JPH07188232A - 細胞障害抑制剤 - Google Patents
細胞障害抑制剤Info
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- JPH07188232A JPH07188232A JP5346844A JP34684493A JPH07188232A JP H07188232 A JPH07188232 A JP H07188232A JP 5346844 A JP5346844 A JP 5346844A JP 34684493 A JP34684493 A JP 34684493A JP H07188232 A JPH07188232 A JP H07188232A
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- cells
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 細胞障害に起因する効果的治療に役立てるた
め、安全性が高く、生体内でも安定に作用する物質を探
索し製剤化をはかる。 【構成】 次式： 【化１】 （式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6はＨまたは一緒になっ
て二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれＨ、アルキル、
ヒドロキシアルキルを示す。）で示されるプテリン誘導
体を主成分とする細胞障害抑制剤、および細胞保護剤。 【効果】 細胞障害の予防及び治療に有効な細胞障害抑
制剤、細胞培養に際し培地に添加して細胞を保護する等
の効果を有する細胞保護剤を提供することができる。
め、安全性が高く、生体内でも安定に作用する物質を探
索し製剤化をはかる。 【構成】 次式： 【化１】 （式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6はＨまたは一緒になっ
て二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれＨ、アルキル、
ヒドロキシアルキルを示す。）で示されるプテリン誘導
体を主成分とする細胞障害抑制剤、および細胞保護剤。 【効果】 細胞障害の予防及び治療に有効な細胞障害抑
制剤、細胞培養に際し培地に添加して細胞を保護する等
の効果を有する細胞保護剤を提供することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、プテリン誘導体（ネオ
プテリン誘導体を含む）を有効成分とする外因性ならび
に内因性の細胞障害の予防及び治療、細胞保護に有効な
製剤に関するものである。
プテリン誘導体を含む）を有効成分とする外因性ならび
に内因性の細胞障害の予防及び治療、細胞保護に有効な
製剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】高齢化の進行により痴呆を始めとする老
人性の疾病が社会問題となっている。疾病はすべて、細
胞が何らかの障害を受けて変性、脱落し、その本来の機
能が低下もしくは欠損した結果、種々の器官の機能不全
を引き起こすことによる。よって、種々の障害に対する
細胞の機能低下及び細胞死を抑制することが治療に有効
であることは衆目の一致するところである。細胞に対す
る障害ストレスとしては、家族性の遺伝的機能不全症候
群、物理的応力による細胞破壊、虚血及び高酸素障害な
どで見られる栄養因子の枯渇及びフリーラジカルによる
細胞障害、自己免疫疾患等で見られるキラーＴ細胞など
による細胞破壊、農薬、毒物、劇物などによる薬剤性の
障害、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等で見られる
ウィルス性の障害などがある。
人性の疾病が社会問題となっている。疾病はすべて、細
胞が何らかの障害を受けて変性、脱落し、その本来の機
能が低下もしくは欠損した結果、種々の器官の機能不全
を引き起こすことによる。よって、種々の障害に対する
細胞の機能低下及び細胞死を抑制することが治療に有効
であることは衆目の一致するところである。細胞に対す
る障害ストレスとしては、家族性の遺伝的機能不全症候
群、物理的応力による細胞破壊、虚血及び高酸素障害な
どで見られる栄養因子の枯渇及びフリーラジカルによる
細胞障害、自己免疫疾患等で見られるキラーＴ細胞など
による細胞破壊、農薬、毒物、劇物などによる薬剤性の
障害、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等で見られる
ウィルス性の障害などがある。
【０００３】従来これらの障害に対して種々の薬剤が治
療に用いられてきた。例えば、フリーラジカルによる障
害に対してはスーパーオキシドジスムターゼ、カタラー
ゼ等の製剤投与による治療が有効とされているが、これ
らの酵素の生体内有効時間は短く、多量の投与を必要と
する。また、酵素が蛋白質であるため抗原性があり、長
期投与が必要なときは抗原抗体反応の結果引き起こされ
るアナフィラキシーショック等の副作用が懸念され、安
全性に問題がある。
療に用いられてきた。例えば、フリーラジカルによる障
害に対してはスーパーオキシドジスムターゼ、カタラー
ゼ等の製剤投与による治療が有効とされているが、これ
らの酵素の生体内有効時間は短く、多量の投与を必要と
する。また、酵素が蛋白質であるため抗原性があり、長
期投与が必要なときは抗原抗体反応の結果引き起こされ
るアナフィラキシーショック等の副作用が懸念され、安
全性に問題がある。
【０００４】抗腫瘍活性と抗ウイルス作用を有するイン
ターフェロン−βなどについても、ワクチン等の生物学
的製剤の過敏症既往歴者には、使用することはできな
い。一方、プテリン誘導体については、これまで特開昭
63-297326 号公報に抗健忘症活性を持つ薬剤組成物の製
法に関するプテリジンについて、特開平1-186887号公報
にプテリジン誘導体及びこれらを含有する抗不整脈及び
利尿作用を有する製剤について等の開示がある。また、
最近、テトラヒドロビオプテリン（塩酸サプロプテリ
ン）が遺伝的な異型高フェニルアラニン血症に適用され
る医薬品として承認されている。
ターフェロン−βなどについても、ワクチン等の生物学
的製剤の過敏症既往歴者には、使用することはできな
い。一方、プテリン誘導体については、これまで特開昭
63-297326 号公報に抗健忘症活性を持つ薬剤組成物の製
法に関するプテリジンについて、特開平1-186887号公報
にプテリジン誘導体及びこれらを含有する抗不整脈及び
利尿作用を有する製剤について等の開示がある。また、
最近、テトラヒドロビオプテリン（塩酸サプロプテリ
ン）が遺伝的な異型高フェニルアラニン血症に適用され
る医薬品として承認されている。
【０００５】更に、プテリン誘導体製剤は、糖尿病（タ
イプＩ）、虚血再灌流障害、肝障害の治療等に対して優
れた作用があることが認められている（特願平04-17591
7号公報）。また、ＮＰＨ４は、癌転移抑制や制癌剤の
副作用治療にも有効であることが確認されている（特願
平04-304525)。しかしながら、プテリン誘導体が細胞障
害に対して予防及び障害抑制効果を示すことについて
は、学術誌、特許公報において見あたらない。
イプＩ）、虚血再灌流障害、肝障害の治療等に対して優
れた作用があることが認められている（特願平04-17591
7号公報）。また、ＮＰＨ４は、癌転移抑制や制癌剤の
副作用治療にも有効であることが確認されている（特願
平04-304525)。しかしながら、プテリン誘導体が細胞障
害に対して予防及び障害抑制効果を示すことについて
は、学術誌、特許公報において見あたらない。
【０００６】また、現在生命科学全般において、種々の
細胞が培養され、生命現象の解析や物質生産などに用い
られている。しかしながら、脆弱な細胞を培養すること
は現在の技術でも多くの困難を伴っている。この問題の
一つが、細胞に栄養補給を行うための細胞培養培地の交
換という操作である。培地の交換による細胞障害として
は、酸素の巻き込みによる活性酸素の発生と水流による
物理的ショック、自己分泌型栄養因子の枯渇などによる
障害が考えられている。長期に培養する際には、培地を
常に交換する必要に迫られ、本来栄養補給と老廃物除去
による細胞保護のために行うはずの培地交換が、かえっ
て細胞に障害を与えることになっている。具体的には、
初代培養した神経細胞やオリゴデンドロサイトのような
神経系の細胞、免疫系の細胞などは全般に培地交換によ
る障害に感受性が高い細胞群である。また、モノクロー
ナル抗体を産出するハイブリドーマも時として、培地交
換障害による抗体産生能の低下や変性を生じる場合もあ
る。これらの細胞はその有用性の高さと脆弱性から非常
に高コストな細胞である。よって、貴重な細胞ほど培地
交換に伴う障害を低下させる必要がある。しかしなが
ら、このような障害性を抑制するような薬剤は今まで検
討されていない。
細胞が培養され、生命現象の解析や物質生産などに用い
られている。しかしながら、脆弱な細胞を培養すること
は現在の技術でも多くの困難を伴っている。この問題の
一つが、細胞に栄養補給を行うための細胞培養培地の交
換という操作である。培地の交換による細胞障害として
は、酸素の巻き込みによる活性酸素の発生と水流による
物理的ショック、自己分泌型栄養因子の枯渇などによる
障害が考えられている。長期に培養する際には、培地を
常に交換する必要に迫られ、本来栄養補給と老廃物除去
による細胞保護のために行うはずの培地交換が、かえっ
て細胞に障害を与えることになっている。具体的には、
初代培養した神経細胞やオリゴデンドロサイトのような
神経系の細胞、免疫系の細胞などは全般に培地交換によ
る障害に感受性が高い細胞群である。また、モノクロー
ナル抗体を産出するハイブリドーマも時として、培地交
換障害による抗体産生能の低下や変性を生じる場合もあ
る。これらの細胞はその有用性の高さと脆弱性から非常
に高コストな細胞である。よって、貴重な細胞ほど培地
交換に伴う障害を低下させる必要がある。しかしなが
ら、このような障害性を抑制するような薬剤は今まで検
討されていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】例えば、自己再生能力
の低い神経細胞などの細胞においては、栄養因子の枯
渇、フリーラジカルによる細胞膜の損傷、物理的ショッ
ク、毒物などに対して非常に脆弱であり、容易に細胞死
をまねき、ひいては組織及び器官の機能不全を生じる。
従って本発明は、これらの細胞障害に起因する効果的治
療に役立てるため、安全性が高く、生体内でも安定に作
用する物質を探索し製剤化をはかることを目的とする。
の低い神経細胞などの細胞においては、栄養因子の枯
渇、フリーラジカルによる細胞膜の損傷、物理的ショッ
ク、毒物などに対して非常に脆弱であり、容易に細胞死
をまねき、ひいては組織及び器官の機能不全を生じる。
従って本発明は、これらの細胞障害に起因する効果的治
療に役立てるため、安全性が高く、生体内でも安定に作
用する物質を探索し製剤化をはかることを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、前記課題を
解決するために鋭意研究した結果、プテリン誘導体製剤
が本来的に脆弱な細胞及び機能低下した細胞に対して、
細胞保護作用を示すとともに、種々の障害に対して細胞
障害抑制活性を持ち、さらにプテリン誘導体及びその塩
は、水溶性が高いことから、細胞培養培地に容易に添加
でき、また注射剤として製剤化できることを明らかに
し、本発明を完成させた。すなわち、本発明の第一は、
次式
解決するために鋭意研究した結果、プテリン誘導体製剤
が本来的に脆弱な細胞及び機能低下した細胞に対して、
細胞保護作用を示すとともに、種々の障害に対して細胞
障害抑制活性を持ち、さらにプテリン誘導体及びその塩
は、水溶性が高いことから、細胞培養培地に容易に添加
でき、また注射剤として製剤化できることを明らかに
し、本発明を完成させた。すなわち、本発明の第一は、
次式
【０００９】
【化３】
【００１０】（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6はＨまた
は一緒になって二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれ
Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルを示す。）で示され
るプテリン誘導体を主成分とする細胞障害抑制剤に関す
る。本発明の第二は、前記式で示されるプテリン誘導体
を主成分とする細胞保護剤に関し、好ましくは、細胞培
養において細胞保護のために添加する。
は一緒になって二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれ
Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルを示す。）で示され
るプテリン誘導体を主成分とする細胞障害抑制剤に関す
る。本発明の第二は、前記式で示されるプテリン誘導体
を主成分とする細胞保護剤に関し、好ましくは、細胞培
養において細胞保護のために添加する。
【００１１】これら製剤に使用されるプテリン誘導体と
しては、例えば次のような化合物を挙げることができ
る。プテリン（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって
二重結合、Ｒ3、Ｒ4はＨを示す）、５，６，７，８−テ
トラヒドロプテリン（Ｒ1〜Ｒ6はＨを示す）、プテリン
カルボン酸（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって二
重結合、Ｒ3はＣＯＯＨ、Ｒ4はＨを示す）、ビオプテリ
ン（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって二重結合、
Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3を示し、Ｒ4はＨ
を示す）、７，８−ジヒドロビオプテリン（Ｒ1、Ｒ2は
一緒になって二重結合を示し、Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）ＣＨ
（ＯＨ）ＣＨ3を示し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）、
５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン（Ｒ1、
Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ3 を示す）、セピアプテリン（Ｒ1、Ｒ2
は一緒になって二重結合、Ｒ3はＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3
を示し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）、１´，２´−ジ
アセチル−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン
（Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ（Ｏ
Ａｃ）ＣＨ（ＯＡｃ）ＣＨ3 である）、６−メチル−
５，６，７，８−テトラヒドロプテリン（Ｒ1、Ｒ2、Ｒ
4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ3を示す。）等であ
る。さらに式中、Ｒ3はＤ−エリスロ、Ｌ−スレオ、Ｄ
−スレオ、Ｌ−エリスロ型のいずれでもよい。
しては、例えば次のような化合物を挙げることができ
る。プテリン（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって
二重結合、Ｒ3、Ｒ4はＨを示す）、５，６，７，８−テ
トラヒドロプテリン（Ｒ1〜Ｒ6はＨを示す）、プテリン
カルボン酸（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって二
重結合、Ｒ3はＣＯＯＨ、Ｒ4はＨを示す）、ビオプテリ
ン（Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6は一緒になって二重結合、
Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3を示し、Ｒ4はＨ
を示す）、７，８−ジヒドロビオプテリン（Ｒ1、Ｒ2は
一緒になって二重結合を示し、Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）ＣＨ
（ＯＨ）ＣＨ3を示し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）、
５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン（Ｒ1、
Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ（ＯＨ）Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ3 を示す）、セピアプテリン（Ｒ1、Ｒ2
は一緒になって二重結合、Ｒ3はＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3
を示し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）、１´，２´−ジ
アセチル−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン
（Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ（Ｏ
Ａｃ）ＣＨ（ＯＡｃ）ＣＨ3 である）、６−メチル−
５，６，７，８−テトラヒドロプテリン（Ｒ1、Ｒ2、Ｒ
4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示し、Ｒ3はＣＨ3を示す。）等であ
る。さらに式中、Ｒ3はＤ−エリスロ、Ｌ−スレオ、Ｄ
−スレオ、Ｌ−エリスロ型のいずれでもよい。
【００１２】また、プテリン誘導体のうち、ネオプテリ
ン誘導体としては、例えばネオプテリン（Ｒ1、Ｒ2およ
びＲ5、Ｒ6は一緒になって二重結合を示し、Ｒ4はＨを
示す）、７，８，−ジヒドロネオプテリン（Ｒ1、Ｒ2は
一緒になって二重結合を示しＲ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示
す）、５，６，７，８−テトラヒドロネオプテリン（Ｒ
1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）等がある。さらに
式中、６−ヒドロキシプロピル部はＤ−エリスロ、Ｌ−
スレオ、Ｄ−スレオ、Ｌ−エリスロ型のいずれでもよ
い。
ン誘導体としては、例えばネオプテリン（Ｒ1、Ｒ2およ
びＲ5、Ｒ6は一緒になって二重結合を示し、Ｒ4はＨを
示す）、７，８，−ジヒドロネオプテリン（Ｒ1、Ｒ2は
一緒になって二重結合を示しＲ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示
す）、５，６，７，８−テトラヒドロネオプテリン（Ｒ
1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6はＨを示す）等がある。さらに
式中、６−ヒドロキシプロピル部はＤ−エリスロ、Ｌ−
スレオ、Ｄ−スレオ、Ｌ−エリスロ型のいずれでもよ
い。
【００１３】プテリン誘導体は、そのままでも使用する
ことができるが、塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩やカンフ
ァースルホン酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸等の有機
酸塩として製造し、注射剤や経口剤の主薬とすることが
できる。プテリン誘導体は、すでに公知の方法（例えば
Bernhard Schiriks, Jost H.Bieri und Max Viscontin
i, Helvetica Chimica Acta -Vol. 60, Fasc. 1 (1977)
- Nr. 24、同 -Vol. 61, Fasc. 7 (1978)- Nr. 257や特
開昭63-297326 号公報に紹介されている製造法）で得る
ことができる。さらにネオプテリン誘導体は、すでに公
知の方法（例えば M. Viscontini, R. Provenzale, S.
Ohlgart und J.Mallevialle, Helvetica Chimica Acta
-Vol. 53, Fasc. 5 (1970)- Nr. 139、Bernhard Schiri
ks, Jost H. Bieri und Max Viscontini, Helvetica Ch
imica Acta -Vol. 59, Fasc. 1 (1976)- Nr. 27、Rembo
ld, Buschman, (1963), Ber., 96, 1406 に紹介されて
いる製造法）で得ることができる。
ことができるが、塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩やカンフ
ァースルホン酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸等の有機
酸塩として製造し、注射剤や経口剤の主薬とすることが
できる。プテリン誘導体は、すでに公知の方法（例えば
Bernhard Schiriks, Jost H.Bieri und Max Viscontin
i, Helvetica Chimica Acta -Vol. 60, Fasc. 1 (1977)
- Nr. 24、同 -Vol. 61, Fasc. 7 (1978)- Nr. 257や特
開昭63-297326 号公報に紹介されている製造法）で得る
ことができる。さらにネオプテリン誘導体は、すでに公
知の方法（例えば M. Viscontini, R. Provenzale, S.
Ohlgart und J.Mallevialle, Helvetica Chimica Acta
-Vol. 53, Fasc. 5 (1970)- Nr. 139、Bernhard Schiri
ks, Jost H. Bieri und Max Viscontini, Helvetica Ch
imica Acta -Vol. 59, Fasc. 1 (1976)- Nr. 27、Rembo
ld, Buschman, (1963), Ber., 96, 1406 に紹介されて
いる製造法）で得ることができる。
【００１４】医薬品剤型としては、経口的には、液剤、
散剤、細粒剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、懸濁
剤として使用でき、注射剤としては、水剤あるいはリポ
ソームやマイクロカプセルに封入して製造される。錠
剤、細粒剤、カプセル剤などに混和される佐薬は次のよ
うなものである。アラビアゴム、トラガント、ゼラチ
ン、白糖、メチルセルロース類、ポリビニールピロリド
ン等の結合剤、乳糖、白糖、デンプン、デキストリン、
微結晶セルロース、タルク、酸化チタン、無機塩類のよ
うな賦形剤、カルボキシメチルセルロース類、アルギン
酸ナトリウム、ゼラチン化澱粉、コーンスターチのよう
な崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ワック
スのような滑沢剤、糖類、サッカリンのような甘味剤、
クエン酸、グルタミン酸、ペパーミント、アカモノ油、
チェリーのような香味剤、カプセルの場合、上記材料の
ほか、植物油脂類のような液体担体を含有することがで
きる。また要すれば、医薬用として許された色素類が使
用される。
散剤、細粒剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、懸濁
剤として使用でき、注射剤としては、水剤あるいはリポ
ソームやマイクロカプセルに封入して製造される。錠
剤、細粒剤、カプセル剤などに混和される佐薬は次のよ
うなものである。アラビアゴム、トラガント、ゼラチ
ン、白糖、メチルセルロース類、ポリビニールピロリド
ン等の結合剤、乳糖、白糖、デンプン、デキストリン、
微結晶セルロース、タルク、酸化チタン、無機塩類のよ
うな賦形剤、カルボキシメチルセルロース類、アルギン
酸ナトリウム、ゼラチン化澱粉、コーンスターチのよう
な崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ワック
スのような滑沢剤、糖類、サッカリンのような甘味剤、
クエン酸、グルタミン酸、ペパーミント、アカモノ油、
チェリーのような香味剤、カプセルの場合、上記材料の
ほか、植物油脂類のような液体担体を含有することがで
きる。また要すれば、医薬用として許された色素類が使
用される。
【００１５】また、製剤の物理的形態を変化させるた
め、例えば腸溶性コーティング剤として、酢酸フタール
酸セルロースのような公知のセルロース類や、メタアク
リル酸、アクリル酸エチルコポリマーのようなアクリル
酸系素材が使用される。また錠剤はシエラック、砂糖で
被覆することができる。シロップ、エリキシルのような
液剤は主薬に加えて、甘味剤としてショ糖など、防腐剤
としてメチルあるいは、プロピルパラベン、色素および
チェリー、またはオレンジ香味のような香味剤を含有す
ることができる。また要すれば界面活性剤、メチルセル
ロース類、アラビアゴム、トラガントの様な乳化ないし
は懸濁剤を使用することができる。
め、例えば腸溶性コーティング剤として、酢酸フタール
酸セルロースのような公知のセルロース類や、メタアク
リル酸、アクリル酸エチルコポリマーのようなアクリル
酸系素材が使用される。また錠剤はシエラック、砂糖で
被覆することができる。シロップ、エリキシルのような
液剤は主薬に加えて、甘味剤としてショ糖など、防腐剤
としてメチルあるいは、プロピルパラベン、色素および
チェリー、またはオレンジ香味のような香味剤を含有す
ることができる。また要すれば界面活性剤、メチルセル
ロース類、アラビアゴム、トラガントの様な乳化ないし
は懸濁剤を使用することができる。
【００１６】注射剤のための無菌組成物は、水溶性の主
薬はそのまま注射用水に、水に溶けにくい主薬は前記乳
化剤、あるいは懸濁化剤を使用して、溶解ないしは懸濁
させるか、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油等のよう
な天然植物油、プロピレングリコールやエチルオレエー
トなどに溶解ないしは懸濁させ、要すればリン酸塩、酢
酸塩、ホウ酸塩のような緩衝剤、食塩、ブドウ糖のよう
な等張化剤、ベンジルアルコール、塩酸プロカインのよ
うな無痛化剤や防腐剤、アスコルビン酸のような抗酸化
剤、色素などを配合することが出来る。天然レシチン、
ジパルミトイルまたはジステアロイルレシンのような合
成レシチン中に薬物を封入し、リポソーム化して注射剤
とすることも出来る。また、エチルセルロース、ポリイ
ソブチレンなどで被膜したマイクロカプセル剤とし、経
口または注射剤として使用することも出来る。
薬はそのまま注射用水に、水に溶けにくい主薬は前記乳
化剤、あるいは懸濁化剤を使用して、溶解ないしは懸濁
させるか、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油等のよう
な天然植物油、プロピレングリコールやエチルオレエー
トなどに溶解ないしは懸濁させ、要すればリン酸塩、酢
酸塩、ホウ酸塩のような緩衝剤、食塩、ブドウ糖のよう
な等張化剤、ベンジルアルコール、塩酸プロカインのよ
うな無痛化剤や防腐剤、アスコルビン酸のような抗酸化
剤、色素などを配合することが出来る。天然レシチン、
ジパルミトイルまたはジステアロイルレシンのような合
成レシチン中に薬物を封入し、リポソーム化して注射剤
とすることも出来る。また、エチルセルロース、ポリイ
ソブチレンなどで被膜したマイクロカプセル剤とし、経
口または注射剤として使用することも出来る。
【００１７】外用剤としては、基剤として、ワセリン、
パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴール、ロウな
どを用い、必要に応じ、前記されている抗酸化剤、防腐
剤、懸濁剤、芳香剤のほか、グリセリン、Ｄ−ソルビト
ール、プロピレングリコールのような保湿剤、ポリソル
ベート80、セスキオレイン酸ソルビタンのような界面活
性剤なども配合することができる。
パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴール、ロウな
どを用い、必要に応じ、前記されている抗酸化剤、防腐
剤、懸濁剤、芳香剤のほか、グリセリン、Ｄ−ソルビト
ール、プロピレングリコールのような保湿剤、ポリソル
ベート80、セスキオレイン酸ソルビタンのような界面活
性剤なども配合することができる。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 製造例１ プテリン誘導体主成分製剤の錠剤の製造 １．錠剤 (1) ネオプテリン （２−アミノ−４−オキソ−６−（Ｄ−エリスロ−１´， ２´，３´−トリヒドロキシプロピル）−プテリジン） 10ｇ (2) 乳糖 90ｇ (3) トウモロコシ澱粉 29ｇ (4) ステアリン酸マグネシウム 1ｇ 1000錠 130ｇ 成分(1), (2)および17ｇの(3) を混和し、７ｇの成分
(3) から作ったペーストとともに顆粒化し、この顆粒に
５ｇの成分(3) と成分(4) を加え、混合物を圧縮錠剤機
で圧縮して、錠剤当たり成分(1)10mg を含有する直径７
mmの錠剤1000個を製造した。
る。 製造例１ プテリン誘導体主成分製剤の錠剤の製造 １．錠剤 (1) ネオプテリン （２−アミノ−４−オキソ−６−（Ｄ−エリスロ−１´， ２´，３´−トリヒドロキシプロピル）−プテリジン） 10ｇ (2) 乳糖 90ｇ (3) トウモロコシ澱粉 29ｇ (4) ステアリン酸マグネシウム 1ｇ 1000錠 130ｇ 成分(1), (2)および17ｇの(3) を混和し、７ｇの成分
(3) から作ったペーストとともに顆粒化し、この顆粒に
５ｇの成分(3) と成分(4) を加え、混合物を圧縮錠剤機
で圧縮して、錠剤当たり成分(1)10mg を含有する直径７
mmの錠剤1000個を製造した。
【００１９】 全成分を混和し、ゼラチンカプセル３号（第12改正日本
薬局方) 1000個に充填し、カプセル１個当り成分(1)10m
g を含有するカプセル剤を製造した。
薬局方) 1000個に充填し、カプセル１個当り成分(1)10m
g を含有するカプセル剤を製造した。
【００２０】 ３．注射剤 (1) ５，６，７，８−テトラヒドロネオプテリン・二塩酸塩 12ｇ (2) 塩化ナトリウム 9ｇ 成分(1) および(2) を蒸留水1000mlに溶解し、褐色アン
プル1000個に１mlずつ分注し、窒素ガスで置換して封入
した。全工程は無菌条件下に行った。
プル1000個に１mlずつ分注し、窒素ガスで置換して封入
した。全工程は無菌条件下に行った。
【００２１】 ４．外用剤 (1) ５，６，７，８−テトラヒドロネオプテリン 3 ｇ (2) ポリエチレングリコール 40 ｇ (3) ステアレート 3.1ｇ (4) グリセリールステアレート 7.7ｇ (5) ビフェニールアルコール 8.5ｇ (6) スクワレン 12.3ｇ (7) グリセリントリオクタノエート 12.3ｇ (8) プロピルパラベン 0.1ｇ (9) メチルパラベン 0.1ｇ (10)ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.3ｇ (11)ジプロピレングリコール 7.7ｇ (12)クエン酸 0.2ｇ (13)クエン酸ナトリウム 1.4ｇ 成分(1) を水に溶解または懸濁し、他の成分とともに常
法に従って100gの軟膏を製造した。
法に従って100gの軟膏を製造した。
【００２２】実施例１ 製造例１と同様にして製造したプテリン誘導体製剤のう
ち、５，６，７，８−テトラヒドロ−Ｄ−ネオプテリン
（ＮＰＨ４）、５，６，７，８−テトラヒドロ−６−ビ
オプテリン（ＢＰＨ４）、５，６，７，８−テトラヒド
ロプテリン（ＰＴＨ４）、５，６，７，８−テトラヒド
ロ−６，７−ジメチルプテリン（ＤＰＨ４）を用いた製
剤につき各種効果を試験した。
ち、５，６，７，８−テトラヒドロ−Ｄ−ネオプテリン
（ＮＰＨ４）、５，６，７，８−テトラヒドロ−６−ビ
オプテリン（ＢＰＨ４）、５，６，７，８−テトラヒド
ロプテリン（ＰＴＨ４）、５，６，７，８−テトラヒド
ロ−６，７−ジメチルプテリン（ＤＰＨ４）を用いた製
剤につき各種効果を試験した。
【００２３】１）培地交換によって生じる細胞障害に対
する保護効果 （方法）ラット胎仔大脳皮質より調製した神経細胞を24
ウェル培養ディッシュ上で10％牛胎仔血清を含む最少必
須培地（Minimum Essential Medium（ＭＥＭ))にて２〜
４日間培養し、インスリン、トランスフェリン、セレン
酸ナトリウム、プトレシンを含む無血清ＭＥＭ（ＩＴＳ
Ｐ−ＭＥＭ）にプテリン誘導体（ＮＰＨ４、ＢＰＨ４、
ＰＴＨ４、ＤＰＨ４）を溶解したサンプル溶液（0.25ml
／ウエル) に置換し、37℃、５％ＣＯ2にてインキュベ
ートした。ＩＴＳＰ−ＭＥＭのみで培地を交換したもの
を試験対照とした。
する保護効果 （方法）ラット胎仔大脳皮質より調製した神経細胞を24
ウェル培養ディッシュ上で10％牛胎仔血清を含む最少必
須培地（Minimum Essential Medium（ＭＥＭ))にて２〜
４日間培養し、インスリン、トランスフェリン、セレン
酸ナトリウム、プトレシンを含む無血清ＭＥＭ（ＩＴＳ
Ｐ−ＭＥＭ）にプテリン誘導体（ＮＰＨ４、ＢＰＨ４、
ＰＴＨ４、ＤＰＨ４）を溶解したサンプル溶液（0.25ml
／ウエル) に置換し、37℃、５％ＣＯ2にてインキュベ
ートした。ＩＴＳＰ−ＭＥＭのみで培地を交換したもの
を試験対照とした。
【００２４】牛胎仔血清を含む培地から無血清培地へ交
換することにより、栄養因子の枯渇、培地添加時の物理
的ショックと酸素巻き込みによるフリーラジカルの発生
等による細胞障害が考えられる。試験の各薬物濃度は最
終100μM または100unit/mlで行った。プテリン誘導体
の効果は100μM プテリン誘導体を含むＩＴＳＰ−ＭＥ
Ｍで全ての培地交換を行った。培地交換終了後、37℃、
５％ＣＯ2にて24時間インキュベート後、神経細胞の障
害度を測定した。障害度は、24時間インキュベート後の
培養上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ活性を測定し、コン
トロールを100％とした相対値を求め、評価した。さら
に、上清を除いた後に 500μl／ウェルＩＴＳＰ−ＭＥ
Ｍを添加し、ＭＴＴアッセイを行い、細胞のミトコンド
リア酵素活性について測定し、コントロールとの相対値
で評価した。
換することにより、栄養因子の枯渇、培地添加時の物理
的ショックと酸素巻き込みによるフリーラジカルの発生
等による細胞障害が考えられる。試験の各薬物濃度は最
終100μM または100unit/mlで行った。プテリン誘導体
の効果は100μM プテリン誘導体を含むＩＴＳＰ−ＭＥ
Ｍで全ての培地交換を行った。培地交換終了後、37℃、
５％ＣＯ2にて24時間インキュベート後、神経細胞の障
害度を測定した。障害度は、24時間インキュベート後の
培養上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ活性を測定し、コン
トロールを100％とした相対値を求め、評価した。さら
に、上清を除いた後に 500μl／ウェルＩＴＳＰ−ＭＥ
Ｍを添加し、ＭＴＴアッセイを行い、細胞のミトコンド
リア酵素活性について測定し、コントロールとの相対値
で評価した。
【００２５】（結果）培地交換によって生じる細胞障害
と薬物添加による保護効果を図１に示す。ＮＰＨ４、Ｂ
ＰＨ４、ＰＴＨ４、ＤＰＨ４を含む培地では、何も含ま
ない培地の場合に比べて明らかに培地交換による障害を
低減した。中でもＮＰＨ４、ＢＰＨ４、ＤＰＨ４は強い
神経細胞保護効果を示した。この作用は大量のＳＯＤと
カタラーゼを同時に添加しても全く保護効果がなかった
ことから、活性酸素消去作用とは異なる保護作用と考え
られた。そこで、ミトコンドリア活性の指標の一つとし
て、神経細胞ミトコンドリアのＭＴＴ還元能に対するＮ
ＰＨ４の影響を測定した（図２）。ＮＰＨ４はコントロ
ールに対して、高いＭＴＴ還元能を示した。ＳＯＤとカ
タラーゼの同時添加にそのような作用はなかった。ＮＰ
Ｈ４にはミトコンドリア賦活作用があると考えられた。
と薬物添加による保護効果を図１に示す。ＮＰＨ４、Ｂ
ＰＨ４、ＰＴＨ４、ＤＰＨ４を含む培地では、何も含ま
ない培地の場合に比べて明らかに培地交換による障害を
低減した。中でもＮＰＨ４、ＢＰＨ４、ＤＰＨ４は強い
神経細胞保護効果を示した。この作用は大量のＳＯＤと
カタラーゼを同時に添加しても全く保護効果がなかった
ことから、活性酸素消去作用とは異なる保護作用と考え
られた。そこで、ミトコンドリア活性の指標の一つとし
て、神経細胞ミトコンドリアのＭＴＴ還元能に対するＮ
ＰＨ４の影響を測定した（図２）。ＮＰＨ４はコントロ
ールに対して、高いＭＴＴ還元能を示した。ＳＯＤとカ
タラーゼの同時添加にそのような作用はなかった。ＮＰ
Ｈ４にはミトコンドリア賦活作用があると考えられた。
【００２６】２）過酸化水素と硫酸鉄によって生じるヒ
ドロキシラジカル障害からの神経細胞死抑制効果 （方法）実施例１の１）と同様に大脳皮質神経細胞を調
製、培養した。２〜４日間培養した細胞を、ＩＴＳＰ−
ＭＥＭ（0.25ml／ウエル) に置換し、37℃、５％ＣＯ2
にて30分間インキュベートした。その後、培地を除きプ
テリン誘導体を含むＩＴＳＰ−ＭＥＭと過酸化水素と硫
酸鉄を直前に混合し、すぐさまその混合液を0.25ml／ウ
エルで培養細胞に添加した。37℃、５％ＣＯ2にて24時
間インキュベート後、神経細胞の障害度を測定した。障
害度は、24時間インキュベート後の培養上清中の乳酸デ
ヒドロゲナーゼ活性を測定し、コントロールを100％と
した相対値を求め、評価した。
ドロキシラジカル障害からの神経細胞死抑制効果 （方法）実施例１の１）と同様に大脳皮質神経細胞を調
製、培養した。２〜４日間培養した細胞を、ＩＴＳＰ−
ＭＥＭ（0.25ml／ウエル) に置換し、37℃、５％ＣＯ2
にて30分間インキュベートした。その後、培地を除きプ
テリン誘導体を含むＩＴＳＰ−ＭＥＭと過酸化水素と硫
酸鉄を直前に混合し、すぐさまその混合液を0.25ml／ウ
エルで培養細胞に添加した。37℃、５％ＣＯ2にて24時
間インキュベート後、神経細胞の障害度を測定した。障
害度は、24時間インキュベート後の培養上清中の乳酸デ
ヒドロゲナーゼ活性を測定し、コントロールを100％と
した相対値を求め、評価した。
【００２７】（結果）結果を図３に示す。神経細胞に過
酸化水素と硫酸鉄を添加すると濃度依存性に細胞障害を
生じた。ここに、100μM のＮＰＨ４、ＢＰＨ４を各々
同時に添加すると、その神経細胞死を抑制した。また、
100μM 過酸化水素と硫酸鉄を含むＩＴＳＰ−ＭＥＭで
先に障害を30分または60分与えた後に、培地を除き、Ｎ
ＰＨ４を作用させても細胞死抑制効果を示した（図
４）。さらに、過酸化水素と硫酸鉄による障害負荷前
に、神経細胞を 100μM ＮＰＨ４で30分間インキュベー
トしただけでも細胞死抑制効果を示した。よって、プテ
リン類はこの様に神経細胞死を生じる過酷な障害に対し
ても、その障害を低減することが明らかとなり、その予
防及び、治療に効果を示す。
酸化水素と硫酸鉄を添加すると濃度依存性に細胞障害を
生じた。ここに、100μM のＮＰＨ４、ＢＰＨ４を各々
同時に添加すると、その神経細胞死を抑制した。また、
100μM 過酸化水素と硫酸鉄を含むＩＴＳＰ−ＭＥＭで
先に障害を30分または60分与えた後に、培地を除き、Ｎ
ＰＨ４を作用させても細胞死抑制効果を示した（図
４）。さらに、過酸化水素と硫酸鉄による障害負荷前
に、神経細胞を 100μM ＮＰＨ４で30分間インキュベー
トしただけでも細胞死抑制効果を示した。よって、プテ
リン類はこの様に神経細胞死を生じる過酷な障害に対し
ても、その障害を低減することが明らかとなり、その予
防及び、治療に効果を示す。
【００２８】
【発明の効果】本発明によって、プテリン誘導体を有効
成分として、外因性ならびに内因性の細胞障害の予防及
び治療に有効な細胞障害抑制剤、細胞培養に際し培地に
添加して細胞を保護する等の効果を有する細胞保護剤を
提供することができた。
成分として、外因性ならびに内因性の細胞障害の予防及
び治療に有効な細胞障害抑制剤、細胞培養に際し培地に
添加して細胞を保護する等の効果を有する細胞保護剤を
提供することができた。
【図１】 培地交換により生じる細胞障害に対するプテ
リン誘導体の神経細胞保護効果を示すグラフ。
リン誘導体の神経細胞保護効果を示すグラフ。
【図２】 培地交換障害に対する神経細胞ミトコンドリ
ア活性へのプテリン誘導体の影響を示すグラフ。
ア活性へのプテリン誘導体の影響を示すグラフ。
【図３】 過酸化水素＋硫酸鉄による障害とプテリン誘
導体による細胞死抑制効果を示すグラフ。
導体による細胞死抑制効果を示すグラフ。
【図４】 過酸化水素＋硫酸鉄障害におけるＮＰＨ４の
障害前後における投与とその神経細胞死抑制効果を示す
グラフ。図中、障害の負荷はすべて 100μM 過酸化水素
と 1μM 硫酸鉄添加により行った。ＮＰＨ４は培地に溶
解して添加した。**；ｐ＜0.01、＊；ｐ＜0.03
障害前後における投与とその神経細胞死抑制効果を示す
グラフ。図中、障害の負荷はすべて 100μM 過酸化水素
と 1μM 硫酸鉄添加により行った。ＮＰＨ４は培地に溶
解して添加した。**；ｐ＜0.01、＊；ｐ＜0.03
Claims (2)
- 【請求項１】 一般式： 【化１】 （式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6はＨまたは一緒になっ
て二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれＨ、アルキル、
ヒドロキシアルキルを示す。）で示されるプテリン誘導
体を主成分とする細胞障害抑制剤。 - 【請求項２】 一般式： 【化２】 （式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ5、Ｒ6はＨまたは一緒になっ
て二重結合を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれＨ、アルキル、
ヒドロキシアルキルを示す。）で示されるプテリン誘導
体を主成分とする細胞培養における細胞保護剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34684493A JP3360152B2 (ja) | 1993-12-27 | 1993-12-27 | 細胞障害抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34684493A JP3360152B2 (ja) | 1993-12-27 | 1993-12-27 | 細胞障害抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07188232A true JPH07188232A (ja) | 1995-07-25 |
| JP3360152B2 JP3360152B2 (ja) | 2002-12-24 |
Family
ID=18386193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34684493A Expired - Fee Related JP3360152B2 (ja) | 1993-12-27 | 1993-12-27 | 細胞障害抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3360152B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007072911A1 (ja) * | 2005-12-22 | 2007-06-28 | Asubio Pharma Co., Ltd. | 塩酸サプロプテリンの生体内吸収性を向上させた製剤 |
-
1993
- 1993-12-27 JP JP34684493A patent/JP3360152B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007072911A1 (ja) * | 2005-12-22 | 2007-06-28 | Asubio Pharma Co., Ltd. | 塩酸サプロプテリンの生体内吸収性を向上させた製剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3360152B2 (ja) | 2002-12-24 |
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