JPH07501350A - 安定化酵素を有する液体洗浄剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 安定化酵素を有する液体洗浄剤 本発明は酵素組成物および液体洗浄剤組成物に関する。

詳しくは、本発明は安定化された酵素および該安定化された酵素を有する液体洗 濯洗浄剤に関する。

２、　従来技術 近年、布を洗浄する洗浄剤の開発が着実に改良されている。洗浄剤添加物におけ る改良は、界面活性剤、ビルダー、分散剤、蛍光増白剤、漂白剤等の改良を含み 、洗浄剤を粉末、小粒および液体に配合せしめている。例えば、ここに参照文献 として包含する米国特許第３．５５１．００２号、第３，５５８、４９８号、第 ３．６２３．９５７号、第３．７４９．６７１号、第３．７９０．４８２号、第 ３．９８５．６８６号、第４．０９０．９７３号、第４．０１１．１６９号、第 ４．０１．８５５号、第４．１４２．９９９号、第４．２４２．２１９号、第４ ゜２６１、８６８号、第４．３１８．８１８号、第４．４０４．１１５号、およ び第４、３８１．２４７号の洗浄剤組成物を参照のこと。

洗浄剤組成物はしばしば、酵素感受性のしみ、泥および付着物の分解と除去を補 助する酵素（例えば、プロテアーゼ）を含有する。しかしながら、酵素を含有す る洗浄剤配合物、特に高水準の界面活性剤と水を含有する液体洗浄剤は、ある期 間に亘り酵素活性が低減するという問題に出くわす。酵素は水中で加水分解する こともあり、しばしばプロテアーゼはそれ自身で分解し、または存在する他の酵 素を分解する。界面活性剤、例えばアルキル硫酸塩は、酵素を奪活し、その酵素 を不活化する傾向にある。洗浄剤ビルダーは、酵素の安定性に必要なカルシウム イオンを封鎖し得る。これらの問題には、洗浄剤の使用期限または洗浄剤に添加 する高価な酵素の量を増加させるという望ましくない選択肢を要する。それゆえ 、安定化され、ある期間に亘り大きな活性を示す酵素を含有する液体洗浄剤が引 き続き必要とされている。従来技術は、これらの問題を処理しようとしてきた。

米国特許第３．０９５．３５８号においてメイスターは、ソルビトールを用いて 、パパインおよびバシラスサブチリスから得たアミラーゼとプロテアーゼの混合 物のような酵素を含有する水溶液を安定化させている。この方法はまた、大量の 安定剤を必要とする。いくっがの特許は酵素を安定化する化合物を列記している 。しかしながら、以下のどの特許も匹敵する阻害剤ではない。

米国特許第３．２９６．０９４号においてケイルは、部分的に加水分解され可溶 化せしめられたコラーゲンとグリセロールを用いてタンパク質分解酵素の水溶液 を安定化せしめている。この方法には、溶液合計の重量に対して大量のグリセロ ールを必要とし、それゆえ、酵素溶液の費用を著しく上昇せしめている。

米国特許第３．５５７．００２号においてマツフカ−ティーは、安定化酵素の調 製に、短鎖アルキルまたはアルコキシアルキルモノヒドロキシアルコールを使用 している。これらの調製により、１００°Ｆでの５週間に亘る貯蔵後に、少なく とも５０％の酵素活性に列記した酵素を保護している。米国特許第４．０１１． １．６９号においてシールは、アミノ化セルロースのようなアミノ化多糖類を使 用して、酵素活性を安定化せしめている。

米国特許第４．１４２．９９９号においてブローチングは、−価と多価アルコー ルおよびそのエーテル、並びに効果的な量のアルコキシル化アルキルアミンを用 いて酵素活性を安定化せしめている。

１９８１年４月１４日に発行されたホーラ等の米国特許第４，２６１、８６８号 は、酵素と、酵素安定化システムとして、２−２５％の、ジェタノールアミン、 トリエタノールアミン、ジイソプロパツールアミン、トリイソプロパツールアミ ンおよびトリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタンから選択される多官能価ア ミノ化合物、並びに０．２５−１５％の、ホウ酸、酸化ホウ素、ホウ砂、および オルト、メタそしてノ々ラホウ酸すｌ・リウムから選択されるホウ素化合物とを 含有する液体洗浄剤を開示している。この組成物は、陰イオンを含む１０−６０ ％の界面活性剤、および４０％までのビルダーを含有し得る。

１９８２年３月９日に発行されたレトン等の米国特許第４，３１８、８１８号は 、酵素と、カルシウムイオンおよび低分子量カルボン酸または酸塩、好ましくは 蟻酸塩からなる酵素安定化システムとを含有する液体洗浄剤を開示している。こ の組成物は好ましくは約２０％から５０％の界面活性剤を含有する。この界面活 性剤は陰イオンでもよい。好ましい実施態様において、組成物は約３％から１５ ％の飽和脂肪酸を含有する。その組成物は一方では実質的にビルダーを含まない が、少量の金属イオン封鎖剤を含有し得る。

通常指定される、米国特許第５．０３９．４４６号は、酵素と、ロイペプチン（ ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ）である酵素阻害剤からなる酵素安定化システムとを含有す る液体洗浄剤を開示している。この特許は、本発明の出願臼の後に発行された。

１９８３年９月１３日に発行されたタイの米国特許第４．４０４．１１５号は、 酵素、１−１５％のアルカリ金属ペンタホウ酸塩、０−１５％のアルカリ金属亜 硫酸塩、および０−１５％の、２−６のヒドロキシル基を有するポリオールを含 有する、液体洗浄組成物、好ましくはビルト（ｂｕｉｌｔ）液体洗浄剤を開示し ている。この組成物は、石鹸を有するものと有さないものの、１−６０％の界面 活性剤、好ましくは６：１から１：１の重量比の陰イオンと非イオンの混合物を 含有し得る。

この組成物はまた、好ましくは５−５０％のビルダーを含有する。

１９８５年１月９日に発行されたヨーロッパ特許第０．１３０．７５６号は、こ れに有用なタンパク質分解酵素およびその調製方法を開示している。この酵素は 、液体と小粒の両方で洗濯洗浄剤に有用であると言われている。この酵素は、界 面活性剤（陰イオンを含む）、ビルダー、漂白剤および／または蛍光増白剤と組 み合わせられるが、特定の洗浄剤組成物の開示はない。

１９８６年１０月１０日に発行されたヨーロッパ特許第０．１９９．４０５号は 、合成界面活性剤、酵素および約０．１％から約１０％、好ましくは０．２５％ から５％、そして最も好ましくは約０．５％から約３％のホウ酸またはホウ素化 合物を含有する液体洗浄剤組成物を開示している。しかしながら、酵素とホウ酸 を適合せしめる開示はない。酵素の百分率に関して、ホウ酸は、少なくとも２％ から１００．０００％までである。

従来技術は、大量の追加の成分の添加並びに水と他の成分の量に基づいて添加し なければならない安定剤の量の教示を変化せしめることにより生じる希釈の困難 により、酵素の安定化にかかる費用と出費を例証している。

それゆえ、本発明の目的は、水、洗浄剤または存在する場合には液体洗浄剤中の 他の成分の存在下で最少の標準化量の安定剤と、製造者および消費者にとっての 最少コストで酵素および液体洗浄剤中の酵素を安定化せしめることにある。

本発明によると、そのような問題に対して酵素が安定化せしめられることを発見 した。本発明は、ａ）　約１％から約７５％の界面活性剤、ｂ）　重量で約ｌθ ％から約９５％の水、Ｃ）　約０．０１％から約５％の、洗浄剤組成物への使用 に適した酵素、および ｄ）　洗浄剤の使用前に、酵素阻害剤が少なくとも約９θ％の酵素を結合せしめ 、残りの酵素が遊離形態にあるような、効果的な量の酵素阻害剤からなり、この 組成物を２から１０．０００倍に希釈した場合に、少なくとも約２５％の結合酵 素が遊離形態に解放されることを特徴とする液体洗浄剤に関する。

本発明はまた、 ａ）　洗浄剤組成物への使用に適した酵素、およびｂ）　少なくとも約９０％の 酵素が酵素阻害剤に結合せしめられ、残りの未結合酵素が遊離形態にあるような 、効果的な量の酵素阻害剤からなる、この組成物を２から１００．０００倍に希 釈した場合に、少なくとも約２５％の結合酵素が遊離形態に解放されることを特 徴とする安定化酵素組成物に基本液体洗浄剤組成物は、界面活性剤、好ましくは 非イオンまたは陰イオン界面活性剤および酵素と酵素阻害剤に加えて重量基準で 約１０％から約９５％の水を含有する。安定剤の量を変化せしめることが教示さ れているが、一般的に阻害剤は洗浄剤組成物の少なくとも約０．１％であると教 示されている。

本発明の好ましい組成物は、重量で、約１％から約７５％の、好ましくは約１０ ％から約４０％の、そして最も好ましくは約１５％から約３０％の界面活性剤を 含有する。適切な陰イオン合成界面活性剤は、１９８１年８月２５日に発行され たバラッド等の米国特許第４．１１１．８５５号、および１９７５年１２月３０ 日に発行されたラフリン等の米国特許第３．９２９．６７８号に開示されており 、両方をここに参照文献として包含する。

有用な界面活性剤はまた、分子構造中に、約１０から約２０の炭素原子を含有す るアルキル基およびスルホン酸または硫酸エステル基を有する有機硫酸反応生成 物の、水溶性塩、好ましくはアルカリ金属、アンモニウムおよびアルキロールア ンモニウム（例えば、モノエタノールアンモニウムまたはトリエタノールアンモ ニウム）塩を含有する。（「アルキル」という用語に、アリル基のアルキル部分 を含む。）合成界面活性剤のこの群の実施例は、アルキル硫酸塩、特に、獣脂ま たはヤシ油のグリセリドを還元することにより製造したアルコールのような高級 アルコール（Ｃ８Ｃｐｓの炭素原子）を硫酸化することにより製造した硫酸塩、 およびアルキル基が、直鎖または枝分れ鎖形状にある、約９から１５の炭素原子 を含有する、アルキルベンゼンスルホン酸塩、例えば、米国特許第２．２２０． ０９９号および第２．４７７、３８３号に記載した種類のアルキルベンゼンスル ホン酸塩である。アルキル基の平均炭素原子数が約１１から１４である、線状直 鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩が特に価値がある。

ここに用いられる他の陰イオン界面活性剤は、約８から約２４（好ましくは約１ ２から１８）の炭素原子を含有するパラフィンスルホン酸塩、アルキルグリセリ ルエーテルスルホン酸塩、特にＣＳ−＋Ｓアルコールのエーテル（例え、獣脂お よびヤシ油から誘導したもの）、１分子当たり約１から４単位のエチレンオキシ ドを含有するアルキルフェノールエチレンオキシドエーテル硫酸塩、および１分 子当たり１から４単位のエチレンオキシドおよびアルキル基中に約１０から約２ ０の炭素原子を含有するアルキルエチレンオキシドエーテル硫酸塩の、水溶性塩 である。

他の有用な陰イオン界面活性剤は、脂肪酸基中に約６から２０の炭素原子および エステル基中に約１から１０の炭素原子を含有するアルファースルホン化脂肪酸 のエステルの水溶性塩、アシル基中に約２から９の炭素原子およびアルカン部分 中に約９から約２３の炭素原子を含有する２−アシロキシ−アルカン−１−スル ホン酸の水溶性塩、約１２から２４の炭素原子を含有するオレフィンスルホン酸 塩の水溶性塩、およびアルキル基中に約１から３の炭素原子およびアルカン部分 中に約８から２０の炭素原子を含有するベーターアルキルオキシアルカンスルホ ン酸塩を含む。

好ましい陰イオン界面活性剤は、Ｃ，、−ｃ、３線状アルキルベンゼンスルホン 酸塩、およびその混合物である。

組成物は好ましくは、重量で、約１％から約５％の、より好ましくは約２％から 約４％のエトキシル化されていないアルキル硫酸塩を含有する。これらのアルキ ル硫酸塩は、一部には汚れを非常に変性させやすい（ｄｅｎａｔｕｒｊｎｇ　ｔ ｏ　５ｔａｉｎｓ）ので、最良の洗浄性能にとって望ましい。

本発明の組成物は、前述したバラッド等およびラフリン等の特許に記載された非 イオン、陽イオン、双性イオン、および両性界面活性剤のような、従来技術で知 られている他の合成界面活性剤を任意に含有し得る。

組成物の重量で、約１％から約２５％、好ましくは約３％から約１５％の水準で 用いられる好ましい共界面活性剤（ｃｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、化学式Ｒ’ 　（ＯＣ２Ｈ，Ｉ　）、ＯＨのエトキシル化非イオン界面活性剤であり、ここて Ｒ１はＣ、ｏ−Ｃ１６アルキリ基またはＣｓ　Ｃ＋　ｘアルキルフェニル基であ り、ｎは約３から約９であり、前記非イオン界面活性剤は約６から約１４、好ま しくは約１０から約１３のＨＬＢ　（ｈｙｄｒ。

ｐｈｉｌｅ−１ｉｐｏｐｈｉｌｅ　ｂａｌａｎｃｅ）を有する。これらの界面活 性剤は、１９８１年８月２５日に発行されたバラッド等の米国特許第４．２８５ ．８４１号および１９８１年８月１８日に発行されたレイヒム等の同第４．２８ ４．５３２号により詳細に記載されており、両方をここに参照文献として包含す る。アルコール１モル当たり約３から約８モルのエチレンオキシドを有するＣＩ □−Ｃ１６、例えばアルコール１モル当たり約６．５モルのエチレンオキシドと 縮合したＣ　Ｉ２−　ＣＩ３アルコールの縮合物が特に好ましい。

上述したエトキシル化非イオン界面活性剤の使用に適した好ましい共界面活性剤 は化学式 のアミドてあり、ここてＲ１は、約８から約２０の炭素原子を含有する、アルキ ル、ヒドロキシアルキルまたはアルケニルラジカルてあり、Ｒ２およびＲ３は、 水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−ヒドロキシエチル、２− ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシルプロピルからなる群より選択され、前記 ラジカルは追加に約５までのエチレンオキシド単位を含有し、少なくとも１つの Ｒ２とＲ３がヒドロキシル基を含有するように提供されている。

好ましいアミドは、各アルキロール基が約１から３の炭素原子を含有し、約２ま でのエチレンオキシド単位を追加に含有し得る。ＣＩ２　Ｃ１６脂肪酸モノエタ ノールおよびジェタノールアミドが特に好ましい。

本発明に用いるある組成物は、重量で、約５％から約２０％、好ましくは約６％ から約１５％、より好ましくは約７％から約１２％の、約４・１から１：４、好 ましくは約３＝１から約１・３、より好ましくは約２：１から約１：２の重量比 の上述したエトキシル化非イオン界面活性剤とアミド界面活性剤の混合物を好ま しくは含有する。さらに、陰イオン合成界面活性剤（酸ベースの）の合計非イオ ン界面活性剤（エトキシル化非イオンおよびアミドの両方）に対する重量比は、 約２：１から約４：１、好ましくは約２．５＝１から約３．５：１であり、油し みた泥の良好な除去を提供するのに十分な浦／水界面での硬度界面活性剤の形成 と吸着を確実にすべきである。

重量で、約０．５％から約３％、約０．７％から約２％の水準で用いられる、他 の好ましい共界面活性剤は、１９８５年３月２６日に発行され、ここに参照文献 として包含したハゲスの米国特許第４．５０７．２１９号に記載された第四アン モニウム、アミンまたはアミン酸化物界面活性剤である。

本発明の組成物は、１９７９年９月１９日に発行され、ここに参照文献として包 含するマーフィーのイギリス国特許第２゜０４１、９６８号に開示されたような 、２つの長鎖を有する第四アンモニウム陽イオン界面活性剤（例えば、それぞれ か平均で約１６から約２２の鎖を含有し、それぞれが平均約１６から約２２の炭 素鎖を含有する２つの鎖を有する界面活性剤）を含有し得るが、組成物は好まし くは、そのような界面活性剤の重量の約２％未満、より好ましくは約１％未満を 含有する。最も好ましくは、そのような界面活性剤は本発明の酵素の安定性に有 害であるように思われるので、本発明の組成物はそのような界面活性剤を実質的 に含まない。

本発明の組成物は、重量で、約５％から約４０％、好ましくは約８％から約３０ ％、より好ましくは約１０％から約２５％の洗浄剤ビルダー材料を必要に応じて 含有する。さらに、この組成物は、重量で、少なくとも約２０％、好ましくは約 ２５％から約６０％、より好ましくは約３０％から約５０％の陰イオン合成界面 活性剤およびビルダーを含有すべきである。

有用なビルダーは、約１０から約２２の炭素原子を含有する脂肪酸である。約１ ０から約１８、好ましくは約１０から約１４の炭素原子を含有する飽和脂肪酸が 好ましい。存在する場合には、脂肪酸は好ましくは、組成物の重量で、約５％か ら約２０％、より好ましくは約８％から約１６％を占める。

適した飽和脂肪酸は、植物または動物エステル（例えば、パーム核油、パーム油 およびヤシ油）のような天然源から得られるか、または合成的調製（例えば、石 油の酸化により、またはワイスター−トロプシュ法による一酸化炭素の水素添加 により）で得られる。本発明の組成物への使用に適した飽和脂肪酸の実施例は、 カプリン、ラウリン、ミリスチン、ヤシおよびパーム核脂肪酸を含む。ラウリン 酸とミリスチン酸の混合物が５＝１−から１：１（好ましくは３：１）の飽和ヤ シ脂肪酸、上述した混合物に小量（例えば、脂肪酸の合計の１％−３０％）のオ レイン酸を加えた脂肪酸、およびパーム核脂肪酸が好ましい。

本発明に有用な洗浄剤ビルダーはまた、１９８１年８月１８日に発行され、ここ に参照文献として包含するレイキム等の米国特許第４．２８４．５３２号に記載 の、ポリカルボキシレート、ポリホスフォネートおよびポリホスフェートビルグ ーを含む。水溶性ポリカルボキシレートビルダー、特にクエン酸塩がこの群で好 ましい。ポリカルボキシレートビルダーは好ましくは、組成物の重量で約１％か ら約２０％を占める。

適切なポリカルボキシレートビルダーは、様々なアミノポリカルボキシレート、 シクロアルケンポリカルボキシレート、エーテルポリカルボキシレート、アルキ ルポリカルボキシレート、エボキシボリカルボキシレート、テトラヒドロフラン ポリカルボキシレート、ベンゼンポリカルボキンレート、およびポリアセタール ポリカルボキシレートを含む。

そのようなポリカルボキシレートビルダーの実施例は、ナトリウムおよびカリウ ムエチレンジアミンテトラアセテート、ナトリウムおよびカリウムニトリロトリ アセテート、１９５６年３月２７日に発行され、ここに参照文献として包含する エラキーの米国特許第１．７３９．９４２号に開示されたフィチン酸の水溶性塩 、例えば、ナトリウムおよびカリウムフィテート、および参照文献としてここに 包含する米国特許第３、３６４．１０３号に記載のポリカルボキシレート物質で ある。

有用な洗浄剤ビルダーはまた、以下の構造特性と物理特性・（ａ）酸の形態に計 算して約３５０の最少分子量：（ｂ）酸の形態に計算して約５０から約８０の当 量；（ｃ）２以下の炭素原子だけ互いに離れている少なくとも２つのカルボキシ ラジカルを有する少なくとも４５モルパーセントの単量体種。

（ｄ）カルボキシ含有ラジカルのポリマー鎖の付着部位が、隣のカルボキシ含有 ラジカルの付着部位からポリマー鎖に沿って３つ以下の炭素原子だけ離れている ：を有する高分子脂肪族ポリカルボン酸の水溶性塩を含む。そのようなビルダー の特定実施例は、イタコン酸、アコニット酸、マレイン酸、メサコン酸、フマル 酸、メチレンマロン酸、およびシトラコン酸の重合体と共重合体である。

他の適切なポリカルボキシレートビルダーは、メリット酸、クエン酸、ピロメリ ット酸、ベンゼンペンタカルボン酸、オキシジ酢酸、カルボキシメチロキシマロ ン酸、カルボキシメチロキシマロン酸、シス−シクロヘキサンヘキサカルボン酸 、シス−シクロペンタンテトラカルボン酸、およびオキシシサクシン酸の、水溶 性塩、特にナトリウムおよびカリウム塩を含む。

本発明に使用される他のポリカルボキシレートは、１９７９年３月１３日にクラ ッチフィールド等に発行された米国特許第４．１４４．２２６号、および１９７ ９年３月２７日にクラッチフィールド等に発行された米国特許第４．１４６．４ ９５号に記載のポリアセタールカルボキシレートであり、両方をここに参照文献 として包含する。

本発明に有用な他の洗浄剤ビルダーは、１９８３年９月２０日にクゼル等に発行 され、ここに参照文献として包含する米国特許第４．４０５．４８３号に記載の アルミノケイ酸塩イオン交換物質を含む。

ビルグーシステムの一部として、本発明の組成物は好ましくは、重量で、約０． １から約１％、より好ましくは約０゜２％から約０．６％の、エチレンジアミン 　テトラメチレンホスフォン酸、ジエチレントリアミン　ペンタメチレンホスフ ォン酸、エチレンジアミン　テトラ酢酸、またはジエチレントリアミン　ペンタ 酢酸の水溶性塩を含有し、布を予洗する場合に洗浄性能を高める。

本発明の液体洗浄剤組成物中に含有する酵素は、洗浄剤組成物中への使用に適し たものであり、上述した従来技術によく知られている。好ましい酵素は、サブチ リシンのようなプロテアーゼ、およびバシラス種から得たようなアミラーゼであ る。好ましいプロテアーゼはまた、ここに参照文献として包含するヨーロッパ特 許第０１３０７５６８１号および１０９１１０６６３７号に記載されたプロテア ーゼである。１つ以上の酵素をこの組成物中に含んでもよい。

上述した酵素は好ましくは、組成物１グラム当たりのアンソン（＾ｎ５ｏｎ）単 位で、約０．００１から約０．１、より好ましくは約０．００５から約０．０７ 、最も好ましくは約０．０１から約０゜０４の活性を提供するのに十分な量で含 まれる。組成物の百分率基準では酵素は、液体洗浄剤組成物の重量の約０．０１ から約５％であることが好ましい。本発明の有用な酵素は、完成組成物中に包含 される前に、好ましくは精製されてる。

そのため、酵素は、蒸留水中の１グラム当たり約０．００２のアンソン単位未満 の濃度では検出可能な臭気を有さない。

酵素は、蒸留水中の１グラム当たりのアンソン単位で、約０、００２５、より好 ましくは約０．００３未満の濃度では検出可能な臭気を有さない。

本発明の組成物は、２０℃での蒸留水中０．２重量％の濃度において、約６．５ から約９．５、好ましくは約７から約８．５、最も好ましくは約７．２から約８ ．０の初期ｐ　Ｈを有する。好ましいｐＨ緩衝液はモノエタノールアミンおよび トリエタノールアミンを含む。モノエタノールアミンおよびトリエタノールアミ ンはまたさらに酵素安定性を高め、組成物の情景で、約０．５％から約１０％、 好ましくは約１％から約４％の水準で含まれる。

本発明の液体洗浄剤に使用される他の任意の成分は、従来技術で知られている、 汚れ除去剤、再付着防止剤、泡規制剤（ｓｕｄｓ　ｒｅｇｕｌａｎｔ　）　、ヒ ドロトロープ、不透明剤、酸化防止剤、殺菌剤、染料、香料、および漂白剤を含 む。そのような任意の成分は一般的に、組成物の重量の、約１５％未満、好まし くは約１％から約１０％を占める。

本発明の酵素阻害剤は、選択した酵素の競合阻害剤であるように選択される。以 下のように特異的に競合阻害剤を選択することにより、実質的に少量の酵素が用 いられる。

酵素阻害剤は、酵素の少なくとも約９０％が酵素の実質的な活性部位で酵素阻害 剤に結合し、残りの未結合酵素が組成物中で遊離形態にあるような量で選択され るが、約２から約１０．０００倍に、水または他の適切な液体により液体洗浄剤 を希釈したときに、または約２から約１００．０００倍に、水、洗浄剤、または 他の適切な液体により酵素組成物を希釈したときに、そのような結合酵素の少な くとも約２５％がその遊離形態に解放される。

好ましくは競合阻害剤は、希釈の前に少なくとも約９０％の酵素と結合する量で 存在し、希釈によりそのような結合酵素の少なくとも約４５％が活性形態に解放 される量で存在する。最も好ましくは、酵素阻害剤は、シチメンチョウオボムコ イド（ＴＯＭ）またはロイペプチンであり、選択的に阻害される酵素は、サブチ リシンのようなプロテアーゼである。酵素阻害剤がロイペプチンである場合、少 なくとも約５５％の酵素が、酵素の実質的な活性部位で酵素阻害剤に結合してい ることが好ましい。

阻害剤溶液を、２０ｍＭのモツプ、ｐＨ７の緩衝液中で調製し、エッペンドルフ に加える。０．８ｍＭのサブチリシンを加え、混合物を室温で１５分間に亘り培 養せしめる。１５分後、９９０　ｕ　］の混合物を、Ｌｏμｌの１００ｍｇ／ｍ ｌの５ＡＡＡｐｎａを含有するキュベツトに加える。加水分解の速度を４１０ｎ ｍでモニタする。阻害剤を含まないサブチリシン対照についてもこのことを行な う。結果を表１に示す。

希釈検定 上記阻害検定を１：１０に希釈して、標準サブチリシン検定緩衝液（０，００５ ％のツイーンを有する０、１Ｍ）リス、ｐＨ８，６）とする。次いでこの希釈し た物質の１０μｍを、１０μｌの１００　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌの５ＡＡＰＦｐｎ ａおよび９８０　μｍのサブチリシン検定緩衝液を含有するキュベツトに加える 。

反応速度を４１０ｎｍでモニタする。最終希釈は１　：　１０００である。デー タを表■に示す。

表　Ｉ 阻害検定　希釈検定 阻害剤　阻害％　回復活性％ 対照　０１００ ０、４ｍｇ／ｍｌのＴＯＭ　８２　３２２ｍｇ／ｍｌのＴ　ＯＭ　９７　４５ ＴＯＭの存在下での リパーゼとサブチリシンの安定性 ２ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌのＴＯＭを液体タイドＴＭ（ブロクター＆ギャンブル社か ら市販されている）に加えた。この溶液を１１５００に希釈して、標準サブチリ シン８．６トリス緩衝液とした。１０μＩのアリコートを様々な時間で採取し、 サブチリシン活性をモニタした。同様の希釈と検定方法を、液体タイドＴＭニツ イて行なった。１００ｍｇ／ｍｌの５ＡＡＰＦｐｎａ基質を用いた。データを表 ＩＩに示す。

表　ＩＩ 液体タイド１Ｍの存在下での ＴＯＭによるサブチリシンの阻害 時間　タイド＊　タイド＊　希釈により回復した（分）　活性　垣〔畦竺亘Ｌ　 活性％ ０　２．２５　１．０４　４６ １５　２．５４　０．９７　３８ ３０　２．９６　０．９６５　３３ ＊液体タイドＴＭは約２１ｇｍ／ｍｌのサブチリシンを含有する。

表■とＩＩのデータは、サブチリシンの約２　ｍ　ｇ　／　ｍ　ＩのＴＯＭによ る阻害は、少なくとも９０％の活性酵素を結合せしめることにより酵素活性を阻 害し、適切な希釈をすると直ぐに、結合酵素のその活性形態への解放により、〉 ２５％の酵素活性（４６％）が回復されることを示す。

国際調査報告　ｐｃ工／ＵＳ　９２１０５５２５ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０５５２ ５ ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０５５２５

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．ａ）約１％から約７５％の界面活性剤、ｂ）重量で約１０％から約９５％の 水、ｃ）約０．０１％から約５％の、洗浄剤組成物への使用に適した酵素、およ び ｄ）洗浄剤の使用前に、酵素阻害剤が少なくとも約９０％の酵素を結合せしめ、 残りの酵素が遊離形態にあるような、効果的な量の酵素阻害剤からなり、この組 成物を適切に希釈した場合に、少なくとも約２５％の結合酵素が遊離形態に解放 されることを特徴とする液体洗浄剤。
2. ２．４５％以上の結合酵素が前記洗浄剤の希釈により遊離形態に解放されること を特徴とする請求の範囲第１項記載の液体洗浄剤。
3. ３．前記酵素がプロテアーゼであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の液 体洗浄剤。
4. ４．前記プロテアーゼがサブチリシンであることを特徴とする請求の範囲第３項 記載の液体洗浄剤。
5. ５．前記酵素阻害剤がシチメンチョウオポムコイドであることを特徴とする請求 の範囲第１項記載の液体洗浄剤。
6. ６．前記酵素阻害剤がロイペプチンであることを特徴とする請求の範囲第１項記 載の液体洗浄剤。
7. ７．ａ）洗浄剤組成物への使用に適した酵素、およびｂ）少なくとも約９０％の 酵素が酵素阻害剤に結合せしめられ、残りの未結合酵素が遊離形態にあるような 、効果的な量の酵素阻害剤からなる、この組成物を適切に希釈した場合に、少な くとも約２５％の結合酵素が遊離形態的解放されることを特徴とする安定化酵素 組成物。
8. ８．４５％以上の結合酵素が前記組成物の希釈により遊離形態に解放されること を特徴とする請求の範囲第７項記載の酵素組成物。
9. ９．前記酵素がプロテアーゼであることを特徴とする請求の範囲第７項記載の酵 素組成物。
10. １０．前記プロテアーーゼがサブチリシンであることを特徴とする請求の範囲第 ９項記載の酵素組成物。
11. １１．前記酵素阻害剤がシチメンチョウオポムコイドであることを特徴とする請 求の範囲第７項記載の酵素組成物。
12. １２．前記酵素阻害剤がロイペプチンであることを特徴とする請求の範囲第７項 記載の酵素組成物。