JPH07194375A - コラーゲン合成促進剤およびコラーゲン代謝賦活剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】グリシン、プロリン、アラニンの３種のアミノ
酸を含有することを特徴とするコラーゲン合成促進剤，
グリシン、プロリン、アラニンの３種のアミノ酸、およ
びコラーゲン合成促進物質を含有することを特徴とする
コラーゲン合成促進剤，コラーゲン合成促進物質がアス
コルビン酸またはその誘導体である前記のコラーゲン合
成促進剤，グリシン、プロリン、アラニンのモル含有率
が３：２：１である前記のコラーゲン合成促進剤，前記
のコラーゲン合成促進剤とコラゲナーゼ産生促進剤を含
有することを特徴とするコラーゲン代謝賦活剤。 【効果】線維芽細胞に作用して、アスコルビン酸誘導体
等のコラーゲン合成促進物質のコラーゲン蛋白合成能を
高めることができる。また、本発明のコラーゲン代謝賦
活剤は、コラーゲンの合成と分解の両方を促進すること
ができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬，化粧品等に適用可
能であり、また生化学の実験用試薬としても有用なコラ
ーゲン合成促進剤およびコラーゲン代謝賦活剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】通常の蛋白質の代謝回転（新陳代謝）に
比べ、コラーゲンの代謝回転速度は非常に遅く、生理的
条件に於いても、老化に伴ってコラーゲンの代謝回転速
度がさらに低下していくことが知られている。コラーゲ
ンの代謝回転速度はコラーゲンの分解速度と合成速度に
より決まるが、この様な老化に伴う代謝回転速度の低下
はコラーゲンの架橋構造（老化架橋）の増加につなが
り、例えば、皮膚の硬化やしわの形成に関わっている。
難分解・難抽出性の固いコラーゲンが増加することによ
り、細胞の足場として増殖・分化・移動に関与するコラ
ーゲンの機能が損なわれ、細胞活性の低下を来し、さら
にコラーゲンの代謝回転速度が低下するという悪循環に
陥ると考えられている（現代化学、12月号、36頁、1990
年参照）。

【０００３】この様な老化に伴うコラーゲン代謝回転速
度の低下を食い止めるためには、コラーゲン代謝の鍵と
なる酵素コラゲナーゼの活性を賦活し分解を促すととも
に、コラーゲンの合成速度を高めてやることにより、新
しいコラーゲンを供給する必要がある。

【０００４】細胞のコラーゲン合成能を賦活するものと
して、アスコルビン酸誘導体，エストラジオール，テス
トステロン等が知られている。これらはコラーゲン遺伝
子を刺激するあるいは、蛋白合成後の律速過程を解除す
ることによりコラーゲンの合成速度を上昇させるもので
ある。

【０００５】しかし、前記のコラーゲン合成促進剤を用
いても、実際には、コラーゲン合成量は不十分であっ
た。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、コラーゲン蛋白の合成を円滑に促すコラ
ーゲン合成促進剤を提供するにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、グリシ
ン、プロリン、アラニンの３種のアミノ酸を含有するこ
とを特徴とするコラーゲン合成促進剤，グリシン、プロ
リン、アラニンの３種のアミノ酸、およびコラーゲン合
成促進物質を含有することを特徴とするコラーゲン合成
促進剤，コラーゲン合成促進物質がアスコルビン酸また
はその誘導体である前記のコラーゲン合成促進剤，グリ
シン、プロリン、アラニンのモル含有率が３：２：１で
ある前記のコラーゲン合成促進剤，前記のコラーゲン合
成促進剤とコラゲナーゼ産生促進剤を含有することを特
徴とするコラーゲン代謝賦活剤により達成される。

【０００８】本発明に用いられるグリシン、プロリン、
アラニンの各アミノ酸モル比はアラニン１に対し、グリ
シンとプロリンは各々０．１〜１０の範囲で可能である
が、好ましくはコラーゲンのアミノ酸構成比に近く、合
成促進の作用が最も強い３：２：１（グリシン：プロリ
ン：アラニン）であることが望ましい（試験例２参
照）。

【０００９】これらのアミノ酸でコラーゲン合成促進剤
を調製し、コラーゲン合成促進物質を添加した細胞系
に、補助剤として添加使用することができるが、予めコ
ラーゲン合成促進物質とともにコラーゲン合成促進剤と
して調製して用いても良い。

【００１０】本発明に用いられるコラーゲン合成促進物
質としては、コラーゲン合成促進物質として一般に知ら
れているものを用いることができるが、老化予防化粧品
として皮膚に適用するときは、皮膚線維芽細胞の存在す
る真皮層（結合組織）への作用が大きいので、アスコル
ビン酸およびその誘導体，エストロジェン，テストステ
ロンなどの様な低分子物質が望ましい。

【００１１】本発明に用いられるコラゲナーゼ産生促進
剤としては、絹ペプチド（特願平３−５９７５２号）、
セリン，Ｎ−メチルセリン（特開平４−１１３０号）、
硫酸塩，アンモニウム塩，硝酸塩（特願平４−３５５６
５２号），エタノールアミン誘導体（特開平３−２９４
２２２号）、ペントキシフィリンなどが挙げられる。こ
れらのコラゲナーゼ産生促進剤とコラーゲン合成促進剤
を含有するコラーゲン代謝賦活剤は、コラーゲンの合成
と分解の両方を促進することができる。

【００１２】本発明のコラーゲン合成促進剤およびコラ
ーゲン代謝賦活剤を、その使用目的に応じて、通常用い
られる公知の成分に配合することによって、液剤、固形
剤、半固形剤等の各種剤形に調製することが可能で、好
ましい組成物として軟膏、ゲル、クリーム、スプレー
剤、貼付剤、ローション、粉末、顆粒剤、錠剤等が挙げ
られる。

【００１３】その例として、本発明のコラーゲン合成促
進剤を、ワセリン等の炭化水素、ステアリルアルコール
等の高級アルコール、ミリスチン酸イソプロピル等の高
級脂肪酸低級アルキルエステル、ラノリン等の動物性油
脂、グリセリン等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸
エステル、モノステアリン酸ポリエチレングリコール等
の界面活性剤、無機塩、蝋、樹脂、水および要すればパ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル等
の防腐剤に混合することによって、化粧品や医薬品を製
造することができる。

【００１４】その際のコラーゲン合成促進剤の含有量は
剤形により異なるが、適用する組成物全量を基準として
好ましくは０. ００１〜２重量％（アミノ酸固形物とし
て）、更に好ましくは０. ０１１〜１重量％である。ま
た、アスコルビン酸誘導体等のコラーゲン合成促進物質
の含有量は、０．０１〜１０重量％が好ましく、更に好
ましくは０．１〜３重量％である。ただし、入浴剤のよ
うに使用時に希釈されるものはさらに添加量を増やすこ
とができる。また、予めコラーゲン合成促進物質を含む
細胞系に補助剤として用いる際には、１０⁵ コ／ｍｌの
細胞系の場合、例えばアミノ酸として３０ｍＭ含有する
コラーゲン合成促進剤溶液を、０．５〜２．０容量％程
度添加すれば良い。

【００１５】

【発明の効果】本発明のコラーゲン合成促進剤は、線維
芽細胞に作用して、アスコルビン酸誘導体等のコラーゲ
ン合成促進物質のコラーゲン蛋白合成能を高めることが
できる。また、本発明のコラーゲン代謝賦活剤は、コラ
ーゲンの合成と分解の両方を促進することができる。

【００１６】

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明する
が、それに先立って、本発明のコラーゲン合成促進能の
試験方法を記載する。

【００１７】（コラーゲン合成促進能測定試験法）正常
ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取されたＣＣ
Ｄ４５ＳＫ(ATCCCRL 1506) 〕の細胞密度を１０容量％
ウシ胎仔血清（以下ＦＢＳと略記）を含むＭＥＭ培地に
て１ｘ１０⁵ 個／ｍｌに調整し、２４穴プレートにそれ
ぞれ０. ４ｍｌずつ播種（４ｘ１０⁴ 個／穴）して、５
％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。

【００１８】尚、ＭＥＭ培地は、大日本製薬社製最少必
須培地１０−１０１に、０. １２重量％炭酸水素ナトリ
ウムを添加して調製した。

【００１９】２４時間後培養液を吸引除去し、終濃度
０. ６容量％ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で細胞を２回
洗浄した後、４００μｌの、終濃度５００μg/mlのアス
コルビン酸硫酸エステル２ナトリウムと０. ６容量％Ｆ
ＢＳを添加したＭＥＭ培地で置換した。

【００２０】コラーゲン合成促進剤溶液をポアーサイズ
が０. ２μｍのニトロセルロース膜（アドバンテック東
洋製、DISMIC-25 ）で濾過滅菌後、各ウェルに終濃度
０．５〜２容量％となるよう添加した。

【００２１】２４時間同様の条件で培養した後、β−ア
ミノプロピオニトリルを終濃度５０μｇ／ｍｌ、トリチ
ウム−Ｌ−プロリンを最終１μＣｉ／ｍｌ添加して、さ
らに２４時間培養した（培養検液）。

【００２２】コラーゲン産生量の定量：コラーゲンの産
生量は上記の培養検液より、ペプシンに耐性かつ食塩濃
度依存的溶解度によって分画されたコラーゲン画分に取
り込まれた放射活性で測定した。ペプシン処理及び食塩
濃度によるコラーゲンの分画法は、Ｗｅｂｓｔｅｒらの
方法（Analytical Biochemistry ，２２０頁，１９７９
年参照）に準じた。

【００２３】実施例１〜３ グリシン、プロリン、アラニンの３アミノ酸を表１記載
の様に混ぜ合わせ、モル比として１：１：１（実施例
１）、１：２：３（実施例２）、３：２：１（実施例
３）のコラーゲン合成促進剤を得た。

【００２４】

【表１】 混合時の各アミノ酸量をｇ数で表示

【００２５】尚、細胞添加実験においては、実施例１〜
３記載のコラーゲン合成促進剤を各々２７９．２９ｍ
ｇ、２８６．３１ｍｇ、２７２．２９ｍｇとり、それぞ
れの最終容量が１００ｍｌになるように水に溶かして、
総アミノ酸濃度が３０ｍＭのコラーゲン合成促進剤溶液
を作製した。

【００２６】（試験例１）実施例１記載のコラーゲン合
成促進剤溶液を最終濃度０．５〜１．５容量％で、アス
コルビン酸硫酸エステル２ナトリウムを含有する細胞培
養系に添加し、前述の試験をおこなった結果を表２に示
した。なお、比較例１としてコラーゲン合成促進剤溶液
を添加しない（アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウ
ムのみ）群を設けた。

【００２７】

【表２】 平均値 ±標準偏差（ｎ＝４）

【００２８】表２からわかるように実施例１記載のコラ
ーゲン合成促進剤は、用量依存的に強いコラーゲン合成
促進活性を示した。

【００２９】（試験例２）実施例１〜３記載のコラーゲ
ン合成促進剤を水に溶かして総アミノ酸濃度が３０ｍＭ
のコラーゲン合成促進剤溶液を調製し、最終濃度１容量
％で、アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウムを含有
する細胞培養系に添加して試験例１と同様の試験をおこ
なった結果を表３に示した。なお、比較例２としてコラ
ーゲン合成促進剤溶液を添加しない（アスコルビン酸硫
酸エステル２ナトリウムのみ）群を設けた。

【００３０】

【表３】 平均値 ±標準偏差（ｎ＝３）

【００３１】表３からわかるように実施例１〜３コラー
ゲン合成促進剤はどれもアスコルビン酸硫酸エステル２
ナトリウムのコラーゲン合成促進能を増強したが、なか
でも実施例３記載のコラーゲン合成促進剤が最も強いコ
ラーゲン合成促進能をもっていた。

【００３２】以上の結果から、本発明で用いたコラーゲ
ン合成促進剤が線維芽細胞に働いてコラーゲン合成促進
物質であるアスコルビン酸誘導体の効果を増大させるこ
とがわかった。

【００３３】以下に本発明のコラーゲン合成促進剤また
はコラーゲン代謝賦活剤を応用した組成物の処方例を示
す。

【００３４】処方例１−軟膏 実施例３のコラーゲン合成促進剤３ｍｇと下記親水性成
分とを、湯浴で８０℃に加温して混合し、これを、８０
℃に加温した下記の親油性成分混合物に攪拌しながら徐
々に加えた。次に、ホモジナイザー（TOKUSYUKIKA KOGY
O 製）で２分半激しく攪拌(2500rpm) して各成分を充分
乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、１００
ｇ中に０．００３重量％のコラーゲン合成促進剤を含む
軟膏を得た。

【００３５】 「親水性成分」 （ｇ） アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 ０.０３ パラオキシ安息香酸メチル ０.１ プロピレングリコール ６.７ 精製水 ４４.１

【００３６】 「親油性成分」 スクワラン ４.７ 白色ワセリン ２４.０ ステアリルアルコール ８.７ ミリスチン酸イソプロピル ６.０ モノステアリン酸ポリエチレングリコール（４５E.O.） （商品名NIKKOL MYS-45 、日本サーファクタント工業（株）製） １.３ ジポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸（２E.O.） （商品名NIKKOL DDP-2、日本サーファクタント工業（株）製） ２.３ モノステアリン酸グリセリン ２.０ パラオキシ安息香酸ブチル ０.１ ─────────────────────────────────── 計 １００

【００３７】処方例２−ローション （コラゲナーゼ産生促進剤の調製）塩化カルシウムの６
０重量％水溶液４００ｍｌに、精錬絹原料５６ｇを加熱
溶解した。この際、溶解を容易にするため、エチルアル
コール１６０ｍｌを添加した。次いで、これを２４時間
透析し濃縮後、１８重量％の可溶化フィブロイン水溶液
３１２ｍｌを得た。

【００３８】このうち２３５ｍｌに濃硫酸１６５ｍｌを
ゆっくりと加え、６０℃で６時間加温した。次いでこれ
に水を加え総量１．８ｌとし、室温で一夜放置後氷冷し
ながら水酸化ナトリウムで中和、濾過することにより絹
ペプチド溶液を得た（濃度２３５重量％）。

【００３９】（コラーゲン代謝賦活剤の調製）上記で得
た絹ペプチド溶液と本発明のコラーゲン合成促進剤を下
表に従って配合しローションを作製した（コラーゲン代
謝賦活剤含有ローション）。

【００４０】 重量％ 実施例３のコラーゲン合成促進剤 １.０ アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 ０.０３ コラゲナーゼ産生促進剤（絹ペプチド溶液） ０.１ エタノール １０.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ グリセリン ２.０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４１】 処方例３−ローション 重量％ 実施例３のコラーゲン合成促進剤 ０．００１ エタノール １０.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ グリセリン ２.０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４２】 処方例４−ローション 重量％ 実施例３のコラーゲン合成促進剤 ２.０ アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩 ０.０１ Ｎ−メチル−Ｌ−セリン ２.０ Ｎ−メチルエタノールアミン ３.０ エタノール １０.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ グリセリン ２.０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４３】 処方例５−ローション 重量％ 実施例１のコラーゲン合成促進剤 ０．１ アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 ０.０１ エタノール １３.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ グリセリン ２.０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４４】 処方例６−ローション 重量％ 実施例２のコラーゲン合成促進剤 ０．５ アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 ０.１ Ｎ−メチル−Ｌ−セリン １.０ Ｎ−メチルエタノールアミン １.０ エタノール １２.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ グリセリン ２.５ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４５】 処方例７−ローション 重量％ 実施例２のコラーゲン合成促進剤 ０．００１ エタノール １０.０ 乳酸 ０.３ クエン酸ナトリウム ０.１ アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩 ０.１ グリセリン ２.０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００重量％

【００４６】処方例８−入浴剤 実施例３のコラーゲン合成促進剤３ｇと下記成分とを混
合し、コラーゲン代謝賦活剤としての入浴剤１００ｇを
得た。

【００４７】 香料 ０．１ｇ 有機色素 １０ｍｇ 炭酸水素ナトリウム １４．９ｇ 硫酸ナトリウム ５０．０ｇ 硫酸アンモニウム ３５．０ｇ アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩 ０．３ｇ

【００４８】尚、この入浴剤は使用時に約３０００倍に
希釈される。

【００４９】処方例９−クリーム 下表の成分（Ｃ）を約８０℃で均一に混合溶解し、約８
０℃で均一に混合溶解しておいた成分（Ａ）中に加えて
乳化したのち、約５０℃で均一に混合溶解しておいた成
分（Ｂ）を添加し、約３０℃まで冷却して調製した。

【００５０】 （Ａ） 配合量（％） スクワラン １０.０ オリーブ油 １０.０ 固形パラフィン ５.０ セタノール ４.０ ソルビタンモノステアレート ２.０ ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（20E.O.） ２.０ （Ｂ） 実施例３記載のコラーゲン合成促進剤 ０.５ アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩 ２.０ Ｎ−メチル−Ｌ−セリン ２.０ 精製水 ２５.５ （Ｃ） グリセリン ５.０ メチルパラベン ０.１ 精製水 残量

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 グリシン、プロリン、アラニンの３種の
   アミノ酸を含有することを特徴とするコラーゲン合成促
   進剤。
2. 【請求項２】 グリシン、プロリン、アラニンの３種の
   アミノ酸、およびコラーゲン合成促進物質を含有するこ
   とを特徴とするコラーゲン合成促進剤。
3. 【請求項３】 コラーゲン合成促進物質がアスコルビン
   酸またはその誘導体である請求項１または２記載のコラ
   ーゲン合成促進剤。
4. 【請求項４】 グリシン、プロリン、アラニンのモル含
   有率が３：２：１である請求項１〜３いずれかに記載の
   コラーゲン合成促進剤。
5. 【請求項５】 請求項１〜４いずれかに記載のコラーゲ
   ン合成促進剤とコラゲナーゼ産生促進剤を含有すること
   を特徴とするコラーゲン代謝賦活剤。