JPH07228565A - スパガリン類縁体及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 新規な免疫抑制剤を提供する。 【構成】 一般式〔Ｉ〕 【化１】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
の薬理学的に許容される塩が免疫抑制作用を有すること
を特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はスパガリン類縁体及びそ
の用途に関する。本発明のスパガリン類縁体は低毒性で
免疫抑制などの作用を有し、医薬として期待されるもの
である。

【０００２】

【従来の技術】スパガリンはバチラス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属の微生物の産生する抗生物質（特開昭５７−４８
９５７号参照）であり、その後、関連化合物の合成が数
多く行われてきた（特開昭５９−４２３５６号；同６０
−１８５７５８号；ペプチドケミストリー（Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）１９８７年、６７１〜６７
４ページ、蛋白質研究奨励会刊；特開昭６３−４５２４
７号参照）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来、公知のスパガリ
ン及びその類縁体においては、活性の強い化合物は化学
的な安定性に欠け、一方化学的に安定な化合物は活性が
さほど強くないという欠点を有する。そのため、化学的
に安定でかつ活性も強く、毒性の弱いスパガリン類縁体
の開発が求められている。従って本発明の目的は、低毒
性で化学的に安定で、優れた免疫抑制作用を有するスパ
ガリン類縁体を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明を概説する
と、第１の発明は、一般式〔Ｉ〕

【化５】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
の薬理学的に許容される塩に関するものである。

【０００５】第２の発明は、一般式〔ＩＩ〕

【化６】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＲ₁ −（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｒ₂ 〔ＩＩ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｒ₁ はアミノ基の保護
基、Ｒ₂ はアミノ基の保護基又は保護されたアミノ基を
有するアミノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より
水酸基を除いた残基（これらの残基は側鎖が保護されて
いてもよい。）を示す。〕で表される保護基を有する化
合物から保護基を除去することを特徴とする

【０００６】一般式〔Ｉ〕

【化７】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
の薬理学的に許容される塩の製造法に関するものであ
る。

【０００７】第３の発明は、一般式〔Ｉ〕

【化８】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
の薬理学的に許容される塩を有効成分とする免疫抑制剤
に関するものである。

【０００８】本発明を更に詳しく説明する。一般式
〔１〕のＸがフェニレン基を表わす場合には、そのフェ
ニレン基は置換基を有していてもよく、置換基として
は、塩素、フッ素、臭素などのハロゲン原子；メチル、
エチル、プロピル、ｔ−ブチル、ペンチルなどの低級ア
ルキル基；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔ−ブト
キシ、ペントキシなどの低級アルコキシ基等が挙げられ
る。

【０００９】Ｙとしては例えば水素原子又は下記アミノ
酸もしくは下記ペプチドのカルボキシル基より水酸基を
除いた残基があげられる。なおアミノ酸残基の立体配置
はグリシン、β−アラニンおよびγ−アミノ酪酸を除
き、Ｓ，ＲあるいはＲＳ型を示す。

【００１０】（１） アミノ酸 アラニン、アルギニン、オルニチン、アスパラギン酸、
アスパラギン、システイン、シスチン、グルタミン酸、
グルタミン、ピログルタミン酸、グリシン、ヒスチジ
ン、リジン、プロリン、ヒドロキシプロリン、イソロイ
シン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、フェ
ニル置換フェニルアラニン、セリン、スレオニン、トリ
プトファン、ホモセリン、チロシン、バリン、フェニル
グリシン、パラヒドロキシフェニルグリシン、４−ヒド
ロキシメチル−３−ヒドロキシフェニルグリシン、β−
アラニン、γ−アミノ酪酸、３−アミノ−２−ヒドロキ
シ−４−フェニル酪酸等。

【００１１】（２） ペプチド 上記（１）のアミノ酸が単独あるいは組みあわさって２
〜３個のアミノ酸が縮合したジあるいはトリペプチドな
どが好ましい。例えばアラニルアラニン、ロイシルロイ
シン、バリルバリン、フェニルアラニルフェニルアラニ
ン、チロシルチロシン、フェニルグリシルフェニルグリ
シン、グリシルグリシン、イソロイシルイソロイシン、
ロイシルフェニルアラニン、フェニルアラニルロイシ
ン、ロイシルフェニルグリシン、フェニルグリシルロイ
シン、グリシルグリシルグリシン、フェニルグリシルフ
ェニルグリシルフェニルグリシン、フェニルアラニルフ
ェニルアラニルフェニルアラニンおよびロイシルロイシ
ルロイシン等があげられる。

【００１２】好ましいアミノ酸もしくはペプチドとして
は、フェニルグリシン、フェニルアラニン、ロイシン、
アスパラギン酸、トリプトファン、アラニン及びこれら
のアミノ酸が２〜３個縮合したペプチド等である。Ｙと
して好ましいものとしては水素原子及びフェニルグリシ
ン等のアミノ酸、ロイシルロイシン等のジペプチドであ
る。

【００１３】一般式〔Ｉ〕で表わされるスパガリン類縁
体は酸と塩を形成していてもよい。塩を形成するための
酸としては、非毒性のものであれば無機酸、有機酸のい
ずれでもよい。無機酸としては特に制限はないが、塩
酸、硫酸、硝酸、リン酸などが好ましく、有機酸も特に
制限はないが、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、フマル
酸、マレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、グルタル酸、クエ
ン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタ
ンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロパンスルホン
酸、アスパラギン酸、グルタミン酸などが好ましい。

【００１４】本発明の一般式〔Ｉ〕においてＲ₀₀が結合
する炭素原子の立体配置はＳ，ＲあるいはＲＳ型を示
す。本発明化合物の主なものを以下の表１〜表６に示
す。尚、表中Ｘ₂ で＊印を付した炭素原子の立体配置は
上記のとおりＳ，ＲあるいはＲＳ型を示す。

【００１５】

【表１】

【表２】

【表３】

【表４】

【表５】

【表６】

【００１６】本発明の一般式〔Ｉ〕の化合物は、次のよ
うにして合成される。下記一般式〔ＩＩ〕

【化９】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＲ₁ −（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｒ₂ 〔ＩＩ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｒ₁ はアミノ基の保護
基、Ｒ₂ はアミノ基の保護基又は保護されたアミノ基を
有するアミノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より
水酸基を除いた残基（これらの残基は側鎖が保護されて
いてもよい。）を示す。〕で表わされる保護基を有する
化合物から保護基を除去することによって得られる。

【００１７】保護基の除去は、還元、酸分解、加水分解
等のそれ自体公知の方法によって行うことができる。還
元、酸分解、加水分解等の反応は通常不活性溶媒中で−
６０℃〜溶媒の沸点、好ましくは−５０℃〜１００℃程
度で行われる。不活性溶媒としては、水、および親水性
有機溶媒、例えばメタノール、エタノールなどの低級ア
ルコール；アセトンおよびメチルエチルケトンなどのケ
トン；ジメチルホルムアミドおよびジメチルアセトアミ
ドなどのアミド類；テトラヒドロフラン、ジオキサンな
どの環状エーテル；酢酸、トリフルオロ酢酸などの低級
脂肪酸；あるいは液体アンモニア、液体フッ化水素など
である。

【００１８】保護基を除去した反応液から一般式〔Ｉ〕
のスパガリン類縁体の単離は、例えばパラジウム黒での
接触還元により保護基を除去した場合は触媒を濾別し、
濾液を減圧濃縮し、残渣をＣＭ−セファデックス（登録
商標）Ｃ−２５（Ｎａ⁺ ）およびセファデックス（登録
商標）ＬＨ−２０を用いる公知の精製法（Ｔ．Ｔａｋｅ
ｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３４，１６１９（１９８１）参照）で精製すること
に実施することができる。また、トリフルオロ酢酸によ
り保護基を除去した場合は反応液を減圧で濃縮し、残渣
を上述と同様の公知の精製法で精製することにより単離
することができる。

【００１９】上記の精製法により、一般式〔Ｉ〕のスパ
ガリン類縁体は例えば塩酸塩などの塩として得られる。
これらの塩を他の塩に導く場合は、例えば塩酸塩を水に
溶かしその水溶液を強塩基性イオン交換樹脂に通し、目
的物を含むフラクションを集め、目的とする酸、それを
含む水溶液またはメタノール、エタノール、アセトン、
テトラヒドロフラン、ジオキサンのような親水性有機溶
媒溶液を加えて中和し、中和液を減圧乾固するか、有機
溶媒を含む場合は有機溶媒を減圧留去後凍結乾燥するこ
とにより行うことができる。または一般式〔Ｉ〕の化合
物の例えば塩酸塩に水酸化銀または酸化銀水溶液を加え
て塩酸を中和し、不溶の塩化銀を濾別後濾液に所望の酸
を加えて塩とし、凍結乾燥することにより行われる。

【００２０】上記の方法により得られる目的物は、処理
条件により水和物を有する場合がありこれらの水和物も
本発明化合物の１形態である。本発明のスパガリン類縁
体の原料である一般式〔ＩＩ〕の保護されたスパガリン
類縁体は次のようにして合成される。

【００２１】ａ） Ｒ₁ 及びＲ₂ が共にアミノ基の保護
基を表わす場合の一般式〔ＩＩ〕の化合物は次のように
して合成される。特開昭５９−４２３５６号公報に記載
された通り、一般式〔ＩＩＩ〕

【化１０】 Ｈ₂ Ｎ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＲ₁ −（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｒ₂ ′ 〔ＩＩＩ〕 （式中、Ｒ₁ ，Ｒ₂ ′はアミノ基の保護基を示す。）で
表わされるジ保護スペルミジンに一般式〔ＩＶ〕

【化１１】 Ｐ−ＮＨ−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＯＯＨ 〔ＩＶ〕 （式中、ＰはＲ₁ 及びＲ₂ ′と異なるアミノ基の保護
基、Ｒ₀₀は前述と同意義を示す。）で表される保護アミ
ノ酸の反応性誘導体を反応させて下記式

【化１２】Ｐ−ＮＨ−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−
（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＲ₁ −
（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｒ₂ ′ （式中、Ｐ、Ｒ₁ 及びＲ₂ ′は前述と同意義）で表わさ
れる化合物とし、次いでアミノ基の保護基Ｐを除去した
のち、一般式〔Ｖ〕

【化１３】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＯＨ 〔Ｖ〕 （式中、Ｘ₁ 及びａは前述と同意義を示す。）で表され
るω−グアニジノ脂肪酸の反応性誘導体を反応させ、一
般式〔ＩＩ〕で表される化合物とすることができる。

【００２２】（ｂ） 一般式〔ＩＩ〕で示される化合物
のうちＲ₂ が保護されたアミノ基を有するアミノ酸もし
くはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除いた残基
（これらの残基は側鎖が保護されていてもよい）を示す
場合の化合物は以下のようにして合成される。上記
（ａ）の方法で合成された、Ｒ₁ 及びＲ₂ が共にアミノ
基である化合物からＲ₂ の保護基を除去した化合物（一
般式〔Ｉ〕で表わされる化合物のうちＹが水素原子で表
わされる化合物）と一般式〔ＶＩ〕

【化１４】 Ｙ−ＯＨ 〔ＶＩ〕 （式中、Ｙは前述と同意義を示す。）で表わされる保護
アミノ酸又は保護ペプチドの反応性誘導体を反応させ、
一般式〔ＩＩ〕で表わされる化合物とすることができ
る。

【００２３】上記（ａ）および（ｂ）における縮合は、
ペプチド結合に使用される通常の方法が使用できる。即
ち、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−
エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボ
ジイミドなどを用いるカルボジイミド法、ヒドラジドか
らのアジド法、クロル炭酸エチル、クロル炭酸イソブチ
ルなどを用いる混合酸無水物法、シアノメチルエステ
ル、ビニルエステル、置換および未置換フェニルエステ
ル、チオフェニルエステル、ヒドロキシコハク酸イミド
エステルなどを用いる活性エステル法、アセトキシム、
シクロヘキサノンオキシムなどを用いるＯ−アシルヒド
ロキシルアミン誘導体法、カルボニルジイミダゾールな
どを用いるＮ−アシル化合物法および１，３−チアゾリ
ジン−２−チオンを用いるカルボン酸活性化法などがあ
げられる。

【００２４】縮合に用いる溶媒としては通常のペプチド
結合に用いられる溶媒を使用できる。たとえばジエチル
エーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエー
テル類；酢酸エチルなどのエステル類；アセトン、メチ
ルエチルケトンなどのケトン類；塩化メチレン、クロロ
ホルムなどのハロゲン化炭化水素類；ジメチルホルムア
ミド、ジメチルアセトアミドなどのアミド類；アセトニ
トリルなどのニトリル類などを単独であるいは水と混ざ
る溶媒の場合は水との混合溶媒として使用できる。

【００２５】本発明で使用できるアミノ基の保護基とし
てはベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジ
ルオキシカルボニル基のような置換ベンジルオキシカル
ボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミル
オキシカルボニル基、ホルミル基、トリチル基、Ｏ−ニ
トロフェニルスルフェニル基などがあげられる。

【００２６】アミノ酸側鎖の保護基であるカルボキシル
基の保護基としては、ｔ−ブチル基などの低級アルキル
基、ベンジル基、置換ベンジル基等；水酸基の保護基と
してはｔ−ブチル基、ベンジル基等；メルカプト基の保
護基としてはベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基等；
イミダゾール基の保護基としてはベンジルオキシカルボ
ニル基、ベンジル基、トシル基等；およびグアニジン基
の保護基としてはニトロ基、トシル基、ｔ−ブチルオキ
シカルボニル基等があげられるが必ずしもこれらに限定
されるものではない。

【００２７】本発明化合物が免疫抑制剤として用いられ
る場合は、単独または賦形剤あるいは担体と混合して注
射剤、経口剤、または坐剤などとして投与される。賦形
剤及び担体としては薬剤学的に許容されるものが選ば
れ、その種類及び組成は投与経路や投与方法によって決
まる。例えば液状担体として水、アルコール類もしくは
大豆油、ピーナツ油、ゴマ油、ミネラル油等の動植物油
または合成油が用いられ、固体担体として乳糖、マルト
ース、シュクロースなどの糖類、アミノ酸類、ヒドロキ
シプロピルセルロースなどセルロース誘導体、ステアリ
ン酸マグネシウムなどの有機酸塩などが使用される。

【００２８】注射剤で使用する賦形剤はマンニトール、
マルトース、デキストラン、乳糖、シクロデキストリ
ン、コンドロイチン硫酸、ゼラチン、ヒト血清アルブミ
ンであるが、マルトース、乳糖、コンドロイチン硫酸、
ゼラチン、ヒト血清アルブミンが好ましい。これらの賦
形剤と共に凍結乾燥製剤とし、それを投与時に注射用の
適当な溶剤、例えば滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖液、
電解質溶液、アミノ酸液等の通常の静脈投与用液体に溶
解して投与することもできる。

【００２９】本発明における製剤の組成中にｐＨ調整等
の目的で、酸やアルカリ又は適量の緩衝剤を加えてもよ
い。

【００３０】製剤中における本発明化合物の含量は製剤
により種々異なるが通常０．１〜１００重量％、好まし
くは１〜９８重量％である。例えば注射液の場合には、
通常０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量％の
有効成分を含むようにすることがよい。経口投与する場
合には、前記固体担体もしくは液状担体とともに錠剤、
カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ剤等
の形態で用いられる。カプセル、錠剤、顆粒、粉剤は一
般に５〜１００重量％、好ましくは２５〜９８重量％の
有効成分を含む。

【００３１】投与量は、患者の年齢、体重、症状、治療
目的等により決定されるが一般的に、非経口投与で０．
０１〜１００ｍｇ／ｋｇ・日、好ましくは１〜５０ｍｇ
／ｋｇ・日、経口投与で５〜１０００ｍｇ／ｋｇ・日、
好ましくは２〜５００ｍｇ／ｋｇ・日である。本発明化
合物は比較的低毒性であり、また、連続投与による毒性
の蓄積性が小さいことが特徴的である。従って本発明の
化合物は免疫異常亢進により生ずると考えられる種々の
疾患、例えば、臓器移植あるいは皮膚移植における拒絶
反応の抑制、各種の自己免疫が主たる原因と考えられる
自己免疫病、例えば多発性硬化症、溶血性貧血、Ｉ型糖
尿病、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、ベーチェット症候
群、リウマチの治療またアレルギー疾患、および自己免
疫疾患に基づく腎疾患、例えばネフローゼ等の治療にも
それらの疾患の治療剤として有効に使用しうる免疫抑制
剤である。

【００３２】

【作用】一般式〔Ｉ〕で表わされるスパガリン類縁体の
水溶液中での安定性及び生理活性を試験例により具体的
に説明する。 試験例 １．本発明化合物の水溶液中での安定性 試験方法 本発明の化合物を０．５（ｗ／ｗ）％になるように水に
溶かす。この水溶液を４０±１℃に保ち、一定時間ごと
にサンプリングし、高速液体クロマトグラフィによりピ
ーク面積比を求め、残存率を算出した。開始時を１００
％とした時の本発明化合物の一定時間経過後の残存率
（％）を表７に示す。尚、対照物質としては、一般式
［Ｉ］において、Ｘ₁ ＝−（ＣＨ₂）₅ −、ａ＝１、Ｘ
₂ ＝−（ＣＨ₂ ）₂ −ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯ−、Ｙ＝Ｈの
公知化合物を用いた。

【００３３】

【表７】 表７に示す通り本発明化合物は１週間経過後もほぼ安定
である。

【００３４】２．ラット皮膚移植における免疫抑制効果 試験方法 （ａ）ラット皮膚移植実験は雄性ＷＫＡＨ（ＲＴ１^k ）
ラット（７〜１０週齢）の尾皮膚片（５×１０ｍｍ）を
雄性Ｆ３４４（ＲＴ１^1v1 ）ラット（７〜１０週齢）の
背部に移植することにより行った。本発明化合物を移植
翌日から１０日間、連日腹腔内投与したときの免疫抑制
効果を移植皮膚片の平均生着日数で示す。なお対照物質
としては試験例１で用いたのと同様の公知の化合物を用
いた。ラット皮膚移植実験結果を表８に示す。

【００３５】

【表８】

【００３６】

【実施例】次に実施例により本発明における一般式
〔Ｉ〕で示される化合物及び製剤の製造法を具体的に説
明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限定されるも
のではない。実施例１ １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノイル）−γ
−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイル｝−１，
５，１０−トリアザデカン・３塩酸塩（化合物番号１）
の合成 （イ） １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノイ
ル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイ
ル｝−１，５−ジ−ベンジルオキシカルボニル−１，
５，１０−トリアザデカン・塩酸塩 １１−グアニジノウンデカン酸・塩酸塩６．０４ｇ（２
１．５８ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド６０ｍｌに
溶かし、氷冷下Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド２．９８
ｇ（２５．８９ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド５．３５ｇ（２５．８９ｍｍｏｌ）を
加え、室温で一夜反応させる。析出物を濾別し、ろ液は
そのまま次の反応に使用する。

【００３７】油状の１０−（γ−アミノ−β−（Ｒ）−
ヒドロキシブタノイル）−１，５−ジ−ベンジルオキシ
カルボニル−１，５，１０−トリアザデカン・塩酸塩
９．９５ｇ（８．０ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムア
ミド６０ｍｌに溶かし、氷冷下トリエチルアミン２．０
ｇ（１９．７７ｍｍｏｌ）を加え、次いで上述の１１−
グアニジノウンデカン酸塩酸塩Ｎ−ヒドロキシコハク酸
イミドエステルのジメチルホルムアミド溶液を加え、室
温で一夜反応させる。反応液を減圧濃縮し、油状の残渣
をｎ−ヘキサン１００ｍｌで２回洗滌したのち減圧濃縮
する。

【００３８】得られた油状物をシリカゲル６０（メルク
社製）によるカラムクロマトグラフィーに付し、クロロ
ホルム−メタノール１７％アンモニア水（６：２．５：
０．５ｖ／ｖ）の混液で展開すると油状物８．０ｇ（収
率５７．２６％）が得られる。

【００３９】ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ＋Ｄ₂ Ｏ，ｅｘｔｅｒ
ｎａｌ ＴＭＳ） δ＝１．２〜２．２（ｍ，２２Ｈ），２．２〜２．８
（ｍ，４Ｈ），３．１〜３．８（ｍ，１２Ｈ），４．０
〜４．６（ｍ，Ｈ），５．２５（Ｓ，２Ｈ），５．２８
（Ｓ，２Ｈ），７．５６（Ｓ，１０Ｈ）． ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：１７％アンモニア
水＝６：２．５：０．５％） Ｒｆ＝０．４５

【００４０】（ロ） １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノ
ウンデカノイル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキ
シブタノイル｝−１，５−ジ−ベンジルオキシカルボニ
ル−１，５，１０−トリアザデカン・塩酸塩８．０ｇ
（１０．３０ｍｍｏｌ）をメタノール６０ｍｌに溶か
し、酢酸３ｍｌとパラジウム黒１．０ｇを加えて室温、
常圧で６時間接触還元を行う。

【００４１】反応後触媒をろ別し、ろ液を減圧濃縮する
と油状物７．７ｇ（収率定量的）が得られる。この油状
物を蒸留水１００ｍｌに溶かし、ＣＭ−セファデックス
（登録商標）Ｃ−２５（Ｎａ⁺ ）５００ｍｌを充填した
カラムに付し、蒸留水２５００ｍｌと０．８Ｍ塩化ナト
リウム水溶液２５００ｍｌとの間のグラジェント溶出法
で溶出し、目的物を含むフラクションを集め減圧で濃縮
乾固し、乾固物にメタノールを加えて不溶物の塩化ナト
リウムをろ別する。得られた油状物からの目的物の精製
は、次のようにして行う。

【００４２】残存する少量の塩化ナトリウムを除去する
ために得られた油状物をメタノール４０ｍｌに溶かし、
セファデックス（登録商標）ＬＨ−２０ ３３０ｍｌを
充填したカラムに付し、メタノールで溶出し、目的物を
含むフラクションを集め、減圧で濃縮する。得られた油
状物を蒸留水４５ｍｌに溶かし、不溶物をろ別後凍結乾
燥すると目的物４．９０ｇ（収率８１．９３％）が得ら
れる。

【００４３】ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，２００ＭＨｚ） δ＝１．１８〜１．４６（ｍ，１２Ｈ），１．４７〜
１．８３（ｍ，８Ｈ），１．９８〜２．１９（ｍ，２
Ｈ），２．２１〜２．５４（ｍ，４Ｈ），３．０３〜
３．４（ｍ，１２Ｈ），４．０３〜４．２０（ｍ，
Ｈ）． ＩＲ（ＫＢｒ） ν（ｃｍ^-1）＝３３１０，３１６０，２９３０，２８５
０，１６４０，１５４５，１４５５，１４１０． 〔α〕²⁰ _D −１．４°（Ｃ＝１．００，Ｈ₂ Ｏ）

【００４４】実施例２ １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノイル）−γ
−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイル｝−１−
Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−１，５，１０−トリアザ
デカン・３塩酸塩（化合物番号２）の合成 （イ） １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノイ
ル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイ
ル｝−１−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル−
Ｌ−ロイシル−１，５，１０−トリアザデカン・２塩酸
塩 白色結晶の１０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノ
イル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイ
ル｝−１，５，１０−トリアザデカン・３塩酸塩（化合
物番号１）１．１ｇ（１．８９ｍｍｏｌ）をメタノール
３０ｍｌに溶かし、氷冷下Ｎ−メチルモルホリン０．２
１ｇ（２．０７ｍｍｏｌ）を加える。次いでＮ−ベンジ
ルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンとＮ
−ヒドロキシこはく酸イミドとのエステル１．０８ｇ
（２．２７ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下１．５時間反応さ
せる。

【００４５】反応液を減圧濃縮し、油状の残渣をアセト
ン６０ｍｌに懸濁させ、上澄みをデカンテーションす
る、この操作を２回くり返した後、減圧濃縮すると白色
結晶の目的物２．２ｇ（収率定量的）が得られる。 ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：１７％アンモニア
水＝６：２．５：０．５ｖ／ｖ） Ｒｆ＝０．４

【００４６】（ロ） １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノ
ウンデカノイル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキ
シブタノイル｝−１−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−
１，５，１０−トリアザデカン・３塩酸塩 １０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウンデカノイル）−γ
−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイル｝−１−
ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシ
ン−１，５，１０−トリアザデカン・２塩酸塩 ２．２
ｇを用いて、実施例１の（ロ）と同様に行うことによ
り、目的物を得ることができる。

【００４７】ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，２００ＭＨｚ） δ＝０．８３〜１．０７（ｍ，１２Ｈ），１．１９〜
１．４２（ｍ，１２Ｈ），１．４６〜１．８２（ｍ，１
４Ｈ），１．８２〜２．０１（ｍ，２Ｈ），２．１９〜
２．５３（ｍ，４Ｈ），２．９３〜３．１２（ｍ，４
Ｈ），３．１２〜３．４１（ｍ，８Ｈ），３．９１〜
４．０４（ｔ，Ｈ，Ｊ＝７．１１），４．０４〜４．２
０（ｍ，Ｈ），４．２６〜４．４２（ｔ，Ｈ，Ｊ＝７．
３７）． 〔α〕²⁰ _D −１．３°（Ｃ＝１．００，Ｈ₂ Ｏ）

【００４８】実施例３ １０−｛Ｎ−（１５−グアニジノペンタデカノイル）−
γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイル｝−
１，５，１０−トリアザデカン・３塩酸塩（化合物番号
１７）の合成 （イ） １０−｛Ｎ−（１５−グアニジノペンタデカノ
イル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイ
ル｝−１，５−ジ−ベンジルオキシカルボニル−１，
５，１０−トリアザデカン・塩酸塩 １５−グアニジノペンタデカン酸・塩酸塩２．８２ｇ
（８．３９ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１の（イ）と同
様に行うことにより、油状の目的物３．１ｇ（収率５
２．４５％）が得られる。

【００４９】ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ＋Ｄ₂ Ｏ，ｅｘｔｅｒ
ｎａｌ ＴＭＳ） δ＝１．０〜２．８（ｍ，３４Ｈ），２．９〜３．７
（ｍ，１２Ｈ），３．９〜４．４（ｍ，Ｈ），５．１７
（Ｓ，４Ｈ），７．４（Ｓ，１０Ｈ）． ＩＲ（ＫＢｒ） ν（ｃｍ^-1）＝３３００，２９２０，２８６０，１６５
０，１５４０，１４４５，１３８０，１２５０，１０９
０． ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：１７％アンモニア
水＝６：２．５：０．５ｖ／ｖ） Ｒｆ＝０．４８

【００５０】（ロ） １０−｛Ｎ−（１５−グアニジノ
ペンタデカノイル）−γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロ
キシブタノイル｝−１，５，１０−トリアザデカン・３
塩酸塩 １０−｛Ｎ−（１５−グアニジノペンタデカノイル）−
γ−アミノ−β−（Ｒ）−ヒドロキシブタノイル｝−
１，５−ジ−ベンジルオキシカルボニル−１，５，１０
−トリアザデカン・塩酸塩３．１ｇ（３．７２ｍｍｏ
ｌ）をメタノール４０ｍｌと酢酸１０ｍｌに溶かし、パ
ラジウム黒０．７ｇを加えて、室温、常圧で６時間接触
還元を行う。

【００５１】反応後触媒をろ別し、ろ液を減圧濃縮する
と油状物４．１ｇ（収率定量的）が得られる。この油状
物を蒸留水３０ｍｌに溶かし、三菱化成（登録商標）Ｈ
Ｐ−２０ ３００ｍｌを充填したカラムに付し、蒸留水
１５００ｍｌと４０％メタノール１５００ｍｌとの間の
グラジェント溶出法で溶出する。目的物を含むフラクシ
ョンを集め減圧で濃縮乾固すると、乾固物１．９ｇが得
られた。

【００５２】この乾固物１．９ｇを蒸留水７０ｍｌに溶
かし、ＣＭ−セファデックス（登録商標）Ｃ−２５（Ｎ
ａ⁺ ）２００ｍｌを充填したカラムに付し、蒸留水１０
００ｍｌと１．２Ｍ塩化ナトリウム水溶液１０００ｍｌ
との間のグラジェント溶出法で溶出し、目的物を含むフ
ラクションを集め減圧で濃縮乾固し、乾固物にメタノー
ルを加えて不溶物の塩化ナトリウムをろ別する。得られ
た油状物中に残存する少量の塩化ナトリウムを除去する
ために、油状物をメタノール３０ｍｌに溶かし、セファ
デックス（登録商標）ＬＨ−２０ ２００ｍｌを充填し
たカラムに付し、メタノールで溶出し、目的物を含むフ
ラクションを集め、減圧で濃縮する。得られた油状物を
蒸留水１０ｍｌに溶かし、不溶物をろ別後凍結乾燥する
と目的物０．８３ｇ（収率３５．０２％）が得られる。

【００５３】ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，２００ＭＨｚ） δ＝１．１２〜１．４６（ｍ，２０Ｈ），１．４６〜
１．８２（ｍ，８Ｈ），１．９７〜２．１７（ｍ，２
Ｈ），２．１８〜２．５３（ｍ，４Ｈ），２．９７〜
３．３８（ｍ，１２Ｈ），３．９９〜４．２０（ｍ，
Ｈ）． ＩＲ（ＫＢｒ） ν（ｃｍ^-1）＝３３２０，３１６０，２９３０，２８６
０，１６４５，１５４５，１４６０． 〔α〕²⁰ _D −０．９°（Ｃ＝１．００，Ｈ₂ Ｏ）

【００５４】以下一般式〔ＩＩ〕に対応する化合物を用
い、上記実施例１の（ロ）の工程と同様にしてそれぞれ
対応する一般式〔Ｉ〕で表わされる本発明化合物を得
た。一般式〔ＩＩ〕の化合物のアミノ基の保護基がｔｅ
ｒｔ−ブチルオキシカルボニル基の場合は、４Ｎ塩酸−
ジオキサン溶液を使用して脱保護を行った。

【００５５】さらに、セリン等のヒドロキシル基の保護
基としては、ベンジル基を使用したが、その場合の処理
法としては接触還元で処理した。また、アミノ基とヒド
ロキシル基の保護基が異なる場合には、まず４Ｎ塩酸−
ジオキサンで処理し、次いで接触還元を行った。

【００５６】次に、化合物番号２のような化合物を製造
する場合には、実施例２の（イ）の工程、次いで実施例
１の（ロ）の工程と同様にして対応する本発明化合物
（一般式〔Ｉ〕）を得た。

【００５７】実施例４錠剤の製造 化合物番号１又は２を３０重量部、結晶乳糖１２０重量
部、結晶セルロース１４７重量部及びステアリン酸マグ
ネシウム３重量部をＶ型混合機で打錠し、１錠３００ｍ
ｇの錠剤を得た。

【００５８】

【発明の効果】表７及び表８に示した結果から明らかな
ように、本発明における一般式〔Ｉ〕で示される化合物
は水溶液中で安定であり、また皮膚移植後の皮膚生着日
数を延長させる作用を有する。従って、本発明における
一般式〔Ｉ〕で示される化合物は臓器移植における拒絶
反応の抑制、また自己免疫疾患の治療に極めて有用であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/062 8318−4Ｈ (72)発明者 小林 富美子 東京都江東区古石場３−13−９−602 (72)発明者 竹迫 一任 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式〔Ｉ〕 【化１】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
   又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
   の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
   Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
   ₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
   ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
   いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
   の薬理学的に許容される塩。
2. 【請求項２】 一般式〔ＩＩ〕 【化２】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＲ₁ −（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｒ₂ 〔ＩＩ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
   又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
   の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
   Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
   ₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｒ₁ はアミノ基の保護
   基、Ｒ₂ はアミノ基の保護基又は保護されたアミノ基を
   有するアミノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より
   水酸基を除いた残基（これらの残基は側鎖が保護されて
   いてもよい。）を示す。〕で表される保護基を有する化
   合物から保護基を除去することを特徴とする一般式
   〔Ｉ〕 【化３】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
   又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
   の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
   Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
   ₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
   ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
   いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
   の薬理学的に許容される塩の製造法。
3. 【請求項３】 一般式〔Ｉ〕 【化４】 Ｇｕ−Ｘ₁ −（ＣＨ₂ ）_a −ＣＯＮＨ−Ｘ₂ −ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂ ）₄ −ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₃ −ＮＨ−Ｙ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｇｕはグアニジノ基、Ｘ₁ は−（ＣＨ₂ ）₅ −
   又は置換基を有してもよいフェニレン基、ａは４〜１３
   の整数、Ｘ₂ は−（ＣＨ₂ ）_0-2 −ＣＨ（Ｒ₀₀）−（Ｃ
   Ｈ₂ ）_0-2 −（式中、Ｒ_{0 0} は−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＣＨ
   ₃ 又は−ＣＨ₂ ＯＨを示す。）、Ｙは水素原子又はアミ
   ノ酸もしくはペプチドのカルボキシル基より水酸基を除
   いた残基を示す。〕で表されるスパガリン類縁体及びそ
   の薬理学的に許容される塩を有効成分とする免疫抑制
   剤。
4. 【請求項４】 一般式〔Ｉ〕で表わされるスパガリン類
   縁体及びその塩が、１０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウ
   ンデカノイル）−γ−アミノ−β−ヒドロキシブタノイ
   ル｝−１，５，１０−トリアザデカン及びその塩である
   請求項３の免疫抑制剤。
5. 【請求項５】 一般式〔Ｉ〕で表わされるスパガリン類
   縁体及びその塩が、１０−｛Ｎ−（１１−グアニジノウ
   ンデカノイル）−γ−アミノ−β−ヒドロキシブタノイ
   ル｝−１−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−１，５，１０
   −トリアザデカン及びその塩である請求項３の免疫抑制
   剤。
6. 【請求項６】 一般式〔Ｉ〕で表わされるスパガリン類
   縁体及びその塩のＸ ₂ における−ＣＨ（Ｒ₀₀）−が−Ｃ
   Ｈ（ＯＨ）−であり、光学配置がＳ，ＲＳおよびＲのい
   ずれか１種である請求項３の免疫抑制剤。
7. 【請求項７】 免疫抑制剤が組織移植における拒絶反応
   抑制剤または自己免疫疾患治療剤である請求項３の免疫
   抑制剤。