JPH07233147A - 精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 - Google Patents
精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法Info
- Publication number
- JPH07233147A JPH07233147A JP5135994A JP5135994A JPH07233147A JP H07233147 A JPH07233147 A JP H07233147A JP 5135994 A JP5135994 A JP 5135994A JP 5135994 A JP5135994 A JP 5135994A JP H07233147 A JPH07233147 A JP H07233147A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydroxyproline
- organic solvent
- separated
- crystals
- purified
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 title claims abstract description 71
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 69
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 9
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000151 deposition Methods 0.000 abstract 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 8
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 8
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 7
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 7
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 3
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L cadmium dichloride Chemical compound Cl[Cd]Cl YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 2
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGPBVJWCIDNDPN-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1C=O DGPBVJWCIDNDPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGLIQORZYPZFPW-UHFFFAOYSA-K azanium;azane;chromium(3+);tetrathiocyanate Chemical compound N.N.[NH4+].[Cr+3].[S-]C#N.[S-]C#N.[S-]C#N.[S-]C#N ZGLIQORZYPZFPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007691 collagen metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- FCQJEPASRCXVCB-UHFFFAOYSA-N flavianic acid Chemical compound C1=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FCQJEPASRCXVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- -1 for example Chemical class 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Pyrrole Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 本発明の精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造
法はつぎの工程を含む。（ｉ）動物性タンパク質の加水
分解で得られたアミノ酸混合液と水混和性の第１の有機
溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出した結晶を
除去して分離液を得る工程、（ii）工程(i)にて得られ
た分離液に第２の有機溶媒を加えるかあるいは工程(i)
で析出を行った温度と同一またはそれより低い温度に保
持してＬ−ヒドロキシプロリン結晶を析出させて分離す
る工程 【効果】 本発明によれば動物性タンパク質の加水分解
物から簡便な製造法で効率よく、低コストでしかも環境
上の問題もなくＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製する
ことができる。
法はつぎの工程を含む。（ｉ）動物性タンパク質の加水
分解で得られたアミノ酸混合液と水混和性の第１の有機
溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出した結晶を
除去して分離液を得る工程、（ii）工程(i)にて得られ
た分離液に第２の有機溶媒を加えるかあるいは工程(i)
で析出を行った温度と同一またはそれより低い温度に保
持してＬ−ヒドロキシプロリン結晶を析出させて分離す
る工程 【効果】 本発明によれば動物性タンパク質の加水分解
物から簡便な製造法で効率よく、低コストでしかも環境
上の問題もなくＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製する
ことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は動物性タンパク質の加水
分解物から精製Ｌ−ヒドロキシプロリンを効率よく製造
する方法に関する。
分解物から精製Ｌ−ヒドロキシプロリンを効率よく製造
する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および課題】Ｌ−ヒドロキシプロリンの誘
導体は、コラーゲン代謝を正常化する薬理効果を有する
ため、従来より抗炎症剤（特開昭５０−４０６６号)、
抗高血圧剤（特開平１−１７５９３９号）、解熱・鎮痛
剤（特開昭５２−５７５９)などの医薬品として用いら
れている。また、Ｌ−ヒドロキシプロリンは保湿効果を
有するため、化粧品(特開平１−１３１１０７号)などの
ほか、増糖剤(特開昭４９−９１８２９号)などとしても
使用されている。
導体は、コラーゲン代謝を正常化する薬理効果を有する
ため、従来より抗炎症剤（特開昭５０−４０６６号)、
抗高血圧剤（特開平１−１７５９３９号）、解熱・鎮痛
剤（特開昭５２−５７５９)などの医薬品として用いら
れている。また、Ｌ−ヒドロキシプロリンは保湿効果を
有するため、化粧品(特開平１−１３１１０７号)などの
ほか、増糖剤(特開昭４９−９１８２９号)などとしても
使用されている。
【０００３】このようにＬ−ヒドロキシプロリン誘導体
は様々な用途に用いられており、原料となるＬ−ヒドロ
キシプロリンの需要も年々増加している。Ｌ−ヒドロキ
シプロリンは天然のアミノ酸であって、コラーゲン、カ
ゼイン、グロビン、エヂスチン等の限られたタンパク質
に含まれているが、これらタンパク質中における含有量
は大きく異なる。特に、コラーゲン由来のゼラチン中に
はＬ−ヒドロキシプロリンが約１２％と他のタンパク質
に比べて高い含有量を示す。このため、従来よりＬ−ヒ
ドロキシプロリンを製造するには、安価に入手可能でＬ
−ヒドロキシプロリンの含有量の高いゼラチンを加水分
解し、これに分離精製操作を施し、工業的に生産されて
いる。
は様々な用途に用いられており、原料となるＬ−ヒドロ
キシプロリンの需要も年々増加している。Ｌ−ヒドロキ
シプロリンは天然のアミノ酸であって、コラーゲン、カ
ゼイン、グロビン、エヂスチン等の限られたタンパク質
に含まれているが、これらタンパク質中における含有量
は大きく異なる。特に、コラーゲン由来のゼラチン中に
はＬ−ヒドロキシプロリンが約１２％と他のタンパク質
に比べて高い含有量を示す。このため、従来よりＬ−ヒ
ドロキシプロリンを製造するには、安価に入手可能でＬ
−ヒドロキシプロリンの含有量の高いゼラチンを加水分
解し、これに分離精製操作を施し、工業的に生産されて
いる。
【０００４】このようなＬ−ヒドロキシプロリンの分離
方法としては、タンパク質の加水分解液をブタノールを
用いて連続抽出するブタノール抽出法[Dakin,H.D.,J.Bi
ol.Chem.,44,499(1920)]が古くから知られている。この
方法は抽出に多大の時間を要し、その上中性アミノ酸部
の分離がよくない。
方法としては、タンパク質の加水分解液をブタノールを
用いて連続抽出するブタノール抽出法[Dakin,H.D.,J.Bi
ol.Chem.,44,499(1920)]が古くから知られている。この
方法は抽出に多大の時間を要し、その上中性アミノ酸部
の分離がよくない。
【０００５】他にタンパク質の加水分解液にアンモニウ
ムライネッケ塩を加えＬ−ヒドロキシプロリンとＬ−プ
ロリンを沈殿せしめた後、両者のアルコールへの溶解度
差で分離するライネッケ塩法[Kapfhammer,J.,Eck,R.,Z.
physiol.Chem.,170,294(1927)]も知られている。この方
法ではあらかじめフラビアン酸によってアルギニンを、
ついでリンタングステン酸によってリジン、ヒスチジン
を除去しなければならず、また、ライネッケ塩のごとき
特殊な試薬が必要であるため、工業的なＬ−ヒドロキシ
プロリンの製法としては適さない。
ムライネッケ塩を加えＬ−ヒドロキシプロリンとＬ−プ
ロリンを沈殿せしめた後、両者のアルコールへの溶解度
差で分離するライネッケ塩法[Kapfhammer,J.,Eck,R.,Z.
physiol.Chem.,170,294(1927)]も知られている。この方
法ではあらかじめフラビアン酸によってアルギニンを、
ついでリンタングステン酸によってリジン、ヒスチジン
を除去しなければならず、また、ライネッケ塩のごとき
特殊な試薬が必要であるため、工業的なＬ−ヒドロキシ
プロリンの製法としては適さない。
【０００６】また、ゼラチンの加水分解液を亜硝酸処理
し、Ｌ−ヒドロキシプロリンとＬ−プロリンを他のアミ
ノ酸と分離後、両者をアルコールへの溶解度差で分離す
る亜硝酸処理法[Levine,M.,J.Biol.Chem.,234,1731(195
9)]もよく知られている。この方法では、工程中に発熱
や発泡および窒素酸化物が大量に発生するなど工業規模
で生産するには安全面においても環境的にも好ましくな
く、さらにＬ−ヒドロキシプロリン、Ｌ−プロリン以外
のアミノ酸は亜硝酸処理によりオキシ酸になるためアミ
ノ酸として分離できないという問題点もある。
し、Ｌ−ヒドロキシプロリンとＬ−プロリンを他のアミ
ノ酸と分離後、両者をアルコールへの溶解度差で分離す
る亜硝酸処理法[Levine,M.,J.Biol.Chem.,234,1731(195
9)]もよく知られている。この方法では、工程中に発熱
や発泡および窒素酸化物が大量に発生するなど工業規模
で生産するには安全面においても環境的にも好ましくな
く、さらにＬ−ヒドロキシプロリン、Ｌ−プロリン以外
のアミノ酸は亜硝酸処理によりオキシ酸になるためアミ
ノ酸として分離できないという問題点もある。
【０００７】このほかに銅塩法[Klabunde,H.K.,J.Biol.
Chem.,110,293(1931)]、ピクリン酸塩法[Klabunde,H.
K.,J.Biol.Chem.,110,293(1931)]、塩化カドミウム複塩
法[Kapfhammer,J.,Spoerer,H.,Z.physiol.Chem.,173,24
5(1928)]等も知られているが、これらも製造工程が複雑
であったり、製造コストが高価、環境的に悪影響を及ぼ
す等の理由のためＬ−ヒドロキシプロリンの工業的な製
造法としては好ましくない。
Chem.,110,293(1931)]、ピクリン酸塩法[Klabunde,H.
K.,J.Biol.Chem.,110,293(1931)]、塩化カドミウム複塩
法[Kapfhammer,J.,Spoerer,H.,Z.physiol.Chem.,173,24
5(1928)]等も知られているが、これらも製造工程が複雑
であったり、製造コストが高価、環境的に悪影響を及ぼ
す等の理由のためＬ−ヒドロキシプロリンの工業的な製
造法としては好ましくない。
【０００８】また、Ｌ−ヒドロキシプロリンは合成によ
っても製造が可能である。ヒドロキシプロリンは不斉炭
素原子２個が存在するため４種の光学異性体の混合物が
できる。これからＬ−ヒドロキシプロリンを分離しよう
とすれば、まず、アロヒドロキシプロリンを分離[Leuch
s,H.,Ber.,38,1937(1905)]し、次いで、ＤＬ−ラセミ体
を分離[Leuchs,H.,Brewster,J.F.,Ber.,46,986(1913)]
しなければならず製造工程が多くなり、Ｌ−ヒドロキシ
プロリンのみを得るには製造コストが高価になる。
っても製造が可能である。ヒドロキシプロリンは不斉炭
素原子２個が存在するため４種の光学異性体の混合物が
できる。これからＬ−ヒドロキシプロリンを分離しよう
とすれば、まず、アロヒドロキシプロリンを分離[Leuch
s,H.,Ber.,38,1937(1905)]し、次いで、ＤＬ−ラセミ体
を分離[Leuchs,H.,Brewster,J.F.,Ber.,46,986(1913)]
しなければならず製造工程が多くなり、Ｌ−ヒドロキシ
プロリンのみを得るには製造コストが高価になる。
【０００９】さらにこれら従来法では、ブタノール抽出
法を除きいずれもアミノ酸を化学修飾しアミノ酸誘導体
としてからＬ−ヒドロキシプロリンの分離を行なってお
り、工程が複雑で工業的に好ましくない。また有害物質
が発生するような化学反応もあるため大気や排水の汚染
の恐れが少なくないなど環境上の問題もある。
法を除きいずれもアミノ酸を化学修飾しアミノ酸誘導体
としてからＬ−ヒドロキシプロリンの分離を行なってお
り、工程が複雑で工業的に好ましくない。また有害物質
が発生するような化学反応もあるため大気や排水の汚染
の恐れが少なくないなど環境上の問題もある。
【００１０】本発明の目的は、動物性タンパク質から簡
便な方法により効率よくＬ−ヒドロキシプロリンを分離
精製する方法を提供することにある。また本発明の他の
目的は環境上の問題なしにＬ−ヒドロキシプロリンの分
離精製法を提供することにある。
便な方法により効率よくＬ−ヒドロキシプロリンを分離
精製する方法を提供することにある。また本発明の他の
目的は環境上の問題なしにＬ−ヒドロキシプロリンの分
離精製法を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記の課題
について鋭意検討を重ねた結果、意外にも動物性タンパ
ク質を加水分解して得られた混合アミノ酸の有機溶媒中
における溶解度の差によりＬ−ヒドロキシプロリンを分
離することができるとの知見を得て本発明を完成した。
について鋭意検討を重ねた結果、意外にも動物性タンパ
ク質を加水分解して得られた混合アミノ酸の有機溶媒中
における溶解度の差によりＬ−ヒドロキシプロリンを分
離することができるとの知見を得て本発明を完成した。
【００１２】本発明の第１の発明は（ｉ）動物性タンパ
ク質の加水分解で得られたアミノ酸混合液と水混和性の
第１の有機溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出
した結晶を除去して分離液を得る工程、および（ii）工
程(i)にて得られた分離液に第２の有機溶媒を加えてＬ
−ヒドロキシプロリン結晶を析出させて分離する工程か
らなることを特徴とする精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの
製造法を提供するものである。
ク質の加水分解で得られたアミノ酸混合液と水混和性の
第１の有機溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出
した結晶を除去して分離液を得る工程、および（ii）工
程(i)にて得られた分離液に第２の有機溶媒を加えてＬ
−ヒドロキシプロリン結晶を析出させて分離する工程か
らなることを特徴とする精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの
製造法を提供するものである。
【００１３】また、本発明の第２の発明は（ｉ）動物性
タンパク質の加水分解で得られたアミノ酸混合液と水混
和性の有機溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出
した結晶を除去して分離液を得る工程、および（ii）工
程(i)にて得られた分離液を、工程(i)で析出を行った温
度と同一またはそれより低い温度に保持してＬ−ヒドロ
キシプロリン結晶を析出させて分離する工程からなるこ
とを特徴とする精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法を
提供するものである。
タンパク質の加水分解で得られたアミノ酸混合液と水混
和性の有機溶媒との混合液を０〜５０℃に保持し、析出
した結晶を除去して分離液を得る工程、および（ii）工
程(i)にて得られた分離液を、工程(i)で析出を行った温
度と同一またはそれより低い温度に保持してＬ−ヒドロ
キシプロリン結晶を析出させて分離する工程からなるこ
とを特徴とする精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法を
提供するものである。
【００１４】以下に本発明を詳細に説明する。
【００１５】工程（i） 本発明において原料として用いられる動物性タンパク質
は、ゼラチン、ニカワ、カゼインなどが挙げられる。こ
れらのうち、ゼラチンはＬ−ヒドロキシプロリンの含有
量が高く、特に好ましい。
は、ゼラチン、ニカワ、カゼインなどが挙げられる。こ
れらのうち、ゼラチンはＬ−ヒドロキシプロリンの含有
量が高く、特に好ましい。
【００１６】これらの原料の加水分解は従来公知の方法
を用いてよい。すなわち、酸としては、例えば塩酸、硫
酸などの鉱酸が用いられ、酸の使用量は動物性タンパク
質に対して、５０〜２００重量％が好ましい。また、中
和に用いるアルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸
化カルシウム、水酸化バリウムなどが挙げられる。特に
好ましい組み合わせとしては、塩酸と水酸化ナトリウ
ム、硫酸と水酸化ナトリウム、あるいは硫酸と水酸化バ
リウムの組み合わせが挙げられる。
を用いてよい。すなわち、酸としては、例えば塩酸、硫
酸などの鉱酸が用いられ、酸の使用量は動物性タンパク
質に対して、５０〜２００重量％が好ましい。また、中
和に用いるアルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸
化カルシウム、水酸化バリウムなどが挙げられる。特に
好ましい組み合わせとしては、塩酸と水酸化ナトリウ
ム、硫酸と水酸化ナトリウム、あるいは硫酸と水酸化バ
リウムの組み合わせが挙げられる。
【００１７】加水分解を行うには、原料に酸を加え６〜
２４時間加熱還流し、分解液を活性炭などを用いて脱色
後濾別する。ついで、濾液を中和し、析出塩を濾別また
は電気透析機などにより脱塩を行うのが好ましい。
２４時間加熱還流し、分解液を活性炭などを用いて脱色
後濾別する。ついで、濾液を中和し、析出塩を濾別また
は電気透析機などにより脱塩を行うのが好ましい。
【００１８】このようにして得られたアミノ酸混合液を
好ましくは減圧下、濃縮して水を除去しシロップ状の液
体を得る。得られた混合液は通常含水率３０％以下であ
るのが好ましい。
好ましくは減圧下、濃縮して水を除去しシロップ状の液
体を得る。得られた混合液は通常含水率３０％以下であ
るのが好ましい。
【００１９】ついで、このシロップ状のアミノ酸混合液
に水混和性の有機溶媒(第１の有機溶媒)を加え、充分に
溶解を行う。このような第１の有機溶媒としては、低級
アルコール、例えばメチルアルコール、エチルアルコー
ル、イソプロピルアルコールなどアルコール類を単独で
あるいは混合して用いることができる。これらのうち、
価格および収率の点から特にメチルアルコールが好まし
い。これら有機溶媒の使用量は、動物性タンパク質に対
して３０〜２００重量％であるのが好ましい。
に水混和性の有機溶媒(第１の有機溶媒)を加え、充分に
溶解を行う。このような第１の有機溶媒としては、低級
アルコール、例えばメチルアルコール、エチルアルコー
ル、イソプロピルアルコールなどアルコール類を単独で
あるいは混合して用いることができる。これらのうち、
価格および収率の点から特にメチルアルコールが好まし
い。これら有機溶媒の使用量は、動物性タンパク質に対
して３０〜２００重量％であるのが好ましい。
【００２０】この混合液を０〜５０℃、好ましくは１０
〜４０℃にて２〜４８時間保持すると結晶が生ずる。こ
の結晶を濾過などの適宜の手段により分離、除去し、分
離液(濾液)を得る。
〜４０℃にて２〜４８時間保持すると結晶が生ずる。こ
の結晶を濾過などの適宜の手段により分離、除去し、分
離液(濾液)を得る。
【００２１】工程（ii） つぎに本発明の第１の発明では、得られた分離液にさら
に有機溶媒(第２の有機溶媒)を加えて粗製Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの結晶を析出させる。第２の有機溶媒は工程
(i)で用いた第１の有機溶媒と同一であってもよく、ま
た異なっていてもよい。このような第２の有機溶媒とし
ては、例えばメチルアルコール、エチルアルコール、イ
ソプロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコールなどアル
コール類、またはアセトンを単独で、あるいは混合して
用いることができるが、収率の点からメチルアルコール
とアセトンが特に好ましい。なお、第１および第２の有
機溶媒が同一であると溶媒の再利用が容易となり、製造
コスト面で有利になる。これら溶媒の使用量は特に制限
はないが、動物性タンパク質に対して０〜１００重量％
であるのが好ましい。
に有機溶媒(第２の有機溶媒)を加えて粗製Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの結晶を析出させる。第２の有機溶媒は工程
(i)で用いた第１の有機溶媒と同一であってもよく、ま
た異なっていてもよい。このような第２の有機溶媒とし
ては、例えばメチルアルコール、エチルアルコール、イ
ソプロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコールなどアル
コール類、またはアセトンを単独で、あるいは混合して
用いることができるが、収率の点からメチルアルコール
とアセトンが特に好ましい。なお、第１および第２の有
機溶媒が同一であると溶媒の再利用が容易となり、製造
コスト面で有利になる。これら溶媒の使用量は特に制限
はないが、動物性タンパク質に対して０〜１００重量％
であるのが好ましい。
【００２２】なお、工程(ii)においては、分離液に第２
の有機溶媒の添加を行うと共に工程(i)の温度と同一ま
たはそれより低い温度に保持するのが好ましい。このよ
うに工程(ii)の温度を低く保持することにより収率が向
上し、より好ましい。工程(ii)では温度０〜４０℃、好
ましくは０〜３０℃にて２〜７２時間保持する。
の有機溶媒の添加を行うと共に工程(i)の温度と同一ま
たはそれより低い温度に保持するのが好ましい。このよ
うに工程(ii)の温度を低く保持することにより収率が向
上し、より好ましい。工程(ii)では温度０〜４０℃、好
ましくは０〜３０℃にて２〜７２時間保持する。
【００２３】また、本発明の第２の発明では、工程(ii)
において第２の有機溶媒を加えることなく、前記のごと
く工程(i)の温度と同一またはそれより低い温度に保持
することにより粗製Ｌ−ヒドロキシプロリンの結晶を得
る。
において第２の有機溶媒を加えることなく、前記のごと
く工程(i)の温度と同一またはそれより低い温度に保持
することにより粗製Ｌ−ヒドロキシプロリンの結晶を得
る。
【００２４】このようにして得られた粗製Ｌ−ヒドロキ
シプロリンを水に溶解し、例えばメチルアルコールなど
を用いて再結晶し、精製Ｌ−ヒドロキシプロリンを得
る。
シプロリンを水に溶解し、例えばメチルアルコールなど
を用いて再結晶し、精製Ｌ−ヒドロキシプロリンを得
る。
【００２５】このように本発明は、Ｌ−ヒドロキシプロ
リンの水−有機溶媒間の分配係数差に基づく液−液抽出
である従来のブタノール抽出法とは異なり、Ｌ−ヒドロ
キシプロリンの溶媒に対する溶解度差を利用した分離精
製方法である。
リンの水−有機溶媒間の分配係数差に基づく液−液抽出
である従来のブタノール抽出法とは異なり、Ｌ−ヒドロ
キシプロリンの溶媒に対する溶解度差を利用した分離精
製方法である。
【００２６】なお、参考のため本発明に必要な工程、使
用薬品数、反応状態及びＬ−ヒドロキシプロリンの収率
を、従来法であるライネッケ塩法、亜硝酸処理法と比較
し下記の表１に示す。
用薬品数、反応状態及びＬ−ヒドロキシプロリンの収率
を、従来法であるライネッケ塩法、亜硝酸処理法と比較
し下記の表１に示す。
【００２７】
【表１】
【実施例】つぎに本発明を実施例に基づきさらに具体的
に説明する。
に説明する。
【００２８】［実施例１］ゼラチン１Ｋｇに１６規定の
硫酸１Ｌを加え、１６時間加熱還流させて加水分解を行
った。この分解液に活性炭５０ｇを加え１０分間還流
し、脱色後活性炭を瀘別した。瀘過液に飽和水酸化バリ
ウムを加え、ｐＨを７.０に調整した後、硫酸バリウム
を瀘別し、無機イオンの存在しないアミノ酸混合液を得
た。この溶液を減圧下でシロップ状まで濃縮すると、ア
ミノ酸混合物１.２ｋｇが得られた。ｐ−ジメチルアミ
ノベンズアルデヒド法によりＬ−ヒドロキシプロリン１
２.０％を含有することを確認した。
硫酸１Ｌを加え、１６時間加熱還流させて加水分解を行
った。この分解液に活性炭５０ｇを加え１０分間還流
し、脱色後活性炭を瀘別した。瀘過液に飽和水酸化バリ
ウムを加え、ｐＨを７.０に調整した後、硫酸バリウム
を瀘別し、無機イオンの存在しないアミノ酸混合液を得
た。この溶液を減圧下でシロップ状まで濃縮すると、ア
ミノ酸混合物１.２ｋｇが得られた。ｐ−ジメチルアミ
ノベンズアルデヒド法によりＬ−ヒドロキシプロリン１
２.０％を含有することを確認した。
【００２９】このシロップ状のアミノ酸混合物にメチル
アルコール０.７ｋｇを加え、均一に溶解した後、２０
℃にて２４時間静置した。この時析出した１次結晶を瀘
別して濾過液を得た。ついで、この瀘過液にアセトン
０.０６ｋｇを加え、５℃で２４時間撹拌した。この時
析出した２次結晶を瀘取して乾燥すると、粗製のＬ−ヒ
ドロキシプロリン８５ｇが得られた。ｐ−ジメチルアミ
ノベンズアルデヒド法によりＬ−ヒドロキシプロリンの
純度が７８.８％であることを確認した。
アルコール０.７ｋｇを加え、均一に溶解した後、２０
℃にて２４時間静置した。この時析出した１次結晶を瀘
別して濾過液を得た。ついで、この瀘過液にアセトン
０.０６ｋｇを加え、５℃で２４時間撹拌した。この時
析出した２次結晶を瀘取して乾燥すると、粗製のＬ−ヒ
ドロキシプロリン８５ｇが得られた。ｐ−ジメチルアミ
ノベンズアルデヒド法によりＬ−ヒドロキシプロリンの
純度が７８.８％であることを確認した。
【００３０】この粗製Ｌ−ヒドロキシプロリン８５ｇを
純水１１７ｍＬに溶解し、撹拌しながらメチルアルコー
ル３５０ｍＬを滴下した後、５℃で２４時間撹拌した。
この時析出した結晶を瀘取して、乾燥すると精製Ｌ−ヒ
ドロキシプロリン６２ｇ(収率５１.７％；ゼラチンに対
するＬ−ヒドロキシプロリンの含有量を１００とした相
対値)が得られた。この結晶を分析するとｐ−ジメチル
アミノベンズアルデヒド法により純度は９９.５％、比
旋光度〔α〕(20℃、ナトリウムＤ線、以下同様)＝−７
６.１０°(ｃ＝４,Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン
−７５.６°)、融点２７４℃(標準Ｌ−ヒドロキシプロ
リン２７４℃)、薄層クロマトグラフィー(エチルアルコ
ール：水＝６３：３７、およびｎ−ブチルアルコール：
酢酸：水＝４：１：１)によってワンスポットであるこ
とを確認した。
純水１１７ｍＬに溶解し、撹拌しながらメチルアルコー
ル３５０ｍＬを滴下した後、５℃で２４時間撹拌した。
この時析出した結晶を瀘取して、乾燥すると精製Ｌ−ヒ
ドロキシプロリン６２ｇ(収率５１.７％；ゼラチンに対
するＬ−ヒドロキシプロリンの含有量を１００とした相
対値)が得られた。この結晶を分析するとｐ−ジメチル
アミノベンズアルデヒド法により純度は９９.５％、比
旋光度〔α〕(20℃、ナトリウムＤ線、以下同様)＝−７
６.１０°(ｃ＝４,Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン
−７５.６°)、融点２７４℃(標準Ｌ−ヒドロキシプロ
リン２７４℃)、薄層クロマトグラフィー(エチルアルコ
ール：水＝６３：３７、およびｎ−ブチルアルコール：
酢酸：水＝４：１：１)によってワンスポットであるこ
とを確認した。
【００３１】なお、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒ
ド法とはＬ−ヒドロキシプロリンの定量法[D.S.Miyada,
A.C.Tappel:Anal.Chem.,28,909(1956)]であり、Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンを酸化、脱炭酸によって生じるピロー
ルをｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドで発色させ、
これを分光光度計で測定する方法である。
ド法とはＬ−ヒドロキシプロリンの定量法[D.S.Miyada,
A.C.Tappel:Anal.Chem.,28,909(1956)]であり、Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンを酸化、脱炭酸によって生じるピロー
ルをｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドで発色させ、
これを分光光度計で測定する方法である。
【００３２】［実施例２］ゼラチン１Ｋｇに８.４規定
の塩酸２Ｌを加え、８時間加熱還流させて加水分解を行
った。この分解液に活性炭５０ｇを加え１０分間加熱還
流し、脱色後活性炭を瀘別した。瀘過液に８.４規定の
水酸化ナトリウム２Ｌを加え、ｐＨ７.０に調整した
後、電気透析機(旭化成工業(株)製、MICRO ACILYZER G3
(AC110-800))により脱塩を行い、無機イオンの存在しな
いアミノ酸混合溶液を得た。この溶液を減圧下でシロッ
プ状まで濃縮すると、アミノ酸混合物１.２Ｋｇが得ら
れた。ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法により、
このアミノ酸混合物はＬ−ヒドロキシプロリン１２.０
％を含有することが確認された。
の塩酸２Ｌを加え、８時間加熱還流させて加水分解を行
った。この分解液に活性炭５０ｇを加え１０分間加熱還
流し、脱色後活性炭を瀘別した。瀘過液に８.４規定の
水酸化ナトリウム２Ｌを加え、ｐＨ７.０に調整した
後、電気透析機(旭化成工業(株)製、MICRO ACILYZER G3
(AC110-800))により脱塩を行い、無機イオンの存在しな
いアミノ酸混合溶液を得た。この溶液を減圧下でシロッ
プ状まで濃縮すると、アミノ酸混合物１.２Ｋｇが得ら
れた。ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法により、
このアミノ酸混合物はＬ−ヒドロキシプロリン１２.０
％を含有することが確認された。
【００３３】このシロップ状のアミノ酸混合物にメチル
アルコール１.３ｋｇを加え、均一に溶解した後、２５
℃で２４時間静置すると１次結晶が析出した。この結晶
を瀘別し、瀘過液にさらにメチルアルコール０.６ｋｇ
を加え、５℃で２４時間撹拌した。この時析出した２次
結晶を瀘取して乾燥し、粗製のＬ−ヒドロキシプロリン
８０ｇを得た。ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法
によりこの結晶のＬ−ヒドロキシプロリン純度は８０.
５％であることを確認した。
アルコール１.３ｋｇを加え、均一に溶解した後、２５
℃で２４時間静置すると１次結晶が析出した。この結晶
を瀘別し、瀘過液にさらにメチルアルコール０.６ｋｇ
を加え、５℃で２４時間撹拌した。この時析出した２次
結晶を瀘取して乾燥し、粗製のＬ−ヒドロキシプロリン
８０ｇを得た。ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法
によりこの結晶のＬ−ヒドロキシプロリン純度は８０.
５％であることを確認した。
【００３４】この粗製のＬ−ヒドロキシプロリン８０ｇ
を純水１１０ｍＬに溶解し、撹拌しながらメチルアルコ
ール３３０ｍＬを滴下した後、５℃で２４時間撹拌し
た。この時析出した結晶を瀘取して、乾燥すると精製Ｌ
−ヒドロキシプロリン６２ｇ(収率５１.７％)が得られ
た。この結晶を分析するとｐ−ジメチルアミノベンズア
ルデヒド法により純度は９９.４％、比旋光度〔α〕＝
−７６.２５°(ｃ＝４，Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプ
ロリン−７５.６°)、融点２７５℃(標準Ｌ−ヒドロキ
シプロリン２７４℃)、薄層クロマトグラフィー(エチル
アルコール：水＝６３：３７、およびｎ−ブチルアルコ
ール：酢酸：水＝４：１：１)によってワンスポットで
あることを確認した。
を純水１１０ｍＬに溶解し、撹拌しながらメチルアルコ
ール３３０ｍＬを滴下した後、５℃で２４時間撹拌し
た。この時析出した結晶を瀘取して、乾燥すると精製Ｌ
−ヒドロキシプロリン６２ｇ(収率５１.７％)が得られ
た。この結晶を分析するとｐ−ジメチルアミノベンズア
ルデヒド法により純度は９９.４％、比旋光度〔α〕＝
−７６.２５°(ｃ＝４，Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプ
ロリン−７５.６°)、融点２７５℃(標準Ｌ−ヒドロキ
シプロリン２７４℃)、薄層クロマトグラフィー(エチル
アルコール：水＝６３：３７、およびｎ−ブチルアルコ
ール：酢酸：水＝４：１：１)によってワンスポットで
あることを確認した。
【００３５】［実施例３］実施例１に従い、シロップ状
のアミノ酸混合物１.２Ｋｇを得た。このシロップ状の
アミノ酸混合物にメチルアルコール１.３Ｋｇを加え、
均一に溶解した後、２５℃で２４時間静置すると、１次
結晶が析出した。この結晶を濾別し、濾過液を５℃で２
４時間撹拌した。この時析出した２次結晶を濾取して乾
燥し、粗製のＬ−ヒドロキシプロリン７６ｇを得た。ｐ
−ジメチルアミノベンズアルデヒド法によりこの結晶の
Ｌ−ヒドロキシプロリン純度は８２.３％であることを
確認した。
のアミノ酸混合物１.２Ｋｇを得た。このシロップ状の
アミノ酸混合物にメチルアルコール１.３Ｋｇを加え、
均一に溶解した後、２５℃で２４時間静置すると、１次
結晶が析出した。この結晶を濾別し、濾過液を５℃で２
４時間撹拌した。この時析出した２次結晶を濾取して乾
燥し、粗製のＬ−ヒドロキシプロリン７６ｇを得た。ｐ
−ジメチルアミノベンズアルデヒド法によりこの結晶の
Ｌ−ヒドロキシプロリン純度は８２.３％であることを
確認した。
【００３６】この粗製のＬ−ヒドロキシプロリンを実施
例１と同様に再結晶すると精製Ｌ−ヒドロキシプロリン
５８ｇ(収率４８.３％)が得られた。この結晶を分析す
るとｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法により純度
は９９.５％、比旋光度〔α〕＝−７６.００°(ｃ＝
４，Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン−７５.６
°)、融点２７４℃(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン２７４
℃)、薄層クロマトグラフィー(エチルアルコール：水＝
６３：３７、およびｎ−ブチルアルコール：酢酸：水＝
４：１：１)によってワンスポットであることを確認し
た。
例１と同様に再結晶すると精製Ｌ−ヒドロキシプロリン
５８ｇ(収率４８.３％)が得られた。この結晶を分析す
るとｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド法により純度
は９９.５％、比旋光度〔α〕＝−７６.００°(ｃ＝
４，Ｈ2Ｏ)(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン−７５.６
°)、融点２７４℃(標準Ｌ−ヒドロキシプロリン２７４
℃)、薄層クロマトグラフィー(エチルアルコール：水＝
６３：３７、およびｎ−ブチルアルコール：酢酸：水＝
４：１：１)によってワンスポットであることを確認し
た。
【００３７】［実施例４〜６］第１の有機溶媒および第
２の有機溶媒の種類を下記のとおり代えた以外は、実施
例１と同様にしてＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製し
た。その収率を表２に示す。
２の有機溶媒の種類を下記のとおり代えた以外は、実施
例１と同様にしてＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製し
た。その収率を表２に示す。
【００３８】 ［表２］ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 第１有機溶媒 第２有機溶媒 収率（％） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 実施例４ メチルアルコール ブチルアルコール ４３.３ ───────────────────────────────── 〃 ５ エチルアルコール アセトン ４１.７ ───────────────────────────────── 〃 ６ メチルアルコール ９部 アセトン ５０.０ エチルアルコール １部 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
【００３９】
【発明の効果】本発明によれば動物性タンパク質の加水
分解物から簡便な製造法で効率よく、低コストでしかも
環境上の問題もなくＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製
することができる。
分解物から簡便な製造法で効率よく、低コストでしかも
環境上の問題もなくＬ−ヒドロキシプロリンを分離精製
することができる。
Claims (6)
- 【請求項１】（ｉ）動物性タンパク質の加水分解で得ら
れたアミノ酸混合液と水混和性の第１の有機溶媒との混
合液を０〜５０℃に保持し、析出した結晶を除去して分
離液を得る工程、および（ii）工程(i)にて得られた分
離液に第２の有機溶媒を加えてＬ−ヒドロキシプロリン
結晶を析出させて分離する工程からなることを特徴とす
る精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法。 - 【請求項２】 第１の有機溶媒と第２の有機溶媒とが同
一の溶媒である請求項１の精製Ｌ−ヒドロキシプロリン
の製造法。 - 【請求項３】 工程(ii)において、工程(i)で析出を行
った温度と同一またはそれより低い温度に保持してＬ−
ヒドロキシプロリン結晶を析出させて分離する請求項１
の精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法。 - 【請求項４】 第１の有機溶媒がメチルアルコールであ
る請求項１または２の精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製
造法。 - 【請求項５】（ｉ）動物性タンパク質の加水分解で得ら
れたアミノ酸混合液と水混和性の有機溶媒との混合液を
０〜５０℃に保持し、析出した結晶を除去して分離液を
得る工程、および（ii）工程(i)にて得られた分離液
を、工程(i)で析出を行った温度と同一またはそれより
低い温度に保持してＬ−ヒドロキシプロリン結晶を析出
させて分離する工程からなることを特徴とする精製Ｌ−
ヒドロキシプロリンの製造法。 - 【請求項６】 有機溶媒がメチルアルコールである請求
項５の精製Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5135994A JPH07233147A (ja) | 1994-02-23 | 1994-02-23 | 精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5135994A JPH07233147A (ja) | 1994-02-23 | 1994-02-23 | 精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07233147A true JPH07233147A (ja) | 1995-09-05 |
Family
ID=12884747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5135994A Pending JPH07233147A (ja) | 1994-02-23 | 1994-02-23 | 精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07233147A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0740938A3 (de) * | 1995-05-05 | 1997-03-12 | Ipr Inst Pharm Res Riehen Ag | Prolin und 4-hydroxyprolin als therapeutische Wirkstoffe |
| WO2006011613A1 (ja) * | 2004-07-27 | 2006-02-02 | Ajinomoto Co., Inc. | モナティンまたはその塩の製造方法 |
| CN105669511A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-06-15 | 天津市敬业精细化工有限公司 | 一种羟脯氨酸精制方法 |
| CN107513030A (zh) * | 2017-10-19 | 2017-12-26 | 福建师范大学 | 一种从l‑羟脯氨酸发酵液中分离纯化l‑羟脯氨酸的方法 |
| CN107699595A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-02-16 | 绍兴厚普生物科技有限责任公司 | 一种微生物发酵法生产l‑羟脯氨酸的方法 |
| CN114105849A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-03-01 | 保定九孚生化有限公司 | 一种l-羟基脯氨酸的提取方法 |
-
1994
- 1994-02-23 JP JP5135994A patent/JPH07233147A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0740938A3 (de) * | 1995-05-05 | 1997-03-12 | Ipr Inst Pharm Res Riehen Ag | Prolin und 4-hydroxyprolin als therapeutische Wirkstoffe |
| US5827874A (en) * | 1995-05-05 | 1998-10-27 | Meyer; Hans | Methods of treating pain and inflammation with proline |
| WO2006011613A1 (ja) * | 2004-07-27 | 2006-02-02 | Ajinomoto Co., Inc. | モナティンまたはその塩の製造方法 |
| CN105669511A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-06-15 | 天津市敬业精细化工有限公司 | 一种羟脯氨酸精制方法 |
| CN107513030A (zh) * | 2017-10-19 | 2017-12-26 | 福建师范大学 | 一种从l‑羟脯氨酸发酵液中分离纯化l‑羟脯氨酸的方法 |
| CN107699595A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-02-16 | 绍兴厚普生物科技有限责任公司 | 一种微生物发酵法生产l‑羟脯氨酸的方法 |
| CN114105849A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-03-01 | 保定九孚生化有限公司 | 一种l-羟基脯氨酸的提取方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH10237030A (ja) | 分岐鎖アミノ酸の精製法 | |
| KR100399509B1 (ko) | 발린정제방법 | |
| JPH07233147A (ja) | 精製ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 | |
| JPS60169451A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの分離精製法 | |
| JPS6351140B2 (ja) | ||
| EP0611369A1 (en) | Process for preparing (s) (+)-4,4'-(1-methyl-1,2-ethanediyl)-bis(2,6-piperazinedione) | |
| JPH07285919A (ja) | アスパラギン酸アンモニウムからｌ−アスパラギン酸を製造する方法 | |
| US4076745A (en) | Process for calcium salts α-ketocarboxylic acids | |
| JPH0574583B2 (ja) | ||
| JPS6231915B2 (ja) | ||
| JPH0317096A (ja) | タウロウルソデオキシコール酸二水塩の製造方法 | |
| JPH08143585A (ja) | Ｏ，ｓ−ジメチル ｎ−アセチルホスホルアミドチオエートの精製法 | |
| SU960163A1 (ru) | Способ очистки L-пролина | |
| BE901069A (fr) | Procede de synthese d'acide ursodesoxycholique conjugue avec la taurine et produit ainsi obtenu. | |
| JPS604155A (ja) | Ｌ−ロイシンおよびｌ−イソロイシンの分離法 | |
| JP2004196560A (ja) | ヨウ化アルカリの精製方法 | |
| JP2505487B2 (ja) | 光学活性リジンのラセミ化法 | |
| JPS6054037B2 (ja) | エラスタ−ゼの製法 | |
| JPS604168A (ja) | トリプトフアンの晶析法 | |
| JPH0812632A (ja) | グリシンの精製法 | |
| JPS58188862A (ja) | Ｎ−アシルカルノシンの製造法 | |
| JP3316917B2 (ja) | 新規フェニルアラニン塩結晶とその製造法 | |
| JP2712669B2 (ja) | 光学活性１，２―プロパンジアミンの製法 | |
| JPS62440A (ja) | ジヒドロキシ安息香酸異性体の分離法 | |
| JP2616211B2 (ja) | 光学活性１，２―プロパンジアミンの製法 |