JPH07507264A - 新規シタラビン誘導体、その製造及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規シタラビン誘導体、その製造及び使用本発明は、新規シタラビン誘導体、そ の製造及び疾患の制御のための使用に関する。

ＡｒａＣ（＝シタラビン＝４−アミノー１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（ ＩＨ）−ピリミジノン又はｌ−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、Ｍｅｒｃ ｋ　Ｉｎｄｅｘ第１１版、　Ｎｏ、　２７９０）は、癌の化学療法における証明 された利用性を有する抗腫傷薬である。しかしながら、ＡｒａＣは、体内に存在 するシトシンデアミナーゼによって容易に脱アミノ化を受け、それにより不活性 となる。従ってそれは、治療効果を達成するためには高投与量の投与をしければ ならず、それは患者にとって不快である副作用と関連する。

この素早い酵素的脱アミノ化を遅らせるため、シトシン残基のアミノ基にアシル 保護基が備えられた（［ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　３７　（１９８６）　１ ４９））。得られたＲ４−アシルＡｒａＣ誘導体の抗腫瘍作用は、しかしながら 、リポソームの形態でそれらを投与した場合においてすら、誘導体化していない ＡｒａＣのそれより少しもよくはなかった。

これらのＡｒ　ａＣプロドラッグのＲ４−アシルアミド結合は、ｉｎ　ｖｉｖｏ において酵素的脱アミノ化を少しの時間遅らせることができるに過ぎない。

我々は今や、酵素的脱アミノ化に対してシタラビンが一層効果的に防護されてい るものである、新規シタラビン誘導体を見出した。

本発明は、式Ｉ、 （式中、Ｒ１は、１乃至２個の二重結合を含んでいてもよく且つ分枝していても よい０２〜Ｃ２４アルキルであり、そしてＲ２、Ｒ３及びＲ４は、同−又は異な っていてよく、各々水素、脂肪族Ｃ２〜Ｃｓアシル、ベンゾイル又はカルボキシ Ｃ１〜Ｃ，アルキルカルボニルである）のシタラビン誘導体に関する。

Ｒ１のアルキルとして適しているのは、特に、ヘキサデシル及びオクタデシルで ある。

コハク酸から誘導される遊離基は、特にＲ２、Ｒ３及びＲ４に適するものとして 言及することができる。

式■の新規シタラビン誘導体は、式１１、（式中、Ａｃは、アセチルであり、Ｒ は、塩素であるか又はである）の化合物を式ＩＩ＋、 ＮＨ２Ｒ”　ｌ１ｌ （式中、Ｒ”は、ｌ乃至２個の二重結合を含んでいてもよく且つ分枝していても よい０２〜Ｃ２４アルキルである）のアミンと反応させ、そして続いて、場合に 応じて、得られた化合物中のアセチル基をＲ２、Ｒ２又はＲ４によって置換する ことによって、製造することができる。

この反応は、ジオキサン又はメタノールのような極性溶媒中において沸点にて良 好に起こる。

水素又は他のアシル基によるアセチル基の置換は、次のようにして行うことがで きる。

該アセチルラジカルは、水性又はメタノール性アンモニア中に２０乃至６０°Ｃ にて２乃至２４時間放置することによるアンモノリシスにより、水素によって置 換される。得られる化合物中のそれらの水素は、続いて、適当なカルボン酸無水 物又は塩化カルボニルとの反応により、アシル基によって置換される。

この反応は、ピリジン中室温にて良好に起こる。

この反応に必要な出発材料は、既知物質（Ｊ、Ｃ，Ｓ、　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｉ　（ １９８２）　１１７１　）であるか又は既知の方法によって製造できる。

この新規化合物は、改善されたデアミナーゼ抵抗性によってＡｒａＣから明確に 区別される。それらの両親媒性のため、それらは容易に水性薬剤形態へと変換さ れることができる。

驚くべきことに、本発明の該ＡｒａＣ誘導体のこの両親媒性を、各置換基の数、 長さ、性質及び配置によって広い範囲内において修飾することが更に可能である 。該両親媒性のＡｒａＣ誘導体は、従って水性の緩衝液系に可溶性であり及び／ 又はリポソームの形で分散できる。超音波、ゲルクロマトグラフィー又は界面活 性剤透析のような、リポソームを製造するためのあらゆる慣用の方法が、該リポ ソームを製造するために使用できる。各場合において導入された親油性の基もま た、他の脂質成分と共に該両親媒性ＡｒａＣ誘導体から形成されるリポソームの サイズ及び安定性に決定的な影響を及ぼす。

しかしながら、親油性の基を目標を定めて導入することによって、本発明のＡｒ 　ａＣ誘導体の該両親媒性を目標を定めた仕方で調節することができるのみなら ず、驚くべきことに、ＡｒａＣの抗腫瘍効果を決定的に最適化することができる 。

該新規化合物は、ＡｒａＣ自体と同様に、造血細胞の悪性疾患に、特に急性白血 病に及び慢性骨髄性白血病の芽球発症において用いることができる。

該両親媒性のＡｒａＣ誘導体の抗腫瘍性は、驚くべきことに、ある種の腫瘍細胞 の、目標を定めた破壊のための、免疫リポソームにおいて使用することができる 。これを行うためには、該両親媒性誘導体は、他の官能基を有する脂質成分と共 にリポソームの形で生理的緩衝系中に分散される。モノクローナル抗体が、該リ ポソーム膜上の該官能基に固定化される。得られる免疫リポソームは、１ｎｖｉ ｔｒｏにおいて該抗体に対応する抗原を発現している腫瘍細胞によって優先的に 取り込まれる。この細胞標的化の結果は、種々の細胞の混合物中における特定の 標的腫瘍再細胞の選択的破壊である。

該新規化合物の効果は、以下の設計になる実験において示すことができる。

Ｌ１２１０腫瘍細胞の静脈注射によって、ＤＢＡ／２マウスに白血病を惹起した 。該腫瘍細胞の注射の３及び７日目に、該腫瘍を有する動物に、種々の投与量の 試験物質又は溶媒を投与した。実験群は、次のものからなるものであった。

−対照群（溶媒） −静脈内投与（２投与量） −腹腔内投与（２投与量） −参照としての静脈内ＡｒａＣ（２投与量）−参照としての腹腔内ＡｒａＣ（２ 投与量）処置の結果を、各実験群（各群１０匹の動物）の各々の中間生存時間を 計算することによって評価した。

これらの実験において、該新規化合物は、ＡｒａＣより優れた効果を示した。

該新規化合物は、患者当たり及び１日当たり約４０乃至１０００ｍｇの投与量で 用いることが意図されている。

実施例１ ４−（１−ヘキサデシルアミノ）−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２（ＩＨ ）−ピリミジノン ６０ｇ　（１４２ｍｍｏｌ）の４−　（１，２，４−トリアゾール−１−イル） −１−β−Ｄ−２°、３’、５°　−トリー〇−アセチルアラビノフラノシル− ２（ＩＨ）−ピリミジノンを、４５０ｍＬの乾燥ジオキサンに溶解した。４５０ ｍＬのエタノールに溶解した５４ｇ（２１１ｍｍｏｌ）の１−ヘキサデシルアミ ンの溶液を、この溶液に滴下した。この混合物を、次いで、２時間還流し、続い て冷却した。溶媒を減圧下に溜去し、残ったシロップを、アンモニアを飽和した ７５０ｍＬのメタノールに溶解した。この溶液を室温にて約１２時間放置し、そ の間、所望の生成物が、徐々に沈殿した。結晶化を完全にするために、この混合 物を暫くの間−２０℃に貯蔵した。次いで沈殿を吸引濾去し、ジエチルエーテル で洗浄し、オーブンで約６０”Ｃにて乾燥させた。得られた粗生成物（約６０乃 至７０ｇ）を、８０％強度の水性メタノールから再結晶させた。これは、６０ｇ の４−（ｌ−ヘキサデシルアミノ）−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２（Ｉ Ｈ）−ピリミジノンを白色結晶性生成物として与え、それはクロロホルム／メタ ノール　４：１（ｖ：ｖ）系におけるシリカゲル上で０．４３のＲ１を有した。

実施例２ ４−（１−ヘキサデシルアミノ）−１−β−Ｄ−５°−０−スクシノイルアラビ ノフラノシルー２（ＩＨ）−ピリミジノン２ｇ　（４，３ｍｍｏｌ）の４−（ｌ −ヘキサデシルアミノ）−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２（ＩＨ）−ピリ ミジノンを、１０ｍＬの乾燥ピリジン中に溶解し、０．　７ｇ　（５，７ｍｍｏ ｌ）の４−ジメチルアミノピリジン及び０．７　ｇ　（７ｍｍｏｌ）のコハク酸 無水物を加えた。この混合物を室温にて約１２時間攪拌し、次いで、ピリジン／ 水　１：４（ｖ：ｖ）を用いて陽イオン交換カラム（ＬＥＷＡＴＩＴ、ピリミジ ン形）によってクロマトグラフィーした。溶出液を減圧上濃縮してシロップとし 、次いでそれをトルエンで数回溜去した。得られた泡を少量のクロロホルムに溶 解させ、１０％から１００％までエタノール含量が段階的に増大するクロロホル ム／エタノール混合液を用いて、シリカゲルカラムにより分画した。所望の生成 物を含んだ両分（高エタノール含量でカラムより溶出してきた）を合わせ、減圧 下に濃縮してシロップとした。このシロップを、クロロホルムに溶解させ、エー テル／ヘキサン混合液（３：２、Ｖ　：　Ｖ）の過剰量中で沈殿させた。Ｃ１゜ 逆相によるＨＰＬＣは、副生成物として生じた２°、３°異性体を除去した。所 望の生成物を含有する両分を濃縮し、４−（ｌ−ヘキサデシルアミノ）−１−β −Ｄ−５’−０−スクシノイルアラビノフラノシルー２（ＩＨ）−ピリミジノン を白色粉末として得、これはクロロホルム／エタノール　４　：　ｌ　（ｖ／Ｖ ）系中シリカゲル上で０．４７のＲ１値を有していた。

実施例３ リポソーム生成物の製造 リポソーム分散液を製造するため、ｍＬ当たり次のものを１／１のクロロホルム ／メタノール（Ｖ／Ｖ）中に溶解させた。すなわち、１００ｍｇの大豆ホスーフ ァチジルコリン、１０ｍｇのコレステロール、１ｍｇのα−トコフェロール、７ ｍｇのＮ！−バルミトイル−Ｎ＠−スクシノイルーＬ−リジン及び１２ｍｇの４ −（ｌ−ヘキサデシルアミノ）−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２（ＩＨ） −ピリミジノン。この原液脂質溶液の０．６ｍＬを試験管中で空気を吹き込むこ とによって脂質フィルムへと変換し、次いでこのフィルムを減圧下５０°Ｃにて 約１時間乾燥させた。１０ｍＭのＰＢＳ　（０，９％のＮａＣ１及びｌ０ｍＭの ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７，３）の３ｍＬをこのフィルムに加え、混合物をディス イッチグレーターのミクロチップを用い４０Ｗにて３０分間超音波照射した。こ れにより、乳白光を発するリポソーム分散液が得られ、これを次の反応に使用し た。

実施例４ 免疫リポソームの製造 凍結乾燥物としてｌ、２　ｎｍｏｌの抗体を、実施例３からのリポソーム生成物 ５０μＬ及び７ｍｇ　（２７ｎｍｏｌ）のＮ−（３−ジメチルアミノプロピル） −Ｎｏ　−エチルカルボジイミドｘＨＣ１（ＥＤＣ）と混合し、３０μＬのＰＢ Ｓ　（ｐＨ１）を加えることによりｐＨ４に調整した。ＥＤＣの更なる７ｍｇ部 分を、１時間の間隔をあけて２回加えた。反応混合物を室温にて約５時間攪拌し た後、ＵＬＴＲＯＧＥＬ　ＡＣＡ　２２カラムに負荷し、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４ ）で分画した。その吸光度比が使用したリポソーム生成物についての値と一致す るところの両分をあわせ、細胞標的化のために使用した。

国際調査報告　ＰＣＴ／εＰ　９２１００７０６、　ａｂ＋　ＰＣＴ／ＥＰ　９ ２１００７０６

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ、 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ （式中、Ｒ１は、１乃至２個の二重結合を含んでよく且つ分枝していてよいＣ２ 〜Ｃ２４アルキルであり、そしてＲ２、Ｒ３及びＲ４は、同一又は異なっていて よく、各々水素、脂肪族Ｃ２〜Ｃ５アシル、ベンゾイル又はカルボキシＣ１〜Ｃ ３アルキルカルボニルである）のシタラビン誘導体。
2. ２．式ＩＩ、 ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、Ａｃは、アセチルであり、Ｒは 、塩素であるか又は▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ１＝Ｈ、ＮＯ２）で ある）を式ＩＩＩ ＮＨ２Ｒ１１　ＩＩＩ （式中、Ｒ１１は、１乃至２個の二重結合を含んでいてもよく且つ分枝していて もよいＣ２〜Ｃ２４アルキルである）のアミンと反応させ、そして続いて、場合 に応じて、得られた化合物中のアセチル基をＲ２、Ｒ３又はＲ４によって置換す ることによる、請求項１に記載の式Ｉのシタラビン誘導体を製造するための方法 。
3. ３．請求項１に記載の式Ｉのシタラビン誘導体を含有する免疫リボソーム。
4. ４．疾患の制御に使用するための請求項１に記載の式Ｉのシタラビン誘導体。