JPH072716B2 - 発光化合物および発光共役体 - Google Patents
発光化合物および発光共役体Info
- Publication number
- JPH072716B2 JPH072716B2 JP62252301A JP25230187A JPH072716B2 JP H072716 B2 JPH072716 B2 JP H072716B2 JP 62252301 A JP62252301 A JP 62252301A JP 25230187 A JP25230187 A JP 25230187A JP H072716 B2 JPH072716 B2 JP H072716B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- oso
- aryl
- alkyl
- halide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 19
- -1 amino, carboxyl Chemical group 0.000 claims description 15
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 150000004820 halides Chemical group 0.000 claims description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 8
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 8
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 4
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 4
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 3
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OMNHTTWQSSUZHO-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-3,5-dimethylbenzoic acid Chemical compound CC1=CC(C(O)=O)=CC(C)=C1O OMNHTTWQSSUZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-[2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl]amino]acetate Chemical compound C=1C=CC=C(OC(C)=O)C=1CN(CC(=O)OC)CCN(CC(=O)OC)CC1=CC=CC=C1OC(C)=O OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGBXMLOGRLGZII-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-2,3-dimethylbenzoic acid Chemical compound CC1=C(C)C(C(O)=O)=CC=C1O NGBXMLOGRLGZII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfate Chemical compound COS(=O)(=O)OC VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIYUZWMXMSNPRG-UHFFFAOYSA-N phenyl acridine-9-carboxylate Chemical compound C=12C=CC=CC2=NC2=CC=CC=C2C=1C(=O)OC1=CC=CC=C1 QIYUZWMXMSNPRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEPLFOBGEPKMRG-UHFFFAOYSA-N 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=C(C([O-])=O)C2=C1 FEPLFOBGEPKMRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001620634 Roger Species 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- POZJERCVPSQRFG-UHFFFAOYSA-N acridine-9-carbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)Cl)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 POZJERCVPSQRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007860 aryl ester derivatives Chemical class 0.000 description 1
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- YSSSPARMOAYJTE-UHFFFAOYSA-N dibenzo-18-crown-6 Chemical compound O1CCOCCOC2=CC=CC=C2OCCOCCOC2=CC=CC=C21 YSSSPARMOAYJTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010438 granite Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000007422 luminescence assay Methods 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D219/00—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems
- C07D219/04—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はイムノアッセイまたは核酸ハイブリッド形成ア
ッセイのような特異結合アッセイにおいて発光標識とし
て有用な新規のアクリジニウムエステルに関する。さら
に特に、多置換アリールアクリジニウムエステルが化学
発光イムノアッセイに使用するため意外にも安定な標識
であることを見出した。
ッセイのような特異結合アッセイにおいて発光標識とし
て有用な新規のアクリジニウムエステルに関する。さら
に特に、多置換アリールアクリジニウムエステルが化学
発光イムノアッセイに使用するため意外にも安定な標識
であることを見出した。
（従来の技術とその問題点） 化学発光標識として不飽和アリールアクリジニウムエス
テルを使用することは、ジェー・エス・ウッドヘッドら
のGB2,008,247Bに最初に開示され、次に欧州特許出願EP
82,636号に開示された。しかし、これらの化合物はアリ
ールエステル成分の一部を構成するフェノキシリングの
オルトの位置が何も置換されていなかった。不幸にも、
ウッドヘッドの化合物はpH7.4の緩衝液で不安定であ
り、従って、市販品のアッセイとして有用でなかった。
テルを使用することは、ジェー・エス・ウッドヘッドら
のGB2,008,247Bに最初に開示され、次に欧州特許出願EP
82,636号に開示された。しかし、これらの化合物はアリ
ールエステル成分の一部を構成するフェノキシリングの
オルトの位置が何も置換されていなかった。不幸にも、
ウッドヘッドの化合物はpH7.4の緩衝液で不安定であ
り、従って、市販品のアッセイとして有用でなかった。
（問題点を解決するための手段） 本発明は新しい多置換アリールアクリジニウムエステル
およびこれらのエステルを用いる発光標識した共役体を
含む。これらの置換の結果として、本発明の化合物と共
役体は、pH7.4の緩衝液において意外な程、安定性が良
く、共役体として形成される場合、発光効率が３倍に増
加し、固相の特異結合アッセイに使用する場合、信号体
ノイズの比が２倍に改善される。
およびこれらのエステルを用いる発光標識した共役体を
含む。これらの置換の結果として、本発明の化合物と共
役体は、pH7.4の緩衝液において意外な程、安定性が良
く、共役体として形成される場合、発光効率が３倍に増
加し、固相の特異結合アッセイに使用する場合、信号体
ノイズの比が２倍に改善される。
さらに特に、次に示す化合物は本発明の代表的なもので
ある。本発明は、次の構造を有する群から選ばれた多置
換アリールアクリジニウムエステルを含む発光化合物で
ある。
ある。本発明は、次の構造を有する群から選ばれた多置
換アリールアクリジニウムエステルを含む発光化合物で
ある。
（式中のR1はアルキル，アルケニル，アルキニル，また
はアリール基であり；R2，R3，R5またはR7は水素，アミ
ノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシル，ニト
ロまたはハライド基であり；R4またはR8はアルキル，ア
ルケニル，アルキニル，アリール，アルコキシル，アミ
ノ，アミド，スルホンアミド，またはスルフィド基であ
り；R6は次の置換体を示し、 R6＝−R9−R10 R9は必須ではないが任意にアルキル，アリール，または
アラルキル基であり、およびR10は次の群： −Ｎ＝Ｃ＝S,−Ｎ＝Ｃ＝0,-N2 +X-,a halide,-N3， ‐OSO2F,-OSO2CF3,-OSO2C4F9， ‐NH2， から選ばれ、ＸがCH3SO4 -，OSO2F-，ハライド，OSO2CF3
-，OSO2C4F9 -，または であり；およびＲがアルキル，アリールまたはアラルキ
ルであり；最後にフェノキシリングのR5，R6およびR7の
置換位置が交換できる）。
はアリール基であり；R2，R3，R5またはR7は水素，アミ
ノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシル，ニト
ロまたはハライド基であり；R4またはR8はアルキル，ア
ルケニル，アルキニル，アリール，アルコキシル，アミ
ノ，アミド，スルホンアミド，またはスルフィド基であ
り；R6は次の置換体を示し、 R6＝−R9−R10 R9は必須ではないが任意にアルキル，アリール，または
アラルキル基であり、およびR10は次の群： −Ｎ＝Ｃ＝S,−Ｎ＝Ｃ＝0,-N2 +X-,a halide,-N3， ‐OSO2F,-OSO2CF3,-OSO2C4F9， ‐NH2， から選ばれ、ＸがCH3SO4 -，OSO2F-，ハライド，OSO2CF3
-，OSO2C4F9 -，または であり；およびＲがアルキル，アリールまたはアラルキ
ルであり；最後にフェノキシリングのR5，R6およびR7の
置換位置が交換できる）。
特異結合アッセイのための標識として従来の非置換のも
のよりも本発明の多置換アリールアクリジニウムエステ
ルの性能が著しく改善されたのは、本発明化合物のアリ
ールエステル結合の遮蔽に由来する。立体効果、電子効
果、またはこれらの組み合わせは、抗体／抗原免疫反応
または相補的核酸ハイブリッド形成反応のような分野で
知られている特異結合現象を用いる発光アッセイに、こ
れらの化合物を市販品として用いることができる。
のよりも本発明の多置換アリールアクリジニウムエステ
ルの性能が著しく改善されたのは、本発明化合物のアリ
ールエステル結合の遮蔽に由来する。立体効果、電子効
果、またはこれらの組み合わせは、抗体／抗原免疫反応
または相補的核酸ハイブリッド形成反応のような分野で
知られている特異結合現象を用いる発光アッセイに、こ
れらの化合物を市販品として用いることができる。
この分野で知られているように、これらのアッセイのた
めの標識化合物は、リガンドまたは分析物（例えば抗
原）、あるいはリガンドまたは分析物（例えば対応する
抗体）にカップルすることを含め、種々の通常の構造に
使用できる。
めの標識化合物は、リガンドまたは分析物（例えば抗
原）、あるいはリガンドまたは分析物（例えば対応する
抗体）にカップルすることを含め、種々の通常の構造に
使用できる。
好適には、本発明の多置換アリールアクリジニウムエス
テル化合物は、上述のように次の置換基を有する。すな
わち、R1はメチル基であり、R2，R3，R5およびR7は水素
であり、R4およびR8はメチル基であり、R10はフェノキ
シリングのパラ位に直接結合したＮ−スクシンイミジル
オキシカルボニル基であり、ＸはCH3SO4 -である。次の
実施例は好ましい化合物、オルト−ジメチルアリールア
クリジニウムエステルの合成法を開示している。
テル化合物は、上述のように次の置換基を有する。すな
わち、R1はメチル基であり、R2，R3，R5およびR7は水素
であり、R4およびR8はメチル基であり、R10はフェノキ
シリングのパラ位に直接結合したＮ−スクシンイミジル
オキシカルボニル基であり、ＸはCH3SO4 -である。次の
実施例は好ましい化合物、オルト−ジメチルアリールア
クリジニウムエステルの合成法を開示している。
（実施例） 実施例１ 3.5ジメチル−４−ヒドロキシ安息香酸のカリウム塩の
調製 50mlのメタノールに溶かした3.5ジメチル−４−ヒドロ
キシ安息香酸（7.8g、47ミリモル）の溶液に2.5N NaOH
を混合物のpHが約7.0になるまで滴下した。反応混合物
を室温で１時間かきまぜ、真空下に乾燥するまで蒸発さ
せた。残渣をアセトンで粉にして濾過した。希望するカ
リウム塩を白色塩として集め、次にアセトンで洗浄し、
空気乾燥した（7.6g、80％）。
調製 50mlのメタノールに溶かした3.5ジメチル−４−ヒドロ
キシ安息香酸（7.8g、47ミリモル）の溶液に2.5N NaOH
を混合物のpHが約7.0になるまで滴下した。反応混合物
を室温で１時間かきまぜ、真空下に乾燥するまで蒸発さ
せた。残渣をアセトンで粉にして濾過した。希望するカ
リウム塩を白色塩として集め、次にアセトンで洗浄し、
空気乾燥した（7.6g、80％）。
実施例２ 3.5ジメチル−４−ヒドロキシ安息香酸のベンジルエス
テルの調製 実施例１の3.5ジメチル−４−ヒドロキシ安息香酸のカ
リウム塩（5.6g、27ミリモル）、ジベンゾ−18−クラウ
ン−６（1.0g、３ミリモル）および100mlのDME/アセト
ニトリル（1:2、v/v）を、還流コンデンサ、乾燥管、お
よびかきまぜ棒を備えた250mlの丸底フラスコに添加し
た。混合物を80℃で30分間、油浴中で加熱した後、塩化
ベンジル（3.5ml、30ミリモル）を添加した。この反応
混合物をさらに３時間80℃で加熱し、冷却し濾過した。
濾液を蒸発乾涸した。残渣を最小量のクロロホルムに溶
解し、クロロホルム／ヘキサン（3:1、v/v）を用いて溶
出するシリカゲル充填カラム（60Å、230〜400メッシ
ュ）で精製した。溶出液を100％クロロホルムに変え
た。トルエン／酢酸エチル（4:1、v/v）を用いて展開す
るとき、メルクシリカゲル薄層クロマトグラフィで0.6
のRf値を有する部分を集め、蒸発させて白色固体の希望
するベンジルエステル（4.8g、70％、融点108℃）を得
た。
テルの調製 実施例１の3.5ジメチル−４−ヒドロキシ安息香酸のカ
リウム塩（5.6g、27ミリモル）、ジベンゾ−18−クラウ
ン−６（1.0g、３ミリモル）および100mlのDME/アセト
ニトリル（1:2、v/v）を、還流コンデンサ、乾燥管、お
よびかきまぜ棒を備えた250mlの丸底フラスコに添加し
た。混合物を80℃で30分間、油浴中で加熱した後、塩化
ベンジル（3.5ml、30ミリモル）を添加した。この反応
混合物をさらに３時間80℃で加熱し、冷却し濾過した。
濾液を蒸発乾涸した。残渣を最小量のクロロホルムに溶
解し、クロロホルム／ヘキサン（3:1、v/v）を用いて溶
出するシリカゲル充填カラム（60Å、230〜400メッシ
ュ）で精製した。溶出液を100％クロロホルムに変え
た。トルエン／酢酸エチル（4:1、v/v）を用いて展開す
るとき、メルクシリカゲル薄層クロマトグラフィで0.6
のRf値を有する部分を集め、蒸発させて白色固体の希望
するベンジルエステル（4.8g、70％、融点108℃）を得
た。
実施例３ ９−アクリジンカルボニルクロリドの調製 ９−アクリジンカルボン酸水和物（7.3g、30ミリモル）
と塩化チオニル（50ml、0.685モル）の混合物を還流コ
ンデンサ、乾燥管、およびかきまぜ棒を備えた丸底フラ
スコに入れ熱還流した。反応混合物が溶解した後、さら
に１時間加熱し、次に冷却し、蒸発させて過剰の塩化チ
オニルを除いた。残渣は、さらに精製することなく直接
次の反応に使用した。
と塩化チオニル（50ml、0.685モル）の混合物を還流コ
ンデンサ、乾燥管、およびかきまぜ棒を備えた丸底フラ
スコに入れ熱還流した。反応混合物が溶解した後、さら
に１時間加熱し、次に冷却し、蒸発させて過剰の塩化チ
オニルを除いた。残渣は、さらに精製することなく直接
次の反応に使用した。
実施例４ ２′,6′−ジメチル−４′−ベンジルオキシカルボニル
フェニルアクリジン−９−カルボキシレートの調製 実施例２からの3.5−ジメチル−４−ヒドロキシ安息香
酸のベンジルエステル（6.4g、25ミリモル）と４−ジメ
チルアミノピリジン（345mg、３ミリモル）を50mlのピ
リジン（３Å以上の分子ふるい）に溶かした溶液を、乾
燥管を備えた丸底フラスコに入れて90℃で加熱した。溶
液を冷却し、実施例３からの乾燥したアクリジン−９−
カルボニルクロリド（7.05g、29.2ミリモル）を含むフ
ラスコにピペットで移した。反応混合物を100℃で３時
間、次いで室温で終夜かきまぜた。溶媒を除去した後、
粗生成物をシリカゲル充填カラムでクロロホルム、次い
で酢酸エチルで溶出して精製した。トルエン／酢酸エチ
ル（4:1、v/v）で0.6のRf値を有する希望する生成物が
酢酸エチル／ヘキサンから結晶になって精製された（6.
37g、50％、融点146〜148℃）。
フェニルアクリジン−９−カルボキシレートの調製 実施例２からの3.5−ジメチル−４−ヒドロキシ安息香
酸のベンジルエステル（6.4g、25ミリモル）と４−ジメ
チルアミノピリジン（345mg、３ミリモル）を50mlのピ
リジン（３Å以上の分子ふるい）に溶かした溶液を、乾
燥管を備えた丸底フラスコに入れて90℃で加熱した。溶
液を冷却し、実施例３からの乾燥したアクリジン−９−
カルボニルクロリド（7.05g、29.2ミリモル）を含むフ
ラスコにピペットで移した。反応混合物を100℃で３時
間、次いで室温で終夜かきまぜた。溶媒を除去した後、
粗生成物をシリカゲル充填カラムでクロロホルム、次い
で酢酸エチルで溶出して精製した。トルエン／酢酸エチ
ル（4:1、v/v）で0.6のRf値を有する希望する生成物が
酢酸エチル／ヘキサンから結晶になって精製された（6.
37g、50％、融点146〜148℃）。
実施例５ ２′,6′−ジメチル−４′−カルボキシルフェニルアク
リジン−９−カルボキシレートの調製 実施例４からの２′,6′−ジメチル−４′−ベンジルオ
キシカルボニルフェニルアクリジン−９−カルボキシレ
ート（5.4g、11.7ミリモル）、100mlの氷酢酸、および2
5mlの48％臭化水素の混合物を、100℃で３時間加熱し冷
却した。反応混合物を600mlの水に添加し、クロロホル
ム中20％のメタノールを用いて抽出した（100mlで３
回）。有機抽出物を合わせて、蒸発させ、残渣をフリッ
トディスクを有する漏斗でヘキサンを用いて洗浄した。
（HBr塩として得られた）黄色固体をクロロホルムに懸
濁し、水で洗浄する前に僅かに過剰のトリエチルアミン
で中和し、硫酸ナトリウムで乾燥し蒸発させた（3.83
g、88％）。このようにして得られた希望する生成物は1
0％のメタノール／クロロホルムで0.4のRf値を示した。
リジン−９−カルボキシレートの調製 実施例４からの２′,6′−ジメチル−４′−ベンジルオ
キシカルボニルフェニルアクリジン−９−カルボキシレ
ート（5.4g、11.7ミリモル）、100mlの氷酢酸、および2
5mlの48％臭化水素の混合物を、100℃で３時間加熱し冷
却した。反応混合物を600mlの水に添加し、クロロホル
ム中20％のメタノールを用いて抽出した（100mlで３
回）。有機抽出物を合わせて、蒸発させ、残渣をフリッ
トディスクを有する漏斗でヘキサンを用いて洗浄した。
（HBr塩として得られた）黄色固体をクロロホルムに懸
濁し、水で洗浄する前に僅かに過剰のトリエチルアミン
で中和し、硫酸ナトリウムで乾燥し蒸発させた（3.83
g、88％）。このようにして得られた希望する生成物は1
0％のメタノール／クロロホルムで0.4のRf値を示した。
実施例６ ２′,6′−ジメチル−４′−（Ｎ−スクシンイミジルオ
キシカルボニル）フェニルアクリジン−９−カルボキシ
レートの調製 450mlのDMFに溶かした実施例５からの２′,6′−ジメチ
ル−４′−カルボキシルフェニルアクリジン−９−カル
ボキシレート（3.58g、9.64ミリモル）の溶液を、乾燥
管とかきまぜ棒を備えた１の丸底フラスコに入れた。
溶液を10分間氷浴で冷却し、次に50mlのDMFに溶かした
ジシクロヘキシルカルボジイミド（3.0g,14.6ミリモ
ル）の溶液と混合した。反応混合物を30分間氷浴中でか
きまぜ、50mlのDMFに溶かしたＮ−ヒドロキシスクシン
イミド（1.7g、14.5ミリモル）の溶液と混合し、室温で
終夜かきまぜ、蒸発乾涸させた。残渣を150mlの塩化メ
チレンで抽出し、濾過した。濾液を湿った固体に濃縮
し、20mlの酢酸エチルで粉にして、濾過し、真空デシケ
ーターで乾燥し、粗生成物（3.5g）を得た。さらに従来
のフラッシュクロマトグラフィ技術を用いて生成物の精
製を行った。シリカゲル（ジェー・ティー・ベーカー、
＃7024-1）カラムを充填し、クロロホルム／酢酸エチル
（4:1、v/v）を用いて溶出した。エチルエーテル／酢酸
エチル（4:1、v/v）で展開したときシリカゲル薄層クロ
マトグラフィプレートで0.28のRf値を示した部分を集
め、白色固体（HPLCで95％の純度）を与えるように蒸発
させた。充填シリカゲルカラムを用いてヘキサン／アセ
トン（2:1）で溶出し繰り返しフラッシュクロマトグラ
フィーで精製し、希望する純生成物（34％の収量、融点
276〜277℃）を得た。
キシカルボニル）フェニルアクリジン−９−カルボキシ
レートの調製 450mlのDMFに溶かした実施例５からの２′,6′−ジメチ
ル−４′−カルボキシルフェニルアクリジン−９−カル
ボキシレート（3.58g、9.64ミリモル）の溶液を、乾燥
管とかきまぜ棒を備えた１の丸底フラスコに入れた。
溶液を10分間氷浴で冷却し、次に50mlのDMFに溶かした
ジシクロヘキシルカルボジイミド（3.0g,14.6ミリモ
ル）の溶液と混合した。反応混合物を30分間氷浴中でか
きまぜ、50mlのDMFに溶かしたＮ−ヒドロキシスクシン
イミド（1.7g、14.5ミリモル）の溶液と混合し、室温で
終夜かきまぜ、蒸発乾涸させた。残渣を150mlの塩化メ
チレンで抽出し、濾過した。濾液を湿った固体に濃縮
し、20mlの酢酸エチルで粉にして、濾過し、真空デシケ
ーターで乾燥し、粗生成物（3.5g）を得た。さらに従来
のフラッシュクロマトグラフィ技術を用いて生成物の精
製を行った。シリカゲル（ジェー・ティー・ベーカー、
＃7024-1）カラムを充填し、クロロホルム／酢酸エチル
（4:1、v/v）を用いて溶出した。エチルエーテル／酢酸
エチル（4:1、v/v）で展開したときシリカゲル薄層クロ
マトグラフィプレートで0.28のRf値を示した部分を集
め、白色固体（HPLCで95％の純度）を与えるように蒸発
させた。充填シリカゲルカラムを用いてヘキサン／アセ
トン（2:1）で溶出し繰り返しフラッシュクロマトグラ
フィーで精製し、希望する純生成物（34％の収量、融点
276〜277℃）を得た。
実施例７ ２′,6′−ジメチル−４′−（Ｎ−スクシンイミジルオ
キシカルボニル）フェニル10−メチル−アクリジニウム
−９−カルボキシレートメソスルフェートの調製 3.8mlの塩化エチレンに溶かした実施例６からの２′,
6′−ジメチル−４′−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ
カルボニル）フェニルアクリジン−９−カルボキシレー
ト（91.5mg、0.195ミリモル）の溶液に、2.0mlの再蒸留
ジメチルスルフェートを加えた。得られた溶液を４日間
無水の条件下に還流した。室温で黄色均質溶液に15mlの
ジエチルエーテルを加え、希望する生成物を沈澱させ
た。塩化メチレンとジエチルエーテルの混合物から再結
晶して精製し、黄色固体（92.7mg、80％、融点228〜230
℃）を与えた。
キシカルボニル）フェニル10−メチル−アクリジニウム
−９−カルボキシレートメソスルフェートの調製 3.8mlの塩化エチレンに溶かした実施例６からの２′,
6′−ジメチル−４′−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ
カルボニル）フェニルアクリジン−９−カルボキシレー
ト（91.5mg、0.195ミリモル）の溶液に、2.0mlの再蒸留
ジメチルスルフェートを加えた。得られた溶液を４日間
無水の条件下に還流した。室温で黄色均質溶液に15mlの
ジエチルエーテルを加え、希望する生成物を沈澱させ
た。塩化メチレンとジエチルエーテルの混合物から再結
晶して精製し、黄色固体（92.7mg、80％、融点228〜230
℃）を与えた。
実施例８ ２′,6′−ジメチル−４′−ベンジルオキシカルボニル
フェニル10−メチル−アクリジニウム−９−カルボキシ
レートメソスルフェートの調製 1mlのクロロホルムと0.3mlのジメチルスルフェート（3.
17ミリモル）に溶かした実施例４からの２′,6′−ジメ
チル−４′−ベンジルオキシカルボニルフェニルアクリ
ジン−９−カルボキシレート（46ml、0.1ミリモル）の
溶液を、ビグロウ蒸留カラムとかきまぜ棒を備えた25ml
丸底フラスコに入れた。溶液を105℃で10分間加熱し、
冷却した。反応混合物を2mlの塩化メチレンで希釈し、
次いで無水エチルエーテルを加えて、希望する生成物の
最大量の沈澱物を得た。混合物を濾過し、エチルエーテ
ルで洗浄し、空気乾燥して黄色固体（46mg、78％）を与
えた。
フェニル10−メチル−アクリジニウム−９−カルボキシ
レートメソスルフェートの調製 1mlのクロロホルムと0.3mlのジメチルスルフェート（3.
17ミリモル）に溶かした実施例４からの２′,6′−ジメ
チル−４′−ベンジルオキシカルボニルフェニルアクリ
ジン−９−カルボキシレート（46ml、0.1ミリモル）の
溶液を、ビグロウ蒸留カラムとかきまぜ棒を備えた25ml
丸底フラスコに入れた。溶液を105℃で10分間加熱し、
冷却した。反応混合物を2mlの塩化メチレンで希釈し、
次いで無水エチルエーテルを加えて、希望する生成物の
最大量の沈澱物を得た。混合物を濾過し、エチルエーテ
ルで洗浄し、空気乾燥して黄色固体（46mg、78％）を与
えた。
合成中にR10部分は上述のように、限定された部分に転
換する必要がある前駆体である。例えば保護基を限定さ
れた部分に結合し、限定された部分を生成するように除
去する。このような合成技術は既知である。
換する必要がある前駆体である。例えば保護基を限定さ
れた部分に結合し、限定された部分を生成するように除
去する。このような合成技術は既知である。
本発明の共役体の調製 R10カップリング部分を選択すると、エステル標識は直
接、水または有機媒体中で特異結合パートナーまたはリ
ガンドと直接反応できる。また、このようなカップリン
グ技術は既知である。
接、水または有機媒体中で特異結合パートナーまたはリ
ガンドと直接反応できる。また、このようなカップリン
グ技術は既知である。
発光効率 好ましいオルトジメチル置換アリールアクリジニウム化
合物単独では従来の非置換化合物の発光効率の1/3であ
るが、共役体を形成するように抗体に結合すると、本発
明の共役体の発光効率が３倍になり、従って、意外なこ
とに従来技術の共役体と同じ効率になる。
合物単独では従来の非置換化合物の発光効率の1/3であ
るが、共役体を形成するように抗体に結合すると、本発
明の共役体の発光効率が３倍になり、従って、意外なこ
とに従来技術の共役体と同じ効率になる。
本発明の共役体は、置換アクリジニウムエステルが非置
換化合物よりもカップリングに必要なアルカリ性緩衝溶
液において一層大きい安定性を有するため、従来のもの
よりも高い特異的活性を示す。
換化合物よりもカップリングに必要なアルカリ性緩衝溶
液において一層大きい安定性を有するため、従来のもの
よりも高い特異的活性を示す。
さらに特に、次のアッセイはオルトジメチルエステルと
従来の非置換化合物で行った。
従来の非置換化合物で行った。
従来の蛋白質カップリング法によって実施例７の多置換
アクリジニウムエステルに抗TSH抗体を結合して共役体
を調製したが、このように既知の方法はいずれも適して
いる。
アクリジニウムエステルに抗TSH抗体を結合して共役体
を調製したが、このように既知の方法はいずれも適して
いる。
最終の抗体濃度は0.8mg/mlであった。0.1NHNO3、0.1％H
2O2、および0.2％のアークアド（Arquad登録商標）表面
活性剤を含有する第１溶液を0.3ml、続いて0.1N NaOHの
第２溶液を0.3ml注入して、1200倍に水で希釈した共役
体１のうち10マイクロリットルをフラッシュした。発
光はバーソルド発光計で２秒間であった。
2O2、および0.2％のアークアド（Arquad登録商標）表面
活性剤を含有する第１溶液を0.3ml、続いて0.1N NaOHの
第２溶液を0.3ml注入して、1200倍に水で希釈した共役
体１のうち10マイクロリットルをフラッシュした。発
光はバーソルド発光計で２秒間であった。
従来の非置換アクリジニウムエステル化合物の置換以外
は、上記方法を繰り返した。
は、上記方法を繰り返した。
本発明のオルソジメチルエステルを用いてつくった共役
体の発光効率は、従来の非置換エステルを用いてつくっ
た同様の共役体に匹敵するか、またはそれよりも優れて
いた。 表１ 共 役 体 総 数 非置換エステル 3,408,030 非置換エステル 3,110,990 オルトジメチルエステル 3,913,690 オルトジメチルエステル 3,467,030 共役体の安定性 上述の従来の非置換エステル共役体とオルトジメチルエ
ステル共役体の安定性を試験した。発光活性の保持力を
種々のpH値（クエン酸塩−リン酸塩緩衝剤を使用）およ
び温度で試験した。上記各共役体のアリコート５ミリリ
ットルを、２組の３種の緩衝液（pH5.0、7.4、8.0）に
各々0.1％BSAを含ませた液に加えた。１組はコントロー
ルとして４〜８℃に保持し、残りの１組を７日間37℃に
保持した。３日目,7日目に25マイクロリットルの緩衝液
を上記のようにフラッシュさせた。結果は次の通りであ
った。
体の発光効率は、従来の非置換エステルを用いてつくっ
た同様の共役体に匹敵するか、またはそれよりも優れて
いた。 表１ 共 役 体 総 数 非置換エステル 3,408,030 非置換エステル 3,110,990 オルトジメチルエステル 3,913,690 オルトジメチルエステル 3,467,030 共役体の安定性 上述の従来の非置換エステル共役体とオルトジメチルエ
ステル共役体の安定性を試験した。発光活性の保持力を
種々のpH値（クエン酸塩−リン酸塩緩衝剤を使用）およ
び温度で試験した。上記各共役体のアリコート５ミリリ
ットルを、２組の３種の緩衝液（pH5.0、7.4、8.0）に
各々0.1％BSAを含ませた液に加えた。１組はコントロー
ルとして４〜８℃に保持し、残りの１組を７日間37℃に
保持した。３日目,7日目に25マイクロリットルの緩衝液
を上記のようにフラッシュさせた。結果は次の通りであ
った。
＊従来の非置換エステルの相対活性を最初に示し、次に
本発明のオルトジメチルエステルの相対活性を示す。従
って、この場合、本発明のオルトジメチルエステルは91
％の相対活性であり、これに対して従来の非置換エステ
ルは77％の相対活性を有する。活性はすべて２〜８℃の
安定度に戻して記述する。
本発明のオルトジメチルエステルの相対活性を示す。従
って、この場合、本発明のオルトジメチルエステルは91
％の相対活性であり、これに対して従来の非置換エステ
ルは77％の相対活性を有する。活性はすべて２〜８℃の
安定度に戻して記述する。
信号対ノイズの比較 上述の非置換エステル共役体と本発明のオルトジメチル
エステルのイムノアッセイにおける信号対ノイズ（S/
N）比に対する試験をした。試験を次のように行った。
エステルのイムノアッセイにおける信号対ノイズ（S/
N）比に対する試験をした。試験を次のように行った。
上記共役体のひとつを100マイクロリットル用いて、200
ulのTSH標準液（チバコーニングダイアグノスティック
ス社、メドフィールド、マサチュセッツ州）と共に室温
で２時間インキュベートした。インキュベーションは、
0,0.4,1.0または100uIU/mlのTSHを含有する４種の標準
液で別々に行った。第２のインキュベーションは、上記
混合物に500uマイクロリットルのヒツジ抗TSH,MAGICR磁
気粒子共役体（チバコーニングダイアグノスティックス
社から入手）を添加し、次に30分間室温に保持した。最
初溶液から粒子を磁気分離し、溶液をデカントし、次々
に500マイクロリットルの水を加え、さらに磁気分離し
た。洗浄した粒子を0.1NHNO3と0.1％H2O2を含む溶液100
マイクロリットルに再懸濁した。上述の方法によってフ
ラッシングと計数を行った。その結果をTSH含有のTSH標
準液対ゼロTSH標準液の計数比で表に示した。
ulのTSH標準液（チバコーニングダイアグノスティック
ス社、メドフィールド、マサチュセッツ州）と共に室温
で２時間インキュベートした。インキュベーションは、
0,0.4,1.0または100uIU/mlのTSHを含有する４種の標準
液で別々に行った。第２のインキュベーションは、上記
混合物に500uマイクロリットルのヒツジ抗TSH,MAGICR磁
気粒子共役体（チバコーニングダイアグノスティックス
社から入手）を添加し、次に30分間室温に保持した。最
初溶液から粒子を磁気分離し、溶液をデカントし、次々
に500マイクロリットルの水を加え、さらに磁気分離し
た。洗浄した粒子を0.1NHNO3と0.1％H2O2を含む溶液100
マイクロリットルに再懸濁した。上述の方法によってフ
ラッシングと計数を行った。その結果をTSH含有のTSH標
準液対ゼロTSH標準液の計数比で表に示した。
この結果の比較は、本発明共役体が従来の共役体よりも
信号対ノイズの比が平均して増加していることを示して
いる。
信号対ノイズの比が平均して増加していることを示して
いる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/532 Ｂ 8310−2Ｊ (72)発明者 ステフン エイ パルマッチ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02081 ウオルポール グラナイト スト リート 110 (72)発明者 ロジャー エス キュビチオッティ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02192 ニーダム カーリー ロード 48 (56)参考文献 英国特許1461877（ＧＢ，Ａ) 欧州特許公開82636（ＥＰ，Ａ) 欧州特許公開216553（ＥＰ，Ａ)
Claims (6)
- 【請求項１】次の構造式： （式中のR1はアルキル，アルケニル，アルキニル，また
はアリール基であり；R2，R3，R5またはR7は水素，アミ
ノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシル，ニト
ロまたはハライド基であり；R4またはR8はアルキル，ア
ルケニル，アルキニル，アリール，アルコキシル，アミ
ノ，アミド，スルホンアミド，またはスルフィド基であ
り；R6は次の置換体を示し、 R6＝−R9−R10 R9は必須ではないが任意にアルキル，アリール，または
アラルキル基であり、R10は次の： −Ｎ＝Ｃ＝S,−Ｎ＝Ｃ＝0,-N2 +X-,a halide,-N3， ‐OSO2F,-OSO2CF3,-OSO2C4F9， ‐NH2， から選ばれ、 ＸがCH3SO4 -，OSO2F-，ハライド，OSO2CF3 -，OSO2C
4F9 -，または であり;Rがアルキル，アリールまたはアラルキルであ
り；R5，R6，およびR7のフェノキシリングの置換位置が
交換できる） を有する群から選ばれた多置換アリールアクリジニウム
エステルを含む発光化合物。 - 【請求項２】R1がメチル基であり；R2，R3，R5およびR7
が水素であり；R4およびR8がメチル基であり；R10がフ
ェノキシリングのパラ位に直接結合したＮ−スクシンイ
ミジルオキシカルボニル基であり;XがCH3SO4 -である特
許請求の範囲第１項記載の発光化合物。 - 【請求項３】次の構造式： （式中のR1はアルキル，アルケニル，アルキニル，また
はアリール基であり；R2，R3，R5，R6またはR7は水素，
アミノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシル，
ニトロまたはハライド基であり；R4またはR8はアルキ
ル，アルケニル，アルキニル，アリール，アルコキシ
ル，アミノ，アミド，スルホンアミド，またはスルフィ
ド基であり；R5，R6，およびR7のフェノキシリングの置
換位置が交換できる） を有する群から選ばれる多置換アリールアクリジニウム
エステルを含む発光化合物。 - 【請求項４】R1がメチル基であり；R2，R3，R5，R6およ
びR7が水素であり；R4およびR8がメチル基であり;XがCH
3SOF4 -である特許請求の範囲第３項記載の発光化合物。 - 【請求項５】次の構造式： （式中のR1はアルキル，アルケニル，アルキニル，また
はアリール基であり；R2，R3，R5またはR7は水素，アミ
ノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシル，ニト
ロまたはハライド基であり；R4またはR8はアルキル，ア
ルケニル，アルキニル，アリール，アルコキシル，アミ
ノ，アミド，スルホンアミド，またはスルフィド基であ
り；R6は次の置換体を示し、 R6＝−R9−R10 R9は必須ではないが任意にアルキル，アリール，または
アラルキル基であり、R10は次の： −Ｎ＝Ｃ＝S,−Ｎ＝Ｃ＝0,-N2 +X-,a halide,-N3， ‐OSO2F,-OSO2CF3,-OSO2C4F9， ‐NH2， から選ばれ、 ＸがCH3SO4 -，OSO2F-，ハライド，OSO2CF3 -，OSO2C
4F9 -，または であり;Rがアルキル，アリールまたはアラルキルであ
り；R5，R6，およびR7のフェノキシリングの置換位置が
交換できる） を有する群から選ばれた多置換アリールアクリジニウム
エステルを含む発光化合物を含有し、R6置換体がリガン
ドまたは特異結合パートナーに共役結合している発光共
役体。 - 【請求項６】R1がメチル基であり；R2，R3，R5およびR7
が水素であり；R4およびR8がメチル基であり；R10がフ
ェノキシリングのパラ位に直接結合したＮ−スクシンイ
ミジルオキシカルボニル基であり;XがCH3SO4 -である特
許請求の範囲第５項記載の発光共役体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/915,527 US4745181A (en) | 1986-10-06 | 1986-10-06 | Polysubstituted aryl acridinium esters |
| US915527 | 1986-10-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63101368A JPS63101368A (ja) | 1988-05-06 |
| JPH072716B2 true JPH072716B2 (ja) | 1995-01-18 |
Family
ID=25435903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62252301A Expired - Lifetime JPH072716B2 (ja) | 1986-10-06 | 1987-10-06 | 発光化合物および発光共役体 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4745181A (ja) |
| EP (1) | EP0263657B1 (ja) |
| JP (1) | JPH072716B2 (ja) |
| AU (1) | AU595644B2 (ja) |
| CA (1) | CA1341498C (ja) |
| DE (1) | DE3779040D1 (ja) |
Families Citing this family (64)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6414152B1 (en) * | 1981-12-11 | 2002-07-02 | University Of Wales College Of Medicine Of Heath Park | Luminescent labelling material and procedures |
| DE3279029D1 (en) * | 1981-12-11 | 1988-10-20 | Welsh Nat School Med | Luminescent labelling materials and procedures |
| US5110932A (en) * | 1986-10-06 | 1992-05-05 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Polysubstituted aryl acridinium esters |
| DE3750503T2 (de) * | 1986-10-22 | 1995-02-09 | Abbott Lab | Chemilumineszierende Acridinium- und Phenantridiniumsalze. |
| JP2527340B2 (ja) * | 1986-12-15 | 1996-08-21 | アプライド バイオシステムズ インコーポレイテッド | ロ―ダミン染料の５−及び６−スクシニミジルカルボキシレ―ト異性体 |
| US4824777A (en) * | 1987-07-08 | 1989-04-25 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for determining thyroxine uptake |
| US4927769A (en) * | 1987-07-08 | 1990-05-22 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for enhancement of chemiluminescence |
| NL8703075A (nl) * | 1987-12-18 | 1989-07-17 | Nederlanden Staat | Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof. |
| US5338847A (en) * | 1987-12-31 | 1994-08-16 | London Diagnostics, Inc. | Hydrolytically stable chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom by adduct formation |
| US5321136A (en) * | 1987-12-31 | 1994-06-14 | London Diagnostics, Inc. | Peri substituted fused ring chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom |
| NZ227506A (en) * | 1987-12-31 | 1992-06-25 | London Diagnostics Inc | Specific binding assays using chemiluminescent compounds |
| US5290936A (en) * | 1987-12-31 | 1994-03-01 | London Diagnostics, Inc. | Nitro substituted chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom |
| US6002007A (en) * | 1988-02-20 | 1999-12-14 | Dade Behring Marburg Gmbh | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays |
| US4950613A (en) * | 1988-02-26 | 1990-08-21 | Gen-Probe Incorporated | Proteted chemiluminescent labels |
| US5656426A (en) * | 1988-08-01 | 1997-08-12 | Chiron Diagnostics Corporation | Functionaized hydrophilic acridinium esters |
| US5227489A (en) * | 1988-08-01 | 1993-07-13 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Stable hydrophilic acridinium esters suitable for liposome encapsulation |
| AU634716B2 (en) * | 1988-08-01 | 1993-03-04 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes |
| US5663074A (en) * | 1988-09-26 | 1997-09-02 | Chiron Diagnostics Corporation | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester conjugates and syntheses thereof |
| CA1339491C (en) * | 1988-09-26 | 1997-10-07 | Say-Jong Law | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester and uses thereof |
| US5241070A (en) * | 1988-09-26 | 1993-08-31 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof |
| DD296503A5 (de) * | 1989-07-13 | 1991-12-05 | �K@�K@������������@�K@�Kk�� | Chemitumineszente zusammensetzungen, chemilumineszenz-verfahren und ihre anwendung in analytischen tests |
| WO1991003476A1 (en) * | 1989-09-08 | 1991-03-21 | Applied Biosystems, Inc. | 5- and 6-succinimidylcarboxylate isomers of rhodamine dyes |
| US6436349B1 (en) | 1991-03-04 | 2002-08-20 | Bayer Corporation | Fluid handling apparatus for an automated analyzer |
| US20060013729A1 (en) * | 1991-02-14 | 2006-01-19 | Glen Carey | Fluid handling apparatus for an automated analyzer |
| US6498037B1 (en) | 1991-03-04 | 2002-12-24 | Bayer Corporation | Method of handling reagents in a random access protocol |
| CA2384519C (en) * | 1991-03-04 | 2006-08-15 | Bayer Corporation | Automated analyzer |
| JP3390468B2 (ja) * | 1991-10-16 | 2003-03-24 | バイエル コーポレーション | 新規の無水混合物法による遺伝子プローブの結合方法 |
| US6087188A (en) * | 1992-11-13 | 2000-07-11 | Alk A/S | Two-site immunoassay for an antibody with chemiluminescent label and biotin bound ligand |
| JP3584379B2 (ja) * | 1993-02-04 | 2004-11-04 | 持田製薬株式会社 | アクリジニウム化合物およびアクリジニウム化合物複合体 |
| ATE217087T1 (de) * | 1993-03-19 | 2002-05-15 | Novartis Ag | Chemilumineszierende derivate mit langer emissionswellenlänge und ihre verwendung in assays |
| US5395752A (en) * | 1993-03-19 | 1995-03-07 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Long emission wavelength chemiluminescent compounds and their use in test assays |
| US5523212A (en) * | 1993-05-17 | 1996-06-04 | Lumigen, Inc. | Aryl N-alkylacridanthiocarboxylate derivatives useful for chemiluminescent detection |
| US5491072A (en) * | 1993-05-17 | 1996-02-13 | Lumigen, Inc. | N-alkylacridan carboxyl derivatives useful for chemiluminescent detection |
| GB9310612D0 (en) * | 1993-05-22 | 1993-07-07 | Rhone Poulenc Diagnostics Limi | New method of detection of bacteria |
| DE69518182T2 (de) * | 1994-04-11 | 2001-03-22 | Kyowa Medex Co. Ltd., Tokio/Tokyo | Methode zur Bestimmung einer Substanz |
| US6217847B1 (en) | 1994-07-01 | 2001-04-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal |
| US7255851B2 (en) | 1994-07-01 | 2007-08-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal |
| US5650135A (en) * | 1994-07-01 | 1997-07-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal |
| US5731148A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-24 | Gen-Probe Incorporated | Adduct protection assay |
| US5650512A (en) * | 1995-06-07 | 1997-07-22 | Systemix | Fluorescent labeling reagents |
| EP0761652A1 (en) * | 1995-08-01 | 1997-03-12 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Acridinium compound having a plurality of luminescent groups and binding groups, and conjugate thereof |
| CA2221306A1 (en) | 1996-03-15 | 1997-09-18 | Kazuhiro Imai | Reagents for labeling sh groups, process for the preparation of them, and method for labeling with them |
| US8349602B1 (en) | 1996-04-19 | 2013-01-08 | Xenogen Corporation | Biodetectors targeted to specific ligands |
| US6146836A (en) | 1997-05-19 | 2000-11-14 | Bayer Corporation | Immunoassays using anti-allotypic monoclonal antibodies |
| US6165800A (en) * | 1997-05-30 | 2000-12-26 | Bayer Corporation | Chemiluminescent energy transfer conjugates and their uses as labels in binding assays |
| BE1011206A4 (fr) * | 1997-06-11 | 1999-06-01 | Biocode Sa | Derives chimioluminescents heterocycliques. |
| US6126870A (en) * | 1997-09-12 | 2000-10-03 | Lumigen, Inc. | Chemiluminescent labeling compounds |
| JP4672144B2 (ja) * | 1998-08-11 | 2011-04-20 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレーテッド | 近赤外化学発光性アクリジニウム化合物およびその使用。 |
| US6673560B1 (en) | 1998-11-25 | 2004-01-06 | Bayer Corporation | Measurement of hydride using chemiluminescent acridinium compounds and applications thereof |
| JP3819294B2 (ja) * | 1999-07-30 | 2006-09-06 | バイエル コーポレイション | 燐酸酵素のような加水分解性酵素の化学発光基質 |
| US6783948B1 (en) * | 1999-07-30 | 2004-08-31 | Bayer Corporation | Chemiluminescent acridinium compounds and analogues thereof as substrates of hydrolytic enzymes |
| KR100399370B1 (ko) * | 2000-12-22 | 2003-09-26 | 김병효 | 아크리디늄 화합물 및 이를 이용한 화학발광 조성물 |
| US6723851B2 (en) | 2001-10-31 | 2004-04-20 | Quest Diagnostics Investment Incorporated | Chemiluminescent compounds and use thereof |
| US7319041B2 (en) * | 2002-09-27 | 2008-01-15 | Siemens Medical Solutions Diagnostic | Applications of acridinium compounds and derivatives in homogeneous assays |
| US7309615B2 (en) * | 2002-09-27 | 2007-12-18 | Siemens Medical Solutions Diagnostic | High quantum yield acridinium compounds and their uses in improving assay sensitivity |
| US7390670B2 (en) | 2003-02-20 | 2008-06-24 | Lumigen, Inc. | Signalling compounds and methods for detecting hydrogen peroxide |
| DE602006019262D1 (de) | 2005-08-11 | 2011-02-10 | Siemens Healthcare Diagnostics | QUANTITATIVE ASSAYS FÜR PDGFR-beta- IN KÖRPERFLÜSSIGKEITEN |
| DOP2006000277A (es) | 2005-12-12 | 2007-08-31 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización |
| ES2392900T3 (es) | 2006-10-13 | 2012-12-14 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Ésteres de acridinio estables con emisión de luz rápida |
| CA2696263C (en) | 2007-08-15 | 2017-06-13 | Bing Liu | Monospecific and multispecific antibodies and method of use |
| US20120015390A1 (en) | 2009-03-27 | 2012-01-19 | Protea Biopharma N.V. | Methods for the Detection and Treatment of Aberrant Prion Disease |
| AU2010276236B2 (en) | 2009-07-21 | 2014-03-20 | Gen-Probe Incorporated | Methods and compositions for quantitative detection of nucleic acid sequences over an extended dynamic range |
| WO2019116234A1 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Nestec S.A. | Methods for determining microbiome ribosomal rna composition changes |
| US11237170B2 (en) | 2018-12-04 | 2022-02-01 | Aat Bioquest, Inc. | Styryl phenols, derivatives and their use in methods of analyte detection |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1461877A (en) | 1974-02-12 | 1977-01-19 | Wellcome Found | Assay method utilizing chemiluminescence |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4363759A (en) * | 1978-04-10 | 1982-12-14 | Miles Laboratories, Inc. | Chemiluminescent-labeled haptens and antigens |
| DE3279029D1 (en) * | 1981-12-11 | 1988-10-20 | Welsh Nat School Med | Luminescent labelling materials and procedures |
| US4665022A (en) * | 1984-02-17 | 1987-05-12 | The Regents Of The University Of California | Bioluminescent assay reagent and method |
| JPS6117956A (ja) * | 1984-07-04 | 1986-01-25 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規な尿中カリクレイン測定用基質 |
| JPS6261969A (ja) * | 1985-09-06 | 1987-03-18 | アモコ・コーポレーション | アクリジニウムエステルの合成法 |
| DE3628573C2 (de) * | 1986-08-22 | 1994-10-13 | Hoechst Ag | Chemilumineszierende Acridinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
-
1986
- 1986-10-06 US US06/915,527 patent/US4745181A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-09-30 CA CA000548253A patent/CA1341498C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-30 AU AU79100/87A patent/AU595644B2/en not_active Expired
- 1987-10-05 DE DE8787308793T patent/DE3779040D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-05 EP EP87308793A patent/EP0263657B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-06 JP JP62252301A patent/JPH072716B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1461877A (en) | 1974-02-12 | 1977-01-19 | Wellcome Found | Assay method utilizing chemiluminescence |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU595644B2 (en) | 1990-04-05 |
| CA1341498C (en) | 2006-03-14 |
| EP0263657A2 (en) | 1988-04-13 |
| DE3779040D1 (de) | 1992-06-17 |
| AU7910087A (en) | 1988-04-14 |
| EP0263657A3 (en) | 1988-11-30 |
| JPS63101368A (ja) | 1988-05-06 |
| EP0263657B1 (en) | 1992-05-13 |
| US4745181A (en) | 1988-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH072716B2 (ja) | 発光化合物および発光共役体 | |
| US4918192A (en) | Polysubstituted aryl acridinium esters | |
| US5110932A (en) | Polysubstituted aryl acridinium esters | |
| US5346996A (en) | Rare earth cryptates, processes for their preparation, synthesis intermediates and application as fluorescent tracers | |
| CA2768352C (en) | Novel fluorescent dyes and uses thereof | |
| EP0322926B2 (en) | Assays utilizing improved chemiluminescent esters, thioesters and amides | |
| EP0257541B1 (de) | Chemilumineszierende Acridin-derivate und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays | |
| JP2019073533A (ja) | 両性イオン含有アクリジニウム化合物 | |
| US5688966A (en) | Compounds and method for synthesizing sulfoindocyanine dyes | |
| EP0609885B1 (en) | Acridinium compounds and conjugates thereof | |
| AU2002227015C1 (en) | Processes and synthetic intermediates for preparing N-arylacridancarboxylic acid derivatives | |
| US5670644A (en) | Acridan compounds | |
| US5723295A (en) | Methods, acridan compounds and kits for producing light | |
| US5321136A (en) | Peri substituted fused ring chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom | |
| US5338847A (en) | Hydrolytically stable chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom by adduct formation | |
| JP2801078B2 (ja) | アセチレン誘導体の製造法 | |
| JPH09100415A (ja) | 複数の発光基と結合性の基を持つアクリジニウム化合物およびその複合体 | |
| AU733635B2 (en) | Novel method and kits for producing light from an acridan compound | |
| JPH04164051A (ja) | アントラセン誘導体の製造法 | |
| JPH0418075A (ja) | ５―ジアルキルアミノ―２―クロロ―８―ホルミルキノリン類及びその製造方法 | |
| JPH0333710B2 (ja) | ||
| HK1020276A (en) | Assays utilizing improved chemiluminescent esters, thioesters and amides | |
| JPH072697B2 (ja) | 新規なオキサニル酸誘導体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080118 Year of fee payment: 13 |