JPH07324097A - インターロイキン６拮抗剤、及びペプチド類または医薬として許容されるその塩類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 インターロイキン６に対して拮抗的に作用
し、その活性発現を阻害することのできるインターロイ
キン６拮抗剤を提供する。 【構成】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｗ−Ｙ （式中、Ｘは水素またはアミノ保護基、Ｙは水酸基また
はカルボキシ保護基、Ｗは以下のＡ等で示されるアミノ
酸配列の全部、またはその一部を連続して含むペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表す。）で示さ
れるペプチド類または医薬として許容されるその塩類、
及び医薬として許容される担体を含有するインターロイ
キン６拮抗剤である。 Ａ： Thr-Ser-Ser-Glu-Arg-Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-Arg-
Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Th
r-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys-Glu-Ser-Ser-Lys-Glu-
Ala-Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Asn-Leu-Pro-Lys-Met-Al
a-Glu-Lys

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はヒトインターロイキン６
の活性発現を阻害するインターロイキン６拮抗剤、及び
新規なペプチド類または医薬として許容されるその塩類
に関するものである。本発明に用いられるペプチド類ま
たは医薬として許容されるその塩類は、ヒトインターロ
イキン６に対して拮抗的に作用し、その活性発現を阻害
するものであり、ヒトインターロイキン６に由来する種
々の疾患（例えば自己免疫疾患等）等の治療に有用であ
る。

【０００２】

【従来の技術】Ｂ細胞の抗体産生を誘導するＢ細胞分化
因子（ＢＣＤＦ／ＢＳＦ₂ ）に関するｃＤＮＡのクロー
ニングやアミノ酸配列の決定等がなされたことにより、
該Ｂ細胞分化因子は、これまで互いに異なる物質として
独立して研究されてきたインターフェロンβ₂ （ＩＦＮ
β₂ ）、ハイブリドーマ／プラズマサイトーマ増殖因子
（ＨＰＧＦ）、肝細胞刺激因子（ＨＳＦ）等と同一物質
であることが判明し、これらの物質を総称してインター
ロイキン６（以下、ＩＬ−６と略記する）と呼ぶ様にな
った。

【０００３】このＩＬ−６は、上述した様にＢ細胞分化
因子として抗体産生を増強させたり、また肝細胞刺激因
子として急性期タンパク質の合成を誘導する等、炎症や
感染に対する生体防御機構において極めて重要な機能を
担う重要なタンパク質であるが、その一方では、該ＩＬ
−６の過剰産生が原因と考えられる疾患も問題になって
いる。例えば、Medical Immunology、第１５巻、１９５
〜２０１頁（１９８８年）には、ＩＬ−６と自己免疫疾
患との関係が報告されている。また、現代化学増刊１８
「サイトカイン」免疫応答及び細胞の増殖・分化因子、
大沢利昭編、７１〜８５頁（１９９０年、出版：東京化
学同人）にはＩＬ−６が原因物質となって関与する疾患
として、慢性関節リュウマチ、心房内粘液腫、キャッス
ルマン病、ミエローマ、レンネルＴリンパ腫、メサンギ
ウム増殖性腎炎等の種々の自己免疫疾患が挙げられる。

【０００４】この様にＩＬ−６は種々の自己免疫疾患の
原因物質と考えられるので、これらの疾患を治療するこ
とを目的として、ＩＬ−６分子の活性発現部位に関する
研究、及びこの活性発現部位に対して拮抗的に作用し、
ＩＬ−６の働きを阻害する物質の開発が進められてい
る。

【０００５】ＩＬ−６分子の活性発現部位に関する研究
報告によれば、例えばJust P. J. Brakenhoff 等は、従
来シグナルペプチドと考えられていたＩＬ−６分子のＮ
末端の２８個のアミノ酸残基はＩＬ−６の活性発現には
不要であると報告している（The Journal of Immunolog
y ，１４３巻、１１７５〜８２頁、１９８９年）。ま
た、A.Kruttgen等は、ＩＬ−６のＣ末端から３番目のア
ミノ酸が活性発現に必須であると報告している（FEBS L
etters、２７３巻、９５〜９８頁、１９９０年）。更
に、C. Nishimura等は、ＩＬ−６分子をＮＭＲで解析
し、ＩＬ−６がその受容体と結合する際には、Ｃ末端に
近い部分が重要な働きをすると予測している（FEBS Let
ters、２８１巻、１６７〜１６９頁、１９９１年）。し
かしながら、いずれの報告においてもＩＬ−６の活性発
現部位は特定できておらず、その活性発現に対して拮抗
作用を有する物質は未だ発見されていない。

【０００６】また、ＩＬ−６の活性発現部位に対して拮
抗的に作用し、ＩＬ−６の働きを阻害すると考えられる
物質として、例えばＢＳＦ₂ の一部を構成するポリペプ
チド、すなわちＢＳＦ₂ のＮ末端及びＣ末端から複数個
のアミノ酸が欠損したポリペプチドが開示されている
（特開平２−１８８６００号）。

【０００７】しかし、上記公開公報で開示されている物
質は全アミノ酸数が２０個以上からなるペプチドであ
り、この様な長鎖のペプチドを製造するには複数の化学
合成法を駆使する必要があり、操作が煩雑で且つ技術的
にも困難な問題を伴うことが多く、実用性に欠けるもの
である。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の様な
問題に鑑みてなされたものであり、その第１の目的は、
ＩＬ−６に対して拮抗的に作用し、その活性発現を阻害
することのできるＩＬ−６拮抗剤を提供することにあ
り、その第２の目的は、アミノ酸数が比較的少ないペプ
チドであっても同様の作用効果を有するインターロイキ
ン６拮抗剤を提供することにある。更に、本発明の第３
の目的は、新規なペプチド類を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明のＩＬ−６拮抗剤
は、一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｗ−Ｙ （式中、Ｘは水素またはアミノ保護基、Ｙは水酸基また
はカルボキシ保護基、Ｗは以下のＡ〜Ｄのいずれかで示
されるアミノ酸配列の全部、またはその一部を連続して
含むペプチドのＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該
ペプチドのＣ末端から水酸基を１個除いた２価の基を表
す。但し、Ｗにおいて該アミノ酸配列中の遊離のメルカ
プト基は、メルカプト保護基で保護されていてもよ
い。）で示されるペプチド類または医薬として許容され
るその塩類、及び医薬として許容される担体を含有する
ことに要旨を有するものである。 Ａ： -Thr-Ser-Ser-Glu-Arg-Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-Arg
-Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-T
hr-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys-Glu-Ser-Ser-Lys-Glu
-Ala-Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Asn-Leu-Pro-Lys-Met-A
la-Glu-Lys- Ｂ： -Lys-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala
-Lys-Asn-Leu-Asp-Ala-Ile-Thr-Thr-Pro-Asp-Pro-Thr-T
hr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn
-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-A
rg-Ser-Phe-Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg-Ala
-Leu-Arg-Gln-Met- Ｃ： -Ser-Cys-Phe-Arg-Lys-Ser-Pro-Leu-Ser-Asn-Val
-Val-Cys-Glu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ser-Thr-Pro-Ser-Leu-T
hr-Thr-Lys-Ala-Val-Leu-Leu-Val-Arg-Lys-Phe-Gln-Asn
-Ser-Pro-Ala-Glu-Asp-Phe-Gln-Glu-Pro-Cys-Gln-Tyr-S
er-Gln-Glu-Ser-Gln-Lys-Phe-Ser-Cys-Gln-Leu-Ala-Val
-Pro-Glu-Gly-Asp-Ser-Ser-Phe-Tyr-Ile-Val-Ser-Met-C
ys-Val-Ala-Ser-Ser-Val-Gly-Ser-Lys-Phe-Ser-Lys-Thr
-Gln-Thr-Phe-Gln-Gly-Cys-Gly-Ile-Leu-Gln-Pro-Asp-P
ro-Pro-Ala-Asn-Ile-Thr-Val-Thr-Ala-Val-Ala-Arg-Asn
-Pro-Arg-Trp-Leu-Ser-Val-Thr-Trp-Gln-Asp-Pro-His-S
er-Trp-Asn-Ser-Ser-Phe-Tyr-Arg-Leu-Arg-Phe-Glu-Leu
-Arg-Tyr-Arg-Ala-Glu-Arg-Ser-Lys-Thr-Phe-Thr-Thr-T
rp-Met-Val-Lys-Asp-Leu-Gln-His-His-Cys-Val-Ile-His
-Asp-Ala-Trp-Ser-Gly-Leu-Arg-His-Val-Val-Gln-Leu-A
rg-Ala-Gln-Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gly- Ｄ： -Gly-Leu-Pro-Pro-Glu-Lys-Pro-Lys-Asn-Leu-Ser
-Cys-Ile-Val-Asn-Glu-Gly-Lys-Lys-Met-Arg-Cys-Glu-T
rp-Asp-Gly-Gly-Arg-Glu-Thr-His-Leu-Glu-Thr-Asn-Phe
-Thr-Leu-Lys-Ser-Glu-Trp-Ala-Thr-His-Lys-Phe-Ala-A
sp-Cys-Lys-Ala-Lys-Arg-Asp-Thr-Pro-Thr-Ser-Cys-Thr
-Val-Asp-Tyr-Ser-Thr-Val-Tyr-Phe-Val-Asn-Ile-Glu-V
al-Trp-Val-Glu-Ala-Glu-Val-Ala-Leu-Gly-Lys-Val-Thr
-Ser-Asp-His-Ile-Asn-Phe-Asp-Pro-Val-Tyr-Lys-Val-L
ys-Pro-Asn-Pro-Pro-His-Asn-Leu-Ser-Val-Ile-Asn-Ser
-Glu-Glu-Leu-Ser-Ser-Ile-Leu-Lys-Leu-Thr-Trp-Thr-A
sn-Pro-Ser-Ile-Lys-Ser-Val-Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn
-Ile-Gln-Tyr-Arg-Thr-Lys-Asp-Ala-Ser-Thr-Trp-Ser-G
ln-Ile-Pro-Pro-Glu-Asp-Thr-Ala-Ser-Thr-Arg-Ser-Ser
-Phe-Thr-Val-Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-Phe-Thr-Glu-Tyr-V
al-Phe-Arg-Ile-Arg-Cys-Met-

【００１０】ＷがＡの一部を連続して含む２価の基であ
る場合における好適な実施態様としては、下記式（１）
〜式（７）のいずれかで示されるものが挙げられる。 式（１）： -Lys-Gln-Ile-Arg-Tyr- 式（２）： -Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly- 式（３）： -Glu-Ser-Ser-Lys-Glu- 式（４）： -Ser-Lys-Glu-Ala-Leu- 式（５）： -Lys-Glu-Ala-Leu-Ala- 式（６）： -Glu-Ala-Leu-Ala-Glu- 式（７）： -Leu-Ala-Glu-Asn-Asn- ＷがＢの一部を連続して含む２価の基である場合におけ
る好適な実施態様としては、下記式（８）〜式（２３）
のいずれかで示されるものが挙げられる。 式（８） ： -Gln-Lys-Lys-Ala-Lys- 式（９） ： -Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（１０）： -Ala-Lys-Asn-Leu-Asp- 式（１１）： -Lys-Asn-Leu-Asp-Ala- 式（１２）： -Ile-Thr-Thr-Pro-Asp- 式（１３）： -Asp-Pro-Thr-Thr-Asn- 式（１４）： -Ala-Ser-Leu-Leu-Thr- 式（１５）： -Leu-Thr-Lys-Leu-Gln- 式（１６）： -Lys-Leu-Gln-Ala-Gln- 式（１７）： -Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- 式（１８）： -His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（１９）： -Leu-Arg-Ser-Phe-Lys- 式（２０）： -Arg-Ser-Phe-Lys-Glu- 式（２１）： -Ser-Ser-Leu-Arg-Ala- 式（２２）： -Leu-Arg-Ala-Leu-Arg- 式（２３）： -Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg-

【００１１】ＷがＣの一部を連続して含む２価の基であ
る場合における好適な実施態様としては、下記式（２
４）〜式（３１）のいずれかで示されるペプチドが挙げ
られる。 式（２４）： -Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gly- 式（２５）： -Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２６）： -Cys(Acm)-Phe-Arg-Lys-Ser-Pro-Leu-Ser
-Asn-Val-Val-Cys(Acm)- （式中、Acm はCys 中のメルカプト基を保護するアセト
アミドメチル基を示す。） 式（２７）： -Asn-Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２８）： -Ala-Val-Pro-Glu-Gly- 式（２９）： -Glu-Gly-Asp-Ser-Ser- 式（３０）： -Ile-Leu-Gln-Pro-Asp- 式（３１）： -Ala-Arg-Asn-Pro-Arg- ＷがＤの一部を連続して含む２価の基である場合におけ
る好適な実施態様としては、下記式（３２）〜式（３
８）のいずれかで示されるものが挙げられる。 式（３２）： -Glu-Trp-Ala-Thr-His-Lys 式（３３）： -Asn-Glu-Gly-Lys-Lys- 式（３４）： -Glu-Glu-Leu-Ser-Ser- 式（３５）： -Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr- 式（３６）： -Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn- 式（３７）： -Thr-Val-Gln-Asp-Leu- 式（３８）： -Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-

【００１２】また、本発明のペプチド類または医薬とし
て許容されるその塩類は、 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｗ−Ｙ （式中、Ｘは水素またはアミノ保護基、Ｙは水酸基また
はカルボキシ保護基、Ｗは上記式（１）〜（３８）のい
ずれかで示されるアミノ酸配列を含むペプチドのＮ末端
から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ末端から
水酸基を１個除いた２価の基を表す。但し、Ｗにおいて
該アミノ酸配列中の遊離のメルカプト基は、メルカプト
保護基で保護されていてもよい。）で示されることに要
旨を有するものである。

【００１３】

【作用】本発明のＩＬ−６拮抗剤は、上記一般式（Ｉ）
で示されるペプチド類または医薬として許容されるその
塩類、及び医薬として許容される担体を含有するもので
ある。なお、本明細書においてアミノ酸残基、保護基、
溶媒等を略号で表示する場合には、ＩＵＰＡＣ及びＩＣ
Ｂの規定、もしくは当該分野における慣用の記号に従う
ものとする。以下にそれらの例を挙げる。

【００１４】アミノ酸残基： Ａｌａ ：Ｌ−アラニン残基 Ａｒｇ ：Ｌ−アルギニン残基 Ａｓｎ ：Ｌ−アスパラギン残基 Ａｓｐ ：Ｌ−アスパラギン酸残基 Ｃｙｓ ：Ｌ−システイン残基 Ｇｌｎ ：Ｌ−グルタミン残基 Ｇｌｕ ：Ｌ−グルタミン酸残基 Ｇｌｙ ：グリシン残基 Ｈｉｓ ：Ｌ−ヒスチジン残基 Ｉｌｅ ：Ｌ−イソロイシン残基 Ｌｅｕ ：Ｌ−ロイシン残基 Ｌｙｓ ：Ｌ−リジン残基 Ｍｅｔ ：Ｌ−メチオニン残基 Ｐｈｅ ：Ｌ−フェニルアラニン残基 Ｐｒｏ ：Ｌ−プロリン残基 Ｓｅｒ ：Ｌ−セリン残基 Ｔｈｒ ：Ｌ−トレオニン残基 Ｔｒｐ ：Ｌ−トリプトファン残基 Ｔｙｒ ：Ｌ−チロシン残基 Ｖａｌ ：Ｌ−バリン残基

【００１５】アミノ保護基： Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル Ｍｂｈ ：４’−ジメトキシベンズヒドリル Ｍｔｒ ：４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベン
ゼンスルホニル Ｐｍｃ ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｔｏｓ ：トシル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル

【００１６】メルカプト保護基： ｔＢｕ ：第三級ブチル Ａｃｍ ：アセトアミドメチル溶媒 ： ＤＣＭ ：塩化メチレン ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＮＭＰ ：Ｎ−メチルピロリドンその他 ： ＤＣＣ ：ジクロロヘキシルカルボジイミド ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＴＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イ
ル）テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェー
ト ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸

【００１７】また本明細書では、慣用の記載方法に従っ
て、ペプチド中のアミノ酸配列を、そのＮ末端のアミノ
酸残基が左側に位置し、Ｃ末端のアミノ酸残基が右側に
位置するように記述する。

【００１８】上記一般式（Ｉ）において、Ｘは水素また
はアミノ保護基を意味する。上記アミノ保護基としては
例えば、Ｂｏｃ基、トリクロロエトキシカルボニル基、
ｔ−アミルオキシカルボニル基等の置換基を有してもよ
いアルコキシカルボニル基；シクロペンチルオキシカル
ボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基等の置換
基を有してもよいシクロアルコキシカルボニル基；Ｚ
基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｃｌ−
Ｚ基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、Ｂｒ−
Ｚ基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニ
トロベンジルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシ
カルボニル基、Ｆｍｏｃ基等の置換基を有してもよいア
ラルキルオキシカルボニル基；アセチル基、トリフルオ
ロアセチル基、ホルミル基、プロピオニル基、フェニル
アセチル基、フェニルプロピオニル基、ベンゼンスルホ
ニル基、Ｔｏｓ基等の置換基を有してもよいアシル基等
が挙げられる。

【００１９】また、上記一般式（Ｉ）において、Ｙは水
酸基またはカルボキシ保護基を意味する。上記カルボキ
シ保護基としては例えば、アミノ基；メチルアミノ基ま
たはエチルアミノ基等の、モノまたはジ（低級）アルキ
ルアミノ基；メトキシ基、エトキシ基等の低級アルコキ
シ基；フェニルオキシ基、ナフチルオキシ基等のアリー
ルオキシ基；ベンジルオキシ基等のアリール（低級）ア
ルコキシ基；複素環（低級）アルコキシ基等が挙げられ
る。

【００２０】また、上記Ａ、Ｃ及びＤ中に含まれるシス
テイン中のメルカプト保護基としては、ベンジル基、ｐ
−メトキシベンジル基、トリチル基等の置換基を有して
もよいアラルキル基；アセトアミドメチル基、トリメチ
ルアセトアミドメチル基などのアミドメチル基；３−ニ
トロ−２−ピリジンスルフェニル基、ｔ−Ｂｕ基等が挙
げられる。また、Ｗの定義において用いられる「その一
部」とは、上記Ａ〜Ｄのいずれかで示されるアミノ酸配
列の少なくとも３個以上を連続して含むものであること
が好ましい。

【００２１】上記一般式（Ｉ）で示されるペプチド類の
うち、Ｗが上記式（１）〜（３８）のいずれかで示され
る２価の基（但し、Ｗにおいて該アミノ酸配列中の遊離
のメルカプト基は、メルカト保護基で保護されていても
よい。）で示されるペプチド類または医薬として許容さ
れるその塩類は、本発明によって初めて開示された新規
なものである。本発明に用いられるペプチド類の最も好
ましい例を表１及び表２に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【表２】

【００２４】なお、各ペプチド中のアミノ酸残基は、酸
性アミノ酸、塩基性アミノ酸等、アミノ酸の性状もしく
は機能が同じアミノ酸（相同的なアミノ酸）に置換され
得る。

【００２５】上記本発明において用いられるペプチド類
を合成するに当たっては、ペプチド合成において通常用
いられる方法、例えば固相合成法または液相合成法を用
いて調製することができる。具体的には例えば、「続医
薬品の開発 第１４巻ペプチド合成」監修 矢島治明（廣
川書店発行、１９９１年）に記載の方法に準じて行えば
よいが、液相合成法よりも固相合成法の方が操作の簡便
性という点で有利である。固相合成法としては例えば、
有機溶媒に不溶性である支持体に、合成しようとするペ
プチドのＣ末端に対応するアミノ酸を結合させ、α−カ
ルボキシル基以外のα−アミノ基等の官能基をｔ−ブト
キシカルボニル基等の保護基で保護した後、これら保護
された対応するアミノ酸をＮ末端方向に順次縮合反応に
より結合させ、該保護基を脱離させる反応を交互に繰り
返すことによりペプチド鎖を延長させる方法が用いられ
る。固相ペプチド合成法は、用いられる保護基の種類に
よりｔ−Ｂｏｃ法とＦｍｏｃ法とに大別される。

【００２６】この様にして目的するペプチドを合成した
後、脱保護基反応およびペプチド鎖の支持体からの切断
を行う。脱保護基反応には、ｔ−Ｂｏｃ法ではトリフル
オロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭＳＡと言う）を、ま
たＦｍｏｃ法ではＴＦＡを用いるのが適当である。例え
ばｔ−Ｂｏｃ法では、フッ化水素中で上記ペプチドをア
ニソール存在下にて処理し、保護基の脱離と支持体から
の切断を行ってペプチドを回収する。これを凍結乾燥さ
せることにより、粗ペプチドが得られる。一方、Ｆｍｏ
ｃ法ではＴＦＡ中において上記と同様の操作で脱保護基
反応およびペプチド鎖の支持体からの切断反応を行うこ
とが可能である。

【００２７】この様にして得られた粗ペプチドを高速液
体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略記する）に供
することにより分離・精製を行う。その溶出に当たって
は、タンパク質の精製に通常用いられる水ー アセトニト
リル系溶媒を用いて最適条件下で行うのがよい。得られ
たクロマトピークに相当する画分を分取し、これを凍結
乾燥する。この様にして精製した精製ペプチド画分につ
いて、マススペクトル分析による分子量解析、アミノ酸
組成分析、あるいはアミノ酸配列解析等により同定を行
う。

【００２８】本発明において用いられる、医薬として許
容される上記ペプチド類の塩類とは生理学的に許容され
る塩類であり、その様な例としては例えば、塩酸、硫
酸、燐酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石
酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエ
ン酸、オレイン酸、パルミチン酸等の無機酸または有機
酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのア
ルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩；トリエチル
アミン、ジエタノールアミン、ｔ−ブチルアミン、ベン
ジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アルギニン等の
有機塩基との塩等が挙げられる。これらペプチド類の塩
類は、通常の塩生成反応を用いて調製することができ
る。

【００２９】本発明に用いられる上記ペプチド類及び医
薬として許容されるその塩類（以下、これらを単にペプ
チド類で代表する場合がある）は、ヒトＩＬ−６の受容
体もしくはその情報伝達タンパク質であるｇｐ１３０に
拮抗的に作用する結果、種々の活性発現を阻害すること
ができると考えられる。従って、本発明のペプチド類は
ＩＬ−６過剰産生が原因と考えられる自己免疫疾患等の
種々の疾患として有用である。この様な自己免疫疾患と
しては、膠原病としてＳＬＥ（全身性エリテマトーデ
ス）、慢性関節リュウマチ、強皮症（進行性全身性硬化
症）、結節性多発性動脈炎、ベーチェット病（腸型、血
管型、神経型、口腔、皮膚、目、外陰部、関節、副睾
丸、肺、腎）、乾癬、ウェゲナー肉芽腫、大動脈炎症候
群、シェーグレン症候群、自己免疫睾丸炎など、腎疾患
としてＩ型糖尿病（膵島炎）、ネフローゼ症候群、糸球
体腎炎（糸球体硬化症）、間質性腎炎、グッドパスチャ
ー症候群、糖尿病性腎症、溶血性尿毒症、虚血性急性腎
不全、慢性腎不全、糸球体内血栓抑制などが挙げられ
る。また、原発性粘膜水腫、バセドウ病、悪性貧血、自
己免疫性萎縮性胃炎、早発閉経、男性不妊症、重症筋無
力症、若年型糖尿病、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、交感性
眼炎、水晶性ぶどう膜炎、多発性硬化炎、溶血性貧血、
持発性血小板減少性紫斑症、持発性白血球減少症、原発
性胆汁性肝硬変、活動性慢性肝炎、持発性肝硬変、潰瘍
性大腸炎、円板状紅斑性狼瘡、皮膚筋炎、橋本甲状腺
炎、アジソン病、クローン病なども挙げられる。

【００３０】本発明において用いられる上記ペプチド類
は、カプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、
粉末、トローチ剤、丸剤、軟膏、坐剤、注射剤、懸濁
剤、シロップ剤、乳剤、液剤、腸溶コーティング剤、噴
霧剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤等の慣用の医薬製剤の形
で投与することができる。投与経路としては経口、皮
下、筋肉内、静脈内、膣内、直腸内、口腔内（頬側及び
舌下を含む）、経皮、鼻粘膜等を含む様々な経路によっ
て投与することができる。

【００３１】上記ペプチド類の製剤化に当たっては、医
薬として許容される担体を用いて常法によって製造する
ことができる。この様な担体としては、例えばスクロー
ス、デンプン、マンニット、ソルビット、ラクトース、
グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、
炭酸カルシウム等の賦形剤；例えばセルロース、メチル
セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピ
ルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレン
グリコール、スクロース、デンプン等の結合剤；例えば
デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルデンプン、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウ
ム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤；、例えばステアリ
ン酸マグネシウム、エアロシル、タルク、ラウリル硫酸
ナトリウム等の滑択剤；例えばクエン酸、メントール、
グリシン、オレンジ末等の矯味剤；例えば安息香酸ナト
リウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピ
ルパラベン等の保存剤；例えばクエン酸、クエン酸ナト
リウム、酢酸等の安定化剤；例えばメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の
懸濁化剤；例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース
等の分散剤；例えば水等の希釈剤；例えばカカオバタ
ー、白色ワセリン、ポリエチレングリコール等の基材ワ
ックスのような、製剤化に慣用の有機または無機の各種
担体が挙げられる。

【００３２】上記本発明の薬剤の投与量は、症状の程
度、患者の全身状態、年齢、体重等に応じて十分な治療
（または予防）効果を発揮し得る量であり、投与経路や
剤型等を考慮して適宜決定されるものであるが、有効成
分であるペプチドの量として、経口投与の場合は、通常
成人において一日当たり０．０１μｇ〜２ｇ／ｋｇ／日
であり、好ましくは０．１μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇであ
る。また、通常成人において一回当たり０．０１μｇ〜
２００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは０．１μｇ〜１０
０ｍｇ／ｋｇである。また、非経口投与の場合は、通常
成人において一日当たり０．００１μｇ〜１ｇ／ｋｇ／
日であり、好ましくは０．０１μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ
である。また、通常成人において一回当たり０．００１
μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは０．０１μ
ｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。

【００３３】以下実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施するこ
とは全て本発明の技術的範囲に包含される。

【００３４】

【実施例】実施例１ 化合物（１）＝Z-Lys-Gln-Ile-Arg-Tyr-OHの合成 化合物（１）の合成は、簡易型ペプチド合成装置（国産
化学（株）製、商標「コックさん」）を用い、一般にＦ
ｍｏｃ法と呼ばれる固相合成法で行った。本実施例に用
いる樹脂としては、オキシメチルフェノキシメチル樹脂
に、合成するペプチドのＣ末端に対応する保護されたア
ミノ酸残基であるFmoc-Tyr(tBu)残基が結合した樹脂
（すなわち、Fmoc-Tyr(tBu)-O-Polymer ）0.5g（該樹脂
中に0.33mmol相当のTyr が含まれている）を用い、以下
に示す手順に従って、目的とするペプチドのＣ末端から
Ｎ末端方向へ順次、対応する保護アミノ酸を結合させ
た。

【００３５】１）ＤＭＦ６ｍｌで上記樹脂を１分間攪拌
する。これを３回繰り返す。 ２）更に、２０％(W/W) ピペリジンのＤＭＦ溶液６ｍｌ
で３分間攪拌する。これを３回繰り返す。 ３）更に、２０％(W/W) ピペリジンのＤＭＦ溶液６ｍｌ
で１５分間攪拌する。 ４）更に、ＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ５）更に、ＤＭＦ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ６）更に、メタノール６ｍｌで１分間攪拌する。 ７）更に、ＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ８）更に、ＮＭＰ６ｍｌで１分間攪拌する。これを３回
繰り返す。 ９）次に、Fmoc-Arg(Pmc)-OH・1/2AcOEt (1.2mmol, 848m
g)の組成からなる保護アミノ酸のＮＭＰ(2.6ml) 溶液
に、ＨＯＢｔ(1.2mmol) 及びＴＢＴＵ(1.2mmol) のＤＭ
Ｆ溶液(2.4ml) 、並びにＤＩＥＡ(2.4mmol) のＮＭＰ溶
液(1.0ml) を加え、室温で７分間攪拌する。なお、以下
に用いるアミノ酸はすべて、上記樹脂に対して、該樹脂
に結合しているTyr （0.33mmol）の４倍量（約1.2mmol
）が加えられる。 10）上記９）で得られた溶液を、上記１）〜８）の工程
を経た樹脂に添加した後、３０分間攪拌する。 11）上記樹脂をメタノール６ｍｌで１分間攪拌し、洗浄
する。 12）更に上記樹脂をＮＭＰ６ｍｌで１分間攪拌し、洗浄
する。これを３回繰り返す。 13）更に上記樹脂をＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌、洗浄す
る。これを５回繰り返す。この様にして、樹脂にFmoc-A
rg(Pmc) を結合させる。 14）上記９）においてFmoc-Arg(Pmc)-OH・1/2AcOEt (1.2
mmol, 848mg)の代わりに Fmoc-Ile-OH (1.2mmol, 424m
g) を用いたこと以外は９）と同様にして溶液を調製
し、引き続き10）〜13）の工程を行うことにより、樹脂
に上記組成の保護アミノ酸を結合させる。 15）上記９）においてFmoc-Arg(Pmc)-OH・1/2AcOEt (1.2
mmol, 848mg)の代わりにFmoc-Gln-OH (1.2mmol, 442mg)
を用いたこと以外は９）と同様にして溶液を調製し、引
き続き10）〜13）の工程を行うことにより、樹脂に上記
組成の保護アミノ酸を結合させる。 16）上記９）においてFmoc-Arg(Pmc)-OH・1/2AcOEt (1.2
mmol, 848mg)の代わりにZ-Lys(Boc)-OH (1.2mmol, 457m
g)を用いたこと以外は９）と同様にして溶液を調製し、
引き続き10）〜13）の工程を行うことにより、樹脂に上
記組成の保護アミノ酸を結合させる。

【００３６】この様にして全ての保護アミノ酸を樹脂に
結合させた後、真空乾燥することにより、624mg の保護
ペプチド樹脂を得た。このうち、280mg の保護ペプチド
樹脂を５％フェノールを含むＴＦＡ溶液（１５ｍｌ）で
処理し、目的ペプチドを樹脂から切り出すと同時に不要
な側鎖保護基の除去を行った。反応液中の不溶物をグラ
スフィルターで除去し、濾液にジエチルエーテルを加
え、得られた沈澱物をグラスフィルターで回収し、真空
乾燥することにより、化合物（１）を含む粗生成物50mg
を得た。

【００３７】得られた粗生成物のうち30mgを、分取用高
速液体クロマトグラフィー（カラム：東ソー社製「ＴＳ
Ｋｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、2.54cmφ×30cmL ）を
用いてアセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液の混合
溶液による直線グラディエント法で溶出させ、化合物
（１）を含む画分を分離・精製することにより、化合物
（１）の精製物12mgを得た。得られた精製物を50%(W/W)
の酢酸溶液に溶解し、陽イオン交換樹脂Amberlite IRA-
410 （オルガノ株式会社製）に通すことにより、化合物
（１）の酢酸塩10mgを得た。

【００３８】この様にして合成した化合物（１）につい
て、ＨＰＬＣによる純度検定とアミノ酸分析による確認
を行った。以下に、ＨＰＬＣによる分析条件及びアミノ
酸分析法を示すと共に、その分析結果を表３〜表６に示
す。なお、これらの表には、後記する実施例２〜７で得
られた化合物（２）〜（４２）の分析結果も併記してい
る。

【００３９】ＨＰＬＣによる分析： カラム ：TSKgel ODS-120T （0.46cmφ x 25cm L ）
（東ソー社製） 溶出液 ：アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液の
混合溶液 検 出：ＵＶ検出器、波長214nm 流 速：1.0ml/min なお表３及び表４において、比率Ａは溶出開始時におけ
るアセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率
を示し、Ｂは溶出開始３０分後の溶出液の混合比率を示
す。なお、溶出液の混合比率は直線的に変化させた。アミノ酸分析 ： ６Ｎ塩酸で上記化合物を酸分解した（110 ℃、２４時
間）後、各化合物のアミノ酸組成を日立アミノ酸分析装
置（Ｌ−８５００）で分析した。

【００４０】

【表３】

【００４１】

【表４】

【００４２】

【表５】

【００４３】

【表６】

【００４４】以下の実施例２〜４２で用いた樹脂、保護
アミノ酸の種類及び量（樹脂への結合順に記載する）、
並びに得られる化合物（酢酸塩）の量を表７〜表１６に
まとめて示す。

【００４５】

【表７】

【００４６】

【表８】

【００４７】

【表９】

【００４８】

【表１０】

【００４９】

【表１１】

【００５０】

【表１２】

【００５１】

【表１３】

【００５２】

【表１４】

【００５３】

【表１５】

【００５４】

【表１６】

【００５５】実施例２：化合物（２）＝Z-Tyr-Ile-Leu-
Asp-Gly-OHの合成 実施例１において、表７に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（２）の酢酸塩が得られる。実施例３： 化合物（３）＝Z-Glu-Ser-Ser-Lys-Glu-OHの
合成 実施例１において、表７に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（３）の酢酸塩が得られる。実施例４ ：化合物（４）＝Z-Ser-Lys-Glu-Ala-Leu-OHの
合成 実施例１において、表７に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（４）の酢酸塩が得られる。実施例５ ：化合物（５）＝Z-Lys-Glu-Ala-Leu-Ala-OHの
合成 実施例１において、表７に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（５）の酢酸塩が得られる。

【００５６】実施例６：化合物（６）＝Z-Glu-Ala-Leu-
Ala-Glu-OHの合成 実施例１において、表７に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（６）の酢酸塩が得られる。実施例７ ：化合物（７）＝Z-Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-OHの
合成 実施例１において、表８に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（７）の酢酸塩が得られる。実施例８ ：化合物（８）＝Z-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-NH₂
の合成 上記化合物の様にＣ末端がアミド型のペプチドを合成す
る場合には、実施例１の様にＣ末端のアミノ酸が既に樹
脂に結合したＦｍｏｃアミノ酸樹脂の入手ができないこ
とから、表８に記載のＦｍｏｃアミド樹脂を用いた。こ
の樹脂に、表８に記載の保護アミノ酸を結合させたこと
以外は実施例１と同様にして行うことにより、化合物
（８）の酢酸塩が得られる。実施例９ ：化合物（９）＝Z-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-OHの
合成 実施例１において、表８に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（９）の酢酸塩が得られる。

【００５７】実施例１０：化合物（10）＝H-Ala-Lys-As
n-Leu-Asp-NH₂ の合成 表８に記載のＦｍｏｃアミド樹脂及び保護アミノ酸を用
い、実施例１と同様にして行うことにより、これらの保
護アミノ酸を樹脂に結合させた。次に、Ｎ末端のＦｍｏ
ｃ保護基を除去することを目的として、実施例１におけ
る１）〜６）の工程を更に行った後、樹脂からの切り出
しを行ったこと以外は、実施例１と同様にして行うこと
により、化合物（10）の酢酸塩が得られる。

【００５８】実施例１１：化合物（11）＝フェニルプロ
ピオニル-Lys-Asn-Leu-Asp-Ala-OH の合成 表８に記載の樹脂及び保護アミノ酸を用い、実施例１と
同様にして行うことにより、これらの保護アミノ酸を樹
脂に結合させた。次に、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液
で処理することにより、Ｎ末端のＦｍｏｃ保護基を除去
したこと、その結果遊離状態になったＮ末端アミノ酸の
アミノ基に、ＤＣＣ−ＨＯＢｔ法（脱水剤のＤＣＣと反
応促進剤のＨＯＢｔを用いた脱水縮合反応）により、フ
ェニルプロピオン酸を縮合させたこと以外は、実施例１
と同様にして行うことにより、化合物（11）の酢酸塩が
得られる。

【００５９】実施例１２：化合物（12）＝Z-Ile-Thr-Th
r-Pro-Asp-OHの合成 実施例１において、表９に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（12）の酢酸塩が得られる。実施例１３ ：化合物（13）＝Z-Asp-Pro-Thr-Thr-Asn-OH
の合成 実施例１において、表９に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（13）の酢酸塩が得られる。実施例１４ ：化合物（14）＝Z-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-OH
の合成 実施例１において、表９に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（14）の酢酸塩が得られる。実施例１５ ：化合物（15）＝Z-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-OH
の合成 実施例１において、表９に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（15）の酢酸塩が得られる。

【００６０】実施例１６：化合物（16）＝Z-Lys-Leu-Gl
n-Ala-Gln-OH の合成 実施例１において、表９に記載の樹脂及び保護アミノ酸
を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことによ
り、化合物（16）の酢酸塩が得られる。実施例１７ ：化合物（17）＝Z-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-OH
の合成 実施例１において、表１０に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（17）の酢酸塩が得られる。実施例１８ ：化合物（18）＝H-His-Leu-Ile-Leu-Arg-NH
₂ の合成 実施例１０において、表１０に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（18）の酢酸塩が得られる。

【００６１】実施例１９：化合物（19）＝H-His-Leu-Il
e-Leu-Arg-OHの合成 表１０に記載の樹脂及び保護アミノ酸を用い、実施例１
と同様にして行うことにより、全ての保護アミノ酸を樹
脂に結合させた。次に、Ｎ末端のＦｍｏｃ保護基を除去
することを目的として、実施例１において更に上記１）
〜６）の工程を行った後、樹脂からの切り出しを行った
こと以外は、実施例１と同様にして行うことにより、化
合物（19）の酢酸塩が得られる。

【００６２】実施例２０：化合物（20）＝H-Leu-Ile-Le
u-Arg-NH₂ の合成 実施例１０において、表１０に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は施例１０と同様にして行うこと
により、化合物（20）の酢酸塩が得られる。実施例２１ ：化合物（21）＝H-Leu-Arg-NH₂ の合成 実施例１０において、表１０に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（21）の酢酸塩が得られる。 実施例２２ ：化合物（22）＝Z-Leu-Arg-Ser-Phe-Lys-OH
の合成 実施例１において、表１０に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（22）の酢酸塩が得られる。実施例２３ ：化合物（23）＝フェニルプロピオニル-Arg
-Ser-Phe-Lys-Glu-OH の合成 実施例１１において、表１１に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１１と同様にして行うこ
とにより、化合物（23）の酢酸塩が得られる。 実施例２４ ：化合物（24）＝Z-Ser-Ser-Leu-Arg-Ala-OH
の合成 実施例１において、表１１に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（24）の酢酸塩が得られる。実施例２５ ：化合物（25）＝H-Leu-Arg-Ala-Leu-Arg-NH
₂ の合成 実施例１０において、表１１に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（25）の酢酸塩が得られる。

【００６３】実施例２６：化合物（26）＝H-Arg-Ala-Le
u-Arg-NH₂ の合成 実施例１０において、表１１に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（26）の酢酸塩が得られる。 実施例２７ ：化合物（27）＝H-Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Se
r-Ser-Leu-Arg-NH₂ の合成 実施例１０において、表１２に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（27）の酢酸塩が得られる。 実施例２８ ：化合物（28）＝Z-Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gl
y-OHの合成 実施例１において、表１２に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（28）の酢酸塩が得られる。実施例２９ ：化合物（29）＝H-Ser-Ser-Phe-Tyr-NH₂ の
合成 実施例１０において、表１２に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（29）の酢酸塩が得られる。 実施例３０ ：化合物（30）＝H-Cys(Acm)-Phe-Arg-Lys-S
er-Pro-Leu-Ser-Asn-Val-Val-Cys(Acm)-OHの合成 実施例１９において、表１３に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１９と同様にして行うこ
とにより、化合物（30）の酢酸塩が得られる。

【００６４】実施例３１：化合物（31）＝H-Asn-Ser-Se
r-Phe-Tyr-OHの合成 実施例１９において、表１３に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１９と同様にして行うこ
とにより、化合物（31）の酢酸塩が得られる。 実施例３２ ：化合物（32）＝Z-Ala-Val-Pro-Glu-Gly-OH
の合成 実施例１において、表１３に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（32）の酢酸塩が得られる。実施例３３ ：化合物（33）＝Z-Glu-Gly-Asp-Ser-Ser-NH
₂ の合成 実施例８において、表１４に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例８と同様にして行うことに
より、化合物（33）の酢酸塩が得られる。実施例３４ ：化合物（34）＝Z-Ile-Leu-Gln-Pro-Asp-OH
の合成 実施例１において、表１４に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（34）の酢酸塩が得られる。実施例３５ ：化合物（35）＝H-Ala-Arg-Asn-Pro-Arg-NH
₂ の合成 実施例１０において、表１４に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（35）の酢酸塩が得られる。

【００６５】実施例３６：化合物（36）＝H-Glu-Trp-Al
a-Thr-His-Lys-NH₂ の合成 実施例１０において、表１４に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（36）の酢酸塩が得られる。 実施例３７ ：化合物（37）＝H-Asn-Glu-Gly-Lys-Lys-NH
₂ の合成 実施例１０において、表１５に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（37）の酢酸塩が得られる。 実施例３８ ：化合物（38）＝Z-Glu-Glu-Leu-Ser-Ser-OH
の合成 実施例１において、表１５に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（38）の酢酸塩が得られる。実施例３９ ：化合物（39）＝H-Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr-NH
₂ の合成 実施例１０において、表１５に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１０と同様にして行うこ
とにより、化合物（39）の酢酸塩が得られる。 実施例４０ ：化合物（40）＝H-Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn-OH
の合成 実施例１９において、表１５に記載の樹脂及び保護アミ
ノ酸を用いたこと以外は実施例１９と同様にして行うこ
とにより、化合物（40）の酢酸塩が得られる。

【００６６】実施例４１：化合物（41）＝Z-Thr-Val-Gl
n-Asp-Leu-OHの合成 実施例１において、表１５に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと以外は実施例１と同様にして行うことに
より、化合物（41）の酢酸塩が得られる。実施例４２ ：化合物（42）＝Z-Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-OH
の合成 実施例１において、表１６に記載の樹脂及び保護アミノ
酸を用いたこと、及びFmoc-Lys(Boc) 導入後の操作で、
化合物合成手順２）での反応時間を３分間から１分間に
変更し、更に３）の操作を省略したこと以外は実施例１
と同様にして行うことにより、化合物（42）の酢酸塩が
得られる。

【００６７】試験例１：ヒトＳＫＷ６．４細胞を用いた
ＩＬ−６によるＩｇＭ抗体産生抑制試験 ヒトリコンビナントＩＬ−６（ｈｒＩＬ−６）に対す
る、本発明に用いられるペプチドの拮抗作用を調べるた
めに、被験物質として、上記実施例で合成した化合物の
うち（３），（１９）及び（３７）の３種類を用い、該
化合物を最終濃度が８００μｇ／ｍｌになるように適宜
希釈した。ＩｇＭ抗体産生細胞としてヒトＳＫＷ６．４
細胞を用い、９６穴のマイクロプレートの各ウエルに１
×１０⁴ 個の上記細胞を加え、上記被験物質及び適当量
のｈｒＩＬ−６と共に、炭酸ガスインキュベーター中で
３７℃で４日間培養した。培養終了後、１２００ｒｐｍ
で５分間遠心して得られた培養上清を集め、この上清中
に含まれるＩｇＭ抗体量をＥＬＩＳＡ法により定量し
た。なお、対照試験として、被験物質を加えないで上記
の方法と同様にしてＩｇＭ抗体量を定量した。上記化合
物の添加によるＩｇＭ抗体産生阻害率を次式により算出
した。

【００６８】

【数１】 その測定結果を表１７に示す。

【００６９】

【表１７】

【００７０】表１７から明らかな様に、化合物（３），
（１９）及び（３７）はいずれも、ＩｇＭ抗体産生を著
しく阻害することが分かった。

【００７１】

【発明の効果】本発明によれば、ＩＬ−６に対して拮抗
的に作用し、その活性発現を阻害することができるＩＬ
−６拮抗剤が提供されるので、ＩＬ−６に起因すると考
えられる種々の自己免疫疾患の治療薬として有用であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＵ Ｃ０７Ｋ 5/10 7/06 8318−4Ｈ 7/08 8318−4Ｈ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ (72)発明者 木村 仁 つくば市千現１−14−14 パークハイツ千 現404号 (72)発明者 妹尾 八郎 門真市千石東町12−１ (72)発明者 関 信男 茨木市橋の内２−12−28−303

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｗ−Ｙ （式中、Ｘは水素またはアミノ保護基、 Ｙは水酸基またはカルボキシ保護基、 Ｗは以下のＡ〜Ｄのいずれかで示されるアミノ酸配列の
   全部、またはその一部を連続して含むペプチドのＮ末端
   から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ末端から
   水酸基を１個除いた２価の基を表す。但し、Ｗにおいて
   該アミノ酸配列中の遊離のメルカプト基は、メルカプト
   保護基で保護されていてもよい。）で示されるペプチド
   類または医薬として許容されるその塩類、及び医薬とし
   て許容される担体を含有することを特徴とするインター
   ロイキン６拮抗剤。 Ａ： -Thr-Ser-Ser-Glu-Arg-Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-Arg
   -Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-T
   hr-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys-Glu-Ser-Ser-Lys-Glu
   -Ala-Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Asn-Leu-Pro-Lys-Met-A
   la-Glu-Lys- Ｂ： -Lys-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala
   -Lys-Asn-Leu-Asp-Ala-Ile-Thr-Thr-Pro-Asp-Pro-Thr-T
   hr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn
   -Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-A
   rg-Ser-Phe-Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg-Ala
   -Leu-Arg-Gln-Met- Ｃ： -Ser-Cys-Phe-Arg-Lys-Ser-Pro-Leu-Ser-Asn-Val
   -Val-Cys-Glu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ser-Thr-Pro-Ser-Leu-T
   hr-Thr-Lys-Ala-Val-Leu-Leu-Val-Arg-Lys-Phe-Gln-Asn
   -Ser-Pro-Ala-Glu-Asp-Phe-Gln-Glu-Pro-Cys-Gln-Tyr-S
   er-Gln-Glu-Ser-Gln-Lys-Phe-Ser-Cys-Gln-Leu-Ala-Val
   -Pro-Glu-Gly-Asp-Ser-Ser-Phe-Tyr-Ile-Val-Ser-Met-C
   ys-Val-Ala-Ser-Ser-Val-Gly-Ser-Lys-Phe-Ser-Lys-Thr
   -Gln-Thr-Phe-Gln-Gly-Cys-Gly-Ile-Leu-Gln-Pro-Asp-P
   ro-Pro-Ala-Asn-Ile-Thr-Val-Thr-Ala-Val-Ala-Arg-Asn
   -Pro-Arg-Trp-Leu-Ser-Val-Thr-Trp-Gln-Asp-Pro-His-S
   er-Trp-Asn-Ser-Ser-Phe-Tyr-Arg-Leu-Arg-Phe-Glu-Leu
   -Arg-Tyr-Arg-Ala-Glu-Arg-Ser-Lys-Thr-Phe-Thr-Thr-T
   rp-Met-Val-Lys-Asp-Leu-Gln-His-His-Cys-Val-Ile-His
   -Asp-Ala-Trp-Ser-Gly-Leu-Arg-His-Val-Val-Gln-Leu-A
   rg-Ala-Gln-Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gly- Ｄ： -Gly-Leu-Pro-Pro-Glu-Lys-Pro-Lys-Asn-Leu-Ser
   -Cys-Ile-Val-Asn-Glu-Gly-Lys-Lys-Met-Arg-Cys-Glu-T
   rp-Asp-Gly-Gly-Arg-Glu-Thr-His-Leu-Glu-Thr-Asn-Phe
   -Thr-Leu-Lys-Ser-Glu-Trp-Ala-Thr-His-Lys-Phe-Ala-A
   sp-Cys-Lys-Ala-Lys-Arg-Asp-Thr-Pro-Thr-Ser-Cys-Thr
   -Val-Asp-Tyr-Ser-Thr-Val-Tyr-Phe-Val-Asn-Ile-Glu-V
   al-Trp-Val-Glu-Ala-Glu-Val-Ala-Leu-Gly-Lys-Val-Thr
   -Ser-Asp-His-Ile-Asn-Phe-Asp-Pro-Val-Tyr-Lys-Val-L
   ys-Pro-Asn-Pro-Pro-His-Asn-Leu-Ser-Val-Ile-Asn-Ser
   -Glu-Glu-Leu-Ser-Ser-Ile-Leu-Lys-Leu-Thr-Trp-Thr-A
   sn-Pro-Ser-Ile-Lys-Ser-Val-Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn
   -Ile-Gln-Tyr-Arg-Thr-Lys-Asp-Ala-Ser-Thr-Trp-Ser-G
   ln-Ile-Pro-Pro-Glu-Asp-Thr-Ala-Ser-Thr-Arg-Ser-Ser
   -Phe-Thr-Val-Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-Phe-Thr-Glu-Tyr-V
   al-Phe-Arg-Ile-Arg-Cys-Met-
2. 【請求項２】 Ａの一部を連続して含むものが、下記式
   （１）〜式（７）のいずれかで示される請求項１に記載
   のインターロイキン６拮抗剤。 式（１）： -Lys-Gln-Ile-Arg-Tyr- 式（２）： -Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly- 式（３）： -Glu-Ser-Ser-Lys-Glu- 式（４）： -Ser-Lys-Glu-Ala-Leu- 式（５）： -Lys-Glu-Ala-Leu-Ala- 式（６）： -Glu-Ala-Leu-Ala-Glu- 式（７）： -Leu-Ala-Glu-Asn-Asn-
3. 【請求項３】 Ｂの一部を連続して含むものが、下記式
   （８）〜式（２３）のいずれかで示される請求項１に記
   載のインターロイキン６拮抗剤。 式（８） ： -Gln-Lys-Lys-Ala-Lys- 式（９） ： -Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（１０）： -Ala-Lys-Asn-Leu-Asp- 式（１１）： -Lys-Asn-Leu-Asp-Ala- 式（１２）： -Ile-Thr-Thr-Pro-Asp- 式（１３）： -Asp-Pro-Thr-Thr-Asn- 式（１４）： -Ala-Ser-Leu-Leu-Thr- 式（１５）： -Leu-Thr-Lys-Leu-Gln- 式（１６）： -Lys-Leu-Gln-Ala-Gln- 式（１７）： -Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- 式（１８）： -His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（１９）： -Leu-Arg-Ser-Phe-Lys- 式（２０）： -Arg-Ser-Phe-Lys-Glu- 式（２１）： -Ser-Ser-Leu-Arg-Ala- 式（２２）： -Leu-Arg-Ala-Leu-Arg- 式（２３）： -Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg-
4. 【請求項４】 Ｃの一部を連続して含むものが、下記式
   （２４）〜式（３１）のいずれかで示される請求項１に
   記載のインターロイキン６拮抗剤。 式（２４）： -Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gly- 式（２５）： -Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２６）： -Cys(Acm)-Phe-Arg-Lys-Ser-Pro-Leu-Ser
   -Asn-Val-Val-Cys(Acm)- （式中、Acm はCys 中のメルカプト基を保護するアセト
   アミドメチル基を示す。） 式（２７）： -Asn-Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２８）： -Ala-Val-Pro-Glu-Gly- 式（２９）： -Glu-Gly-Asp-Ser-Ser- 式（３０）： -Ile-Leu-Gln-Pro-Asp- 式（３１）： -Ala-Arg-Asn-Pro-Arg-
5. 【請求項５】 Ｄの一部を連続して含むものが、下記式
   （３２）〜式（３８）のいずれかで示される請求項１に
   記載のインターロイキン６拮抗剤。 式（３２）： -Glu-Trp-Ala-Thr-His-Lys- 式（３３）： -Asn-Glu-Gly-Lys-Lys- 式（３４）： -Glu-Glu-Leu-Ser-Ser- 式（３５）： -Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr- 式（３６）： -Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn- 式（３７）： -Thr-Val-Gln-Asp-Leu- 式（３８）： -Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-
6. 【請求項６】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｗ−Ｙ （式中、Ｘは水素またはアミノ保護基、 Ｙは水酸基またはカルボキシ保護基、 Ｗは以下の式（１）〜（３８）のいずれかで示されるア
   ミノ酸配列を含むペプチドのＮ末端から水素原子を１個
   除き、且つ該ペプチドのＣ末端から水酸基を１個除いた
   ２価の基を表す。但し、Ｗにおいて該アミノ酸配列中の
   遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基で保護されて
   いてもよい。）で示されるペプチド類または医薬として
   許容されるその塩類。 式（１） ： -Lys-Gln-Ile-Arg-Tyr- 式（２） ： -Tyr-Ile-Leu-Asp-Gly- 式（３） ： -Glu-Ser-Ser-Lys-Glu- 式（４） ： -Ser-Lys-Glu-Ala-Leu- 式（５） ： -Lys-Glu-Ala-Leu-Ala- 式（６） ： -Glu-Ala-Leu-Ala-Glu- 式（７） ： -Leu-Ala-Glu-Asn-Asn- 式（８） ： -Gln-Lys-Lys-Ala-Lys- 式（９） ： -Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（１０）： -Ala-Lys-Asn-Leu-Asp- 式（１１）： -Lys-Asn-Leu-Asp-Ala- 式（１２）： -Ile-Thr-Thr-Pro-Asp- 式（１３）： -Asp-Pro-Thr-Thr-Asn- 式（１４）： -Ala-Ser-Leu-Leu-Thr- 式（１５）： -Leu-Thr-Lys-Leu-Gln- 式（１６）： -Lys-Leu-Gln-Ala-Gln- 式（１７）： -Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- 式（１８）： -His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（１９）： -Leu-Arg-Ser-Phe-Lys- 式（２０）： -Arg-Ser-Phe-Lys-Glu- 式（２１）： -Ser-Ser-Leu-Arg-Ala- 式（２２）： -Leu-Arg-Ala-Leu-Arg- 式（２３）： -Lys-Glu-Phe-Leu-Gln-Ser-Ser-Leu-Arg- 式（２４）： -Glu-Glu-Phe-Gly-Gln-Gly- 式（２５）： -Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２６）： -Cys(Acm)-Phe-Arg-Lys-Ser-Pro-Leu-Ser
   -Asn-Val-Val-Cys(Acm)- （式中、Acm はCys 中のメルカプト基を保護するアセト
   アミドメチル基を示す。） 式（２７）： -Asn-Ser-Ser-Phe-Tyr- 式（２８）： -Ala-Val-Pro-Glu-Gly- 式（２９）： -Glu-Gly-Asp-Ser-Ser- 式（３０）： -Ile-Leu-Gln-Pro-Asp- 式（３１）： -Ala-Arg-Asn-Pro-Arg- 式（３２）： -Glu-Trp-Ala-Thr-His-Lys- 式（３３）： -Asn-Glu-Gly-Lys-Lys- 式（３４）： -Glu-Glu-Leu-Ser-Ser- 式（３５）： -Ile-Ile-Leu-Lys-Tyr- 式（３６）： -Ile-Leu-Lys-Tyr-Asn- 式（３７）： -Thr-Val-Gln-Asp-Leu- 式（３８）： -Gln-Asp-Leu-Lys-Pro-