JPH0710880B2 - 抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする抗血液凝固剤 - Google Patents

抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする抗血液凝固剤

Info

Publication number
JPH0710880B2
JPH0710880B2 JP22705086A JP22705086A JPH0710880B2 JP H0710880 B2 JPH0710880 B2 JP H0710880B2 JP 22705086 A JP22705086 A JP 22705086A JP 22705086 A JP22705086 A JP 22705086A JP H0710880 B2 JPH0710880 B2 JP H0710880B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
anticoagulant
amino acid
stable
minutes
cystine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP22705086A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS62174023A (ja
Inventor
正博 真木
英郎 谷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kowa Co Ltd
Original Assignee
Kowa Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=16705389&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH0710880(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Kowa Co Ltd filed Critical Kowa Co Ltd
Publication of JPS62174023A publication Critical patent/JPS62174023A/ja
Publication of JPH0710880B2 publication Critical patent/JPH0710880B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4721—Lipocortins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
    • G03—PHOTOGRAPHY; CINEMATOGRAPHY; ANALOGOUS TECHNIQUES USING WAVES OTHER THAN OPTICAL WAVES; ELECTROGRAPHY; HOLOGRAPHY
    • G03C—PHOTOSENSITIVE MATERIALS FOR PHOTOGRAPHIC PURPOSES; PHOTOGRAPHIC PROCESSES, e.g. CINE, X-RAY, COLOUR, STEREO-PHOTOGRAPHIC PROCESSES; AUXILIARY PROCESSES IN PHOTOGRAPHY
    • G03C1/00—Photosensitive materials
    • G03C1/005—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein
    • G03C1/04—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein with macromolecular additives; with layer-forming substances
    • G03C1/047—Proteins, e.g. gelatine derivatives; Hydrolysis or extraction products of proteins
    • G03C2001/0471—Isoelectric point of gelatine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/842—Skin; hair; nails; sebaceous glands; cerumen
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
    • Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規な抗血液凝固物質、その製法及びそれを
有効成分として含有する抗血液凝固剤並びに医薬組成物
に関する。
〔従来の技術〕
血液凝固は、トロンボプラスチン活性の発現に始まり、
血中のＸ因子、Ｖ因子の活性化、次いでプロトロンビン
が活性化されてトロンビンを生じ、これがフイブリノー
ゲンをフイブリンに変換させることにより完成すると考
えられている。
血液凝固に起因する疾患を治療するには、この血液凝固
機構に関与する種々の凝固因子を阻害若しくは失活させ
る物質、すなわち抗血液凝固物質を用いることが有効で
ある。この抗血液凝固物質としては、現在、ヘパリン、
ヘパリンコフアクター−II、アンチトロンビン−III、
α２−マクログロブリン、α１−トリプシンインヒビタ
ー、C1−エステラーゼインヒビター、プロテインＣ等が
知られている。また最近クリスP.M.リユーテリングスペ
ルガーら（Chris P.M.Reutelingsperger et al.）は、
臍帯動脈から、分子量32kDaの新規な抗凝固活性を有す
る物質を見い出し、報告している〔Eur.J.Biochem.151,
625〜629（1985）参照〕。
〔発明が解決しようとする問題点〕
しかしながら、これらの抗血液凝固物質の多くは単に存
在が確認された程度であり、医薬として実用に供されて
いるのはヘパリンのみである。しかし、ヘパリンに出血
傾向を招く副作用があるため、その使用方法及び使用量
等が極めて限定されており、抗血液凝固剤としては安全
性の面から満足すべきものではない。
また、リユーテリングスペルガーらの見出した物質は後
述するように本発明物質と異なるもので、しかも混合物
の状態で活性が測定されているにすぎず、到底実用に供
し得るものではない。
したがつて、更に優れた抗血液凝固剤の開発が望まれて
いた。
〔問題点を解決するための手段〕
そこで本発明者らは、安全で副作用のない抗血液凝固剤
を提供すべく鋭意研究を重ねた結果、組織トロンボプラ
スチン含有量が多く、XIII因子、線溶阻止因子等も含有
し、血栓形成傾向にあると考えられ、また血液凝固機構
からも特異な状態を保持している胎盤中、特に人胎盤ホ
モジネートを遠心分離して得られる沈渣並びに上清部分
を分画して得られるマイクロゾーム画分から新規な抗血
液凝固物質が得られることを見出し、本発明を完成し
た。
すなわち、本発明は下記性質を有する人胎盤由来の新規
な抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする
抗血液凝固剤を提供するものである。
分子量（SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
法、還元状態） 34,000±2,000 等電点（アンフオライトを用いる等電点カラム電気
泳動法） 4.7±0.1 安定性 イ 50℃、30分加熱処理で失活 ロ pH4〜10で安定 ハ 血漿中37℃、30分で安定 ニ プロテアーゼタイプＩ又はトリプシンによる３時間
処理で74％以上の抗凝固活性を保持 作用 イ カルシウム再加凝固時間を延長 ロ プロトロンビン時間を延長 ハ 活性化部分トロンボプラスチン時間を延長 アミノ酸分析 アミノ酸分析で、アスパラギン酸、スレオニン、セリ
ン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、1/
2シスチン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイ
シン、チロシン、フエニルアラニン、ヒスチジン、リジ
ン及びアルギニンの存在が認められる。
本発明の抗血液凝固物質（以下「本発明物質」という）
は、例えば次の如くして調製される。
まず、ヒト胎盤から胎盤ホモジユネートを調製し、遠心
分離をおこなう。ホモジナイズ操作は、胎盤より羊膜等
を切除した後、生理食塩水にて充分洗浄し、ワーリング
ブレンダー及びポリトロンを用いておこなう。得られた
ホモジネートを遠心分離に付し、上清及び沈渣を得る。
こうして得られた胎盤ホモジネート沈渣は、緩衝液で充
分洗浄し、再度遠心分離して、洗浄沈渣を分取し、以後
の抽出操作に付す。即ち、洗浄沈渣は、EDTA、EGTA、シ
ユウ酸、クエン酸、ニトリロ三酢酸ナトリウム、リン酸
等のキレート剤を含む緩衝液及び／又は、トリトンＸ−
100、ルブロール、SDS、デオキシコール酸等の界面活性
剤を含む緩衝液に浸し、４℃〜８℃にて一晩放置後、遠
心分離して上清を集め抽出液を得る。この場合、抽出
は、キレート剤及び界面活性剤の両方を用いて行なうこ
ともできる。
一方、胎盤ホモジネート上清は、更に50,000〜100,000g
の超遠心分離して沈渣部分であるマイクロゾーム分画を
得る。このマイクロゾーム分画を洗浄後、上記と同様に
して、キレート剤及び／又は界面活性剤抽出を行なつた
後、超遠心分離して上清を集め抽出液を得る。
このようにして得られた抽出液は、硫安分画に付され
る。硫安分画は、先づ上記抽出液に35％飽和となるよう
に固形硫安を加えて遠心分離し上清を分取する。次い
で、上清に対し85％飽和となるように硫安を加えて遠心
分離し、沈渣を分取することによりおこなわれる。
得られた硫安分画は、更に公知の分離・精製手段、例え
ば透析、イオン交換クロマトグラフイー、ゲル過、吸
着クロマトグラフイー、疎水性クロマトグラフイー、等
電点カラム電気泳動法、レクチン又は抗体を用いたアフ
イニテイー・クロマトグラフイー等を単独又は組合せ用
いることにより精製され、本発明物質が得られる。例え
ば、キレート剤又は／及び界面活性剤は抽出液を硫安分
画して得られた画分を充分透析し、この透析液をDEAE−
トヨパールを用る直線濃度勾配法により溶出させ、活性
画分を透析した後、ブルーセフアロースを通過させる。
次いで活性画分を濃縮し、セフアデツクスＧ−100を用
いるゲル過させることにより本発明物質を得る。
斯くして得られた本発明物質は、前記の性質を有するも
のであるが、更に具体的に測定方法及び結果について説
明すれば以下の如くである。
分子量測定 SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（12％ポリア
クリルアミドゲル；還元状態）により測定した結果、3
4,000±2,000であつた。また、セフアデツクスＧ−100
を用いるゲル過法により測定した結果、低分子量ウロ
キナーゼ（分子量約34,000）と同じ位置に溶出した。
等電点測定 アンフオライトを用いる等電点カラム電気泳動法（pH3.
5〜10,4℃）により300Vで48時間泳動して測定した結
果、4.7±0.1であつた。また、アンフオライトを用いた
ポリアクリルアミドゲルによる等電点電気泳動法（pH4.
0〜6.0,10℃）により10Wで２時間泳動して測定した結
果、4.9を示した。
安定性試験 イ 加熱処理に対する安定性 各設定温度（０〜90℃）で30分間処理した後の抗血液凝
固活性をカルシウム再加凝固時間法により測定した結
果、50℃以上の温度において該活性は完全に消失した。
ロ pH安定性 pH2.5〜10.0の種々の緩衝液を加え、４℃で18時間及び2
5℃で３時間処理した後、残存する抗血液凝固活性をカ
ルシウム再加凝固時間法により測定した結表、pH4〜10
の範囲においては該活性の低下は見られなかつた。
ハ 血漿中における安定性 血漿中に本発明物質を加え、37℃で30分インキユベート
した後、残存する抗血液凝固活性をカルシウム再加凝固
時間法により測定した結果、活性の低下は見られなかつ
た。
ニ プロテアーゼに対する安定性 本発明物質溶液（2.4mg/ml）100μ、プロテアーゼ溶
液20μ〔プロテアーゼタイプI1.1単位/ml,トリプシン
880BAEE単位/ml又は20mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4,コ
ントロール）〕及び0.15M塩酸ナトリウルを含む50mMト
リス−塩酸緩衝液（pH7.4）80μの混液を、37℃でイ
ンキュベートし、０、１、２及び３時間後に５μをサ
ンプリングし、活性化部分トロンボプラスチン時間（AP
TT）を測定した。ここで、APTTはサンプル５μにAPTT
試薬20μ、生理食塩液75μ及び標準血清100μを
加え、37℃で５分間インキュベート後、塩化カルシウム
（0.0125M）200μを加え、凝固時間を測定した。
その結果、表ａに示す如く、本発明物質はプロテアーゼ
タイプＩ及びトリプシンのいずれで３時間処理しても74
％以上の活性を保持していた。なお、このとき本発明物
質を添加しないネガティブコントロールの凝固時間は52
秒であった。
作用 イ カルシウム再加凝固時間に対する作用 標準血漿（オーソ社製）100μと本発明物質溶液100μ
を混和し、３分後に0.025M塩化カルシウム溶液100μ
を添加し、凝固時間を測定した。その結果、表１に示
す如く、強力なカルシウム再加凝固時間延長作用が認め
られた。
ロ プロトロンビン時間（PT）に対する作用 各種濃度のPT試薬（シンプラスチン：ワーナー・ランバ
ート社製）100μ及び本発明物質溶液100μを混和
し、３分後に標準血漿100μを添加し、凝固時間を測
定した。その結果、表２に示す如く、強力なPT延長作用
が認められた。
ハ 活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）に対す
る作用 APTT試薬（活性トロンボファツクス；オーソ社製）10μ
と本発明物質溶液90μを混和し、２分後に標準血漿
100μを混和する。６分後に0.025M塩化カルシウム溶
液100μを添加し、凝固時間を測定した。その結果、
表３に示す如く強力なAPTT延長作用が認められた。
アミノ酸組成 本発明物質を6N塩酸で110℃、24時間加水分解処理し、
ワーターズ高速液体クロマトグラフイー（Waters HPL
C）アミノ酸分析システムにより測定した。結果を表４
に示す。
叙上の如くして得られた物質と前記のリューテリングス
ペルガーらにより報告された物質とは、プロテアーゼに
対する安定性が大きく異なることから、両者は異なる物
質であると判断される。
本発明物質を抗血液凝固剤の有効成分として使用する場
合の剤型としては、注射剤が挙げられる。注射剤として
は、凍結乾燥粉末を用時、注射用蒸留水、生理食塩水等
に溶解して投与する形態が好ましい。投与部位として
は、静脈内が適当である。
投与量は、疾患の重症度、患者の体重等により異なる
が、通常10μｇ〜10mg/Kg・dayであることが好ましい。
尚、本発明物質は、上記投与量の範囲内においては全く
異常が認められず、安全である。なお、本発明物質を注
射剤として製剤化する際には安定化剤として、例えばア
ルブミン、ゼラチン、マンニトール等を添加することが
でき、こうすることによつて製剤化工程での分解、吸着
等による失活が防止でき、また、製剤の保存安定性が向
上する。
〔作用及び発明の効果〕
本発明物質は、強力な抗血液凝固活性を有し、特に組織
トロンボプラスチン活性の亢進している状態、すなわ
ち、凝固亢進状態において、より強い活性を示すことか
ら、これを有効成分として含有する抗血液凝固剤は、副
作用が少なく安全である。
〔実施例〕
次に実施例を挙げ、本発明を説明する。
実施例１ （ｉ） ヒト胎盤５個（約2500g）より、膜等を除去
し、生理食塩水で充分洗浄後ミンチする。次いでワーリ
ングブレンダーを用いて破砕し、これに更に、50mMトリ
ス−塩酸緩衝液（pH7.4）２を加え、ポリトロン（Pol
ytron）で磨砕する。得られたホモジネートを7,000rpm1
5分間遠心分離し、沈渣を分取した。得られた沈渣に再
度50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）２を加え、ポリ
トロンでホモジナイズし、7,000rpm15分間遠心分離して
洗浄沈渣を得た。この操作を数回繰り返し、血液成分を
除去して、洗浄沈渣930gを得た。
（ii） （ｉ）で得た沈渣900gに、50mM EDTAを含む50m
Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）を約２加え、ワーリン
グブレンダーでホモジナイズする。このホモジネートを
４℃にて、一夜撹拌後7,000rpm15分間遠心分離して、抽
出液２を得た。
（iii） （ii）で得た抽出液に固形硫安を加え、35％
飽和とし、４℃で30分〜数時間放置後、7,000rpm15分間
遠心分離し上清を分取した。この上清に更に硫安を加
え、85％飽和とし、４℃で２時間放置した後7,000rpm15
分間遠心分離し、沈渣を分取した。得られた沈渣を20mM
トリス−塩酸緩衝液の少量に溶かし、同緩衝液に対し、
４℃で一夜、充分に透析した。透析中に生じた沈澱は、
7,000rpm15分間遠心分離して除き、透析液390mlを得
た。
（iv） 得られた透析液を、20mMトリス−塩酸緩衝液
（pH7.4）で平衡化したDEAE−トヨパール（φ5.5×19c
m）に吸着させ、同緩衝液に充分洗浄した後、０〜0.3M
塩化ナトリウムを含む同緩衝液４を用い、直線濃度勾
配により１分画20mlとなる様に溶出させた。活性画分
は、ほぼ0.15M塩化ナトリウム濃度付近にて溶出され、3
80mlの活性画分を得た。
（ｖ） 得られた活性画分は、0.1Mリン酸緩衝液（pH7.
0）に対し、４℃で一夜充分に透析し、同緩衝液にて平
衡化したブルーセフアロース（φ2.5×12cm）カラムを
通過させた。A280の吸収を示す通過画分（480ml）を集
め、これをダイアフロー メンブランフイルターYM−10
を用いて濃縮した。
（vi） （ｖ）で得た濃縮液をセフアデツクスＧ−100
を用いるゲル過（φ4.5×75cm）に付し、生理食塩水
で１分画8mlになるように溶出させ、活性画分88〜104を
集め、これを限界過により濃縮して、本発明物質14.5
ml（蛋白重量136.1mg,Lowry法）を得た。
なお、各精製段階において得た蛋白の収量を下に示す。
工程 蛋白重量（mg） （ii）工程（EDTA抽出） 7226 （iii）工程（硫安分画、透析） 3184 （iv）工程（DEAE−トヨパール吸着） 531 （ｖ）工程（ブルー−セフアロース吸着） 163 （vi）工程（セフアデツクスＧ−100吸着） 136 実施例２ 実施例１（ｉ）で得た洗浄沈渣1gに各種濃度（０〜200m
MのEDTAを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）1mlを
加え、ホモジナイズした後、４℃一夜放置し、次いで7,
000rpm15分間遠心分離し、上清1mlを得た。得られた上
清をSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ウエスタ
ンプロツテイングを行い、ウサギ抗血清を用いて免疫染
色し、デンシトメーターで本発明物質の定量を行つた。
この結果を表５に示す。
この結果から、本発明物質は、12.5mM以上のEDTA、特に
20〜100mMのEDTAを含む等量のトリス−塩酸緩衝液を用
いることにより、効率良く抽出することができることが
明らかとなつた。
実施例３ ヒト胎盤３個（約1500g）を用い、実施例１（ｉ）と同
様にして洗浄沈渣510gを得た。
この洗浄沈渣10gに対し、下に示した各種キレート作用
を有する試薬を50及び100mM含む、50mMトリス−塩酸緩
衝液（pH7.4）10ml加え、ホモジナイズした後、４℃一
夜放置し、次いで7,000rpm15分間遠心分離し上清10mlを
得た。得られた上清についてSDS−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動後、タンパク染色を行ない、本発明物質に
対応する移動度の位置にタンパク染色バンドが検出され
るかどうか調べた。
タンパク染色バンドが検出された試料については、実施
例１（iii）、（iv）、（ｖ）および（vi）に準じた方
法により、硫安分別後、DEAE・トヨパール（φ1.4×7c
m）によるイオン交換、次いでブルーセフアロース（φ
1.4×6.5cm）の通過、さらにセフアデツクスＧ−100に
よるゲル過（φ2.0×90cm）をおこない、それぞれ本
発明物質を精製した。この結果を表６に示す。尚、SDS
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果、相当するタ
ンパク染色バンドが検出されなかつた試料については−
（マイナス）、精製を行なつた試料については最終収量
（mg,Lowry法による測定）を示した。
この結果から、本発明物質は特にカルシウムに対し強い
キレート効果を有する試薬により、少なくとも洗浄沈渣
に対して等量のトリス−塩酸緩衝液を用いれば効率よく
抽出、精製できることが明らかとなつた。
実施例４ 実施例３と同様にして得た洗浄沈渣1gに対し、下に示し
た各種界面活性剤を0.5及び1.0％含む50mMトリス−塩酸
緩衝液（pH7.4）4mlを加え、一夜放置した後の遠心上清
をSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動し、本発明物
質の抽出について調べた。この結果を表７に示す。本発
明物質に対応する移動度の位置にタンパク染色バンドが
検出されたものについては＋（プラス）、明らかな染色
バンドが検出されなかつたものについては±（プラスマ
イナス）で示した。
この結果に基づき、洗浄沈渣10gに対し、１％ルブロー
ルを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）40ml加え、
ホモジナイズした後、４℃で一夜放置し、7,000rpm15分
間遠心分離した上清40mlを用いて、セフアデツクスＧ−
100（φ4.8×75cm）によるゲル過の後、DEAE−トヨパ
ール（φ1.4×7cm）によるイオン交換、再度セフアデツ
クスＧ−100（φ2.0×90cm）によるゲル過を用いて本
発明物質を精製したところ、0.95mg（Lowry法による）
を得た。
以上の結果から、本発明物質は界面活性剤により、少な
くとも洗浄沈渣に対して等量のトリス−塩酸緩衝液を用
いれば効率良く抽出できることが明らかとなつた。
実施例５ 実施例１（ｉ）及び（ii）と同様にして調製した抽出液
に各種飽和度（40〜80％）の硫安を加え、４℃にて30分
以上放置した後、7,000rpm15分間遠心分離し、上清と硫
安画分を分離した。
上清及び硫安画分を各々、50mMトリス−塩酸緩衝液（pH
7.4）に対して、４℃一夜透析後、濃縮し、以下実施例
２と同様にして本発明物質の定量を行つた。この結果を
表８に示す。
この結果から、本発明物質は、キレート剤抽出液を40％
飽和以下の硫安で処理して不純物を除去した後、80％飽
和以上の硫安を用いて濃縮して分離することができるこ
とが明らかとなつた。
実施例６ （ｉ） ヒト胎盤４個（1950g）を生理食塩水で充分洗
浄後、膜、血管を除去し破砕する。これに更に、50mMト
リス−塩酸緩衝液（pH7.4）２を加えポリトロン（pol
ytron）で破砕し、次にテフロンホモジナイザーで磨砕
する。得られたホモジネートを7,000rpm15分間遠心分離
し上清を分取する。
（ii） 上清を55,000gで１時間超遠心分離し、沈渣に
マイクロゾーム分画を得た。このマイクロゾーム分画
を、20mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）50mlに懸濁し、1
0％トリトンＸ−100 10mlを混和して超音波処理する。
次いで、冷蔵したエタノール：エーテル３対２混合溶媒
を500ml加え、低温室（４℃）にて２時間振盪する。振
盪液を2,000rpm10分間遠心分離して得られた沈渣を冷エ
ーテル500mlに懸濁、振盪し再度2,000rpm、10分間遠心
分離して沈渣を分取する。これを0.02％トリトンＸ−10
0を含む20mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）約50mlに懸濁
させ、超音波処理後、105,000g、１時間超遠心分離して
上清（マイクロゾーム可溶分画）53mlを得る。
（iii） （ii）で得られた溶液をコンカナバリンＡセ
フアロースカラム（φ1.4×5.5cm）に付し、非吸着画分
中、OD280の吸収を示す分画63mlを分取する。これをDEA
E−セフアデツクスカラム（φ1.4×8.5cm）に吸着させ2
0mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.4）にて充分洗浄した後、
０〜0.5M塩化ナトリウムを含有する上記緩衝液150mlを
用い直線濃度勾配により１分画3mlとなる様に溶出させ
る。活性分画64mlを濃縮し、セフアクリルＳ−200を用
いるゲル過（φ2.5×8.6cm）に付し、生理食塩水で１
分画3mlになる様に溶出させ活性を示すフラクシヨン85
−95分画33.5mlを得る。尚、活性はカルシウム再加凝固
時間法により測定した。
（iv） 更に、セフアデツクスＧ−100を用いるゲル
過（φ2.0×90cm）に付し、生理食塩水で１分画2mlにな
る様に溶出させ、活性分画No.74〜89を得る。これを限
外過により濃縮し、精製本発明物質標品3.0ml（蛋白
重量3.8mg（Lowry法））を得た。得られた本発明物質
は、SDS−ポリアクリルアミド電気泳動法にて単一バン
ドを示したことから、不純物を含まない単一成分からな
ると考えられる。
実施例７ （ｉ） ヒト胎盤45個（約20Kg）を生理食塩水で充分洗
浄後、膜を除去し、ミンチした。50mM Tris−HCl buff
er（pH7.4）約16を加え、ワーリングブレンダー次い
でポリトロンにて破砕する。得られたホモジネートを7,
000rpm15分間遠心分離し、上清を分取する。遠心沈渣に
ついては、再度50mM Tris−HCl buffer（pH7.4）約13
を加え、破砕し、遠心分離により上清を得る。
（ii） ２回の破砕、遠心分離の操作により得られた上
清を合わせ（約30）、シヤープレス超高速遠心分離機
により45,000rpmで遠心分離し、沈澱としてマイクロゾ
ーム画分を得る。このマイクロゾームに50mM Tris−HCl
buffer（pH7.4）約３を加え、テフロンホモジナイザ
ーを用いて磨砕し、さらにシヤープレス超高速遠心分離
機により、沈澱を集め、洗浄マイクロゾームを得る。
（iii） 得られたマイクロゾームに20mM EDTAを含む50
mM Tris−HCl buffer（pH7.4）約４を加え、磨砕し、
さらに一夜マグネチツクスターラーで撹拌する。次いで
再度シヤープレス超高速遠心分離機により遠心分離し、
上清にマイクロゾームからのEDTA抽出液を得た。
（iv） マイクロゾームからのEDTA抽出液を透析し、ED
TAを除いた後さらに実施例１と同様にイオン交換クロマ
ト、ブルーセフアロースの通過およびゲル過の操作に
よつて精製を進める。この方法により胎盤約20Kgのマイ
クロゾームから95mgの抗凝固性物質を得た。
実施例８ 本発明物質（実施例１で得たもの）の抗血液凝固作用を
トロンボエラストグラフを用いて測定した。
（１） 新鮮血への添加実験： （測定方法） 新鮮血490μに、本発明物質の生理食塩水溶液10μ
（最終濃度0,0.15,0.5,1.5,5,15μg/ml）を添加し、よ
く混和した後、トロンボエラストグラフにセツトし、70
分間トロンボエラストグラムを作成する。ｒ値とＲ値の
合計時間を凝固時間とした。
血液は、ウサギとヒトのものを用い、結果は、本発明物
質無添加の場合の値をコントロール値とした比率で表９
に示した。
（２） 採血後室温10分間放置後の血液への添加実験： （測定方法） 上記実験（１）と同じ方法により測定した。結果を表10
に示す。
上記（１）及び（２）の結果から、本発明物質の抗血液
凝固活性は採血直後よりも、凝固系が動き出した状態で
添加した方が優れていた。
（３） 組織トロンボプラスチン（TTP）添加血液への
添加実験： TTP添加濃度と凝固時間の関係 （測定方法） 採血直後のウサギ血液にTTPを０〜4.0μg/ml（最終濃
度）添加し、実験（１）と同様にして凝固時間を測定し
た。結果を図１に示す。
この結果、TTPを約１μg/ml添加することにより凝固時
間が約半分に短縮され、凝固促進が起こることが明らか
である。
TTP添加血液への添加実験： （測定方法） 採血直後の血液480μにTTPの生理食塩水溶液10μ
（最終濃度０〜２μg/ml）及び本発明物質の生理食塩水
溶液10μ（最終濃度15μg/ml）を添加し混合する。以
下実験（１）と同様にして凝固時間を測定した。
ウサギの血液を用いた時の結果を図２に、ヒト血液を用
いた場合の結果を図３に示す。
以上の結果から本発明物質の抗凝固作用は、凝固亢進状
態でより効果的に発現することがわかる。
実施例９（製剤例） 本発明物質（実施例１で得たもの） 1mg アルブミン 5mg マンニトール 25mg 塩化ナトリウム 1.95mg リン酸ナトリウム 3.85mg 上記成分を注射用蒸留水2mlに溶解し、無菌バイアルに
入れ、−30℃〜−40℃で２時間予備凍結し、−30℃〜＋
20℃、真空度0.05〜0.1Torrで35時間、一次乾燥し、次
いで30℃、真空度0.01〜0.05Torrで５時間、二次乾燥し
て、注射用バイアルを製造した。
【図面の簡単な説明】
図１は、ウサギ新鮮血へ添加したTTP濃度と凝固時間延
長率との関係を示す図面である。 図２は、ウサギ新鮮血へ添加したTTP濃度と凝固時間及
びTTP添加血液へ添加した本発明物質濃度と凝固時間と
の関係を示す図面である。 図３は、ヒト新鮮血へ添加したTTP濃度と凝固時間及びT
TP添加血液へ添加した本発明物質濃度と凝固時間との関
係を示す図面である。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記性質を有する人胎盤由来の抗血液凝固
    物質。 分子量（SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
    法、還元状態） 34,000±2,000 等電点（アンフォライトを用いる等電点カラム電気
    泳動法） 4.7±0.1 安定性 イ 50℃、30分加熱処理で失活 ロ pH4〜10で安定 ハ 血漿中37℃、30分で安定 ニ プロテアーゼタイプＩ又はトリプシンによる３時間
    処理で74％以上の抗凝固活性を保持 作用 イ カルシウム再加凝固時間を延長 ロ プロトロンビン時間を延長 ハ 活性化部分トロンボプラスチン時間を延長 アミノ酸分析 アミノ酸分析で、アスパラギン酸、スレオニン、セリ
    ン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、1/
    2シスチン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイ
    シン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジ
    ン及びアルギニンの存在が認められる。 アミノ酸組成 （モル％） アスパラギン酸 9.8 スレオニン 7.0 セリン 6.3 グルタミン酸 13.3 プロリン 2.0 グリシン 7.5 アラニン 8.0 1/2シスチン 0.3 バリン 4.6 メチオニン 1.8 イソロイシン 5.3 ロイシン 11.8 チロシン 3.6 フェニルアラニン 4.2 ヒスチジン 1.4 リジン 7.2 アルギニン 6.2
  2. 【請求項２】ヒト胎盤をホモジナイズし、このホモジュ
    ネートを遠心分離に付し、得られた遠心分離沈渣あるい
    は遠心分離上清から分画したマイクロゾーム分画を界面
    活性剤及び／又はキレート剤を用いて抽出し、該抽出物
    を分離精製することを特徴とする下記性質を有するヒト
    胎盤由来の抗血液凝固物質の製法。 分子量（SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
    法、還元状態） 34,000±2,000 等電点（アンフォライトを用いる等電点カラム電気
    泳動法） 4.7±0.1 安定性 イ 50℃、30分加熱処理で失活 ロ pH4〜10で安定 ハ 血漿中37℃、30分で安定 ニ プロテアーゼタイプＩ又はトリプシンによる３時間
    処理で74％以上の抗凝固活性を保持 作用 イ カルシウム再加凝固時間を延長 ロ プロトロンビン時間を延長 ハ 活性化部分トロンボプラスチン時間を延長 アミノ酸分析 アミノ酸分析で、アスパラギン酸、スレオニン、セリ
    ン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、1/
    2シスチン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイ
    シン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジ
    ン及びアルギニンの存在が認められる。 アミノ酸組成 （モル％） アスパラギン酸 9.8 スレオニン 7.0 セリン 6.3 グルタミン酸 13.3 プロリン 2.0 グリシン 7.5 アラニン 8.0 1/2シスチン 0.3 バリン 4.6 メチオニン 1.8 イソロイシン 5.3 ロイシン 11.8 チロシン 3.6 フェニルアラニン 4.2 ヒスチジン 1.4 リジン 7.2 アルギニン 6.2
  3. 【請求項３】下記性質を有する人胎盤由来の抗血液凝固
    物質を有効成分として含有する抗血液凝固剤。 分子量（SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
    法、還元状態） 34,000±2,000 等電点（アンフォライトを用いる等電点カラム電気
    泳動法） 4.7±0.1 安定性 イ 50℃、30分加熱処理で失活 ロ pH4〜10で安定 ハ 血漿中37℃、30分で安定 ニ プロテアーゼタイプＩ又はトリプシンによる３時間
    処理で74％以上の抗凝固活性を保持 作用 イ カルシウム再加凝固時間を延長 ロ プロトロンビン時間を延長 ハ 活性化部分トロンボプラスチン時間を延長 アミノ酸分析 アミノ酸分析で、アスパラギン酸、スレオニン、セリ
    ン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、1/
    2シスチン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイ
    シン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジ
    ン及びアルギニンの存在が認められる。 アミノ酸組成 （モル％） アスパラギン酸 9.8 スレオニン 7.0 セリン 6.3 グルタミン酸 13.3 プロリン 2.0 グリシン 7.5 アラニン 8.0 1/2シスチン 0.3 バリン 4.6 メチオニン 1.8 イソロイシン 5.3 ロイシン 11.8 チロシン 3.6 フェニルアラニン 4.2 ヒスチジン 1.4 リジン 7.2 アルギニン 6.2
JP22705086A 1985-09-30 1986-09-25 抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする抗血液凝固剤 Expired - Lifetime JPH0710880B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP21751285 1985-09-30
JP60-217512 1985-09-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS62174023A JPS62174023A (ja) 1987-07-30
JPH0710880B2 true JPH0710880B2 (ja) 1995-02-08

Family

ID=16705389

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP22705086A Expired - Lifetime JPH0710880B2 (ja) 1985-09-30 1986-09-25 抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする抗血液凝固剤

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4732891A (ja)
EP (1) EP0217341B2 (ja)
JP (1) JPH0710880B2 (ja)
KR (1) KR940003751B1 (ja)
CA (1) CA1265446A (ja)
DE (1) DE3676148D1 (ja)
ES (1) ES2001707A6 (ja)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5066788A (en) * 1984-09-21 1991-11-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Blood coagulation inhibiting proteins, processes for preparing them and their uses
US5264550A (en) * 1985-04-15 1993-11-23 Scios Nova Inc. Human anti-inflammatory phospholipase inhibitor protein
ES2065318T3 (es) * 1986-07-15 1995-02-16 Kowa Co Sustancia que se une a trombina y procedimiento para su preparacion.
JPH0764878B2 (ja) * 1986-10-14 1995-07-12 興和株式会社 抗血液凝固物質及びその製法
JPH08840B2 (ja) * 1986-11-14 1996-01-10 興和株式会社 抗ｐｃｉモノクローナル抗体、これを用いた抗ｐｃｉの精製法及び免疫学的測定法
DE3643182A1 (de) * 1986-12-18 1988-06-30 Behringwerke Ag Arzneimittel enthaltend das gewebeprotein pp4, verfahren zur herstellung von pp4 und zu seiner pasteurisierung sowie die verwendung von pp4
US4937324A (en) * 1987-02-06 1990-06-26 Zymogenetics, Inc. Chromatographic purification of human proteins having anticoagulant and anti-inflammatory activity
JP2660514B2 (ja) * 1987-02-20 1997-10-08 興和株式会社 抗血液凝固作用を有するポリペプチド
PT87083B (pt) * 1987-03-28 1992-07-31 Boehringer Ingelheim Int Processo para a preparacao de uma proteina anticoagulante vascular, de adn que codifica para esta proteina e de composicoes farmaceuticas que a contem
DE3724726A1 (de) * 1987-07-25 1989-02-02 Behringwerke Ag Verfahren zur reinigung des plazentaren gewebeproteins pp4
DE3737239A1 (de) * 1987-11-03 1989-10-12 Behringwerke Ag Gentechnische herstellung von anticoagulatorischem protein pp4
DE3737237A1 (de) * 1987-11-03 1989-05-18 Behringwerke Ag Anticoagulatorisches protein pp4-x, seine herstellung und verwendung
JP2660548B2 (ja) * 1988-06-15 1997-10-08 興和株式会社 膠原病疾患関連抗体検出用試薬及びこれを用いる膠原病疾患関連抗体の検出方法
US5202421A (en) * 1988-12-27 1993-04-13 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anticoagulant substance obtained from urine and process for the preparation thereof
EP0409052B1 (de) * 1989-07-15 1993-05-12 BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH Antikoagulanz enthaltendes Mittel
US5360789A (en) * 1990-11-20 1994-11-01 Kowa Co., Ltd. Therapeutic agent for skin or corneal disease
US20030220233A1 (en) 1994-01-24 2003-11-27 Neorx Corporation Radiolabeled annexins
US5968477A (en) * 1994-01-24 1999-10-19 Neorx Corporation Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator
AU5062100A (en) 1999-06-14 2001-01-02 Novo Nordisk A/S Fviia/tf activity inhibiting compounds
DE60138111D1 (de) * 2000-07-21 2009-05-07 Chemo Sero Therapeut Res Inst Verfahren zur reinigung eines kalziumionen-bindenden proteins
US7635676B2 (en) 2001-02-21 2009-12-22 Alavita Pharmaccuticals, Inc. Modified annexin proteins and methods for their use in organ transplantation
US20090291086A1 (en) * 2001-02-21 2009-11-26 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Compositions and Methods for Treating Cerebral Thrombosis and Global Cerebral Ischemia
WO2002067857A2 (en) * 2001-02-21 2002-09-06 Surromed, Inc. Modified annexin proteins and methods for preventing thrombosis
US7645739B2 (en) * 2001-02-21 2010-01-12 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Modified annexin compositions and methods of using same
US7635680B2 (en) * 2001-02-21 2009-12-22 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Attenuation of reperfusion injury
US20040067909A1 (en) * 2001-02-26 2004-04-08 Haruhiko Naruse Eye drops
IL157842A0 (en) 2001-03-22 2004-03-28 Novo Nordisk Healthcare Ag Coagulation factor vii derivatives
US6982154B2 (en) * 2002-02-21 2006-01-03 Surromed, Inc. Modified annexin proteins and methods for treating vaso-occlusive sickle-cell disease

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL297212A (ja) * 1962-08-31
US3310471A (en) * 1965-05-13 1967-03-21 Upjohn Co Placental lactogenic factor process
US3409605A (en) * 1965-06-15 1968-11-05 American Cyanamid Co Concentration and purification of growth factor-placental origin (human)
BE787961A (fr) * 1971-08-24 1973-02-26 Behringwerke Ag Procede d'isolement d'une matiere thromboplastique et medicament contenant ladite matiere
DE2640387C3 (de) * 1976-09-08 1981-01-22 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung
DE2720704C2 (de) * 1977-05-07 1986-09-25 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung
IT1114943B (it) * 1977-12-27 1986-02-03 Sclavo Inst Sieroterapeut Processo per la preparazione di somatomammotropina corionica umana
DE2842467A1 (de) * 1978-09-29 1980-04-10 Behringwerke Ag Neues ubiquitaeres gewebsprotein pp tief 8
DE2952792A1 (de) * 1979-12-31 1981-07-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein (pp(pfeil abwaerts)15(pfeil abwaerts)) mit immunsuppressiver wirkung
DE3230996A1 (de) * 1982-08-20 1984-02-23 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung
DE3315000A1 (de) * 1983-04-26 1984-10-31 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
JPS6019719A (ja) * 1983-07-15 1985-01-31 Asahi Chem Ind Co Ltd 抗腫瘍活性を有する蛋白質
DE3338480A1 (de) * 1983-10-22 1985-05-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
DE3404563A1 (de) * 1984-02-09 1985-08-14 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
EP0182929A1 (de) * 1984-11-26 1986-06-04 American Hospital Supply Corporation Koaktivator zur Aktivierung von Protein C

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５１，Ｐ．６２５〜６２９（１９８５）

Also Published As

Publication number Publication date
US4732891A (en) 1988-03-22
EP0217341B1 (en) 1990-12-12
EP0217341A3 (en) 1988-04-06
DE3676148D1 (de) 1991-01-24
ES2001707A6 (es) 1988-06-01
CA1265446A (en) 1990-02-06
KR870002848A (ko) 1987-04-13
KR940003751B1 (ko) 1994-04-30
EP0217341B2 (en) 1997-12-17
EP0217341A2 (en) 1987-04-08
JPS62174023A (ja) 1987-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4732891A (en) Placenta-derived anticoagulating substance, process for preparing same and anticoagulant comprising same as an effective component
Sgouris et al. The preparation of human fibrinolysin (plasmin)
US5099003A (en) Method of preparing a sterile plasma-protein solution containing fibrinogen and factor xiii
KR930007434B1 (ko) 혈액응고 억제 단백질 제조방법
Jesty et al. Purification of Factor VII from bovine plasma: Reaction with tissue factor and activation of Factor X
JPS6254286B2 (ja)
EP0376251B1 (en) A novel thrombomodulin-like glycoprotein obtainable from urine
EP0041173B2 (en) Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them
US4379085A (en) Heat stabilization of plasma proteins
KR960007922B1 (ko) 조직단백질 pp4의 저온살균법
JPH0424360B2 (ja)
RU2142806C1 (ru) Способ очистки и хранения фактора ix, водный раствор очищенного фактора ix, композиция, содержащая фактор ix, способ лечения
JPS6042207B2 (ja) 胎盤よりプラスミノ−ゲン型活性化合物を抽出する方法
US4977246A (en) High recovery process for antihemophilic factor
CA1198672A (en) Fibrinolytically active agent and a method for the preparation thereof
US4873222A (en) Placenta-derived anticoagulating substance
DE3486023T2 (de) Verfahren zur herstellung von urokinase zymogen.
US4067964A (en) Antihemophilic agent and process for its manufacture
US20240262861A1 (en) Process for isolating plasminogen from a blood plasma fraction
US4391746A (en) Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them
JPH0764877B2 (ja) 抗血液凝固物質及びその製法
JPS6333666B2 (ja)
Miller et al. Prothrombin activation by encephalitogenic brain protein
JPS5865218A (ja) 組織プラスミノーゲンアクチベーターの製造方法
Seegers et al. Wayne State University College of Medicine, Detroit

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term