８）、１４７７　（７，２）。
１４４５　（３５，８）および１４２２　（８，６）。アルキル化の位置は、９ ６％エタノールから再結晶して得た結晶についてのＸ−線結晶学によフて確認し た。
を乾燥ＤＭＦ　（５０ｍｌ）に緩やかに加熱して溶解させて、２０　℃にまで冷 却し塩化メチレン（５０ｍｌ）にＮ−エチルベンジルオキシカルボニルイミダゾ ールＮ−エチル　テトラフルオロ硼酸エステル液で連続して洗浄した。この溶液 を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空において蒸発乾個したところ、油状物１１ｇ が得られた。この物質を塩化メチレン（２５ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、石 油エーテル（５０ｍｌ）で沈殿させた。この方法をもう一度繰り返して、表題化 合物３．４５ｇ　（６３％）が得られた。ｍ、ｐ、１３２−３５℃。元素分析、 ＣＩｙ　Ｈ＋ｙ　Ｎｓ　Ｏい実験値（理論値）　Ｃ：５６．９５　（５７，４６ ）　Ｈ：４．７１　（４゜８２）　；　Ｎ　：　１９．３５　（１９，７１）。
ＨＮ　Ｍ　Ｒ（２５０Ｍ　Ｈｚ　−ＣＤ　ＣＩｓ　）　：８．７７　（ｓ、ＬＨ ，Ｈ−２＆　Ｈ−８）　；７．９９　（ｓ、、ＬＨ，Ｈ−２またはＨ−８）　； 　７．４５−７．２６　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）　；　５．３］　（ｓ、２Ｈ，ＮＣ Ｈｇ））　：　４．９６（ｓ、２Ｈ，Ｐｈ　−ＣＨ，）　；　４．２７　（ｑ、 ２Ｈｊ　＝　７．１５Ｈｚ、Ｃ１５ＣＨＪ）および１　、３０　（ｔ　、　３　 Ｈ、Ｊ　＝　７　、１５　Ｈｚ　、　ＣＨｚ　Ｃ）ｊ　）　、”　ＣＮ　Ｍ　Ｒ −１５３、０９；　１４３　。
１１　；　６７．８４　、６２．５１　；　４４．２４および１４．０９゜ＦＡ Ｂ　−ＭＳ　＋　３５６　（ＭＨ＋）および３１２　（ＭＨ＋　−Ｃｏ、）。１ ２７周波数、ｃｍ−’　（強度）。３４２３（５２，１）　；　３１８２　（５ ２，８）　；　３１１５　（５２，４））　；　３０３１　（４７，９）　；　 ２９８１（３８，６）　；　１７４７　（１，１）　；　１６１７　（４，８） 、１５８７　（８，４）　；　１５５２　（２５゜２）　；　１５１１　（４５ ，２）　；　１４９２　（３７，９）　；　１６４５　（１４，０）および１４ １３ｙ−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボキシメチルアデニン Ｎ６−ペンジルオキジカルポニルー９−カルボキシメチルアデニンエチルエステ ル（３，２０ｇ　；　９．０１ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍｌ）と混合し、 ０℃に冷却した。水酸化ナトリウム溶液（５０ｍｌ；２Ｎ）を加えたところ、こ の物質が急速に溶解した。０℃において３０分経過して、このアルカリ性溶液を 塩化メチレン（２ｘ　５０ｍ１）で洗浄し、０℃において４Ｎ−Ｉ（ＣＩでｐＨ １，０に調節したところ、表題化合物が沈殿した。ろ過し、水で洗浄しかつ乾燥 後の収率は、３゜０８ｇ　（１０４％）であった。この製品は塩を含有しており 、元素分析にこのことが反映されていた。元素分析、ＣＩｓＨ＋５ＮｓＯい実験 値（理論値）　Ｃ：４６．３２（５５，０５）　Ｈ：４．２４（４，００）；　 Ｎ：１８．１０（２１゜４０）およびＣ／Ｎ　：　２．５７　（２，５６）、’ Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄａ）　：８．７０　（ｓＪＨ，Ｈ− ２＆　Ｈ−８）　；７．５０−７．３５　（ｍ、５Ｈ。
Ｐｈ）　；　５．２７　（ｓ、２Ｈ，ＮＣＨｔ）および５．１５　（ｓ、２Ｈ， Ｐｈ　ＣＨ））。”Ｃ−ＮＭＲ０１６８，７７、１５２，５４、１５１，３６、 １４８，７５、１４５，１３；　１２８゜５１　、１２８．１７　、１２７．９ ８　：　６６．６７および４４．６７゜１８５周波数、（ＫＢｒ）。
３４８４　（１８，３）　；　３１０９　（１５，９）　；　３０８７　（１５ ，０））　；　２９６６　（１７，１）　。
２９２７　（１９，９）；　２３８３　（５３，８）；　１９６０　（６２，７ ）、１７３９　（２，５）；　１６８８（５，２）；　１６５５　（０，９）； 　１５９４　（１１，７）；　１５６０　（１２，３）；　１５３０　（２６゜ ３）；　１４９９　（３０，５）；　１４７５　（１０，４）；　１４５５　（ １４，０）、１４２９　（２４゜５）および１４１１　（２３，６）。ＦＡＢ　 −ＭＳ　：　３２Ｂ　（ＭＨ＋）および２８４（ＭＨ＋　−Ｃ０ｔ）。ＨＰＬＣ （２１５％ｍ、２６０％ｍ）、溶媒系１　：　１５．１８分、マイナーな不純物 は全てで２％以下。
１２ｍｍｏｌ）、ＤｈｂｔＯＨ（１，４６ｇ　；　８．９３ｍｍｏｌ）およびＮ ６−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボキシメチルアデニン８２．９２ｇ　 ；８．９３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（１５ｍｌ）に溶解した。塩化メチレン（１５ ｍｌ）（１５ｍｌ）で一度、塩化メチレン（２ｘ　１５ｍ１）で二環洗浄した。
２Ｈ，０ＣＨＩＣＨ３）；　３．６７　３．２９　（ｍ、４Ｈ，Ｃ１ｌ＊Ｃ１ｉ ＊）；　１．４２　（ｓ、９Ｈ。
ｔＢｕ）および１．２７　（ｔ、３Ｈ，ＯＣＨ，ＣＨ，）。スペクトルの結果、 痕跡量のエタノールおよびＤＣＵの存在が明となった。
エチルエステル（１，４８ｇ　；　２．６６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ　（１３ｍｌ） 中に懸濁させ、混合物を０℃に冷却した。水酸化リチウム（８ｍｌ；　ＩＮ）を 添加し、１５分間攪拌した後で反応混合物をろ過し、さらに水（２５ｍｌ）を添 加し、この溶液を塩化メチレン（２ｘ　２５ｍ１）で洗浄した。
この水溶液のｐＨを１．Ｎ　−ＨＣＩでｐＨ２，０に調節した。沈殿をろ過して 単離して、水で洗浄し、乾燥して、０．８２ｇ　（５８％）が得られた。水晶を 塩化メチレン／石油エーテルで二環再度沈殿させ、乾燥後０．７７ｇ　（５５％ ）が得られた。ｍ、ｐ、１１９℃（分解）。元素分析、Ｃｕ　Ｈａ　Ｎｔ　Ｏ− ・Ｈ，Ｏ１実験値（理論値）　Ｃ：　５６３．３２　（５２，８４）　Ｈ：５． ７１　（５，７３）　、Ｎ　：　１７．６Ｂ　（１７，９７）。ＦＡＢ　−ＭＳ ０５２８．５　（ＭＨ＋）、’Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄ、） 　：　１２．７５　（ｖｅｒｙ　ｂ、ＩＨ。
ＣＯ，Ｈ）　；　１０．６５　（ｂ、ｓ、ＩＨ，ＺＮＨ）　；　８．５９　（ｄ 、ＬＨ，Ｊ　＝　２．１４Ｈｚ、ＡｄｅＨ−２）　；８．３１　（ｓ、ＩＨ，Ａ ｄｅ　Ｈ−８）　；７．４９−７．３１　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）　；７．０３＆６ ．７５　（ｕｎｒｅｓｏｌｖ、ｔ、ＩＨ，ＢｏｃＮＨ）　；　５．３３　＆　５ ．１６　（ｓ。
２Ｈ，ＣＨ，Ｃ０Ｎ）　；　５．２２　（ｓ、２Ｈ，ＰｈＣ１ｊ２））　；　４ ．３４−３．９９　（ｓ、２Ｈ。
ＣＨｙＣＯｔＨ）　；　３．５４　３．０３　（ｍ’ｓ、水を含有、ｃ　Ｈ，Ｃ ＩＪｚ　）および１゜３９　＆　１．３７　（ｓ、９Ｈ，ｔＢｕ）、”Ｃ−ＮＭ Ｒ０１７０，４；　１６６．６　；　１５２゜３　、１５１．５　、１４９．５ 　、１４５．２　、１２８．５　、１２８．０　、１２７．９　；　６６．３２ 　；４７．６３　、４７．０３　、４３．８７および２８．２４゜を２０時間窒 素雰囲気下で激しく攪拌し、水（１５０ｍｌ）を添加し、ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ ＝）　：　ｄ　＝　４．８８ｐｐｍ　（ｓ、２Ｈ）　；　６．９５　（ｓ、２Ｈ ）　；８．１．０　（ｓ、ＬＨ）。
夾１ｔμ竪 ２−アミノ−６−ベンジルオキシ−９−カルボキシメチルプリンナトリム（２， ０ｇ　；　８７．Ｏｍｍｏｌ）をベンジルアルコール（２０ｍｌ）に溶解し、１ ３０℃で２時間加熱した。０℃にまで冷却したあとで、２−アミノ−６−クロロ −９−カルボキシメチルプリン（４，０５ｇ　；１８、Ｏｍｍｏｌ）をＤ　Ｍ　 Ｆ　（８５ｍ　ｌ　）中に溶かした溶液をゆっくりと添加し、生じた懸濁液を２ ０℃において一夜攪拌した。水酸化ナトリウム溶液（ＩＮ、１００　ｍ　）を加 え５、透明な溶液を酢酸エチル（３ｘ　１００ｍ１）で洗浄した。水相を４Ｎ塩 酸でｐＨ３に酸性化した。沈殿物を酢酸エチル（２００ｍｌ）にとり、水相を酢 酸エチル（２ｘｌｏｏｍｌ）で抽出した。有機層を併せて、飽和塩化ナトリウム 液（２ｘ　７５ｍ１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で蒸発転 用させた。残渣をエタノールから再結晶化させた。真空下での５ｉｃａｐｅｎｔ 上での乾燥後の収率：　２，７６ｇ　（５２％）。ｍ、ｐ、１５９−６５℃。元 素分析、実験値（理論値）Ｃ：（５６，１８；５５．９７）　Ｈ（４゜３８　＋ 　４．３２）、Ｎ　（２３，４；　２３．１０）、’Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ 、　ＤＭＳＯ−ｄ、）　：　４．８２ｐｐｍ　（ｓ、２Ｈ）　；　５．５１　（ ｓ、２Ｈ）　；　６．４５　（２，２Ｈ）　；　７゜４５　（ｍ、５Ｈ）　；　 ７．８２　（ｓ、ＩＨ）。
Ｋｌ硼旦 Ｎ−２−アミノ−６−ベンジルオキシ−プリン−９イル　−アセチル　−Ｎ−２ −Ｂｏｃ−アミノエチル　−　リシン　ＢｏｃＧａｅ二を上」Ｌムヱ：ユ ２−アミノ−６−ベンジルオキシ−９−カルボキシメチルプリン（０，０５０ｇ 　；　１．６７ｍｍｏｌ）、メチル−Ｎ（２−［第三級−ブトキシ力ルポニルア ミノ］エチル）−グリシンエステル（０，６５ｇ　；　２．８０ｍｍｏｌ）、ジ イソプロピルエチルアミン（０，５４ｇ　；　４．１９ｍｍｏｌ）およびプロモ ートリス−ピロリジノ−ホスホニウム−へキサフロロホスフェート（ＰｙＢｒｏ Ｐ■）　（０，７９８ｇ　；　１．７１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（２ｍｌ）中で４ 時間攪拌した。透明な溶液を重炭酸ナトリウムの水冷液（３ｘ　４０　ｍｌ）に 注ぎ、酢酸エチル（３ｘ　４０ｍ１）で抽出した。有機相を硫酸水素カリウム溶 液（ＩＮ；２　ｘ　４０　ｍｌ）、重炭酸ナトリウム溶液（ＩＮ　；　１　ｘ　 ４０ｍ１）および飽和塩化ナトリウム溶液（６０ｍｌ）で洗浄した。無水硫酸ナ トリウムで乾燥し、真空下で蒸発したあとで、固形残渣を酢酸エチル／ヘキサン （２０ｍｌ　（２：　１））から再結晶化して、収率６３％でメチルエステルを 得た（ＭＳ−ＦＡＢ５１４　（Ｍ　＋１）。このエステルを濃水酸化ナトリウム 液（１ｍｌ）を含むエタノール／水（３０ｍｌ　（１：　２））に溶解すること によって加水分解を行った。２時間攪拌した後で、この溶液をろ過し、４Ｎ−塩 酸を酸化してｐＨ３に酸性化した。表題化合物を、ろ過して得た。
収率：　３７０ｍｇ　（加水分解に対して７２％）。ＨＰＬＣによる純度は、９ ９％以上であった。二級アミドの回転が制限されていたために、シグナルのいく つかは、２：１の比率で二重化した（リストにおいては、主要ピークについてｍ ｊ、でまた小さいピークはｍｉ、で表しである）。。’Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨ ｚＳＤＭＳＯ−ｄｓ）：ｄ＝１．４ｐｐｍ、（ｓ。
９Ｈ）　；　３．２　（ｍ、２Ｈ）　；　３．６　（ｍ、２Ｈ）　；　４．１　 （ｓ、ｍｊ、、Ｃ０ＮＲＣＨ，Ｃ００Ｈ）　；４．４　（ｓ、ｍｉ、、Ｃ０ＮＲ ＣＨ，Ｃ００Ｈ）　；　５．０　（ｓ、ｍｊ、、Ｇｕａ　−ＣＨ，ＣＯ−）　； ５．２　（ｓ、ｍｊ、、Ｇｕａ　−ＣＨ，ＣＯ）　；　５．６　（ｓ、２Ｈ）　 ；　６．５　（ｓ、２Ｈ）　；　６．９（ｍ、ｍｉ、、ＢｏｃＮＨ）；７．１　 （ｍ、ｍｊ、、ＢｏｃＮＨ）；７．５　（ｍ、、３Ｈ）；７゜８　（ｓ、ＩＨ） 　；　１２．８　（ｓ、ＩＨ）、”Ｃ−ＮＭＲ，１７０，９５；　１７０．５２ 　；　１６７゜２９　；　１６６．８５　、１６０．０３　、１５９．７８　、 １５５．８４　、１５４．８７　、１４０．６３　；１３６．７６　、１２８． ４９　、１２８．’１０　、１１３．０４　、７８．１９　、７７．８６　、６ ６．９５　。
４９．２２　、４７．７０　、４６．９４　、４５．９６　、４３．６２　、４ ３．３１および２８．２５゜火１」ド咀 ３−　Ｂｏｃ−アミノ−１２−プロパンジオール３−アミノ−１，２−プロパン ジオール（４０，００ｇ　；　０．４４０ｍｏｌ、１、Ｏｅｑ、）を水（１００ ０ｍ１．）に溶解し、０℃にまで冷却した。ジー三級−ブチル炭酸エステル（１ １５，０ｇ、　０．５２６ｍｏ、１，２ｅｑ、）を一度に加えた。この反応混合 物を攪拌しつつ水浴上で室温にまで加温した。ｐＨを水（１２０ｍ、ｌ）に溶か した水酸化ナトリウム（１７，５６ｇ１０．４４０ｍｏｌ、　１．Ｏｅｑ、）で １０．５に維持した。水酸化ナトリウム溶液を添加し終えたとき、反応混合物を 室温で一夜攪拌した。その後、酢酸エチル（７５０ｍ１．）を反応混合物に加え 、次に０℃に冷却した。ｐＨを激しく攪拌しつつ４Ｎ−硫酸で２．５に調節した 。二つの相を分離し、水相を別の酢酸エチル（６ｘ　３５０ｍ１）で洗浄した。
有機相の容量を減圧下で蒸発させて９００ｍ１にまで減少させた。
有機相を飽和硫酸水素カリウム溶液を二倍量に希釈したもの（１ｘ　１００１０ ０Ｏおよび飽和塩化ナトリウム溶液（１ｘ　５００ｍ１）で洗浄した。有機相を 乾燥させ（ＭｇＳＯ，）、減圧下で蒸発させて、表題化合物を５０．１２ｇ　（ ６０％）を得た。このものは、塩化メチレンから蒸発させ次いで凍結させて、固 化させることが出来た。’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１，／ＴＭＳ）　：　ｄ　＝　１ ．４３　（ｓ、９Ｈ，Ｍ、ｅＣ）、３　、２５　（ｍ　、　２　Ｈ、ＣＨ２）、 ３．５７　（ｍ、２Ｈ，ＣＨ，’）、３　、７３　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ、Ｃ１４） 　、”　ＣＮ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　ＣＩｓ　／ＴＭＳ）：　ｄ　＝　２８．２　（Ｍ ｅｓＣ）、４２　、６　（ＣＨｓ　）、６３．５．７１．１　（ＣＨ，ＯＨ。
ＣＨＯＨ）、７９　、５　（Ｍ　ｅｓ　Ｃ）、１５７　（Ｃ＝　Ｏ）。
実施！μ団 ２−　ＢＯＣ−アミノ　エチル−Ｌ−アラニンメチルエステル３−　Ｂｏｃ−ア ミノ−１，２−プロパンジオール（２０，７６ｇ　；　Ｏ，１０９０ｍｏ１１０ ９Ｏ，）を水（１５０ｍｌ）に溶解した。ｍ−過ヨウ素酸カリウム（２４゜９７ ｇ；　０．１９０ｍｏｌ、ｌｅｑ、）を加え、反応混合物を窒素雰囲気中で室温 で２時間攪拌した。反応混合物をろ過し、水相をクロロホルム（６ｘ　２５０ｍ １）で抽出した。有機相を乾燥しくＭｇ５Ｏ，）、蒸発させると無色の油状物と してＢｏａ−アミノアセトアルデヒドが殆ど定量的な収率で得られ、このものを 精製することなく次の処理法に用いた。
パラジウム−カーボン（１０％、０．８ｇ）を窒素雰囲気中で冷却しく０℃）か つ激しく攪拌しつつＭｅＯＨ（２５０ｍｌ）に加え、無水酢酸ナトリウム（４， ４９ｇ　；　５４．７ｍｍｏｌ、　２ｅｑ、）およびＬ−アラニンメチルエステ ル塩酸塩（３，８２ｇ　；　２７．４ｍｍｏＬ　ｌｅｑ、）を加えた。
Ｂｏｃ−アミノアセトアルデヒド（４，７９ｇ　；　３０．１ｍｍｏｌ、　１． １ｅｑ、）をＭｅＯＨ（１５０ｍｌ）に溶かし、反応混合物に加えた。反応混合 物を常圧、常温で、水素吸収が止むまで水素添加した。反応混合物をセライトを 通してろ過させたが、セライトをさらにＭ　ｅ　ＯＨで洗浄した。このＭ　ｅ　 ＯＨを減圧下で除去し、残渣を水（１５０ｍｌ）に溶解し、ｐＨを激しく攪拌し つつ０．５Ｎ−ＮａＯＨを滴下することによって８．０に調節した。水相を塩化 メチレン（４ｘ　２５０ｍ１）で抽出し、有機相を乾燥しくＭｇ５Ｏ）、セライ トでろ過し、減圧下で蒸発させて透明で、若干黄色の油状物として表題化合物が ６．３６ｇ　（９４％）得られた。ＭＳ　（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ　（％）＝ ２４７　（１００，Ｍ＋　１．１９１　（９０）、１４７　（１８）。’ＨＮＭ Ｒ（２５０ＭＨｚ、　ＣＤＣ１３）　：　１゜１８　（ｄ、Ｊ　＝　７．０Ｈｚ 、３Ｈ，Ｍｅ）、１．３６　（ｓ、９Ｈ，ＭｅｓＣ）、１．８９　（ｂ、ＬＨ。
Ｎ［（）、２．５１　（ｍ、ＩＨ，ＣＨ２）、２　、６６　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ、 ＣＨ２）、３．１０　（ｍ、２Ｈ。
ＣＨ２）、３．２７　（、Ｊ　＝　７．０Ｈｚ、Ｈ（、ＣＨ）、３．６４　（ｓ 、３Ｈ，ＯＭｅ）、５゜０６　（ｂ、１１１．カルバメートＮ　Ｈ）。”Ｃ−Ｎ ＭＲｄ　＝　１８．８　（Ｍｅ）、２８．２　（Ｍｅ、Ｃ）、４０．Ｌ　４７． ０　（ＣＨ２）、５１．６１１ｅｏ）、５６．０　（ＣＨ）。
１５５．８　（カルバメートＣ＝０）、１７５．８　（エステルＣ＝０）。
火［■ Ｎ−＜Ｔ３ｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（１−チミニルアセチル　−し一アラニ ンメチルエステル Ｂｏａ−アミノエチル−（Ｌ）−アラニンメチルエステル（１，２３ｇ。
５、Ｏｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（ｌｏｍｌ）に溶かした溶液に、Ｄｈｂｔ　−ＯＨ （０゜／９０ｇ、５．５２ｍｍｏ１）および１−チミニル酢酸（１，０１ｇ、５ ．４８ｍｍｏｌ）を添加した。１−チミＮＹＬＳ空く酸が溶解した時に、クロロ メタン（１０ｍｌ）を加え、溶液を水浴で冷却した。この反応混合物が０に達し た時に、ＤＣＣ（１，２４ｇ、６０１ｍｍｏｌ）を加え、添加後５分でＤＣＵの 沈殿が認められた。二時間後に、ＴＬＣ分析の結果、反応が完結したのを確認し た。この混合物をろ過し、沈殿をジクロロメタン（１９９ｍｌ）で洗浄した。得 た溶液を５％重炭酸ナトリウム（１５０ｍｌ）で二環、また飽和硫酸水素カリウ ム液（２５ｍｌ）を水（１００ｍ）に溶かした液で二環洗浄した。飽和塩化ナト リウム液で最終的に抽出した後、溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させる と、白色発泡物を得た。この発泡物を、メタノール傾斜のジクロロメタンを溶出 溶媒として用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。これ によって、純品を得た（ＨＰＬＣで９９％以上）　（１，０８ｇ、５２．８％） 。ＦＡＢ　−ＭＳ　＊　４１３　（Ｍ　＋　１）および４３１（Ｍ＋１＋水）。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１，）　：　４．５２　（ｓ、２Ｈ，ＣＨ’ｔ）　；　３ ゜７３　（ｓ、３Ｈ，ＯＭｅ）　；　３．２−３．６　（ｍ、４Ｈ，エチルＣＩ （２８）、１．９０　（ｓ。
３Ｈ，ＴにおけるＭｅ）　；　１．４９　（ｄ、３Ｈ，ＡｌａにおけるＭｅ）　 ；　１．４４　（ｓ。
Ｎ−ＢＯＣ−アミノエチル　ＯＮ−１−チミニルアセチル　−し一アラニン 表題化合物のメチルエステル（２，０７ｇ、５．０２ｒｒ＋ｍｏｌ）をメタノー ル（１００ｍｌ）に溶解し、水浴で冷却し、２Ｎ水酸化ナトリウム（１００ｒｎ ｌ）を加えた。１０分間攪拌した後で、混合物のｐＨを４Ｍ−塩化水素で３に調 節した。その後この溶液を酢酸エチル（３ｘ　１００ｍ１）で抽出し、有機抽出 液を併せて、硫酸マグネシウムで乾燥した。蒸発後、得た発泡物を酢酸エチル（ ４００ｍｌ）と数ｍｌのメタノールに溶かして、この固形物を溶解した。石油エ ーテルを沈殿物が生成し始めるまで加え、−２０℃で一夜放置した後、沈殿物を ろ過して除いた。こうすることによって、純品を１．０１ｇ　（５０，５％）得 た（ＨＰＬＣで９９％以上）。この化合物を２−プロパツールから再結晶した。
ＦＡＢ−ＭＳ・３９９　（Ｍ　＋　１）。’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　： １１．３５　（ｓ、ＩＨ，Ｃｏｏ）　；　７．４２　（ｓ、ＩＨ，Ｈ’、）　； 　４．６９　（ｓ、２Ｈ，ＣＨ’ｘ）　；１．８３　（ｓ、３Ｈ，ＴにおけるＭ ｅ）　；　１．５０−１．４０　（Ｍ、　１２ＨＳＡｌａ＋　ＢｏｃにおけるＭ 　ｅ　）。
火１」ドけ ａ　Ｎ　−Ｂｏａ−アミノエチル　−Ｎ−１−チミニルアセチルー〇−アラニン メチルエステル Ｂｏｃ−アミノエチルアラニンメチルエステル（２，４８ｇ　；　１０．１ｍｍ ｏｌ）をＤＭＦ　（２０ｍｌ）に溶かした溶液にＤｈｈｂｔ　−ＯＨ（１，８０ ｇ　；　１１゜Ｏｍｍｏｌ）およびチミニル酢酸（２，１４ｇ　；　１１．６ｍ ｍｏｌ）を添加した。１−チミニル酢酸が溶解した後で、塩化メチレン（２０ｍ ）　を加え、この溶液を水浴で冷却した。反応混合物が０℃に達した時に、ＤＣ Ｃ（２，８８ｇ　；　１４．Ｏｍｍｏｌ）を加えた。添加後５分でＤＣＵの沈殿 が認められた。３５分後に、水浴を取り除き、３．５時間後に反応混合物をろ過 し、沈殿を塩化メチレン（２００ｍｌ）で洗浄した。得た溶液を５％重炭酸ナト リウム液（２００ｍｌ）で二環、また飽和流酸水素カリウム水溶液（１，００ｍ １）で二環抽出し、飽和塩化ナトリウム液（２５０ｍｌ）で最終的に抽出した後 で、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると油状物を得た。この油状物をメタ ノール傾斜の塩化メチレンを溶出溶媒として用いて、短いカラムシリカゲルクロ マトグラフィーで精製した。こうすることによって、石油エーテルで沈殿させた 後でＨＰ　Ｌ　Ｃによる純度が９６％の化合物が得られた（１．０５ｇ　；　２ ５．３％）。ＦＡＢ　−ＭＳ　＊　４１３　（Ｍ　＋　１）。。’Ｈ−ＮＭＲ（ ＣＤＣ１，）　：　５．６４　（ｔ、ＩＨ，ＢｏｃＮＨ，Ｊ　＝　５．８９Ｈｚ ）　；　４．５６　（ｄ。
２Ｈ，ＣＨ’、）　：　４．３５　（ｑ、１．Ｈ，ＣＨｍ、ＡｌａにおけるＣＨ ，Ｊ　＝　７．２５）　；３．７４　（ｓ、３Ｈ，ＯＭｅ）　；　３．６４−３ ．２７　（ｍ、４Ｈ，エチルのＨ’）　；　１．９０（ｓ、３Ｈ，ＴにおけるＭ ｅ）　；　１．５２−１．４４　（ｔ、１２Ｈ，ＡｌａにけるＢｏｃ＋Ｍｅ）。
ｂ　Ｎ−ＢＯＣ−アミノエチル）−Ｎ−１−チミニルアセチル表題化合物のメチ ルエステル（１，５７ｇ、３．８１ｍｍｏｌ）　ラメ９　／　−ル（１００ｍｌ ）に溶解し、水浴で冷却し、水酸化ナトリウム（１００ｍｌ　；２Ｍ）を加えた 。１０分間攪拌した後で、混合物のｐＨを４Ｍ−塩化水素で３に調節した。その 後この溶液を酢酸エチル（３ｘ　１００ｍ１）で抽出し、有機抽出液を併せて、 硫酸マグネシウムで乾燥した。蒸発後、得た油状物を酢酸エチル（２００ｍｌ） に溶かし、石油エーテルを沈殿物が生成し始めるまで加え、−２０℃で一夜放置 した後、沈殿物をろ過して除いた。こうすることによって、表題化合物を１．０ ２ｇ　（６７，３％）得たが、純度はＨＰＬＣで９９％以上であった。
ＦＡＢ　−ＭＳ　：　３９９　（Ｍ　＋　１）、’Ｈ−ＮＭＲ：１１．３４　（ ｓ、ＩＨ，Ｃ００Ｈ）　；７．４２　（ｓ、ＬＨ，Ｈ’−）　；　４．６９　（ ｓ、２Ｈ，ＣＨ’＊）　；　４．４０　（ｑ、ＩＨ，ＡｌａにおけるＣＨ，Ｊ＝ ７゜２０Ｈｚ）　；　１．８３　（ｓ、３Ｈ，ＴにおけるＭｅ）　；　１．５２ −１．４０　（ｍ、１２ＨＳＡｌａにおけるＢｏｃ　＋Ｍｅ）。
夾１」目Ａ Ｎ　−Ｎ’　−Ｂｏａ−３’−アミノエチル　−Ｎ−１−チミニルアセチル　グ ーシンメチルエステル Ｎ　（Ｎ’　−Ｂｏｃ−３°−アミノプロピル）グリシンメチルエステル（２， ８４ｇ　；　０．０１１５ｍｏｌ）をＤＭＦ　（３５ｍｌ）に溶解し、その後Ｄ ｈｂｔＯＨ（２，０７ｇ　；　０．０１２７ｍｏｌ）と１−チミニル酢酸（２， ３４ｇ　；０．０１２７ｍｏｌ）を加えた。塩化メチレン（３５ｍｌ）を加えて 、混合物を水浴で０℃に冷却した。ＤＣＣ（２，８５ｇ　：　０．０１３８ｍｏ ｌ）を加えし、更に追加量の塩化メチレン（１５０ｍｌ）を濾液に加えた。有機 相を重炭酸す）　ＩＪウム（飽和液を当量の水で希釈、６　ｘ　２５０ｍ１）で 抽出し、硫酸カリウム（飽和液を４倍量の水で希釈、３　ｘ　２５０ｍ１）固体 として得た（３．０５ｇ、６４％）。ｍ、ｐ、７６−７９℃（分解）。元素分析 ＣゆＨ，Ｎ、０．、実験値（理論値）　Ｃ：　５２．０３　（５２，４２）　Ｈ ：６．９０　（６，８４）　；　Ｎ　：　１３．２１　（１３，５８）。この化 合物は、満足すべき１Ｈおよび”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。
０℃において２に調節した。本製品をろ過して白色結晶として単離し、水（３ｘ 　１０ｍ１）で洗浄し、真空下で５ｉｃａｐｅｎｔで乾燥した。
収率・２．１９　（７５％）。元素分析、Ｃ，、Ｈ，Ｎ、０．・Ｈ２Ｏ、実験値 （理論値’）　Ｃ：４９．９５　（４９，０３）　Ｈ：６．４７　（６，２９） 　；　Ｎ　：　１３．４３　（１３゜４５）。この化合物は、満足すべき’Ｈ− および”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。
夾１」目ノ ３−（１−チミニル　−プロパン　メチルエステルチミン（１４，０ｇ　；　０ ．１１ｍｏｌ）をメタノールに懸濁させ、メタアクリル酸メチル（３９，６ｍｌ 　；　０．４４ｍｏｌ）を触媒量の水酸化ナトリウムとともに加えた。この溶液 を４５時間暗所で還流させ、真空下において蒸発乾個させ、残渣を加熱しつつメ タノール（８ｍｌ）に溶解させた。水浴で冷却した後、生成物をエーテル（２０ ｍｌ）を加えて沈殿させ、ろ過して単離し、エーテル（２０ｍｌ）で洗浄し、真 の化合物は、満足すべきＩＨ−および”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。
夾１１目」 し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で蒸発乾個させると、表題化合物が白色 固体として得られた（０．６６ｇ　；　７１％）。ｍ、ｐ、１１８−１２１℃。
元素分析、Ｃ，Ｈ，。Ｎ、α、実験値（理論値）　Ｃ：　４８．３８　（４８゜ ４９）Ｈ・５．０９　（５，０９）　：　Ｎ　：　１３．９８　（１４，１４） 。この化合物は、満足すべき１Ｈ−および”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。
０．００４１　ｍｏｌ）をＤＭＦ　（１２ｍｌ）に溶解し、その後ＤｈｂｔＯＨ （０，７３ｇ　；　０．００４５ｍｏｌ）と１−チミニルプロパン酸（０，８９ ｇ　；　０．００４５ｍｏｌ）を加えた。塩化メチレン（１２ｍｌ）を加えて、 混合物を水浴で０℃に冷却した。ＤＣＣ（１，０１ｇ　；　０．００４９ｍｏ＋ ）を加えた後、混合物を２時間０℃で攪拌し、その後室温で１時間攪拌した。沈 殿したＤＣＵをろ過して除去し、塩化メチレン（２５ｍｌ）で洗浄し、更に追加 量の塩化メチレン（５０ｍｌ）を濾液に加えた。有機相を重炭酸ナトリウム（飽 和液を当量の水で希釈、６　ｘ　１００ｍ１）で抽出し、硫酸カリウム（飽和液 を４倍量の水で希釈、３　ｘ　１００ｍ１）次いで飽和塩化ナトリウム（１ｘ　 １００ｍ１）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し真空下で蒸発乾個した。固体 の残渣を塩化メチレン（１５ｍｌ）に懸濁させて、１時間攪拌した。沈殿したＤ ＣＵは、ろ過して除去し、塩化メチレン（２５ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空下 で蒸発乾個して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、メタノ−１２ ，７６（１３，１３）。この化合物は、満足すべきＨおよびＣ−ＮＭＲスペクト ルを示した。
プロパノイルコグリシンエチルエステル＜０．８３ｇ　；　０．００１９５ｍｏ １）ＷＯメタノール（２５ｍｌ）に溶解した。水酸化ナトリウム（２５ｍｌ　； ２Ｍ）を加え、この溶液を１時間攪拌した。メタノールを真空下で下で５ｊｃａ ｐｅｎｔの上で乾燥させた。収率：　０．７６９ｇ　（９９％）。ｍ。
ｐ、２１３℃（分解） 夾１１目玉 後、ｐＨを４Ｍ−塩酸で３．５に調節した。この溶液をろ過し、クロロホルム（ ３ｘ　２５０ｍ１）で抽出した。このｐＨを２Ｍ−水酸化ナトリウムで０℃にお いて１２に調節し、水溶液を塩化メチレン（３ｘ　３００ｍ１）で抽出した。飽 和塩化ナトリウム水溶液で（２５０ｍｌ）処理した後で、塩化メチレン溶液を硫 酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過して、生じた溶液を真空下で蒸発乾個して、本 島（油状物）９４゜２２ｇが得られた。’Ｈ−ＮＭＲ：δ１．４４　（ｓ、９Ｈ ）　；　２．８７　（ｔ、２Ｈ）　；３．１　（ｑ、２Ｈ）　；　５．６２　（ ｓ、ｂｒｏａｄ）。
夾１ノ目１ Ｎ　−Ｂｏｃ　−３°−アミノエチル　−　−アラニンメチルエステ上塩量玉 モノーＢｏｃ−エチレンジアミン（２）　（１６，２８ｇ　；　０．１０２ｍｏ ｌ）をアセトニトリル（４４０ｍｌ）に溶解し、アクリル酸メチル（９１，５０ ｍ１　；１．０２ｍｏｌ）をアセトニトリル（２００ｍｌ）と−緒にこの混合物 に移した。この溶液を暗所で窒素雰囲気下で一夜還流して、アクリル酸メチルの 重合を回避した。真空下で蒸発乾個した後で、水とエーテルの混合物（２００＋ 　２００ｍ１）を加え、生じた溶液をろ過して、激しく攪拌した。水相をもう一 度エーテルで抽出し、次いで凍結乾燥して、黄色の固体を得た。酢酸エチルから 再結晶して、表題化合物を１３．０９ｇを得た。ｍ、ｐ、１３８−１４０℃。元 素分析ＣＩＩＨ＝ＩＮ、Ｏ，ＣＩ、実験値（理論値）　Ｃ：　４６．４９　（４ ６，７２）　Ｈ：　８．３８　（８゜２０）　；　Ｎ　：　９．８３　（９，９ １）　；　Ｃ１：　１２．４５　（１２，５４）、’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ ）：δ１．３９ｓ、９Ｈ）　；　２．９　（ｍ、８Ｈ）　；　３．６４　（ｓ、 ３Ｈ）。
実施例４８ Ｎ−１−チミニル）アセチル　−Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチル−−アラニンメチ ルエステル （Ｎ　−Ｂｏｃ−アミノ−エチル）−β−アラニンメチルエステル・塩酸塩（３ ）　（２，０ｇ　；　０．００７１ｍｏｌ））および１−チミニル酢酸ペンタフ ルオロフェニルエステル（５）　（２，８２８ｇ　；　０．００８１２ｍｏｌ） をＤＭＦ　（５０ｍｌ）に溶解した。トリエチルアミン（１，１２ｍ１　；　０ ．００８１２ｍｏｌ）を加え、混合物を一夜攪拌した。塩化メチレン（２００ｍ ｌ）を添加後、有機層を重炭酸ナトリウム水溶液（３ｘ　２５０ｍ１）、半飽和 流酸水素カリウム水溶液（３ｘ　２５０ｍ１）と飽和塩化ナトリウム水溶液（２ ５０ｍｌ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、次いで真空下で蒸 発乾個すると、２．９ｇ　（９９％）の収量で生成物が得られた（油状物）。’ Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ　；　ＣＤＣｌ３　：二級アミドの周囲の回転が制限 されるため、信号のいくつかが二重化した。６１．４３　（ｓ、９Ｈ）　；　１ ．８８　（ｓ、３Ｈ）　；　２．６３　（ｔ、ＩＨ）　；　２．７４　（ｔ、Ｉ Ｈ）　；３．２５−３．５５　（４ｘｔ、８Ｈ）　；　３．６５　（２ｘｔ、２ Ｈ）　；　３．６６　（ｓＪ、５）　；　３゜７２　（ｓ、１．５）　；　４． ６１　（ｓ、ＩＨ）　；　５．７２　（ｓ、２Ｈ）　；　５．５９　（’ｓ、０ ．５Ｈ）　；５．９６　（ｓ、０．５Ｈ）　；　７．１１　（ｓ、ＩＨ）　；　 １０．３３　（ｓ、ＩＨ）。
夾１１目上 Ｎ−１−チミニル　アセチル　−Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチル二り二二二三上 Ｎ−［（１−チミニル）アセチル］　−Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチル−β−ア ラニンメチルエステル（３，０ｇ　；　０．００７３ｍｏｌ）を２Ｍ−水酸化ナ トリウム（３０ｍｌ）に溶解し、ｐＨを４Ｍ−塩酸で０℃において２に調節し、 溶液を２時間攪拌した。沈殿をろ過して単離し、冷水で三度洗浄し、真空下にお いて５ｉｃａｐｅｎｔ上で乾燥した。収率、２．２３ｇ　（７７％）。ｍ、ｐ、 １７０−１７６℃。元素分析Ｃ，，Ｈ，Ｎ、　Ｏ，・Ｈ，Ｏ１実験値（理論値” ）　Ｃ：４９．４９（４９，０３）　Ｈ：６．３１（６，７８）；Ｎ　：　１３ ．８４　（１３，４５）　；　Ｃ１゜’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−市）：６１．３ ８　（ｓ、９Ｈ）　；　１．７６　（ｓ、３Ｈ）　；　２．４４および３．２９ 　（ｍ、８Ｈ）　；　４．５５　（ｓ。
２Ｈ）　；　７．３　（ｓ、ＬＨ）　；　１１．２３　（ｓ、ＩＨ）。ＦＡＢ　 −ＭＳ　：　３９９　（Ｍ　＋爽直乱四 Ｎ−１−Ｎ’−Ｚ　−シトシル　アセチル　−Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチル−− アラニンメチルエステル（Ｎ　−Ｂｏｃ−アミノ−エチル）−β−アラニンメチ ルエステル・塩酸塩（３）　（２，０ｇ　；　０．００７１ｍｏｌ）および１− 　（Ｎ−４−Ｚ＞　−シトシル酢酸ペンタフルオロフェニルエステル（５）　（ ３，３１９ｇ　；　０゜００７１ｍｏｌ）をＤＭＦ　（５０ｍｌ）に溶解した。
トリエチルアミン（０゜９９ｍ１　；　０．００７１ｍｏｌ）　ｗｏ加え、混合 物を一夜攪拌した。塩化メチレン（２００，１）を添加した後で、有機層を重炭 酸ナトリウム水溶液（３ｘ　２５０ｍ１）、半艶和硫酸水素カリウム水溶液（３ ｘ　２５０ｍ１）および飽和塩化ナトリウム水溶液で抽出し、硫酸マグネシウム で乾燥した。ろ過して、真空下で蒸発乾個して、３．３６ｇの固体の化合物が得 られたが、このものをメタノールから再結晶した。収率：２．４２ｇ　（６４％ ）。ｍ、ｐ、１５８−１６１℃。元素分析Ｃ−Ｈ，ｓ　Ｎｓ　ｏｓ、実験値（理 論値）　Ｃ：５５．１９（５６，４９）　Ｈ：６．１９（６，２６）；　Ｎ：１ ２８６　（１３，１８）、’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ　；　ＣＤＣｌ５）　：二 級アミドの周囲の回転が制限されるため、信号のいくつかが二重化した；δ１゜ ４３　（ｓ、９Ｈ）　；　２．５７　（ｔ、ＬＨ）　；　３．６０−３．２３　 （ｍ’ｓ、６Ｈ）　；　３．６０　（ｓ。
１．５Ｈ）　＋　３．６６　（ｓ、１．５Ｈ）　；　４．８０　（ｓ、ＩＨ）　 ；　４．８８　（ｓ、ＩＨ）　：　５．２０（ｓ、２Ｈ）；　７．８０−７．２ ５　（ｍ’ｓ、７Ｈ）。ＦＡＢ−ＭＳ　＋　５３２　（Ｍ＋　１）実１ノ日Ｕ Ｎ−１−Ｎ’−Ｚ　−シトシル　アセチル　−Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチル−− アラニン Ｎ−［（１−（Ｎ”Ｚ）−シトシル）アセチル］　Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチ ル−β−アラニンメチルエステル（０，６２１ｇ　；　Ｏ，ＯＯ１２ｍｏｌ）を ２Ｍ−水酸化ナトリウム（８，５ｍ１）に溶解して２時間攪拌した。
その後に、ｐＨを４Ｍ−塩酸で０℃において２に調節し、この溶液を２時間攪拌 した。沈殿をろ過して単離して、冷水で三度洗浄し、真空下で５ｉｃａｐｅｎｔ 上で乾燥した。収率：　０．３２６ｇ　（５４％）。この白色固体を２−プロパ ツールから再結晶し、石油エーテルで洗浄した。ｍ、ｐ、１６３第（分解）。元 素分析Ｃ２，Ｈ，、Ｎ、Ｏ，、実験値（理論値）ＣＩ　４９．４９　（４９，０ ３）　Ｈ：　６．３１　（６，７８）　；　Ｎ　：　１３．８４　（１３，４５ ）。１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ　；　ＣＤＣ１，）　：二級アミドの周囲の回 転が制限されるため、信号のいくつかが二重化した；δ１．４０　（ｓ、９Ｈ） 　；　２゜５７　（ｔ、ＩＨ）　；　２．６５　（ｔ、ＩＨ）　；　３．６０− ３．３２　（ｍ’ｓ、６Ｈ）　；　４．８５　（ｓ。
ＩＨ）：　４．９８　（ｓ、ＬＨ）　＋　５．２１　（ｓ、２Ｈ）　；　５．７ １　（ｓ、ＬＨ，ｂｒｏａｄ）　；　７゜９９−７．２５　（ｍ’ｓ、７Ｈ）。
ＦＡＢ　−ＭＳ　＋　５１８　（Ｍ　＋　１）夾１１巳４ グアニン　るＰＮＡ−才リゴマ−の （ａ　Ｈ−Ｔａｅ　−Ｇａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨの批丘１ 保護されたＰＮＡを、置換度がほぼ０１５であるＢｏｃ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ） で修飾したＭ　Ｂ　ＨＡ樹脂の上で構築した（定量的ニンヒドリン反応で測定） 。カップルしていないアミノ基のキャッピングは、ＢｏｃＢａｅｇ−Ｏ■（モノ マーを導入する前に初めて行った。
合成は、予備膨潤（Ｄ　ＣＭ中で一夜）させかつ中和したＢｏａ　−Ｌｙｓ（Ｃ ＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂１０２ｍｇ　（乾燥重量）において開始した。実施した工 程は以下の通りである　（１）　ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２　（１：　１、Ｖ／Ｖ） によるＢｏｃ−脱保護、１Ｍ２分および１　ｘ　ｌ　／　２時間、３ｍｌ　；　 （２）１）　Ｃ％ｉによる洗浄、４ｘ２０秒、３ｍｌ；ＤＭＦによる洗浄、２Ｍ ２０秒、：３ｍｌ；ＤＣＭによる洗浄、２Ｍ２０秒、３ｍｌ、および３０秒間の ドレーン；　（３）　ＤＩＥＡ／ＤＣＭ　（１：　１９、ｖ　／　ｖ　）による 中和、２Ｍ３分、３ｍｌ；　（４）ＤＣＭによる洗浄、４ｘ２０秒、３ｍｌおよ び１分間のドレーン；（５）４当量のジイソプロピルカルボジイミド（０，０６ ｍｍｏｌ　；９．７　ｔｔ　］）および４当量（０，０６ｍｍｏｌ　；　２４ｍ ｇ）のＢｏｃＴａｅｇ　−ＯＨまたは（０，０６ｍｍｏｌ　；　３０ｍｇ）のＢ ｏｃＧａｅｇ　−ＯＨを０．６ｍｌのＤＣＭ／ＤＭＦ　（１：　１、Ｖ　／　Ｖ 　）に溶解して添加、このカップリング反応は、室温で振盪させなから１ｘ２時 間進行させた；（６）サクションを２０秒間適用した。（７）ＤＭＦによる洗浄 、２Ｍ２０秒及び１Ｍ２分、３ｍｌ　；　（８）Ｄ４ＥＡ／ＤＣＭ　（１：　１ ９、ｖ　／　ｖ　）による中和、２Ｍ３分、３ｍｌ；　（９）ＤＣＭによる洗浄 、４ｘ２０秒、３ｍｌおよび１分間のドレーン；　（１０）定性的Ｋａｉｓｅｒ 試験；　（１１）未反応アミノ基をＡｃ、０／ピリジン／ＤＣＭ（１：１：２、 ｖ　／　ｖ　）。ｌｘｌ／２時間、３ｍｌ　；および（１２）ＤＣＭによる洗浄 、４ｘ２０秒、２Ｍ２分；　２Ｍ２０秒。工程１−１２は、所望の配列が得られ るまで繰り返した。定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は全て、マイナスであり（わら様の 黄色、ビーズには一切着色しない）、カップリング収率はほぼ１００％であるこ とを示していた。ＰＮＡ−オリゴマーを開裂させ、通常の方法で精製した。ＦＡ Ｂ−ＭＳ　：　２８３２．１１　［Ｍ　＊　＋　１］　（計算値２８３２．１５ ）。
叉１ノ己４ Ｈ−Ｔａｅ　−Ａａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨの　Δａ　Ｂｏｃ−Ｔａｅ　 −Ａ　Ｚ　ａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　ｓ　ＣＩＺ　−性」シ穎１批主風 湿潤Ｂｏｃ−［Ｔａｅｇ］、−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨ樹脂はぼ０．３ｇ を３ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に入れた。　Ｂｏｃ　−Ｔａｅｇ　−Ａ　（Ｚ）　 ａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂を、２５ｍ １の５０％ＤＭＦ／　ＣＨ２ＣＩ２中０．１５Ｍ−ＤＣＣと共に０．１９ＭのＢ ｏｃ　（Ａ）　（Ｚ）　ａｅｇ−ＯＨを用いたｉｎ　５ｉｔｕＤＣＣカツプリン グ（単一）および純ＣＨ。
Ｃ１，中において０．１５ＭのＢｏｃＴａｅｇ　−０Ｐｆｐとの単一カッブリン グによって組み立て・構築した（”合成実験記録５″）。この合成は、定量的ニ ンヒドリン反応によってモニターしたが、これによってＡ　（Ｚ）　ａｅｇの導 入率はほぼ５０％でありまたＴａｅｇの導入率はほぼ９６％であることが明らか になった。
（ｂ）Ｈ−Ｔａｅ　−Ａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨの扛圭グ皿亙 保護されたＢｏｃ−Ｔａｅｇ−Ａ　（Ｚ）　ａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌｓ−Ｌｙｓ 　（ＣＩＺ）−ＢＨＡ樹脂を実施例４０ｃにおいて記載したように処理して、乾 燥Ｈ−Ｔａｅｇ−Ａ　（Ｚ）　ａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌ５−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ） 　−ＢＨＡ樹脂５３．１ｍｇをＨＦ開裂すると粗製物質がほぼ１５．６ｍｇが得 られた。
１４．４分における主ピークは、全吸光度の５０％以下を占めていた。
この粗製物０．５ｍｇを精製して、Ｈ−Ｔａｅｇ　−Ａａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌ 。
−Ｌｙｓ　−ＮＨ，が０．１ｍｇ得られた。（ＭＨ＋）’について、計算ｍ／２ 値は、２８１６．１６でありかつ測定ｍ　／　ｚ値は２８１６．２８゜Ｃム　Ｉ ５ （１）　ＴＦＡ／ＣＨｔＣ１２（１：　１、ｖ／ｖ）によるＢｏｃ−脱保護、２ ．５ｍｌ。
Ｏｘ１分および１ｘ３０分；　（２）　ＣＨ，ＣＩ、による洗浄、２．５ｍｌ、 ６ｘ１分：（３）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：　１９、ｖ　／　ｖ　）によ る中和、２．５ｍｌ、３ｘ２分；　（４）　ＣＨ，Ｃｌ、による洗浄、２．５ｍ ｌ、６ｘ１分、および１分間のトレー７；　（５）２−５ｍｇのＰＮＡ−樹脂試 料を取り出し、完全に乾燥してニンヒドリン定量分析に供して置換度を測定する 。（６）１゜２５ｍ１のＤＭＦに溶解した０、４７ｍｍｏｌ　（０，２５ｇ）の ＢｏｃＴａｅｇ　−ＯＨを添加し、次いで１．２５ｍ１のＣＨ，Ｃ１，に溶かし た０、４７ｍｍｏｌ　（Ｉｇ＞のＤＣＣまたは２．５ｍｌのＣＨ，ＣＩ、に溶か した０、３６ｍｍｏｌ　（０，２０ｇ）のＢｏｃＴａｅｇ　−０Ｐｆｐを添加す る。カップリング反応は、振盪しつつ全部で２０−２４時時間待させた；（７） ＤＭＦによる洗浄、２゜５ｍＬ　１ｘ２分；　（８）　ＣＨ２Ｃｌ、による洗浄 、２．５ｍｌ、　４ｘ１分；　（９）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，ＣＩ、　（１：　１９ 、ｖ　／　ｖ　）による中和、２．５ｍｌ、２ｘ２分；　（１０）ＣＨ，Ｃ１， による洗浄、２．５ｍｌ、　６ｘ１分；　（１１）　２−５ｍｇの保＋Ｉ　ＰＮ Ａ樹脂試料を取り出し、よく乾燥してニンヒドリン定量分析に供して、カップリ ング度を測定する。（１２）未反応アミノ基を無水酢酸／ピリジン／Ｃ１，ＣＩ 、　（］暑、２、ｖ　／　ｖ　／　ｖ　）の混合物２５ｍ１用いて２時間アセチ ル化することによってブロックする（最後のサイクルを除＜）、および（１３） 　ＣＨ，ＣＩ、による洗浄、２．５ｍｌ、６ｘ１分；（１４）保護されたＰＮＡ −樹脂の２ｘ２−５ｍｇ試料を取り出し、ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：　１９ 、ｖ／ｖ）による中和し、ＣＨ，Ｃ１，で洗浄してニンヒドリン分析を行った。
央ｍ Ｈ−Ｔａｅ　−Ａａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨの　ムａ　Ｂｏｃ　−Ｔａｅ 　−Ａ（Ｚ　ａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　ｓ　ＣＩＺ−ＭＢＨＡ　の　・４ 湿潤ＢＯＣ−［Ｔａｅｇ］ｓ　−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂はぼ０． ５ｇを５ｍｌの５ＰＰＳ反応容器に入れた。Ｂｏａ　−［Ｔａｅｇｌ２−　Ａ　 （Ｚ）　ａｅｇ−［Ｔａｅｇｌ−−Ｌｙｓ　（（ｊＺ）　−ＭＢＨＡ樹脂を、２ ｍｌの／　ＣＨａ　ＣＩｇ中の当量のＤＣＣと共に０．１５Ｍから０．２０Ｍの 保護されたＰＮＡモノマー（遊離酸）を用いたＡ　（Ｚ）　ａｅｇとＴａｅｇ残 基とのｉｎ　５ｉｔｕＤＣＣカツプリングを行うことによって組み立て・構築し た（”合成実験記録６″）。この合成は、定量的ニンヒドリン反応によってモニ ターしたが、これによってミロのカップリングを行った後でＡ　（Ｚ）ａｅｇの 導入率はほぼ８２％であり（−回目のカップリングでは、導入率はほぼ５０％で あった：５０％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨ，ＣＩ、中での四回目のＨＯＢｔ仲介カッ プリングでは、全カップリング収率は有意には増大しなかった）またＴａｅｇ残 基の導入率は定量的であることが明らかになった。
ｂ　Ｈ−Ｔａｅ　−Ａｅ　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨの亘ｌユロ」定 保護されたＢｏｃ　−［Ｔａｅｇ］ｇ　−Ａ　（Ｚ）　ａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌ 、　−Ｌｙｓ（ＣＩＺ）　−ＢＨＡ樹脂を実施例４０ｃにおいて記載したように 処理して、乾燥Ｈ−［Ｔａｅｇ］＊−Ａ　（Ｚ）　ａｅｇ　−［Ｔａｅｇ］ｅ− Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）−ＢＨＡ樹脂１０２．５ｍｇをＨＦ開裂すると粗製物質がほ ぼ１６．２ｍｇが得られた。この粗製物の一部を精製した。（ＭＨ＋）”につい て、計算ｍ／ｚ値は、２０５０．８５でありかつ測定ｍ　／　ｚ値は２０５０． ９０であった。
Ｃム　言６ （１）　ＴＦＡ／ＣＨ，ＣＩ２　（１：　ｌ、ｖ／ｖ）によるＢｏｃ−脱保護、 ２ｍｌ、３ｘ１分およびｌ’ｘ　３０分；　（２）　ＣＨ２ｃｌｆｆによる洗浄 、２ｍｌ、　ｅｘ１分；（３）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃｌ２（１：　１９、ｖ／ｖ ）による中和、２ｍｌ、３ｘ２分；（４）　ＣＨ，ＣＩ２による洗浄、２．５ｍ ｌ、Ｏｘ１分、および１分間のドレーン：　（５）２−５ｍｇのＰＮＡ−樹脂試 料を取り出し、完全に乾燥してニンヒドリン定量分析に供して置換度を測定する ；　（６）　１．５ｍｌのＣＨ，Ｃ１，に溶解した０、４４ｍｍｏｌ　（０，２ ３ｇ）のＢｏｃＡ　（Ｚ）　ａｅｇ　−ＯＨを添加し、次いで０．５ｍｌのＣＨ ，Ｃｔｔに溶かした０、４７ｍｍｏｌ　（Ｉｇ）のＤＣＣまたは１．５ｍｌのＣ Ｈ，Ｃ１，に溶かした０、３３ｍｍｏｌ　（０，１３ｇ）のＢｏｃＴａｅｇ　− ＯＨを添加する；カップリング反応は、振盪しつつ全部で２０−２４時時間待さ せた＋（７）ＤＭＦによる洗浄、２ｍｌ、１ｘ２分；　（８）　ＣＨ，Ｃ１，に よる洗浄、２ｍｌ、Ｊｘ１分；　（９）　ＤＩＥＡ／ＣＨ，ＣＩ！（１：　１９ 、ｖ　／　ｖ　）による中和、２ｍｌ、２ｘ２分；　（１０）　ＣＨ，ＣＩ、に よる洗浄、２ｍｌ、６ｘ１分、　（１１）　２−５ｍｇの保護ＰＮＡ樹脂試料を 取り出し、よく乾燥してニンヒドリン定量分析に供して、カップリング度を測定 する；　（１２）未反応アミン基を無水酢酸／ピリジン／ＣＨ，Ｃ１，（１：　 １　：　２、ｖ　／　ｖ　／　ｖ　）の混合物２５ｍ１用いて２時間アセチル化 することによってブロックする（最後のサイクルを除り）：（１３）　ＣＨ，Ｃ Ｉ、による洗浄、２ｍｌ、６ｘ１分：および（１４）保護されたＰＮＡ−樹脂の ２ｘ２−５ｍｇ試料を取り出し、ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃ１，（１：１９、ｖ　／　 ｖ　）による中和し、ＣＨ，Ｃ１，で洗浄してニンヒドリン分析を行った。
夾１ノロ浸 ”ゼロ塩基”置換の試料。
即ち、Ｌ＝Ｈ Ｈ−Ｔ、　（Ａｃ）　Ｔ＋ｔ　−ＬｙｓＮＨ２（ｄＡ）＋。　４９℃ＨＴ＝　（ Ａｃ）　Ｔｓ　ＬｙｓＮＨ，（ｄＡ）−（ｄＧ）　（ｄＡ）ｓ　３７℃Ｈ−Ｔ、 （Ａｃ）Ｔ、−ＬｙｓＮＨｔ　（ｄＡ）−（ｄＣ）（ｄＡ）ｓ　４１℃Ｈ−Ｔ、 　（Ａｃ）　Ｔｓ　−ＬＹＳＮＨ２（ｄＡ）４（ｄＴ）（ｄＡ）、４１℃ＨＴ＝ 　（Ａｃ）Ｔｓ　ＬｙｓＮＨ２（ｄＡ）ｉ　（ｄＧ）（ｄＡ）４３６℃Ｈ−Ｔ、 （Ａｃ）Ｔｏ−ＬｙｓＮＨｔ　（ｄＡ）、（ｄＣ）（ｄＡ）、４０℃ＨＩ４（Ａ ｃ）Ｔａ　ＬｙｓＮＨ２（ｄＡ）ａ　（ｄＴ）（ｄＡ）４４０℃即ち、Ｈ−Ｔｌ ｏ　−ＬｙｓＮＨ，と比べて、一つのチミンリガンドをＨで置換すると、Ｉ６が ７３℃から４８℃まで低下することが判る。また単一塩基ミスマツチを導入する 効果も示しである。
ＰＮＡオリゴマーのいくつかの生化学的／生物学的性質を、以下の実験によって 説明する。
のＢａｍＨＩ、　５ａｌｌまたはＰＳＴＩにクローンした認識配列ん。、Ａ、Ｇ 　Ａ。
三つのＰＮＡは、以下の相対的な効率でそれぞれの認識配列に結合することが判 った：　ＰＮＡ　Ｔ＋ｏ　：ん。＞ＡｎＧ＞んＧ２、ＰＮＡ　−Ｔ、Ｃ：Ａ、Ｇ 　＞　Ａ、。＞　Ａｓ　Ｇｚ、Ｐ　Ｎ　Ａ　Ｔｓ　Ｑ　：　Ａｓ　Ｇ２≧Ａ＊Ｇ ＞ん。。即ち、３７℃において、１０につきｌのミスマツチがあると、効率が減 少しく５−１０倍と推定）、他方では二つのミスマツチは受け入れられない。
２、ＰＮＡｓＴ　Ｔ　ＣＴ　Ｃのハイブリ　イゼーシ　ンに　ｄｓ　−ＤＮＡか らの　−　ＤＮＡの　２０　−　６３３、ＰＮＡ　−Ｔ　−ｄｓＤＮＡの　ム　 ノ　の貼ユｍ■ 複合体形成は、ＰＮＡと”Ｐ　−ｅｎｄ標識ｄｓＤＮＡフラグメントを混合した 後個となる時点でＳ、−ヌクレアーゼによってプローブした（第２１図）。
４、ＰＮＡ　−ｄｓＤＮＡΔの。
ＰＮＡ−Ｔ、、と”Ｐ　−ＤＳＤＮＡ　（ＡＩ。／　Ｔ＋。）標識との複合体を 形成させた（６０分、３７℃）。これらの複合体は、過剰のオリゴ−ｄん。の存 在下所望の温度において培養し、室温に冷却しＫ　Ｍ　ｎ　０４でプローブした 。その結果（第２２図）、ＰＮＡ−ｄｓＤＮＡ複合体の熱安定性はＰＮＡオリゴ ヌクレオチド複合体の熱安定性を”Ｔ、、′とういう点で反映していることが判 る。
５、ＰＮＡによる　の　６４２３ プラスミド構成、ｐＴＩＯは、ｐＵｃ１９中のＢａｍＨＩ部位にクローンしたｄ Ａ、。／ｄＴ、。ｔｒａｃｔを含有している。即ち、ＢａｍＨＩおよびＰｖｕｌ ＴによるＰＴＩＯの開裂を行うと、２１１とｌ１ｌｂｐなる二つの小さいＤＮＡ フラグメントが生じる。ＰＮＡ　−Ｔ、。の存在下では、３３６ｂｐフラグメン トが得られるが、これはＰｖｕｌｌのみに因る開裂に相当する（第２３図）。即 ち、ＢあＭｌｌによる開裂は、制限酵素部位に近接して結合したＰＮＡによって 抑制される。このような結果も、ＰＮＡ−ｄｓＤＮＡ複合体を１００％収率で形 成させることが出来ることを示している。
６、”Ｉ−、したＰＮＡのオリゴヌクレチドへの　八６３１に■Ｌ Ｔｙｒ　−ＰＮＡ　−Ｔ、。−Ｌｙｓ　−ＮＨｙをＮａ’町およびタロラミン− Ｔを用いで町で標識し、ＨＰＬＣで精製した。この”Ｉ　−ＰＮＡ　−Ｔ、。
は、ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーによってオリゴニｄＡ、。
に結合することが判った。このような結合は、過剰の変成した子牛胸腺ＤＮＡに よって拮抗させることが出来た。
上記（１）項に戻って論じると、ｄｓＤＮＡの配列特異的認識は、１０のチミン 置換２−アミノエチルグリシル単位から成るＰＮＡ−そのＣ−終末はりシンアミ ドでありまたＮ−終末は複合９−アミノアクリジンリガンド（９−Ａｃｒ’　（ ｔａｅｇ）＋ｏ　Ｌｙｓ　ＮＨｉ、第１１ａおよびｌｌｂ図）である−がｄＡ＋ 。／ｄＴ、。標的配列に結合することよりて説明される。この標的は、２４８　 ｂｐ”Ｐ−ｅｎｄ（末端）−標識ＤＮＡ−フラグメントに含まれる。
１）この９−Ａｃｒ’は（第５図）、照射時のＤＮＡの開裂を確実にするため４ −ニトロベンズアミドを付しており、その結合部位に極めて近接してＤＮＡを開 裂させることが予期されるに過ぎない。上記２４８　ｂｐ　ＤＮＡフラグメント とともにＰＮＡを照射すると、ｄＡ、。
／　ｄ　Ｔ、、配列における選択的開裂が認められる（第３ａ図）。
２）所謂ホトフットプリンティング検定において、合成ジアゾ結合アクリジンは 紫外線照射下において、ＤＮＡと相互作用した場合にＤＮＡを開裂させる（但し 、ＤＮＡが前記結合性物質で保護されている場合は除く）。
このような実験は、上記した２４８ｂｐｄｓＤＮＡを用いて行ったが、その結果 ＰＮＡ結合部位の光開裂に対する保護が明らかとなった（第３ｂ図）。
３）様様な種類の実験において、ＤＮＡ−開裂性酵素であるＭｉｃｒｏｃｏｃｃ ｕｓヌクレアーゼは、矢張り大抵のＤＮＡ−結合性試薬によってその作用が阻害 されるが、Ｔ１゜−標識における開裂を増大させた（第３ｃ図）。
４）また別の種類の実験におい手、−重鎖チミンリガンドは（二本鎖チミンリガ ンドとは異なりｔｅ）過マンガン酸カリウムによる酸化を極めて受け易いのであ るが、この性質を利用した。この試薬の存在下で２４８ｂｐを酸化したところ、 標的のＴｌ０−鎖の酸化のみが起こることが判った（第３ｂ図）。
５）同種の証明実験において、Ｓ１ヌクレアーゼが持つ一本鎖特異性によって、 標的のＴ、。−鎖のみが攻撃されたことが判った（第３ｄ図）。
（Ｔａｅｇ）＋ｏ、（Ｔａｅｇ）＋ｏ　Ｌｙｓ　ＮＨｇおよびＡｃｒ’　−（ｔ ａｅｇ）、、　−Ｌｙｓ　−ＮＨ２（第５図）が相当するｄん。に極めて効率よ く結合することは、以下の二つの方法で説明・証明された：１、以下の実施例５ ６　におい手示す様に、ＰＮＡ−オリゴヌクレオチット複合体は、ポリアクリル アミドゲル中での電気泳動を行うと一木調オリゴヌクレオチソドよりも泳動速度 が遅いはずである。
従って、このような実験は、Ａｃｒ’　−（Ｔａｅｇ）＋。−Ｌｙｓ−ＮＨ，お よび”Ｐ　−ｅｎｄで標識したｄＴ、。につぃて行った。この結果、通常のｄＡ 、。
、／　ｄ　Ｔｏｏ二重らせんが安定である条件においてはまたこのような二重ら せんが不安定である（変成性ゲル）条件下においても泳動が　−遅延することが 判った。対照実験を、Ａｃｒ’　−（ｔａｅｇ）＋ｏ　−１，ｙｓ−ＮＨ，と” Ｐ　−ｅｎｄで標識したｄＴ、。との混合物で行ったが、その結果上記した条件 下では全く遅延しないことが判った。
２、一本鎖ＤＮＡからＤＮＡ二重らせん（ｄｓＤＮＡ）を形成させると、吸光度 係数は減少する（淡色効果）。即ち、ＤＮＡの変性は、吸光率の変化をたとえば 、二重らせんの５０％が消失して一本鎖を生じる温度であるＴ、を函数として測 定することにｙｏって追跡することができる。
二重らせんは、−木調オリゴデオキシリプヌクレオチドと以下に列挙するＰＮＡ 類とから形成した。典型的には、Ｔ−リッチ鎖の０．３０Ｄカを１当量の他の鎖 と、９０”Ｃにおいて５分間加熱し、次いで室温にまで冷却することにょハイブ リダイゼーションさせ、次いで３０分間保持し、最後に５℃の冷蔵庫に少なくと も３０分間保存した。使用した緩衝液は全て、りん酸が１０ｍＭかっＥＤＴＡが １ｍＫであった。低塩緩衝液は塩化ナトリウムを一切含有しておらず、一方中塩 緩衝液は、１４０ｍＭのＮａＣ１を含有しまた高温緩衝液は５００ｍＭのＮａＣ ｌを含有していた。これら緩衝液の全ては、ｐＨが７．２であった。ハイブリッ ドの融点は、Ｇ１１ｆｏｒｄ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ装置で測定した。以下に記載す る吸光度係数を用いた：通常のオリゴヌクレオチットおよびＰＮＡの双方とも、 Ａ　：　１５．４ｍｌ／　μｍｏｌ　−ｃｍ　；　Ｔ　：８．８　、　Ｇ　：　 １１．７およびＣ７，３とした。融解曲線を０．５℃／分刻みで記録した。Ｔ、 は、Ａヶと温度との曲線の一次微分係数も最大値からめた。
オリゴデオキシリボヌクレオチド　のリスト；１．５’　−ＡＡＡ　−ＡＡＡ　 −ＡＡ２．５°−ＡＡＡ−ＡＡＡ−ＡＡＡ−Ａ３．５°−ＴＴＴ−ＴＴＴ−ＴＴ Ｔ−Ｔ４．５’　−ＡＡＡ　−ＡＡＧ　−ＡＡＡ　−Ａ５．５°−ＡＡＧ−ＡＡ Ｇ−ＡＡＡ−Ａ６．５’　−ＡＡＡ　−ＡＧＡ　−ＡＡＡ　−Ａ７．５°−ＡＡ Ａ−ＡＧＡ−ＡＧＡ−Ａ８．５’　−ＴＴＴ　−ＴＣＴ　−ＴＴＴ　−Ｔ９．５ ’　−ＴＴＴ−ＴＣＴ−ＴＣＴ−Ｔ１０．５’−ＴＴＴ　−ＴＴＣ−ＴＴＴ　− Ｔ１１．５’　−ＴＴＴ　−ＴＴＣ−ＴＴＣ−Ｔ１２５°　−ＴＴＣ−ＴＴＣ− ＴＴＴ　−Ｔ１３．５°　−ＴＴＴ　−ＴＴＴ　−ＴＴＴ　−ＴＴＴ　−ＴＴＴ １４．５’　−ＡＡＡ　−ＡＡＡ−ＡＡＡ　−ＡＡＡ　−ＡＡＡＰＮＡ類のリス ト ａ、ＴＴＴ−ＴＴＴ−ＴＴＴ−Ｔ−Ｌｙｓ−ＮＨ２ｂ、ＴＴＴ−ＴＴＴ−ＴＴ− Ｌｙｓ−ＮＨ２ｃ、ＴＴＴ　ＴＴＣＴＴＴ　Ｔ　Ｌｙｓ　ＮＨ２ｄ、ＴＴＣＴＴ ＣＴＴＴ　Ｔ　Ｌｙｓ　ＮＨ２ｅ、Ａｃｒ−ＴＴＴ−ＴＴＴ−ＴＴＴ−Ｔ−Ｌｙ ｓ−ＮＨ。
ｆ、Ａｃ−ＴＴＣ−ＴＴＴ−ＴＴＴ−Ｔ−Ｌｙｓ−ＮＨ２０１ｉｏ／ＰＮＡ　ｔ １　＋　ｂ　５６．０　５１．５　５０．０２　＋　ａ　７３．０　７２．５　 ７３．０２　＋　ｃ　４１．５　＆　５２．０　＊２→ｅ　８４．５　８６．０ 　＝　９０２　＋　ｆ　７４ ４４−　ａ　６０．０　５９．０　６１．５４　＋　ｃ　７４．５　７２．０　 ７２．５１３　＋　１４　３９．０ 注記　＊、明確な融点が二つ認められるが、変性が終了する前に局所的な融解が 起こったこを示している。
ＲＮＡ−Ａ（ポリｒＡ）とＰＮＡ−Ｔ、、−Ｌｙｓ−ＮＨ２との間ツバイブリッ トは、測定出来ないほどの高温で融解する（〉９０℃）。しかし、特異的なハイ ブリダイゼーションは、ＲＮＡ−Ａ−但しＧｌＣおよびＵではない−と混合した 時のＡ！、が大幅に低下することによって証明される。実験は、ＰＮＡ溶液溶液 １占ｌＮＡ溶液１ｍ１−何れもＡカニ０．６−とを混合し、次いで２６０ｎｍに おける吸光度を測定することによって行う。その後、試料を９０℃に５分間加熱 し、室温にまで冷却し、この温度に３０分間保持子、最後に５℃において３０分 間保存する。
混合前　混合後　混合及び加熱 ＲＮＡ　ＰＮＡ　の　の　の ＲＮＡ−Ａ　ＰＮＡ−Ｔ、、−Ｌｙｓ−ＮＩｉｓ　Ｏ，６０００，３８９０，３ ６０ＲＮＡ−Ｕ　ＰＮＡ−Ｔ、、−Ｌｙｓ−ＮＨｓ　Ｏ，６０００，５３８０， ５２８ＲＮＡ−Ｇ　ＰＮＡ−Ｔ、、−Ｌｙｓ−ＮＨＪＯ，６０００，５１４０， ５１７ＲＮＡ−ＣＰＮＡ−Ｔ、、−Ｌｙｓ−ＮＨｓ　Ｏ，６０００，５４００， ５３２上記の測定値から、以下の結論を下すことが出来る。融解曲線が認められ るので、塩基スタッキングがある。ＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドの方が、通常の ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッドよりも安定性が高く、而もＰＮＡ−ＲＮＡはさらに これよりも安定である。ミスマツチによって、誤対合した塩基がＤＮＡ鎖にある かまたはＰＮＡ鎖にあるかに拘らず、Ｔ□が大幅に低下する。このＴ１値は、通 常のオリゴヌクレオチドとは異なりイオン強度にわずかしか依存していない。
犬１１ｇ」 Ａｃｒ’　−Ｔａｅ　−Ｌ　５−ＮＨのｄＡ　ＩＯへの　ム　ｌｌａ胆 Ａｃｒ’　−（Ｔａｅｇ）＋ｏ　−Ｌｙｓ　（１００ｎｇ）を２０μＩのＴＥ緩 衝液（１０ｍＭトリスＨＣＩ、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７，４）中において５０ｃ ｐｓの５°−［”Ｐ］−ｅｎｄ−で標識したオリゴヌクレオチットと一緒に室温 で工５分間培養した。試料を氷で冷却しく１５分間）、ポリアクリルアミド中で のゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）で分析した。試料の１０μｌに、２μｍの５０％ のグリセリン、５　μｌのＴＢＥ　（ＴＢＥ＝９０ｍＭ　トリス硼酸塩、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８，３）を加え、試料を４℃においてＴＢＥ緩衝液中でのＰＡＧ Ｅ　（１５％アクリルアミド、０．５％ビスアクリルアミド）によって分析した 。この試料１０μｌを凍結乾燥して、１０μｌの８０％ホルムアミド、ＩＴＢＥ に再度溶解し、９０℃に加熱（５分間）し、尿素／ＴＢＥ緩衝液中でのＰＡＧＥ 　（１５％アクリルアミド、０．５％ビスアクリルアミド）によって分析した。
［”Ｐ］−含有ＤＮＡバンドを増幅スクリーンおよび一８０℃において２時間露 光したアグファクリックス（Ａｇｆａ　Ｃｕｒｉｘ）　ＲＰＩＸ−線フィルムを 用いて、オートラジオグラフィーで可視化した。
オリゴヌクレオチットを、γ［”円−ＡＴＰ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ、　５０００ Ｃｉ／ｍｍｏｌ）とポリヌクレオチドキナーゼで標識したＢｉｏｓｅｒａｃｈ７ ５００ＤＮＡ合成装置で合成し、標準技法を用いてＰＡＧＥで精製した（Ｍａｎ ｉａｔｉｓら、（１９８５）：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ ｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。
第１１ａ図および第１１ｂ図において、５゛−Ｐで標識したオリゴヌクレオチド １は、５′−ＧＡＳＴＣＣＡ、、Ｇであり、Ａｃｒ　−Ｔｌｏ　Ｌ　ｙ　５−Ｎ Ｈ，の不存在下（レーン１および４）または存在下（レーン２および５．２５ｐ ｍｏｌ　；レーン３および６．７５ｐｍｏｌ））で培養し、また５°−ＧＡＴＣ ＣＴ、、Ｇである”オリゴ−どの不存在化（レーン１から３まで）または存在化 （レーン４から６まで）で培養した。５′−Ｐで標識したオリゴ２は、同じＰＮ Ａの不存在下（レーン７）または存在下（レーン８．２５ｐｍｏｌ　；レーン９ ．７５ｐｍｏｌ）で培養し、上記において詳細に記載したようなＰＡＧＥで分析 した。
第１１ａ図に示した結果によれば、ＰＮＡでハイブリダイゼーションしたと同様 に（レーン１から３まで）ｓｓＤＮＡの遅延化が明らかであり、ＰＮＡが、標識 した相補オリゴヌクレオチド（レーン４から６まで）に対してＤＮＡオリゴヌク レオチドと競合・拮抗する能力を有していることが判る。ｄｓＤＮＡに起因する バンドの強度は、ＰＮＡ濃度を上げるに応じてより急速に増大し、泳動速度が遅 いＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドを表すバンドで置換される。レーン７から９まで は、このＰＮＡは、相補的でないＴ、。オリゴＤＮＡには影響を及ぼさないこと を示す。
第１１ｂ図においては、ＤＮＡ変成条件で行ったものであるが、ＰＮＡ−ＤＮＡ 二重らせんが未変成のままである。
Ｋ１乱旺 ムの− プラスミドＤＮＡに含有されるｄん。０−ｄＴ、。標的配列を、標準的方法に従 い（Ｍａｎｉａｔｉｓら、１９８６）　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｊ ＭＩＯ１株を用いて二つのオリゴヌクレオチド（ｄ　（ＧＡＴＣＣＡ＋ｏＧ）　 ＋　ｄ　（ＧＡＴＣＣＴ＋。
Ｇ）））をｐＵｃ１９のＢａｍＨＩ制限酵素部位にクローンすることによって構 成した。所望のプラスミド（ｐＴｌｏと称する）を得られたクローンの一つから 単離し、アルカリ性抽出法およびＣｓＣ１遠心分離法（Ｍａｎｉａｔｉｓら、１ ９８６）によって精製した。ｄＡ、。／　ｄ　Ｔ、、標的配列を含む２４８ｂｐ の３°　［”Ｐ］　−ｅｎｄ　（末端）で標識したＤＮＡフラグメントを、この ｐＴｌｏＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＰｖｕｌｌで開裂し、次にＥ、ｃｏ ｌｉＤＮＡポリメラーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）のＫｌｅ ｎｏｗフラグメントを用いてこの開裂したＤＮＡをα［”Ｐ］　−ｄＡＴＰ　（ ４０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）で標識し、２４８ｂｐＤＮＡフ ラグメントをＰＡＥＧ　（１５％アクリルアミド、０．５％ビスアクリルアミド 、ＴＢＥ緩衝液）によって精製して得た。このＤＮＡフラグメントは、ＥｃｏＲ Ｉで開裂したｐＴｉｏプラスミドをバクテリア性アルカリ性ホスファターゼ（Ｂ ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で処理し、このプラスミドＤＮＡを低 融点アガロースでのゲル電気泳動法で精製し、次いでγ［Ｐ］　ＡＴＰとポリヌ クレオチドキナーゼで標識することによりて、５°−ｅｎｄにおける［”Ｐ］標 識を付して得た。
Ｐｖｕｌｌで処理した後、２４８ｐｂＤＮＡを上記のように精製した。
Ａｃｒ’　−（Ｔａｅｇ）＋ｏ　Ｌｙｓ　ＮＨｔと２４８ｂｐＤＮＡフラグメン トとの複合体を、Ａｃｒ’　−（Ｔａｅｇ）＋。　Ｌ　ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈｚ　５０ 　ｎ　ｇを５００ｃｐｓのＰ−標識した２４８　ｂｐフラグメントと０．５μ− ｇの子牛胸腺ＤＮＡとともに、下記においてさらに詳細に述べるように、１００ μｍの２５ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ、１ｍＭＭｇＣ１ｇ、０．１ｍＭＣａＣ１，、 ｐＨ７，４中において３７℃において６０分間培養することによって形成させた 。
火１九Ｉ ｐ　いた　Δ　のプロービン （ａ）スタフィロコッカスヌクレアーゼ（第１２ｂ　レーン８から１０）。
鎖置換複合体を上記したように生成させた。この複合体を２０℃において５分間 ７５０　Ｕ／ｍｌのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）ヌク レアーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で処理し、この反応をＥ ＤＴＡを２５ｍＭまで添加することによって停止させた。このＤＮＡを２容量の エタノール−２％酢酸カリウム−で沈殿させ、８０％ホルムアミド、ＴＨＥに再 溶解させ、９０℃に加熱しく５分間）、高分解ＰＡＧＥ　（１０％アクリルアミ ド、０．３％ビスアクリルアミド、７Ｍ尿素）とオートラジオグラフィーによっ て分析した。レーン８は、ＰＮＡを含有せず、レーン９は４０ｐｍｏｌまたレー ン１０は１２０μｍｏｌのＰＮＡを含有している。ＰＮＡが含有されているので 、フットプリントの生成が認められ、この結果スタフィロコッカスヌクレアーゼ によって消化を受け易くなることおよび従ってｄｓＤＮＡから５ｓＤＮＡの置換 が増大することが判る。
（ｂ）アフィニティー光開裂（第１２因子第１２ｂ図；何れの　合もレーン１か ら３まで 複合体をＴＥ緩衝液中で生成させた。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に入れた試料に３０ ０μｍにおいて（Ｐｈｉｌｉｐｓ　ＴＬ）　２０Ｗ／１２蛍光灯、２４３Ｊｍ− ’／５）３０分間ＵＶ照射した。ＤＮＡは、上記したように沈殿させ、１Ｍピペ リジンに取り、９０℃にまで２０分間加熱した。凍結乾燥した後で、ＤＮＡは、 上記したＰＡＧＥによって分析した。もう一度、それぞれの場合において、レー ン１は、ＰＮＡは一切含有せず、レーン２および３は、それぞれ４０ｐｍｏｌと １２０μｍｏｌのＰＮＡを含有する。ＰＮＡに結合したＤＮＡ鎖（Ａ＋。鎖）は 、アクリジンエステルの位置において（第１２ａ図のレーンｌから３まで）開裂 して、新しいバンドを与えるが、またＰＮＡによって置換された鎖は（Ｔ、。鎮 ）ランダムに開裂子、フットプリントを与える。
（Ｃ）過マンガン酸カリウム（第１２Ｂ図レーン４から６まで）複合体を１００ μ、ＩのＴＥ中で生成させ、２０　ｍ　Ｍ　Ｋ　Ｍ　ｎ　Ｏ，を５μｍ添加した 。２０℃において１５秒経過後、１．５Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ７゜０．１Ｍ２ −メルカプトエタノールを添加して反応を停止させた。ＤＮＡを沈殿させ、ピペ リジンで処理して、上記した様に分析した。レーン４から６までにおいては、レ ーン１から３までと同様のＰＮＡ濃度を用いた。かくして再び、過マンガン酸塩 により置換された５ｓＤＮＡの開裂を示すフットプリントの生成を認める。
（ｄ）光フットプリンティング（第１２ａ図レーン５から６まで）複合体を１０ ０μＩＴＥにおいて生成させ、ジアゾ−結合アクリジン（０，１１１ｇ／　ｔｔ 　Ｉ）　（ＤＨＡＳＮｉｅｌｓｅｎら（１９８８）、Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓＲｅ ｓ、１６．３８７７−８８）を添加した。試料を３６５μｍ　（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＴＬ　２０Ｗ１０９Ｎ、　２２Ｊｍ−”／ｓ）で３０分間照射し、上記した様に 処理して、”アフィニティー光開裂”に供した。ＰＮＡの存在下において、（レ ーン６）このＤＮＡは、保護されておりかつ保護された領域において開裂に相当 するバンドは消滅する。
（ｅ）Ｓ、−ヌクレアーゼ（第１２ｃ図レーン１から３）複合体を５０ｍＭ酢酸 ナトリウム、２０ｍＭＮａｃｌ、０．５％グリセリン、１ｍＭＺｎＣＩａ、ｐＨ ４，５において生成させ、０．５０／ｍｌにおいてヌクレアーゼＳ、　（Ｂｏｅ ｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で２０℃において５分間処理した。反応を 停止させ、さらに上記″スタフィロコッカスヌクレアーゼ項において記載した様 に処理した。使用したＰＮＡの量は、ゼロ（レーン１から３まで）または１２０ μｍｏｌ　（レーン４から６まで）であり、レーン７がサイズの標準を示す。か くして再び、ＰＮＡで置換されたＴ１゜ＤＮＡ鎮の開裂が認められる。
爽ｍ １　０　２　Ｈおよび　３　ミスマーチに・　ハイブリダイゼーシ　ンの ＰＮＡオリゴ７−　Ｈ−Ｔ４Ｃ２ＴＣＴＣ−ＬｙｓＮＨ，を合成実験記録６によ って製造し、逆相ＨＰＬＣによって精製し、ＦＡＢ−ｍａｓｓ分光分析法によっ て同定した；実験値（理論値）　：　２７４６．８　（２４４７゜１５）。この 配列を用いたハイブリダイゼーション実験によって、実際のところ非対照である ので、配向の問題が解決される。このような実験によって、Ｔ、の温度依存性や 生成した複合体の化学量論の問題も解決される。
ＰＮＡ−オリゴ７−Ｈ−Ｔ４Ｃ２ＴＣＴＣ−ＬｙｓＮＨｍを用いたハイブリダイ ゼーション実験を以下のように行った：′−ハイブリ・・ド／　の　ＨＴｍ９ １５°−（ｄＡ）、　（ｄｃ）ｙ　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　 ７．２５５．５２　：　１２５゛〜（ｄＡ）、　（ｄＧ）ｌ　（ｄＡ）　（ｄＧ ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　９．０２６．０２　：　１３５’　−（ｄＡ）、　（ ｄＧ）、　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　５．０８８．５２　：　 １４５’　−（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）ｙ　（ｄＡ） 、７．２３８．０２　：　１５５°−（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ） 　（ｄＧ）ｊ　（ｄＡ）４９．０３１．５　−６５°−（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）、　（ｄＡ）、５．０５２．５　−６１．０ ７５°−（ｄＡ）、　（ｄＧ）（ｄＴ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄ Ｇ）　７，２３９．０　−８５°−（ｄＡ）、（ｄＧ）（ｄＴ）（ｄＡ）（ｄＧ ）（ｄＡ）（ｄＧ）９．０　＜２０−９５°−（ｄＡ）、　（ｄＧ）（ｄＴ）　 （ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　５．０５＋、５−１０５’　−（ｄ Ａ）、（ｄＧ）（ｄＴ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　７．２３１．５−１ ＋５°−（ｄＡ）ｌ　（ｄＧ）＋　（ｄＴ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　 ５．０５０．５　−１２５’　−（ｄＧ）（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄ Ｔ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）、　７．２２４．５１３５’　−（ｄＧ）（ｄＡ）　 （ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＴ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）、　９．０　＜２０１４５ ’　−（ｄＧ）（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＴ）　（ｄＧ）　（ｄＡ） 、　５．０５７．０１５５°−（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ）　（ｄＴ）　（ｄ Ｇ）、　（ｄＡ）、　７．２２５．０１６５’　−（ｄＧ）　（ｄＡ）　（ｄＧ ）　（ｄＴ）　（ｄＧ）、　（ｄＡ）、　５．０３９．５５２．０ ！Ｉ＝ＵＶ−混合曲線によって決定された化学量論−＝決定せず これらの結果から、真に混合された配列が明確な輪郭の融解曲線をもたらしたこ とが明らかとなった。ＰＮＡ−オリゴマーは実際に両方の配向において結合する ことが可能である（第１列と第４列を比較のこと）。尤もＮ−末端１５゛−配向 に対する優先性が認められる。ｔまたはＣに対向する単一ミスマツチを導入した 結果、ｐＨ７，２において１６℃以上もＴゆが低下することになった。ｐＨ５， ０においては、このＴヨ値は、２７℃以上も低下した。このことは、極めて高度 の配列選択性があることを示している。
上記したように、Ｔ１値には極めて強度のｐＨ依存性が認められ、Ｈｏｏｇｓｔ ｅｎの塩基対合がハイブリッドを形成する上で重要であることを示している。従 って、化学量論が２：１であることが判明したことは、驚くに当たらない。
配列に対称性がないことおよびミスマツチが存在した場合Ｔ、が極めて大きく低 下することは、相補的ＤＮＡに結合した場合Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ鎖および Ｈｏｏｇｓｔｅｎ鎖が平行することを示している。このことは、双方の配向・方 向、即ち５゛／Ｎ−末端および３’／Ｎ−末端についても当てはまるのである。
ｍ四 ハイブリダイゼーシ　ンにお番る　ｌ ＨＴ８ＧＴ４　ＬｙｓＮＨ，を用いたデオキシオリゴヌクレオチドに対するハイ ブリダイゼーション実験結果を以下に示す：デオキシオリゴヌクレオチド　Ｔ １５°−（ｄＡ）５　（ｄＡ）（ｄＡ）４−３°　５５．０２５°−（ｄＡ）５ 　（ｄＧ）（ｄＡ）４−３°　４７．０３　５’　−（ｄＡ）５　（ｄＣ）（ｄ Ａ）４−３°　５６．５４５°−（ｄＡ）　５　（ｄＴ）　（ｄＡ）　４−３’ 　４６．５５　５’　−（ｄＡ）　４　（ｄＧ）　（ｄＡ）　５−３’　４８． ５６　５’　−（ｄＡ）　４　（ｄＣ）　（ｄＡ）　５−３’　５５．５７　５ ’−（ｄＡ）　４　（ｄＴ）　（ｄＡ）　５−３’　４７．０第１．３および６ 列を第２．４．５および７列を比較すると明らかなように、Ｇは、このような態 様においてＤＮＡ−鎖におけるＣ／ＡとＧ／Ｔとを識別することが可能であり、 即ち配列識別が認められる。第３列における複合体は更には、ＵＶ−混合曲線か ら２ＰＮＡ　：ｌＤＮＡ複合体であることが決定された。
実ｍ された　いたハイブリダイゼーションにおする竺且ユ 延長された主鎖（β−アラニン修飾）を有する単一ユニットのＰＮＡ−オリゴマ ーに対するハイブリダイゼーションデータは、以下の通りである： 巳すＬ−一一一一一一一一一一一一因ソし一一一一一一一−ＬＨ−Ｔ、ｏ　−Ｌ ｙｓＮＨｚ　（ｄＡ）＋。　７３℃Ｈ−Ｔ４（ｄＴ）　Ｔｓ　ＬｙｓＮＨｔ　（ ｄＡ）＋。　５７℃Ｈ−Ｔ、（ｄＴ）Ｔ、−ＬｙｓＮＨｔ　（ｄＡ）ｓ　（ｄＧ ）（ｄＡ）ｓ　４７ｍｇ　−Ｔ、　（ｄＴ）Ｔｓ　ＬｙｓＮＨ−（ｄＡ）＝　（ ｄＣ）（ｄＡ）ｓ　４９℃Ｈ−Ｔ、（ｄＴ）Ｔｅ　ＬｙｓＮＨ，（ｄＡ）ｎ　（ ｄＴ）（ｄＡ）ｓ　４７℃融点が低下するにつれて、これらのデータから、塩基 特異的認識が保持されていることが明らかである。
Ｔｙｒ　ＰＮＡ　Ｔｌｏ　Ｌｙｓ　ＮＨ＊の５μｇを１００ｍＭりん酸ナトリウ ム、ｐＨ７，０の４０μｍ中に溶解し、１ｍＣ１のＮ　ａ”　Ｉと２μｍのクラ ミンーＴ　（ＣＨ，ＣＮ中５０　ｍ　Ｍ　）を添加する。この溶液を２０℃に１ ０分間放置し、次いで０．５　＋　５ｃｍのセファデックスＧＩＯカラムに通す 。放射能を含む最初の二つのフラクシヨン（それぞれ１００　ｔｔ　Ｉ）を集め 、ＨＰＬＣｒ精製する：即ち、１％のｃ４ＦＣＯＯＨ水溶液中０−６０％Ｃ礼Ｃ Ｎ勾配を用いた逆相Ｃ−１８である。１″Ｉ　−ＰＮＡは、ＰＮＡピークの直後 に溶出する。溶媒は減圧下で除去する。
夫五九録 二　ＤＮＡ　−Ａ　ＡＧ　ＡＧに・　るＰＮＡｓ　−Ｔ　Ｔ　ＣＴＣのム　２０ 表示したプラスミドの二本鎖、Ｐで標識したＥｃｏＲＩ　−ＰｖｕＩＩフラグメ ント（ＥｃｏＲ１部位の３°−末端で標識した大きいフラグメント）　２００ｃ ｐｓ、キャリアー子牛胸腺ＤＮＡ０．５　μｇおよび１ｏｏμｌ緩衝液（２００ ｍＭＮａＣ１，５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４，５，１ｍＭＺｎ５Ｏ，）中の 表示したＰＮＡ３００ｎｇから成る混合物を３７℃において１２０分間培養した 。ヌクレアーゼＳｌを５０単位を加え、２０℃において５分間培養した。０．５ ＭＥＤＴＡ３μＩを添加することによって反応を停止させ、エタノール中２％の 酢酸カリウム液２５０μｌを加えることによってＤＮＡを沈殿させた。このＤＮ Ａを１０％ポリアクリルアミド配列決定ゲルにおける電気泳動法によって分析し 、放射能標識したＤＮＡバンドをオートラジオグラフィーで可視化した。得られ た完全なバンドパターンから、鎖置換によって一本鎖ＤＮＡが生成していること が明らかとなっているが、このものは、ヌクレアーゼによって攻撃され、より短 鎖のオリゴヌクレオチドの混合物が得られる。それぞれの場合に使用した三種の ＰＮＡについて得られた結果を比較した結果、得られるそれぞれの標的に対する 選択性があることが明らかとなっている。
ｐＵｃ１９に適当なオリゴヌクレオチドをクローンすることによって標的プラス ミドを調製した。標的Ａ１゜：ＢａｍＨ１部位（ｐＴｌｏと称するプラスミド） にクローンしたオリゴヌクレオチドＧＡＴＣＣＡ、。
Ｇ　＆　Ｇ　Ａ　Ｔ　ＣＣＴｏｏ　Ｇ　０標的Ａｓ　Ｇ　Ａ４：　Ｓ　ａ　Ｉ　 １部位（プラスミドｐ７９Ｃ）にクローンしたオリゴヌクレオチドＴ　ＣＧ　Ａ 　ＣＴ４　ＣＴ３　Ｇ　＆　Ｔ　ＣＧ　Ａ　ＣＡｓＧΔ４Ｇ６標的Ａ４ＧＡ、Ｇ Ａ４　：　Ｐｓｔ１ｓ位（プラスミドｐＴ８Ｃ２）にクローンＩ、タオ’）ゴヌ クレオチドＧＡ２ＧＡ２ＧＡ、ＴＧＣＡ＆ＧＴ、ＣＴ２ＣＴ２ＣＴＧＣＡ。
ゲル中におけるこれらの標的の位置は、左方へのバーによって示される。Ａ／Ｇ は、標的ＰＩＯのへ十Ｇ配列ラダーである。
火ｌ九Ｂ １　、Ｆ’ノＰＮＡｊ、：ヨル２３ プラスミドｐＴＴ１０の２μｇを２０μｍのＴＥ緩衝液（１０ｍＭＴｒｉｓ−Ｈ ＣＩ、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７，４）中のｐＮＡ　’Ｌｏの表示量と混合し、３ ７℃において１２０分間培養した。２μｌｘ濃縮緩衝液（１０ｍＭＴｒｉｓ−Ｈ ＣＬ　ｐＨ７，５，１０ｍ　Ｍ　、　Ｍ　ｇ　Ｃ＋２．５０　ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　 ＣＩ、１　ｍ　Ｍ　Ｄ　Ｔ　Ｔ　）およびＰｖｕｌＩ　（２単位）とＢａｍＨＩ 　（２単位）を添加し、培養を６０分間継続した。このＤＮＡを５％ポリアクリ ルアミド中でのゲル電気泳動法によって分析し、このＤＮＡを臭化エチジウム染 色法によって可視化した。
有意比率のＰＮＡの存在下では（０，２，０，６）、酵素Ｂ　ａ　ｍ　ＨＩの開 裂パターンは、変化せず、この酵素は開裂部位に添ってＰＮＡの存在によって抑 制阻害されることが判る。
支１九録 ＰＮＡ　−Ｔ　−ｄｓＤＮＡ盲　Δ　≦　の　螢　、、２１　・・ｐＴｌｏの二 本鎖、３２Ｐで標識したＥｃｏＲＩ　−ＰｖｕＩＩフラグメント（ＥｃｏＲ１部 位の３”−末端で標識した大きいフラグメント）　２００ｃｐｓ、キャリアー子 牛胸腺ＤＮＡ０．５　μｇおよび１００μｌ緩衝液（２００ｍＭＮａＣ１，５０ ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４，５，１ｍＭＺｎ５Ｏ４）中の表示したＰＮＡ−Ｔ 、、−ＬｙｓＮＨ２３００ｎｇから成る混合物を３７℃において１２０分間培養 した。表示した時間において、ヌクレアーゼＳ１を５０単位を７つの試料のそれ ぞれに加え、２０℃において５分間培養した。鎖置換によって生成した一本鎖Ｄ ＮＡをこのヌクレアーゼによって消化した。エタノール中２％の酢酸カリウム液 ２５０μｍを加えることによってＤＮＡを沈殿させ、１０％ポリアクリルアミド 配列決定ゲルにおける電気泳動法によって分析した。鎖置換複合体の量を、標的 配列におけるＳｌ−配列の強度をオートラジオグラフをデンシトメーターで走査 して測定し、これに基づいて任意の単位で算定した。時間の経過とともにこの複 合体の生成が認められる。
火１１目］ ＰＮＡ　−ｄｓＤＮＡ　Δ　の　２２ ２００ｃｐｓの″Ｐ−ｐＴｔｏフラグメント（実施例６５旧おけると同様のもの ）、子牛胸腺ＤＮＡ０．５μｇおよび３００μｇの所望のＰＮＡ（Ｔｌｏ　Ｌｙ ｓＮＨ２、Ｔ、−ＬＹＳＮＨ，またはＴ、−ＬＹＳＮＨ，）とから成る混合物を 、１００μの２００ｍＭＮａＣ１，５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４゜５、Ｉ　 ｍ　Ｍ　Ｚ　ｎ　Ｓ　Ｏｓ中中子７℃おいて６０分間培養した。オリゴヌクレオ チドＧＡＴＣＣＡ、、Ｇを２μｇを加え、標識オリゴヌクレオチドに対するＰＮ Ａと拮抗させ、各試料を表示した温度において１ｏ分間加熱し、氷で１０分間冷 却し、次いで２０℃に加温した。ｓｌヌクレアーゼを５０単位加え、単一ヌクレ オチドとして放出遊離された放射能の量を測定した。
Ｔ１゜ＤＮＡ二重らせんに対する予期Ｔｍ値は、２０’Ｃであり、またＴ、につ いては１６℃であり、Ｔ６については１２℃であった。相当するＰＮＡ／ＤＮＡ 値は、Ｔ１０〉７０℃であり、Ｔ８については６０℃であり、またＴ＠について は３７℃であった。
良敷九［ ぶちし主ｌ定囮 ＰＮＡ−セファロースを製造するために、臭化ジンアンで活性化したセファ０− ス（Ｓｉｇｍａ）１０ｍｇを１０μｇのＰＮＡとともに５０ｍＭりん酸ナトリウ ム、ｐＨ７，５において３７℃で６０分間培養した。このセファロースは、遠心 分離によって単離し、５０ｍＭりん酸ナトリウム、ｐＨ７，５の２５０μｍでミ ロ洗浄した。
実施例６８ １００μのＴＥ中１ｍｇのＰＮＡ−セファロース（実施例６７）を”Ｐで標識し たオリゴヌクレオチドの５０ｃｐｓ　（−１０１００ｎと共に２０℃において１ ６時間培養した。このセファロースを遠心分離して淡離ｓｉ、５００μｌのＴＥ で二回洗浄した。結合したオリゴヌクレオチドを、”Ｃｅｒｅｎｋｏｖ”方法を 用いて液体シンチレーションカウンティングによってめた。三種の異なるＰＮＡ −セファロースと４種のオリゴ−ＤＮＡについて、得られた結果を下記の表に示 す。この固定化したＰＮＡによる捕捉の特異性が明確にめられるが、なお塩基対 ミスマツチは一つだけ許容される。
ＰＮＡ−セフ　ロースへの”Ｐ−オリゴの　ム・　％固体支持体（ＣＮＢｒ−セ ファロース）でのＰＮＡＴＩＯＴ９ＣＴ８Ｃ２なし ＮＡ ＡＩＯ５１４５１５８ Ａ９Ｇ　１１　５０　５２　８ Ａ８Ｇ２　１１　４５　４２　４ ｍ１ｘ　１１　１３　１４　１５ この表において、ＡＩＯは、５’　−ＧＡＴＣＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧであり 、Ａ９Ｇは、５’−ＴＣＧＡＣＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧであり、Ａ３Ｇ２は、５ °−ＧＡＡＧＡＡＧ ＡＡＡＣＴＧＡＣであり、またｍｉｘは、５′−ＧＡＴＣＡＣＧＣＧＴＡＴＡＣ ＧＣＧＴある。ＰＮＡ類は、以下の通り：Ｔ１０＋Ｈ−Ｔ、。ＬｙｓＮＨｚ、Ｔ ９Ｃ：　ＨＴＢ　ＣＴ＜　Ｌ　ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈｚ、Ｔ８Ｃ２：　Ｈ−ＴＩＣ”Ｌ ＣＴ４−　ＬｙｓＮＨｔ、なし：カウンティングによって測定し、セファロース を再び５００μｍにとら曲線間における変位は、ミスマツチが一つ生じた場合オ リゴヌクレオチド結合安定性が低下したことを示す。
夫度九匹 ＰＮＡによる　の　・　２６ １００ｎＨのプラスミドＤＮＡ　（制限酵素ＰｖｕＩＩ　（以下を参照）で開裂 した）と１０ｍＭＴｒｉｓ　−ＨＣＩ、１ｍＭＥＤＴＡＳｐＨ７，４の１５μｍ 中での１１００ｎのＰＮＡとを３７℃において６０分間培養した。次いで、４μ １５ｘ濃縮緩衝液（０，２ＭＴｒｉｓ　−ＨＣＩ　（ｐＨ８，０）、４０ｍＭＭ ｇＣｌ＊、１０ｍＭスペルミジン、１２５ｍＭＮａＣＩ）を１μｍのＮＴＰ　− ｍｉｘ　（１０ｍＭＡＴＰ１１０ｍＭ　ＣＴＰ、１０ｍＭ　ＧＴＰ、１ｍＭ　Ｕ ＴＰ、０．１ｔｔｃ：／ｕｌ″Ｐ−ＵＴＰ、５ｍＭ　ＤＴＴ、２μｇ／ｍｌ　ｔ ＲＮＡ、１μＧ／ｍｌヘパリン）および３単位のＲＮＡポリメラーゼと混合した 。培養を３７℃において１０分間継続した。このＲＮＡを一２０℃において９６ ％エタノール中の２％酢酸カリウム液６０μｍを添加して沈殿させ、８％ポリア クリルアミド配列決定ゲルにおける電気泳動法によって分析した。ＲＮＡ転写物 をオートラジオグラフィーで可視化した。
使用したプラスミドは以下の通りであった：レーン１から５まで；ｐＡｌｏＫｓ 　（Ａ＋。標的は、転写された鎖の上に位置する）。レーン６から１０まで：ｐ Ｔ１０Ｋｓ　（ん。標的は、転写されていない鎖の上に位置する）。このプラス ミドは、実験に先だって以下の制限酵素で処理した：レーン１，４．６および９ ：ハ＋ｕｌＩ　；レーン２．５．７および１０：Ｘｈａｌ；レーン３および８　 ：　Ｂａｍ１ｌ。レーン４．５．９および１０の試料は、ＰＮＡを含有していた が、その他は、含有していなかった。ＰＮＡＴ、、をプラスミドの転写された鎖 に結合した場合、ＲＮＡの転写は、ＰＮＡ結合部位において阻止されることが、 ゲルから認めることが出来る。このＰＮＡをプラスミドの転写されていない鎖に 結合すると、転写は阻止されないのである。
爽１乱■ アフ　ニティＰＮＡ−セフ　ロース　２７）１００μｌのＴＥ中のＰＮＡ　−Ｔ 、。セファロース（実施例６７を参照）１ｍｇを以下のり一５′−末端標識した オリゴヌクレオチドの”　５０ｃｐｓと共に２０℃において１６時間培養した： １：５°−ＧＡＴ　ＣＣＧ　ＧＣＡ　ＡＡＴ　ＣＧＧ　ＣＡＡ　ＴＡＣＧＧＣＡ ＴＡ　ＡＣＧ　ＧＣＴ　ＡＡＡ　ＣＧＴ　ＣＴＴ　ＴＡＣＧＧＣＴＴＡＴＣＧ　 ＧＣＴ　ＡＴＴ　ＣＧＧ　ＣＡＴ　ＴＴＣＧＧＣＡＡＴ　ＴＣＧ。
２：５’　−ＧＡＴ　ＣＣＧ　ＧＣＴ　ＴΔＡ　ＣＧＧ　ＣＡＡ　ＴＴＣＧＣＴ ＴＡＴ　ＡＣＧ　ＧＣＡ　ＴＡＴ　ＣＧＧ　ＣＴＡ　ＡＴＣＧＧＣＡＴＴＡＣＧ 　ＧＣＴ　ＴＴＴ　ＣＧＧ　Ｇ。
３：５°−ＧＡＣＡＡＡ　ＣＡＴ　ＡＣＡ　ＡＴＴ　ＴＣＡ　ＡＣＡ　ＧＡＡＣ ＣＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　Ａ。
４：５″−ＡＣＴ　ＧＡＣＴＡＣＣＴＡ　ＧＧＴ　ＴＴＡ　ＣＣＧ　ＴＧＣＣＡ Ｇ　ＴＣＡ ５：５’　−ＧＡＡ　ＡＣＧ　ＧＡＴ　ＡＧＣＴＧＣＡこのセファロースを遠心 分離して単離し、ＴＥでミロ洗浄した。
オリゴヌクレオチドを次に温度を上げつつ５００μｌのＴＥで洗浄し幅スクリー ン）で検出した。結果を第２６図に示す。
レーン１：セファアデックスに結合していないオリゴヌクレオチド レーン２；４０℃で洗浄除去したオリゴヌクレオチドレーン３：６０℃で洗浄除 去したオリゴヌクレオチドレーン４：８０℃で洗浄除去したオリゴヌクレオチド プラスミド３のみが、このＰＮＡに相補的である。８０℃までの一つのオリゴヌ クレオチドを抽出出来ることが証明される。
使用したプラスミドは、以下の通りであつＩこ：レーン１から３まで：１）ＴＩ 。＋　ＨａｅｌＩＩレーン４から６まで：　ｐＴ＋ｏ　＋Ｈｉｎｆｌレーン７か ら９まで：ｐＴｌ。−ニ１■。
それぞれの試料中のＰＮＡ　−Ｔ、。−Ｔｙｒの全量は、以下の通りであった： レーン１．４および？ニー１０ｎｇ； レーン２．５および８　：　２５ｎｇ　；レーン３．６および９　：　２５０ｎ ｇ　；臭化エチジウムゲル（ａ）は、生成したＤＮＡフラグメント（ＤＮＡ−Ｐ ＮＡハイブリッドを含む）の大きさを示す。オートラジオグラフ（ｂ）は、ゲル （ａ）中の何れのバンドがＰＮＡを含有しているかを示す。鎖置換複合体の存在 は、レーンｌにおいて認めることが出来るが、レーン２および３において冷ＰＮ Ａの比率を増大させることによってこのバンドの強度に及ぼす影響を認めること が出来る。同様の結果がレーン４から６までおよびレーン７から９までにおいて 他の二つのプラスミドのそれぞれについて認められる。それぞれの場合における ＰＮＡ−ＤＮＡバンドの位置は、プラスミドを同定するために用いられ、またそ の強度は、存在するプラスミドの量を定量化するために用いることが出来る。
当業者は、本発明の好ましい実施態様について多くの変更および修正を行い得る ことおよびかかる変更および修正は、本発明の精神から逸脱することなく行い得 ることを理解するであろう。従って、添付する請求の範囲は、本発明の真の精神 および範囲に含まれる全ての等価の変更を包含することが意図される。
ジアゾアクリジン ５　’　−ＧＦＩＴＣＣＦ１１’ｌｆ’１Ｆｌｆ’１ＦＩＦＩＦＩＦＩＦＩＧＧ ＦＩＴＣＦＩＧ　ｌ。
ＦＩＧ、　５ ↓ ＭＩＮＵＴＥＳ ＦＩＧ　９ ＭＩＮＵＴＥＳ ＦＩＧ、　７０ ＦＩＧ、　７１ａ ３２Ｐ−ｏｌｉｇｏ　ｔ　ｔ　ｔ　１　ｔ　１　２　２　２ｏ１ｉｇｏ　２　“ 　−−＋＋＋−” ｐＮＡ４　−　＋　＋＋　−＋　＋＋　−＋　＋＋３２Ｐ−ｏｌｉｇｏ　１　ｔ 　ｔ　１　１　１　２　２　２ｏ１ｉｇｏ　２　°　−−＋−１−＋−−。
ＰＮＡ−１°　＋　＋＋−＋　＋＋−＋＋＋ＦＩＧ、　７２ａ ＦＩＧ、　１２ｂ ＦＩＧ、１２ｃ ＦＩＧ、　７３ ＦＩＧ、　７５ アミンエチルグリシン　ベータ　アラニンｐ−％　＼ ＦＩＧ、　７９ ＦＩＧ、　２０ ＰＮＡ　１：　Ｔ１０　ＰＮＡ　２：　’ｒ、ｃ’ｒ４ＰＮＡ　３：　ＴｚｃＴ Ｚｃ’ｒ４解離屋度 ＦＩＧ　２２ ＰＮＡ／ＤＮＡ　０　０．００６０．０２０．０６０．２０．６５”−−−−− −ＧＧＡＴＣＣＧＧＡＴＣＣ−−−−−−−３”−−−−−−ＣＣＴＡＧＧＴＴ ＴＴＴＴＴ’ｒＴＴＣＣＴＡＧＧ−−−−一−−［Ｔ−ＤＮＡ１０１ｉｇｏ　Ｏ ０，３１３１０３０１００３００ＰＮＡ　−−−＋　＋　−−−＋　＋ ｒ’ＸＢＰＸＰＸＢＰＸ ［ＩＱｍ　ｌ−１１Ｘｂａ　Ｉ　Ｐｖｕ　ＩＩフロントページの続き （５１月旺ｃｉ、　ｓ　識別記号　庁内整理番号ＣＯ７Ｋ　７／１０　８３１８ −４Ｈ （３１）優先権主張番号　０５１０／９２（３２）優先臼　１９９２年４月１５ 日（３３）優先権主張国　デンマーク（ＤＫ）Ｌ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＰ、ＢＪ、 ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ）、ＡＴ 、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＨ，Ｃ３，ＤＥ。
ＤＫ、　ＥＳ、ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ、　ＫＲ，Ｌ・　Ｋ、　Ｌ Ｕ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　ＮＯ，ＰＬ、ＲＯ、ＲＵ、ＳＤ、ＳＥ 、ＵＳ （７１）出願人　ベルク、ロルフ・ヘンリクデンマーク国、２０００　フレデリ クスベルク、ランゲラントスベイ　２０番べ一１３テーバ− ＦＩ （７２）発明者　ブカルト、オーレ デンマーク国、３５００フエルレーセ、センダーガルトスベイ　７３番 （７２）発明者　ニゲホルム、ミカエルデンマーク国、２０００　フレデリクス ベルク、シントシュビレベイ　５番、３　テーパー （７２）発明者　ニールセン、ピータ−・アイギルデンマーク国、２９８０　コ ッケダール、ヒョルテベンゲト　５０９番 （７２）発明者　ベルク、ロルフ・ヘンリクデンマーク国、２０００　フレデリ クスベルク、ランゲラントスベイ　２０番ベー、３テーハ−

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．一つまたはそれ以上の化学的または微生物的個体単位についてその捕捉、認 識、検出、同定または定量化を行うために使用する核酸類縁体であって、かかる 類縁体が以下であるもの：即ち、（ａ）主鎖に沿ったそれぞれ空間を置いた異な る位置において複数のリガンドを有するポリアミド主鎖から構成されるペプチド 核酸（ＰＮＡ）において、前記リガンドがそれぞれ独立して天然の核酸塩基、非 天然の核酸塩基または核酸塩基結合基であり、前記リガンドは各々前記主鎖の窒 素原子に直接または間接に結合せしめられ、かつ前記リガンドが４つから８つま での介在する原子によって前記主鎖のなかで相互に分離された窒素原子を有する ものである、前記ペプチド核酸（ＰＮＡ）、 （ｂ）核酸類縁体であって、相補的配列の核酸とハイブリッド形成して、前記類 縁体に相当する従来公知のデオキシリボヌクレオチドと前記核酸との間で形成さ れたハイブリッドよりも熱による変性に対する安定性がより高いハイブリッドを 形成する能力を有する前記核酸類縁体；または （ｃ）核酸類縁体であって、一本鎖が前記縁体に相補的である配列を有する二重 鎖核酸とハイブリッド形成して、かくして前記一本鎖からもう一方の鎖を置換せ しめる能力を有する前記核酸類縁体。 ２．以下の一般式を有する、請求の範囲第１項において請求された核酸類縁体： ▲数式、化学式、表等があります▼ 但し上式において： ｎは、少なくとも２である、 Ｌ１−Ｌｎのそれぞれは独立して、水素、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルカノ イル、天然の核酸塩基類、非天然の核酸塩基類、芳香族原子部、ＤＮＡ挿入基、 核酸塩基結合基およびリポータリガンドから構成される群から選択されるが、Ｌ １−Ｌｎの内の少なくとも一つは、天然の核酸塩基、非天然の核酸塩基、ＤＮＡ 挿入基または核酸塩基結合基である； Ａ１−Ａｎのそれぞれは、一重結合、メチレン基または式（ＩＩａ）または式で 表される基である： ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼但 し上式において： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ３、ＣＨ２またはＣ（ＣＨ３）２である；Ｙは、一重 結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ４である；　ｐおよびｑのそれぞれは、１から５までの 整数であり、ｐ＋ｑの和は、１０以下である； ｒおよびｓのそれぞれは、ゼロまたは１から５までの整数であり、ｒ＋ｓの和は 、１０以下である； Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシもしくはアルコキシもし くはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ 、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンから構成される群から選択 される；またＲ３およびＲ４のそれぞれは独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アル キル、ヒドロキシもしくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換された（Ｃ１ −Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオおよびアミノから構 成される群から選択される；Ｂ１−Ｂｎのそれぞれは、ＮまたはＲ３Ｎ＋であり 、ここにおいてＲ３は上記において定義された通りである； Ｃ１−Ｃｎのそれぞれは、ＣＲ６Ｒ７、ＣＨＲ６ＣＨＲ７またはＣＲ６Ｒ７ＣＨ ２であり、ここにおいてＲ５は水素でありまたＲ７は、天然のアルファアミノ酸 の側鎖から構成される群から選択され、またはＲ６およびＲ７は独立して、水素 、（Ｃ２−Ｃ６）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキ シ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ＮＲ３Ｒ４およ びＳＲ５から構成される群から選択されるが、ここにおいてＲ３およびＲ４は、 上記において定義された通りであり、Ｒ５は水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒ ドロキシ、アルコキシもしくはアルキルチオで置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキ ルであり、またはＲ６およびＲ７とは一緒になって、脂環系または異項環系を形 成する； Ｄ１−Ｄｎのそれぞれは、ＣＲ６Ｒ７、ＣＨ２Ｒ６ＣＨＲ７またはＣＨＲ６ＣＨ Ｒ７であり、ここにおいてＲ６およびＲ７は、上記において定義された通りであ る； Ｇ１−Ｇｎ−１はそれぞれ、いずれかの方向での−ＣＯＮＲ３−、ＣＳＮＲ３− 、−ＳＯＮＲ３−または−ＳＯ２ＮＲ３−でって、なおここにおいてＲ３は、上 記において定義した通りである；Ｑは、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＮＲ′Ｒ′′、−Ｓ Ｏ２Ｈもしくは−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ′′または−ＣＯ２Ｈもしくは−ＳＯ３Ｈの活 性化誘導体である；また１は、−ＮＨＲ′′′Ｒ′′′′−または−ＮＲ′′′ Ｃ（Ｏ）Ｒ′′′′であり、ここにおいてＲ′、Ｒ′′、Ｒ′′′およびＲ′′ ′′は独立して、水素、アルキル、アミノ保護基、リポータリガンド、挿入基、 キレート化剤、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、オリゴヌ クレオチドならびに可溶および不溶のポリマーである。 ３．以下の一般式を有する、請求の範囲第２項において請求されたペプチド核酸 ： ▲数式、化学式、表等があります▼ なお本式において： Ｌはそれぞれ独立して、水素、フェニル、例えば一つ、二つまたは三つのリング の異項環、天然の核酸塩基および非天然の核酸塩基から成る群から選択される； Ｒｒはそれぞれ独立して、水素および天然のアルファアミノ酸の側鎖から成る群 から選択される； ｎは、１から６０までの整数である； ｋ、１およびｍのそれぞれは独立して、ゼロまたは１から５までの整数である； 好ましくは、ｋとｍとの和は１または２であり、最も好ましくは１である； Ｒｎは、ＯＨ、ＮＨ２または−ＮＨＬｙｓＮＨ２である；およびＲ１はＨまたは ＣＯＣＨ３である。 ４．以下の一般式を有する、請求の範囲第３項において請求された核酸類縁体： ▲数式、化学式、表等があります▼なお本式において：Ｌはそれぞれ独立して、 核酸塩基であるチミン、アデニン、シトシン、グアニンおよびウラシルから成る 群から選択される；Ｒｒはそれぞれ、水素である；および ｎは、１から３０までの整数である。 ５、検出可能な標識を導入したまたは検出可能な標識に接合された、請求の範囲 第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された核酸類縁体。 ６．前記標識が、放射性同位元素標識、酵素標識、ビオチン、発蛍光団、化学発 光標識、抗原、抗体またはスピン標識である、請求の範囲第５項において請求さ れた標識された核酸類縁体。 ７．一つまたはそれ以上の化学的または微生物的個体単位についてその捕捉、認 識、検出、同定または定量化を行うために、請求の範囲第１項から第６項までの 内の何れか一項において定義された核酸類縁体を使用すること。 ８．核酸を捕捉するに際して、固体支持体に固定化した、請求の範囲第１項から 第６項までの内の何れか一項において請求された核酸類縁体にハイブリッド形成 条件下において前記核酸を接触させることから成る、核酸を捕捉する方法。 ９．捕捉された前記核酸が、前記固定化された核酸類縁体に結合された状態にあ る核酸認識薬剤で処理することによって検出され、認識され、定量化されまたは 同定される、請求の範囲第８項において請求された方法。 １０．捕捉された該核酸が、前記固定化された核酸類縁体にハイブリッドされた 第一の領域およびそのようにハイブリッドされて以いない第二の領域であって、 該第二の領域の少なくとも一部にハイブリッドする様に適合せしめられている標 識核酸または核酸類縁体で処理された第二の領域を有しており、かつ前記標識が 検出される、請求の範囲第９項において請求された方法。 １１．前記固定化された核酸類縁体が、加水分解してｍＲＮＡのポリＡ尾部を生 じ、その結果前記ｍＲＮＡを捕捉することが可能である逐次リガンドから成る、 請求の範囲第９項において請求された、ｍＲＮＡを捕捉する方法。 １２．ｚｅｎｋｉ逐次リガンドがチミンである、請求の範囲第１１項において請 求された方法。 １３．−旦捕捉された前記核酸か、前記固定化された核酸類縁体と捕捉された核 酸とを脱ハイブリッド化する条件に供することによって該固定化核酸類縁体から 開放・放出される、請求の範囲第８項、１１項また第１２項の内の何れか一項に おいて請求された方法。 １４．固体支持体に固定化された、請求の範囲第１項から第６項までの内の何れ か一項において請求された核酸類縁体。 １５．アフィニティ捕捉カラムに導入された、請求の範囲第１４項において請求 された固定化された核酸類縁体。 １６．ハイブリッド化する条件下においてハイブリッドするに充分に相補的な配 列を有する、請求の範囲第５項または第６項で請求された標識した核酸類縁体に 標的をハイブリッドさせ、かつ前記標的にハイブリッドさせた該核酸類縁体の前 記標識を検出するかまたは定量化することから成る、標的核酸を認識、検出また は定量化する方法。 １７．前記標的核酸が前記ハイブリダイゼーションに先だって支持体に固定化さ れる、請求の範囲第１６項において請求された方法。 １８．前記標的核酸が、前記支持体に固定化されるに際して、その第一の領域を 、捕捉された核酸または核酸類縁体であって、ハイブリッドするに充分に前記第 一の領域に相補的である配列を有しかつそれ自体が前記支持体に固定化されてい る該捕捉核酸または核酸類縁体にハイブリダイゼーションさせ、かつ前記標識さ れた核酸類縁体が前記標的の第二の領域にハイブリッドする、請求の範囲第１７ 項において請求された方法。 １９．核酸二重らせんから一本鎖を置換する方法において、前記二重らせんに対 して、前記核酸のもう一方の鎖に対するアフィニティーが前記一本鎖を置換する ことが可能である程に充分であるような核酸類類縁体をハイブリッドさせること から成る前記置換方法。 ２０．二本鎖標的核酸を検出し、同定しまたは定量化する方法において、置換さ れない鎖が置換核酸類縁体に相補的な配列を有する二本鎖標的から一本鎖を置換 することができる置換核酸類縁体を該標的核酸にハイブリッドさせるに際して、 前記置換核酸類縁体の配列が、自らにハイブリッドするに充分に相補的あって、 その結果、一本鎖の形態において前記標的の一本鎖を置換するものであって、か つその後に前記置換された一本鎖を存在を検出するかまたは定量化することから 成る、前記検出、同定または定量化する方法。 ２１．置換された鎖をフラグメントに切断しかつ前記フラグメントの存在を検出 する、請求の範囲第２０項において請求された方法。 ２２．前記置換された鎖がヌクレアーゼの攻撃によって切断される、請求の範囲 第２１項において請求された方法。 ２３．請求の範囲５項または第６項ににおいて請求された少なくとも一つの標識 された核酸類縁体および前記標識された核酸類縁体を検出する少なくとも一つの 検出試薬とから構成される、診断方法において使用されるキット。 ２４．請求の範囲第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された核 酸類縁体を更に固体支持体に固定化されて成る、請求の範囲第２３項において請 求されたキット。 ２５．請求の範囲第１項から第４項までの内の何れか一項において請求された固 定化された核酸類縁体と、前記核酸類縁体によって捕捉された核酸の存在を検出 する少なくとも一つの核酸認識薬剤とを組合せて成るキット。 ２６．前記核酸認識薬剤が、標識された核酸または標識された核酸類縁体である 、請求の範囲第２５項において請求されたキット。
JP51013992A 1991-05-24 1992-05-22 診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用方法 Expired - Lifetime JP3982828B2 (ja)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK0986/91 1991-05-24
DK0987/91 1991-05-24
DK98791A DK98791D0 (da) 1991-05-24 1991-05-24 Fremgangsmaade til sekvensspecifik genkendelse af et dobbeltstrenget polynucleotid
DK98691A DK98691D0 (da) 1991-05-24 1991-05-24 Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf
DK92510A DK51092D0 (da) 1991-05-24 1992-04-15 Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf
DK0510/92 1992-04-15
PCT/EP1992/001220 WO1992020703A1 (en) 1991-05-24 1992-05-22 The use of nucleic acid analogues in diagnostics and analytical procedures

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2003015384A Division JP2003235590A (ja) 1991-05-24 2003-01-23 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2007147536A Division JP2007306926A (ja) 1991-05-24 2007-06-01 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH06509063A true JPH06509063A (ja) 1994-10-13
JP3982828B2 JP3982828B2 (ja) 2007-09-26

Family

ID=27220741

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP51013992A Expired - Lifetime JP3982828B2 (ja) 1991-05-24 1992-05-22 診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用方法
JP4510434A Expired - Fee Related JP2758988B2 (ja) 1991-05-24 1992-05-22 ペプチド核酸
JP2003015384A Withdrawn JP2003235590A (ja) 1991-05-24 2003-01-23 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2007147536A Withdrawn JP2007306926A (ja) 1991-05-24 2007-06-01 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2008060342A Withdrawn JP2008253251A (ja) 1991-05-24 2008-03-10 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2008258890A Withdrawn JP2009069158A (ja) 1991-05-24 2008-10-03 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP4510434A Expired - Fee Related JP2758988B2 (ja) 1991-05-24 1992-05-22 ペプチド核酸
JP2003015384A Withdrawn JP2003235590A (ja) 1991-05-24 2003-01-23 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2007147536A Withdrawn JP2007306926A (ja) 1991-05-24 2007-06-01 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2008060342A Withdrawn JP2008253251A (ja) 1991-05-24 2008-03-10 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法
JP2008258890A Withdrawn JP2009069158A (ja) 1991-05-24 2008-10-03 核酸類縁体並びに診断薬および分析方法におけるその使用方法

Country Status (16)

Country Link
US (11) US6357163B1 (ja)
EP (5) EP0586474B1 (ja)
JP (6) JP3982828B2 (ja)
KR (1) KR0133131B1 (ja)
AT (3) ATE515569T1 (ja)
AU (2) AU1884392A (ja)
BR (1) BR9206049A (ja)
CA (2) CA2109320C (ja)
DE (2) DE69220946T2 (ja)
DK (3) DK51092D0 (ja)
ES (2) ES2107552T3 (ja)
FI (1) FI118424B (ja)
GR (1) GR3025018T3 (ja)
HU (1) HU221003B1 (ja)
NO (2) NO312516B1 (ja)
WO (2) WO1992020703A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999002730A1 (en) * 1997-07-09 1999-01-21 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Method for detecting dna with probe pna
JP2004502649A (ja) * 2000-04-18 2004-01-29 アベンティス・ファーマ・ドイチユラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 負電荷を有するペプチド核酸誘導体、薬剤ならびにその製造方法

Families Citing this family (373)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5852182A (en) * 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals Inc. Thiol-derivatized oligonucleosides
US5783682A (en) * 1990-07-27 1998-07-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide mimics having nitrogen-containing linkages
US5714331A (en) * 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5766855A (en) * 1991-05-24 1998-06-16 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity and sequence specificity
US5719262A (en) * 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
DK51092D0 (da) 1991-05-24 1992-04-15 Ole Buchardt Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf
US7223833B1 (en) 1991-05-24 2007-05-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acid conjugates
US6228982B1 (en) * 1992-05-22 2001-05-08 Benget Norden Double-stranded peptide nucleic acids
US6441130B1 (en) 1991-05-24 2002-08-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Linked peptide nucleic acids
US5539082A (en) * 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US6451968B1 (en) 1991-05-24 2002-09-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acids
US6713602B1 (en) 1991-05-24 2004-03-30 Ole Buchardt Synthetic procedures for peptide nucleic acids
US5641625A (en) * 1992-05-22 1997-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cleaving double-stranded DNA with peptide nucleic acids
US6414112B1 (en) 1991-05-24 2002-07-02 Ole Buchardt Peptide nucleic acids having 2,6-diaminopurine nucleobases
AU3250093A (en) 1991-12-12 1993-07-19 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
MX9207334A (es) * 1991-12-18 1993-08-01 Glaxo Inc Acidos nucleicos peptidicos y formulacion farma- ceutica que los contiene
KR940703846A (ko) * 1991-12-24 1994-12-12 비. 린네 파샬 갭(gap)이 형성된 2′ 변성된 올리고뉴클레오티드(gapped 2′ modifed oligonucleotides)
US5700922A (en) * 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
US6277603B1 (en) 1991-12-24 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
US6033884A (en) * 1992-03-20 2000-03-07 Baylor College Of Medicine Nucleic acid transporter systems and methods of use
US6770738B1 (en) 1992-05-22 2004-08-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Higher order structure and binding of peptide nucleic acids
GB9211979D0 (en) * 1992-06-05 1992-07-15 Buchard Ole Uses of nucleic acid analogues
US6350853B1 (en) 1993-04-26 2002-02-26 Peter E. Nielsen Conjugated peptide nucleic acids having enhanced cellular uptake
US7825215B1 (en) * 1993-04-26 2010-11-02 Peter E. Nielsen Substituted nucleic acid mimics
GB9311386D0 (en) * 1993-06-02 1993-07-21 Pna Diagnostics As Nucleic acid analogue assay procedures
WO1994028720A1 (en) * 1993-06-11 1994-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers for modulating ras oncogene
WO1995004748A1 (en) * 1993-08-09 1995-02-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers for modulating viral processes
US5527675A (en) * 1993-08-20 1996-06-18 Millipore Corporation Method for degradation and sequencing of polymers which sequentially eliminate terminal residues
DE4331012A1 (de) * 1993-09-13 1995-03-16 Bayer Ag Nukleinsäuren-bindende Oligomere mit N-Verzweigung für Therapie und Diagnostik
DE4331011A1 (de) * 1993-09-13 1995-03-16 Bayer Ag Nukleinsäuren-bindende Oligomere mit C-Verzweigung für Therapie und Diagnostik
DE69425379T2 (de) * 1993-09-21 2000-11-30 Amersham Pharmacia Biotech Uk Ltd., Little Chalfont Elongation, amplifikation und sequenzierung unter verwendung eines chimären oligonucleotids
US6710164B1 (en) * 1993-11-22 2004-03-23 Peter E. Nielsen Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
GB2284209A (en) 1993-11-25 1995-05-31 Ole Buchardt Nucleic acid analogue-induced transcription of RNA from a double-stranded DNA template
GB2284208A (en) * 1993-11-25 1995-05-31 Pna Diagnostics As Nucleic acid analogues with a chelating functionality for metal ions
GB2289677A (en) * 1993-12-06 1995-11-29 Pna Diagnostics As Labelling of nucleic acid analogue-peptide chimerae
GB2285445A (en) * 1993-12-06 1995-07-12 Pna Diagnostics As Protecting nucleic acids and methods of analysis
US6133444A (en) * 1993-12-22 2000-10-17 Perseptive Biosystems, Inc. Synthons for the synthesis and deprotection of peptide nucleic acids under mild conditions
JPH11503713A (ja) * 1993-12-22 1999-03-30 パーセプティブ・バイオシステムズ・インコーポレーテッド ペプチド核酸合成用のグアニンシントンと、その調製方法
DK145493D0 (da) * 1993-12-23 1993-12-23 Dako As Antistof
US5539083A (en) * 1994-02-23 1996-07-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis
DE4408531A1 (de) * 1994-03-14 1995-09-28 Hoechst Ag PNA-Synthese unter Verwendung einer gegen schwache Säuren labilen Amino-Schutzgruppe
DE4408528A1 (de) * 1994-03-14 1995-09-28 Hoechst Ag Peptid-Oligonucleotid-Derivate, deren Herstellung und Verwendung
DE4408534A1 (de) * 1994-03-14 1995-09-28 Hoechst Ag Substituierte N-Ethyl-Glycinderivate zur Herstellung von PNA und PNA-/DNA-Hybriden
US6919441B2 (en) 1994-03-14 2005-07-19 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Polyamide-oligonucleotide derivatives, their preparation and use
DE4408533A1 (de) * 1994-03-14 1995-09-28 Hoechst Ag PNA-Synthese unter Verwendung einer basenlabilen Amino-Schutzgruppe
WO1995029921A1 (en) * 1994-04-29 1995-11-09 Perseptive Biosystems, Inc. Activated esters of 1-phenylpyrazolin-5-one for labelling amine-functionalized molecules
US6169169B1 (en) 1994-05-19 2001-01-02 Dako A/S PNA probes for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis
US5629152A (en) * 1994-08-01 1997-05-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Trisubstituted β-lactams and oligo β-lactamamides
DE4427980A1 (de) * 1994-08-08 1996-02-15 Bayer Ag Nukleinsäuren-bindende Oligomere für Therapie und Diagnostik
US6558633B1 (en) 1994-09-21 2003-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chemical reaction apparatus and methods
PT804456E (pt) * 1994-10-06 2003-01-31 Peter Eigil Nielsen Conjugados de acidos nucleicos dos peptidos
US5629178A (en) * 1994-10-28 1997-05-13 Genetics & Ivf Institute Method for enhancing amplification in the polymerase chain reaction employing peptide nucleic acid (PNA)
UA48150C2 (uk) * 1994-11-02 2002-08-15 Ай-Сі-Ен Фармасьютикалз Похідні амінокислот або аміноспиртів, олігонуклеотид
EP0792283A1 (en) * 1994-11-14 1997-09-03 Chiron Corporation SYNTHESIS OF PEPTIDE NUCLEIC ACIDS (PNAs) AND ANALOGUES VIA SUBMONOMER APPROACH
CA2207629A1 (en) * 1994-12-22 1996-06-27 Abbott Laboratories Methods of immobilizing oligonucleotides to solid support materials and methods of using support bound oligonucleotides
US6475721B2 (en) 1995-03-04 2002-11-05 Boston Probes, Inc. Sequence specific detection of nucleic acids using a solid carrier bound with nucleic acid analog probes
US7682786B1 (en) * 1995-03-04 2010-03-23 Oerum Henrik Modulation of the binding properties of nucleic acid binding partners
US6465650B1 (en) 1995-03-13 2002-10-15 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Substituted N-ethylglycine derivatives for preparing PNA and PNA/DNA hybrids
EP0830368A1 (en) 1995-06-07 1998-03-25 Genta Incorporated Novel carbamate-based cationic lipids
EP0840741B1 (en) * 1995-06-07 2004-04-28 Perseptive Biosystems, Inc. Pna-dna chimeras and pna synthons for their preparation
WO1996012397A2 (en) * 1995-06-22 1996-05-02 Dako A/S Recombinant antibody capable of binding to pna/nucleic acid complexes
AU4327196A (en) * 1995-06-22 1996-05-31 Dako A/S Monoclonal antibody capable of binding to pna/nucleic acid complexes
GB9519299D0 (en) * 1995-09-21 1995-11-22 Farrar Gwyneth J Genetic strategy
JPH11512617A (ja) * 1995-10-06 1999-11-02 パーセプテイブ・バイオシステムズ・インコーポレイテツド ペプチド核酸プローブを用いるハイブリダイゼーション分析のための方法、装置及びキット
EP1477572A3 (en) * 1995-10-06 2006-02-15 Perseptive Biosystems, Inc. Methods and kit for hybridization analysis using peptide nucleic acid probes
WO1997014026A2 (en) 1995-10-12 1997-04-17 Dako A/S Method for detecting multiple copies of a repeat sequence in a nucleic acid molecule
US6001966A (en) * 1995-10-19 1999-12-14 Proligo Llc Method for solution phase synthesis of oligonucleotides and peptides
US5874532A (en) 1997-01-08 1999-02-23 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Method for solution phase synthesis of oligonucleotides and peptides
WO1997014793A1 (en) * 1995-10-20 1997-04-24 Trustees Of Boston University Nucleic acid clamps
DE69637194T2 (de) * 1995-11-16 2008-04-30 Dako Denmark A/S In situ-hybridisation zum nachweis von spezifischen nukleinsäuresequenzen in eukaryontischen proben
US5888733A (en) * 1995-11-16 1999-03-30 Dako A/S In situ hybridization to detect specific nucleic acid sequences in eucaryotic samples
CA2190430A1 (en) * 1995-12-12 1997-06-13 Margret Barbara Basinski Method for measuring genetic messages
US6180767B1 (en) 1996-01-11 2001-01-30 Thomas Jefferson University Peptide nucleic acid conjugates
US20030069195A1 (en) * 1996-03-01 2003-04-10 Farrar Gwenyth Jane Suppression of polymorphic alleles
US6020126A (en) * 1996-03-21 2000-02-01 Hsc, Reasearch And Development Limited Partnership Rapid genetic screening method
EP0932698A1 (en) * 1996-03-26 1999-08-04 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide treatments and compositions for human melanoma
US20040234999A1 (en) * 1996-04-02 2004-11-25 Farrar Gwenyth Jane Genetic suppression and replacement
US8551970B2 (en) * 1996-04-02 2013-10-08 Optigen Patents Limited Genetic suppression and replacement
GB9606961D0 (en) 1996-04-02 1996-06-05 Farrar Gwyneth J Genetic strategy III
GB9608803D0 (en) * 1996-04-27 1996-07-03 Univ Newcastle Mitochondrial dna defects
SE506700C2 (sv) 1996-05-31 1998-02-02 Mikael Kubista Sond och förfaranden för analys av nukleinsyra
US20050118605A9 (en) * 1996-06-06 2005-06-02 Baker Brenda F. Oligomeric compounds having modified bases for binding to adenine and guanine and their use in gene modulation
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US20040266706A1 (en) * 2002-11-05 2004-12-30 Muthiah Manoharan Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20040171030A1 (en) * 1996-06-06 2004-09-02 Baker Brenda F. Oligomeric compounds having modified bases for binding to cytosine and uracil or thymine and their use in gene modulation
US20050032068A1 (en) * 2002-11-05 2005-02-10 Prakash Thazha P. Sugar and backbone-surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US9096636B2 (en) * 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20050042647A1 (en) * 1996-06-06 2005-02-24 Baker Brenda F. Phosphorous-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
JP3306073B2 (ja) * 1996-07-24 2002-07-24 ブヒャルト，ドルテ 増加した結合親和性、配列特異性および溶解性を有するペプチド核酸
US5858683A (en) 1996-08-30 1999-01-12 Matritech, Inc. Methods and compositions for the detection of cervical cancer
DE19637339A1 (de) * 1996-09-13 1998-03-19 Hoechst Ag Verfahren zur Amplifikation von Nukleinsäuren
US5919638A (en) * 1996-10-08 1999-07-06 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting prostate tumors
US5908845A (en) * 1996-10-30 1999-06-01 Segev; David Polyether nucleic acids
US20050202499A1 (en) 1996-10-31 2005-09-15 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6444202B1 (en) 1996-11-25 2002-09-03 Bundesrepublic Deutschland, Vertreten Durch Den Bundesminister Fur Gesundheit Processed polypeptides with IL-16 activity, processes for their production and their use
US6117973A (en) * 1997-02-24 2000-09-12 Georgia Tech Research Corp. PNA monomers with electron donor or acceptor
EP0968309B1 (en) * 1997-02-24 2004-10-13 Georgia Tech Research Corporation Method for determining a nucleic acid
US5932711A (en) * 1997-03-05 1999-08-03 Mosaic Technologies, Inc. Nucleic acid-containing polymerizable complex
US6692912B1 (en) * 1997-03-05 2004-02-17 Matrix Technologies Corporation Nucleic acid-containing polymerizable complex
US6015887A (en) * 1997-04-11 2000-01-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chiral peptide nucleic acids and methods for preparing same
SE522077C2 (sv) * 1997-09-05 2004-01-13 Lightup Technologies Ab Förfarande att välja sekvens hos sond för nukleinsyrahybridisering
US6617422B1 (en) 1997-05-23 2003-09-09 Peter Nielsen Peptide nucleic acid monomers and oligomers
IL133087A0 (en) * 1997-05-28 2001-03-19 Nielsen Peter E Conjugated peptide nucleic acids having enhanced cellular uptake
EP0881228B1 (en) * 1997-05-30 2005-08-10 PNA Diagnostics A/S 2- or 3-Dimensional Geometric Structures of Peptide Nucleic Acids
AU8147798A (en) * 1997-06-16 1999-01-04 University Of North Carolina At Chapel Hill, The Peptido oligonucleotides (pons) and their combinatorial libraries
US5962665A (en) 1997-06-16 1999-10-05 Abbott Laboratories Nucleic acid primers and probes for detecting HIV-1 and HIV-2
DK0897991T3 (da) * 1997-08-22 2005-07-25 Pna Diagnostics Aps Små triplexdannende PNA-oligoer
US6300318B1 (en) 1997-09-16 2001-10-09 Peter E. Nielsen Antibacterial and antibiotic methods using peptide nucleic acids and pharmaceutical compositions therefor
DE19741739B4 (de) * 1997-09-22 2006-04-27 Nanogen Recognomics Gmbh Supramolekulares Paarungssystem, dessen Herstellung und Verwendung
US6723560B2 (en) 1998-10-08 2004-04-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Using polyamide nucleic acid oligomers to engender a biological response
US6989270B1 (en) 1997-10-17 2006-01-24 Mayo Foundation For Medical Education And Research Using polyamide nucleic acid oligomers to engender a biological response
US6007992A (en) * 1997-11-10 1999-12-28 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US6028183A (en) 1997-11-07 2000-02-22 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same
DE19816550A1 (de) 1997-12-24 1999-06-24 Roche Diagnostics Gmbh Universell verwendbarer Aufbau eines Analysenelements und dessen Einsatz zur Analytbestimmung
US6030997A (en) * 1998-01-21 2000-02-29 Eilat; Eran Acid labile prodrugs
US6326479B1 (en) * 1998-01-27 2001-12-04 Boston Probes, Inc. Synthetic polymers and methods, kits or compositions for modulating the solubility of same
US6361942B1 (en) * 1998-03-24 2002-03-26 Boston Probes, Inc. Method, kits and compositions pertaining to detection complexes
US20040186071A1 (en) * 1998-04-13 2004-09-23 Bennett C. Frank Antisense modulation of CD40 expression
US20040063618A1 (en) * 2002-09-30 2004-04-01 Muthiah Manoharan Peptide nucleic acids having improved uptake and tissue distribution
DE19824900B4 (de) 1998-06-04 2006-05-04 Roche Diagnostics Gmbh DNA-Nachweis über einen Strangreassoziationskomplex
US6664045B1 (en) * 1998-06-18 2003-12-16 Boston Probes, Inc. PNA probes, probe sets, methods and kits pertaining to the detection of microorganisms
EP1095054B1 (en) 1998-07-09 2006-10-25 Biocept, Inc. Method of using an improved peptide nucleic acid universal library to optimize dna sequence hybridation
US6548651B1 (en) * 1998-11-11 2003-04-15 Pantheco A/S Modified peptide nucleic acid (PNA) molecules
ATE314488T1 (de) 1999-03-18 2006-01-15 Exiqon As Einstufige probezubereitung und bestimmung von nukleinsäure in biologischen proben
US20020049173A1 (en) * 1999-03-26 2002-04-25 Bennett C. Frank Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
US6824866B1 (en) 1999-04-08 2004-11-30 Affymetrix, Inc. Porous silica substrates for polymer synthesis and assays
DE19927783A1 (de) 1999-06-18 2000-12-21 Roche Diagnostics Gmbh Element zur Bestimmung eines Analyts in einer Flüssigkeit, entsprechendes Bestimmungsverfahren unter Verwendung des Elementes sowie Kit zur Bestimmugn eines Analyts
AU6629200A (en) * 1999-08-25 2001-03-19 Philip P Garner Alpha-helical peptide nucleic acid alpha-pna
CA2384407C (en) 1999-08-30 2009-10-20 Roche Diagnostics Gmbh 2-azapurine compounds and their use
US6348583B1 (en) * 1999-08-30 2002-02-19 Bio-Rad Laboratories, Inc. Poly(ether-thioether), poly(ether-sulfoxide) and poly(ether-sulfone) nucleic acids
US6994964B1 (en) 1999-09-01 2006-02-07 Affymetrix, Inc. Macromolecular arrays on polymeric brushes and methods for preparing the same
US6660845B1 (en) * 1999-11-23 2003-12-09 Epoch Biosciences, Inc. Non-aggregating, non-quenching oligomers comprising nucleotide analogues; methods of synthesis and use thereof
ATE406914T1 (de) 2000-02-10 2008-09-15 Massachusetts Eye & Ear Infirm Photodynamische therapie zur behandlung von augenerkrankungen
US20040014644A1 (en) * 2000-03-14 2004-01-22 Vladimir Efimov Oligonucleotide analogues and methods of use for modulating gene expression
US7115738B2 (en) 2000-03-14 2006-10-03 Active Motif Hydroxyproline/phosphono oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
US6962906B2 (en) 2000-03-14 2005-11-08 Active Motif Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
US6936443B2 (en) 2000-04-03 2005-08-30 Cytyc Corporation Detection and typing of human papillomavirus using PNA probes
DE60141205D1 (de) 2000-04-03 2010-03-18 Cytyc Corp Nachweis und typisierung des papillomavirus mittels pna-sonden
US6593092B2 (en) 2000-04-04 2003-07-15 Abbott Laboratories Beta 2 adrenergic polymorphism detection
US7211381B1 (en) 2000-04-04 2007-05-01 Abbott Laboratories β2 andrenergic polymorphism detection
DE10019135A1 (de) 2000-04-18 2001-10-31 Aventis Pharma Gmbh Polyamidnukleinsäure-Derivate, Mittel und Verfahren zu ihrer Herstellung
US6887664B2 (en) 2000-06-06 2005-05-03 Applera Corporation Asynchronous primed PCR
WO2002012263A1 (en) 2000-08-03 2002-02-14 Roche Diagnostics Gmbh Nucleic acid binding compounds containing pyrazolo[3,4-d]pyrimidine analogues of purin-2,6-diamine and their uses
DK2359854T3 (da) 2000-08-08 2013-11-04 Technion Res & Dev Foundation Farmaceutiske sammensætninger og fremgangsmåder egnet til modulering af angiogenese
US20030114410A1 (en) 2000-08-08 2003-06-19 Technion Research And Development Foundation Ltd. Pharmaceutical compositions and methods useful for modulating angiogenesis and inhibiting metastasis and tumor fibrosis
US7183394B1 (en) * 2000-08-11 2007-02-27 Garner Philip P Helical nucleopeptides
EP1416972B1 (en) * 2000-11-09 2012-02-08 Cold Spring Harbor Laboratory Chimeric molecules to modulate gene expression
WO2002051797A1 (en) * 2000-12-26 2002-07-04 Applied Biosystems Japan Ltd Novel functional peptide nucleic acid monomer and process for producing the same
AU2002230058B2 (en) 2001-01-29 2005-11-17 Bio-Rad Laboratories, Inc. Nucleic acid derivatives
GB0102388D0 (en) * 2001-01-31 2001-03-14 Secr Defence Polymers
EP1236804A1 (en) 2001-03-02 2002-09-04 Boehringer Mannheim Gmbh A method for determination of a nucleic acid using a control
EP1412517B1 (en) 2001-03-09 2006-11-29 Boston Probes, Inc. Methods, kits and compositions of combination oligomers
WO2002083855A2 (en) 2001-04-16 2002-10-24 Wyeth Holdings Corporation Novel streptococcus pneumoniae open reading frames encoding polypeptide antigens and uses thereof
ATE527376T1 (de) 2001-05-18 2011-10-15 Boston Probes Inc Pna-sonden, sondensätze, verfahren und kits im zusammenhang mit dem nachweis von candida
US20030207804A1 (en) * 2001-05-25 2003-11-06 Muthiah Manoharan Modified peptide nucleic acids
US7053195B1 (en) 2001-06-12 2006-05-30 Syngenta Participatious Ag Locked nucleic acid containing heteropolymers and related methods
EP1925672A1 (en) 2001-06-22 2008-05-28 Syngeta Participations AG Abiotic stress responsive polynucleotides and polypeptides
US6921812B1 (en) 2001-07-03 2005-07-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of modulating pharmacokinetics of oligonucleotides
US6852491B2 (en) 2001-09-04 2005-02-08 Abbott Laboratories Amplification and detection reagents for HIV-1
EP1432826B1 (en) 2001-09-24 2012-12-12 Life Technologies Corporation Methods, kits and compositions pertaining to the suppression of detectable probe binding to randomly distributed repeat sequences in genomic nucleic acid
JP2005508196A (ja) 2001-11-07 2005-03-31 アプレラ コーポレイション 核酸分析の汎用ヌクレオチド
AU2002362013B2 (en) 2001-11-21 2008-04-24 Applied Biosystems, Llc. Digital assay
US7255874B1 (en) 2001-12-21 2007-08-14 Closure Medical Corporation Biocompatible polymers and adhesives: compositions, methods of making and uses related thereto
KR100464261B1 (ko) 2002-01-24 2005-01-03 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
WO2003065146A2 (en) 2002-01-25 2003-08-07 Applera Corporation Methods for placing, accepting, and filling orders for products and services
WO2003080857A2 (en) * 2002-03-21 2003-10-02 Boston Probes,Inc. Pna oligomers, oligomers sets, methods and kits pertaining to the detection of bacillus anthracis
US20030211509A1 (en) * 2002-03-26 2003-11-13 Wiley Steven R. TNF-delta ligand and uses thereof
US7052840B2 (en) 2002-04-03 2006-05-30 Capitol Genomix, Inc. Reversible association of nucleic acid with a carboxylated substrate
US7026120B2 (en) 2002-04-15 2006-04-11 Abbott Laboratories Probes for detecting tumor cells
KR20030084444A (ko) 2002-04-26 2003-11-01 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
US7015317B2 (en) 2002-05-02 2006-03-21 Abbott Laboratories Polynucleotides for the detection and quantification of hepatitis B virus nucleic acids
US20040005611A1 (en) * 2002-05-17 2004-01-08 Hyldig-Nielsen Jens J. PNA probes, probe sets, methods and kits pertaining to the determination of Listeria
US20030220844A1 (en) * 2002-05-24 2003-11-27 Marnellos Georgios E. Method and system for purchasing genetic data
US20040137469A1 (en) * 2002-09-08 2004-07-15 Casale Ralph A Methods, compositions and libraries pertaining PNA dimer and PNA oligomer synthesis
WO2005003291A2 (en) * 2002-10-16 2005-01-13 Board Of Regents Of The University Of Texas System Bead bound combinatorial oligonucleoside phosphorothioate and phosphorodithioate aptamer libraries
EP1552025A4 (en) * 2002-10-18 2006-12-13 Cylene Pharmaceuticals Inc METHOD FOR IDENTIFYING ANTIVIRAL MOLECULES DETECTED BY A QUADRUPLEX STRUCTURE
US9150605B2 (en) * 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
CA2504694C (en) * 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US9150606B2 (en) * 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US8604183B2 (en) * 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
US7807802B2 (en) 2002-11-12 2010-10-05 Abbott Lab Polynucleotides for the amplification and detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae
HUE033832T2 (en) 2002-11-15 2018-01-29 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-methyl nucleosides in combination with interferon and Flaviviridae mutation
CN1738914A (zh) 2002-11-21 2006-02-22 震源技术公司 使用编码双链启动子一条链的引物的方法
US20040259132A1 (en) * 2002-11-22 2004-12-23 Henrik Stender Peptide nucleic acid probes for analysis of pseudomonas (sensu stricto)
EP2112229A3 (en) 2002-11-25 2009-12-02 Sequenom, Inc. Methods for identifying risk of breast cancer and treatments thereof
US7736909B2 (en) 2003-01-09 2010-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions comprising capture agents
JP4613299B2 (ja) * 2003-01-30 2011-01-12 ディーエイチ テクノロジーズ デベロップメント プライベート リミテッド 分析物分析に関する方法、混合物、キット、および組成物
WO2004072284A1 (en) * 2003-02-11 2004-08-26 Antisense Therapeutics Ltd Modulation of insulin like growth factor i receptor expression
US20040171149A1 (en) * 2003-02-11 2004-09-02 Wraight Christopher J. Modulation of insulin like growth factor I receptor expression
AU2004213716B2 (en) 2003-02-21 2008-02-28 Eisai R&D Management Co., Ltd. Signal amplification method for detecting mutant gene
DE602004030114D1 (de) * 2003-05-20 2010-12-30 Investigen Inc System zum nachweis von polynukleotiden
WO2005010181A1 (ja) * 2003-07-25 2005-02-03 Credia Japan Co., Ltd. 核酸検出方法
WO2005012546A2 (en) * 2003-07-25 2005-02-10 Andreas Braun Methods for isolating and identifying novel target-specific structuremers for use in the biological sciences
WO2005016364A1 (en) * 2003-08-14 2005-02-24 Guthy-Renker Corporation Skin care composition including hexapeptide complexes and methods of their manufacture
US20060198800A1 (en) * 2003-08-14 2006-09-07 Natalie Dilallo Skin care compositions including hexapeptide complexes and methods of their manufacture
US20050095627A1 (en) * 2003-09-03 2005-05-05 The Salk Institute For Biological Studies Multiple antigen detection assays and reagents
US20050148087A1 (en) * 2004-01-05 2005-07-07 Applera Corporation Isobarically labeled analytes and fragment ions derived therefrom
CN1910289B (zh) 2004-01-07 2012-05-23 日立化成研究中心公司 用于检测hiv的引物和探针
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
ATE399884T1 (de) 2004-03-24 2008-07-15 Applera Corp Codierungs- und decodierungsreaktionen zur bestimmung von target-polynukleotiden
US7745124B2 (en) 2004-04-28 2010-06-29 Eisai R&D Management Co., Ltd. Hybridization method
US7306916B2 (en) * 2004-05-04 2007-12-11 Dako Denmark A/S Methods for detecting chromosome aberrations
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
AU2005252663B2 (en) * 2004-06-03 2011-07-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
US20060057611A1 (en) 2004-06-30 2006-03-16 Applera Corporation Log-linear amplification
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
US7306785B2 (en) * 2004-09-23 2007-12-11 General Electric Company Multifunctional cross-bridged tetraaza macrocyclic compounds and methods of making and using
JP2008522588A (ja) * 2004-12-06 2008-07-03 バイオヴェリス コーポレイション 炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ）を検出するための方法及び組成物
US20080305142A1 (en) * 2004-12-11 2008-12-11 Cytogenix, Inc. Cell Free Biosynthesis of High-Quality Nucleic Acid and Uses Thereof
AU2006204006A1 (en) 2005-01-06 2006-07-13 Applera Corporation Polypeptides having nucleic acid binding activity and compositions and methods for nucleic acid amplification
EP1871913A2 (en) 2005-03-25 2008-01-02 Ambion, Inc. Methods and compositions for depleting abundant rna transcripts
US7229769B2 (en) * 2005-03-25 2007-06-12 Illumina, Inc. Compositions and methods for detecting protease activity
JP5479731B2 (ja) 2005-06-02 2014-04-23 アドヴァンディーエックス，インコーポレイテッド 微生物を解析するためのペプチド核酸プローブ
US8293472B2 (en) 2005-06-07 2012-10-23 Luminex Corporation Methods for detection and typing of nucleic acids
EP1920072A2 (en) 2005-07-01 2008-05-14 Dako Denmark A/S In situ hybridization detection method
US20070059713A1 (en) 2005-09-09 2007-03-15 Lee Jun E SSB-DNA polymerase fusion proteins
US20090291437A1 (en) * 2005-11-02 2009-11-26 O'brien Sean Methods for targeting quadruplex sequences
WO2007073149A1 (en) 2005-12-22 2007-06-28 Keygene N.V. Alternative nucleotides for improved targeted nucleotide exchange
WO2007100711A2 (en) * 2006-02-24 2007-09-07 Investigen, Inc. Methods and compositions for detecting polynucleotides
WO2007108378A1 (ja) 2006-03-15 2007-09-27 Eisai R & D Management Co., Ltd. シグナルプローブポリマーの形成方法
EP2677039B8 (en) 2006-05-10 2022-10-05 DxTerity Diagnostics Incorporated Detection of nucleic acid targets using chemically reactive oligonucleotide probes
US20100196336A1 (en) 2006-05-23 2010-08-05 Dongsu Park Modified dendritic cells having enhanced survival and immunogenicity and related compositions and methods
BRPI0713206A2 (pt) 2006-06-30 2012-04-17 Applera Corp métodos de análise das interações das ligações
EP3305915B1 (en) 2006-08-01 2022-01-26 Applied Biosystems, LLC Detection of analytes and nucleic acids
US20080096193A1 (en) * 2006-10-24 2008-04-24 Charles Robert Bupp Methods and compositions for detecting polynucleotides
US20080131880A1 (en) * 2006-11-22 2008-06-05 Bortolin Laura T PNA-DNA oligomers and methods of use thereof
US8324359B1 (en) 2006-12-04 2012-12-04 Luminex Corporation Oxocarbonamide peptide nucleic acids and methods of using same
EP2857526B1 (en) 2006-12-13 2016-08-17 Luminex Corporation Systems and methods for multiplex analysis of PCR in real time
US9938641B2 (en) * 2006-12-18 2018-04-10 Fluidigm Corporation Selection of aptamers based on geometry
EP2118310B1 (en) * 2006-12-29 2013-03-06 Applied Biosystems, LLC Systems and methods for detecting nucleic acids
CN101978070A (zh) * 2006-12-29 2011-02-16 应用生物系统公司 检测核酸的系统和方法
US7803543B2 (en) 2007-01-19 2010-09-28 Chang Gung University Methods and kits for the detection of nucleotide mutations using peptide nucleic acid as both PCR clamp and sensor probe
US9150612B2 (en) * 2007-02-23 2015-10-06 The Research Foundation Of State University Of New York RNA targeting compounds and methods for making and using same
WO2008103702A2 (en) * 2007-02-23 2008-08-28 Investigen, Inc. Methods and compositions for rapid light-activated isolation and detection of analytes
US9260476B2 (en) 2007-02-23 2016-02-16 The Research Foundation For The State University Of New York RNA targeting compounds and methods for making and using same
EP2035440B1 (en) 2007-04-13 2012-06-13 Abbott Laboratories Primer and probe sequences for detecting chlamydia trachomatis
US8097422B2 (en) 2007-06-20 2012-01-17 Salk Institute For Biological Studies Kir channel modulators
EP3620465B1 (en) 2007-07-03 2025-02-19 Dako Denmark A/S Improved methods for generation, labeling and use of mhc multimers
IL184627A0 (en) 2007-07-15 2008-12-29 Technion Res & Dev Foundation Agents for diagnosing and modulating metastasis and fibrosis as well as inflammation in a mammalian tissue
CA2693310C (en) 2007-08-02 2018-11-27 Arresto Biosciences, Inc. Lox and loxl2 inhibitors, antibodies and uses thereof
CN101835906A (zh) 2007-10-24 2010-09-15 卫材R&D管理有限公司 核酸探针及探针聚合物的形成方法
WO2009057702A1 (ja) 2007-10-31 2009-05-07 Eisai R & D Management Co., Ltd. 標的物質検出用ポリマー及び標的物質の検出方法
US8916531B2 (en) 2007-11-20 2014-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of CD40 expression
US8017338B2 (en) 2007-11-20 2011-09-13 Life Technologies Corporation Reversible di-nucleotide terminator sequencing
CA2711499C (en) 2008-01-10 2018-09-25 Research Development Foundation Vaccines and diagnostics for the ehrlichioses
ES2990227T3 (es) 2008-01-17 2024-11-29 Sequenom Inc Composiciones y procedimientos de análisis de ácido nucleico de secuencia única
KR101072899B1 (ko) * 2008-01-21 2011-10-17 주식회사 파나진 아미노산 스페이서가 결합된 펩티드 핵산의 합성 및 그의응용
CA2717320A1 (en) 2008-03-11 2009-09-17 Sequenom, Inc. Nucleic acid-based tests for prenatal gender determination
KR20090098710A (ko) 2008-03-14 2009-09-17 주식회사 씨티아이바이오 세포투과성과 핵산 결합력이 좋은 펩타이드 핵산 유도체
EP2636756B2 (en) 2008-05-27 2019-11-20 Dako Denmark A/S Compositions and methods for detection of chromosomal aberrations with novel hybridization buffers
EP3023494B1 (en) 2008-06-13 2018-11-28 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants
US20090312196A1 (en) 2008-06-13 2009-12-17 Codexis, Inc. Method of synthesizing polynucleotide variants
US8859490B2 (en) 2008-09-03 2014-10-14 Nanyang Technological University Peptide nucleic acid monomers and oligomers
US8476013B2 (en) 2008-09-16 2013-07-02 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based acid enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
US8962247B2 (en) 2008-09-16 2015-02-24 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non invasive prenatal diagnoses
CA2746527A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Rxi Pharmaceuticals Corporation Rna interference in skin indications
WO2010037124A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tumor vascular marker-targeted vaccines
DK2337860T3 (en) 2008-10-15 2016-08-29 Axolabs Gmbh A method for the detection of oligonucleotides
US20100135904A1 (en) 2008-11-07 2010-06-03 Research Development Foundation Compositions and methods for the inhibition of cripto / grp78 complex formation and signaling
US8715732B2 (en) * 2009-01-05 2014-05-06 Cornell University Nucleic acid hydrogel via rolling circle amplification
WO2010080769A2 (en) 2009-01-06 2010-07-15 Arresto Biosciences, Inc. Chemotherapeutic methods and compositions
WO2010087994A2 (en) 2009-01-30 2010-08-05 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods for ligation and uses thereof
US9745574B2 (en) 2009-02-04 2017-08-29 Rxi Pharmaceuticals Corporation RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
US7964355B2 (en) 2009-02-17 2011-06-21 Investigen, Inc. Assays based on detection of photobleaching reaction products from dye catalytic complex
EP2401396B1 (en) 2009-02-26 2016-11-23 Dako Denmark A/S Methods for performing a stringent wash step in hybridization applications
US8063193B2 (en) 2009-03-27 2011-11-22 Abbott Laboratories Nucleotide and amino acid sequences encoding an exported protein 1 derived from Plasmodium vivax and uses thereof
US9976177B2 (en) 2009-04-01 2018-05-22 Dxterity Diagnostics Incorporated Chemical ligation dependent probe amplification (CLPA)
US20100297127A1 (en) 2009-04-08 2010-11-25 Ghilardi Nico P Use of il-27 antagonists to treat lupus
BRPI1013012A2 (pt) 2009-06-02 2016-10-18 Opko Health Inc identificação de pequenas moléculas reconhecidas por anticorpos em indivíduos com doenças neurodegenerativas
EP2449104B1 (en) 2009-06-29 2014-06-04 Luminex Corporation Chimeric primers with hairpin conformations and methods of using same
WO2011011630A2 (en) 2009-07-23 2011-01-27 Codexis, Inc. Nitrilase biocatalysts
EP2462230B1 (en) * 2009-08-03 2015-07-15 Recombinetics, Inc. Methods and compositions for targeted gene modification
EP2467396A4 (en) 2009-08-21 2012-12-26 Gilead Biologics Inc CATALYTIC DOMAINS FROM LYSYL OXIDASE AND LOXL2
WO2011047257A1 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for producing cyclic peptoid libraries
US20130040294A1 (en) 2009-12-02 2013-02-14 Steen H. Matthiesen Compositions and methods for performing hybridizations with no denaturation
EP3088532B1 (en) 2009-12-22 2019-10-30 Sequenom, Inc. Processes and kits for identifying aneuploidy
WO2011087789A2 (en) 2009-12-22 2011-07-21 Becton, Dickinson And Company Methods for the detection of microorganisms
US9080171B2 (en) 2010-03-24 2015-07-14 RXi Parmaceuticals Corporation Reduced size self-delivering RNAi compounds
WO2011133931A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Genentech, Inc. Use of il-27 antagonists for treating inflammatory bowel disease
MX340258B (es) 2011-01-11 2016-07-01 Seegene Inc Detección de secuencias de ácido nucleico objetivo mediante ensayo de escisión y extensión del pto.
EP2691543B1 (en) 2011-03-29 2017-11-01 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent cleavage
EP3428287B1 (en) 2011-04-08 2021-03-24 Carnegie Mellon University Conformationally-preorganized, minipeg-containing gamma-peptide nucleic acids
WO2012149339A2 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Sequenom, Inc. Quantification of a minority nucleic acid species
WO2012150749A1 (en) 2011-05-04 2012-11-08 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by po cleavage and hybridization
US9745616B2 (en) 2011-05-17 2017-08-29 Dxterity Diagnostics Incorporated Methods and compositions for detecting target nucleic acids
WO2013046033A1 (en) 2011-09-30 2013-04-04 Dako Denmark A/S Hybridization compositions and methods using formamide
GB201117482D0 (en) 2011-10-11 2011-11-23 Univ Dundee Targetiing of miRNA precursors
EP2768974B1 (en) 2011-10-21 2017-07-19 Dako Denmark A/S Hybridization compositions and methods
EP2594942A1 (en) * 2011-11-16 2013-05-22 Koninklijke Philips Electronics N.V. Long rigid spacers to enhance binding kinetics in immunoassays
WO2013085026A1 (ja) 2011-12-09 2013-06-13 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 塩基変異の検出方法及び検出用キット
JP6012767B2 (ja) 2012-02-07 2016-10-25 ヴィブラント ホールディングス リミテッド ライアビリティ カンパニー 基板、ペプチドアレイ、および方法
HK1206055A1 (en) 2012-03-02 2015-12-31 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
JP5976849B2 (ja) 2012-03-05 2016-08-24 シージーン アイエヌシー ＰＴＯ切断及び伸長アッセイによるターゲット核酸配列でのヌクレオチド変異検出｛ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＶａｒｉａｔｉｏｎｏｎＴａｒｇｅｔＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＳｅｑｕｅｎｃｅｂｙＰＴＯＣｌｅａｖａｇｅａｎｄＥｘｔｅｎｓｉｏｎＡｓｓａｙ｝
WO2013172305A1 (ja) 2012-05-15 2013-11-21 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 Ｒｎａの検出方法及び検出用キット
US10504613B2 (en) 2012-12-20 2019-12-10 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
US9920361B2 (en) 2012-05-21 2018-03-20 Sequenom, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acid
JP2015519899A (ja) 2012-05-21 2015-07-16 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート リボソームポリヌクレオチドおよび関連する発現系
US10077474B2 (en) 2012-05-29 2018-09-18 Abbott Molecular, Inc. Method of designing primers, method of detecting single nucleotide polymorphisms (SNPs), method of distinguishing SNPs, and related primers, detectable oligonucleotides, and kits
US20140093873A1 (en) 2012-07-13 2014-04-03 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
WO2014033314A1 (en) 2012-09-03 2014-03-06 Uab Bioseka Antisense oligonucleotide targeting bacterial glucosyltransferases
US10006909B2 (en) 2012-09-28 2018-06-26 Vibrant Holdings, Llc Methods, systems, and arrays for biomolecular analysis
US10260089B2 (en) 2012-10-29 2019-04-16 The Research Foundation Of The State University Of New York Compositions and methods for recognition of RNA using triple helical peptide nucleic acids
WO2014093291A1 (en) 2012-12-10 2014-06-19 Advandx, Inc. Use of probes for mass spectrometric identification of microorganisms or cells and associated conditions of interest
AU2014200958B2 (en) 2013-02-25 2016-01-14 Seegene, Inc. Detection of nucleotide variation on target nucleic acid sequence
US9289502B2 (en) 2013-03-08 2016-03-22 Emerald Therapeutics, Inc. Preparation of oligo conjugates
HK1216655A1 (zh) 2013-03-13 2016-11-25 Sequenom, Inc. 用於dna甲基化分析的引物
EP2971115B1 (en) 2013-03-13 2022-07-27 Seegene, Inc. Quantification of target nucleic acid using melting peak analysis
US9347095B2 (en) 2013-03-15 2016-05-24 Bio-Rad Laboratories, Inc. Digital assays for mutation detection
CN105026580A (zh) 2013-03-15 2015-11-04 雅培分子公司 重亚硫酸盐转化的核苷酸序列的检测
WO2014169206A2 (en) 2013-04-11 2014-10-16 Carnegie Mellon University Divalent nucleobase compounds and uses therefor
WO2014169216A2 (en) 2013-04-11 2014-10-16 Carnegie Mellon University TEMPLATE-DIRECTED γPNA SYNTHESIS AND γPNA TARGETING COMPOUNDS
JP2016529885A (ja) 2013-07-12 2016-09-29 イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン 活性炭を使用して標的タンパク質を含む試料からのウイルス除去を決定する方法
EP3022319B1 (en) 2013-07-15 2023-05-17 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent immobilized oligonucleotide hybridization
LT6214B (lt) 2013-10-07 2015-08-25 Uab "Bioseka" Priešprasminiai oligonukleotidai aterosklerozės ir kardiovaskulinių infekcijų prevencijai
KR20160068855A (ko) 2013-10-11 2016-06-15 제넨테크, 인크. Nsp4 억제제 및 사용 방법
US10159652B2 (en) 2013-10-16 2018-12-25 The University Of British Columbia Device for formulating particles at small volumes
US11447814B2 (en) 2013-10-18 2022-09-20 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence on solid phase by PTO cleavage and extension using HCTO assay
EP3065706A4 (en) 2013-11-08 2017-11-29 Baylor Research Institute Nuclear localization of glp-1 stimulates myocardial regeneration and reverses heart failure
CA2940526A1 (en) 2014-01-28 2015-08-06 Dice Molecules Sv, Llc Monoliths with attached recognition compounds, arrays thereof and uses thereof
US11365447B2 (en) 2014-03-13 2022-06-21 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
WO2015172058A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Carnegie Mellon University Left-handed gamma-peptide nucleic acids, methods of synthesis and uses therefor
JP6695285B2 (ja) 2014-06-10 2020-05-20 ディクステリティー ダイアグノスティクス インコーポレイテッド 生物学的試料を採取して安定化するためのデバイス及び方法
WO2015200377A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Abbott Molecular Inc. Detection of single nucleotide polymorphisms in human kras
ES2752761T3 (es) 2014-07-24 2020-04-06 Abbott Molecular Inc Composiciones para la detección y análisis de mycobacterium tuberculosis
EP3633047B1 (en) 2014-08-19 2022-12-28 Pacific Biosciences of California, Inc. Method of sequencing nucleic acids based on an enrichment of nucleic acids
EP3259346B1 (en) 2015-02-20 2024-08-07 Baylor College of Medicine P63 inactivation for the treatment of heart failure
JP6764870B2 (ja) 2015-02-24 2020-10-07 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア 連続フローマイクロ流体システム
JP7376977B2 (ja) 2015-06-12 2023-11-09 アレクトル エルエルシー 抗ｃｄ３３抗体及びその使用方法
JP7497953B2 (ja) 2015-06-12 2024-06-11 アレクトル エルエルシー 抗ｃｄ３３抗体及びその使用方法
HK1255315A1 (zh) 2015-07-14 2019-08-16 Abbott Molecular Inc. 用於鉴定耐药性结核的组合物和方法
CA2996059A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Alector Llc Anti-siglec-7 antibodies and methods of use thereof
HK1257030A1 (zh) 2015-09-16 2019-10-11 PetaOmics, Inc. 用於基因组目标富集和选择性dna测序的方法和组合物
US12492423B2 (en) 2015-09-16 2025-12-09 PetaOmics, Inc. Methods and compositions for genomic target enrichment and selective DNA sequencing
ES2941968T3 (es) 2015-10-01 2023-05-29 The Whitehead Institute For Biomedical Res Marcaje de anticuerpos
CN108291227A (zh) 2015-10-14 2018-07-17 拜奥-帕斯控股股份有限公司 用于脂质体制剂的对乙氧基核酸
MX391259B (es) 2015-10-14 2025-03-21 X Therma Inc Composiciones y métodos para reducir la formación de cristales de hielo.
CA3003458A1 (en) 2015-10-29 2017-05-04 Alector Llc Anti-siglec-9 antibodies and methods of use thereof
AU2016385135B2 (en) 2016-01-06 2022-02-17 The University Of British Columbia Bifurcating mixers and methods of their use and manufacture
WO2017168348A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Baylor Research Institute Angiopoietin-like protein 8 (angptl8)
US10400274B2 (en) 2016-06-18 2019-09-03 Jan Biotech, Inc. Fluorogenic probes and their use in quantitative detection of target RNA sequences
WO2018013924A1 (en) 2016-07-15 2018-01-18 Massachusetts Institute Of Technology Synthetic nanoparticles for delivery of immunomodulatory compounds
AU2017325971A1 (en) 2016-09-16 2019-04-11 Bio-Path Holdings, Inc. Combination therapy with liposomal antisense oligonucleotides
CN114907272A (zh) 2016-09-26 2022-08-16 卡耐基梅隆大学 二价核碱基化合物及其用途
US11147249B2 (en) 2016-12-08 2021-10-19 Alector Llc Siglec transgenic mice and methods of use thereof
WO2018213316A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 Alector Llc Anti-siglec-5 antibodies and methods of use thereof
US10538808B2 (en) 2017-05-26 2020-01-21 Vibrant Holdings, Llc Photoactive compounds and methods for biomolecule detection and sequencing
KR102733407B1 (ko) 2017-08-03 2024-11-21 알렉터 엘엘씨 항-cd33 항체 및 이의 이용 방법
KR102380264B1 (ko) 2017-08-31 2022-03-29 주식회사 씨젠 다이머-형성 프라이머 쌍을 이용한 구성요소의 성능 평가
US11401546B2 (en) 2017-09-29 2022-08-02 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by PTO cleavage and extension-dependent extension assay
US11470827B2 (en) 2017-12-12 2022-10-18 Alector Llc Transgenic mice expressing human TREM proteins and methods of use thereof
JP7373205B2 (ja) 2017-12-21 2023-11-02 カーネギー メロン ユニバーシティ 鋳型指向性の核酸標的化合物
EP3790985B1 (en) 2018-05-09 2026-04-15 Vibrant Holdings, LLC Methods of synthesizing a polynucleotide array using photactivated agents
MX2020013172A (es) 2018-06-08 2021-03-29 Alector Llc Anticuerpos anti-siglec-7 y sus metodos de uso.
JP7535495B2 (ja) 2018-07-27 2024-08-16 アレクトル エルエルシー 抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体及びその使用方法
MX2021002299A (es) 2018-08-31 2021-04-28 Alector Llc Anticuerpos de anti-cd33 y metodos para usarlos.
US12097239B2 (en) 2018-09-21 2024-09-24 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for treating diabetes, and methods for enriching MRNA coding for secreted proteins
US20220251567A1 (en) 2019-07-10 2022-08-11 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
US20230016983A1 (en) 2019-11-19 2023-01-19 lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer
KR102403904B1 (ko) * 2019-12-24 2022-06-02 주식회사 시선바이오머티리얼스 용액공정상 pna 올리고머의 제조방법
WO2021243271A2 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Front Range Biosciences, Inc. Methods and compositions for pathogen detection in plants
US20230002779A1 (en) 2020-06-29 2023-01-05 Front Range Biosciences, Inc. Characterization of plant cultivars based on terpene synthase gene profiles
KR20230050336A (ko) 2020-07-10 2023-04-14 인스티튜트 내셔널 드 라 싼테 에 드 라 리셰르셰 메디칼르 (인 썸) 뇌전증을 치료하기 위한 방법과 조성물
CA3218220A1 (en) * 2021-05-11 2022-11-17 Russell Lewis Mccurdy Replaceable floating attractant accessories for fishing line
WO2023043280A1 (ko) 2021-09-17 2023-03-23 주식회사 씨젠 합성 비자연 염기를 포함하는 태그 올리고뉴클레오타이드를 이용한 타겟 핵산 서열의 검출
CN114409890A (zh) * 2022-02-28 2022-04-29 中国科学院长春应用化学研究所 一种氨基功能化的聚乙二醇衍生物及其制备方法
EP4558149A1 (en) 2022-07-21 2025-05-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders
EP4646478A1 (en) 2023-01-06 2025-11-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain
WO2025008406A1 (en) 2023-07-04 2025-01-09 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2025090427A1 (en) 2023-10-23 2025-05-01 University Of Rochester Glial-targeted relief of hyperexcitability in neurodegenerative diseases
WO2025237990A1 (en) 2024-05-14 2025-11-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of pulmonary fibrosis
WO2026061986A1 (en) 2024-09-17 2026-03-26 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotide (aso)-mediated down-regulation of cd33 to safely enrich for genetically modified cells
CN119954890B (zh) * 2025-04-10 2025-10-17 广东工业大学 一种光学纯小肽类化学发光探针及其在结核分枝杆菌识别中的应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2910130A1 (de) 1979-03-15 1980-09-25 Franz Rossmoeller Verbesserte befestigungsvorrichtung zum aufhaengen von paneelen und moebelelementen
DE2910129C2 (de) 1979-03-15 1986-01-23 Oskar 4354 Datteln Fleck Leiste zum Abdichten des Zwischenraums zwischen der Trauflatte eines Daches und den darüberliegenden traufseitigen Dacheindeckungsplatten
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
JP3022967B2 (ja) 1985-03-15 2000-03-21 アンチバイラルズ インコーポレイテッド 立体規則性ポリヌクレオチド結合ポリマー
US5034506A (en) * 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) * 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
DE3856406T2 (de) 1987-10-28 2000-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine, Parkville Oligonucleotid-polyamid konjugate
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
EP0433345B1 (en) 1988-09-01 1994-04-20 Forskningscenter Riso Peptide synthesis method and solid support for use in the method
JPH02156895A (ja) * 1988-12-08 1990-06-15 Sumitomo Heavy Ind Ltd 好塩菌による５’‐ヌクレオチド類の製造法
JPH0635469B2 (ja) * 1989-09-13 1994-05-11 信 高橋 ジエチレントリアミン三酢酸化合物及びその製造中間体並びにそれらの製造法
US5340716A (en) * 1991-06-20 1994-08-23 Snytex (U.S.A.) Inc. Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label
US6451968B1 (en) * 1991-05-24 2002-09-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acids
US5539082A (en) * 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) * 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US6228982B1 (en) * 1992-05-22 2001-05-08 Benget Norden Double-stranded peptide nucleic acids
DK51092D0 (da) * 1991-05-24 1992-04-15 Ole Buchardt Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf
US6414112B1 (en) * 1991-05-24 2002-07-02 Ole Buchardt Peptide nucleic acids having 2,6-diaminopurine nucleobases
MX9207334A (es) 1991-12-18 1993-08-01 Glaxo Inc Acidos nucleicos peptidicos y formulacion farma- ceutica que los contiene
US6770738B1 (en) * 1992-05-22 2004-08-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Higher order structure and binding of peptide nucleic acids
AU4525093A (en) * 1992-05-28 1993-12-30 Gilead Sciences, Inc. Conformationally restrained oligomers containing amide or carbamate linkages for sequence-specific binding
US5705333A (en) * 1994-08-05 1998-01-06 The Regents Of The University Of California Peptide-based nucleic acid mimics(PENAMS)
US6472209B1 (en) * 1997-10-17 2002-10-29 Mayo Foundation For Medical Education And Research Using polyamide nucleic acid oligomers to engender a biological response

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999002730A1 (en) * 1997-07-09 1999-01-21 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Method for detecting dna with probe pna
JP2004502649A (ja) * 2000-04-18 2004-01-29 アベンティス・ファーマ・ドイチユラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 負電荷を有するペプチド核酸誘導体、薬剤ならびにその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
NO934235D0 (no) 1993-11-23
US6357163B1 (en) 2002-03-19
US20020160383A1 (en) 2002-10-31
FI118424B (fi) 2007-11-15
DE69232055T2 (de) 2002-06-06
NO934122D0 (no) 1993-11-15
JP2008253251A (ja) 2008-10-23
ES2107552T3 (es) 1997-12-01
EP0586618A1 (en) 1994-03-16
JP2009069158A (ja) 2009-04-02
GR3025018T3 (en) 1998-01-30
EP1411063A1 (en) 2004-04-21
WO1992020702A1 (en) 1992-11-26
US20060046255A1 (en) 2006-03-02
EP1162206A3 (en) 2004-04-14
JP3982828B2 (ja) 2007-09-26
WO1992020703A1 (en) 1992-11-26
US20030180734A1 (en) 2003-09-25
NO934122L (no) 1994-01-11
EP1074559B1 (en) 2011-07-06
US20060160731A1 (en) 2006-07-20
AU666480B2 (en) 1996-02-15
NO313201B1 (no) 2002-08-26
JP2003235590A (ja) 2003-08-26
ATE205504T1 (de) 2001-09-15
JP2007306926A (ja) 2007-11-29
DK0586618T3 (da) 1998-02-09
JP2758988B2 (ja) 1998-05-28
DK0586474T3 (da) 2001-12-31
BR9206049A (pt) 1994-12-27
ATE515569T1 (de) 2011-07-15
AU1884392A (en) 1992-12-30
EP1411063B1 (en) 2006-07-19
EP0586474B1 (en) 2001-09-12
US6395474B1 (en) 2002-05-28
EP0586474A1 (en) 1994-03-16
JPH06506945A (ja) 1994-08-04
FI935208A7 (fi) 1993-11-23
EP0586618B1 (en) 1997-07-16
US20040059087A1 (en) 2004-03-25
US6710163B1 (en) 2004-03-23
DK51092D0 (da) 1992-04-15
NO312516B1 (no) 2002-05-21
EP1074559A1 (en) 2001-02-07
FI935208A0 (fi) 1993-11-23
HU221003B1 (hu) 2002-07-29
ATE155483T1 (de) 1997-08-15
US20120115136A1 (en) 2012-05-10
US6201103B1 (en) 2001-03-13
DE69232055D1 (de) 2001-10-18
EP1162206A2 (en) 2001-12-12
HUT66597A (en) 1994-12-28
NO934235L (no) 1994-01-20
CA2109320C (en) 2003-07-22
KR0133131B1 (en) 1998-04-14
ES2164052T3 (es) 2002-02-16
US5977296A (en) 1999-11-02
HU9303023D0 (en) 1994-01-28
CA2109805A1 (en) 1992-11-26
CA2109320A1 (en) 1992-11-25
AU1880692A (en) 1992-12-30
DE69220946D1 (de) 1997-08-21
US7378485B2 (en) 2008-05-27
DE69220946T2 (de) 1998-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH06509063A (ja) 診断薬および分析方法における核酸類縁体の使用・用途
US6228982B1 (en) Double-stranded peptide nucleic acids
EP0773950B1 (en) Linked peptide nucleic acids
US5766855A (en) Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity and sequence specificity
US5786461A (en) Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5736336A (en) Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US6441130B1 (en) Linked peptide nucleic acids
US6414112B1 (en) Peptide nucleic acids having 2,6-diaminopurine nucleobases
EP0960121B1 (en) Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
Antsypovitch Peptide nucleic acids: structure, properties, applications, strategies and practice of chemical synthesis
US5955571A (en) Nucleic acid-binding oligomers for therapy and diagnosis
US20030157500A1 (en) Pyrrolidinyl peptide nucleic acids
US20030105286A1 (en) Linked peptide nucleic acids
EP1513871B1 (en) Pyrrolidinyl peptide nucleic acids
JPH1087634A (ja) 核酸結合オリゴマー

Legal Events

Date Code Title Description
A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20060420

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20060425

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20060728

RD12 Notification of acceptance of power of sub attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7432

Effective date: 20060728

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20060728

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20070601

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20070703

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100713

Year of fee payment: 3

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110713

Year of fee payment: 4

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110713

Year of fee payment: 4

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120713

Year of fee payment: 5

EXPY Cancellation because of completion of term