JPH07227287A - Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼをコードする遺伝子ｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼをコ
ードするコリネ型細菌由来の遺伝子を含むＤＮＡ断片。 【効果】 本発明のＤＮＡ断片を組み込んだ形質転換株
を用いて、新たな観点から効率的にＳ−アデノシルメチ
オニンを製造することが可能であると期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コリネ型細菌由来のＳ
−アデノシルメチオニンシンセターゼ（Ｅ．Ｃ．２．
５．１．６）をコードする遺伝子ＤＮＡに関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ
（Ｅ．Ｃ．２．５．１．６）は、アデノシル三リン酸と
Ｌ−メチオニンからＳ−アデノシルメチオニンを合成す
る酵素として、エシェリヒア・コリ (Escherichia col
i) においてよく研究されており〔ジャーナル・オブ・
バイオロジカル・ケミストリー(J. Biol. Chem.), 255,
9082-9092, 1980〕、Ｓ−アデノシルメチオニンシンセ
ターゼをコードする遺伝子としては、エシェリヒア・コ
リ由来遺伝子〔J. Biol. Chem., 259, 14505-14507, 19
84〕の他に、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyc
es cerevisiae)由来遺伝子〔J. Biol. Chem., 262, 167
04-16709, 1987〕、ラット腎臓由来遺伝子〔J. Biol. C
hem., 265, 13683-13686, 1990〕、ラット肝臓由来遺伝
子〔ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミスト
リー(Eur. J. Biochem.), 184, 497-501, 1989〕、ヒト
肝臓由来遺伝子〔バイオケミストリー・インターナショ
ナル(Biochem. Int.), 25, 81-90, 1991〕等の一次構造
が決定されている。しかしながら、産業上重要な細菌で
あるコリネ型細菌由来のＳ−アデノシルメチオニンシン
セターゼ（Ｅ．Ｃ．２．５．１．６）遺伝子について
は、従来の報告例はない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、コリ
ネ型細菌由来のＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼ
（Ｅ．Ｃ．２．５．１．６）をコードする遺伝子を単離
し、該遺伝子を同種であるコリネ型細菌に導入し、該コ
リネ型細菌を用いて、新たな観点から効率的にＳ−アデ
ノシルメチオニンを製造することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、コリネ型細菌染
色体よりＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子
を単離することに成功し、本発明を完成するに至った。

【０００５】かくして本発明によれば、コリネ型細菌由
来のＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼをコードす
る遺伝子を含むＤＮＡ断片が提供される。

【０００６】以下、本発明についてさらに詳細に説明す
る。本発明の「Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ
をコードする遺伝子」とは、アデノシル三リン酸とＬ−
メチオニンからＳ−アデノシルメチオニンを合成する酵
素、すなわちＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼ
（Ｅ．Ｃ．２．５．１．６）をコードする遺伝子ＤＮＡ
を意味する。

【０００７】本発明のＳ−アデノシルメチオニンシンセ
ターゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（以下、こ
れを「Ａ断片」と略称することがある）は、その塩基配
列が決定された後においては合成することも可能である
が、通常は微生物からクローニングされ、その供給源と
なる微生物として、コリネ型細菌が使用される。

【０００８】これらの供給微生物からＡ断片を調製する
ための基本操作の一例を述べれば次のとおりである：Ａ
断片は、コリネ型細菌、例えばブレビバクテリウム・フ
ラバム(Brevibacterium flavum) ＭＪ−２３３株（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−１４９７）の染色体上に存在し、この染色
体の中から、以下に述べる方法で分離・取得することが
できる。

【０００９】先ず、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ
−２３３株の培養物から染色体ＤＮＡを抽出する。この
染色体ＤＮＡを、適当な制限酵素、例えばＳａｌＩを用
いて完全に消化する。

【００１０】得られるＤＮＡ断片を、クローニングベク
ター、例えばｐＵＣ１１８（宝酒造製）に挿入し、この
ベクターを用いてエシェリヒア・コリＪＭ１０９（宝酒
造製）を形質転換し、形質転換体を取得する。

【００１１】得られる形質転換体よりプラスミドＤＮＡ
を抽出し、エシェリヒア・コリ、サッカロミセス・セレ
ビシエ、ラット腎臓およびラット肝臓由来の各Ｓ−アデ
ノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子の共通領域配列を
プローブとして用いるサザンハイブリダイゼーションに
より、挿入されたブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−
２３３株染色体由来のＡ断片を確認・取得することがで
きる。

【００１２】このようにして得られるＡ断片の一つとし
ては、上記ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３
株の染色体ＤＮＡを制限酵素ＳａｌＩでの完全消化によ
り切断することによって得られる、大きさが約５．５kb
のＤＮＡ断片を挙げることができる。この約５．５kbの
Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子ＤＮＡを
含むＤＮＡ断片を、各種の制限酵素で切断したときの認
識部位数および切断断片の大きさを下記第１表に示す。

【００１３】

【表１】

【００１４】なお、本明細書において、制限酵素による
「認識部位数」は、ＤＮＡ断片またはプラスミドを制限
酵素の存在下で完全消化し、それらの分解物をそれ自体
既知の方法に従い１％アガロースゲル電気泳動および５
％ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、分離可能な
断片の数から決定した値を採用した。

【００１５】また、「切断断片の大きさ」およびプラス
ミドの大きさは、アガロースゲル電気泳動を用いる場合
には、エシェリヒア・コリのラムダファージ（λphage)
のＤＮＡを制限酵素ＨｉｎｄIII で切断して得られる分
子量既知のＤＮＡ断片の同一アガロースゲル上での泳動
距離で描かれる標準線に基づき、また、ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動を用いる場合には、エシェリヒア・コ
リのファイ・エックス１７４ファージ（φｘ１７４Phag
e)のＤＮＡを制限酵素ＨａｅIII で切断して得られる分
子量既知のＤＮＡ断片の同一ポリアクリルアミドゲル上
での泳動距離で描かれる標準線に基づき、切断ＤＮＡ断
片またはプラスミドの各ＤＮＡ断片の大きさを算出す
る。プラスミドの大きさは、切断断片のそれぞれの大き
さを加算して求める。なお、各ＤＮＡ断片の大きさの決
定において、１kb以上の断片の大きさについては、１％
アガロースゲル電気泳動によって得られる結果を採用
し、約０．１kbから１kbの断片の大きさについては５％
ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって得られる結果
を採用した。

【００１６】一方、上記のブレビバクテリウム・フラバ
ムＭＪ−２３３株の染色体ＤＮＡを制限酵素ＳａｌＩに
よって切断することにより得られる大きさが約５．５kb
のＤＮＡ断片については、その塩基配列をプラスミドｐ
ＵＣ１１８またはｐＵＣ１１９（宝酒造製）を用いるジ
デオキシヌクレオチド酵素法〔dideoxy chain terminat
ion 法、Sanger, F. et al.,プロシーディングス・オブ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・
ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ(Proc. Natl.
Acad. Sci. USA), 74, 5463, 1977）〕により決定する
ことができる。このようにして決定した上記約５．５kb
のＤＮＡ断片の塩基配列のオープンリーディングフレー
ムの存在から決定したＳ−アデノシルメチオニンシンセ
ターゼ遺伝子ＤＮＡは、後期配列表の配列番号１に示す
配列を有するものであり、４１２個のアミノ酸（および
ストップコドン）をコードする１２３９塩基対のＤＮＡ
から構成される。

【００１７】上記の塩基配列を包含するＡ断片は、天然
のコリネ型細菌染色体ＤＮＡから分離されたもののみな
らず、通常用いられるＤＮＡ合成装置、例えばアプライ
ド・バイオシステムズ(Applied Biosystems)社製３９４
ＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザーを用いて合成されたも
のであってもよい。

【００１８】また、前記の如くブレビバクテリウム・フ
ラバムＭＪ−２３３株の染色体ＤＮＡから取得されるＳ
−アデノシルメチオニンシンセターゼをコードする本発
明の遺伝子ＤＮＡは、Ｓ−アデノシルメチオニンシンセ
ターゼ遺伝子産物の機能を実質的に損なうことがない限
り、塩基配列の一部の塩基が他の塩基と置換されていて
もよくまたは削除されていてもよく、或いは新たに塩基
が挿入されていてもよく、さらに塩基配列の一部が転位
されているものであってもよく、これらの誘導体のいず
れもが、本発明の遺伝子ＤＮＡに包含されるものであ
る。

【００１９】

【実施例】以上に本発明を説明してきたが、下記の実施
例によりさらに具体的に説明する。 実施例１ ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３株由来のＳ
−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子ＤＮＡを含
むＤＮＡ断片（Ａ断片）のクローン化 （Ａ）ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３株の
全ＤＮＡの抽出 半合成培地Ａ培地〔組成：尿素２ｇ、（ＮＨ₄)₂ ＳＯ₄
７ｇ、Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ０．５ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．５ｇ、
ＭｇＳＯ₄ ０．５ｇ、ＦｅＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ６mg、Ｍｎ
ＳＯ₄ ・４〜６Ｈ₂ Ｏ ６mg、酵母エキス２．５ｇ、カ
ザミノ酸５ｇ、ビオチン２００μg 、塩酸チアミン２０
０μg 、グルコース２０ｇ、蒸留水１L 〕１L に、ブレ
ビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１４９７）を対数増殖期後期まで培養し、菌体を
集めた。得られた菌体を、１０mg/ml の濃度にリゾチー
ムを含む１０mMＮａＣｌ−２０mMトリス緩衝液（pH８．
０）−１mMＥＤＴＡ・２Ｎａ溶液１５mlに懸濁した。次
にプロテナーゼＫを、最終濃度が１００μg/mlになるよ
うに添加し、３７℃で１時間保温した。さらに、ドデシ
ル硫酸ナトリウムを最終濃度が０．５％になるように添
加し、５０℃で６時間保温して溶菌した。この溶菌液
に、等量のフェノール／クロロホルム溶液を添加し、室
温で１０分間ゆるやかに振盪した後、全量を遠心分離
（５，０００×ｇ、２０分間、１０〜１２℃）し、上清
画分を分取し、酢酸ナトリウムを０．３M となるように
添加した後、２倍量のエタノールをゆっくりと加えた。
水層とエタノール層の間に存在するＤＮＡをガラス棒で
まきとり、７０％エタノールで洗浄した後、風乾した。
得られたＤＮＡに１０mMトリス緩衝液（pH７．５）−１
mMＥＤＴＡ・２Ｎａ溶液５mlを加え、４℃で一晩静置
し、以後の実験に用いた。

【００２０】（Ｂ）組換え体の創製 上記（Ａ）項で得たブレビバクテリウム・フラバムＭＪ
−２３３株の全ＤＮＡ溶液９０μl を、制限酵素Ｓａｌ
Ｉ ５０units を用い、３７℃で１時間反応させて完全
消化した。このＳａｌＩ消化ＤＮＡを、クローニングベ
クターｐＵＣ１１８（宝酒造より市販）を制限酵素Ｓａ
ｌＩで切断した後、脱リン酸化処理したものと混合し、
５０mMトリス緩衝液（pH７．６）、１０mMジチオスレイ
トール、１mMＡＴＰ、１０mMＭｇＣｌ₂ およびＴ₄ ＤＮ
Ａリガーゼ１unitの各成分を添加し（各成分の濃度は最
終濃度である）、４℃で１５時間反応させ、結合させ
た。

【００２１】上記で得られたプラスミド混液を用い、塩
化カルシウム法 (J. Mol. Biol., 53, 159, 1970) によ
りエシェリヒア・コリＪＭ１０９（宝酒造製）を形質転
換し、アンピシリン５０mgを含む培地〔トリプトン１０
ｇ、イーストエキストラクト５ｇ、ＮａＣｌ ５ｇおよ
び寒天１６ｇを蒸留水１L に溶解〕に塗抹した。

【００２２】この培地上の生育株を常法により液体培養
し、培養液よりプラスミドＤＮＡを抽出し、該プラスミ
ドを制限酵素により切断し、アガロースゲルを用いて泳
動した。このアガロースゲルよりＤＮＡをナイロンメン
ブレン上に移しとり、エシェリア・コリ、サッカロミセ
ス・セレビシエ、ラット腎臓およびラット肝臓由来の各
Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子の共通領
域をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行
なった。用いたプローブとしては、エシェリヒア・コ
リ、サッカロミセス・セレビシエ、ラット腎臓およびラ
ット肝臓由来の各Ｓ−アデノシルメチオニンシンセター
ゼ遺伝子から推定されるアミノ酸配列で特に相同性の高
い領域に注目し、そのアミノ酸配列より想定される混合
オリゴヌクレオチドプローブをApplied Biosystems社製
３９４ ＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザーを用いて合成し
た。

【００２３】実際に用いたプローブの塩基配列は、次の
アミノ酸配列： Gly Ala Gly Asp Gln Gly および Gly Leu Thr Gly Arg Lys Ile Ile Val Asp Thr より想定される下記の塩基配列： GGY GCI GGY GAY CAG GG および GGY TTI ACY GGY CGY AAG ATY ATY GTI GAY AC （配列中、Ａはアデニン、Ｇはグアニン、Ｃはシトシ
ン、Ｔはチミン、Ｉはデオキシイノシンを示し、ＹはＣ
またはＴを示す。）の１７mer および３２mer である。
なお、プローブの合成にあたっては、塩基配列の混合の
度合が著しくなりすぎぬようにデオキシイノシンを用い
た。

【００２４】合成した上記オリゴヌクレオチドプローブ
を、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（宝酒造製）を用い
る手法で、５´末端リン酸基を〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰでラ
ジオアイソトープラベルした〔アナリティカル・バイオ
ケミストリー(Anal. Biochem., 158, 307-315, 1986
〕。サザンハイブリダーゼーションは、常法〔「モレ
キュラー・クローニング」(Molecular Cloning), Cold
Spring Harbor LaboratoryPress(1989) 〕のとおり行な
った。この結果、ポジティブなバンドを生ずるクローン
を選定することができ、プラスミドｐＵＣ１１８の長さ
３．２kbのＤＮＡ断片に加え、長さ約５．５kbの挿入断
片が認められた。各種の制限酵素で切断したときの、長
さ約５．５kbのＤＮＡ断片の制限酵素認識部位数および
切断断片の大きさは、前記表１に示したとおりであっ
た。このＤＮＡ断片の制限酵素切断点地図を図１に示
す。また、上記で得たプラスミドを各種制限酵素で切断
して、切断断片の大きさを測定した。その結果を第２表
に示す。

【００２５】

【表２】

【００２６】上記の制限酵素により特徴づけられるプラ
スミドを、ｐＵＣ１１８−ＳＡＬ２１と命名した。

【００２７】実施例２ Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子を含むＤ
ＮＡ断片（Ａ断片）の塩基配列の決定 実施例１の（Ｂ）項で得られた長さが約５．５kbのＤＮ
Ａ断片上に存在するＳ−アデノシルメチオニンシンセタ
ーゼ遺伝子の存在部位を特定するために、その塩基配列
を、プラスミドｐＵＣ１１８またはｐＵＣ１１９（宝酒
造製）を用いるジデオキシヌクレオチド酵素法（Sange
r, F. et al, 前出）により決定した。決定された５．
５kbのＤＮＡ断片の塩基配列中には後記配列表の配列番
号１に示す塩基配列を有する４１２アミノ酸残基のタン
パク質をコードする１２３９塩基対のＤＮＡより構成さ
れるオープンリーディングフレームが存在し、さらに、
該オープンリーディングフレームにコードされるタンパ
ク質のアミノ酸配列中に、エシェリヒア・コリ、サッカ
ロミセス・セレビシエ、ラット腎臓およびラット肝臓由
来の各Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子か
ら推定されるアミノ酸配列と高い相同性を有する配列が
確認された。

【００２８】この結果、コリネ型細菌由来のアデノシル
メチオニンシンセターゼ遺伝子は後記配列表の配列番号
１に示す塩基配列を有する４１２アミノ酸残基のタンパ
ク質をコードする１２３９塩基対のＤＮＡより構成され
ることが明らかとなり、長さが約５．５kbの前記のＤＮ
Ａ上にＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼ酵素をコ
ードする遺伝子の全長が存在していることが判明した。

【００２９】

【発明の効果】本発明により、コリネ型細菌由来のＳ−
アデノシルメチオニンシンセターゼ（Ｅ．Ｃ．２．５．
１．６）をコードする新規な遺伝子が提供される。この
Ｓ−アデノシルメチオニンシンセターゼ遺伝子を組み込
んだ形質転換株を用いて、新たな観点から効率的にＳ−
アデノシルメチオニンシンセターゼを製造することが可
能であると期待される。

【００３０】

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：1239 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：ブレビバクテリウム フラバム 株名：MJ-233 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：1-1239 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 GTG GCT CAG CCA ACC GCC GTC CGT TTG TTC ACC AGT GAA TCT GTA ACT 48 Val Ala Gln Pro Thr Ala Val Arg Leu Phe Thr Ser Glu Ser Val Thr 1 5 10 15 GAG GGA CAT CCA GAC AAA ATA TGT GAT GCT ATT TCC GAT ACC ATT TTG 96 Glu Gly His Pro Asp Lys Ile Cys Asp Ala Ile Ser Asp Thr Ile Leu 20 25 30 GAC GCG CTG CTC GAA AAA GAT CCG CAG TCG CGC GTC GCA GTG GAA ACT 144 Asp Ala Leu Leu Glu Lys Asp Pro Gln Ser Arg Val Ala Val Glu Thr 35 40 45 GTG GTC ACC ACC GGA ATC GTC CAT GTT GTT GGC GAG GTC CGT ACC AGC 192 Val Val Thr Thr Gly Ile Val His Val Val Gly Glu Val Arg Thr Ser 50 55 60 GCT TAC GTA GAG ATC CCT CAA TTA GTC CGC AAC AAG CTC ATC GAA ATC 240 Ala Tyr Val Glu Ile Pro Gln Leu Val Arg Asn Lys Leu Ile Glu Ile 65 70 75 80 GGA TTC AAC TCC TCT GAG GTT GGA TTC GAC GGA CGC ACC TGT GGC GTC 288 Gly Phe Asn Ser Ser Glu Val Gly Phe Asp Gly Arg Thr Cys Gly Val 85 90 95 TCA GTA TCT ATC GGT GAG CAG TCC CAG GAA ATC GCT GAC GGC GTG GAT 336 Ser Val Ser Ile Gly Glu Gln Ser Gln Glu Ile Ala Asp Gly Val Asp 100 105 110 AAC TCC GAC GAA GCC CGC ACC AAC GGC GAC GTT GAA GAA GAC GAC CGC 384 Asn Ser Asp Glu Ala Arg Thr Asn Gly Asp Val Glu Glu Asp Asp Arg 115 120 125 GCA GGT GCT GGC GAC CAG GGC CTG ATT GTT TCG GCT ACG CCA CCA ACG 432 Ala Gly Ala Gly Asp Gln Gly Leu Ile Val Ser Ala Thr Pro Pro Thr 130 135 140 AAA CCG AAG AGT ACA TGC CTC TTC CTA TCG CGT TTG GCG CAC CGA CTG 480 Lys Pro Lys Ser Thr Cys Leu Phe Leu Ser Arg Leu Ala His Arg Leu 145 150 155 160 TCA CGT CGT CTG ACC CAG GTT CGT AAA GAG GGT ATC GTT CCT CAC CTG 528 Ser Arg Arg Leu Thr Gln Val Arg Lys Glu Gly Ile Val Pro His Leu 165 170 175 CGT CCA GAC GGA AAA ACC CAG GTC ACC TTC GCA TAC GAT GCG CAA GAC 576 Arg Pro Asp Gly Lys Thr Gln Val Thr Phe Ala Tyr Asp Ala Gln Asp 180 185 190 CGC CCT AGT CAC CTA GAT ACC GTT GTC ATC TCC ACC CAG CAC GAC CCA 624 Arg Pro Ser His Leu Asp Thr Val Val Ile Ser Thr Gln His Asp Pro 195 200 205 GAA GTT GAC CGT GCA TGG TTG GAA ACC CAG CTG CGC GAA CAC GTC ATT 672 Glu Val Asp Arg Ala Trp Leu Glu Thr Gln Leu Arg Glu His Val Ile 210 215 220 GAT TGG GTA ATC AAA GAC GCA GGC ATT GAG GAT CTG GCA ACC GGT GAG 720 Asp Trp Val Ile Lys Asp Ala Gly Ile Glu Asp Leu Ala Thr Gly Glu 225 230 235 240 ATC ACC GTG TTG ATC AAC CCT TCA GGT TCC TTC ATT CTG GGT GGC CCC 768 Ile Thr Val Leu Ile Asn Pro Ser Gly Ser Phe Ile Leu Gly Gly Pro 245 250 255 ATG GGT GAT GCG GGT CTG ACC GGC CGC AAG ATC ATC GTG GAT ACC TAC 816 Met Gly Asp Ala Gly Leu Thr Gly Arg Lys Ile Ile Val Asp Thr Tyr 260 265 270 GGT GGC ATG GCT CGC CAT GGT GGT GGA GCA TTC TCC GGT AAG GAT CCA 864 Gly Gly Met Ala Arg His Gly Gly Gly Ala Phe Ser Gly Lys Asp Pro 275 280 285 AGC AAG GTG GAC CGC TCT GCT GCA TAC GCC ATG CGT TGG GTA GCA AAG 912 Ser Lys Val Asp Arg Ser Ala Ala Tyr Ala Met Arg Trp Val Ala Lys 290 295 300 AAC ATC GTG GCA GCA GGC CTT GCT GAT CGC GCT GAA GTT CAG GTT GCA 960 Asn Ile Val Ala Ala Gly Leu Ala Asp Arg Ala Glu Val Gln Val Ala 305 310 315 320 TAC GCC ATT GGA CGC GCA AAG CCA GTC GGA CTT TAC GTT GAA ACC TTT 1008 Tyr Ala Ile Gly Arg Ala Lys Pro Val Gly Leu Tyr Val Glu Thr Phe 325 330 335 GAC ACC AAC AAG GAA GGC CTG AGC GAC GAG CAG ATT CAG GCT GCC GTG 1056 Asp Thr Asn Lys Glu Gly Leu Ser Asp Glu Gln Ile Gln Ala Ala Val 340 345 350 TTG GAG GTC TTT GAC CTG CGT CCA GCA GCA ATT ATC CGT GAG CTT GAT 1104 Leu Glu Val Phe Asp Leu Arg Pro Ala Ala Ile Ile Arg Glu Leu Asp 355 360 365 CTG CTT CGT CCG ATC TAC GCT GAC ACT GCT GCC TAC GGC CAC TTT GGT 1152 Leu Leu Arg Pro Ile Tyr Ala Asp Thr Ala Ala Tyr Gly His Phe Gly 370 375 380 CGC ACT GAT TTG GAC CTT CCT TGG GAG GCT ATC GAC CGC GTT GAT GAA 1200 Arg Thr Asp Leu Asp Leu Pro Trp Glu Ala Ile Asp Arg Val Asp Glu 385 390 395 400 CTT CGC GCA GCC TCA AGT TGG CCT AAA AAT CTG ATG TAG 1239 Leu Arg Ala Ala Ser Ser Trp Pro Lys Asn Leu Met Stop 405 410 412

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のＳ−アデノシルシンセターゼをコード
する遺伝子ＤＮＡ（ｓａｍＡ）を含む大きさが約５．５
ｋｂのＤＮＡ断片の制限酵素による切断地図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:13）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コリネ型細菌由来のＳ−アデノシルメチ
   オニンシンセターゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断
   片。
2. 【請求項２】 前記コリネ型細菌が、ブレビバクテリウ
   ム・フラバム(Brevibacterium flavum) ＭＪ−２３３株
   である、請求項１記載のＤＮＡ断片。
3. 【請求項３】 制限酵素ＳａｌＩ認識部位を両端に有
   し、下記制限酵素により下記制限酵素認識部位数で下記
   の大きさの切断断片に切断される、請求項１または２記
   載のＤＮＡ断片。 制限酵素 認識部位数 切断断片の大きさ（kb） ＢａｍＨＩ ２ ２．４，１．７，１．４ ＰｓｔＩ ３ ３．３，１．０，０．７，０．５ ＳａｌＩ ０ ５．５
4. 【請求項４】 配列表の配列番号１のアミノ酸配列で示
   されるＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼをコード
   する遺伝子ＤＮＡ。
5. 【請求項５】 配列表の配列番号１の塩基配列で示され
   るＳ−アデノシルメチオニンシンセターゼをコードする
   遺伝子ＤＮＡ。