JPH0665314B2 - 発酵法によるｌ−バリンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−バリンの製造法Info
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- JPH0665314B2 JPH0665314B2 JP62093959A JP9395987A JPH0665314B2 JP H0665314 B2 JPH0665314 B2 JP H0665314B2 JP 62093959 A JP62093959 A JP 62093959A JP 9395987 A JP9395987 A JP 9395987A JP H0665314 B2 JPH0665314 B2 JP H0665314B2
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ−バリンはアミノ酸輸液及び総合アミノ酸製剤等の重
要な成分である。本発明はこのＬ−バリンを発酵法で製
造する方法を改良するものである。
要な成分である。本発明はこのＬ−バリンを発酵法で製
造する方法を改良するものである。
ブレビバクテリウム属及びコリネバクテリウム属の微生
物がＬ−バリン生産能を有するためには、Ｌ−イソロイ
シン要求性、Ｌ−ロイシン要求性、Ｌ−ホモセリン要求
性、ノルバリン耐性、２−チアゾールアラニン耐性、α
−アミノ酪酸耐性等を付与せしめれば良いことがわかっ
ている。
物がＬ−バリン生産能を有するためには、Ｌ−イソロイ
シン要求性、Ｌ−ロイシン要求性、Ｌ−ホモセリン要求
性、ノルバリン耐性、２−チアゾールアラニン耐性、α
−アミノ酪酸耐性等を付与せしめれば良いことがわかっ
ている。
本発明が解決しようとする問題点はＬ−バリンの製造コ
ストを低下させるために発酵収率を向上させることにあ
る。
ストを低下させるために発酵収率を向上させることにあ
る。
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り、従来より知られているブレビバクテリウム属又はコ
リネバクテリウム属に属するＬ−バリン生産能を有する
微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い出
すべく研究した結果、ポリケタイド類に耐性を付与した
菌株の中に、従来のＬ−バリン生産菌よりも高収率でＬ
−バリンを生産する菌株が存在することを発明した。
り、従来より知られているブレビバクテリウム属又はコ
リネバクテリウム属に属するＬ−バリン生産能を有する
微生物を改良して更に発酵収率の向上した菌株を見い出
すべく研究した結果、ポリケタイド類に耐性を付与した
菌株の中に、従来のＬ−バリン生産菌よりも高収率でＬ
−バリンを生産する菌株が存在することを発明した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリネバクテ
リウム属に属し、ポリケタイド類に耐性を有し、且つＬ
−バリン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、
培地中に生成・蓄積したＬ−バリンを採取することを特
徴とするＬ−バリンの製造法に関する。
リウム属に属し、ポリケタイド類に耐性を有し、且つＬ
−バリン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、
培地中に生成・蓄積したＬ−バリンを採取することを特
徴とするＬ−バリンの製造法に関する。
ポリケタイド類としては多くのものが知られているが、
例えばtriacetie acid lactone,mycophenolic acid,ter
rin,cerulenin,fallacinal,frenolicin,solorinic acid
等がある。
例えばtriacetie acid lactone,mycophenolic acid,ter
rin,cerulenin,fallacinal,frenolicin,solorinic acid
等がある。
本発明において用いられている微生物はブレビバクテリ
ウム属又はコリネバクテリウム属に属し、ポリケタイド
類に耐性を有し、且つＬ−バリン生産能を有する変異株
である。本発明の変異株を得るには、下記野生株に、先
にＬ−バリン生産能を付与し、次いでポリケタイド類耐
性を付与しても良いし、下記野生株にポリケタイド類耐
性を付与し、次いでＬ−バリン生産能を付与しても良
い。
ウム属又はコリネバクテリウム属に属し、ポリケタイド
類に耐性を有し、且つＬ−バリン生産能を有する変異株
である。本発明の変異株を得るには、下記野生株に、先
にＬ−バリン生産能を付与し、次いでポリケタイド類耐
性を付与しても良いし、下記野生株にポリケタイド類耐
性を付与し、次いでＬ−バリン生産能を付与しても良
い。
本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテリウム属
又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムＬ−グル
タミン酸生産菌として知られているものであり、例え
ば、以下のものがある。ブレビバクテリウム・デリバリカタム ATCC 14020ブレビバクテリウム・フラバム ATCC 14067ブレビバクテリウム・ラクトファ -メンタム ATCC 13869ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ATCC 14066コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ATCC 13870コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC 13032 これらの親株より本発明の変異株を変異誘導する方法は
Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに
接触せしめる等の通常の変異誘導方法が適宜適用でき
る。変異処理した菌株から本発明の変異株を分離する方
法は、ポリケタイド類を含む培地で生育するような菌株
を採取することによって行われる。
又はコリネバクテリウム属の特にコリネホルムＬ−グル
タミン酸生産菌として知られているものであり、例え
ば、以下のものがある。ブレビバクテリウム・デリバリカタム ATCC 14020ブレビバクテリウム・フラバム ATCC 14067ブレビバクテリウム・ラクトファ -メンタム ATCC 13869ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ATCC 14066コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ATCC 13870コリネバクテリウム・グルタミクム ATCC 13032 これらの親株より本発明の変異株を変異誘導する方法は
Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに
接触せしめる等の通常の変異誘導方法が適宜適用でき
る。変異処理した菌株から本発明の変異株を分離する方
法は、ポリケタイド類を含む培地で生育するような菌株
を採取することによって行われる。
本発明の変異株の具体的な変異誘導方法を以下に示す。
ブイヨン寒天スラント上に３０℃２４時間生育させたブ
レビバクテリウム・ラクトファーメンタムAJ3434(FERM
BP-1896，２−チアゾールアラニン耐性，イソロイシン
及びメチオニン要求性）又は及びコリネバクテリウム・
グルタミクムAJ3776(FERM BP-1897)（特開昭50-15568
4）の菌体をM/30リン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度108〜10
9／mlの菌体懸濁液に500μｇ／mlのＮ−メロチル−Ｎ′
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃に２０
分間保持した。ついで遠心分離して菌体を集め、M/30リ
ン酸緩衝液で良く洗浄した後、ポリケタイドの１つであ
るmycophenolic acid（以下MPAと略す）を含む下記組成
の培地に接種し、31.5℃で４〜１０日間培養した。
レビバクテリウム・ラクトファーメンタムAJ3434(FERM
BP-1896，２−チアゾールアラニン耐性，イソロイシン
及びメチオニン要求性）又は及びコリネバクテリウム・
グルタミクムAJ3776(FERM BP-1897)（特開昭50-15568
4）の菌体をM/30リン酸緩衝液に懸濁し菌体濃度108〜10
9／mlの菌体懸濁液に500μｇ／mlのＮ−メロチル−Ｎ′
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え３０℃に２０
分間保持した。ついで遠心分離して菌体を集め、M/30リ
ン酸緩衝液で良く洗浄した後、ポリケタイドの１つであ
るmycophenolic acid（以下MPAと略す）を含む下記組成
の培地に接種し、31.5℃で４〜１０日間培養した。
培地組成（pH7.0） 成分 含量 グルコース 2.0 ｇ／dl 尿素 0.2 〃 (NH4)2SO4 0.5 〃 K2HPO4 0.1 〃 KH2PO4 0.1 〃 MgSO4・7H2O 0.1 〃 FeSO4・7H2O 0.001 〃 MnSO4・7H2O 0.001 〃 ビオチン 50 μｇ／ サイアミン塩酸塩 100 〃 Ｌ−イソロイシン 0.3 g/dl DL−メチオニン 0.1 〃 MPA 0.1 〃 寒天 2.0 〃 寒天培地に生育したコロニーの中からＬ−バリン生産能
の高い菌株としてブレビバクテリウム・ラクトファーメ
ンタムAJ12341(FERM BP-1763)及びコリネバクテリウム
・グルタミカムAJ12342(FERM BP-1764)を得た。
の高い菌株としてブレビバクテリウム・ラクトファーメ
ンタムAJ12341(FERM BP-1763)及びコリネバクテリウム
・グルタミカムAJ12342(FERM BP-1764)を得た。
このようにして得られた変異株のMPA耐性度を親株と比
較した。
較した。
グルコース1.0g/dl，尿素0.15g/dl，硫安0.3g/dl，K2HP
O4 0.1g/dl，KH2PO4 0.1g/dl，MgSO4・7H2O 0.05g/dl，F
eSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g/dl，ピオチ
ン50μｇ／，サイアミン塩酸塩100μｇ／，Ｌ−イ
ソロイシン0.1g/dl,DL-メチオニン0.1g/dl及び表に示す
量のMPAを含み、pH7.0に調節した培地に、天然培地（ペ
プトン1g/dl，酵母エキス1g/dl，NaCl 0.5g/dl，pH7.
0）スラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁し
て接種し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
O4 0.1g/dl，KH2PO4 0.1g/dl，MgSO4・7H2O 0.05g/dl，F
eSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g/dl，ピオチ
ン50μｇ／，サイアミン塩酸塩100μｇ／，Ｌ−イ
ソロイシン0.1g/dl,DL-メチオニン0.1g/dl及び表に示す
量のMPAを含み、pH7.0に調節した培地に、天然培地（ペ
プトン1g/dl，酵母エキス1g/dl，NaCl 0.5g/dl，pH7.
0）スラントで２４時間培養した菌体を殺菌水に懸濁し
て接種し、２４時間培養して生育度を濁度で測定した。
上記の変異株にノルバリン耐性、２−チアゾールアラニ
ン耐性、α−アミノ酪酸耐性のようにすでにＬ−バリン
の生産性を向上せしめることが知られている性質を更に
付加することにより収率が向上する場合が多い。
ン耐性、α−アミノ酪酸耐性のようにすでにＬ−バリン
の生産性を向上せしめることが知られている性質を更に
付加することにより収率が向上する場合が多い。
これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素源、無機
イオン及び更に必要に応じ、その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
イオン及び更に必要に応じ、その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シュークロース、酢酸等の
有機酸等その他が使用できる。
有機酸等その他が使用できる。
窒素源としてはアンモニアガス、アンモニア水、アンモ
ニウム塩、尿素等が好適である。
ニウム塩、尿素等が好適である。
培養は好気的条件が望ましく、培養の間培地のpHを４な
いし８に、温度を２５ないし３７℃に調節しつつ行えば
より好ましい結果が得られる。
いし８に、温度を２５ないし３７℃に調節しつつ行えば
より好ましい結果が得られる。
かくして、１ないし７日間も培養すれば培地中に著量の
Ｌ−バリンが生成蓄積される。
Ｌ−バリンが生成蓄積される。
培養液よりＬ−バリンを採取する方法はイオン交換樹脂
による方法等通常の方法で採取できる。
による方法等通常の方法で採取できる。
実施例１ グルコース３g/dl，KH2PO4 0.1g/dl，MgSO4・7H2O 0.04g
/dl，FeSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g/dl，
尿素0.3g/dl，大豆蛋白酸加水分解液0.13g/dl（全窒素
として）、ピオチン10μｇ/dl，サイアミン・HCl300μ
ｇ/l，DL−メチオニン0.01g/dlを含む種母培地をpH6.5
に調節し、その５０mlを５００ml容肩付フラスコに入れ
加熱殺菌した。これに第１表に示す菌株をそれぞれ接種
し、31.5℃に保ちつつ、２０時間振盪培養した。
/dl，FeSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g/dl，
尿素0.3g/dl，大豆蛋白酸加水分解液0.13g/dl（全窒素
として）、ピオチン10μｇ/dl，サイアミン・HCl300μ
ｇ/l，DL−メチオニン0.01g/dlを含む種母培地をpH6.5
に調節し、その５０mlを５００ml容肩付フラスコに入れ
加熱殺菌した。これに第１表に示す菌株をそれぞれ接種
し、31.5℃に保ちつつ、２０時間振盪培養した。
一方、グルコース14g/dl，KH2PO4 0.1g/dl，MgSO4・7H2O
0.04g/dl，FeSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g
/dl，硫安2.0g/dl，大豆蛋白酸加水分解液0.08g/dl（全
窒素として），ビオチン５μｇ/dl，サイアミン・HCl30
μｇ/dl，DL−メチオニン60mg/dlを含むpH6.5に調節し
た培地の２８５mlを１容ファーメンターに入れ殺菌し
た。これに上記種母培地をそれぞれ１５mlずつを接種し
た。培地は31.5℃にてアンモニアガスによりpH6.5ない
し、7.0に保持しつつ通気攪拌下に残グルコースが0.5g/
dl以下になるまで行った。
0.04g/dl，FeSO4・7H2O 0.001g/dl，MnSO4・7H2O 0.001g
/dl，硫安2.0g/dl，大豆蛋白酸加水分解液0.08g/dl（全
窒素として），ビオチン５μｇ/dl，サイアミン・HCl30
μｇ/dl，DL−メチオニン60mg/dlを含むpH6.5に調節し
た培地の２８５mlを１容ファーメンターに入れ殺菌し
た。これに上記種母培地をそれぞれ１５mlずつを接種し
た。培地は31.5℃にてアンモニアガスによりpH6.5ない
し、7.0に保持しつつ通気攪拌下に残グルコースが0.5g/
dl以下になるまで行った。
Ｌ−バリンの対糖重量収率は第２表に示す通りであっ
た。
た。
ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタムAJ12341を
上記の方法で培養して、培養液１を得、これより遠心
分離して菌体他を除き、上清を強酸性イオン交換樹脂
「ダイヤイオン」SK-1B（NH4 +型）に通過させた。樹脂
を水洗後、２Ｎ−アンモニア水にて溶出し、ついで溶出
液を濃縮し、これよりＬ−バリンの粗結晶１９ｇを得
た。
上記の方法で培養して、培養液１を得、これより遠心
分離して菌体他を除き、上清を強酸性イオン交換樹脂
「ダイヤイオン」SK-1B（NH4 +型）に通過させた。樹脂
を水洗後、２Ｎ−アンモニア水にて溶出し、ついで溶出
液を濃縮し、これよりＬ−バリンの粗結晶１９ｇを得
た。
実施例２ １容小型ジャーファーメンターに下記の組成よりなる
発酵培地３００ml宛注入し、常法により殺菌した。
発酵培地３００ml宛注入し、常法により殺菌した。
発酵培地組成： これらの培地にあらかじめ上記の種発酵培地で２４時間
振盪培養した各菌株の培養液を各々５％の割合で接種
し、温度３１℃、攪拌数1500rpm、通気量1/1VVMの条件
で培養を行った。
振盪培養した各菌株の培養液を各々５％の割合で接種
し、温度３１℃、攪拌数1500rpm、通気量1/1VVMの条件
で培養を行った。
培養中、酢酸と酢酸アンモニウムとのモル比率が１：0.
20の混合液（酢酸濃度として70g/dl）を添加しつつ培養
液pHを7.5に保つと共に培養液への炭素源の供給を行っ
た。培養９０時間後のＬ−バリンの蓄積量、対消費酢酸
重量収率は第３表の如くであった。なお、AJ12341株の
培養終了液を除菌し常法にしたがって処理したところ、
培養液１当り１５ｇのＬ−バリン粗結晶が得られた。
20の混合液（酢酸濃度として70g/dl）を添加しつつ培養
液pHを7.5に保つと共に培養液への炭素源の供給を行っ
た。培養９０時間後のＬ−バリンの蓄積量、対消費酢酸
重量収率は第３表の如くであった。なお、AJ12341株の
培養終了液を除菌し常法にしたがって処理したところ、
培養液１当り１５ｇのＬ−バリン粗結晶が得られた。
Claims (1)
- 【請求項１】ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
ウム属に属しポリケタイド類に耐性を有し、且つＬ−バ
リン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成・蓄積したＬ−バリンを採取する事を特徴とす
るＬ−バリンの製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62093959A JPH0665314B2 (ja) | 1987-04-16 | 1987-04-16 | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 |
| KR1019880004237A KR960016871B1 (ko) | 1987-04-16 | 1988-04-14 | L-발린 생성 돌연변이체 및 이의 발효에 의한 l-발린의 제조방법 |
| EP88106070A EP0287123B1 (en) | 1987-04-16 | 1988-04-15 | L-valine producing microorganism and a process for producing l-valine by fermentation |
| DE88106070T DE3882413T2 (de) | 1987-04-16 | 1988-04-15 | L-Valin produzierender Mikroorganismus und ein Verfahren zur Herstellung von L-Valin durch Gärung. |
| US07/478,032 US5188948A (en) | 1987-04-16 | 1990-02-09 | Process for producing L-valine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62093959A JPH0665314B2 (ja) | 1987-04-16 | 1987-04-16 | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63258588A JPS63258588A (ja) | 1988-10-26 |
| JPH0665314B2 true JPH0665314B2 (ja) | 1994-08-24 |
Family
ID=14096951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62093959A Expired - Lifetime JPH0665314B2 (ja) | 1987-04-16 | 1987-04-16 | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0287123B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0665314B2 (ja) |
| KR (1) | KR960016871B1 (ja) |
| DE (1) | DE3882413T2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2023195475A1 (ja) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | 味の素株式会社 | 寄生植物を防除する方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100442768B1 (ko) * | 2001-05-21 | 2004-08-04 | 주식회사 한국표지화합물연구소 | 방사성동위원소 표지화합물로서 ｌ-발린의 제조방법 |
| DE102005019967A1 (de) | 2005-04-29 | 2006-11-02 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren |
| KR101117022B1 (ko) * | 2011-08-16 | 2012-03-16 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-발린 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-발린 제조방법 |
| CN116731933B (zh) * | 2023-08-03 | 2023-10-03 | 欧铭庄生物科技(天津)有限公司滨海新区分公司 | 一种谷氨酸棒杆菌及其在生产缬氨酸中的应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52116B2 (ja) * | 1973-03-09 | 1977-01-05 |
-
1987
- 1987-04-16 JP JP62093959A patent/JPH0665314B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-04-14 KR KR1019880004237A patent/KR960016871B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-15 DE DE88106070T patent/DE3882413T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-15 EP EP88106070A patent/EP0287123B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2023195475A1 (ja) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | 味の素株式会社 | 寄生植物を防除する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0287123B1 (en) | 1993-07-21 |
| EP0287123A3 (en) | 1989-10-04 |
| KR880012763A (ko) | 1988-11-29 |
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