JPH06510522A - 人体の好中球エラステーゼと人体カテプシンｇの抑制因子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 人体の好中球エラスターゼと人体カテプシンＧの抑制因子発明の背景 発明分野 この発明は新しいプロテアーゼ抑制因子、特に人体の好中球エラスターゼ（ｈＮ Ｅ）を抑制する小さな蛋白質と人体カテプシンＧ　（ｈＣＧ）を抑制する蛋白質 とに関連するものである。

背景となる技術の説明 好中球エラスターゼとカテプシンＧ０セリン・プロテアーゼの活性部位は非常に 類似してい９゜トリプシン、キモトリプシン、好中球エラスターゼ、カテプシン Ｇその他のプロテアーゼは非常に強い連続した相同性を持っている。いわゆる触 媒性三価元素（標準キモトリプシン番号）は、アスパラギン酸１０２、ヒスチジ ン５７、セリン１９５から成り立っている。触媒性三価元素に近い残留物（残基 、以下同じ）は、特定の酵素の基質を決定する。（ＣＲＥ１８４．　ｐ３６６〜 ７参照）消化酵素トリプシン、ひ臓エラスターゼ、キモトリプシンの構造と機能 については好中球エラスターゼよりも詳しく研究されている。基質を合わせたｈ ＮＥのレントゲン構造が解明されてｈＮＥの活性部位とトリプシンのそれとの類 似性が非常に強いことが判明している。ｈＮＥの特殊性はトリプシンより高く、 ファクターＸよりも低い。

セリン・プロテアーゼは生体組織に遍在し、次のような過程で大切な役割を果た す。消化、粗液凝固、繊維３！溶解、免疫反応、受精、ペプチド・ホルモンの並 進運動後のプロセスなど。

こうした酵素が果たす役割は重要とはいえ、制御されない不適切な蛋白質融解活 動は非常に有害である。幾つかのセリン・プロテアーゼは深刻な疾患の直接原因 となっている。

人体の好中球エラスターゼ（ｈＮＥ、または■１、ＥＣ３，４，２１，１１）は 、細胞外マトリックス°コンポーネント（ＣＡＭＰ８２、ＣＡＭＰ８ｇ、ＭＣＷ ’Ｈ８９、その他照合）に対する幅広い範囲の活動を行なう２９ＫｄｔＬ清プロ テアーゼである。

この酵素は、ポリモルフ核白血球の好アズール性か粒の主要な中性プロテアーゼ のひとつで、病原体排除と接続組織の再構築（ＴＲＡＶｌ１８）に関わるもので ある。循環アルファ１抗プロテアーゼ抑制因子（α、−ｐｒ）、）ｔＮＥの生理 学的抑制因子（）（ＥＩＤ８６）の遺伝性減少や、α、−ＰＩの酸化による非活 性化（喫煙者の気ｍ＞　においては、肺組織の広範な破壊ハｈＮＥ　（ＣＡＮＴ ８９、ＢＥｆｆ８６、Ｈ１ＪＢＢ８６、ＨＵＢＢ８９Ｌｂ。

（好中球によるプロテアーゼの過剰分泌）（炎症） （好中球の補充） ト■の不適当な活動は非常に有害で、気腫の進行を止めたり、ＣＦの症状を緩和 させるには、親和性の非常に高い抑制因子が必要とされる。抑制因子は他の有益 なセリン・プロテアーゼやエステラーゼを抑制しないように、ｈＮＥに特定のも のでなければならない。ナブル（ＮＡＤＥ９０）は過剰分泌の開始は１０１０Ｍ 　）ｔＮＥにより始まり、したがって、抑制因子は自由１１＋の濃度をこのレベ ルよりもずっと低く押さえなければならない。したがって、１１＋は優れた抑制 因子を必要とする酵素である。

プロテアーゼ３　（ｐ２９やＰＲ−３としても知られる）は非常に重要で、ｈＮ Ｅよりもさらに重要であると示唆する報告もある。ＮＬＥ８９、ＡＲＮＡ９０． 　ＫＡＯＲ８１１、ＣＡＭＰ９０．　ＧＵＦＴ９０を参照。カテプシンＧは好中 球が生産する別のプロテアーゼで、過剰に分泌されると疾患の原因となり得る。

ＦＥＲＲ９０，ＰＥＴＥ１１９．５ＡＬＶ８７．５０ＭＭ兜を参照。

且していると述べている。

蛋白セリウム・セリン・プロテアーゼ抑制因子。多数の蛋白質は、敵対する酵素 に対して限定して蛋白融解基質を制限することによって、セリン・プロテアーゼ 抑制因子として作用する。

多くの場合、反応部位ペプチド結合（小片結合）は、少なくともひとつの２硫酸 塩ループに取り囲まれている。これにより、新生の抑制因子が修正抑制因子に変 換する再にふたつのペプチド鎖が分断されないようになっている。

抑制因子の活性部位を説明するために特殊な命名法が発達した。小片結合のアミ ノ面の残留書から始まり、結合を離れた残余物はＰｌ、　Ｐ２、Ｐ３というよう に命名される。（ｓｃｈｅ６７）小片結合抑制因子には、単一のポリペプチド鎖 に幾つかの反応部位を持つものもあり、これらの個々のることが挙げられる・Ｐ 、からＰＩ”の域、特に２３から円°の域において、置換アミノ酸が抑制因子の 特殊性に大きな影響を及ぼすことが発見されている。ＬＡＳＫ８０は、Ｂｍ（ク ニ７））科において・ヲ持ツモノハニラステーゼの強力な抑制因子であり、ボウ マン−カーク科のエラスターゼはＰＩＡｊａにより抑制されるが、　ＰＩＬｅｕ では抑制されないと述べている。

次に蛋白上リウム抗エラステーゼと抗カテプシンＧ抑制因子について話を進めて いきたい。

ＨＮＥとガテブシンＧ抑制因子として知られているものに、クニッツ科抑制因子 ＵＴＩ（ＧＥＢＨ６）、ニグリン／大麦科抑制因子ニグリン（Ｓｏ（Ｎｌｉ６ｂ ）、そしてセルピン科抑制因子アルプアー抗キモトリプシンとアルファ抗トリプ シン（ＢＡＲＲ８６）がある。

σ１−プロテナーゼ抑制因子（ａ、−抗トリプシン）。ｔｍレベル過剰による疾 患の治療法として論これによると、ａ　、−ＰＩは実験測定により推定されるよ うに生体においては約１６％だけが活性であると結論きれた。それにもかかわら ず、α−ＰＩは治療効果を示している。貴注性繊維症の患者にａ、−ＰＩをエア ゾール塗布したところ、こうした治療は気管組織と損傷防止と抗マイクロビアル 防御の増加の両方に効果があることが示された。（ＭＯＥＬ９１）しかし、肺用 抗エラスチン分解剤として定期的に使用するには実際面で幾つかの問題があつ− それには、分子が比較的大きいこと（残留物３９４．５１Ｋｄ）、分子間を安定 させる２硫酸塩ブリツ抑制を報告している。これは、白血球プロテアーゼ抑制因 子分泌（ＳＬＪ’ｌ）、σ１−プロテアーゼ抑制因子（α−ＰＩ）、クロロメチ ルケトン抑制因子（Ｃｎ）を比較している。５ＬＰＩとＣｎは弧仲介細胞薄離を 抑制するか、α、−ＰＩは抑制しない。著者は、その大きさのためα１−ＰＩは ｈＮＥが活動する場所に浸透できないのではないかと提案している。この発明で 公開される抑制因子はＳＬＭよりも小さく、細胞外の隙間を自由に通過できるも のと私たちは考えている。

さらに、分割されるα、−Ｐ［とα１−１１／ｈＮＥ複合体（ＢＡＩの８８ａＳ ｂｌは両方とも好中球化学誘因子になりえる。好中球の過剰数が肺に流出し、ｈ Ｎ′Ｅを放出し、ｈ）ＩＥがα、−ＰＩど反応してより多くの好中球を肺に送る というサイクルを遮断しようとする者にとって、これは非常に不利なことである 。したかつ上モトリブノン、サブティリシン、エラスターゼを抑制するものもあ る。

と報告している。ｈＮＥ１０ｐｌｉ１２１下、７．３ｐ１１テノＰＳＴＩ−５Ｄ ３６．７ｐＨテのＰＳＴＩ−４Ａ４０．５．２ｐＨ’？：’mＰＳＴＩ−４Ｆ２ １１．：。

れまてに報告されたものは、Ｐ１浅基にあるリシン又はアルギニノであり、トリ プシンを抑制するの派生物の、多様なプロテアーゼに対する結合について報告１ −でいる。

ＢＰＴ［ＰＩ誘導体の解離定数、モル 残基　トリプシン　キモトリプシン　エラスターゼ　エラスターゼアラユ／”　 −２，８・ｉｏ’　２．５・１ｏ゛９バリン−５，７４０’　１．１’ｉｏ”’ ロイノン　−−１，９・１０４２．９・１０゛９Ｔｓｃｈｅｓｃｂｅその他の報 告から、我々は”＋”と印つけられた分子のペアに、Ｋ１≧３．５・１０−６目 立った結合はしない。だがバークマノ及びＴｓｃｂｅｓｃｂｅ（ＢＲＩＮ９０） は、殿が５．０ｘｌＯ−’Ｍであるに、を持つ、ＢＦｒｒの三つの突然変異体（ ｖｉｚ、　［１５ＦＳＩ１１７Ｆ、ｌ５２Ｅ）を作成した。

ＢＦｒｌ及びその相同体に関する研究には次のものがある。　５ＴＡＴ８７・Ｓ ｏ！Ｗ８７．ＧｏムＤ８３．ＣｍＺＢ３．　ＣＲＥエフ４．ＣＲＥエフ７ａ、Ｃ ＲＥエフ７ｂ、ＣＲＥ工８０．　Ｓ工ＥＫ８フ。

Ｓ工Ｎ’）！９０．　ＲＩＪＥＨ７３，Ｈ１ＪＥＥ７４．　）ｆＵＢＥ７５．　 ）ｒＵＢＥ７７に：Ｄ０８８．　ＰＯＮｌＢ、Ｋ工■９０゜ＡＵＥＲ８７，ＡＵ ＥＲ９０，５ＣＯＴ８Ｔｈ、　ＡＵＥＲ８８，ＡＵＥＲＩ］９．　ＢＥＣＫ８８ ｂ、　ＷＡＣＨ７９，ＷＡＣＨ８０゜ＢＥＣＫ８９ａ、　ＤＵＦＴ８５．　Ｆ工 ０Ｒ８８，ＧＩＲＡ８９．　ＧＯＬＤ８４．　ＧＯｌ、Ｊ）８８．　）ＩＯＣＨ ８４，Ｒ工ＴＯ８R゜ Ｎ０ＲＲ８９ａ、　Ｎ０ＲＲ８９ｂ、　０ＬＴＥ８９．　ＳＷＡ工ａｌｌ、　Ｗ ＡＧＮ７９イノターαトリブンノ抑制因子（ＩＴｌｌは大きい（Ｍ、　ｃａ　２ ４０．０００）循環プロテアーゼ抑制因子であり、多くの補乳類ノブラスマ内に 見られル（０００１１９０，５ＡＬ１９０、ＧＥＢｌ１９０、ＧＥＢＢ８６参ｊ ）！り、ｈＮＥに対する親a 性定数は６０〜１５０１である。カテブ／／Ｇに対するそれは２０〜６０００ｎ ｌｌである。

未だされられていない抑制因子は糖タンパク質であるが、これは強いグリコサミ ノグリカン結合を通して相互作用する３つのグリコサイレート（ｇｌｙｃｏｓｙ ｌａｔｅ）するサブユニットから成ると現在では考えられｔｌ’イル（ＯＤＯ１ １９０，ＳＭＪ９０．　ＥｌＩＧＢ８９．５ＥＬＬ８７）。ＩＴＩの抗トリプシ ン活性は最も小さいサブユニット（ＩＴｒのＬＳＩ、非グリコサイレードＩ１． 　ｃａ１５．０００）に位置しており、このサブユニットは尿（ｔｒｒｌ）５　 と血１ｌｌ（Ｓ’ｎ）に見られる酸安定抑制因子に対するアミノ酸の順序とまっ たく同様である（ＧＲＢ［Ｉ８６．　ＧＥＢＨ９０１゜成熟したＬＳＩは２１残 基Ｎ末端ｉＥｆりをなし、ＳＥＲ＋　ｏでグリコサイレートさね、二つのタンデ ム［ｕＤｏａか続いており、そのうち最初のものは＾９，５でグリコサイレート されている。

（ＯＤＯＭ９０）　人体蛋白質では２番目のクドム（ＫｕＤｏｍ）　（ｍ−Ｄ２ またはＨｌ−ＢＴ）が、トリプシン、キモトリプシン、ブラズミンに対する抑制 を示している。（ＡＬＢＲ１１３ａ、　ＡＬＢＲ３３ｂ、　５日」」７．５ＷＡ Ｉ８８）　最初のドメイン（ｍ−ＤＩまたはＨＩ４ｅ、　ＧＥＢＨ１１６）図１ に示されるび■順序の残留物２２・７６から成る）にはこうした活動が欠如して いるが（ＡＬＢＲ８３ａ−ｎ、　ＳＷＡＩ８ｇ）、白血球エラスターゼ（１０’ 　＞　Ｋ、＞　１αつを抑制することは報告きれテいル、　（ＡＬＢＲ８３Ｌｂ 、　ＯＤＯＭ９０）　タだしその効能は直接使用するには弱すぎる。

シンハ他、　（ＳＤＩ−１９１）は、Ｐｉサイト（残留物！３）でバリンがアル ギニンに取って替わっていルトキに、アルツハイマーのβ−７ミロイド前段階蛋 白質の、Ｋ、＝８００ｐＭを持つｈ＜抑制因子への変換を報告している。彼らは ３つの突然変異（ｖｉｚ、Ｒ１３Ｖ（ＰＩ）、Ａｔａｓ（ｐｒ）、Ｍ＋５ｒ（ｐ ｘ′））を持つ非蛋白セリウム・エラステーゼ抑制因子。化合物、１０２（ＸＪ ｊ３５　（５０ＭＭ９＋）とＩＱ２００Ｊ８０はトリプシンなどの他のプロテア ーゼよりも）（ＮＥを強く好むことを示している。これらの複合体は・」１片結 合の窒素アミドがσ、グループに交換しているときにおけるペプチドの類似物で ある・これらの化合物はそれぞれ、Ｐ１位置でイソプロピル・グループを持ち（ バリンのように）舵でプロリル！！留物を持つ。どちらの化合物もＰＩ’への拡 大はＺ−い。インベリアリとアベレス（１ＭＰＨ８６）は、プロテアーゼ抑制因 子は、ア七チル・ベブチデ（ル・メチル・ケトンかも成り、エル　ニスチル、こ よるＨＮＥと人体カテプシンＧの抑制について報告している。これらの複合物は どれもＰＩ′残留物を持たない。アンシェラストロ他（パＧＥ９０）は、ジケト ・グループを持つプロテアーゼ抑制因子について報告している。これらの化合物 のどれもＰＩ以上には拡大しなアミノ酸メチル・エステルがそれに続き、したが ってＰ１残留物を提供する化合物について説明している。

インベリアリとアベレス（ＩＭＰＲ８７）は、Ｐ３’まで拡大するキモトリプシ ンの抑制因子を説明している。これらの著者によって引用される研究は、抑制因 子定数に１はそれに一致ｆルｓ１°、５２’、５３゛、プロテアーゼの結合部位 、にょって大きく低下できることを示している０これらの著者はこれ以外のクラ スのプロテアーゼ抑制因子としては、小片ペプチドがボロンに交換されたカルボ ニル炭素内のものがある。これらの複合体は七リン・プロテアーゼを抑制するが 、あまり具体的ではないつ エラステーゼ抑制因子の別のクラスに、ロバート他によりＫ”Ａされているクロ ロメチルケトンがある。（ＵＳ−１，６６４，０５３）　これらの化合物はケト ・グループに隣接する塩素原子を持つ＠プロテアーゼの活性部位でリンは核子と して働き、塩化物を分離゛−１不可逆的に不活性のコバレついて説明している。

ノダ（Ｔｓｕｄａ）他（Ｃｈｅｍ　Ｐｈａ＋ｖｎ　Ｂｕｌｌ、３５（９）３５フ ロー８４　（１９１１７））は、ペプ`ド・ク ロロメチル・ケトンの合成と、）［ＮＥを含むプロテアーゼに対するその活動を 説明している。ガヌとシ＊　−（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　Ｒｅ５ｅｒｃｈ、４５ ：Ｉ−６（＋９８７））は、改善されたベブチデイル・クロロメチル・ケトン・ ブラズミン抑制因子について説明している。クロロメチル・ケトンは不可逆性付 加物を形成するので、薬品としては理想的ではない。不可逆性化合物を形成する その他のクラがある。

っていないことになる。

ここで引用した研究がすべて適切な事前研究であると認定するものではなり）。

またここ１こ挙げた日付は参考文献にあるもので、実際の出版月日と必ずしも一 致するものではない。ここに引用した参考文献はすべて引用文献欄に記載されて いる。

発明の概要 この発明は、エラステーゼに大きな親和性を持つＢＦｎやｍ−ＤＩのようなりニ ７ツ・ドメイン・セリン・プロテアーゼ抑制因子の突然変異に関するものである 。これらの変異体は、野性のタイプのドメインに比べて少なくともマグニチュー ドひとつ、場合によってはマグニチュード３つ（１０ｆＸ）倍）はど、エラステ ーゼに対して高い親和性を持つと推定される。

運動性の抑制データは蛋白質のあるものについて、結合親和性が１．Ｏｘ　１０ ”Ｎから３．Ｏｘ　Ｉ（）”の範囲にあることを示している。その他の蛋白質は 融合ファージに１示され、またｈＮＥあるいはｈＣＧへの親和性は不動化活性プ ロテアーゼ（ｈＮＥまたは’ｈＣＧ）からのｐＨ溶出プロフィールから推定され ている。幾つもの蛋白質がイースト内の選択蛋白質として有益な量で生産されて いる。

この発明はまた、人体好中求エラステーゼと／あるいはカテプシンＧと特殊結合 をするアブロトニンとそれに関連するポリペプチドの線形あるいは円形オリゴペ プチド相似体に関するものである。特にここで公開される新しいエラステーゼ結 合ポリペプチド（ＥｐｉＮｅ）とカテプシンＧ結合ポリペプチドの相似体に関連 するものである。

これらふたつの残留物のアルファ炭素の距離を著しく保つ非加水分解質結合であ る。

図の簡単な説明 図１ ｈｗ球のミニＰＥＮライブラリの分割を示す。横軸はバッファのｐＨを示す。

縦軸　は与えられたｐＨで得られるファージの量（投入）７−ジの分周）を示す ０縦軸の目盛りはｌσ。

図２ 叶正球のＭＹＭＵＴＰＥＰＩライブラリの分周を示す。横軸はバッファのｐＨを 示す。

￥ｌｉ軸　は与えられたｐＨで得られるファージの量（投入ファージの仔馬）を 示す。

縦軸の目盛りはＩＯ’。

図３ ＥｐｉＮＥクローンｌ、３と７の溶出プロフィールを示す。各プロフィールは曲 線の形をわかりゃすくするためにピークが１０になるよう目盛りが打たれている 。

図４ 割として）を示す。　縦軸の目盛りはＩＯ’。

図５ カナ１９２６球のＭＹＭＬｒＴライブラリの仔馬を示す。横軸はバッファのｐＨ を示す。

縦軸　は与えられたｐＨで得られるファージの量（投入ファージの仔馬）を示す 。

縦軸　の目盛りはＩＯ’。

図６ カテプシンＧのＭＹＭＶｒ５イブラリの第２分別を示す。

図７ カタプシンＧとの結合に選択されたファージの不動化力タブシンＧの溶出プロフ ィールを示す。

１！１８ 優先される揶抑制因子の１グループの形成を示す。この抑制因子は以後クラス… 制因子と呼ぶ。７，１１．９４０とマークされた炭素はチラルセンター（ｃｈｉ ＩｉＩｃｅｎ閤）である。

図９ 優先されるＨＮＥ抑制因子の第２グループの形成を示す。この抑制因子は以後ク ラス田叩制因子と呼ぶ。７，１１，９．１０とマークされた炭素はチラルセンタ ー（ｃｈ７ｃｅｎｔｅｒｓ）である。

図１Ｏ 結合素としての２カルボキシメチル６アミノメチル・アントラキノンを示したも のである・これと類似した大きさの比較的堅固な他の分子を使うこともできる。

図１１ 図１２ 印１３ 図１４ 図５に示される分子の一部の合成に関与する複合体℃、■から紅■を示す。

優先事項の具体化の詳細 エラステーゼまたはカテプシンＧに対する高い親和性を持つ小さな蛋白質この発 明は、エラステーゼとカテプシンＧに高い親和性を持つ、ＢＦｒｌ、　ｍ−Ｄｌ 、そしてその他のクニック・ドメインタイプ抑制因子の変異体に関するものであ る。ここで説明かれる幾つかの抑制因子はＢＦｎとある種のｍ−ＤＩから取り出 かれたものである。ただし、認識される変異体の雑種や他のクニック・ドメイン タイプの抑制因子を構築することもできる。

クドム（ＫｕＤｏｍ）は遺伝子ｍ外膜蛋白質を持つアミノ終点融解として、Ｍ１ ３の表面に顕示される。クドムアミノ酸順序の改造が紹介される。特定のクドム を顕示しているファージの純粋な集団はそれぞれ不動（ｂホｒまたはｈＣＧとの 相互作用に関連して特徴化される。特定のブロテア−クドムが明らかにされた。

続いて、これらの突然変異クドムの順序が決定された。（一般的には対応するＤ ＮＡＸＩ序による） アブロトニンのようなプロテアーゼ抑制因子の幾つかは、ＨＮＥ　（１０１１／ Ｍと高い親和性があることを示していた。これら５８のアミノ酸ポリペプチドは 、様々な合成により生成されたアブロテイニン突然変異種から生物学的に選択さ れた。Ｐｌ、ＰＩ’、ｎ′、Ｐ３°、Ｐ４°の位置は様々である。

Ｐｌでは、ＶＡＬと証だけが選択されているが、且、ＰＨＥ、　ＭＥＴも合成条 件により許可されている。（ライブラリでは探索されていないが、セリン・プロ テアーゼの多くのカザル科抑制因子は円°でグルタミン酸やアスパラギン酸を有 する）　選択された蛋白質はすべてｎｏでＰＨＥかＥを含んでいる。ＬＥＬＪ、 １Ｅ、ＶＡＬ、これらは分岐脂肪族サイドグループのアミノ酸であるが、ライブ ラリ内には存在するが明らかに［への結合を妨げている。ＩＦ＜ことに、ＨＮＥ に高親和性があるために選択された蛋白質はすべてＰ３’位置にフエニアラニン を持っている。ＨＮＥに関する特殊性を判断するためにはＰ３’位置が重要だと 指摘した者は今古でにない。Ｐ４’ではＳＥＲ，ＰＲＯ、ＴＨＲｌＬＹＳ、　Ｏ Ｌ’Ｊが許可されている。ＴＨＲ以外はすべてが見られた。ＰＲＯとＳＥＲは最 も高い親和性を持つ誘導体の中に発見されている。

前述したように、ＢＦｍは５８のアミノ酸から成る蛋白質である。ＢＦｒＴの順 序は表１３の最初に示されている。相同体では活性アミノ酸の数に多少の違いが あるので、この発明は５８のアミノ酸を持つ蛋白質に限定されるものではない。

野性のタイプのＢＦｒＴはｈｗの抑制因子としては良くない。Ｋ１５Ｌ突然変異 をひとつ持つＢＦｒｌは阪に対してやや親和性を示している。＜Ｋ、＝２．９・ １０′ＩＭ）　（ＢＥＣＫ８８ｂ）　Ｌかし、牛のインターαトリプシン抑制因 子の軽鎖のアミン終点クニック・ドメイン（Ｂｒ−ｓｅ）が蛋白質分解により生 成されており、これはＨＮＥの抑制因子となり得る可能性を示している。（Ｋ、 ＝４．４弓αＩＩＭ）（ＡＬＢＲ１１３） 徴が影響しているのではないかという仮説を立てた。

かなり電荷された残留物はＰ１残留物を含むループの基礎となるループの上に顕 示されており、二硫酸塩のブリクジで接続されている。基礎になるループ内の残 留物（特に残留物３９）はＢＦｎとトリプシンの表面との相互作用に関与してお り（ＢＬＯＷ７２）、ＢＦｎとトリプシンとの堅固な結に対して高い親和性を示 しており、残留物３９−４２において電荷残留物はいっさい持っていない。

だけ含むａｍ　（Ｋ１５Ｌ）　よりも、）ｔＮＥに対して高い親和性を示した。

位置３９にＭｅｔを持ったＢＦＨの突然変異は知られているが、位置荀、４２は 同時には変異していない。

表面７と２０８はｈＮＥに高い親和性を持つ新たなりＦｒＴ突然変異体の追加分 が示されている。

私たちは、これらの突然変異方ｔＢＦｎ　（ＫＩ５Ｖ、ＲＩ几）よりマグニチュ ードひとつ分は多くｈＮＥに対する親和性を持っているものと確信している。こ れらの突然変異体はすべて表に示されている活性部位突然変異の他に、位置３９ −４２にＭＧＮＧ突然変異を持っている。

同様に、ｔ２０９はカテプシンＧに対する高い親和性を持つ新たなりＦｒｌ突然 変異の順序を示している。　ＥｐｉＣ突然変異内のＰＩ残留物はただひとつの例 外としてＰＨＥがあるが、あとは圧倒的に留物１７）では外圧、１工、ＬＥＵと なっている。興味深いことに、残留物１６と１７は、少なくともこの小さなサン プルで見る限り大きさを補足することで組となるように見受けられる。小さなＧ ＬＹ残留物は大型のＰ）ＩＥと組になっており、比較的大型のＡＬＡはそれほど 大型ではない且や１Ｅと組になっている。あるいは、こうした組み合わせは、Ｐ ｌ゛での柔軟性によるものかもしれない。ＰＩ’がアラニンのときには駄目でも Ｐｌ“がグリシンであればフェニールアラニンのサイドグループが可能になるこ とがある。ＰＩ”がアラニンのときは、ロイシンやインロイシンが最適のように 思われる。

ＢＦｎは副作用がほとんどなく人体に用いられ・できたが、クドムは人体クドム に非常に類似しているので、免疫反応を起こす危険がさらに低い。したがって、 私たちはＥｐｉＮＥ７に見られる活性部位変化をインターαトリプシン抑制因子 の最初のクドムに移した。（例■）このアプリケーションの目的として、ｍ軽鎖 遺伝子の核酸順序の番号付けはＴＲＡＢ８６に示されているもの、Ｌｍのアミノ 酸順序はＧＥＢＨ８６の図１に示されているものとなっている。ｍ−ＤＩに必要 なコード順序は、ＴＲＡ１３８６に提示されているｃＤＮＡＭ序の位置７５０と ９１７間の１６８ベースである。人体ｍ−ＤＩのアミノ酸順序はアミノ酸％の長 さで、完全なｍ軽鎖順序のＬｙｓ−２２からＡｒｇ７７に渡る。ｍ−ＤＩのＰＩ Ｈ位はＭｅト３６である。表２２０−２２１にはある種のｍ突然変異体が示され ている。残留物は、ＰＩ残留物１５というように、ＢＦｒＴの同族クニノノ・ド メインに従って番号付けられていることに留意されたい。ｍ−ＤＩのアミノ終点 を短縮すること、少なくともＢＦｎと同族の第１残留物までの短縮は、たぶん容 認されているであろうことも言及されるべきである。

とを発見した。これらの突吠変異のパターンが組み合わされると、親和性に相乗 的な増加が見られた・さらに近接するアミノ酸（ＢＦｎ２６．３１．３４）の突 然変異は親和性をより高めた。

ここで描かれるｍ−ＩＭのエラステーゼ結合変異体は野性のタイプのドメインと は次の位置（ＢＰＴｌにつき番号付け）がひとつふたつ異なっている。１，２． ３．４．＋５．１６．１８，１９．３１．３４．さらに、次の本印の付いた突伏 変異はすべて存在している。

アミノ酸が与えられた場所でクドムの枠組に収まるかどうか。枠組を壊すような 変化は結合を算出モデルは提案される突然変異が安定したものであると示してい るか。自然に発生するクドムの順序の変異性は、ある種のアミノ酸がある場所で 収まることを証明している。例がないからといってアミノ酸が収まらないという ことにはならない。

提案される変化が構造的に容認されれば、次に、ターゲットやその他の物質への 結合にどのような影響が出るかという質問が起きる。一般に、クドムとターゲッ トの閏の界面に変化した残留物を持つ突然変異した蛋白質にはテストが必要で、 普通は突然変異蛋白質を顕示するファージの結合テストによってこれが行なわれ る。結合界面のほとんどの変化は結合を弱めるが、中には親和性を高めるものも ある。結合界面から遠く離れた残留物での変化は、蛋白質が不安定になっていな い隔りは結合を弱めないのが普通である。

表６１は３９の自然発生したクドムの変異を示している。これらの蛋白質はすべ で０からＣ５５の域で５１の残留物を持つ。、蛋白質がその終点で持つ残留物の 数が若干異なることから、残留物の合計数には多少違いがある。表６２は表６１ に含まれる蛋白質の名前のリストである。表研はこれらの順序が記録されている 研究の引用例で、表６３は、特定の変異性に対する変異性を示す軌跡が幾つある かを示したヒストグラムである。「コア（■■）」は５から５５の残留物で、コ ア以外の残留物に比べて順序と構造に大きな類似性を示している。

１０の位置で、単一アミノ酸タイプが４２ケースのすべてで観察されている。こ れらはＣ５，Ｇ１２．Ｃ３０，Ｆ３３．Ｇ３７．Ｃ３８，Ｎ４３．Ｃ５１，Ｃ５ ５である。また、これらの位置それぞれは構造を完全に失うことなく代替するこ とが可能であるという報告がある。Ｃ１１２，Ｃ１４，Ｇ３７．Ｃ３ｇだけが結 合界面に十分近く変化を起こすに足りるものがある。Ｇ１２はグリシンだけが取 ることのできる形態で、この残留物はこのままにしておくのが最善である。マー ク（Ｍａｒｋ）他（Ｍａｒｋ１１７）はＣ１４と０８の両方をふたつのアラナイ ンもしくはふたつのスレオニンと交換した。マークたちが取り除いたＣ１４／Ｃ ３８のシスティン　ブリッジは８７口の小片結合と非常に近いところにあったに もかかわらず、驚いたことには、どちらの突然変異分子もトリプシン抑制因子と して機能した。Ｂｐｎ　（Ｃ１４Ａ、Ｃ３８Ａ）　とＢｌ’■（Ｃ１，４Ｔ、０ 訂）はどちらも安定していてトリプシンを抑制した。これらの残留物を交替する ことにより、有益な抑制因子が有益な安定性を維持するチャンスを高めるかもし れない０そして１４または３８の変更を具体化する突然変異を得てテストするに は、斑紋状集団のファージ顕示が最善の方法である。

Ｃ１４／Ｃ１５二硫酸塩が取り除かれるときに限り、Ｇ３７の堅固な保存が取り 除かれる。

７つの位置（すなわち２３．３５．３５．　ｍｓ、　ａ＋、　４ｓ、４７）で、 ふたつのアミノ酸タイプしか発見されなかった。位置２３ではＹとＦだけが観察 された。フェニル環のバラ位置は溶媒が入り込めるところで結合部位からは遠く 離れている。ここでの変化は結合には僅かな影響しか与えず、斑入りに対しては それほど大切なものではない。同様に、３５にも原子残留物ＹとＷしがなく、フ ェニールアラニンはたぶんここでも良く機能しないだろう。３６ではグリシンが ほとんどを示める他はセリンが見られた。この他のアミノ酸、特にＩＮＤＡＲｌ は可能なはずで、たぶん結合特性に影響を与えるはずである。位置切にはＧとＡ しがない。構造モデルは他のアミノ酸も耐え得ることを示している。特ｉこｌＳ 、Ｄ、Ｍ、Ｎ、Ｅ、に、Ｒ，Ｌ、Ｍ、Ｑ、ＴＩ　のセットが考えられる。位置菊 は結合部位に十分近く、ここでの変更は結合に影響を与える可能性がある。４１ ではＮとＫだけが見られたが、プロリン以外の他のアミノ酸も可能なはずである 。

サイドグループでは、親水性のサイドグループが好まれる。特にＩＤ、Ｓ、Ｔ、 Ｅ、Ｒ，Ｑ、Ａ、ｌ。この残留物は結合部位からはかなり離れているので、この 変化が結合に大きな影響を与えることは考えられない。４５では、Ｆはかなり好 まれるが、Ｙが一度観察されている。フェニール環の一端が１回露出されたが、 他の芳香族の代用（ＷかＨ）　は分子に同じような構造を生み出す確率が高い。

ただし安定性にどのような影響が出るかを予測するのは難しい。ロイシンやメチ オニンのような脂肪族（分岐Ｃ，ｓを持たない）もここで作用するかもしれない 、、４フではＳとＴだけが見られたが、他のアミノ酸、特に　ＩＮ、Ｄ、Ｇ、Ａ ｔ　も蛋白質に安定性を与えるはずである。

ひとつの位置く４４）では３つのアミノ酸タイプしか観察されなかった。ここで は、アスパラギンが多数を示め、内部に水素結合を形成しているようであった。

その他のアミノ酸もおそらくプロリン以外は可能なはずである。

これ以外の残りの荀の位置については、４つ以上のアミノ酸が観察されている。

２８の位置で、８以上のアミノ酸タイプが見られている。位置２５は１３の異な るタイプを示し、５つの位置（＋、　６．１７．２６．３４）では１２タイプを 示している。プロリン（最も堅固なアミノ酸）が次の１４ノ位置でｉｇされティ る。１．２．ｌｌ、９，１１．＋３，１９．２５．３２．３Ａ、３９．４９５１ ．５８゜ＢＩｙｒ１ノφψ角度iＣＲ日８４、 表６−３、ｐ、２２２）は、プロリンが次の位置で可能であることを示している 。

１．２．３．７，９．Ｉ　１．１３．１６．］９．２３．２５．２６．３２．３ ４．３６，４０，４２，４５．４ｇ　、４９Ｊ０．５２．５RＪ４５６．４８゜ 　プロリンは４つの位置（３４，３９５７，５８）で発生し、ここではＢＦＴＩ のφψ内角度それを容認できないことを示している。私たちはこれらのケースで は主鎖がローカルに再配置するという結論を出した。

これらのデータに基き、６つのシスティンを除外して、私たちはクドム構造は表 ６５に示されているこれらの置換を許容するものと推定した。クラスは次の置換 を示している。

Ａ）置換力Ｗ、ｈＣＧに実質的に同じように結合する安定した蛋白質を与える可 能性が非常に強い・あるいは、親順序としてその他のセリン・プロテアーゼを与 える。

ＢＩＩＫと類似した結合を与えるようである。あるいはＣ）置換はクドム構造を 維持する蛋白質を与えるが、結合に影響しやすい。

クラスＣの突然変異は親和性をテストすることが必要である。これは、ＷＯ１０ ２８０９にあるようなＶ示ファージシステムを使って比較的簡単に行なうことが できる。ｈｗとｈＣＧ抑制因子の親和性は、ＢＩｙｒＩノ次の位置での置換に最 もｆＩＩＬ感である。１５．＋６．１７．１ｇ、３４，３９．＋９．１３，１１ ．２０３６゜抑制因qが ｍ−Ｄｒの突然変異の場合は、ＢＦｒｌ＆ｍ−ＤＩのシスティンを揃えることに よりこれらの位置を■−ＤＩの位置に直さなければならない。

私たちが扱っているｒＴ抑制因子のあるものは、ＰＲ−３抑制因子として有益で ある。私たちは自分たちの抑制因子のυことの相互作用をＢＦｒＴ−）リブシン 化合物への照合によりモデル化した。まずＢＦｎ！：接するトリプシンの残留物 をリストした。次に）ｕＮＥとＰＲ−３からの残留物の対応するセットを考慮し た。これらのセットは１１の残留物で異なる。これらの違いでひとつだけが５１ 特殊性のポケットで発生した。それｔｔｈＮＥのｙ、、とＰＲ３の■ｌＪある。

これにより、私たちが扱っているｈｗ抑制因子はＰＲ−３抑制因子でもあるだろ うという結論が出された。

特に、ＰＩでバリンを持つ抑制因子はＰＲ３を抑制するであろうと思われる。Ｐ Ｒ３はこの域にメチルをひとつ余計に持ち、メチルがひとつ少々い抑制因子は堅 固なた結合を行なうだろうと思われる。

ＢＰＴＩばかなり小さい。もしこれが、循環から急激に排除されてしまうなどの 薬学的な問題の原因となるとすれば、８７口により取り出されたドメインをふた つ以上結合子で組み合わせることができる。この結合子はアミノ酸ひとつまたは ふたつの順序が好ましい。好ましい結合子は人体蛋白質に繰り返されるドメイン 間に見られるものである。特に、人体ＢＦｒｌ同族に見られる結合子で、それら のひとつはふたつのドメインを持ち（ＢＡＬＤ１１５、ＡＬＢＲ８３ｂ）もうひ とつは３つのドメインを持つ（ＷＵＮ″ｒ８８）。ペプチド結合子は蛋白質全体 が再結合されたＤＮＡ技術で表されるという長所を持つ。免疫遺伝子の兵役を形 成するときに一般に使われるような非ペプチド結合子を使うこともできる。たと えば、ポリエチレングリコールに対する８７口のようなりトム、いわゆるＰＥＧ ｙｌａｔｉｏｎと呼ばれるものがある。（ＤＡＶＴ７９）　＠　ＰＥＧｙｌａｔ ｉｏｎはｄｅｒｉｖａｔｉ、ｚａｔｉｏｎ　翌奄狽■ ＰＥＧと同義。

この他に考えられる薬学的問題に、免疫遺伝性がある。ＢＦｎは人体においてほ とんど副作用なく使用されてきた。シークマン（Ｓｉｅｋｍａ朋）他（Ｓ正に８ ９）は、ＢＦｒＩとその相同体の幾つかの免疫学的特徴の研究を行なった。さら に、人体蛋白質から始めて免疫反応の可能性を抑えることもできろ。このように 、不可欠ではない残留物を変えることにより、その蛋白質をより人体蛋白質に近 いものに変えることができる。この他の修正、たとえばＰＥＧｙｌａｔｉｏｎな ども免疫反応を抑制することが観察されている。（ＤＡＶＩ７９）エラスターゼ あるいはカテプシンＧと結合する誘導されたベブチドこの発明はエラスターゼあ るいはカテプシンＧと結合する誘導されたある種のペプチドとも関連している。

これに続く説明は特にＥｐｉＮＥタイプのｈｍｍ制子子誘導化に関するものであ るが、必要な変更を加えて、ＥｐｉＣルミＣタイプブシンＧ抑制因子とｒＴＩＤ Ｉタイプのｔｔ＋抑制因子に適用することもできる。ひとつの具体化はクラスＩ の抑制因子から成り　（図８に示される）それらは次のものを含む。１）ペプチ ド残留物の最初のセグメント、２））（ＮＥの５１ポケツトと結合するが加水分 解できないアミノ酸相似体、３）ペプチド残留物の第２セグメント。これらのク ラη抑制因子は図８に描写きれる構造を持つ。

ペプチドの第１と第２セグメントとＰＩアミノ酸相似体のサイドグループ力）（ ト）五への親和性と磯のプロテアーゼへの特殊性を高めるために選ばれた。第１ セグメントと第２セグメントを結ぶグループが次のために選ばれた。１）分割を 防ぐ　２）ＨＮＥの活性お位との可逆性結合を可能にするため　３）ペプチドグ ループの形と電荷配分をまねるため。

発明の次の具体化は図９に示される円形化合物であるクラス田印制因子から成る 。これらの化合物は次のものから成る。ｌ）連結するペプチドの最初のセグメン ト、２）ＨＮＥのＳｔポケットと結合するが加水分解できないアミノ酸相似体、 ３）ペプチド残留物の第２セグメント、４）ペプチドの第２セグメントのカルボ キシ基の末端と第１セグメントのアミノ末端をつなぐ比較的堅固なセグメント。

この４番目のセグメントはセグメントＩ−３力）ヒ旧と結合する形態で存在でき るようデザインされている。セグメントｌ−３に対する考慮はどちらのクラスの 化合物でも同じである。

クラスＨの抑制因子は図９に描かれているように、Ｒ１で比較的堅固な２作用を 行なう結合子を持つ。たとえば、三環式芳香族環システムでまさに反対の作用を 行なうものがある。ひとつはアミングループがａに接続させ、もうひとつはカル ボニル炭素レベルＣＩ＋との結合を可能にする。例：２カルボキシメチル−６ア ミノメチルアントラキノン（図１０）置換物Ｒ＋”’ｌヌ、、Ｒ，，Ｒ，はクラ ス■に設定されたものと同じ可能性を持つ。

発明の３つめの具体化は、図１２に示きれるクラスｍの抑制因子で、残留物Ｐ１ ’Ｊ’２’、Ｐ３’と（オプションの）Ｒ４゛、（モしてＲ５゛）に対応するペ プチド相似体あるいは非ペプチド相似体を持つものから成る。硼酸グループある いは硼酸エステルが酵素の活性お位に収まるように配置される。

これらの化合物を合成する方法は実験技術を持つ者には知られている。

この発明内の多くの相似体は次の公式で定義される。

Ｔ−Ｐ、−Ｐ。

Ｔ−Ｐ２または ■−１ −Ｐ、’−Ｔ。

−Ｔ。

ｐ、、ｐ、：ｐ占とｐ、’、ｐ、’、ｐ、“、Ｐ、’はアミノ酸で、自然発生す るアミノ酸を含むがそれだけに限定されるものではない。これはＥｐｉＦＪＥポ リペプチドの活性部位アミノ酸と対応する。Ｔはペプチド合成物と互換性を持つ 停止機能グループで、ペプチドのエラスターゼの抑制活動を逆行させない（ふた つのＴは同じものでも興なるものでも良く、三環式を形成するために組み合わさ れても良い。） （１）ＰＩは一般分子式−ＮＨ−Ｇ（Ｒ−Ｘｃ−を持つアミノ酸相似体の残留物 である。Ｐｌ゛は一般分子式−Ｘ、−０ＩＲ−ＣＯ−を持つアミノ酸相似体の残 留物である。ＰｌとＰ、゛は共に−Ｘｅ−ｘ、ｌ−を形成し、これは非加水分解 性結合を含む （２）Ｐ、とＰ、゛は共にジペプチドの非加水分解性の硼素含有相似体を形成す る。どちらの場合も、Ｐ、とＰ、゛はＥｐｔＮＥポリペプチドの対応するアミノ 酸と同じように作用する。

いないことである。

図８はクラス■抑制因子を示すが、これはＥｐｉＮＥポリペプチドの線形ペプチ ド相似体である。

Ｒ１（Ｐ２３．Ｒ２（円）ｘ、Ｒ３（ＰＩ　’）、Ｒ４（Ｐ２’）、Ｒ５（Ｐ３ ’）、Ｒ６（Ｒ４’）に好まれる選択は次の通り。

がある。これにはεｐｉＮＥポリペプチドが含まれる。

ソロイシンのＣに類似するように）が好まれる。

Ｘ： エラスターゼ抑制活動を干渉しない非加水分解性連結。

アルファの距離を４５オングストロ一ム以上に伸ばすものではない。

ただし、より長い結合子、たとえば、−Ｃｏ−ＣＦＨ−ＣＨ，−や、−ω〜ＣＦ 、−ＣＨ□−などが使われることもある。これらの結合子ではアルファからアル ファの距離は約５−６オングストロームに伸びる。

結合子の主要原子と結合される　Ｃアルファ　炭素が、通常のペプチド結合に見 られるように実買上同じ面に横たわることはできれば望ましいが、不可欠ではな い。

Ｒ３ニ ーＨ１または小さなアルキルやアルコキシ基グループなど、１−１０の炭素とＯ −３のＮ、Ｏ，Ｓ、ＣＴ、Ｆ原子を含む脂肪族グループ。作用性−Ｈ，−０（、 、−０（、−５ＯＯＨ，−０木、α−ＣＯＯＨ０これによりＣ８がグリシン、Ｌ −アナリン、Ｌ−アスパラギン酸、またはＬ−グルタミン酸のＣアルファにそれ ぞれ類似できるので望ましい。他の可能性としては、エチル、イソプロピル、ｎ −プロピル、ヒドロキシメチル基（形成上リンなど）、またはヒドロキシエチル 基（形成ホモレリンなど）。

４−７の炭素を持つ非分岐脂肪族グループまたはアリルアルキルグループ、ここ ではアルキル成分はｌ−３の炭素でアリル成分は単環式または二環式で、異種Ｎ 子（Ｎ、Ｏ，Ｓ）やハロゲン（Ｃ１，Ｆ）置換物を含むこともある。作用性−０ 雪−フェニールと−ＣＨ，−０（、−５−Ｃに。これによりａがレフエニールア ラニンまたはり、メチオニンのカルファに類似するので望ましい。

Ｒ５： 上記のＲ４の項で説明されているようにアリルアルキルグループ。より望ましい のは、アリルメチルグループ、特に−色−フェニールグループ（Ｌ−フェニール アラニンなど）である。

字であることが望ましい。

Ｒ７： 小さなアルキルグループ（ｌ−４の炭素原子）、℃へ、　−〇も−ｑ、−Ｇ（（ Ｃ）ＩＩ）ｍなど。

Ｒ１では、溶解度を高めるためにブロックされていないアミノグループを持つこ とが望ましい。

アミノ酸は疏水性のものが好ましい。というのは、５２１分子では、この位置に 半分のシスティンがあり、二硫酸塩（−５−５−）結合が疏水性だからである。

にでは、２．プロピルグループが特に好まれる。これは、ＥｐｉＮ口結合は誘導 体やｌでＬＨ！　持つ誘導体に対してよりも）（ＮＥに対してより堅固だからで ある。だが２−ブチルで、β炭素での偏光力が自然状怒で見られるＬ−ＩＩ−Ｅ 内と同じであることが好まれる。図１でａとマークされている炭素がしバリンと 同じ偏光力を持つことが好ましい。ａと０で不特定の偏光力を持つ化合物を使う こともできる。ＯとＣＩＯでの偏光カカｔアミノ酸と同じであることが好ましい 。ｎはまた、−ｃｙ（、−σ、、−ＳＨ，−０（、でもよい。

Ｒ３ではぐ鳩が好まれる。・Ｈ，−０（、−ＣＯＯＨ，または−Ｃ）ｔ、ＯＨも 使われることがある。

Ｒ４＝−Ｇｌ、−フェニルであることが特に好まれ、またＲ４　＝−０（、−０ （、−５−０（、であることも好まれる。

Ｒ５＝−Ｇｌ、フェニルが特に好まれる。他にモノメチルフェニルやジメチルフ ェニル、ナフチル基（ａまたはβ）、ヒドロ謳ジフェニル（ｏ、ｍ、またはｐ） 、メトキシフェニル基などの中性アリルグループも−０（、−グループに付帯す ることができる。

Ｒ６は特殊性と融解度によって選ばれる。−ＯＨ，−ＮＨ，、Ｌ−セリン、Ｌ− プロリン、Ｌ−リジンなどが好まれる。

バーフルオル基化合物の合成は、水素やフッ素を幾つか持つ化合物の合成よりも 簡単なことがしばしばある。よって、Ｘ＝ト■−σ、−１、Ｒ３＝−Ｆまたは【 下８、そしてＨ８をＦで置換することにより、好まれる化合物ができる。

能グループが７ミノグループＮ７と結合できるという複数の機能グループを持つ 。機能グループは希望する堅固さを加えるためにひとつあるいはそれ以上の環を 含む。

Ｒ１はまた望ましいスパンを持つ。これにより、Ｒ１が適切な形態でＣ７，Ｃ８ ，Ｃ９，ＣＩＯを保持できる０ＢＦｒＩ内ではＣσ−１５とＣ−１８は１０オー ムストロング離れている。したがって、瓢は同様に約１０オームスストロングの 間隔を与えるはずである。

たとえば、２．６ジメチルアントラセン内では、メチル炭素の間隔は約９オーム ストロングある。ジメチルアントラセンは、Ｃα−１５とＣ−１８間で望ましい 間隔よりも短いので、ひとつのメチルグループにカルボキシル酸を付け、他のグ ループにはアミノグループをひとつ付けた。これにより結合子を約２オームスト ロング延長した。

メチレン基グループやアミノ酸及び／あるいはカルボキシル酸グループの挿入や 除去は、特定の結合子により与えられる間隔を最適にするのに望ましい方法であ ると考えられる。

アントラセンは疏水性が高い。よって、アントラキノンなどのように、より溶解 度が高く、より簡単に退行できる誘導体のほうがより適切であろう。アントラセ ン核の誘導に加えて、環システム内にひとつまたはそれ以上の異質原子を配置す ることは融解度を高め毒性を下げるために有益であろう。より簡単にイオン化で きるグループ（例−５０３−または−Ｇ（、−ＮＨ，＋）をひとつまたはそれ以 上原子核に付着させることも有益であろう。（遺ｐＨなどの中性溶解グループも 有益である。ＨＮＥに結合する高い親和性を持つＥｐｉＮＥｓは正の電荷を持ち 、溶解グループとしてアミングループを好む。

適切なフレームワークとして適切なものにはこの他次のものが含まれる。テトラ サイクリン（特に２．ｌＯ誘導体）　（Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ ｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、　Ｅｉｇｈ由Ｅｄ奄狽■奄 盾氏A　Ｅｄｉｔｏｎ　ＧｉＬｍｓｕ４　Ｒａ１ｌ。

Ｎ１ｅｓ、　Ｔａｙｌｏｒ、Ｐｅｒｍｉｇｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、　＋９９０．　ｌ ５ＢＮＯ−０８−０４０２９６−１１（以後ＧＯＯＤ−８）Aｐ、１１１７）、 フェノサイアジン （ｐ、３９６．ＧＯＯＤ−８）、７　ルプロティリン（ｐ、４０７．ＧｏｏＤ− ８）、カルバマゼピン（ｐ、４４７．ＧＯＯＤ−８）、アポｃ■ フイン（ｐ、４７３．　ＧＯＯＤ−８）。結合子をデザインするときには、フレ ームワークに付着している望ましくない不要な薬学的特性を生ずるようなグルー プを除去する。

ブリッジ構造として適切な例をざらに挙げると、それはＰｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ である。

図１２はクラス１抑制因子の形を示している。これらの分子はクラス■の抑制因 子と同じように線形である０碩酸グループがＨＮＥの活性部位に収まるように位 置しているのを例外として、Ｐ５．、Ｊ’ｌが欠如している。硼素原子は、普通 ９１ミノ酸のカルボニル炭素のように親電子性で、それと同じように活動する・ 硼酸グループは自由（ＤＩ−Ｄ２−ＯＨ）あるいはエステル化されることもある 。硼酸エステルは血清内でいつでも氷解できる。−Ｂ（ＯＨ）−ＣＩ（、が小片 結合と置換することに留意かれたい。

Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６に対する選択はクラス■抑制因子と同様である。

生体で使用するときには抑制因子は吸収、摂取、吸入、注入などの方法で投与す ることができる。注入する場合は、静脈、筋肉、皮下などに注射する、また錠剤 、カプセル、塗布薬、シロップ、エリキシルなど、どのような形をとってもかま わない。これらについては最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅ ｕｔｉｃａＪ　５ｃｉｅｎｃｅｓを参照されたい。適量を判断するには、非常に 小量から始めて、臨まれる抑制効果が観察されるまで増加させていく方法を取る か薬学効果を得るために知られているその他の方法を取る。抑制因子は好中級エ ラステーゼの過剰活動に悩まされている哺乳類、特に人頭に投与することができ る。

この研究によるペプチドと蛋白質抑制因子は、実験で検証されているどのような 方法をもっても生成することができ、次のような方法がある。対応する遺伝子や ホスト細胞の分割溶解蛋白質にコードされている遺伝子の圧出（シｍｂｒｏｏｋ 他を参照）、関連する蛋白質に基づいた半合成Ｔｓｃｈｅｓｃｈｅの研究を参照 ）、または直接の有機合成などがある。ペプチド結合はＦｍｏｃ、　［ｏｃまた ：よその他のペプチド合成化学を使って生成することができる。５ＯＬＩＤ　Ｐ ）ＬＡＳＥ　ＰＥＦｒＩＤＥＳ　ＹＮＴＦｒＥｓＴＳ：　Ａ　Ｐｒａｃｏｃｓ　 Ａｐｐｒｏａｃｈ　（１三　Ａ山ｅｎｏｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ｃ，５ｈｅｐｐａｒｄ 、ｒＲＬoｒｅｓｓ　ａｔＯｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。

０ｘｆｏｒｄ、　Ｅｎｇｌａｒ＋ｄ、　１９１１９．１ＳＢＮＯ−１９−９６３ ０６７Ｊ）、ＴＨＥ　ＰＲＡＣＴＴ口ＯＦ　ＰＨＦｒＴＤＥ@５ＹＩｆｒＨＥＳ ＩＳ 二と。

る。

参考例 親和性の測定 法を示している。この方法は比較的純粋な蛋白質と結合蛋白質と非結合蛋白質と の識別を必要とする。

抑制因子の酵素に対する親和性を測定するのに適切な第２の方法は、酵素の活動 を低下させる抑制因子の能力を測定するものである。この方法は酵素が基質を分 割する速さとクロム遺伝子またはフッ素遺伝子の能力にもよるが、数十マイクロ グラムからミリグラムの比較的純粋な抑制因子を必要とする。

蛋白質の第２の物質に対する親和性を測定する第３の方法は、Ｍ＋３のような遺 伝パブケージにその蛋白質を顕示し、固定された「第２の物質」に付着する蛋白 質の能力を測定する。この方法は遺伝パンケージが増幅できるのでたいへん感度 が高い。これはまったく新しい方法ではファージ顕示される抑制因子を判断する ための標準プロフィールが設定された。！Ｅ２０３はＢＦｒＩフロフィールの相 対的な形状により上位抑制因子を認識することができるのである。

Ａｓなｎｚｉ他（ＡＳＣＥ９０）はＢＦｎの人体と牛の凝血因子Ｘへの結合にお ける熱力学を研究してし１のＰＫ！を効果的にプロトン化のために低下させるこ とである。

この発表の実験仕様全体を通じてラブクエーク（Ｌａｂｑｕａｋｅ）の撹拌培養 が使われた。

固定人体好中球エラステーゼの準備 ｌｒｎ＋の反応ジェル（Ｒｅａｅｔｉ−Ｇｉ）　６　ｘ　アセトン内（２００！ １バツクビーズ（ｂｅａｄｓ／球体））の■■活活性化アロローズａｇ豚＞　（ Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社）が、空の５ｅｌｅα−Ｄスピンコラム（５ プライム−３プライム）に入れられた。アセトンは排出きれ、ビーズは氷水の温 度の１．０ｍｌの冷水と同じく氷水の温度の１００ｍＭの硼酸１．０ｍｌ、ｐＨ ８，５，０９％ＮａＯで素早く２回洗浄された。硼酸塩バッファ内の２００μｍ の２．０ｍｄｍ１人体好中球エラスターゼ（ｈＮＥ）（カリフォルニア州すンデ ィエゴＣａＪＢｉｏｃｈｅｍ社）がビーズに加えられた。コラムは封印されラブ クエーカー撹拌器を使って４°Ｃで３６時間撹拌された。ｈＮＥ溶液が排出ｓｒ ｅ、ビーズは氷水の温度の２．０Ｍ　Ｔｒｉｓで洗浄された。

ｐＨ８，０，４°Ｃで２時間以上、残りの反応グループをブロックした。７８５ ７ＢＳＡ内のビーズの５０％スラリーが準備されたうこれに同量の滅菌した１０ ０％グリセロールが加えられ、ビーズはｂ％スラリーとして一２０’　Ｃで保存 された。使用に先駆けて、ビーズはＴＢＳ／ＢＳＡで３回洗浄され、’ｎ３ｓ／ ＢＳＡのスラリーが準備された。

例■ ファージのクロン的純正集団の特徴化と分別、各々単一キメラ　アブロティニン 相似体／ＭＩ３ｍ蛋白質を顕示する。

この例では、ターゲット結合ドメインを示すキメラファージ蛋白質が固定ターゲ ットからｐＨを下げることにより圧出できることと、蛋白質が圧出されるときの ｐＨがターゲットに対するドメインの親和性を示していることを説明するもので ある。

標準的な手順 特に記されていない限り、すべての操作は室温で行なわれた。また特に記されて いない限り、すべての細胞はＸＬＩ−Ｂｌｕｅ（ＴＭ）　（カリフォルニア州う ホー旭Ｓｍｕｇｅｎｅ社）である・１）活性トリプシン・ビーズへのＢＦｎ−Ｉ ＩＩ　ＭＫの結合の論証私たちはＢＦｎ−Ｉｎ！［示ファージの固定活性トリプ シンとの結合を論証した。顕示ファージの固定活性プロテアーゼとの結合とそれ に続く感染ファージを固有のｐＨ容出出プロフィール論証することは、何十マイ クログラムもの突然変異蛋白質を生成し純化しなくてすむので、特定の突然変異 についての間を容品にするものである。

ファージＭＫは遺伝子開城にｋａｎＲ遺伝子を挿入することにより、Ｍ１３から 取り出された。

エン酸ナトリウム、ｐＨ６，５，１５０ｍＭ　Ｎａ１１．１．Ｏｍｇ／ｍ１Ｂｓ Ａ　（ＣＢＳ／ＢＳＡ）バフ７７内のどちらかのＢＦｒｌ−ＩＩＩＭＫファージ の感染性はＭＫファージの５倍はど低くなっている。よって、上記で選択された 条件はファージ粒子のほぼ等しい数がトリプシンのビーズに加えられることを確 かにする。

ラブクエーク撹拌器（カリフォルニア州バークレー、Ｌａｂｉｎｄｕｓｔ１１ｅ ｓ社）で３時間撹拌された後、それが適切な場合には、ＴＢＳ／ＢＳＡあるいは ０３５／ＢＳＡの０．５ｍｌがサンプルに加えられた。ビーズはその後５分間洗 浄され、遠心器に時分かけられて回収された。上澄み液が取り除かれて、０．５ ｍｌの’ｎ３ｓ／ＣＪ、Ｉ％Ｔｗｅｅｎ−２０が追加された。ビーズは撹拌器で ５分間攪拌され遠心器で回収された。上澄み液が取り除かれて、ビーズは上記の ＴＢＳ７０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０でさらに５回洗浄された。最後にビーズは０ ．５ｍｌの容量バ７フｙ　（１，０ｍｇ／ｍ１ＢｓＡを含みグリシンでｐＨ２， ２に調節されている０、１Ｍ　ＨＣＬ）の中に入れられ、５分間撹拌されて遠心 器で回ＶＩＮＣ７４）　ＭｘＩＪ御用ファージ（ＢＦｎｉｌ示なし）では固定ト リプシンへの結合はずっと低い割た。よって、肝１を顕示する融解ファージは活 性トリプシンのビーズへの付着し、感染ファージとしての回収できる。

ＢＦｎのＰＩ突然変異の生成 りＦｒ１−ＦＩＴ融解ファージと固定セリン・プロテアーゼの相互作用の特殊性 を論証するために、単一アミノ酸置換カｆ′ＢＦｒＴ−ＩＩＩ融解蛋白質のＰ１ 位置に導入された。（ＢＦ′ｒＩの残留物＋５）Ｋ１５Ｌ変更が望まれたのは、 ＢＦｎ　（Ｋ１５Ｌ）が人体好中球！　ラスｆ−ゼ（ＨＮＥ）　（ｉｃ、＝２． ９−ｔｏＪＭ）に対してはわりと良い抑制因子であるが、トリプシンに対しては 良くないからである。ＢＦｎ（ＫＩ５Ｌ）を顕示する融解ファージは固定ＨＮＥ とは結合するが、固定トリプシンとは結合しないＯＢＦｎ−ｒＩＩＭＫ融解ファ ージは反対の表現型を顕示している（トリプシンに結合し、ＨＮＥに結合しない ）。これらの観察はＢＦｎ−ＩＩＩ融解ファージの固定セリン・プロテアーゼに 対する結合の特殊性を示しているう ＢＰＴＩ−ｒｌｌＭＫとＢＦｒＴ　（Ｋ１５Ｌ）　−ｒＩｒＭＡファージの固定 トリプシンと人体好中球エラステーゼに対する親和性の特徴化 されＬＢ液で希釈され、斑形成ユニット用に力価が測定された。

ではＨＮＥから解離するのではないかと予想された。

融解ファ−−ジを解離させるには中性のｐＨ条件で十分かもしれない。

ＢＦｒｌ　（ＫＩ５Ｌ）　−ＩＩＴＭＡファージ３０μｌ　（ＴＢＳ／ＢＳＡ内 で１．７４０”ｐｆｍ／ｍ＋）力’ＴＢＳ／ＢＳＡ内のＨＮdビー 力Ｏ％スラリー５１１に加えられた。同様にＢＦｒＴ−ＩＩＩＭＡ　７　ｙ−ジ ３０ｐ１　（ＴＢＳ／ＢＳＡ内で８６１０”ｐｆｍ／ｍｌ）力’ｒＢｓ／ＢｓＡ 内の）ＬＮＥビーズ５μＩに加えられた。したがって、はとんど同じ数のファー ジ粒子がビーズに加えられたことになる。サンプルは３時間撹拌されながら培養 された。その後ビーズはＴＢＳ／ＢＳＡ０．５ｍｌで洗浄され、遠心器で回収さ れた。ビーズは０．５ｍｌのＴＢＳＡ）、１％Ｔｗｅｅｎ−２０で５分間洗浄さ れ、遠心器で回収された。その後さらに４回、ＴＢＳｌｏ、１％Ｔｗｅｅｎ−２ ０での洗浄が行なわれた。ビーズは１００ｍ　Ｍクエン酸ナトリウム０．５ｍｌ 、ｐＨ７，０，１，０ｍｇ／ｍ１ＢｓＡ含有で洗浄された。遠・し・器で回収さ れて上澄み液が取り除かれた。ＨＮＥビーズは続いて１００ｍＭクエン酸ナトリ ウム０．５ｍｌ、１．Ｏｍｇ／ｍ１ＢｓＡ含有、ｐＨは６，０．５０．４０．３ ０、そして最後は２．２の出出バッファで洗浄された。ｐＨで洗浄された後は、 １ＭＴｒｉｓ、　ｐＨ８，０を」液で希釈したもので中和され、斑形成ユニット 用に力価が測定された。

釦０３は投入されたＢＦｒＴ−ｒＩｒＭＫ融解ファージのＨＮＥビーズに対する 付着の割合が低いことと、回収されたものはｐＨ７，０と６０で洗浄されたもの が圧倒的に多かったことを示している。著しく高い割合でＢＦｒＴ　（Ｋ１５Ｌ ）−１１１ＭＡバーシカ）ひ旧ビーズに結合しており、ＰＨ５，０と４．０での 洗浄で多くが回収されている。よって、Ｂ円’Ｔ（ＫＩ５Ｌ）−ｒＩＩＭＡをＨ ＮＥから解離するにはＢＦｒＴ−ＭＫファージを解離するよりも低いｐＨ条件（ すなわちより厳しい条件）が必要とされる。

Ｂｖｒｎ　（Ｋ１５Ｌ）の親和性はＢＦ′ｒＩのＨＮＥに対する親和性よりもｌ ０ＣＤ晧以上大きかった（報告されたに、値を使って（ＢＥＣＫ８８ｂ）　）。

よって、これはＨＮＥに対して高い親和性を持つＢＡＪ’ｌ変種を顕示するファ ージを解離するにはより低いｐＨ条件が必要とされることを提案している。

固定沿伍１こ対する親和性において、ＢＦｎ（Ｋ１５Ｌ）の残留物３９４２の突 然変異の影響ＢＦｎ　（ＫＩ５Ｌ、ＭＯＮＧ）ＩＩＩＭＡ７ｙ−ジ（ＴＢＳ／Ｂ ＳＡ内で９．２１Ｏ’ｐｆｕ／ｍｌ）　３０ｐ　ｌが、ＴＢＳ／ＢＳＡ内■ 固定Ｗ伍の５０％スラリー５ＰＬに加えられた。同様に固定■伍に刃μＬのＢＰ ′ｒＴ（Ｋ１５Ｌ）　−１１ＩＭＡファージ（ＴＢＳ／ＢＳＡ内で１．２１Ｏ” ｐｆｕ／ｍυが加えられた。サンプルは３時間撹拌しながら培養された。ビーズ は０．５ｍｌのＴＢＳ／ＢＳＡで５分間洗浄された後で回転にかけられた。ビー ズは０．５ｍｌのＴＢＳＫＪ、１％Ｔｗｅｅｎ−２０で５分間洗浄された。最後 に、ビーズは引続き１００ｍ　Ｍクエン酸ナトリウム・バッファの次の各ｐＨで 洗浄された。ＰＨ７，０，６，０，５，０，４７５，４５，４２５，４，０，３ ，５゜ｐＨで洗浄された後は中和されてＬＢ液で希釈され、斑形成ユニットの力 価が１定された。

！！２０４はＢｐｎ　（Ｋ１５Ｌ、　ＭＧＮＧ）　−ｍのほう力１本田ビーズに 結合しているＢＦｒｌ（Ｋ１５Ｌ）−Ｉ［ＩＭＡファージよりも２倍以上になっ ていることを示している。どちらの場合も、ｐＨ４，７５部分が回収ファージの 最も大きな割合を占めているおり、これは野性タイプのＢＦＨの残留物３９−４ ２をＢｌ−にのＭ３９ＯＮＧで置き換えることにより、ＢＦｎ（Ｋ１５Ｌ）変種 のＨＮＥに対する結合を強めたことを確証している。

ＢＦｎ（ＫＩ５Ｖ、Ｒ１７Ｌ）−１７ＩＭＡの構築ＢＦＩ’Ｔ　（ＫＩ５Ｖ、Ｒ Ｉ７Ｌ）は今までに説明されているすべてのＢＰＴ［変種の中でも既に対して最 も高い親和性を示している。（Ｋ、＝６１αＩＩＭ）（ＡＬｒＥＲ８９）。溶出 システムをテストするために、このＢＦｒｌ　（ＫＩ５Ｖ、Ｒ１７Ｌ）を顕示し ているファージが生成され、自由）ＩＮＥへの既知の親和性を持つＢＦｒｌ変種 を顕示している融解ファージの固定ＨＮＥへの親和性を特徴化するための参考用 ファージとして使われた。

固定ｍに対するＢＦｎ　（Ｋ１５Ｖ、Ｒ１７Ｌ）　−ＩＩＩＭＡファージの親和 性ように、ｐＨ５，０から４３の部分で最も多く回収されている。ＢＦｎ　（Ｋ １５Ｖ、Ｋ１几）の親和性はＢＦｎ（ＫＩ′ｉＬ）の冷圧に対する親和性よりも ４倍高い（Ｋ、値使用、ＢＰＴＩ（Ｋ１５Ｖ、Ｋ１几）にはＡＬａ１１９、由Ｈ ＮＥに対する高い親和性を示すＢ円１変種を顕示する融解ファージを固定階層か ら解離するには、より低いｐＨ条件が必要であるという推定を裏付けるものであ る。

例■ 訃正に高い親和性を持つＢＦｎ誘導体 私たちは、ＢＦｒＴ突然変異がＭ＋３から取り出される顕示ファージの表面に、 遺伝子ｍ蛋白質（ｇＩＵｐ）へのアミノ終、ヴ融解として現れるようにした。Ｍ １３はピリオン（ＶＴＲＩＯＮ）につき約５つのｇｍｐコピーを持つ。

私たちのファージ・ライブラリ理論には位置１５と１７でＰＨＥ、Ｌ日Ｊ、ＬＥ 、ＶＡＬ、ＭＥＴを、位置１６でＧＬＹまたはＡＬＡを、位置１８でＰＩ（Ｅ、 ＳＥＲ，ＴＨＥＲ，ｎ）Ｅを、位置１９テＳＥＲ，ＰＲＯ，ＴＨＲ工ＹＳ、ある いはＧＬＮを持つ１７２８のＢＰ′ｒＩ突然変異が含まれていて、ＢＦｎ遺伝子 の圧出の結果として（前述のＭＯＮＧ突然変異のコード化）、ランダムにコント ロールされる変異遺伝子により、固定ＦＩＮＥで突然変異を持つファージを培養 し、より酸性のバッファで積極的にファージを溶出することにより、ｔｔ＋結合 活動をスクリーンする。２０の突然変異（′ａ２ａ７−２０１１のクロン識別子 を参照）が順序付けのために選択され、８つのユニークな順序が示された。表２ ０７　ｈ　２０８は、ｈＮＥに高い親和性を持つＢＦＩＴ誘導体の９つ（８に事 前調査で識別されたもうひとつを加え）の順序が示されている。これらは、ｐＨ ３，５で溶出されたジ静圧１　、　ＥｐｉＮＥ３．　ＥｐｉＮＥ５．　Ｅｐｉ？ ＪＥ６．　ＥｐｉＮＥ７と、ｐＨ３，５−４で溶出され■dｐｉ聞込 ＥｐＬＮＥ４．　ＥｐｉＮＥｌｌである。

を顕示していることを提案している。

ＥｐｉＮＥｌ、　ＥｐｉＮＥ３．　ＥｐｉＮＥ７は溶性蛋白質として圧出され、 そのＨＮＥ抑制活動がカステイロ他の蛍光計評価で測定されている（ＣＡＳＴ７ ９）。データはグリーン及びワークの方法で解析されているのＬＥＵ、　ＰＨＥ 、またはＰｖ［ＥＴの例は観察されていない。

（ｎＥｃｘｇｇｂ）。

ＰＨＥは位置１７で強く好まれ、２０のクローンのうち１２に現れている。Ｅは この位置で次に優勢な残留物であるが、位置１５にＶＡＬがあるときにだけ現れ る。位置１８では、ライブラリではこの位置で他の残留物も含むべきにもががわ らず、ｐ＋が順序付シナられなりローン２ｏのすべてに現れている。この結果は 非常に驚くべきもので、今までのＢＦｎの突然変異解析からは予想できに優勢な 残留物別又は２０のコドンのうち６つにしか現れていない。この研究で変異遺伝 子にターゲットを当てている残留物のうち、残留物１９はＨＮＨの抑制因子の相 互作用表面の端に一番近い。それにもかかわらず、ＰＲＯの優勢が観察されるの は、位置１９でのＰＲＯは、位置１８でのＰＨＨのように、これらの蛋白質のＨ ＮＥへの結合力を高める役割を果していることを示しているのだろ位置１８は特 定のセリン・プロテアーゼに対するアブロティニン相似体や誘導体の特殊性や親 和性を決定するのに重要な位置であるとは、今まで認識されてぃなかった。今ま でに、位置１８のフェニルアラニン力）（ト）ｒへの特殊性や高親和性に寄与す ると報告したり提案した者はいない。

例■ ｈＣＧに高い親和性を持つＢＦｎ誘導体ＢＦｒｌ突然変異を有するファージの同 じライブラリが、カテプシンＧの結合活動についてスクリーンされる。図７には 個々のカテプシンＧ結合クローンの結合とｐＨプロフィールが示されている（Ｅ ｐｉＣ変種に割り当てられる）。クローンはすべて小さなピークを示しており、 ｐｈｓ　（クローンｌ、８．１０、Ｕ）の溶出とｐＨ４，５（クローン７）にお いて、結合したファージが徐々に低下していくのと重なっている。　１０９はカ テプシンＧビーズの結合を示すクローンを報告している＠Ｅｐｉｃ変種とカテプ シンＧ、またｈＮＥに対するＥｐｉＮＥのｐＨプロフィールを比べると、Ｅｐｔ ＮＥ変種はｈＮＥに対して高い親和性を持っているが、ＥｐｉＣ変種はカテプシ ンＧに対してほどほどの親和性しか持っていない。

ＥｐｉＣ突然変異の２１残留物は圧倒的にＭＥ１′でひとつＰＨＥ例があるだけ だが、ＢＦ１’ｌではＬＹＳで、ＥｐｉＣ変種では■ん−またはＬＥＵのどちら かである。ＥｐｉＣの突然変異では残留物１６はほとんどＡＬＡでひとつだけＧ ＬＹの例がある。残留物１７はＰＨＥ、１Ｅ、またはＬＥＵである。おもしろい ことに、少なくともこの小さなサンプルで見る限り、残留物１６と１７は大きさ を補足しながらベアになるようである。小さなＧＬＹ残留物は大きなＰＨＥと組 になり、比較的大きなＡＬＡはそれよりも小さいＩＪＥＬＩや１Ｅとベアになっ ている。位置１８と１９が使えるＭＹＭｔＪＴライブラリにある残留物の大部分 は、Ｅｐｉｃ変種に代表されている。

例■ ｍ　：　ｈＮＥに対する高い親和性を持つ誘導体顕示ベクトルのａ築 私たちはＴＲＡＢ　１１６にあるｍ軽鎖遺伝子の核酸番号付は方法と、ＧＥＢＨ ８６の図１のびＨに示されているアミノ酸番号付は方法を使用している。またＳ ＡＭＢ８９とＡＵＳＵ８７で標準方法とされているものに従ってＤＮＡの操作を 行なっている。

人体ｍ、ＤＩの蛋白質順序は５６のアミノ酸残留物から成り、完全なｍ軽鎖順序 のＬＹＳ２２からＡＲＧ７７までに渡っている。この順序は、ＴＲＡＢ８６に示 されているｃＤＮＡ順序の位置７５０から９１７の間の１６８の基部によりエン コード（ｅｎｃｏｄｅ）されている。このアミノ酸順序をエンコードしているＤ ＮＡは標準の方法で、Ｍ＋３遺伝子Ｉｉｉに導入されている。含有するｍ−ＤＩ −ｆｆｌ溶解遺伝子を隔離するファージはＭＡ−ｍと呼ばれ、ｕｎｐＲ遺伝子を 保有する。ｍ−ＩＭ：・ｍ融解蛋白質の圧出と、７ア一ジ表面へのその顕示は、 ウェスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）の兎の抗（ｈｍ）１ｍ清を使った分析とファーシ カ価中和実験により論証されていた。

アガローズ固定プロテアーゼ　ビーズに結合されるＭＡ−ｍファージの分別ｍ− ＤＩ−１１１融解蛋白質を顕示しているファージがプロテアーゼ人体好中球エラ ステーゼ（ｈＮＥ）あるいはカテプシンＧと強力に相互作用しているかどうかテ スト下るために、顕示ファージの部分標本がアガローゼ固定ｈＮＥまたはカテプ シンＧのビーズ（ｈＮＥビーズまたはカテブンンＧビーが溶出され、溶出プロフ ィールはｐＨ５，５近くで最高値を示していた。

ＭＡ−ｍファージはアガローズ・ビーズにおいて、１１＋とカテプシンＧのどち らにも大きな親和性は示していない。

カテプシンＧからはＯ１ωω％であった。

ｉしてまた、このドメインがＭＡ−ｍファージに正確に顕示されているとしたら 、顕示ファージのｈＮＥビーズへの結合や分別を可能にする、抑制因子のｈＮＥ に対する親和性は最低でも５ｏがら１α）ｎＭであろう。

ｍ−ＤＩのＰＩ域の変更 ｍ−ＤＩとＥｐｉＮＥ−７が溶液でＢＦｒｌと同じ構成を取るとすると、これら ふたつのポリペプチドは第１第２結合ループの両方で同一のアミノ酸順序を持つ ことになる。例外はＰ１位置あたりと位置１１と３４の４つの残留物である。ｍ −ＤＩでは位置１５がら２０の順序は次のようになる。（ｍ−Ｄｔの位置１５は 、ＧＥＢＨ８６内のげｎ順序の位置３６と対応する。）ＢＦｎ位置番号　公正親 和性 ドメイン　Ｉｔ　１５　１６　１７　１８　１９　２０　３１　３４ＥｐｉＮＥ ７　Ｔ　Ｖ　Ａ　Ｍ　Ｆ　Ｐ　ＲＱ　Ｖ　非常に高いｍ−ＤＩ　Ａ　Ｍ　Ｇ　Ｍ 　Ｔ　Ｓ　ＲＥ　Ｑ　やや３２　３６３７３１１３９４０４１５２５５　−ｍ位 置これらふたつの蛋白質はｈｍに対する親和性に大きな違いがある。ｍ−ＤＩの ■に対する親和性Ｐ１位置付近でＥｐｉＮＥ−７変化があるｍ−ＤＩ−Ｉ１１融 解遺伝子を含むファージはＰｉｔＡ−ｍ−Ｅフと呼ばれる。

ＭＡ−ｍ−Ｅ７フアージの分別 ｍ−ＤＩ−Ｉ［１融解蛋白質の位置１５．１６．１８．１９での変化が顕示ファ ージの翫ビーズへの結合に影響を与えるかどうかをテストするために、ｆｉ［ｐ Ｈ溶出プロフィールが測定された。ＥｐｉＮＥ−７、ＭＡ−ｍ、　ＭＡ−ｒｎ− Ｅ７顕示ファージの部分標本力（′ｈＮＥビーズとともに室温で３時間培養され た。ビＥｐｉＮＥ−７とＭＡ−ｒｒｍ示ファージの結合と溶出は次のように説明 される。投入されたファージの仔馬合計は、ＥｐｉＮＥ、７ファージでは高く　 （０４％）、ＭＡ−ｍ７ｙ−ジでは低がった（０．０００１％）。さらにＥｐｉ ＮＥ−７フアージはｐＨ３，５で溶出が最高となったが、ＭＡ−ｍファージは上 記に見られるように、ｐＨ低下にともなって阜調な減少が見られるだけであった 。

ＭＡ−ｍ−Ｅ７フアージはＭＡ−ｍファージに比べてｈＮＥビーズへの結合レベ ルの向上を示している。投入されたファージのビーズから溶出された分屑の合計 は、ＭＡ−ｍ−Ｅ７フアージ族はけどちｐＨ３，５で最高値を示している。

ＭＡ−ｍ−Ｅ７フアージの結合特性をさらに定義するために、前述の延長ｐＨ分 別手法がｈｗビーズへのファージ結合を使って［２１５に示されるように行なわ れた。ＥｐｉＮＥ−７顕示フアージのｐＨ溶出プロフィールはすでに説明されて いる。このより明解なｐＨ溶出プロフィールでは、ＭＡ−ｍ−２７フアージはｐ Ｈ５を中・し・に幅広く溶出最高値を示している。ｈＮＥビーズからｐＨ溶出で 得られたｈＮＥビーズに結合するＭＡ−Ｉｎ−Ｅ７）ｐＨ溶出状態はＢＦＴＴ［ Ｋ１５Ｌ］−１１Ｉ−ＭＡファージを使ったときに見られるものと類似している 。Ｋ１５Ｌ突然変異を持つＢＦｎのｈＮＥに対する親和性は　３．・ｌα’Ｍで ある。これ以外はすべて同様であると仮定すると、ＭＡ−ｍ−Ｅ７のｐＨ溶出プ ロフィールは・自由ｍ−ＤＩ−Ｅ７　ドメインの＋１＜に対する親和性は禰範囲 にあると示される。よって、Ｐｌ域のあたりでｍ−ＤＩ順序の替りにＥｐＩＮＥ −７順序が置き換えられると、明らかにｈＮＥに対する親和子得が２ω音から５ 倒音増加する（ｍ−ＩＭでＫｌ＝６０から＋５０ｎＭと仮定）。

もしＥｐｉＮＥ−７とｍ−ＤＩ−Ｅ７が同じ溶解構造を持っているとすると、こ れらの蛋白質は相互作用表面についてｈｗに対して同一のアミノ酸順序を示す。

この類似性にもかかわらず、ＥｐｉＮＥ−７はｍ−Ｄｒ、Ｅ７に比べて約１０ｆ Ｘ）倍はど高い親和性を静圧に示している。この観察は、相互作用を調整する上 で、非接触第２残留物の重要性を強調している。

ｍ軽鎖は５ＥＲＩＯとＡＳＮ４５でグリコサイレートされる。（ＧＥＢＨ８６） 　グリコサミノグリカン鎖の除去は抑制因子のｈＮＥに対する親和性を約５倍は ど低下させることが示されている。

（ＳＥｕ１１７）。この他にＥｐｉＮＥ−７とｍ−ＤＩ−Ｅフとの違いで重要と なる可能性を持つものに、正味電荷がある。８７口は電荷＋６を持つが、Ｅｐｉ ＮＥ−７は＋１、ｍ−Ｄｉは−１である。さらに、これらのふたつの分子間の電 荷の違いは結合表面に近接する分子の中心部分の違いとなる。ＥｐｉＮＥ−７の 位置２６はＬＹＳでｍ−Ｄ−Ｅ７では■恨であるが、位置３１の残留物はそれぞ れＧＬＮとＯＬＵである。これらの順序変化は正味分子電荷を変えるのみならず 、ｍ−ＤＩ−Ｅ７の相互作用表面近くに負の電荷を与えている。位置３１におけ る負の電荷発生（ここで説明されている他のどのｈＮＥ抑制因子にも見られない ）が抑制因子とプロテアーゼとの相互作用を不安定にさせるのがもしれない。

Ｂｍ−Ｅ７フアージの県備 ｍ−Ｄ　Ｉ　ノＫ　Ｉ　ＥＤｓをＥｐｉＮＥ７から１７）ＲＩ　ＲＤＦと交換し て、７７一ジＭＡ−Ｂｍ−Ｅ７を作った。ＢＦｒｌのＰｈｅ４はその蛋白質の疎 水コアの一部である。セリンとの交換はｍ−Ｅ７の安定性や力学的特徴を不利な 方向で変えることになるかもしれない。ｍ−Ｅ７は位置２でＧｌｕを負に電荷し ているが、ＥｐｉＮＥ７はｈを持つ。

ファージＭＡ−ｆｆＩにより顕示されるｍ−ｍ融解蛋白質の推定アミノ終点で同 様の変更が行なわれた。これらのファージはＭＡ−Ｂｍと呼ばれる。

ファージＭＡ−ｍとＭＡ−Ｂｍにより顕示されるｍ−ｍ融解蛋白質の特性をウェ スタン分析を使って比較した。どちらの顕示ファージ族によって生成された融解 蛋白質にも大きさや量において著しい違いは見られなかった。よって、ファージ に訳ホされるどちらの融解蛋白質でプロセスされたフオームには大きな違いはな かった。さらに、ＭＡ−ｍ−Ｅ７とＭＡ−ＥｐｉＮＥ７により顕示される遺伝子 ｍ融解蛋白質のプロセスフオームにも大きな違いはなかった。プロセスに大きな 変更があって蛋白質の形成に大きな変化があるということが、ＭＡ−ｍ−Ｅ７と ＭＡＪｐホｒ７ｇ示ファージが示すｈｗビーズへの結合の大きな違いの原因であ るということは、したがってほとんど考えられない。

ｌｖＬＡ−Ｂｍと？ｖ！Ａ−ＢＩｒｒ−Ｅ７顕示ファージのｈｗビーズへの結合 特性を、前述の延長ｐ汁分別手順を使って特徴付けた。！１２１６を参照。静圧 ビーズに結合するＭＡＪｐｉＮＥ７顕示ファージのｐＨ溶出プロフィールはすで に説明したものと類似している。ＭＡ−ＢｍとＭＡ−Ｂｍ−Ｅ７のｐＨ溶出プロ フィールは、ＭＡ−ｍとＭＡ−ｍ−Ｅ７によって示されるものとは著しく異なる 。（ｌＥ２１２と２１５を参照）　どちらの場合も、顕示された融解蛋白質の推 定アミノ終点での変更はｈＮＥビーズから溶出される顕示ファージの分屑を数倍 に高めた。

顕示ファージへのｈＮＥビーズの結合力は、ビーズの準備状態や準備された個々 のビーズの年齢（３ｇｅｊによりて異なるっしたがって、ビーズがち得られるプ ロフィールの形状を比較するにあたっては、同じ＠　（ｂａｔｃｈ）からの同じ 年齢（ａｇｅ）のビーズを使うべきである。例をあげれば、ｈＮＥビーズから回 収されたＭＡ−ＥｐｉＮＥ７１１示ファージの分層は、幻１２．２１５．２１６ に示されるそれぞｔｌ−の実験間、またこの発明内での実験仕様で与えられた結 果と約２倍はど差位がある。

−二だし　ＰＨＳ出プロフィールの形はほとんど同じである。顕示ファージ生成 量を、同時に行なｉｆ゛’３；出りビーズから回収されたＭＡ−ＥｐｎＮＥ７の 生成量に標準化することによって、ｈ門ビーズ−結合力のバラツキを修正するこ とができる。表２１２．２１５，２１６が標準化されると顕示ファージり回収は 、回収笹れたＭＡ−ＥｐｉＮＥ７と比べて次のようになる。

票〒７マージ旌　ｆｆ喫化分刊 ＭＡ、マη　０．００６７ ％ＩＡ、Ｂｒｒｌ　０．０２７ 〜１へ＋ＴＴε７　０．０２７ Ｍ、Ａ、Ｂｍ−Ｅ７　０．１３ よって、顕示斜１−た融解蛋白質のアミノ終点順序の変更は、ｈｈ”ｔビーズか ら溶出されるファージの斤ＩＦ＋を３倍から５倍増加させる。ＭＡ−ｍ−２７は ｐＨ５，０を中・シ・に幅広いｐＨ最高値を示しているが、＼１．へ、ＢｆｆＬ Ｅ７ではｐＨ最高罐はｐＨ４，７５から４５あたりになっている。

〜ＩＡ−Ｂ…、Ｅ７ｕ示ファージのｐＨ溶出の最高値は、前に説明されているよ うに、Ｂｐｎ（ｘｔ５ｔ、）とＢＦｎ（Ｋ！５Ｖ、　ＲＩ７Ｌ）　ＩＩＩｎファ ージ最高値の間に位置するくそｔしぞれ、ｐＨ４，７５、ｐＨ４，５、ｐＨ４， ０）。

にｉｆｆる親和性が増加していることを表す。

上で説明されているように、ファージ蛋白質のウェスタン分析は、アミノ終点順 序変更に関して遺伝子ｍにおいては大きな変化はないことを示している。したが って、顕示ファージの翫ビーズに対する親和性の変化が、アミノ終点の突然変異 の融解蛋白質の変更（訂正）プロセスの＃Ｓ栗から２る蛋白質の大きな変更に帰 することはない。

Ｍ、Ａ−Ｂｍ−Ｅ７．＋２２２とＮｔＡ−Ｂｍ−Ｅ７−１４１の生成と特性−− −シ’ＬＩＡ−Ｂｍ、Ｅ７４２：！２は突妖変異体を持つＢｍ−Ｅ７と同じであ る。ファージＭＡ−Ｂｍ−Ｅ７−Ｉ　Ｊ　Ｉ　！　ｉ　Ｑ　Ｑ変異体Ｅ３１Ｑと Ｑ３Ｊｌ／を持ッＢｒｒｌ−Ｅ７と同じである。

＼ｉ・〜Ｒｍ、Ｅ７．＋２２２とＭＡ−ＢＩＴＩ−Ｅ７−１４１Ｍ示ファージの ｈＮＥビーズへの結合特性を、ｔｌｄ１７　（ＭＡ−７〒ＩＴＩ誘導体の位置１ １でのｎ恨からＡ？ＪＡの置換は、顕示ファージのｈ＋ビーズへの結合力に？ま 町らかな影１１よ与えていない。

廿日的に、位置３１と３４での変化は顕示ファージのｈＮＥ結合特性に深い影響 を与えている。（４上述の結果は、ｈＮＥビーズへのｋＬＡ−Ｂｍ−Ｅ７−１４ １顕示７７ージによる結合がＭＡ−ＥｐｉＮＥフによるものヒｊＪ似するもので あることを示している。よって、Ｂｍ−Ｅ７−１４１はに，＜ｌｐＭを持つかも しれない。二のような親和性はＲ　（ａｍ．ε力に対して上記で推定されたもの よりも１（１）倍程高く、完全なｍ蛋白質について報告されている親和性に比べ て１σから１０賠高いものである。

Ｂｍ．Ｅ７−１４１の突唆変異遺伝子 残留物 ＱＴ：キｈｆ＝　＋　１１１１１　２３３蛋つ買　１　２　３　４．、、、　ｌ 　、、、、５　６フ１１９．、６．、１．、ｄｌＴｌ．ＤＩ　ＫＥＤＳ．、、、 Ａ．、、、％ｌＧＭＴＳ．．　Ｔ．、Ｅ．、Ｑ＋１１　ＲＲＤＦ．、、、Ａ．、 、、ＶＡＭＦＰ．、　Ｔ．、Ｑ．、ＶＭｔｌ′ｎ＋６１９　ＲＲＤＦ．、、、Ａ ．、、、ＶＧＭＦＳ．、　Ｔ．、Ｑ．、Ｖ−Ｉｔ”Ｉ”ＲＩＲＰＤＦ．、、、Ａ ．、、、ＩＧＭＦＳ．、Ｔ．、Ｑ．、ＶＡＭＩＮＯＩ　ＫＥＤＦ．、、Ａ．、、 、ＶＡＭＦＰ．、Ｔ．、Ｑ．ＶＭ川用０２　ＫＰＤＳ．、、、Ａ．、、、ＶＡＭ ＦＰ．、Ｔ．、Ｑ．、ＶＭしＴＱＥ　ＲＰＤＦ．、、、Ａ．、、、ＶＡＭＦＰ． 、Ｔ．、Ｅ．、’／■じ汀２６Ａ　ＲＰＤＦ．、、、Ａ．、、、ＶＡＭＦＰ，、 　Ａ．、Ｑ．、Ｖ−マじ口００　ＫＰＤＦ．、、、Ａ．、、、ＶＧＭＦＳ．、　 Ａ．、Ｅ．、Ｖ１７α丁訂と１８のＰＨＥが高親和性を持つｈＮ′Ｅ結合に最適 のようである力τ、Ｆ１７Ｆ１１１もまた効果的である，１６のＧＬＹと１９の ＳＥＲは、ｈＮ′Ｅに対するＢＦｒｌ変種のライブラリの分別から得られるＢＦ ｎ変種とｈＮ′Ｅとの高親和結合でしばしば発生する。（ＲＯＢＥ９１）　よっ て、ｈ＜への高親和性を維持しなうτらこｔｌ−もの位置でｍ−ＤＩ順序を回復 することが可能なようだ。Ｍ「１刀に指定された順序は仮定であるが、ｈＮＥに 対して高親和性を持つ可能性は非常に高い。

ＢｒｒｌＪｌ示プアージはεｐｉＮＥ７のＲＩＴＤＦをＩｎファージのＫＩＥＤ Ｓで置き換えることによって生成され５ ＢｒｒＴ−Ｅ７に２次のふたつの変化を導入してＢｒｒＬε７−１４１が生成さ れた。位置３１でＧＬＵ′４：ＧＬＮに、位！３４てＧＬＮを■乱に変更。

ＢｒｒＴ−Ｅ７−１４１蛋白質順序７ＳＮ２４−ＧＬＹ２５−ＴＨＲ２６は成熟 核細胞有機体内のＮ結合のグリフサイレ１−？ンで一般的に認められる順序ＡＳ Ｎ−Ｘ−Ｔ）憤５εＲとマツチする。人体血清から隔離された完全１１１白では 、この部ｆヶで軽鎖ヂリペプチドがグリコサイレートされる。（＾５Ｎ４５、Ｏ ＤＯＭ９０）も’ＢｒｎーＥ７ー１４１蛋白質が成銭核柵胞圧出により生成され るなら、ＡＳＮ２４もグリコサイレートさ１−、＝可能性が高いつ二のようなグ リコサイレーシヨンは長期治療に使われると、蛋白質が同種！＋１４−ｑ疫遺伝 性を持つように純化することを困難にするａ　ＫｕＤｏｍｓのこの位置でしばし ばアラニア割７見讐りるので、Ｔ２６とＡを交換した。

工界誘発化Ｐー情ーＢｍーＥ７ー１４１顕示ファージのｈＮＥ結合特性實みつ７ アージ集団の寸花ビーズへの結合特性は、既に説明された短縮及び延長ｐＨ溶出 方法を使って判定笹れるっこれらの研究の結果は表２１９に示されている。

られた値に標準化した数字をリストしている。

劾１９のデータを上のように判読すると、次の結論に達する。

−ズに廿するＵ示ファージの親和性増加は、主に位置３４でのＶ、壮置換による ものであるａｍ−ＤＩの“ミノ姓占域で導入された３つの変化（位置ｌ、２．４ ）はすべて、ｈＮＥビーズに結合し位Ｎｌでの変イヒはほとんど影響しない。

ＢｒｒＬＥ７−１４１のＰＩＮ近く　（位置１５）での変化は、顕示ファージの ｈＮ′Ｅへの結合に影響する。位置１６で″）ＡＬＡからＧＬＹの変化と、１９ でのＰＲＯからＳＥＲへの変化は抑制因子の親和性を幾らか（約３培ｌ！ど）ｆ ｔ少筈せる。位置！５での１１からＶＡＬへの置換はさらに結合を減少させる。

Ｂｍ−Ｅ７−１４１は９つの位置でｍ−ＤＩと異なる。上記の論議によれば、ｍ −ＤＩに基づく高親和性を持つｈＮＥ抑制因子はｍ−Ｄ　１１１１序を４．５箇 所の位置で変えるだけで構築できる。これらの変更は次″）通り。位ｌ１ｊ４の Ｐ）ｔＥ、位置１５の■鮭、位置１８のＰＨＥ、位置３４のｖ社、位置２６のＮ 請。ＡＳＮ２４のグリコサイレーンフンを考慮しなければ、ＴＨＲをそのまま２ ６の位置に置いておくこともできろう ＩＯまとめ：ｈＮＥ１ｍ灯する隔離ｍ−ＤＩ誘導体に推定される親和性ｈＮＥビ ーズへのり示ファージ結合と溶出から考えるに、ｍ−ＤＩの様々な銹導体が自由 に溶液の中にあるようｆｔｈＮ′Ｅｌ：対して親和性を推定することが可能であ る。これらの推定は表ｎｏ以下にまとめられている。

例５ 図１１はＲ２＝２プロピル、Ｘ　＝　［−Ｃｏ−ＣＦ、−］、Ｒ３＝−ＣＨ，を 組み入れる数々の初期中期の化合物である。化合物■はグリセルアルデヒドで、 この中ではヒドロキシルがメチルチオメチル（ＭＴＭ）グループにより保ｌＩさ れる。（ｐ、６８０　ｉｎ　ＡＩ）ＶＡＮＣＥＤ　０ＲＧＡＮＩＣＯ昏１１５Ｔ ＲＹ、　Ｔｈｉ司Ｅｄｉｔｉｏｎ、　oａｒｔ　Ｂ： Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　Ｆ、Ａ　Ｃａｒｅｙ　ａ ｎｄ　Ｒ，Ｊ、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ、　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅ唐刀A　Ｎｅｗ　Ｙ ｏｒｋ、　＋９９０．　ｌ５ＢＮ０．３０６−Ｊ３４５６−３　＜以ｆ＆ｃＡＪ ｔＥ９０）　並びにここで引用される他の研究も含む）化合物Ｉはグリニヤール 試薬に反応し、二塩化プロピルによりイールド■を形成する。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９ｇ５ｊｓＢＮＯ−４７１−８８８４＋−９（以後ＭＡ Ｒ（Ｊ５）　ａｎｄ　Ｆｉｌｌｅｒ、Ｃｈｅｍ　Ｒｅｖ、　U３：２１−４３　 （１９６３）　（ＦＬＬ６３）ｇｅｍジフロライド（化合物ＶＴＩＩ）に転化さ れる。

ＦｍｏｃやｔＢｏｃを使ってペプチド合成物を組み入れるのに適してνする。

化合物℃の合成は０あるいはＣ５での明確な偏光力を確立しなｌ、％。んは、固 定蛋白質などの偏光マトリックスとクロマトグラフィーを使って４つのコンポー ネントに解像することができる。

化合物℃磨具なる偏光力のコンポーネントに解像することが好まれる。

薬を使う。これにより、ＬＨ−ＡＬＡ相似体が合成でき、その中で結合する一冊 −が−ａ：ｌ−に置換される。ニグロビル塩化物の替りにその他のアルキル塩化 物を使うことができる。これにより他のジペプチド相似体が生成され、その中で 最初のアミノ酸が置換される。

ｂ） ■を■で置き換える。これによりＶＡＬ−ＧＬＹまたは１旧ＩＹの相似体が合成 される。■の替りに他の１（０−ＭＥＭ）−２，クロロ化合物を使うことにより 、第２のアミノ酸がＡＬＡとは異なるジペプチド相似体が生成される。

Ｃ） 化合物■と■の替りに℃ＶとＸｖを使うことによって、Ｆ置換のないＸ■を生成 することができる。

ｄ） α、−Ｃｏ、Ｆを使うことによって、−ＦとＣＨ，−ＣＯＯ−を追加し二重結合 で交差できるようになる（ｐ、！８１．　ＣＡＲＥ９０及びここに引用されてい る他の参考文献）ＸＶＩＩは刈ＶとＷのグリニヤール付加物を脱水することによ り得ることができる。

Ｃ） 化学的に近いものを使って、℃の口とＣ３の間に−Ｇ（、−を追加することがで きる。

例６ 図１３はカルボニル炭素の替り）こ硼素を含むジペプチド相似体の仮定的合成に 関与する化合物を示す。これらの相似体はクラスエとクラス■の抑制因子に使わ れる。

例７ は７ミノグループを持たないので、ｌｒＶが鎖の終点となる。

参考文献 ＡＬＢＲ８３ａ：Ａｌｂｒｅｃｂｔ、　ｅｊ　ａｌ、、　Ｈｏｐｐｅ−５ｅｙｌ ｅｒ’ｓ　Ｚ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　０１印（１＊９３）。

１８ユ１６９７４７０２゜ ＡＤＥＹＢＢ：　Ａｄｅｙａｍｉ　ａｎｄ　Ｈｏｄｇｓｏｎ、　Ｊ　Ｃｈｉｎ　 Ｌａｂ　Ｉｎｖｙｕｎｏｌ　（１９８８）　２７（１１１−S゜ Ａ！ＦＯＢ８：　Ａｆｆｏｒｄ、ｅ仁’ａ１．、Ｄｉａｌ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏｐｐ ｅ−Ｃ；ｅｙｌｅｒ　（１９８８１３ｇ９：１０６５−一　７４゜ ＡＬＴ％’６１：　Ａユｔｍａｎ、ｅＬ　ａｌ、、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇゴｎ ｅｅｒｉｎｃｒ　＋１９９１．）　４（５）５９３４００゜ＡＲＳＥ８６：　Ａ ｒ５ｅｎｉｓ、　ｅヒａ１．、　Ａｇｅｎｔｓ　Ａｃｔｉｏｎｓ　！；ｕｐｐｌ 　（１９８６）　ＭＳｌＢ　（ＲｅｃｅｎヒＡｄｖ　Ｃｏｎｎｅｃｔ　Ｔｉ５ｓ ｕｅ　Ｒｅ５）６３−８゜ＡＲ５Ｅ８Ｂ：　Ａｒ５ｅｎｉｓ、ｅヒａ１．、Ｃｕ ｒｒｅｎｔ　Ｅｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　（１９＋１８）　フ［２１９５４０２ ゜ＡＳＣＥ９０：　ＡＺ’：ｅｎＺｅ、　ｅＬ　ａｌ、、Ｂ１１１　Ｃｈｅｍ　 ＨＯｐｐｅ−！；ｅｙ１ｅｒ　（１９９０１３〕１：３８シー３９３゜ ＡＬＢＲ［１３ｂ：　Ａｌｂｒｅｃｈｃ、　ｅ亡ａ１．、　Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙ ｌｅｒ’ｓ　Ｚ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　ｃｈａｍ　（１９８３；@。

ｌコニ１７０３−１７０８゜ ＡＮＧＥ９０：　Ｌ＊ｇｅｌａｓヒｒｏ　ｅＬ　ａｌ、　＋１９９０）　Ｊ、Ｍ ｅｄ、Ｃｈｖ−ｎ、３３二１３−１６゜Ｎ１．ＲＡ９０：　ＡｒｎａＯｕＪ　ｉ ｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　（：Ｌ９９０）　ｌ　ｍ。

ＡｔＪＥＲＢ７：　Ａｕｅｒｓｗａｌｄ、ｅＬ　ａｌ、、Ｂｉｏｌ　Ｃｂａｍ　 Ｈｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　［１９８７Ｌ↓瀘：１４１３−１４２５゜ ＡＴ）ＥＲＢＢ：Ａｕａｒｓｗａｌｄ、ｅＬ　ａユ、、Ｂｉｏ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏ ｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　（１９８８）ｒ釘迫工凪逗劇１工虹諜）：２７−３５゜ ＡＵＥＲ８９：Ａｕｅｒｓｗａｌｄ、ｅＬ　ａｌ、、ｔｌ’Ｋ　Ｐａｔｅｎｔ　 Ａｐｐｌｉｃａ：土ｏｎ　ＧＢ　２，２０Ｂ、５１　Ａ。

ＡＵＥＲ９０：Ａｕａｒｓｗａｌｄ、　ｅｔ　ａｌ、、　ＵＳ　Ｐａｔｅｎヒ４ ，８９４，４３６　（１ｇ　Ｊａｎ　１．９９０）。

ＡＵＳＵ８７：Ａｕ５ｕｂｅｌ、ｅｅ　ａｌ、、Ｅｄｉｔｏｒｓ、Ｑと【χ」Ｉ コニ、Ｐ工Ω二ΩΩａ工ｘ　＝　ＭＱよｆｌよ盈ｘ旦直ＱＩＱ！２Ｍ、Ｇｒｅｅ ｎｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｅｙ−工 ｎｅｅｒｓｃｉａｒｓｃｅ。

Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：　ＪＯｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ＯｎＳｒ　Ｎ６ｗ　ｙ ｏｒ′に、１９８７−ＢＡＬＩ）８５：Ｂａ１ｄｕｙｃｋ、　ｅＬ　ａｌ、、　 Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　（１９８５）、　旦ム９−１ ４゜ ＢＡＮＤＥ１８ａ：Ｂａｎｄａ、ｅＬ　ａｌ、、Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　１ｇ７Ｔ ５１１６０８−１５　ｎ９８８）ＢＡＮＤ８８ｂ：ＢａｎｄＡ、ｅＬ　ａｌ、、 Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２６３（９）４４８１−４　（１９８８）ＢＡＲＲ８ ６：Ｂａｒｒｅｅｅ　ａｎｄ　５ａｌｖ＝ｓｅｎ、Ｅｄｉｔ、ｏｒｓ、　ｓ　” 　。

Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８ Ｇ。

ＢＥＣＫ８８ｂ：Ｅ＝ｃｋｍａｎｎ、ｅｅ　ａｌ、、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅ ｍ　（１９Ｅ！８１．　Ｙ孤：６７Ｓ−８２゜ＢＥＣＫ８９Ａ４ＧＣＩＯＴＩＡ ｎｎ、ｅｃ　ａｌ、、　Ｊ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｈｅｍ　（１９８９）　＋　旦 （１）　１０１４Ｌ３゜Ｂ工ＥＴ８６：Ｂｉ＠ｍｈ、Ｐｐ−２Ｌ７−３２０　ｉ ｎ　−’　！　”　に≦≧Ω。

Ｅｃｉｉｅｏｒ：　ＲＰ　Ｍｅｃｈａｍ、Ａｃａｄ＝ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、０ｒ ｌａｎｄｏ、１９８６゜ＢＬＯＷ７２：Ｂｌｏｗ　シ１１．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏ ｌ　（１９７２１，ｊｄ：Ｄ７ｑ。

ＢＡＲＢ９１　Ｂａｒｂａｓ、ｅＬ　ａｌ、、ｐｒｏｃ　Ｈａａｌ　Ａｃａｄ　 Ｅ；ｃｉ　Ｕ！；Ａ　（１９９１１８８ニア９７Ｂ−８２゜ＢＡ！９５９０　Ｂ ａ５ｓ、ｅＬ　ａｌ、、Ｐｒｏ亡ｅｉｎｓ　（１９９０１８：３０９４４゜ＢＯ ＮＮＢ９　Ｂｏｎｎｅｙ、ｅＬ　ａｌ、、ＪＣｅｌユ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９ ８９１３９（１１４７−５３゜ＢＯＵＤ８７　Ｂｏｕｄｉｅｒ、ｅｔ　ａｌ、、 Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｒｎ　Ｈｏｐｐｅ４ｅｙｌｅｒ　（１９ａ力　３６８：９８１ −９９０゜ ＢＲ工Ｎ９０　Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ　ａｎｄ　Ｔｓｃｈｅｓｃｈｅ、Ｂｉｏｌ　 Ｃｈｅｍ　ＨＯｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　（１９９０１３７１５ｕｐｐｌ：４３− ５２゜ ＢＲ工Ｎ９１　Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ、ｅＬ　ａｌ、、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈａ ｍ　（１９９１）　２０２（１＞９５−９゜ＢＵＴＴ９１　ＢｕこＬユｅ、ｅｅ 　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ　（Ｌ９９Ｌ１　２７Ｇ（２ン３２５−３１ＣＡ ＭＰ８２：　Ｃａｍｐｂｅｌｌ、　５ｅｎｉｏｒ、　ＭｃＤｏｎａｌｄ、　ａｎ ｄ　Ｃｏｘ、　（１９８２１σＣ１１ｎ工ｎｖａｓｅ　７０：８４５−５２゜ ＣＡＭＰＩ３８：　Ｃａｍｐｂｅｌｌ　ａｎｄ　Ｃａｍｐｂｅｌｌ　＋１９８８ ）　Ｊ　Ｃｅ１１Ｂｉｏ１１０６：６６７−６７６゜ＣＡＭＰ９０：　Ｃａｍｐ ａｎａｌｌｉ、　ｅ亡ａ１．　、　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　（Ｄｅｃ　１９９０１ 　、　ｊｐ１７０９４５゜０！ＩＮＴ９９：（、ＨＨ亡ｏｒ　ａｎｄ　Ｔｕｒｉ ｎｏ、　＋１９８９）　Ｃｈａｐヒｓｒ　１６　ｉｎ　ＲＯＢＥ８９゜ＣＨＡＺ ８３：Ｃｈａｚｉｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈａｍ　（１９ ８５１、２這：　（２）４２９−３７゜ＣＩＱＺ８５：Ｃｈ、ａｚｉｎ、　ｅｅ 　ａｌ、、　Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈａｍ　（１９８５１、＝遭：　（２）４２ ９−３７ＣＯＬＬ９０：Ｃｏ１１ｉｎｓ、ｅｔ　ａｌ、、（１９９０）　Ｅｉｏ ｌ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　３フＩ　５ｕｐｐｌ。

ｐｐ、２９−３６゜ ＣＲＥエフ４：Ｃｒｅｉｇｈｅｏｎ　（１９７４１Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　ＬＬ ：５７９−６０２゜ＣＲＥエフ７ａ：Ｃｒａｉｇｈｅｏｎ、　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉ ｏｌ　（１９７７１、号ユニ２７５−２９３゜ＣＲＥＩ７７ｂ：Ｃｒｅｉｇｈ亡 ｏｎ、　、、７　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　＋１９７７＋、　＝コニ２９５−３１２゜ ＣＲＥ工８０：　Ｃｒｅｉｇｈｈｏｎ、Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９８０）、 ｌ土ｉ：５２１−５５０゜ＣＲＥ工８４：ＣｒｅｉｇｈセＯｎ、”　−ムは飢ｒ Ｗ　ＨＦｒｅ釦通ｎ　＆　Ｃｏ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８４゜ＤＡＶエフ ９：Ｄａｖｉｓ　ｅ仁ａｌ、　ＵＳ　Ｐａｅｅｎｔ　４，１７９，３３７　（１ ９７９）Ｄ工ＡＲ９０：Ｄｉａｒｒａ−Ｍｅｈｒｐｏｕｒ、　ｅｅ　ａｌ、、　 Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９９０１、二１３１−１３９゜ ＤＯＨＥ９０　Ｄｏｈｅｒｔｙ　ａｎｄ　Ｍｅｈｄｉ、　Ｉｎｔ　Ｊ　Ｉｍｍｕ ｎｏｐｈａｒｍａｃ　（１９９０１１２（７）７Ｂ７−７９５゜ ＤＵＦＴ８５二Ｄｕｆｊｏｎ、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈａｍ　（１：１８５）、 ユ、ｑ：６４７−６５４゜ＥＮＧＨ８９：Ｅｎｇｈｉｌｄ、　Ｔｈｏｇａｒｓｅ ｎ、　Ｐｉｚｚｏ、　ａｎｄ　５ａｌｖｅｓｅｎ、σＢｉｏｌ　Ｂｉｏｃｈｓｍ （１９８９）、ｚシＬ−１５９７５−１５９８１Ｆ工ＯＲ８Ｂ　：　Ｆｉｏｒｅ ヒｅｉ、　ｅｔａｌ、、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｉｎ　Ｈｏｐｐｅ−９ｅｙｌｅｒ　（ １９８８１゜３ｆａ　（Ｓｕｐｐｌ　ｌ　３７−４２゜ＧＥＢＨ８６：Ｇｅｊｈ ａｒｄ、　Ｗ、　ａｈｄＸ　Ｈｏｃｈｓｅｒａｓｓｅｚ、ｐｐ、３８９−４Ｃｔ ：ｃ　ｉｎ　ＢＡＲＲ６６゜ＧＩＲＡ８９：Ｇｉｒａｒｄ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｎ ａセｕｒａ　（１９８９＋、　ｍ：５１Ｂ−２０゜ＧＯ′ＬＤＢ３：ＧＯｌｄｅ ｎｂｅｒｇ、　ａｎｄ　ｃｒｅｉｇｈｅｏｎ、　１７　ＭＯｌ　Ｂｉｏｌ　＋１ ９８３１１耳１ｆｉ（２１４０７−４３。

ＧＯＬＤ８４：Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ａｎｄ　Ｃｒｅｉｇｈしｏｎ　＋１９８ ４）　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　１７９：５２７−４５゜ＧＯＬＤ８６　：Ｇｏｌ ｄｓセｓｉｎ　ａｎｄ　Ｄｏｓｒｉｎｇ、＋１９８６）　Ａｒｎ　Ｒｅｖ　Ｒｅ ５ｐｉｒ　Ｄｉｓ　ｉｎ４：４９−５６゜ ＧＯＬＤ８８：ＧｏＬｄｅｎｏｅｒｇ、ＢＩＯＣｋｌｅｍ　（１９８８Ｌ　Ｌ： ２４８１−１４９゜ＧＯＶＨ９０：Ｇｏｖｈａｒｄａｎ　ａｎｄ　Ａｂｅｌｅｓ 、＋１９９０）　Ａｒｃｈｉｖｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ２ＢＯ： １３７−１４Ｇ。

ＧＵＰＴ９０：Ｇｕｐヒａ、ｅｔ　ａｌ、、Ｂｌｏｏｄ　（Ｎｏｖ　１５　１９ ９０１．　ユ１ｉ（１０）２１６２゜ＧＲＥＥ９１　Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ、ｅｔ ａｌ、、Ｊ　Ｍｏｌ　Ｅｉｏｌ　（１９９１１２２０：８２１−８２７゜ＧＲＯ Ｅ９１　Ｇｒｏｅｇｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｈｅｍ　 （１９９１）　１０（２）２４５−２５１゜ＨＥより８６：　Ｍｅｉｄセｍａｎ ｎ　ａｎｄ　Ｔｒａｖｉｓ、Ｃｈａｐヒｅｒ　１４　ｉｎ　ＲＯＢＥ８６゜：ｉ ＬＥＭ９１：Ｈｉ＝ｍｓしｒａ、ｅｔ　ａｌ、、Ｉｒｒｍｕｎｏｂｉｏｌｏｑｙ 　（Ｓセｕ：ｅｇａｒセ）１８２＋２ｍ７−２６　＋１９９１１ ＨＯＣＨ８４：Ｈｏ５ｃｈｓｅｒａｓｓｅｒ、ａｎｄ　Ｗａｃｈ仁ｅｒｒ　ＵＳ 　Ｐａｔ−＠ｎ：　４ｒ　４８５ｒ　ＩＣＯ（２７Ｎ０Ｖ１９８４）。

ＨＵＢＢ８６：Ｈｕｂｂａｒｄ　ａｎｄ　Ｃｒｙｓセａｌ、Ｒｅ５ｐｉｒａヒｉ ｏｎ　（１９１１６）、旦Ｑ（Ｓｕｐｐｌ　１１５６−７３゜ ＨＵＢＥ７４：Ｈｕｂｅｒ、ｅｅ　ａｌ、、　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９７ ４１，ｆｌニア３−１０１）ｒＵ１１］Ｅ７５：Ｈｕｂｅｒ、ｅｔ　ａｌ、、Ｂ ｉｏｐｈｙｓ　５ｔｒｕｃセ　Ｍｅｃｈａｎ　（１９７５）、ｉ：１８９−２０ １゜ＨＵＢＥ７７：Ｈｕｂｅｒ、ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｓ仁ｒｕｃセ 　Ｍｅｃｈ　（１９７５１，Ａ（３）１８９−２０１゜ＨＵＴＣ８７：Ｈｕｅｃ ｈｉｎｓｏｎ、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｒｅ５ｐｉｒ　Ｄｉｓ　（１９８７１、Ｌ江凪囚立 Ｌ１本１７８４５゜）ｎ’ＮＥ９０：Ｈｙｎｅｓ、　ｅｔａｌ、、　Ｂｉｏｅｈ ａｍｉｓｅｒｙ　（１９９０１，訂ｊＨ１００１８４００２２゜ＨＵＢＢ８９ａ ：　Ｈｕｂｂａｒｄ、ｅｅ　ａｌ、、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　 ＵＥ；Ａ　（１９８９１８６：６８０−４゜ ＨＵＢＢ８９ｂ：　Ｈｕｂｂａｒｄ、ｅｔ　ａｌ、、Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｉｎ ｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　（１９８９１ｕｉ：２０ｇ−２１２゜ 工ＭＰＥ［ｌｌｉｉｉｍｐｅｒｉ＆１１　ａｎｄ　λｂａｌｅｓ、　＜１９８６ １　Ｂｉｏｃｈ昭　２５ニア６０−６７゜１ＭＰＥ８７：エｍｐｇｒｉａｌｉ　 ａｎｄ　Ａｂｅｌｅｓ、＋１９８７）　Ｂｉｏｃｈｅｍ　２６：４４７４−７７ ゜ＫＡＯＩＢ：ＫａＯ，ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　Ｃ１１ｎ　ｘｎｖｅｓｔ　＜１９ ８８１　、　ｊＪ：１９６３−７３゜ＫＡＵＭ８６：Ｋａｕｍｅｒｅｒ、　ｅｔ ａｌ、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ　（１９８６＋　１１７８３９ −７８５０゜Ｋより（Ｊ８８：ＫｉａＯ，ｅｔａｌ、、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ（１ ９ａ８）、ｌｌ：１８’Ｃ’４−７−ＫＩＤＯ９０：Ｋｉｄｏ、　ｅｅ　ａｌ　 、　、　ＢＩＯＣｈｅｍ　＆　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃ０ｒＩＩＬ！ｌ　ｊ １６冷ｒ　１９９O）　ｒ 庄ｆ２）７１ｇ−２１゜ Ｋ工ＴＡ９０　Ｋｉｅａｇｕｃｈｉ、　ｅｅ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｅｉ ｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ　（１９９０１１０３８：１０５−１１３゜ ＬＡＳに８０：Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ　ａｎｄ　Ｋａｅｏ、　Ａｎｎ　Ｒｅｖ　Ｂ ｉｏｃｈａｍ　（１９８０）　、　ｉ：５９３−６２６゜ＬＡＺＵε３：Ｌａｚ ｕｒｅ、　ｅｔａｌ、、　Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｃａ１ｌ　 Ｂｉｏｌ　（１９８３１。

旦）：２８７−９２゜ ＭＡＲＱ［１３：Ｍａｒｑ’ｕａｒｔ、ｅｅ　ａｌ、ｌ　Ａｃｅａ　Ｃｒｙｓｔ 、Ｂ　（１９８３）ｒ　ユｌ：４８０ｆｆ。

ＭＣＷ！（８９：ＭｃＷｈｅｒセ’ａｒｔ　ｅｅ　ａｌｌ　Ｂｚｏｃｈｅｍｉｓ セｒｙ　＋１９８９１．　ｇ旦：５７０Ｂ−１４゜ＫＥＨＤ９０：Ｍｅｈｄｉ　 ｅｒ、　ａｌ、（１９９０）　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏ ｍｍｕｎ　１６６：５９５−６００゜ ＮＡＤＥ８７：Ｎａｄｅｌ、ａｎｄ　Ｂｏｒｓｏｎ、Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ　 （１９１１１７）、ｌ：５４１−５４９゜ＮＡＤＥ９０：Ｎａｄｅｌ、　１９９ ０　Ｃｙｓセｉｃ　Ｆｉｂｒｏｓｉｓ　Ｍｅｅｔｉｎｇ、　ＡＡｒ１１ｎセｏｎ 、　Ｖａ、。

ｐｌｓ６．　ａｘｚｄＲｕｂｅｎｓｔａｉｎ　ａｔ　ａｌ、＋１９９０）　Ｊ　 Ｃ１１ｎ工ｎｖｅｓし８６！５５５−９゜Ｎ工ＬＥ８９：Ｎｉ１ｅｓ、ｅｔａｌ 、、　Ｂｌｏｏｄ　（１９８９１，２１１；）１８８８−９３゜Ｎ０ＲＲＩ１９ ａ：Ｎｏｒｒｉｓ　ａｎｄ　Ｐｅｅｅｒ；ｅｎ、Ｅｕｒｅｌｐｅａｎ　Ｐａセｅ ｎｅ　Ａｐｐｌｉｃａセｉｏｎ　Ｏ３３９９４２Ａ２゜ Ｎ０ＲＲＢ９ｂ：Ｎｏｒｒｉｓ、ｅｔ　ａｌ、、ＰＣＴ　ｐａｅｅｎセ　ａｐｐ ｌｉｃａｔｉｏｎ　ＷＯ３９７０１−９６８゜ＯＤＱＭ９０　：　Ｏｄｏｍ　、 工ｎｕ　Ｊ　Ｂｉｏｃ？＝ｒ、；ｌ：１９０ｉ　ｒ　ｚＬ−９２５−９２０゜ｏ Ｌｒｒ：Ｃ９：ｏ１ヒｅｒｓｄｏｒｆ、ｅｔ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８ ９１，ユｑ：１４４−７゜ＰＡＤＲ８９Ｐａｄｒｉｎｅｓ、ｅｅ　ａｌ、、＋１ ９８９）　Ａｍ　ＲｅＶ　Ｒｅ５ｐｉｒ　ＤゴＳ　工３９　＋３１７８３−９０ （１９Ｂ９＋ ＰＥＥＴ９０：Ｐ＝ｔ、ｅｊ　ａｌ、、＋１９９０）　Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　 ３３：３９４−４０７゜ＰＥＴＥ８９：Ｐｅｅｅｒｓｏｎ、　Ｊ　Ｔ、、ａｂ　 Ｃ１１ｎ　Ｍｅｄ　（１９８９１、工（３１２９７−３０８゜ＰＯＮＴ８Ｂ：Ｐ Ｏｎｔｅ、ｅｊ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８８）、３］：５２５−７゜Ｐ ＯＷＥ８６：Ｐｏｗｅｒｓ　ａｎｄ　Ｈａｒｐｅｒ、　ｐｐ、５５−１５２　ｏ ｆ　ＢＡＲＲ８６゜ＰＡＤＲ９１：Ｐａｄｒｉｎｅｓ　ａｎｄ　Ｂｉｅｊｈ、Ａ ｍ　Ｊ　Ｒｅ５ｐｉｒ　Ｃｅ１ｌ　Ｍｏｌ　Ｅｉｏｌ　（１９９１１４７１８７ −１９３゜ Ｒ工ＴＯ８３：Ｒｉｅｏｎｊａ、Ｍｅｌｏｕｎ、ａｎｄ　Ｇｕｂｅｎｓｅｋ、Ｂ ｉｏｃ？−ｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｊａ＋１９８３１．　二ｉｊ、：１３８ ４４５゜ＲＯＢＥ８９：Ｒｏｂｅｒセ　ａｎｄ　Ｈｏｒｎｂｅｃｋ、ＥｄｉｔＯ ｒｂ、　１又Ｓ山工九」ユ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａ亡ｏｎ、ＦＬ、 １９８９゜ＲＵＥＨ７３：Ｒｕｅｈｌｍａｎｎ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　Ｍｏｌ　 Ｂｉｏｌ　（１９７３１，７７：４１７−４３６゜５山工９０：５ａｌｉｅｒ、 ＴよりＳ　（１９９０１，Ｇ４３５−４３９゜５ＡＬＶ８７：５ａＬｖｅＳｅｎ 、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９８７１，２ｉ：２２８９−９３゜ ＳＡＭＢ８９：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ、ＥＦ　Ｆｒ１ｔ−ｓｃｈ、ａｎｄ　Ｔ　 Ｋ１ｎ１ａ：ｉｓ、　比江厖諷り匡ａ　Ｊ　、５ｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｅｏｒｙ、１９８９゜５ ＣＨＥ６７：５ＣｎｅＣｅ！ｒ　ａｎｄ　Ｂｅｒｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉ ｏｐｈｙＳ　Ｆ、ａｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　（１９６７）ＳＣＩ（Ｎ８６ｂ：５ｃｈ ｎｅｂｌ土　ａｎｄ　Ｂｒａｕｎ、Ｃｈａｐｅｅｒ　２１　ｉｎ　ＢＡＲＲ８６ ゜５ＣＨＷ８７：Ｓｃｈｗａｒｚ、　ｅｅ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｊｘ 了（１９Ｂ７１．３ｉ：（：Ｌ２）ｐ３ｓ４４−５１ＳＣＯＴ８７ｂ：５ｃｏｅ ｔ、ｅｔ　ａｌ、、Ｂｌｏｏｄ　（１９８７）、旦：１４３１−６゜ＳＥＥＭ８ ｇ：Ｃｈａｐｔ、ｅｒ　ｓ　ｉｎ　ＥＩＡＲＲａ６゜５ＥＬＬ８７：Ｓｅｌｌｏ ｕｍ、　ｅセミ１．、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏｐｐｅ−９ｅｙｌｅｒ　（１ ９８力、　五ム４７−５工ＥＫ８７：５ｉｅｌａｒａｎｎ、ｅｅ　ａｌ、、　Ｂ ｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　Ｈｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　（１９８７）。

影追：１５Ｂ９−９６゜ Ｓ工ＥＫ８９：Ｓｉｅｋｍａｎｎ、ｅｃ　ａｌ、、Ｂｉｏｌ　Ｃｈａｍ　Ｈｏｐ ｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ　＋１９８９１．　ｈヱΩ：６７７−８１゜ Ｓ工ＮＨ９０：５ｉｎｈａ、ｅｅ　ａｌ、、Ｊ　Ｂ１１１　Ｃｈｅｍ　＋：Ｌ９ ９０）、ＺｆｉＭ（１６）８９８３−５゜ＳＮより９１：９ｎｉｄｅｒ、ｅｔ　 ａｌ、、（１９９：Ｌ）　Ａｎｎ　Ｎ　Ｙ　Ａｃａｄ　Ｓｃ土　６２４：４５− ５９゜５０ＭＭ８９：Ｓｏｍｅｒｈｏｆｆ、ｅＣｏ１．、　Ｊ　Ｉｎｗｕｎｏｌ 　（１９Ｂ９１．２２：２４５０−５６゜５０ＭＭ９０：Ｓｏｍｍｅｒｈｏｆｆ 、ｅｃ、ａｌ、、Ｊ　Ｃ１土ｎ　工ｎｖｅｓセ　（Ｍａｒｃｈ　１９９０１　、 旦旦：６８２−５０ＭＭ５１１：Ｓｏｍｍｅｒｈｏｆｆ　ｅｔ　ａｌ、、＋１９ ９１）　Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　１９３：１５３−４５８K ５ＴＡＴ８７：Ｓヒａｅｅｓ、ｅｃ　ａｌ、、Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９８ ７Ｌ　＝玉ｆ３１７３１−９゜５ＴＯＮ９０：５ｔｏｎｅ、ｅｃ　ａｌ、、Ｅｕ ｒ　Ｒｆ！５ｐｉｒ　Ｊ　３（６）６７３−１！　（１９９０）ＳＷＡ工８８： ＳｗａｉｔｎａｎｄＰｉｚｚｏ、Ｂｉｏ＋Ｊ＋ｅｍＪ（：ｃＳ６９＋、２−１≦ −Ｌ１７ｉ−１７８゜ＴＲＡＢ８６：Ｔｒａｂｏｎｉ、Ｃ，ＲＣｏｒｅｅｓｅ、 Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ　：１９８６１゜旦（１５）６３４０゜ ＴＲＡＶ８８：Ｔｒａｖｉｓ、＋１９８８１　Ａｍ　Ｊ　Ｍｅｄ　８４（６Ａ） ３７−４２ＴＲＩＢ８６：Ｔｒａｂｏｎｉ、ｃ、Ｒｃｏｒｔｅｓｅ、Ｎｕｃｌｅ ｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅａｌ　＋１９８６１１１生（１５１６３４０゜ ＴＳＣＨ８７；ＴＳＣｈ＠！５ＣｋｌＪ　ａｈ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ 　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　ＡＣｔ＆　（１９８７１。

瓜：９７４０４゜ ■工ＮＣ７２：Ｖｉｎｃｅｎセｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９７２）、 　］：２９ｆ；７ｆｆ。

Ｖ工ＮＣ７４：Ｖｉｎｃｅｎセ　ｅｃ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９７４） 、ｌ：４２０５゜ｗＡＣＨ７９：Ｗａｃｈｔｅｒ、ｅｃ　ａｌ、、Ｈｏｐｐｅ− ９ｅｙｌｅｒ　Ｚ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｃｈａｍ　（１９’７９１　ｒ３ｊＪｌ： １２９７−１３０３゜ ＷＡＣＨ８Ｇ：　Ｗａｃｈｊｅｒ、ｅｔ：　ａｌ、、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔ−：ｅｒ ｓ　（１９８０１，Ｊ：５８−６２゜ＷＡＧＮ７９：Ｗａｎｇｅｒ、ｅｊ　ａｌ 、、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９７９）、２旦：２３９−２４８゜ＷＡ ＧＮ８７：Ｗａｇｎｅｒ、ｅｃ　ａｌ、、Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９８７１ ，Ｌｉｆｔ（１１２２７−３１ｗｐ工Ｓ８９：Ｗｅｉｓｓ　ｆ１９Ｂ９１　Ｎｅ ｗ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ　３２０：３６５−７６゜ＷＥＷＥｌ］７：ＷｅＷｅ ｒｊ　ｅＣｏ１．、　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ　（１９８７）、　■（１ ７１１０５５−６２゜ＷＬＯＤ８４：ＷＩＯｄａｗｅｒ、ｅｃ　ａｌ、、Ｊ　Ｍ ｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９８４１，１旦Ω（２１３０１−２９゜ＷＬＯＤ８７ａ： Ｗｌｏｄａｗ＝ｒ、　ｅセミ１．、　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　（１９８７１，、 Ｌｌｆｉ（３）４６；９−８０゜Ｗ’ＬＯＤ８７ｂ：Ｗｌ’ｙｄａＷｅｒ、　ｅ Ｃｏ１．、　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　！’＝９３−．’ｒ、　工（１）１４５− ５６゜ＷＪｗｒ８８：Ｗｕｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　（ １９Ｂ６：　、　４割：６００１−４゜ＷＥＬＬ９０　Ｗｅｌｌｓ、　Ｂｉｏｃ ｈｅｍ　（１９９０１２９ｆ３７１８５０９４７゜表１３二Ｂ圧相同体（１−１ ９） Ｒｊ：　１２３４５６７Ｂ９１０１ｍ　＝２　０　１４１ニー、１６　１７　１ ８　１９−３　−　−　−　Ｆ　−−−−−−−−−−−−Ｚ　−−−２−−− Ｑ　Ｔ　−−−−−−Ｑ　−−−ＨＧ　Ｚ　−−二　−−−ＴＥ−−−−−−Ｐ −−−ＤＤＧ−Ｉ　ＲＲＲＰＲＲＲＲＲＲＲＬＡＲＲＲＫＲＡ２　Ｐ　Ｐ　Ｐ　 Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　ミ　ＲＡ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　ＲＰ　Ａ３　ＤＤＤＤＤ ＤＤＤＤＤＤＫＫＤＲＴＤＳＫ４　ＦＦＦＬＦＦＦＦＦＦＦＬＹＦＦＦＩＦＹ５ ＣＣＣＣＣＣ ６ＬＬＬＱＬＬＬＬＬＬＬ　工　に　ＥＥＮＲＮＫ７　ＥＥＥＬＥＥＥＥＥＥＥ ＬＬ　ム　ＬＬＬＬＬ８　ＰＰＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＰＰＰＰＰＰＰ９　ＰＰＰ ＱＰＰＰＰＰＰＰＲＬＡＡＰＰＡＶｌｏ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ａ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｙ 　Ｙ　Ｙ　Ｎ　ＲＥ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｒ１１Ｔ　Ｔ　Ｔ　ＲＴ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　 Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｐ　工　τ　ＴＳＱＴＹ上２　！Ｌ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　−７＋　Ｇ １３　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　’Ｐ　Ｐ　Ｐ　、Ｐ　Ｐ　ス　ＰＬＬ　文　Ｐ ＰＰ１４　Ω　ＴＡＣＣＣＣＣ １５Ｋ　Ｋ　７．　Ｋ　Ｋ　Ｖ　Ｇ　Ａ　Ｌ　Ｘ　Ｋ　Ｙ　Ｗ　Ｋ　Ｋ　ＲＫ　 Ｋ　Ｋ１ｇＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＩＱＲＡニーＧＧＡＫ：Ｌ７　ＲＲＲＡ　Ａ 　ＲＲＲＲＲＲＫ　Ｋ　Ｙ　ＲＨＲＳ　Ｋ１９　エ　エ　エ　Ｌ　エ　エ　エ　 エ　エ　エ　エ　ＰＰＲＲＲＰＲＰ２０　ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＡ　Ｓ　Ｓ　 Ｓ　ＲＲＱ　Ｓ２２　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｙ　Ｙ　 Ｉ（ＨＹ　Ｆ　Ｙ　Ｙ２３　ｙ　ｙ ２４　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｍ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｍ　Ｋ　１７　Ｎ　Ｎ　 Ｎ　Ｎ　Ｎ２５　Ａ　Ａ　Ａ　Ｓ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ｑ　Ｗ　Ｌ　 ＲＬ　Ｐ　Ｓ　質２Ｇ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｔ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ 　Ａ　Ａ　Ｅ　Ａ　Ｋ　Ｋ２７　Ａ　Ａ　Ａ　Ｓ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ 　Ｋ　Ａ　Ａ　Ａ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ａ２８　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｎ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ 　Ｇ　Ｇ　Ｋ　Ｋ　Ｑ　Ｑ　Ｎ　ＲＧ　Ｋ２タ　ＬＬＬＡＦＬＬＬＬＬＬＱＱＱ ＱＫＭＧＱ３０　ＣＣ Ｒ＃　Ｌ　２　３４　５　ｆ：　７　８　９１０１１！２：３１４１５１６１７ １８１９４０　Ａ　Ａ　Ａ　Ｇ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ 　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ４１　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｎ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｎ　Ｎ 　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ４７　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｔ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｓ 　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ４８　Ａ　Ａ　Ａ　Ｔ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　Ａ 　−Ａ　、Ａ　工　：　エ　エ　ＲＫＴ　工４９　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ 　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　ヒ　三　ＤＤＤＡＱＥ５３　ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ：（ ＲＲＥ　ＲＧ　Ｒ５４Ｔ　Ｔ　Ｔ　工Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ 　Ｔ　Ｔ　Ａ　Ｖ　Ｔ５７　ＧＧＧＰＧＧＧＧＧＧＧＲＧＧＧＧＰ−Ｇ５８　Ａ ＡＡＰＡＡＡＡＡＡＡＫ−−−ＫＰ　−−６４−−−Ｓ−−−−−−−−−−− −−−−表１３：　＊　キ（７３ｍ　相同ａ　２Ｏ−３５）Ｒ＃　２０　２１　 ２２　２３　２４　２５　２６　２７　２８　２９　３０　コ１　３２　３３　 ３４　３５−２　Ｚ−ＬＺＲＫ＝−ＲＲ−ＥＴ−−−４Ｐ−ＱＤＤＮ　−−−Ｑ Ｋ−ＲＴ−−１ＲＲＨＨＲＲ工　ＫＴＲ１ｃＲＧＤＫＴ２　ＲＰＲＰＰＰＮＥＶ ＨＨＰＦＬＡＶ３　ＫＹＴＫＫＴＧＤＡＲＰＤＬＰＤＥ４　ＬＡＦＦＦＦＤＳＡ ＤＤＦＤ　工　Ｓｉ３　Ｃ ６工　ＥＫＹＹＮＥＱＮＤＤＬＴＥＱＮ７　ＬＬＬＬＬＬＬＬＬＫＫＥＳＱＬＬ ８　Ｅ　工　ＰＰＰＬＰＧＰＰＰＰＰＡＤＰ９　ＲＶＡＡＡＰＫＹＶＰＰＰＰＦ ＧＹ　工１０　Ｎ　Ａ　Ｅ　Ｄ　Ｄ　Ｅ　Ｖ　Ｓ　ｍ　Ｄ　Ｄ　Ｙ　Ｖ　Ｄ　Ｓ 　ＶＬ′＋　Ｐ　Ａ　Ｐ　Ｐ　ｄ　Ｔ　Ｖ　ｈ−ＲＫ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ａ　Ｑ　Ｇ １２　ｊ−ｊＫ　Ｑ−−ニー」Ｌ二ＬＪ１３　ＲＰ　Ｐ　ＲＲＲＰ　Ｐ　Ｐ　Ｎ 　工　ＰＰＬＰＰ１４　”− １５Ｙ　Ｍ　Ｋ　Ｋ　Ｌ　Ｎ　ＲＭ　Ｒ−−に　ＲＦＩ、Ｒ１６Ｄ　Ｆ　Ａ　Ａ 　Ａ　Ａ　Ａ　Ｇ　Ａ　Ｇ　Ｑ　Ａ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ａ１７　Ｋ　Ｆ　Ｓ　ＨＹ　 Ｌ　ＲＭ　Ｆ　Ｐ　Ｔ　Ｋ　Ｇ　Ｙ　Ｌ　Ｒ１８エ　エ　エ　エ　ＭＩＦＴＩＶ ＶＭＦＭＦ　工１９　Ｐ　Ｒ９Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｐ　Ｓ　Ｑ　ＲＲ工　ＫＫＫＱ ２０　Ａ　Ａ　Ａ　ＲＲＡ　ＲＲＬ　Ａ　Ａ　ＲＲＬ　ＲＬ２１　Ｆ　Ｆ　Ｆ　 Ｆ　Ｆ　Ｆ　Ｙ　Ｙ　Ｗ　Ｆ　Ｆ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｒ２２Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｙ　Ｙ 　Ｙ　Ｙ　Ｔ”　Ａ　Ｙ　Ｙ　Ｆ　Ｎ　Ｓ　Ｆ　Ａ２３　Ｆ　τ　Ｆ ２４ＮＳＨＤＭ　ド　ＮＮＤＤ　に　）ｆＮＮＮＤ２５　Ｑ　Ｋ　Ｗ　Ｓ　Ｐ　 Ｓ　Ｓ　Ｇ　Ａ　Ｔ　Ｐ　Ａ　Ｔ　Ｑ　Ｇ　Ａ２６　Ｋ　Ｇ　Ａ　Ａ　Ａ　）Ｉ 　Ｓ　Ｔ　Ｖ　ＲＳ　Ｋ　ＲＥ　Ｔ　Ｖ２７　Ｋ　Ａ　Ａ　Ｓ　Ｒ９Ｌ　Ｓ　Ｓ 　Ｋ　Ｌ　Ａ　Ａ　Ｔ　Ｔ　Ｓ　Ｒ２８Ｋ　Ｎ　Ｋ　Ｎ　Ｎ　ＨＫ　Ｍ　Ｇ　Ｋ 　Ｋ　Ｇ　Ｋ　Ｋ　Ｍ　ＧＲ＃　２０　２１　２２　２３　２４　２５　２６　 ２７　２８　２９　３０３１　３２　３：ｌ　３４　コ５２９　Ｑ　Ｋ　Ｋ　Ｋ 　Ｋ　Ｋ　ＲＡ　Ｋ　ＴλＦＱＮＡＫ〕ＯＬ　Ｃ−二」Σ」Ｌ≦−」−二一二」 Ｌ≦３１　Ｅ　Ｙ　Ｑ　Ｎ　Ｅ　Ｑ　Ｅ　Ｅ　Ｖ　Ｋ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｖ ３２　ＲＰ　Ｌ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　Ｔ　１．、Ａ　（Ｔ　Ｐ　Ｅ　Ｔ　Ｒ３３Ｆ ＰＦＦＦ　Ｆ） ３４　Ｄ　Ｔ　Ｈ１工Ｎ　Ｘ　Ｑ　Ｐ　Ｑ　ＲＶ　Ｋ　工　ｒ、１Ｓ３ＥＷＹＹ 　Ｙ”ＹＹ　Ｙ １６　Ｓ　Ｓ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　ＲＧ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ３９　 Ｇ　ＲＫ　Ｐ　ＲＧ　Ｇ　Ｍ　Ｑ　Ｄ　二　ＫＫＱＭＫ４０　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　 Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ４１　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　 Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｄ　Ｄ　Ｋ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ４２　Ｓ　Ａ、Ａ　Ａ　Ａ　Ａ　 Ａ　Ｇ　Ｇ　）！　ニーＥ　Ｓ　Ｇ　Ｄ　Ｌ　Ｇ４３　Ｎ　五　Ｇ　Ｚ　ＬＪＬ ＪドニーＪＬＪ王表１３＝続き Ｒ：ｊ　２０２１２２２３２４２５２６２７２８２９３０１１３２３３３４３！ 。

４４　ＲＲＲＮ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　Ｋ　Ｎ　Ｎ　Ｎ　ＲＲＮ　Ｒ４５Ｆ　Ｆ　Ｆ 　Ｐ　Ｐ　Ｆ　？　Ｆ　Ｙ　Ｌ−１−Ｊ７４６　Ｋ　Ｋ　Ｓ　Ｋ　Ｋ　Ｋ　ＨＶ 　Ｙ　Ｋ　Ｋ　ＲＫ　Ｓ　Ｌ　Ｙ４７　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｓ　 Ｔ　５　Ｓ　Ｓ　Ｔ　Ｓ　Ｓ４８　エ　エ　エ　ＷＷ　工　ＬＥＥＥ　′：　Ａ ＥＬＱＱ４９　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｄ　Ｄ　Ｄ　Ｅ　Ｋ　Ｋ　Ｔ　五　ＥＱＡＫ　Ｒ５ ０Ｅ　Ｅ　Ｋ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｌ−Ｄ　Ｄ　Ｅ　Ｅ　Ｅ５２　ＲＲＰ −ＲＲＱ　Ｅ　Ｌ　ＲＲＲＭ　Ｌ　Ｅ　Ｌ　Ｒ５３ＲＲＨＱ　）！　ＲＫ　Ｑ　 Ｅ　ＣＣＲＤ　Ｑ　Ｑ　Ｒ５４τ　ＴＡＴＴＴＶＴＹＥＥＴＡＫＴＹ５５　ＣＣ ＣＣ ５６工　Ｖ　Ｖ　Ｇ　Ｖ　Ａ　Ｇ　ＲＧ　Ｌ　Ｅ　Ｇ　Ｓ　Ｘ　ＲＧ５７　ＧＶ ＧＡＡＡＶ−Ｖ　ｖ　ＬＧＧＮ−ＩＳ８　−−−５ＳＫＲ−ＰＹＹＡＦ−−Ｘ’ ５９　−　−　−　Ａ　Ｇ　Ｙ　Ｓ　−Ｇ　’Ｑ　：’！　−−−−Ｇ６０−　 −　−−　工　Ｇ−−Ｄ−−−−−−Ｒ６１−−−−−−−−Ｅ　〜　−−−− −Ａ表１３：続き（Ｂｐ’ｎ相同体３６−４０）Ｒ９３＋５　３７３８　３９４ ０ １　ＲＲＲＲＲ ２ＰＰＰＰＰ ３　ＤＤＤＤＤ Ｂ　ｐｐｐｐｐ ９　ＰＰＰＰＰ １３ＰＰＰＰＰ １５ＲＫＫＫＫ ｘｇｘｘｘｘｘ １フ　ＲＲＲＲに １８　工　Ｎ　工　ＭＭ １９　エ　エ　エ　エ　エ ２０ＲＲＲＲＲ ２４ＮＮＮＮ１ｆ ２５ＡＡＡＡＡ ２６ＫＩＣＫＩＣＫ ２７ＡＡ　入　ＡＡ ２８ＧＧＧＧＧ ２９ＬＬＬＬＦ ３ｏ　Ｈ−立−ニーＳ−５ ３１ＱＱＱＱＥ ３２ＴＰＰＰ　τ ３３　Ｆ ３４ｖｖｖｖｖ ３５　ニーに二Ｌ−１−１ ３６ＧＧＧＧＧ ３９ＲＲＲＲＫ ４０ＡＡＡＡＡ ４１ＫＫＫＫＫ ４２Ｒ５ＲＲ５ ４３ｘ−１−」Ｌ−１−１ 表１３：　Ｍき Ｒ１３６３７３８３９４０ ４６ＫＫＫＫＲ ４７Ｓ　Ｓ　Ｓ　Ｓ　５ ４８ＡＡＳＡＡ ４９ＥＥＥＥＥ ５０ＤＤＤＤＤ ５３ＲＲＲＲＲ ５４１７７７丁 ５５−一一一二一二一５ ５６ＧＧＧＧＧ ５７ＧＧＧＧＧ ５８ＡＡＡＡＡ 表１３の説明 注： 誰）　ベータ・パンガロトキシン（ｂｕｎｇ釣ｔｏｘｉｎｓ）はどちらも残留物 １５が除去されている。ｂ）Ｂ、ｍｃｙｉは０とＣ１４の間にもうひとつ残留物 を持つ、残留″１９にＦとＧを指定した。

Ｃ）天然蛋白質はすべて、５．１４、鱒、３８．５５．５５でＣを持つ。

ｄ）相同体；よナベてＦ３３とＧ３７を持つ。

Ｃ）パンガロトキシン内に余分にあるＣは課内シスチン・ブリッジを形成する。

表１９ ＢＭｌと５８の相同体の各位置におけるアミノ酸の頻度Ｒｅｓ、差位 −４２−５８Ｅ −３５−５５Ｐ　Ｔ　Ｚ　Ｆ ＢＦＴＩと５８の相同体の各位置をこお１するアミノ酸の頻度４５２Ｆ５８Ｙ　 Ｆ 表１５の説明 表１４と１５の認識コード ２３　２　Ｙ３２Ｆ７　Ｙ ３７　１　Ｇ３９　Ｇ ３８　Ｌ　Ｃ３９Ｃ ３９８Ｇ１４Ｒ９ＫｇＱ３Ｍ３Ｌ２Ｅ　Ｐ　Ｒ孝６３：（与えられた変異性を持 つ残留物の数）に対する変異性表６４：自然発生クニッッ・ドメイン表の引用文 献（表６２）表６５二七リン・プロテアーゼへの結合上のクニッ゛へドメインに 突然変異が与える影響クラス： 表６５二七リン・プロテアーゼへの結合上のクニック・ドメインに突然変異が与 えル影響（耕き） ３７　Ｇ　３ｇがＣである限りＡに限る　Ｘ３８ＣＣが強く好まれる　Ｘ ３９Ｎ【　どれでも　Ｃ ４０Ｇ　、Ａ、　ＳＳＮ、　Ｄ、　Ｔ、　Ｐ　Ｃ４１Ｎ　Ｋ、Ｑ、Ｓ、Ｄ、Ｒ， Ｔ、Ａ、Ｅ　Ｃ４２Ｇ　どれでも　Ｃ ４３Ｎ　Ｎ−二限る　Ｘ ４４Ｎ　Ｓ、に、Ｒ，Ｔ、Ｑ、Ｄ、Ｅ　Ｂ４５ＦＹ　Ｂ ４６Ｋ　非プロピンならどれでも　Ｂ ４７ＳＴ　Ｎ、Ａ、Ｇ　Ｂ ４８　Ａａｎｙ　Ｂ ４９　Ｅ　どルでも　Ａ ５０　Ｄ　どれでも　Ａ ３１ＣＣシ；限る　Ｘ ５２　Ｍ　どれでも　Ａ ５３　Ｒどれでも　Ａ ５４　Ｔ　どれでも　Ａ ３５ＣＣシこ限る　Ａ ５６　Ｇ　どれでも　Ｘ ５７　Ｇ　どれでも　Ａ ５８　Ａ　どれでも　Ａ 却０３ ＢＰＴエーエエＩ　Ｍｘ　Ｂ；Ｔ瞑に１５Ｌ］　−ＩＸＸ　ＭＡＧ　、０　３　 、［１・１０’　２　・１０”　４．５　・：Ｓ’　８．６°１ｏ−１５，０３ ，５４０’　１−１０”　２．Ｌ−１０’　４．０４０４４．０　３．０・１０ ’　１−１０’　４．３・１Ｃ′８゜２・１０−１３．０．　１．４゛１０’　 １・１０−’　１１・ＬＣ４２、ｌ・１０゛１２．２　２．９・１０４１・１０ ’　！５．９・１０’　１．１−Ｌσ１投入プアージの　投入ファージの ＢＰＴ［−ｔｎ　Ｐｖｔｘファージの投入合計は０．０３０ｍ１　Ｘ　（８，６ ・１０”　ｐｆｕ／ｍｌ）　＝　２．６１０’ＢＦｒＴ（ｋ１５１）−ｔＩＩ　 ＭＡ７　ｙ−ジの投入合計は０．０３０ｍ１　Ｘ　（１，７□　１０’・ｐｆｕ ／ｍｌ）　−５，２１Ｏ”表ユ０７−２０８　（併合） Ｐｌ域に押けるＥｐｉＮＥクローンの順序クローン識別子　順序 ＢＰＴ工（ｃ：＋？Ｉｐ、ｏｎＬｙｌＰ　ＣＫ　Ａ　ＲＸ　：　ＲＹ　ｆＢＰＴ 工）Ｐ　ＣＶ　Ａ　Ｍ　Ｆ　Ｑ　ＲＹ　ＥｐｉＮＥａＣＣＴ　、　ＴＧＣ、ＧＴ Ｇ　、　ＧＣＴ　、ＡＴＧ　、　ＴｒＣ、Ｃ２Ａ　、　ＣＧＣ、ＴＡＴ３．９． Ｌ６．　Ｐ　ＣＶ　Ｇ　Ｆ　Ｆ　Ｓ　ＲＹ　ＥｐｉＮＥ３１７、１８．１９　Ｃ ＣＴ、ＴＧＣ，ＧＴＣ，ＧＧＴ、ＴＴＣ，ＴｒＣ，τユ、ＣＧＣ、ＴＡＴｇ　Ｐ 　ＣＶ　Ｇ　Ｆ　Ｆ　Ｑ　ＲＹ　ＥｐｉＮＥ６ＣＣＴ　、　ＴＧＣ、ＧＴＣ、Ｇ ＧＴ　、　ＴｒＣ、ＴｒＣ、’ｊＪｈ　、　ＣＧＣ、ＴＡＴ７．１３，１４　Ｐ 　ＣＶ　Ａ　Ｍ　Ｆ　？　ＲＹ　ＥｐｉＮＥ７１５、２０　ＣＣＴ、ＴＧＣ，Ｇ ＴＣ，ＧＣＴ、ＡＴＧ、ＴｒＣ，ＣＡ、（ＧＣ，ＴＡＴ４　Ｐ　ＣＶ　７ｉ−Ｔ 　Ｆ　Ｗ　ＲＹ　ＥｐｉＮＨ’ｉα：Ｔ　、　ＴＧＣ、ＧＴＣ、ＧＣＴ　、　Ａ ＴＣ、ＴｒＣ、Ｃ：Ａ、　ＣＧＣ、ＴＡＴｌ、１０　Ｐ　Ｃ工Ａ　Ｆ　Ｆ　？　 ＲＹ　ＥｐｉＮＥｌｌｌ、　１２　ＣＣＴ’　、　ＴＧＣ、ＡＴＣ、ＧＣｒ　、 　ＴＴＣ、ＴＴＣ、ＣＣＡ　、　ＣＧＣ、ＴＡＴｓ　ｐ（工　Ａ　Ｆ　Ｆ　Ｑ　 ＲＹ　ＥｐｉＮＥ５ＣＣＴ　、　ＴＧＣ、ＡＴＣ、ＧＣｒ　、　ＴｒＣ、ＴｒＣ 、ＯＡ　、　ＣＧＣ、ＴＡＴｌｏ　１５　１６　１７　１８　１９　３”４０　 ４１　４２　５２　ＦＢＰτ工　ＴＹＲＬＹＳ　ＡＩａ　ＡＲＧ　工ＬＥ　工Ｉ 、Ｅ　にじＡＬＡＬＹＳＡＲＧ　ＭＥＴ　−ＢＲ工Ｎ７：　ＴＹＲＰＨＥＡＬＡ ＰＨＥＩ］、＋Ｅ　工ＬＥ　７１；、５ＡＬＡＬＹＳＡＲＧ　ＧＬＵ　−Ｅｐｉ Ｃ：　Ｔ’ｎ　ＭＥＴ　ＧＬＹ　Ｐ）ＥＥ　ＳＥＲＬＹＳ　Ｆ’Ｔ　ＧＬＹＭＮ 　ＧＬＹ　匹Ｔ　３／７ＥｐｉＣ７−ス　部ＴＡＪスＬ囮Ｐ肛Ｉ、ＹＳ　ＥＴ　 ＧＬＹ　ＡＳＮ　ＧＬＹ　にＴ１／７ＥｐｉＣｆｉ　ＡＳＮ　ＰＦＥＡＬＡＩＬ ＥＴｈＲＰＲＯＥ／ＥＴＧＬＹＡＳＮＧＬＹ　匹Ｔ　１／７ＥｐｉＣ：：　Ｔ” （ＲＭＥＴ　Ａｊ−Ａ　ＬＥ’Ｕ　ＰＲＥ　ＧＬＮ　Ｉ’ＥＴ　ＧＬＹ　ＡＳＮ 　ＧＬＹ　ＭＥＴ　１／７Ｅｐ工Ｃ２）　−−匹ＴＡｊ講工ＬＥ　ＳＥ罠ｐｉｏ 　迦Ｔ　ＧＬＹＭＮ　ＧＬＹ　匹Ｔ　１／７ＥｐｉＣ２二　−朱　にＴにスエＩ 、Ｅ　ＳＥ罠ＰＲＯ４：ＧＩ、Ｙ超Ｎ　ＧＬＹ　にＴ　２／１５ＥｐｉＣ３２Ｔ ＹＲＭＥＴ　Ａｒ−Ａ　工ＬＥ　ＳＥＲＰＲＯＧ−υＡＬＡムＹＳ　ＡＲＧ　Ｍ ＥＴ　７／１ｓＥｐｉ：＝ｉＴＹ？、’Ｆ’ＥＴＡＳＰＩＬＥεＥＲＰＲＯ）ａ −’ＧＩＬＹｊ’−１ｉＮＧＬＹｉ’！Ｅ’？’−／１５ＥｐｉＣ３４ＴＹＲＭ ＥＴ　ＡＳＰ　工’ｒ−Ｅ　ＳＥＲＰＲＯＧ二Ｕ　ＡＬＡ　ＬＹＳ　ＡＲＧ　Ｆ ＥＴ　４／１５ＥｐｉＣ：＝　ＴＹＲＬＥＵ　ＡＳＰ　工Ｔ−Ｅ　ＳＥＲＰＲＯ Ｇ”−：；　ＡＬＡ　ＬＹＳ　ＡＲＧ　ＭＥＴ　ｚ／１ｓ却１１ ファージ感染性に抗血清が与える影響 ｈｍビーズ上のＥｐｉＮＥ−７とＭＡ−ｍファージの分別投入　３．３４０’　 １．００　３．４・１０”　１．００ｐＨ７，０ｇ、２−’１０’　１８４０’ 　１．６・１０’　４．７−１０’ｐＨ６，０１４・１０’　４．１・１０’　 １．０・１０’　２．９・１０４ｐＨ５，５９，４・１０５２．８・１０’　１ ．ｌｉｉ・１０’　４．７・１０４ｐＨ５，０９−５・ユ、−，３２，９・１； ″　３．１・：ＬＯ’　９．１・１０゛７ｐＨ４，５１，２・１０’　３．５４ ０’　１．２４ｏ’　３．５−１０’ｐＨ４，０１，６・：ＬＯ’　４．８・１ ０’　７．２・ＩＱ’　２．：ｊ、・１０°７ｐＨ３，５９，５４０’　２．９ ・１０’　４．９４０’　１．１ｌＯ−’ｐＨ３，０６，６・１０’　２．０・ １０’　２．９・１０’　８．５・１０４ｐＨ２，５１６・１０’　４．８・１ ０°ｊ１．４・１０’　４．１・１０４ｐＨ２，０３，０４０’　９．１・１０ ’　１．７・１０’　５．００−１Ｏ４ＳＵ’　６．４４０’　３４０°’　５ ．７・ｌＯ’　２４０’”ＳＵＭはすべてのｐＨ溶出分分層ら得られたｐｆｕ　 （または投入の分層）の総計 表ｎ３ カテプシンＧビーズ上のＥｐｉＣ−１０どＭＡ−ｍファージの分別投入　５．０ ・１０”　Ｌ、００　４．６・１０”　Ｃｏ。

ｐＨ７，０１，５４０’　３．０４０”　６．１４０’　１．３・１０−’ｐＨ ６，０２，３４０’　ｔｇ−１ｏ”　２．３４０’　５．０・１０’ｐＨ５，５ ２，５・１０’　５．０・１０−’　１．２・１０’　２．６・１０４ｐＨ５， ０２，１・１．ｎ′４．２・１０−’　１．ｌ・’−０’　２．４４０’ｐＨ４ ，５１１・１０’　２．２・１０°５Ｇ、７・１０’　１．５・１０４ｐＨ４， ０１９・１０’　３．８・１０’　４．４・１０ｊ９．６・１Ｏ−７ｐＨ３，５ １１・１０’　２．２・１０’　４．４・１０’　９Ｊ・１Ｏ−７ｐＨ３，０４ ，８−１０’　９．６４０°’　３．６４０’　７．８−１０°７ｐＨ２，５２ ，０・１０’　４．０・１０°７２．７・１０’　５．９・１０゛７ｐＨ２，０ ２，４４０’　４．８−１０−７３．２ＪＯ’　７．０・１０−’ＳＵＮ”　９ ．９４０’　２・１０’　１．４４０’　３・１０’弱　Ｋつ　＞　１０’　Ｍ 　（０，００５を＞　ｐｉ（６，０工τニーＤ１−−−−−−−−−−−−−一 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−一一一一一−−表２１１ ファージ感染性に抗血清が与える影響 表汎２ ＴＢＳ−ＴＷＥＥＮに よる最終洗浄　３・８°１０゛１・２°１０“　１・８″１０“　５・３°１０ ’ｐＨ７，０６，２−１０’　１８４０’　１．６４０”　４．７４０’ｐＨ６ ，０１，４４０’　４．１４０″　１０４０”　２．９−：ＬＯ’ｐＨ５−５９ ，４・１０ｊ２．８・１０”１．６−１０’　４．７・１０４ｐＨｓ、ｏ　９． ５・１０’　２．”：Ｏ’　ｓ、１・−ｔｏ’　９．’２４Ｑ’ｐＨ４，５１， ２−１，０’　３．５４０’　１．２・１０’　３．５４０’ｐＦＥ　４．０　 １．６’ｌＯ’　４．８４０’　７．２・ｌＯ’　２．１４０−’ｐＨ３，５９ ，５４０ｊ２．９４ＣＩ’　４．９−１０’　１．４４０−’ｐＨ３，０６，６ −１０’　２．０・１０’　２．９−１０’　８．５−１０’ｐＨ２，５１，６ ４０’　４．８４０”　１．４−１０’　４．１・１０４ｐＨ２，０３，０・Ｌ Ｏ’　９．１・１０°ｊ１．７・１０’　５．０・１１０４ＳＵ”　６．４−１ ０’　３４０°”　５．７−１０’　２−１０””ＳＵＭはすべてのｐＨ溶出分 分層ら得られたｐｆｕ　＜または投入の分層）の総計 却１３ カテプシンＧビーズ上のＥｐｉＣ−１０どＭＡ−ｍファージの分別投入　５．０ ・１０”　Ｃｏｏ　４．６・１０”　１．００ｐＨ７，０１５・：ＬＯ’　３． ０・１０”　６．１・１０’　１３・１０゛３ｐＦｉ　ｇ、ｏ　２．３・ｉ０’ 　４．６・１０”　２．３・ｌＯ’　５．０４０’ｐＨ５，５２，５・１ｏ”　 ｓ、ｏ・１０“５１．２・１０’　２．６・１０４ｐＨ５，０２，１・’Ｏ”　 ４．２・１０°５１．１・１０’　２．４・１０４ｐＨ４，５１，１−１０７２ ，２−ｘｏ°’　６．７４０’　１５・１０’ｐＨ４，０１，９４０’　３．８ −１０’　４．４−１０’　９．６−１ｏ”ｐＨ３，５１，１・１０’　２．２ −１０’　＋、４ＪＯｊ９．６・ｌＯ°７ｐＨ３，０４，８・１０’　９．６・ １０°７３．６・１０’　７．８・１０°７ｐＨ２，５２，０・１０’　４．０ ・１０’　２．７・１０ｊ５．９・１０゛７ｐ）！　２．０　２．４−１０’　 ４．８・１０°’　３．２４０’　７．０・１０”ＳＵＮ’　９．９・１０？２ ・１０″　１．４・１０７３・１０”５却１４ 団εビーズの表示ファージの短縮分別 表示ファージ ＥｐｉＮＥ−７ＭＡ−ＩＴ工　２ＭＡ−工ＴニーＥ７１　トリーー工ＴニーＥ７ 　２投入　Ｌ、ＯＱ　１．００　１．００　１．００＋ｐｆｕｌ　（１，８・１ ０’ｌ　（１，２４０”）　（３，３４０’ｌ　（１，１−１０’）却１５ 翫ビーズ上のＥｐｉＮＥ−７とＭＡ−ｍファージの分別投入　１．８・１０’　 １．００　３．０・１０’　Ｌ、ＯＯ’Ｈ７，０５，２−１０’　２．９・１０ ’　６．４４０’　２．１４０°８ｐＨ６，０ｇ、４・１０ｊ３．６４０’　４ ．５−１０’　１５４０’ｐＨ５，５７，８４０’　４．３−１０’　５．０４ ０’　１．７４０−’ｐＨ５，０８，４・１０’　４．７・１０’　５．２・１ ０’　１．７・１０゛５ｐＨ４，５１１・１０’　６．１・１０’　４．４・１ ０’　ｉｓ・１０°５ｐＨ４，０１−１・１０’　□　９．４４０’　２．６・ コＯ’　Ｒ−”ＬＯ’生３．５　１：Ｌ・１０’　ｇ、１・１．０’　１．３・ １ｏ’　４．３・１０４ｐＨ３，０３，８・１０’　２．１・１０″　５．６・ １０’　１．９・１０’ｐＨ２，５２，８−１０ｊ１．６−１０’　４．９・ｌ Ｏ’　１．６・１０’ｐＨ２，０２，９４０’　１．６４０’　２．２４０’　 ７．３・１０−’ＳＵＮ’　７．６・１０’　４．１・１０”　３．１・１０’ 　１．１・１０’投入　２．０１０”　１．００　６．ｆ）１０’　１．００ｐ Ｈ５，０９，６１０’　４．８１０’　３．７・１０’　６．２１０”ｐＨ４， ５４，４１０’　２．２１０’　３Ｊ°１０’　６．３１り５ｐＨ４，０３，１ ＬＵ’　１６１０’　：’、’ａＩＧ’　４．０１０”ｐＨ３，５８，６１０’ 　４．３１０’　９．０４０’　１５１０”ｐＨ３，０２，２１０’　１．１１ ０’　８．９１０’　１．５１０°ゝｐＨ２，５２，２１０’　Ｃ１・１０’　 ２．３・１０’　３．８１０’ｐＨ２，０７，７１０’　３．ｔｌＯ”　８−７ １０’　１．４１０’ＳＵＭ”　８．０１０’　３．９１０’　１．８１０’　 ２．９１０’′″ＳＵＭはすべてのｐＨ溶出分分層ら得られたｐｆｕ　（または 投入の分層）の総計 ａ２１６　（続き） ｈＮＥＮ−ビーズ上Ａ−ＥｐｉＮＥ−７とＭＡ−Ｂｍ、並びにＭＡ−Ｂｍ−Ｂ７ ７　ｙ−ジの分別投入　１．５１０’　１．００ ｐＨ７，０２，９１０’　１．９１０’ｐＨ６，０３，７１０ｊ２．５１０″ ｐＨ５，０４，９１０’　３．３１０’ｐＨ４，５６，０１０’　４．０１０’ 陣４．０　６．１ｌＯｊ４．３１０４ ｐＨ３，５５，しｉ０５　３．３１Ｇ’ｐＨ３，０１，９１０’　１．３１０’ ｐＨ２，５７，７１０’　５．１１０−’ｐＨ２，０９，７１０’　６．５１０ −’ＳＵＭ会　！、３１０’　２．２１０°１表１１７ ｈＮＥＮ−ビーズ上Ａ−Ｂｍ−Ｂ７どＭＡ−Ｂｍ−Ｂ７−１２２２７　ｙ−ジの 分別投入　１．３１０’　１．００　１．２１０’　１．００ｐＨ７，０４，７ １０’　３．６１０−’　４．ＩＭＯ’　３．３１０−ｊｐＨ４，ｂ　Ｇ、２１ ０４　４．１１＋コ、Ｏ−’　６−７　Ｌｎ’　５．６１０’ｃＨ４，０３，４ ・１０’　２．６１０−’　２．７１０’　２．２４０”ｐＨ３，５１，８１０ ’　１．４１０”　２．３１０’　１．！ＭＯ”ｐＨ３，０２，Ｓ１０’　１． ９１０’　６．３１０’　５．２１０’ｐｉｆ　２．５　＜１．３１０’　（１ ，（）１０’　＜１．３１０’　＜１０４０’ＳＵＭ會　３．ｔｌＯ’　２．’ ＭＯ’　３．４１０’　２．１１１０’却１８ １１＜ビーズ上の？ｖｉＡ−ＥｐｉＮＥ７とＭＡ−Ｂｒｎ−Ｂ７−１４１ファー ジの分別投入　Ｇ、Ｌｌｏ”　Ｃｏｏ　２．０１０’　１．００ｐＨ７，０５， ３１０’　８．７１０’　４．５１０’　２．２１０’ｐＨ６，０９，７１０’ 　１６１０’　４．４１０’　２．２１０’ｐＨ４，５’　ｌ（３’ｌＯ’　二 、６１Ｃ”　１．ＺＩＧ＠　６．５’ｌＯ’ｐＨ４，０２，０１０’　３．３１ ０’　１１１０’　５．５１０’ｐＨ３，５９，７１０’　１６１０″　５．９ ・１０’、　３．Ｏ゛ｉ０’ｐＨ３，０３，＋ｎｏ’　６．２１０−’　２．３ ・１０’　１．２１０’ｐＨ２，５１，３１０’　２．１１０−ｊ１２１０’　 ｇ−０１０°５ｐＨ２，０１６１０’　２．６１０−’　１−０１０’　５．０ １０−’ＳＵＭ”　８．６１０’　１４１０”　５．５１０’　２．８１０°１ 犯１９ Ｂ汀Ｉ−Ｂ７−１４１変種表示ファージにょるｈＮＥ結合のｐＨ溶出解析表示蛋 白質　投入ｐｆｕＣ７，。−３，５’　２．。−合計　Ｃ比較　ｆｊ＋ｊＧＮｏ １’　０．９’５　０．２４　２．３　０，３５　２．９　０．１１ｉＭＩＮＯ ２’　６．１　０．５７　２．１　０．４５　３．１　０．１２９ＵＴニーＥ７ −１２２２’　１２　０，７２　４．０　０．６４　５．４　０．２１Ｅｐｉ疋 ７’　０．７２　０．４４　６．４　２．２　、９．０　０．３５ＭＬ’ＴＰＩ ’　３．９　１．８　９．２　１２　１２　０．４６ＭＵＴ１６１９’　０．７ １ｉ１　０．Ｂ２　９．９　０．Ｂ４　１２　０．４６ＭＵＴＱＥ’　４．７　 １．２　１６ｉ　５．３　２２　０．８５ＭＵＴＴ２６Ａゝ　０．５１　２．５ 　１９　３．３　２５　０．９ＧＥ工ＴＴ−Ｂ７−ｉ４１’　１．７　２．２　 １８　５．４　２６　Ｃｏ。

Ｅ！τニーＥ７４４１’　０．７５　２．ｘ　２１３．２　２Ｇ　１．ＯＯ犯２ ０ 弱（ＫＤ＞　１０’と） ｘ、ＫＥＤＳＣＱＬＧＹＳＡＧＰＯ３ＧｒｒＳＲＹＦＹＮＧＴＳＭＡＣＥＴＦＱ ＹＣ−Ｃ−ＯＣＮＧＮＮＦＶＴＥＫＤＣＬＱＴＣＲＧＡ中程度　（１０’　＞　 Ｊ：ｏ　＞　１０−’）強　（１０’　＞　ＫＤ　ｙｉｏ−”Ｄ）非常に強　□ Ｃｌ１ｌ（１０”’　８１表ｎ１ 弱（ＫＤ＞　１０’　Ｍ） 中程度　（１０’　＞ち＞　１０−’）強　（１０−’　＞　ＩＣＤ　＞１０’ 口Ｄ）非常に強　（１１：Ｄ＜工ｏ゛１１と）順序キーは犯２０と同様 口ＭＹＭＵＴ　ＣＹＣＬＥ　１ ｐＨ ｐＨ ＲＥＣＹＣＬＪＮＧ　ｐｉ−Ｉ　ＦＲＡＣＴＩＯＮ（コ ０＝ ２−＝ ■ 工 ＸＩ￥ｆｆ　ＸＷ ： 曹 パ■ ＣＨ３ ＶＶＶ＋＋＋ Σα■ 、　、　Ｉｌｉ＋　ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０１５０１フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　１３１００　 ＺＮＡ　８３１８−４Ｈ／／　Ｃ１２Ｎ　９／９９ （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＳＥ）、　ＡＵ、 　ＣＡ、　ＦＩ、ＪＰ、　Ｎｏ、　ＵＳ（７２）発明者　ガターマン、ソニア、 コソウアメリカ合衆国、０２１７８　マサチューセッツ州、ベルモント、オーク レイ　ロードＦＩ （７２）発明者　ロパーツ、ブルース、りンゼイアメリカ合衆国、０１７５７　 マサチューセッツ州、ミルフォード、ウィンザー　ロード（７２）発明者　マー クランド、ウィリアムアメリカ合衆国、０１７５７　マサチューセッツ州、ミル フォード、ウィンザー　ロード（７２）発明者　ケント、レイチェル、バリボー ルドアメリカ合衆国、０１７１９　マサチューセッツ州、ボックスボロー、スト ーンヘツジプレイス　６０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． ＥｐｉＮＥａ、ＥｐｉＮＥ１、ＥｐｉＮＥ２、ＥｐｉＮＥ３、ＥｐｉＮＥ４、Ｅ ｐｉＮＥ５、ＥｐｉＮＥ６、ＥｐｉＮＥ７、ＥｐｉＮＥ８から成るグループより 選択される人体好中球の抑制因子２． ＥｐｉＣ１、ＥｐｉＣ７、ＥｐｉＣ８、ＥｐｉＣ１０、ＥｐｉＣ２０、ＥｐｉＣ ３１、ＥｐｉＣ３２、ＥｐｉＣ３３、ＥｐｉＣ３４、ＥｐｉＣ３５から成るグル ープより選択される人体好中球の抑制因子３． 表２２０のＢＩＩＩ−Ｅ７、ＢＩＩＩ−Ｅ７−１２２２、ＡＭＩＮＯ１、ＡＭＩ ＮＯ２、ＭＵＴＰ１、ＢＩＩＩ−Ｅ７−１４１、ＭＵＴＴ２６Ａ、ＭＵＴＱＥ、 ＭＵＴ１６１９から成るグループより選択される人体好中球の抑制因子４． 主張１から３による参考抑制因子の相同体抑制因子、上述の相同抑制因子と上述 の参考因子との相違点は、表６５によるクラスＡのひとつまたはそれ以上の置換 にある。 ５． 主張１から３による参与抑制因子の相同体抑制因子、上述の相同抑制因子と上述 の参考因子との相違点は、表６５によるクラスＡまたはＢのひとつまたはそれ以 上の置換にある。 ６． 主張１から３による参考抑制因子の相同体抑制因子、上述の相同抑制因子と上述 の参考因子との相違点は、表６５によるクラスＡ、ＢまたはＣのひとつまたはそ れ以上の置換にある。 ７． 図８の分子式を持つ化合物である人体好中球抑制因子。。分子式は次の通り。 Ｒ１ 水素、Ｌプロピル、ＬＬシスチニル（例：ＮＨ３−ＣＨ（ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ ３−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ）−ＣＯ−）、Ｌ−バリル、その他のアミノ酸ま たは２−８の炭素を持つカルボキシル酸誘導体。 Ｒ２ ２プロピルまたは二次ブチル Ｘ −ＣＯ−ＣＨ２−、−ＣＯ−ＣＨＦ−、−ＣＯ−ＣＨＦ−ＣＨ−、−ＣＯ−ＣＦ ２−、−ＣＯ−ＣＦ２−ＣＨ２−、−Ｂ（ＯＨ）−ＣＨ２−、−Ｂ（ＯＲ１）− ＣＨ２−、−ＳＯ−ＣＨ２−、−ＣＯ−Ｓ、−ＣＯ−ＣＯ−Ｒ３ −Ｈ、−ＣＨ１、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨＲ４ −ＣＨ２−フェニルまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ３Ｒ５ −ＣＨ２−フェニルまたはその他のアリルメチルグループＲ６ −ＮＨ２、−ＯＨまたは追加のＮ−結合を持つアミノ酸Ｒ７ 小さなアルキルグループ ８． 図９の分子式を持つ化合物である人体好中球エラステーゼ抑制因子。分子式は次 の通り。 Ｒ１ 比較的堅固な二作用結合子 Ｒ２ ２プロピルまたは二次的ブチル Ｘ −ＣＯ−ＣＨ２−、−ＣＯ−ＣＨＦ−、−ＣＯ−ＣＨＦ−ＣＨ−、−ＣＯ−ＣＦ ２−、−ＣＯ−ＣＦ２−ＣＨ３−、−Ｂ（ＯＨ）−ＣＨ２−、−Ｂ（ＯＲ１）− ＣＨ２−、−ＳＯ−ＣＨ２−、−ＣＯ−Ｓ、−ＣＯ−ＣＯ−Ｒ３ −Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨＲ４ −ＣＨ２−フェニルまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ３Ｒ５ −ＣＨ２−フェニルまたはその他のアリルメチルグループＲ６ −ＮＨ２、−ＯＨまたは追加のＮ−結合を持つアミノ酸Ｒ７ 小さなアルキルグループ ９． 主張８の抑制因子。Ｒ１は次の相反する作用をするトリサイクリック芳香族環シ ステムを持つ。 ひとつの作用はＣ７に接続するアミノググループへの結合を許可し、もうひとつ の作用はＣ１１とラペル付けされたカルボニル炭素に結合させる。 １０． 主張９の抑制因子。Ｒ２は２カルボキシメチル６アミノメチルアウトラキノン１ １． 図１２の分子式を持つ化合物である人体好中球エラステーゼ抑制因子。分子式は 次の通り。 Ｄ１とＤ２は独立に、ヒドロキシルグループ、または生理学的条件のもとで水溶 性溶液の中でヒドロキシルグループに加水分解できるグループ。 Ｒ３ −Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨＲ４ −ＣＨ３−フェニルまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ３Ｒ５ −ＣＨ２−フェニルまたはその他のアリルメチルグループＲ６ −ＮＨ３、−ＯＨまたは追加のＮ−結合を持つアミノ酸１２． 好中球エラステーゼの過剰活動により生じる人体の状態の予防や治療用の調合品 に上記の主張１−１１にある抑制因子を使用すること。 １３． カテプシンＧの過剰活動により生じる人体の状態の予防や治療用の調合品に上記 の主張１−１１にある抑制因子を使用すること。