JPH0720987B2 - ペプチドおよびタンパク質の改質方法 - Google Patents
ペプチドおよびタンパク質の改質方法Info
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- JPH0720987B2 JPH0720987B2 JP62265990A JP26599087A JPH0720987B2 JP H0720987 B2 JPH0720987 B2 JP H0720987B2 JP 62265990 A JP62265990 A JP 62265990A JP 26599087 A JP26599087 A JP 26599087A JP H0720987 B2 JPH0720987 B2 JP H0720987B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なペプチドまたはタンパク質の改質方法に
関し、更に詳細にはペプチドまたはタンパク質に次の一
般式（Ｉ）、 〔式中、R1は炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖の、水
素原子がフッ素原子で置換されてもよいアルキル基もし
くはアルケニル基、または炭素数１〜15の直鎖もしくは
分岐鎖のアルキル基で置換されたフェニル基であり、R2
は炭素数２〜３のアルキレン基であり、ｍは０〜30の数
であり、Ｍは水素原子あるいはアルカリ金属、アルカリ
土類金属、アンモニウム、アルキルアミンもしくはアル
カノールアミンの塩であることを示す。〕 で表されるリン酸エステルを用いたペプチドまたはタン
パク質の改質方法に関する。
関し、更に詳細にはペプチドまたはタンパク質に次の一
般式（Ｉ）、 〔式中、R1は炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖の、水
素原子がフッ素原子で置換されてもよいアルキル基もし
くはアルケニル基、または炭素数１〜15の直鎖もしくは
分岐鎖のアルキル基で置換されたフェニル基であり、R2
は炭素数２〜３のアルキレン基であり、ｍは０〜30の数
であり、Ｍは水素原子あるいはアルカリ金属、アルカリ
土類金属、アンモニウム、アルキルアミンもしくはアル
カノールアミンの塩であることを示す。〕 で表されるリン酸エステルを用いたペプチドまたはタン
パク質の改質方法に関する。
ペプチドや、酵素をはじめとするタンパク質の中には、
それら本来の機能の故に、治療薬、診断薬などの薬剤や
反応試薬、あるいは工業用リアクターとして利用されて
いるものや、利用が期待されているものが多い。しかし
ながら、これらの物質、ことに酵素タンパク質の場合
は、その不安定な性質、溶解特性などの理由から利用範
囲が制限されてしまう欠点があった。そのため天然に存
在するタンパク質を利用する目的のために、近年、天然
に存在するタンパク質の持つ特性を保持したまま、より
有用な特性を付加した改質酵素をはじめとする改質タン
パク質の開発が活発に行われている。
それら本来の機能の故に、治療薬、診断薬などの薬剤や
反応試薬、あるいは工業用リアクターとして利用されて
いるものや、利用が期待されているものが多い。しかし
ながら、これらの物質、ことに酵素タンパク質の場合
は、その不安定な性質、溶解特性などの理由から利用範
囲が制限されてしまう欠点があった。そのため天然に存
在するタンパク質を利用する目的のために、近年、天然
に存在するタンパク質の持つ特性を保持したまま、より
有用な特性を付加した改質酵素をはじめとする改質タン
パク質の開発が活発に行われている。
このような改質タンパク質の例として、ポリエチレング
ルコール修飾タンパク質や、機能性高分子を、ジシクロ
ヘキシルカルボジイミドなどの架橋剤を用いて結合させ
たタンパク質が開発された。しかし前者の場合には、修
飾剤であるポリエチレングルコールと塩化シアヌールの
結合体をクロマトグラフィーなどで精製する必要があ
り、生産を大規模に行うには操作が煩雑であるという問
題があり、後者の場合には、さらにタンパク質あるいは
高分子化合物同士のクロスリンクが問題となっており、
取扱が至便で工業的生産にも適用し得るタンパク質の改
質法の開発が望まれていた。
ルコール修飾タンパク質や、機能性高分子を、ジシクロ
ヘキシルカルボジイミドなどの架橋剤を用いて結合させ
たタンパク質が開発された。しかし前者の場合には、修
飾剤であるポリエチレングルコールと塩化シアヌールの
結合体をクロマトグラフィーなどで精製する必要があ
り、生産を大規模に行うには操作が煩雑であるという問
題があり、後者の場合には、さらにタンパク質あるいは
高分子化合物同士のクロスリンクが問題となっており、
取扱が至便で工業的生産にも適用し得るタンパク質の改
質法の開発が望まれていた。
かかる実情において本発明者は鋭意検討を行った結果、
安価でかつ容易に入手可能な原料を使用し、簡単な操作
で高純度かつ高収率で得られる上記一般式（Ｉ）で表さ
れるリン酸エステンをペプチドまたはタンパク質と反応
させることにより容易にペプチドおよびタンパク質にリ
ン酸エステル基を導入できること、さらに、リン酸エス
テル基を導入することによりペプチドおよびタンパク質
の物理化学的性質が改質されることを見い出し、本発明
を完成した。
安価でかつ容易に入手可能な原料を使用し、簡単な操作
で高純度かつ高収率で得られる上記一般式（Ｉ）で表さ
れるリン酸エステンをペプチドまたはタンパク質と反応
させることにより容易にペプチドおよびタンパク質にリ
ン酸エステル基を導入できること、さらに、リン酸エス
テル基を導入することによりペプチドおよびタンパク質
の物理化学的性質が改質されることを見い出し、本発明
を完成した。
即ち、本発明はペプチドまたはタンパク質に一般式
（Ｉ）、 〔式中、R1は炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖の、水
素原子がフッ素原子で置換されてもよいアルキル基もし
くはアルケニル基、または炭素数１〜15の直鎖もしくは
分岐鎖のアルキル基で置換されたフェニル基であり、R2
は炭素数２〜３のアルキレン基であり、ｍは０〜30の数
であり、Ｍは水素原子あるいはアルカリ金属、アルカリ
土類金属、アンモニウム、アルキルアミン、もしくはア
ルカノールアミンの塩であることを示す。〕 で表されるリン酸エステルを反応させることを特徴とす
るペプチドまたはタンパク質の改質方法を提供するもの
である。
（Ｉ）、 〔式中、R1は炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖の、水
素原子がフッ素原子で置換されてもよいアルキル基もし
くはアルケニル基、または炭素数１〜15の直鎖もしくは
分岐鎖のアルキル基で置換されたフェニル基であり、R2
は炭素数２〜３のアルキレン基であり、ｍは０〜30の数
であり、Ｍは水素原子あるいはアルカリ金属、アルカリ
土類金属、アンモニウム、アルキルアミン、もしくはア
ルカノールアミンの塩であることを示す。〕 で表されるリン酸エステルを反応させることを特徴とす
るペプチドまたはタンパク質の改質方法を提供するもの
である。
本発明において用いられる一般式（Ｉ）で表されるリン
酸エステル塩は、どのような方法で得られたものでも良
いが、例えば本発明者の一部により提案されている高純
度のリン酸エステルのモノアルカリ金属塩にエピハロヒ
ドリンを反応させ、さらにアルカリで閉環することによ
り工業的に容易に製造できる。
酸エステル塩は、どのような方法で得られたものでも良
いが、例えば本発明者の一部により提案されている高純
度のリン酸エステルのモノアルカリ金属塩にエピハロヒ
ドリンを反応させ、さらにアルカリで閉環することによ
り工業的に容易に製造できる。
すなわち、式（II）で表されるリン酸モノエステルのモ
ノアルカリ金属塩に式（III）で表されるエピハロヒド
リンを反応させ、さらにアルカリで閉環することにより
工業的に容易に製造できる。
ノアルカリ金属塩に式（III）で表されるエピハロヒド
リンを反応させ、さらにアルカリで閉環することにより
工業的に容易に製造できる。
（式中、Ｘはハロゲン原子を示し、R1，R2,Mおよびｍは
前記した意味を有する。） 本発明に係る式（Ｉ）で表されるリン酸エステルにおい
て、R1で表される炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖
の、水素原子がフッ素原子で置換されていてもよいアル
キル基またはアルケニル基としては、メチル、エチル、
ブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テト
ラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ドコシル、テ
トラコシル、トリアコンリル、２−エチルヘキシル、２
−オクチルドデシル、２−ドデシルヘキサデシル、２−
テトラデシルオクタデシル、モノメチル分岐−イソステ
アリル、トリデカフルオロオクチル、ヘプタデカフルオ
ロドデシル、ヘンエイコサフルオロドデシル、ペンタコ
サフルオロテトラデシル、ノナコサフルオロヘキサデシ
ル、トリトリアンコンタフルオロオクタデシル、２−ペ
ンタフルオロエチルペンタフルオロヘキシル、２−トリ
デカフルオロヘキシルトリデカフルオロデシル、２−ヘ
プタデカフルオロオクチルヘプタデカフルオロドデシ
ル、２−ヘンエイコサフルオロデシルヘンエイコサフル
オロテトラデシル、２−ペンタコサフルオロドデシルペ
ンタコサフルオロヘキサデシル、２−ノナコサフルオロ
テトラデシルノナコサフルオロオクタデシル、オクテニ
ル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデ
セニル、オクタデセニル、ドコセニル、テトラコセニ
ル、トリアコンテニル、エチルフェニル、ブチルフェニ
ル、ヘキシルフェニル、オクチルフェニル、ノニルフェ
ニル等が挙げられるが、就中、炭素数８〜36のものが好
ましく、特に炭素数８〜24のものが好ましい。またR2で
表される炭素数２〜３のアルキレン基としては、エチレ
ン、１−メチルエチレン、プロピレン基が挙げられる。
前記した意味を有する。） 本発明に係る式（Ｉ）で表されるリン酸エステルにおい
て、R1で表される炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖
の、水素原子がフッ素原子で置換されていてもよいアル
キル基またはアルケニル基としては、メチル、エチル、
ブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テト
ラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ドコシル、テ
トラコシル、トリアコンリル、２−エチルヘキシル、２
−オクチルドデシル、２−ドデシルヘキサデシル、２−
テトラデシルオクタデシル、モノメチル分岐−イソステ
アリル、トリデカフルオロオクチル、ヘプタデカフルオ
ロドデシル、ヘンエイコサフルオロドデシル、ペンタコ
サフルオロテトラデシル、ノナコサフルオロヘキサデシ
ル、トリトリアンコンタフルオロオクタデシル、２−ペ
ンタフルオロエチルペンタフルオロヘキシル、２−トリ
デカフルオロヘキシルトリデカフルオロデシル、２−ヘ
プタデカフルオロオクチルヘプタデカフルオロドデシ
ル、２−ヘンエイコサフルオロデシルヘンエイコサフル
オロテトラデシル、２−ペンタコサフルオロドデシルペ
ンタコサフルオロヘキサデシル、２−ノナコサフルオロ
テトラデシルノナコサフルオロオクタデシル、オクテニ
ル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデ
セニル、オクタデセニル、ドコセニル、テトラコセニ
ル、トリアコンテニル、エチルフェニル、ブチルフェニ
ル、ヘキシルフェニル、オクチルフェニル、ノニルフェ
ニル等が挙げられるが、就中、炭素数８〜36のものが好
ましく、特に炭素数８〜24のものが好ましい。またR2で
表される炭素数２〜３のアルキレン基としては、エチレ
ン、１−メチルエチレン、プロピレン基が挙げられる。
また、本発明に係る式（Ｉ）で表されるリン酸エステル
により改質され得るペプチドおよびタンパク質は天然お
よび人工的に合成して得られる２個以上のアミノ酸から
なるペプチド、タンパク質、それらの誘導体およびそれ
らの塩をその範囲に含み、特に範囲に制限はない。例え
ば、コラーゲン、ゼラチン、ケラチン、アルブミン、グ
ロブリン、フィブリノーゲン、アクチン、エラスチン、
ホスホリパーゼ、リパーゼ、ホスホリラーゼ、トリプシ
ン、大豆タンパク、小麦タンパク、魚肉タンパク、グル
カゴン、グリシルグリシン、グリシルアラニン、グリシ
ル、ロイシン、アラニルアラニン、グルタチオン、メチ
オニルロイシルフェニルアラニン、アラニルグリシルセ
リルグルタミン、ロイシルエンケファリンおよびそれら
の塩等が挙げられる。
により改質され得るペプチドおよびタンパク質は天然お
よび人工的に合成して得られる２個以上のアミノ酸から
なるペプチド、タンパク質、それらの誘導体およびそれ
らの塩をその範囲に含み、特に範囲に制限はない。例え
ば、コラーゲン、ゼラチン、ケラチン、アルブミン、グ
ロブリン、フィブリノーゲン、アクチン、エラスチン、
ホスホリパーゼ、リパーゼ、ホスホリラーゼ、トリプシ
ン、大豆タンパク、小麦タンパク、魚肉タンパク、グル
カゴン、グリシルグリシン、グリシルアラニン、グリシ
ル、ロイシン、アラニルアラニン、グルタチオン、メチ
オニルロイシルフェニルアラニン、アラニルグリシルセ
リルグルタミン、ロイシルエンケファリンおよびそれら
の塩等が挙げられる。
式（Ｉ）で表されるリン酸エステル中には塩が含有され
ているが、本発明の実施において、式（Ｉ）で表される
リン酸エステルを単離して用いても、あるいは式（IV）
で表されるリン酸エステルとアルカリを反応させて得ら
れる反応液をそのまま用いてもよい。また、ペプチドま
たはタンパク質に式（IV）で表されるリン酸エステルを
加えておいてこれにアルカリを作用させることによって
も本発明を実施できるものである。
ているが、本発明の実施において、式（Ｉ）で表される
リン酸エステルを単離して用いても、あるいは式（IV）
で表されるリン酸エステルとアルカリを反応させて得ら
れる反応液をそのまま用いてもよい。また、ペプチドま
たはタンパク質に式（IV）で表されるリン酸エステルを
加えておいてこれにアルカリを作用させることによって
も本発明を実施できるものである。
本発明において、式（Ｉ）で表されるリン酸エステルと
ペプチドまたはタンパク質との反応モル比は要求される
性能によって変化するものであり、特に限定されない
が、通常0.01:1〜100:1の範囲で使用される。反応に用
いる溶媒としては、不活性な極性溶媒が好ましく、例え
ば、水、メチルアルコール、エチルアルコール、２−プ
ロパノール等を挙げることがでい、これらを単独あるい
は混合して用いることができ、またペプチドおよびタン
パク質の変性を避けるために反応系に適量の塩を添加す
ることが好ましい。
ペプチドまたはタンパク質との反応モル比は要求される
性能によって変化するものであり、特に限定されない
が、通常0.01:1〜100:1の範囲で使用される。反応に用
いる溶媒としては、不活性な極性溶媒が好ましく、例え
ば、水、メチルアルコール、エチルアルコール、２−プ
ロパノール等を挙げることがでい、これらを単独あるい
は混合して用いることができ、またペプチドおよびタン
パク質の変性を避けるために反応系に適量の塩を添加す
ることが好ましい。
反応温度としては０〜100℃の範囲で行えばよいが、得
られた生成物の変性を避けるためには、特に30〜90℃で
行うのが好ましい。
られた生成物の変性を避けるためには、特に30〜90℃で
行うのが好ましい。
本発明において、式（Ｉ）で表されるリン酸エステルは
ペプチドまたはタンパク質を修飾する時反応する作用部
位は必ずしも明確ではないが、反応する部位としてはア
ミノ基、メルカプト基、ヒドロキシ基、およびカルボキ
シ基等が挙げられ、特に、アミノ基と反応するものと考
えられる。しかしながら、本発明において式（Ｉ）で表
されるリン酸エステルがペプチドまたはタンパク質を修
飾する時の反応する部位については特に限定するもので
はない。
ペプチドまたはタンパク質を修飾する時反応する作用部
位は必ずしも明確ではないが、反応する部位としてはア
ミノ基、メルカプト基、ヒドロキシ基、およびカルボキ
シ基等が挙げられ、特に、アミノ基と反応するものと考
えられる。しかしながら、本発明において式（Ｉ）で表
されるリン酸エステルがペプチドまたはタンパク質を修
飾する時の反応する部位については特に限定するもので
はない。
リン酸エステル（Ｉ）は、簡単は操作でペプチドおよび
タンパク質にリン酸エステル基が導入でき、しかも、リ
ン酸エステル基を導入することによりペプチド、タンパ
ク質等の溶解性、表面電荷等の物理化学的性質を変える
ことができる。また、本発明において使用するリン酸エ
ステル（Ｉ）は工業的に容易に製造し得るため、工業的
なペプチドおよびタンパク質の改質方法となるものであ
る。
タンパク質にリン酸エステル基が導入でき、しかも、リ
ン酸エステル基を導入することによりペプチド、タンパ
ク質等の溶解性、表面電荷等の物理化学的性質を変える
ことができる。また、本発明において使用するリン酸エ
ステル（Ｉ）は工業的に容易に製造し得るため、工業的
なペプチドおよびタンパク質の改質方法となるものであ
る。
以下、実施例を挙げて本発明を説明する。参考例１ドデ
シル、グリシジルリン酸ナトリウムの製造 反応器にドデシル２−ヒドロキシ−３−クロロプロピル
リン酸ナトリウム50.0g（0.131モル）を投入しエタノー
ル1000mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にした。
次に反応系を室温まで冷却した後に水酸化ナトリウム5.
25g（0.131モル）をエタノール100mlに溶解した溶液を
徐々に加え、この温度で３時間攪拌を続けた。HPLC（高
速液体クロマトグラフィー、以下も同じ）で分析した原
料のピークが消え生成物の新たなピークが現れているこ
とを確認し反応を終了した。ここで析出した塩化ナトリ
ウムを濾過して取り除いた後にエタノールを減圧留去す
るとドデシルグリシジルリン酸ナトリウム45.0g（収率9
9.5％）を得た。
シル、グリシジルリン酸ナトリウムの製造 反応器にドデシル２−ヒドロキシ−３−クロロプロピル
リン酸ナトリウム50.0g（0.131モル）を投入しエタノー
ル1000mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にした。
次に反応系を室温まで冷却した後に水酸化ナトリウム5.
25g（0.131モル）をエタノール100mlに溶解した溶液を
徐々に加え、この温度で３時間攪拌を続けた。HPLC（高
速液体クロマトグラフィー、以下も同じ）で分析した原
料のピークが消え生成物の新たなピークが現れているこ
とを確認し反応を終了した。ここで析出した塩化ナトリ
ウムを濾過して取り除いた後にエタノールを減圧留去す
るとドデシルグリシジルリン酸ナトリウム45.0g（収率9
9.5％）を得た。
実施例１ 反応器に、グリシルグリシン10g（0.0757モル）を投入
し、水100mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、参考例１で得られ
たドデシルグリシジルリン酸ナトリウム28.8g（0.0757
モルを1000mlのエタノールに溶かした溶液を滴下し、６
時間攪拌を続けた。HPLC（高速液体クロマトグラフィ
ー、以下も同じ）で分析し原料のピークが消え新たな生
成物のピークが現れていることを確認し反応を終了し
た。反応終了後溶媒を減圧留去することにより下記化合
物を38.5g（収率99.2％）得た。
し、水100mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、参考例１で得られ
たドデシルグリシジルリン酸ナトリウム28.8g（0.0757
モルを1000mlのエタノールに溶かした溶液を滴下し、６
時間攪拌を続けた。HPLC（高速液体クロマトグラフィ
ー、以下も同じ）で分析し原料のピークが消え新たな生
成物のピークが現れていることを確認し反応を終了し
た。反応終了後溶媒を減圧留去することにより下記化合
物を38.5g（収率99.2％）得た。
実施例２ 反応器にグリシルロイシン10g（0.0531モル）を投入
し、水100mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、参考例１と同様の
方法で得られたトリオキシエチレンドデシルエーテルグ
リシジルリン酸ナトリウム12.7g（0.0266モル）を1000m
lのエタノールに溶かした溶液を滴下し、６時間攪拌を
続けた。HPLC（高速液体クロマトグラフィー、以下も同
じ）で分析し原料のピークが消え新たな生成物のピーク
が現れていることを確認し反応を終了した。反応終了
後、これらから生成物をHPLCで分取し、溶媒を減圧留去
することにより下記化合物を17.5g（収率99.1％）得
た。
し、水100mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、参考例１と同様の
方法で得られたトリオキシエチレンドデシルエーテルグ
リシジルリン酸ナトリウム12.7g（0.0266モル）を1000m
lのエタノールに溶かした溶液を滴下し、６時間攪拌を
続けた。HPLC（高速液体クロマトグラフィー、以下も同
じ）で分析し原料のピークが消え新たな生成物のピーク
が現れていることを確認し反応を終了した。反応終了
後、これらから生成物をHPLCで分取し、溶媒を減圧留去
することにより下記化合物を17.5g（収率99.1％）得
た。
実施例３ 反応器にアラニルアラニン1.00g（0.00624モル）を投入
し、0.1N−水酸化ナトリウム水溶液62.4mlを加えて攪拌
し、70℃に昇温して均一にした。次に、この温度を維持
しながら、参考例１と同様の方法で得られたヘプタデカ
フルオロデシルグリシジルリン酸ナトリウム4.11g（0.0
0624モル）を100mlのエタノールに溶かした溶液を滴下
し、６時間攪拌を続けた。HPLC（高速液体クロマトグラ
フィー、以下も同じ）で分析し原料のピークが消え新た
な生成物のピークが現れていることを確認し反応を終了
した。反応終了後、0.1N−塩酸62.4mlを加えて中和し、
透析により脱塩を行った後に溶媒を減圧留去することに
より下記化合物を4.75g（収率97.3％）得た。
し、0.1N−水酸化ナトリウム水溶液62.4mlを加えて攪拌
し、70℃に昇温して均一にした。次に、この温度を維持
しながら、参考例１と同様の方法で得られたヘプタデカ
フルオロデシルグリシジルリン酸ナトリウム4.11g（0.0
0624モル）を100mlのエタノールに溶かした溶液を滴下
し、６時間攪拌を続けた。HPLC（高速液体クロマトグラ
フィー、以下も同じ）で分析し原料のピークが消え新た
な生成物のピークが現れていることを確認し反応を終了
した。反応終了後、0.1N−塩酸62.4mlを加えて中和し、
透析により脱塩を行った後に溶媒を減圧留去することに
より下記化合物を4.75g（収率97.3％）得た。
実施例４ 反応器にグリシルアラニン1g（0.00684モル）を投入
し、水10mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、エタノール溶媒中
でブチル２−ヒドロキシ−３−クロロプロピルリン酸ナ
トリウム1.84g（0.00684モル）と水酸化ナトリウムを反
応して得たブチルグリシジルリン酸ナトリウムエタノー
ル溶液2.0g（0.00684モル）を滴下し６時間攪拌を続け
た。HPLCで分析し、原料のピークが消え新たなピークが
現れていることを確認し反応を終了した。反応終了後透
析により脱塩を行った後に溶媒を減圧留去することによ
り下記化合物を2.52g（収率97.4％）得た。
し、水10mlを加えて攪拌し、70℃に昇温して均一にし
た。次に、この温度を維持しながら、エタノール溶媒中
でブチル２−ヒドロキシ−３−クロロプロピルリン酸ナ
トリウム1.84g（0.00684モル）と水酸化ナトリウムを反
応して得たブチルグリシジルリン酸ナトリウムエタノー
ル溶液2.0g（0.00684モル）を滴下し６時間攪拌を続け
た。HPLCで分析し、原料のピークが消え新たなピークが
現れていることを確認し反応を終了した。反応終了後透
析により脱塩を行った後に溶媒を減圧留去することによ
り下記化合物を2.52g（収率97.4％）得た。
実施例５ 反応器にBSA（牛血清アルブミン）0.1gを投入し、0.2M
ホウ酸緩衝液（pH9.5）5mlを加えて振盪し40℃に昇温し
て均一にした。次に、この温度を維持しながら参考例１
と同様の方法で得られた２−ヘキシルデシルグリシジル
リン酸ナトリウム0.400g（0.00100モル）を4mlのエタノ
ールに溶かした溶液を滴下し12時間振盪を続けた。ここ
で得られた反応混合物をSDS−ポリアクリルアミド電気
泳動により分析したところ、分子量の増加が認められ
た。このことより、本リン酸エステルがBSAを修飾した
ことが認められた。
ホウ酸緩衝液（pH9.5）5mlを加えて振盪し40℃に昇温し
て均一にした。次に、この温度を維持しながら参考例１
と同様の方法で得られた２−ヘキシルデシルグリシジル
リン酸ナトリウム0.400g（0.00100モル）を4mlのエタノ
ールに溶かした溶液を滴下し12時間振盪を続けた。ここ
で得られた反応混合物をSDS−ポリアクリルアミド電気
泳動により分析したところ、分子量の増加が認められ
た。このことより、本リン酸エステルがBSAを修飾した
ことが認められた。
実施例６ 豚すい臓由来ホスホリパーゼA2を0.2Mのホウ酸緩衝液
（pH9.5）に10mg/mlになるよう溶解した。この酵素液10
0μｌに参考例１と同様の方法で得られたノニルフェニ
ルグリシジルリン酸ナトリウム0.946g（0.00250モル）
をエタノール10mlに溶解した溶液25μｌを加え、50℃に
昇温した。この温度を維持しながら12時間振盪を続け
た。反応終了後、ゲル濾過にて精製した目的生成物を31
P−NMRにて分析したところ、含リン化合物由来のスペク
トルを検出しホスホリパーゼA2が本リン酸エステルで修
飾されていることを確認した。
（pH9.5）に10mg/mlになるよう溶解した。この酵素液10
0μｌに参考例１と同様の方法で得られたノニルフェニ
ルグリシジルリン酸ナトリウム0.946g（0.00250モル）
をエタノール10mlに溶解した溶液25μｌを加え、50℃に
昇温した。この温度を維持しながら12時間振盪を続け
た。反応終了後、ゲル濾過にて精製した目的生成物を31
P−NMRにて分析したところ、含リン化合物由来のスペク
トルを検出しホスホリパーゼA2が本リン酸エステルで修
飾されていることを確認した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 9/96 9152−4Ｂ
Claims (1)
- 【請求項１】ペプチドまたはタンパク質に一般式
（Ｉ）、 〔式中、R1は炭素数１〜36の直鎖もしくは分岐鎖の、水
素原子がフッ素原子で置換されてもよいアルキル基もし
くはアルケニル基、または炭素数１〜15の直鎖もしくは
分岐鎖のアルキルで置換されたフェニル基であり、R2は
炭素数２〜３のアルキレン基であり、ｍは０〜30の数で
あり、Ｍは水素原子あるいはアルカリ金属、アルカリ土
類金属、アンモニウム、アルキルアミン、もしくはアル
カノールアミンの塩であることを示す。〕 で表されるリン酸エルテルを反応させることを特徴とす
るペプチドまたはタンパク質の改質方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62265990A JPH0720987B2 (ja) | 1987-10-21 | 1987-10-21 | ペプチドおよびタンパク質の改質方法 |
| EP88117254A EP0312963B1 (en) | 1987-10-21 | 1988-10-17 | Modification method for peptides and proteins |
| DE3888078T DE3888078T2 (de) | 1987-10-21 | 1988-10-17 | Veränderungsverfahren für Peptide und Proteine. |
| US07/260,709 US5043424A (en) | 1987-10-21 | 1988-10-21 | Modification method for peptides and proteins by reacting with a phosphoric acid ester |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62265990A JPH0720987B2 (ja) | 1987-10-21 | 1987-10-21 | ペプチドおよびタンパク質の改質方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01106900A JPH01106900A (ja) | 1989-04-24 |
| JPH0720987B2 true JPH0720987B2 (ja) | 1995-03-08 |
Family
ID=17424832
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62265990A Expired - Fee Related JPH0720987B2 (ja) | 1987-10-21 | 1987-10-21 | ペプチドおよびタンパク質の改質方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5043424A (ja) |
| EP (1) | EP0312963B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0720987B2 (ja) |
| DE (1) | DE3888078T2 (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2768997A (en) * | 1956-10-30 | Phosphorus-containing polypeptides | ||
| JPS62249995A (ja) * | 1986-04-21 | 1987-10-30 | Kao Corp | リン酸エステルおよびその製造法 |
-
1987
- 1987-10-21 JP JP62265990A patent/JPH0720987B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-10-17 EP EP88117254A patent/EP0312963B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-17 DE DE3888078T patent/DE3888078T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-21 US US07/260,709 patent/US5043424A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5043424A (en) | 1991-08-27 |
| DE3888078T2 (de) | 1994-10-13 |
| DE3888078D1 (de) | 1994-04-07 |
| EP0312963A2 (en) | 1989-04-26 |
| JPH01106900A (ja) | 1989-04-24 |
| EP0312963A3 (en) | 1990-12-19 |
| EP0312963B1 (en) | 1994-03-02 |
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