JPH07179412A - Ｗａ３８５４物質、その製法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ［構成］ ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ）属に属する微生物を培養して、化１で表されるＷＡ
３８５４物質を製造する。 【化１】 ［効果］この物質はプロテアーゼ阻害剤として有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はＷＡ３８５４物質、その
製法及び用途に関するものである。ＷＡ３８５４物質
は、ストレプトミセス属菌の培養物から分離採取された
従来未知の新規物質であり、すぐれたプロテアーゼ抑制
作用を示し、プロテアーゼ抑制剤、抗真菌剤等各種医薬
として有用である。

【０００２】

【従来の技術】真菌の生産する酸性プロテアーゼは、臓
器侵襲や血管内侵入の際、その関与が指摘され、病原性
発現に深くかかわっている。したがってこのようなプロ
テアーゼの作用を阻害することができれば、その結果と
して真菌の作用を阻止することが可能となる。つまり、
プロテアーゼ阻害剤は抗真菌剤として非常に有用なので
ある。

【０００３】従来、プロテアーゼ阻害剤としては、カビ
のプロテアーゼを阻害するのに有効な物質としてペプス
タチンＡが知られ、抗真菌剤としてはアンホテンシンＢ
（ＡＭＰＨ−Ｂ）が知られているが、その作用は充分で
はないし、体内動態も満足しうるものではない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、プロテアー
ゼ、特にカビの酸性プロテアーゼに対して広範な阻害活
性を有し、しかも従来のプロテアーゼ阻害剤よりも体内
動態がすぐれたプロテアーゼ阻害剤を開発する目的でな
されたものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、既知の物質の中か
ら目的とするプロテアーゼ阻害剤をスクリーニングした
けれども、成功するには至らなかった。

【０００６】そこで本発明者らは、安全性の面から天然
物に着目し、微生物の発酵生産物に注目するに至り、各
種微生物を検索した結果、茨城県で採取された土壌から
新たに分離した放線菌Ｎｏ．３８５４株が培養液中に目
的物質を蓄積することを発見した。そして更にこの物質
についてその理化学的性質を詳細に研究したところ、従
来未知の新規物質であることを確認し、この物質を新た
にＷＡ３８５４物質と命名した。

【０００７】そして更に研究の結果、ＷＡ３８５４物質
から４種類の化合物を単離し、それらをそれぞれＷＡ３
８５４Ａ、ＷＡ３８５４Ｂ、ＷＡ３８５４Ｃ、ＷＡ３８
５４Ｄと命名し、いずれも新規化合物であることを確認
した。

【０００８】本発明に係るＷＡ３８５４物質の内、ＷＡ
３８５４Ａ物質は下記表１に示す理化学的性質を有して
いる。

【０００９】

【表１】

【００１０】ＷＡ３８５４Ｂ物質は下記表２に示す理化
学的性質を有している。

【００１１】

【表２】

【００１２】ＷＡ３８５４Ｃ物質は下記表３に示す理化
学的性質を有している。

【００１３】

【表３】

【００１４】ＷＡ３８５４Ｄ物質は下記表４に示す理化
学的性質を有している。

【００１５】

【表４】

【００１６】このような理化学的性質を有する物質は従
来知られておらず、新規物質であることが確認された。
そしてこれら新規物質であるＷＡ３８５４Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ物質について、その化学構造の決定を試みた結果、そ
れに成功し、それらの構造式をそれぞれ化２、化３、化
４、化５に示す式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖのよう
に決定した。

【００１７】

【化２】

【００１８】

【化３】

【００１９】

【化４】

【００２０】

【化５】

【００２１】このようにして、ＷＡ３８５４Ａ、Ｂ、
Ｃ、Ｄ物質の構造決定に伴ない、これらの物質を改めて
それぞれＦＲ−１３６０４８、ＦＲ−１３６０４７、Ｆ
Ｒ−９０１４３０、ＦＲ−９０１４３１と命名し、以
後、これらの名称も使用する場合がある。

【００２２】すなわち本発明は、ＷＡ３８５４物質に関
するものであって、次の化６で示される式Ｉの構造を有
するものである。

【００２３】

【化６】

【００２４】本発明に係るＷＡ３８５４物質は、本発明
者らが茨城県で採取した土壌から新たに分離した放線菌
Ｎｏ．３８５４によって生産されるほか、生産されたＷ
Ａ３８５４物質をアルキル交換その他の化学修飾をした
りする等簡単な化学処理によっても容易に製造すること
ができるし、全合成することも可能である。

【００２５】放線菌Ｎｏ．３８５４株は、後記する菌学
的性質から、ストレプトミセス属に属するものと認めら
れ、ストレプトミセス エスピー Ｎｏ．３８５４（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＮＯ．３８５４）と命
名された。

【００２６】本菌株の凍結乾燥サンプルは、工業技術院
微生物工業技術研究所（〒３０５、茨城つくば市東１−
１−３）へＦＥＲＭ Ｐ−１１７８４の番号で寄託され
た。（寄託日＝１９９０年１０月２２日）

【００２７】ＷＡ３８５４物質の生産は、単に説明を目
的として挙げただけの本明細書記載の特定の微生物の使
用に限定されるものではないことを理解すべきである。
この発明は、記載の微生物からＸ線照射、紫外線照射、
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、
２−アミノプリン等の変異処理により取得できる人工変
異株並びに自然変異株を問わずＷＡ３８５４物質を生産
しうる全ての変異株の使用をも包含するものである。

【００２８】次に、ストレプトミセス エスピー Ｎ
ｏ．３８５４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ｎ
Ｏ．３８５４）の菌学的性質を示す。

【００２９】本菌体の形態観察、培養性状、生理学的性
質を調べるための培地、方法は主にシャーリングとゴッ
トリーブ（１）、ワックスマン（２）の方法に従った。
各観察は、主に３０℃、１４〜２１日間培養後それぞれ
の観察を行った。色名は“メシューエン・ハンドブック
・オブ・カラー”（３）から引用した。炭素源の利用性
はプリドハム・ゴットリーブの方法（６）に従った。生
育温度は酵母エキス・麦芽エキス寒天を用いて調べた。
細胞壁の分析は、ベッカー等の方法（４）及び山口の方
法（５）に従った。

【００３０】〔（１）形態的特徴〕オートミール寒天、
無機塩・でんぷん寒天上で３０℃，１４日培養後、光学
及び電子顕微鏡観察を行った。栄養菌糸はよく発達し断
裂しない。気中菌糸は単純分枝し、１本当り２０個以上
の胞子を直鎖する胞子柄を着生する。気中菌糸と胞子鎖
の形態は直状である。胞子は、０．５−０．７×０．６
−１．２μｍの大きさの円筒形で、表面は平滑であっ
た。菌核、胞子のう、遊走子等は観察されなかった。

【００３１】〔（２）培養性状〕結果を下記の表５に示
す。気菌糸形成は多くの培地で不良である。オートミー
ル寒天、無機塩・スターチ寒天でわずかに、白色の気菌
糸を着生する。生育裏面は、酵母エキス・麦芽エキス寒
天、及びオートミール寒天で薄い黄色を呈する。メラノ
イド色素及び他の可溶性色素の生産は見られなかった。

【００３２】

【表５】

【００３３】〔（３）細胞壁タイプ〕Ｎｏ．３８５４株
の全菌体分解物の分析の結果、ＬＬ−ジアミノピメリン
酸の存在が確認できた。従って本菌株の細胞壁はＩ型で
あると考えられる。

【００３４】〔（４）生理的性質〕生理的性質と炭素源
の利用性の結果を下記の表６、７にそれぞれ示す。

【００３５】

【表６】

【００３６】

【表７】

【００３７】形態観察及び化学分析の結果から、Ｎｏ．
３８５４株はストレプトミセス属に属すると考えられる
（７）（８）。そこで本菌株をストレプトミセス・エス
ピー・Ｎｏ．３８５４と命名した。

【００３８】引用した文献は下記表８に示すとおりであ
る。

【００３９】

【表８】

【００４０】本発明に係るＷＡ３８５４物質を例えば発
酵法にしたがって製造するには、ストレプトミセス属に
属する該物質生産菌（例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｐ・Ｎｏ．３８５４）を資化しうる炭素及び窒素源
を含む栄養培地中に接種し、好気条件下で培養すること
により（例えば、振とう培養、通気攪拌培養等）、生産
せしめることができる。

【００４１】炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉、フラクトース、グリセリンその他の炭水化
物を使用するのが好ましい。

【００４２】窒素源としては、オートミール、イースト
エキストラクト、ペプトン、グルテンミール、綿実粉、
大豆ミール、コーンスティープリカー、乾燥イースト、
小麦胚芽、落花生粉、チキン骨肉ミール等を使用するの
が好ましいが、アンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿
素、アミノ酸等の無機及び有機の窒素化合物も有利に使
用することができる。

【００４３】これらの炭素源及び窒素源は、併用するの
が有利であるが、純粋なものを必らずしも使用する必要
はない。不純なものには、生長因子や微量要素が含まれ
ているからである。

【００４４】必要ある場合には、例えば次のような無機
塩類を培地に添加してもよい：炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、塩化ナト
リウム、塩化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリ
ウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等。

【００４５】特に、培地が強く発泡するのであれば、必
要あるときに、液体パラフィン、動物油、植物油、鉱物
油、シリコン等を添加してもよい。

【００４６】目的物質を大量に工業生産するには、他の
発酵生産物の場合と同様に、通気攪拌培養するのが好ま
しい。少量生産の場合は、フラスコを用いる振とう培養
が好適である。

【００４７】また、培養を大きなタンクで行う場合は、
ＷＡ３８５４物質の生産工程において菌の生育遅延を防
止するため、はじめに比較的少量の培地に生産菌を種培
養した後、次に培養物を大きな生産タンクに移動してそ
こで生産培養するのが好ましい。この場合、種培養に使
用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、両者
ともに同一であってもよいし必要あれば両者を変えても
よい。

【００４８】培養は通気攪拌条件で行うのが好ましく、
例えばプロペラやその他の機械による攪拌、ファーメン
ターの回転または振とう、ポンプ処理、空気の吹込み等
既知の方法が適宜使用される。通気用の空気は滅菌した
ものを用いる。

【００４９】培養温度は、本ＷＡ３８５４物質生産菌が
本物質を生産する範囲内で適宜変更しうるが、通常は１
〜４０℃、好ましくは１１〜３４℃で培養するのがよ
い。培養時間は、培養条件や培養量によっても異なるが
通常は約１日〜１週間である。

【００５０】発酵終了後、培養物から目的とするＷＡ３
８５４物質を回収する。すなわち、菌体は、直接水及び
／又は有機溶媒による抽出、あるいは、これを機械的に
又は超音波等既知の手段を用いて破壊した後、水及び／
又は有機溶媒で抽出した後、常法にしたがって回収、精
製する。培養液の場合は、直接、常法にしたがって回
収、精製すればよい。

【００５１】回収、精製方法としては、例えば、水、有
機溶媒、これらの混合溶媒による溶媒抽出；クロマトグ
ラフィー；単一溶媒又は混合溶媒からの再結晶常法が適
宜単独であるいは組合わせて使用できる。

【００５２】ＷＡ３８５４物質の回収、精製は上記のよ
うに既知の方法を適宜利用して行うが、例えば次のよう
にしてもよい。まず、培養物のアセトン抽出液を、酢酸
エチル、ヘキサン、またはこれらの混合溶媒で抽出し、
抽出液を蒸発又は蒸留して濃縮する。濃縮残渣をクロマ
トグラフィ又は再結晶処理して、必要あれば更に凍結乾
燥してもよい。

【００５３】本発明においては、ＷＡ３８５４物質は各
成分を分離することなく混合物ないし粗製物のまま各種
の用途に使用することができるが、必要ある場合には更
にクロマトグラフィー処理その他既知の分離、精製手段
によってＷＡ３８５４Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄの各成分に分離
し、これ（ら）を取得することができる。また、これら
の各成分を原料として化学的手段により本発明に係る各
種のＷＡ３８５４物質を容易に合成することも可能であ
り、全合成ももちろん可能である。

【００５４】このようにして得たＷＡ３８５４物質は、
遊離の形で使用するほか、例えば次のような塩基で処理
するといった常法によって薬剤上許容できる塩の形で使
用してもよく、これらの塩類も本発明の権利範囲に包含
される。

【００５５】塩基として好適なものの例は次のとおりで
ある：アルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム
等）、アルカリ土金属（例えばマグネシウム、カルシウ
ム等）、これらの水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属ア
ルコキサイド（例えばナトリウムメトキサイド、ナトリ
ウムエトキサイド、カリウムｔ−ブトキサイド等）その
他。

【００５６】本発明に係る薬剤組成物は、ＷＡ３８５４
物質及び／又はその塩を有効成分としてこれに常用され
る無機又は有機の担体を加えて、固体、半固体又は液体
の形で、経口投与剤のほか、外用剤等の非経口投与剤に
製剤化する。

【００５７】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げら
れる。非経口投与のための製剤としては、注射剤、点滴
剤、輸液、軟膏、ローション、トニック、スプレー、懸
濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。本発明の有効
成分を製剤化するには、常法にしたがえばよく、界面活
性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝
剤、懸濁剤、等張剤その他常用される佐薬を適宜使用す
る。

【００５８】本発明に係る薬剤組成物の投与量は、その
種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患者
の年令、患者の症状、処理時間等によって相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分（ＷＡ
３８５４物質及び／又はその塩類）を０．１〜１００ｍ
ｇ／ｋｇ投与し、筋肉投与の場合は同じく０．１〜１０
０ｍｇ／ｋｇ投与し、経口投与の場合も同じく１〜１０
００ｍｇ／ｋｇの範囲内に投与する。

【００５９】以下、本発明を実施例について更に詳しく
説明する。

【００６０】〔実施例１〕

【００６１】〔（１）ＷＡ３９０９物質の発酵生産〕コ
ーンスターチ１％、グリセリン１％、グルコース０．５
％、綿実粉１％、乾燥酵母０．５％、コーンスティープ
リカー０．５％からなる培地のｐＨを６．５に修正後、
ＣａＣＯ_３０．２％を加え、５００ｍｌ容三角フラスコ
に１６０ｍｌ分注し１２１℃、３０分間滅菌した。これ
にＷＡ３８５４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７８４）のスラ
ントを一白金耳接種し、３０℃９６時間ロータリーシェ
ーカー（毎分２５０回転）で培養を行い種培養液とし
た。

【００６２】別に、澱粉の酸加水分解物１％、コーンス
ターチ０．５％、グリセリン０．５％、普通ブイヨン
（極東）０．５％、ペプトン（極東）０．５％、小麦胚
芽０．２％からなる培地のｐＨを７．０に修正後３０ｌ
容ジャーファメンターに２０ｌ注入し、消泡剤としてア
デカノール（旭電化工業（株））０．０５％を添加し１
２１℃、３０分間滅菌後、上記の種培養液を２％接種
し、通気量２０ｌ／分、１ｋｇ／ｃｍ^２、２５０回転／
分、３０℃で９０時間撹拌培養を行った。

【００６３】〔（２）ＷＡ３８５４物質の精製〕上記の
培養方法で得られたブロス６０ｌにラジオライト１．５
ｋｇを添加後濾過し、濾液４５ｌを得た。その濾液を４
ｌまで濃縮後メタノール１６ｌを加え、生ずる沈澱物を
濾過により除去した。メタノールを減圧下蒸発除去し、
３ｌまで濃縮後、等量のｎ−ブタノールを加えプロテア
ーゼ阻害活性成分を抽出した。得られた抽出物は濃縮乾
固し、１ｌのシリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ）カラムに付
した。ジクロロメタン−メタノールの混液（１００：０
−２：１）で段階的に展開すると、ＷＡ３８５４Ａ成分
とＷＡ３８５４Ｂ成分はジクロロメタン−メタノール１
０：１の画分に溶出され、ＷＡ３８５４Ｃ成分とＷＡ３
８５４Ｄ成分は４：１の画分に溶出された。

【００６４】ＷＡ３８５４Ａ、Ｂの両成分を含む画分は
濃縮乾固し、さらに３００ｍｌのシリカゲル６０カラム
に付した。ヘキサン−アセトンから成る混液（４；１−
４：５）でカラムを段階的に展開し、ヘキサン−アセト
ン（４：５）で両成分を溶出した。得られた画分は乾固
し、メタノール５ｍｌに溶解後、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ
ＲＰ−１８ ４０−６３μｍ（４４０−３７）に付し
た。カラムはメタノール濃度を漸増させるメタノール−
水混合液（５０％メタノール水−６０％メタノール水）
で展開した。ＨＰＬＣならびに酵素アッセイにより、Ｗ
Ａ３８５４Ａ成分は５５％メタノール水の画分に、ま
た、ＷＡ３８５４Ｂ成分は６０％メタノール水の画分に
それぞれ溶出された。ＷＡ３８５４Ａ成分のみを含む画
分を減圧下でメタノールを蒸発させ、さらに濃縮すると
ＷＡ３８５４Ａ成分が沈澱してくる。これを濾取するこ
とによりＷＡ３８５４Ａ成分を５５ｍｇ得ることができ
た。ＷＡ３８５４Ｂ成分についても同様の方法で４６ｍ
ｇ得た。

【００６５】一方、ＷＡ３８５４Ｃ成分とＷＡ３８５４
Ｄ成分を含むシリカゲルの溶出画分は、再度３００ｍｌ
のシリカゲル６０のカラムに付し、ジクロロメタン−メ
タノールの混液で段階溶出した。活性はジクロロメタン
−メタノール４：１から２：１の画分に溶出され、その
画分を濃縮乾固し残渣を５ｍｌの５０％メタノールに溶
解後、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ ４０−６３
μｍ（４４０−３７）のカラムに付した。カラムは予
め、０．５％ＮＨ_４Ｈ_２ＰＯ_４を含む１７％アセトニト
リル水で平衡化しておき、サンプルチャージ後、同溶媒
７００ｍｌにて洗浄し、０．５％ＮＨ_４Ｈ_２ＰＯ_４を含
む２０％アセトニトリル水で展開すると、先にＷＡ３８
５４Ｃ成分が、続いてＷＡ３８５４Ｄ成分が溶出され
た。

【００６６】ＷＡ３８５４Ｃ成分を含む画分は減圧下で
アセトニトリルを除去し、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ
−１８ ４０−６３μｍ（３１０−２５）のカラムに付
し、５００ｍｌの水で洗浄後、５００ｍｌのメタノール
でＷＡ３８５４Ｃ成分を溶出した。得られた溶出液は減
圧下濃縮しメタノールを除去後、その残渣を水５０ｍｌ
で溶解し、凍結乾燥することでＷＡ３８５４Ｃ成分を５
４ｍｇ得ることができた。一方、ＷＡ３８５４Ｄ成分を
含む画分２００ｍｌを８０ｍｌまで濃縮するとＷＡ３８
５４Ｄ成分が針状結晶として得られる。この結晶を濾取
し冷水で洗浄後、乾燥することでＷＡ３８５４Ｄ成分を
３００ｍｇ得ることができた。

【００６７】〔実施例２〕実施例１で製造したＷＡ３８
５４物質について、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔ
ｏｉ由来の酸性プロテアーゼを用いて、それに対する阻
害活性の測定を次のようにして行い、該活性を確認し
た。

【００６８】Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｉｄ ｐｒ
ｏｔｅａｓｅ（Ｅ．Ｃ．３．４．２３．６．，Ｓｉｇｍ
ａ社製）を５００μｇ／ｍｌになるように水に溶解し、
酵素液とする。Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，Ｂｏｖｉｎｅ
ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎをそれぞれ１０ｍｇ／ｍ
ｌ，２．５ｍｇ／ｍｌになるように０．１Ｍクエン酸ナ
トリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）に溶解し基質液と
する。

【００６９】段階希釈した被検サンプル液１００μｌ、
酵素液１００μｌ、基質液１，０００μｌを混合し、３
７℃で３０分反応させる。１０％トリクロロ酢酸溶液を
１，０００μｌ加え、反応を停止させた後、約２０分室
温で放置する。その後、３，０００ｒｐｍ、１５分遠心
し上清の２８０ｎｍの吸光度を測定し、ｐｒｏｔｅａｓ
ｅ活性とする。ｐｒｏｔｅａｓｅ活性を５０％阻害する
サンプルの濃度をＩＣ_５０として示す。その結果を下記
の表９に示す。

【００７０】

【表９】

【００７１】上記結果から明らかなように、ＷＡ３８５
４物質はいずれもすぐれたプロテアーゼ阻害作用を有す
ることが確認された。

【００７２】〔実施例３〕実施例１で製造したＷＡ３８
５４物質について、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉ
ｇａｔｕｓ全身感染系での感染防御試験を次のようにし
て行い、該効果を確認した。

【００７３】４日前に２００ｍｇ／ｋｇのサイクロフォ
スファマイドを腹腔内投与したマウスにＡｓｐ．ｆｕｍ
ｉｇａｔｕｓ８００４株の胞子を、一匹当たり４×１０
^５個になるように尾静脈より感染させる。感染後１時間
及びその後９日目まで１日１回、計１０回皮下投与す
る。感染後２３日目まで生存数を観察し、平均生存日数
を算出した結果を次の表１０に示す。

【００７４】

【表１０】

【００７５】上記結果から明らかなように、ｉｎ ｖｉ
ｖｏでの全身感染系において、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍ
ｇ／ｋｇいずれの投与量においても卓越した延命効果が
認められ、Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ Ａよりもすぐれている
ことが確認された。

【００７６】なお、マウスを用いた急性毒性試験ではＷ
Ａ３８５４Ｄの腹腔内投与によるＬＤ_５０値は約１６０
ｍｇ／ｋｇであって、本発明に係る物質は安全性もきわ
めて高いことが確認された。

【００７７】〔実施例４〕以下の表１１に示す各成分を
用いて錠剤の製造を行った。

【００７８】

【表１１】

【００７９】すなわち、（１）、（２）及び（３）（但
し１７ｇ）を混合し、（３）（但し７ｇ）から調製した
ペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒に（３）
（但し５ｇ）と（４）を加えてよく混合し、この混合物
を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり有効成分
（１）を５０ｍｇ含有する錠剤１０００個を製造した。

【００８０】〔実施例５〕以下の表１２に示す各成分を
用いて注射剤の製造を行った。

【００８１】

【表１２】

【００８２】すなわち、（１）〜（４）の全成分を蒸留
水１０００ｍｌに溶解した後、アンプルに１ｍｌずつ分
注して、注射剤１０００本を製造した。

【００８３】

【発明の効果】本発明はＷＡ３８５４物質を提供するも
のであるが、この物質は従来未知の新規薬理活性物質で
あって、すぐれたプロテアーゼ抑制作用を示し、医薬、
例えば真菌による疾患等の予防及び／又は治療剤とし
て、非常に有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＤＺ Ｃ０７Ｋ 5/08 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｐ 21/02 9282−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 高瀬 茂弘 茨城県石岡市総社１−12−10 (72)発明者 橋本 正治 茨城県つくば市梅園２−15−３ (72)発明者 奥原 正国 茨城県つくば市梅園２−14−10

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 化１の式Ｉで表わされるＷＡ３８５４物
   質。 【化１】
2. 【請求項２】 ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓ）属に属するＷＡ３８５４物質生産菌を培養して
   ＷＡ３８５４物質を生成せしめ、これを採取することを
   特徴とするＷＡ３８５４物質の製造方法。
3. 【請求項３】 ＷＡ３８５４物質を有効成分とするプロ
   テアーゼ阻害剤。