JPH06509232A - Ｆｒ９０１４５１物質、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ＦＲ９０１４５１物質、その製造法およびその用途技術分野 この発明は、新規なＦＲ９０１４５１物質に関するものである。より詳しくは、 この発明は、ヒト白血球エラスターゼ阻害活性を有する新規なＦＲ９０１４５１ 物質および医薬として許容されるその塩、その製造法、それを含有してなる医薬 組成物ならびにその使用法に関するものである。

発明の開示 ＦＲ９０１４５１物質は、フレキシバクター（Ｆｌｅｘｉｂａｃｔｅｒ）属のＦ Ｒ９０１４５１物質生産株を栄養培地中で培養することにより製造できる。

ｉ生産 ＦＲ９０１４５１￥に質の製造に使用できる微生物は、フレキシバクター属に属 するＦＲ９０１４５１物質生産株であり、なかでも、フレキシバクターＳＰ、　 Ｎｏ、７５８株は千葉県で採集された土壌試料から新たに単離されたものである 。

この新たに単離されたフレキシバクターＳＰ、　Ｎｏ、７５８株の凍結乾燥試料 は、ブダペスト条約に基く国際寄託機関である工業技術院微生物工業技術研究所 （３０５日本国茨城渠つくば電束１了目１−３）に、寄託番号ＦＥＲＭＢＦ−３ ４２０として寄託されている（寄託日：　１９９１年５月２１日）。

新規ＦＲ９０１４５１物質の生産は、説明することだけを目的として示した本明 細書記載の特定の微生物の使用に限定されるものではない。この発明は、明細書 に記載されている微生物をＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ。

−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、２−アミノフリンなどによる処理などの常 法によって得られる人工変異株ならびに天然変異株を含めて、ＦＲ９０１４５１ 物質を生産できる全ての変異株の使用を包含する。

フレキシバクターＳＰ、　Ｎｏ、７５８株は、次の形態学的、培養的、生物学的 および生理学的特徴をもつ。

この分類学的検討には、バーシーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バ クテリオロジ−（第３巻）に記載されている方法を主として用いた。

（１）形態学的特徴 Ｎｏ、７５８株の形態観察は、普通寒天およびサイトファーガ寒天上で３０℃で ２４時間培養した細胞を用いて、光学顕微鏡により行った。Ｎｏ、　７５８株は 、グラム陰性の細菌であった。それは細長い桿菌で、糸状体のときもあり、滑走 運動を行った。その大きさは、約０．８〜１．ＯＸ　１５〜１８μΦであった。

Ｎｏ、　７５８株のコロニーは、普通寒天上で、橙黄色、円形、凸形、金縁であ った。結果を第１表に示した。

（２）生理学的特徴 Ｎｏ、　７５８株の生理学的特徴を第２表にまとめた。生育温度は１７℃〜４４ ℃であった。Ｎｏ、７５８株は、オキシダーゼ陽性、カタラーゼ陽性、フレキシ ルピン反応陽性であった。硝酸塩は亜硝酸に還元された。この菌株は、ゼラチン 、カゼインおよびエスクリンを加水分解した。デンプン加水分解は陰性であった 。キチナーゼおよびセルラーゼは陰性であった。寒天およびアルギン酸塩分解能 も陰性であった。ＤＮＡのＧ＋Ｃモル百分率は４９．８％であった。Ｄ−グルコ ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトース、スクロース、ラクトースおよびマル トースから、酸産成が認められた。次の化合物が単独炭素源として利用された： Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、Ｄ− マンノース、Ｄ−ガラクトース、スクロース、ラクトースおよびマルトース。

Ｄ−マンニトールおよびソルビトールは利用されなかった。

（３）同定 バーシーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジ−（第３巻 ）に従えば、Ｎｏ、　７５８株は、上記の特徴から、フレキシバクター属に属す ると考えられた。そこで、この菌株を７レキシバクターの１菌株であると同定し 、７レキシバクターＳＰ、　Ｎｏ、７５８と命名した。

第１表　Ｎｏ、　７５８株の形態学的特徴ダラム染色　陰性 コロニーの色　橙黄色 細胞の形　細長い桿状 細胞の大きさ　０．８−１．ＯＸ　１５＝　１８＋ｕ　ｍ運動性　滑走 胞子形成　陰性 第２表　Ｎｏ、７５８株の生理学的特徴条件　特徴 生育温度　１７〜４４℃ 空気中での生育　陽性 マツコンキー寒天上での生育　陰性 海水寒天上での生育　陽性 （ＤＩＦＣＯ海水寒天２２１６） フレキシルピン反応　陽性 カタラーゼ　陽性（弱） オキシダーゼ　陽性 ＮａＣ１耐性（％）Ｏ−２ Ｈ２Ｓ（ＳＩＭ）　陰性 シモンズクエン酸塩陰性 硝酸塩還元　陽性 インドール　陰性 ゼラチン液化　陽性 カゼイン加水分解　陽性（弱） る。リン酸塩、塩化物、その他の金属塩類等の無機塩類、たとえばリン酸水業二 ナトリウム、リン酸二水素カリウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネ シウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化マグネシウムなどを添加しても よい。醗酵中、発泡が著しい場合には、植物油、たとえば大豆油、あまに油など 、高級アルコール、たとえばオクタデカノールなどの消泡剤を適当量添加しても よい。

醗酵は、３０℃前後で３０〜１００時間行うのが好ましい。

上記の醗酵条件は、使用する微生物の特徴に従って、最適条件の組合せを選択す ることとなる。

このようにして培養液中に生産されたＦＲ９０１４５１物質の大部分は細胞外に 存在するので、アセトンなどの適当な溶媒を培養液に加える。

生じた混合物を、珪藻土とともに一過し、次いで一般の抗生物質の生産において 常用されている操作により、Ｐ液から所望化合物を分離、精製する。たとえば、 減圧下の濃縮、凍結乾燥、溶媒抽出、ｐＨ調整、陰イオン交換樹脂処理、陽イオ ン交換樹脂処理、非イオン性吸着樹脂処理、活性炭、珪酸、シリカゲル、アルミ ナなどの吸着剤による処理、結晶化、再結晶などの操作を、単独でまたは適宜組 合せて、採用できる。

培養液中に生産されたＦＲ９０１４５１物質は、遊離の形で、または所望により 医薬として許容される塩の形で、単離できる。該物質を医薬として許容される塩 の形で単離するには、培養液抽出物から得た所望化合物を、無機塩基、たとえば アルカリ金属化合物（たとえば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど）、アル カリ土類金属化合物（たとえば水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムなど）、 無機塩基、たとえばアンモニアなど、有機塩基（たとえばトリエチルアミン、ジ シクロヘキシルアミンなど）などの塩基で、または無機酸（たとえば塩酸、硫酸 、リン酸など）、有機酸（たとえばギ酸、酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエ ン酸、シュウ酸など）などの酸で、処理することにより、対応するＦＲ９０１４ ５１物質の塩を得ることができる。

こうして得られたＦＲ９０１４５１物質の塩は、それ自身慣用の方法で遊離のＦ Ｒ９０１４５１物質に再変換することができる。

ＦＲ９０１４５１物質は、新規物質であり、下記の物理化学的性質を有する。

ＦＲ９０１，４５１物質の物理化学的性質：外観　：白色粉末 呈色反応：陽性：硫酸セリウム、ヨウ業蒸気、エールリッヒ、ニンヒドリン 陰性：モーリッシュ 溶解性　：可溶：水、メタノール、ジメチルスルホキシド 難溶：アセトン 不溶：酢酸エチル 融点　＝２４３〜２４５℃（分解） 比旋光度＝［α１２３−１５°（Ｃ・０．６５．　）１２０）紫外１ｍ　Ｗ＆　 収ｘ　ベクトル：λ丑Ｈｎｍ　（ｔ　）　２７５　（４３００）。

２８１　（４５００）、２９０　（３９００）分子式　：Ｃ６０Ｈ７９Ｎ１３０ １８ 元素分析：Ｃ６ｏＨ７９Ｎ１３０１８・１０Ｈ２０としての計算値：　Ｃ４９， ６８，Ｈ６，８８，Ｎ　１２．５５実測値：　Ｃ４９，９５，Ｈ６，２８，Ｎ　 １２．４２分子量　：　ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　１２７０　（Ｍ＊Ｈ）”薄層ク ロマトグラフィー： ＲＰ−１８７０％含水メタノール　０．３２（メルク） ＦＴ赤外線吸収スペクトル（第１図）　：ｖ　ＫＢ’　３３９０．３０７０．２ ９７０．２８８０．１７４０．１６６０．１５３０゜ａｘ １４５０、１４１０．１，３８０．１３５０．１２５０．１１９０．１１１０゜ １０８０、１０１０．７５０．７００．６７０．６６０．６２０゜６００Ｃ１， １ｌ−１ １Ｈ核磁気共鳴スペクトル（第２図）：（４００ＭＨｚ、Ｄ２０）δ ７、７０　（ＩＩ（、ｄ、　Ｊ＃７Ｈｚ）７．５２　（ＩＨ，ｄ、Ｊ−７，５Ｈ ｚ）７、４．４−７．２３　（７Ｈ，ｍ） ７、２２　（１）１．　ｓ） ５、５９　（ＩＨ，ｑ、　Ｊ＝７）１ｚ）４．９４　（ＩＩ（、ｔ、Ｊ−４，５ Ｈｚ）４．８５−４．７４　（３Ｈ，ｍ） ４．５８　（１）１．ｄｄ、Ｊ１１６Ｈｚ、１０）１ｚ）４．４５−４．３５　 （３Ｈ，ｍ） ４．３０　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、７Ｈｚ）４．０７　（ＩＨ，ｍ） ３．９９　（１）１．ｄｄ、Ｊ−１０Ｈｚ、４．５Ｈｚ）３．６６−３．５０　 （３Ｈ，ｍ） ３．４４−３．２５　（４Ｈ，ｍ） ３．１６−２．９３　（４Ｈ，ｍ） ２．８７　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１８Ｈｚ）２、８０−２．６８　（２）１．　ｍ） ２．５６−２．４８　（２Ｈ，ｍ） ２．０８　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ４６Ｈｚ、４Ｈｚ）１．８７−１．５３　（９Ｈ， ｍ） １．４３　（３Ｌｄ、Ｊ−７Ｈｚ） １、３０　（３Ｌ　ｄ、　Ｊ＝６．５）１ｚ）１．４５−１．１７　（４Ｈ，ｍ ） ０、９５　（３）１．　ｄ、　Ｊ−６Ｈｚ）０．８４　（３Ｈ，ｄ、Ｊ−６Ｈｚ ） １３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（第３図）：（１００ＭＨ２，０２０）δ １７７．２　（ｓ）　１０８．８　（ｓ）　２６．６　（ｔ）１７６．５　（ｓ ）　７３．３　（ｄ）　２５．１　（ｄ）１７４．６　（Ｓ）　６９．７　（ｄ ）　２３．２　（ｑ）１７４．２　（ｓ）　６４．３　（ｔ）　２３．２　（ｔ ）１７４．０　（ｓ）　６２．１　（ｄ）　２３．１　（ｔ）１７３．２　（ｓ ）　６０．９　（ｄ）　２０．８　（ｑ）１７３．０　（ｓ）　５７．１　（ｄ ）　１９．４　（ｑ）１７２、ｓ　（ｓ）　５６．０　（ｄ）　１８．３　（ｑ ）１７２．６　（ｓ）　５４．１　（ｄ）１７２．５　（Ｓ）　５３．８　（ｄ ）１７２．１　（８）　５３．２　（ｄ）１７１．７　（Ｓ）　５３．１　（ｄ ）１７１．４　（ｓ）　５２．９　（ｄ）１７０．３　（Ｓ）　５２．８　（ｄ ）１３７．２　（ｓ）　４９．５　（ｄ）１３６．０　（ｓ）　４８．６　（ｔ ）１３０．０　（ｄ）Ｘ２　４０．１　（ｔ）１２９．８　（ｄ）Ｘ２　３９． ６　（ｔ）１２８．５　（ｄ）　３９．４　（ｔ）１２７．８　（ｓ）　３８． ９　（ｔ）１２５．５　（ｄ）　３５．３　（ｔ）１２３．２　（ｄ）　３４． ８　（ｔ）１２０．９　（ｄ）　３１．７　（ｔ）１１８．７　（ｄ）　３１． ４　（ｔ）１１３．１　（ｄ）　２８．８　（ｔ）ＦＲ９０１４５１物質の医薬 として許容される塩としては、アルカリ金属塩（たとえばナトリウム塩、カリウ ム塩など）、アルカリ土類金属塩（たとえばカルシウム塩など）、アンモニウム 塩、エタノールアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ピ リジン塩などの、無機塩基または有機塩基との塩が包含されうる。

ＦＲ９０１４５１物質およびその医薬として許容される塩は、ヒト白血球エラス ターゼ阻害活性を有し、変性性疾患、たとえば肺気腫、アテローム性動脈硬化、 慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節症、乾癖、膵炎、歯周炎、肺線維症 、のう飽性肺線維症、慢性気管支炎、気管支拡張症、びまん性汎細気管支炎、慢 性気道感染、成人呼吸窮迫症候群などの治療または予防のためのヒト白血球エラ スターゼ阻害剤として有用であり、さらに、喘息、臓器移植における拒絶反応、 腎炎、水胞症、播種性血管向凝固症、ショック、全身性エリテマトーデス、クロ ーン病、虚血−再潅流時の組織障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）　、早期破 水（ＦＲＯＭ）　、角暎秦痕組織の形成または線維芽細胞増殖（眼凝固、火傷、 機械的および化学的損傷、角結膜炎など）および敗血症の治療または予防に有用 である。

ＦＲ９０１４５１物質およびその医薬として許容される塩の有用性を例証するた めに、それらの薬理試験データを以下に示す。

１、プロテアーゼ阻　試験 試験を通じて使用した緩衝液は、０．５Ｍ　ＮａＣ１を含有する０、　１Ｍ　Ｈ ＥＰＥＳ　（Ｎ　−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎｏ　−２−エタン スルホン酸）　、ｐＨ７，５であった。２ｍＭメトキシ−スクシニル−（Ａｌａ ）　２−　Ｐｒｏ　−Ｖａｌ　−ｐ−ニトロアニリド（１００ｍＭジメチルスル ホキシド溶液を緩衝液で希釈）２５μｌと試料５０μｍ（試料の有機溶媒溶液１ ０μｍを緩衝液で５倍に希釈）とを、９６ウエルマイクロタイタープレートのウ ェル中で混合した。混合物の波長４１５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレート リーダー（コロナ電気、茨城県）により測定した。測定後、６μｇ／ｍｌヒト痰 エラスターゼ（）ＩｓＥ、エラスチンプロダクツカンパニー、アメリカ合衆国ミ ズーリ州）２５μｌを加え、室温で３０分間放置する。つぎに、４１５ｎｍでの 吸光度を測定する。薬物による阻害率（％）を、１００Ｘ（１−阻害剤存在下の ｒ／阻害剤不在下のｒ）（式中、ｒは、３０分間インキュベージジン後の吸光度 −酵素添加前の吸光度である）によってめた。他のプロテアーゼに対する阻害剤 の効果も次のものを基質に用いて同様に測定した。

ブタ膵エラスターゼ（タイプ■、最終５μｇ／ｍｌ）の場合は、Ｎ−スクシニル −（ＡＩａ）３−ｐ−ニトロアニリドを、ウシ膵トリプシン（タイブエ、最終１ ６μｇ／ｍｌ）の場合ハ、Ｎ−アルファーベンゾイル−Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニ リドを、ウシ膵キモトリプシン（タイプＩＩ、最終１、５Ｍｇ／　Ｑｌｌ）の場 合は、メトキシスクシニル−（Ａ　ｌ　ａ　）ｚ　−Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−ｐ−ニト ロアニリドを、それぞれ用いた。基質ならびにＨ５Ｅ以外のプロテアーゼは全て シグマケミカルから購入した。

数種のセリンプロテアーゼの活性に対するＦＲ９０１４５１物質の阻害効果 各値は、５０％阻害濃度として表わした。

体重的１２０ｇの雄性ゴールデン・シリアン・ハムスターを日本ＳＬＣ社から入 手した。

ブタ膵エラスターゼ（ＰＰＥ）はシグマケミカルから購入した。

シアルフェリン（登録商標）は日本ロシュから購入した。

ハムスターを、ベンドパルビクールの腹腔内投与により麻酔した。

食塩水０．２ｍｌに溶解したＰＰＥ１００μｇ／部位の気管内投与の５分前に、 食塩水０．２ｍｌに溶解したＦＲ９０１４５１物質（１，１０，１００，１００ ０μｇ／部位）を経口的気管内投与した。

ＰＰＥ投与から３週間後に、ハムスターにベンドパルビタール麻酔を施した。

仰臥位のハムスターの呼吸機能を、体積測定のための定容可変圧全身ブレチスモ グラフを用いて調べた。

水を満たした食道カテーテルを用いて、胸腔圧をめた。

シアルフェリンの腹腔内投与によって自発呼吸を抑制し、肺を締圧（ＰＬ）が３ ０ｃｏｌＨ２０になるまで膨張させ、ＰＬ−Ｏｃｍ　Ｈ２Ｏまでゆっくり排気さ せ、ＰＬ　２０ＣＩｌｌ　Ｈ２Ｏまで穏かに吸引することにより、準静的収縮圧 一体積（ｐ−■）曲線を得た。

中間体積域におけるｐ−ｖ曲線の急峻な傾きを靜肺コンプライアンス（Ｃｓｔ） と定義した。

ＴＬＣ２５（ＰＬ＝　２５ｃｍ　Ｈ２Ｏのときの体積）とＲＶ−２０（ＰＬ＝− ２０ｃａ＋　Ｈ２Ｏのときの体積）との肺体積の差を肺活量とした。

Ｂ、結果 ＦＲ９０１４５１物質による前処置により、第１表に示した通り用量依存的に、 ＰＰＨによって惹起された肺機能変化を抑制することができた。

ハムスターにおけるＰＰＥ誘発気腫に対するＦＲ，９０１４５１物質の効果 ＰＰＥ投与群　１．０５±０．０６　７．．２３±０．２０ＦＲ９０１４５１１ μｇ／部位　１．０６±０．０５　６．９１土０．２０物質　（−１χ）（１４ χ） １０μｇ／部位　１．０４±０．０４　６．９９土０．１５（２り　（１１χ） Ｃｓｔ＝靜肺コンプライアンス ＶＣ＝肺活量 （２）＝阻止率 零　Ｐｒｏ、０５、基本　Ｐｒｏ、０１、零意寡　Ｐ＜０．００１（対ＰＰＥ投 与群） この発明の医薬組成物は、注射剤、吸入剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、糖衣 錠、マイクロカプセル剤、カプセル剤、坐剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤 などの慣用の医薬形態で使用できる。所望により、希釈剤または崩壊剤（たとえ ばスクロース、ラクトース、デンプン、結晶性セルロース、低置換度ヒドロキシ プロピルセルロース、合成ケイ酸アルミニウムなど）、結合剤（たとえばセルロ ース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル メチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン 、アラビアゴム、ポリエチレングリコールなと）、着色剤、甘味剤、滑沢剤（た とえばステアリン酸マグネシウムなど）などを、該組成物に調合してもよい。

この発明の該組成物の用量は、患者の年令、体重、状態などに依存するが、通常 は、目的化合物またはその医薬として許容される塩として１００口ｇ〜１０ｇ、 好ましくは同じ基準で１ｇ〜５ｇの１日量レベルで、１日１〜３回の間隔で経口 投与する。典型的な単位用量としては、５０ωｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、５ ００ｍｇ、１ｇなどが挙げられるが、これらはもちろん単なる例示であって、こ れらに限定されるものではない。

以下の実施例は、この発明をさらに説明するために示すものである。

実施例 ０．５％の酵母エキス、１．０％のポリペプトンおよび０．５％のＮａＣ１を含 有する水性種培地（１２０ｍｌ）を、３本の５００ｍ１三角フラスコの各々に注 入し、１２０℃で３０分間滅菌する。フレキシバクターＳＰ、　Ｎｏ、７５８株 の成熟斜面培養１白金耳を各々の種培地に接種する。フラスコを、回転式振盪培 養機上、３０℃で１時間振盪する。得られた種培養を、ステンレス製３０１ジャ ーファーメンタ−中の、可溶性デンプン４．８％、コーンステイープリカー１． ６％、（ＮＨ４）２５０４０．１６％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，００９６％お よびＣａＣＯ３０，３２％からなる滅菌醗酵培地に接種する。２０Ｊ！／分での 通気、１８０ｒｐｍでの撹拌下に、３０℃で２日間醗酵を行う。

醗酵液中のＦＲ９０１４５１物質の量を、インビトロエラスターゼ阻害試験によ りめる。この試験のための試料は、次のようにして調製する： 醗酵液に、激しく撹拌しながら、同体積のアセトンを加え、１時間放置したのち 、−過する。Ｐ液を減圧下・に、適量になるまで濃縮する。エラスターゼ阻害試 験は、上述した通りである。

醗酵液１００１に、撹拌下、同体積のアセトンを加え、１時間放置後、−過する 。Ｐ液を減圧下に濃縮してアセトンを除く。こうして得た濃縮液Ｈｏｏｐ）を、 ポリマー吸着剤ダイヤイオン）ＩＰ−２０（商標、三菱化成社製、３１）のカラ ムに流す。カラムを９１の水で洗い、メタノール２０ｔで溶出する。溶出液を減 圧下に濃縮し、得られた４ｊの水溶液を６ＮＨＣ１でＩ）Ｈ２，Ｏに調整し、酢 酸エチル４２で洗う。分離した水層を、つぎに、６ＮＮａＯＨ溶液でｐ）１７． ０に調整し、ｎ−ブタノール２ｊで抽出する。

ブタノール抽出液を減圧下に濃縮して、油状残留９３．２ｇを得る。この残留物 をシリカゲル（キーゼルゲル６０．７０〜２３０メツシユ、メルク社製、４５０ １１１１）カラムクロマトグラフィーに付す。カラムをインプロパツール１．５ ２および９０％インプロパツール水溶液１．５ｔで洗い、８０％インプロパツー ル水溶液１．５２により活性成分をカラムから溶出する。溶出液を濃縮し、５０ ％含水メタノールで前もって充填した逆相シリカＹＭＣ−０ＤＳ−ＡＭ　（山村 化学研究所、３００ｍ１　）によるカラムクロマトグラフィーに付す。

５０％、６０％および７０％含水メタノールの溶媒系により、カラムから、活性 物質を段階的に溶出する。最初の３４０ｍ　ｌの５０％含水メタノール溶出画分 を捨て、次のＦＲ９０１４５１物質含有溶出液１２０ｍ１を集める。

ＦＲ９０１４５１物質含有５０％含水メタノール画分を濃縮乾固し、ｎ−ブタノ ール−エタノール−水（４：　１　：　１、ｖ／ｖ）溶液３ｍｌに溶解させる。

溶液を、ｎ−ブタノール−エタノール−水（４：　１　：　１．　ｖ／ｖ）を用 いて充填しておいたシリカ（ａｓｍｌ）によるカラムクロマトグラフィーに付し 、同じ溶媒で展開する。最初の１６０ｍ１の溶出液を捨て、目的物質を含有する 次の４０ｍ１の溶出液を集める。この活性物質溶液を減圧下に濃縮して、ＦＲ９ ０１４５４物質３７ｍｇを純粋な粉末として得る。

図面の簡単な説明 第１図は、ＦＲ９０１４５１物質のＦＴ−赤外線吸収スペクトルを、第２図は、 同物質の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを、第３図は、同物質の１３０核磁気共鳴ス ペクトルを表わす。

産業上の利用可純性 この発明のＰＲ９０１４５１物質は、ヒト白血球エラスターゼ阻害剤として利用 できる。

フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，Ｓ　識別記号　庁内整理番号ＣＩ　２　Ｎ　９／９ ９　９３５９−４Ｂ／／（Ｃ１２Ｐ　１１０４ ＣＩ　２　Ｒ１：０１） Ｉ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記の物理化学的性質を有するＦＲ９０１４５１物質およびその医薬として 許容される塩： 外観：白色粉末 呈色反応：陽性：硫酸セリウム、ヨウ素蒸気、エールリッヒ、ニンヒドリン 陰性：モーリッシュ 溶解性：可溶：水、メタノール、ジメチルスルホキシド 難溶：アセトン 不溶：酢酸エチル 融点：２４３〜２４５℃（分解） 比旋光度：〔α〕Ｄ２３−１５°（Ｃ＝０．６５，Ｈ２Ｏ）紫外線吸収スペクト ル：λ▲数式、化学式、表等があります▼ｎｍ（ε）２７５（４３００），２８ １（４５００），２９０（３９００）分子式：Ｃ６０Ｈ７９Ｎ１３Ｏ１８ 元素分析：Ｃ６０Ｈ７９Ｎ１３Ｏ１８，１０Ｈ２Ｏとしての計算値：Ｃ４９．６ ８，Ｈ６．８８，Ｎ１２．５５実測値：Ｃ４９．９５，Ｈ６．２８，Ｎ１２．４ ２分子量：ＦＡＢ−Ｍｓｍ／ｚ１２７０（Ｍ＋Ｈ）＋薄層クロマトグラフィー： ▲数式、化学式、表等があります▼ ＦＴ赤外線吸収スペクトル（第１図）：▲数式、化学式、表等があります▼３３ ９０，３０７０，２９７０，２８８０，１７４０，１６６０，１５３０，１４５ ０，１４１０，１３８０，１３５０，１２５０，１１９０，１１１０，１０８０ ，１０１０，７５０，７００，６７０，６６０，６２０，６００ｃｍ−１ １Ｈ核磁気共鳴スペクトル（第２図） （４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ ７．７０　（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ７．５２　（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）７．４４−７．２３　（７Ｈ，ｍ） ７．２２　（１Ｈ，ｓ） ５．５９　（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ） ４．９４　（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）４．８５−４．７４　（３Ｈ，ｍ） ４．５８　（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１０Ｈｚ）４．４５−４．３５　（３Ｈ ，ｍ） ４．３０　（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，７Ｈｚ）４．０７　（１Ｈ，ｍ） ３．９９　（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，４．５Ｈｚ）３．６６−３．５０　（ ３Ｈ，ｍ） ３．４４−３．２５　（４Ｈ，ｍ） ３．１６−２．９３　（４Ｈ，ｍ） ２．８７　（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８Ｈｚ）２．８０−２．６８　（２Ｈ，ｍ） ２．５６−２．４８　（２Ｈ，ｍ） ２．０８　（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，４Ｈｚ）１．８７−１．５３　（９Ｈ ，ｍ） １．４３　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．３０　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）１．４５−１．１７　（４Ｈ，ｍ） ０．９５　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ） ０．８４　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ） １３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（第３図）（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ １７７．２（ｓ）　１３０．０（ｄ）×２　５６．０（ｄ）　３１．４（ｔ）１ ７６．５（ｓ）　１２９．８（ｄ）×２　５４．１（ｄ）　２８．８（ｔ）１７ ４．６（ｓ）　１２８．５（ｄ）　５３．８（ｄ）　２６．６（ｔ）１７４．２ （ｓ）　１２７．８（ｓ）　５３．２（ｄ）　２５．１（ｄ）１７４．０（ｓ） 　１２５．５（ｄ）　５３．１（ｄ）　２３．２（ｑ）１７３．２（ｓ）　１２ ３．２（ｄ）　５２．９（ｄ）　２３．２（ｔ）１７３．０（ｓ）　１２０．９ （ｄ）　５２．８（ｄ）　２３．１（ｔ）１７２．８（ｓ）　１１８．７（ｄ） 　４９．５（ｄ）　２０．８（ｑ）１７２．６（ｓ）　１１３．１（ｄ）　４８ ．６（ｔ）　１９．４（ｑ）１７２．５（ｓ）　１０８．８（ｓ）　４０．１（ ｔ）　１８．３（ｑ）１７２．１（ｓ）　７３．３（ｄ）　３９．６（ｔ）１７ １．７（ｓ）　６９．７（ｄ）　３９．４（ｔ）１７１．４（ｓ）　６４．３（ ｔ）　３８．９（ｔ）１７０．３（ｓ）　６２．１（ｄ）　３５．３（ｔ）１３ ７．２（ｓ）　６０．９（ｄ）　３４．８（ｔ）１３６．０（ｓ）　５７．１（ ｄ）　３１．７（ｔ）２．フレキシバクタ−属に属するＦＲ９０１４５１物質生 産株を栄養培地中で培養し、培養液からＦＲ９０１４５１物質またはその医薬と して許容される塩を単離することを特徴とする、ＦＲ９０１４５１物質またはそ の医薬として許容される塩の製造法。 ３．医薬製剤上許容しうる担体または賦形剤と共に、請求項１に記載のＦＲ９０ １４５１物質またはその医薬として許容される塩を有効成分として含有する医薬 組成物。 ４．医薬製剤上許容しうる担体または賦形剤と共に、請求項１に記載のＦＲ９０ １４５１物質またはその医薬として許容される塩を有効成分として含有するヒト 白血球エラスターゼ阻害剤。 ５．医薬製剤上許容しうる担体または賦形剤と共に、請求項１に記載のＦＲ９０ １４５１物質またはその医薬として許容される塩を有効成分として含有してなる 、肺気腫、アテローム住動脈硬化、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節 症、乾癬、膵炎、歯周炎、肺線維症、のう飽性肺線維症、慢性気管支炎、気管支 拡張症、びまん性汎細気管支炎、慢性気道感染、成人呼吸窮迫症候群などの変性 性疾患を治療または予防するための医薬組成物。 ６．医薬製剤上許容しうる担体または賦形剤と共に、請求項１に記載のＦＲ９０ １４５１物質またはその医薬として許容される塩を有効成分として含有してなる 、臓器移植における拒絶反応の治療または予防のための医薬組成物。 ７．医薬製剤上許容しうる担体または賦形剤と共に、請求項１に記載のＦＲ９０ １４５１物質またはその医薬として許容される塩を有効成分として含有してなる 、腎炎、敗血症、水胞症、播種性血管内凝固症、ショック、全身性エリテマトー デス、クローン病、虚血−再潅流時の組織障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ） 、早期破水（ＰＲＯＭ）、角膜瘢痕組織の形成または線維芽細胞増殖（眼凝固、 火傷、機械的および化学的損傷、角結膜炎など）または喘息を治療または予防す るための医薬組成物。 ８．肺気腫、アテローム性動脈硬化、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関 節症、乾癬、膵炎、歯周炎、肺線維症、のう飽性肺線維症、慢性気管支炎、気管 支拡張症、びまん性汎細気管支炎、慢性気道感染、成人呼吸窮迫症候群などの変 性性疾患の治療または予防の必要な患者に、請求項１に記載のＦＲ９０１４５１ 物質またはその医薬として許容される塩の有効量を投与することを特徴とする、 該疾患の治療または予防法。 ９．臓器移植における拒絶反応に対する治療または予防の必要な患者に、請求項 １に記載のＦＲ９０１４５１物質またはその医薬として許容される塩の有効量を 投与することを特徴とする、臓器移植における拒絶反応の治療または予防法。 １０．腎炎、敗血症、水胞症、播種性血管内凝固症、ショック、全身性エリテマ トーデス、クローン病、虚血−再潅流時の組織障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰ Ｄ）、早期破水（ＰＲＯＭ）、角膜瘢痕組織の形成または線維芽細胞増殖（眼凝 固、火傷、機械的および化学的損傷、角結膜炎など）または喘息の治療または予 防の必要な患者に、請求項１に記載のＦＲ９０１４５１物質またはその医薬とし て許容される塩の有効量を投与することを特徴とする、該患者におけるそれら疾 患を治療または予防する方法。 １１．肺気腫、慢性気管支炎、アテローム性動脈硬化、慢性関節リウマチ、変形 性関節症、乾癬、膵炎、成人呼吸窮迫症候群などの変性性疾患、腎炎、敗血症、 喘息または臓器移植における拒絶反応の治療的処置または予防のための医薬の製 造のための、請求項１に記載の化合物およびその医薬として許容される塩の使用 法。