JPH0760147B2 - 毛管電気泳動を利用する試料の分析 - Google Patents
毛管電気泳動を利用する試料の分析Info
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- JPH0760147B2 JPH0760147B2 JP4163337A JP16333792A JPH0760147B2 JP H0760147 B2 JPH0760147 B2 JP H0760147B2 JP 4163337 A JP4163337 A JP 4163337A JP 16333792 A JP16333792 A JP 16333792A JP H0760147 B2 JPH0760147 B2 JP H0760147B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は一般的に試料の分析、特
に毛管ゾーン電気泳動による分析に関し、さらに詳しく
は開放毛管ゾーン電気泳動に用いられる電解質緩衝剤に
関する。
に毛管ゾーン電気泳動による分析に関し、さらに詳しく
は開放毛管ゾーン電気泳動に用いられる電解質緩衝剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】この項
において述べる文献はそれぞれここに本発明を説明する
ために用いられるものである。哺乳類蛋白質、例えば、
全血液、血清、血漿、脳骨髄液、尿などの臨床試料から
誘導される蛋白質は疾病の状態ないし体調を指示するも
のとして有用である。これら蛋白質の量及び種類は患者
の健康状態の情報を提示することができる。
において述べる文献はそれぞれここに本発明を説明する
ために用いられるものである。哺乳類蛋白質、例えば、
全血液、血清、血漿、脳骨髄液、尿などの臨床試料から
誘導される蛋白質は疾病の状態ないし体調を指示するも
のとして有用である。これら蛋白質の量及び種類は患者
の健康状態の情報を提示することができる。
【０００３】例えば、血清の蛋白質成分にはアルブミ
ン、アルファ１−リポ蛋白質、アルファ２−マクログロ
ブリン、ベータ１−リポ蛋白質及び免疫グロブリン（ガ
ンマグロブリンを含む）が含まれる。血清の主要な蛋白
質であるアルブミンは通常４．０〜５．０ｇ／ｄｌの濃
度で存在する。アルブミン濃度の低下は腎臓の疾病を指
示するものであり、アルブミン濃度の上昇は脱水症の特
徴である。アルファ１−リポ蛋白質が高いレベルにある
ことは慢性アルコール中毒もしくは例えば妊娠による過
エストロゲン血症を指示するものである。ベータ１−リ
ポ蛋白質が高いレベルにあることはコレステロールレベ
ルの上昇を指示するものである。
ン、アルファ１−リポ蛋白質、アルファ２−マクログロ
ブリン、ベータ１−リポ蛋白質及び免疫グロブリン（ガ
ンマグロブリンを含む）が含まれる。血清の主要な蛋白
質であるアルブミンは通常４．０〜５．０ｇ／ｄｌの濃
度で存在する。アルブミン濃度の低下は腎臓の疾病を指
示するものであり、アルブミン濃度の上昇は脱水症の特
徴である。アルファ１−リポ蛋白質が高いレベルにある
ことは慢性アルコール中毒もしくは例えば妊娠による過
エストロゲン血症を指示するものである。ベータ１−リ
ポ蛋白質が高いレベルにあることはコレステロールレベ
ルの上昇を指示するものである。
【０００４】哺乳類蛋白質はカチオン部分とアニオン部
分の両方を含有する荷電蛋白質類である。そのためそれ
ら自体は毛管ゾーン電気泳動（ＣＺＥ）によって分析で
きるようにしている。ＣＺＥは荷電物質を迅速かつ有効
に分離することができる技術である。一般的に、ＣＺＥ
には試料を毛管、すなわち、約１０から約２０００ミク
ロンの内径をもつ管に導入すること及び毛管への電場の
適用が含まれる。電場の電位は試料を管中で押しやると
ともに、試料をその組成部分に分離する。すなわち、試
料成分はそれぞれ固有の電気泳動度をもっており、大き
い泳動度をもつ成分は低速泳動度をもつものより毛管中
を早く移動する。その結果、試料成分は管中の試料移動
中に毛管中で不連続のゾーンに分けられる。その分離を
連続的に監視し、分離ゾーンに基いた種々の成分データ
を求めるのにオンライン検出器を用いることができる。
分の両方を含有する荷電蛋白質類である。そのためそれ
ら自体は毛管ゾーン電気泳動（ＣＺＥ）によって分析で
きるようにしている。ＣＺＥは荷電物質を迅速かつ有効
に分離することができる技術である。一般的に、ＣＺＥ
には試料を毛管、すなわち、約１０から約２０００ミク
ロンの内径をもつ管に導入すること及び毛管への電場の
適用が含まれる。電場の電位は試料を管中で押しやると
ともに、試料をその組成部分に分離する。すなわち、試
料成分はそれぞれ固有の電気泳動度をもっており、大き
い泳動度をもつ成分は低速泳動度をもつものより毛管中
を早く移動する。その結果、試料成分は管中の試料移動
中に毛管中で不連続のゾーンに分けられる。その分離を
連続的に監視し、分離ゾーンに基いた種々の成分データ
を求めるのにオンライン検出器を用いることができる。
【０００５】ＣＺＥは通常毛管カラムの内容物に基いて
２つのカテゴリーに分けられる。そのうち「ゲル」ＣＺ
Ｅにおいては、毛管は適当なゲル、例えばポリアクリル
アミドゲルが充填される。試料中の成分の分離はゲルマ
トリックス中を移動する成分のサイズ及び電荷によって
ある程度予測される。「開放」(open)ＣＺＥにおいて
は、毛管は電気伝導性緩衝剤溶液で充填される。毛管の
イオン化により負に荷電した毛管壁は緩衝剤からの正イ
オンの層を引きつける。これらのイオンは電位の影響下
で陰極の方向へ流れるのでバルク溶液（すなわち、緩衝
剤溶液及び分析される試料）は電気的中性を保つために
この方向に流れざるをえない。この電気浸透流は電荷に
関係なく中性及びイオン性の種を陰極方向へ送る一定の
速度成分を与える。開放ＣＺＥ中の緩衝剤は伝導及び拡
散に対してゲルＣＺＥ中で用いられるゲル同様に安定で
ある。したがって、開放ＣＺＥではゲルに基く電気泳動
で得られるのと全く同様の分離が得られる。
２つのカテゴリーに分けられる。そのうち「ゲル」ＣＺ
Ｅにおいては、毛管は適当なゲル、例えばポリアクリル
アミドゲルが充填される。試料中の成分の分離はゲルマ
トリックス中を移動する成分のサイズ及び電荷によって
ある程度予測される。「開放」(open)ＣＺＥにおいて
は、毛管は電気伝導性緩衝剤溶液で充填される。毛管の
イオン化により負に荷電した毛管壁は緩衝剤からの正イ
オンの層を引きつける。これらのイオンは電位の影響下
で陰極の方向へ流れるのでバルク溶液（すなわち、緩衝
剤溶液及び分析される試料）は電気的中性を保つために
この方向に流れざるをえない。この電気浸透流は電荷に
関係なく中性及びイオン性の種を陰極方向へ送る一定の
速度成分を与える。開放ＣＺＥ中の緩衝剤は伝導及び拡
散に対してゲルＣＺＥ中で用いられるゲル同様に安定で
ある。したがって、開放ＣＺＥではゲルに基く電気泳動
で得られるのと全く同様の分離が得られる。
【０００６】溶融シリカが主として毛管の素材として用
いられるが、これはそれがＣＺＥに用いられる比較的高
い電圧に耐えられることとその内部壁がイオン化して目
的の電気浸透流をもたらす負電荷を生成するからであ
る。しかしながら、毛管の内壁のイオン化は蛋白質の分
離に関して問題を発生させる。これは蛋白質が不均一多
価電解質（すなわち、その分子自体の電荷が中性である
時分子内の正及び負に荷電した部分がほぼ同数である）
からである。したがって蛋白質種はイオン化した時その
蛋白質種を内壁に強く吸着させるような正味の正電荷分
布を持つことできる。この吸着はＣＺＥ中に人工的なゾ
ーンの拡大をもたらし、不確定な、誤差の多い、不可解
な結果を示すことになる。
いられるが、これはそれがＣＺＥに用いられる比較的高
い電圧に耐えられることとその内部壁がイオン化して目
的の電気浸透流をもたらす負電荷を生成するからであ
る。しかしながら、毛管の内壁のイオン化は蛋白質の分
離に関して問題を発生させる。これは蛋白質が不均一多
価電解質（すなわち、その分子自体の電荷が中性である
時分子内の正及び負に荷電した部分がほぼ同数である）
からである。したがって蛋白質種はイオン化した時その
蛋白質種を内壁に強く吸着させるような正味の正電荷分
布を持つことできる。この吸着はＣＺＥ中に人工的なゾ
ーンの拡大をもたらし、不確定な、誤差の多い、不可解
な結果を示すことになる。
【０００７】この問題を解決するのに提案された１つの
試みは、電圧が作用した時に電気浸透流を低減させるよ
うに毛管の内壁を処理、すなわち塗布することであっ
た。換言すれば管上への蛋白質の吸着を減少させること
であった。グリコール変性された溶融シリカ毛管が血清
蛋白質分析に使用されたが、限定された成功しか得られ
なった。ヨルゲンソン・ジェー・ダリュー及びルカクス
・ケー・ディー「毛管ゾーン電気泳動」(Jorgenson, J.
W. & Lukacs, K. D. "Capillary Zone Electrophoresi
s") サイエンス (Science)２２２：２６６−２７２（１
９８３）参照。これは処理された溶融シリカ毛管の耐用
寿命が比較的短く、その塗布物が予測されない様式で
「溶解」する傾向があることによる。予測できないとい
う事態は多種の試料を回数多く分析する場合には受け入
れられないことである。
試みは、電圧が作用した時に電気浸透流を低減させるよ
うに毛管の内壁を処理、すなわち塗布することであっ
た。換言すれば管上への蛋白質の吸着を減少させること
であった。グリコール変性された溶融シリカ毛管が血清
蛋白質分析に使用されたが、限定された成功しか得られ
なった。ヨルゲンソン・ジェー・ダリュー及びルカクス
・ケー・ディー「毛管ゾーン電気泳動」(Jorgenson, J.
W. & Lukacs, K. D. "Capillary Zone Electrophoresi
s") サイエンス (Science)２２２：２６６−２７２（１
９８３）参照。これは処理された溶融シリカ毛管の耐用
寿命が比較的短く、その塗布物が予測されない様式で
「溶解」する傾向があることによる。予測できないとい
う事態は多種の試料を回数多く分析する場合には受け入
れられないことである。
【０００８】この問題の解決に提案されたもう１つの方
法は、試料の蛋白質成分の等電点（ｐＩ）よりも高いｐ
Ｈを有する緩衝剤を使用することであった。周知のよう
に、ｐＨがｐＩと同じであれば分子の正負電荷部分は平
衡している。同様に、ｐＨがｐＩより高いと負電荷部分
が優勢になり、ｐＨがｐＩより低いと正電荷部分が負電
荷部分をこえる。例えば、アルブミンのｐＩは４．６で
あり、それゆえｐＨ４．６においてアルブミンの正電荷
部分と負電荷部分は等しく、全体の電荷は中性である。
しかし、ｐＨが等電点よりも高くなると負電荷部分が優
勢になり全体の電荷は負になる。かくして高ｐＨ緩衝剤
の影響下では試料のすべての蛋白質種が負に荷電した内
壁から反発される。換言すればこれはそれらの表面吸着
を無効ないし少なくとも大きく減少させる。しかし、ｐ
ＨとｐＩの差が大きいことは蛋白質の構造変化、または
加水分解の原因となる。未処理溶融シリカ毛管中で８〜
１１の範囲のｐＨを有する緩衝剤溶液を用いる蛋白質電
気泳動分析の試みはすべての試料ゾーンの再現性のない
移行をもたらす結果となった。ラウエル・エイチ・エイ
チ及びマクマニギル・ディー「未処理溶融シリカ管での
蛋白質の毛管ゾーン電気泳動」 (Lauer, H. H. & McMan
igill, D. "Capillary Zone Electrophoresis of Prote
ins in Untreated Fused Silica Tubing" アナリティカ
ル・ケミストリー (Anal. Chem.)５８：１６６−１６９
（１９８６）参照。
法は、試料の蛋白質成分の等電点（ｐＩ）よりも高いｐ
Ｈを有する緩衝剤を使用することであった。周知のよう
に、ｐＨがｐＩと同じであれば分子の正負電荷部分は平
衡している。同様に、ｐＨがｐＩより高いと負電荷部分
が優勢になり、ｐＨがｐＩより低いと正電荷部分が負電
荷部分をこえる。例えば、アルブミンのｐＩは４．６で
あり、それゆえｐＨ４．６においてアルブミンの正電荷
部分と負電荷部分は等しく、全体の電荷は中性である。
しかし、ｐＨが等電点よりも高くなると負電荷部分が優
勢になり全体の電荷は負になる。かくして高ｐＨ緩衝剤
の影響下では試料のすべての蛋白質種が負に荷電した内
壁から反発される。換言すればこれはそれらの表面吸着
を無効ないし少なくとも大きく減少させる。しかし、ｐ
ＨとｐＩの差が大きいことは蛋白質の構造変化、または
加水分解の原因となる。未処理溶融シリカ毛管中で８〜
１１の範囲のｐＨを有する緩衝剤溶液を用いる蛋白質電
気泳動分析の試みはすべての試料ゾーンの再現性のない
移行をもたらす結果となった。ラウエル・エイチ・エイ
チ及びマクマニギル・ディー「未処理溶融シリカ管での
蛋白質の毛管ゾーン電気泳動」 (Lauer, H. H. & McMan
igill, D. "Capillary Zone Electrophoresis of Prote
ins in Untreated Fused Silica Tubing" アナリティカ
ル・ケミストリー (Anal. Chem.)５８：１６６−１６９
（１９８６）参照。
【０００９】蛋白質の未処理溶融毛管壁への吸着は蛋白
質中の陽イオン部位と壁のケイ酸塩部分との間のイオン
交換相互作用によるものであることが理論化されてい
る。ヨルゲンソン・ジェー・ダブリウ「毛管電気泳動」
第１３章「電気泳動法の新しい方向」(Jorgenson, J.W.
"Capillary Electrophoresis", Chpt. 13, New Direct
ion in Electrophoretic Methods.) ACS Symp. Ser. 33
5, 1987 (Jorgenson, J.W. & Phillips, M., Eds.)参
照。したがって、蛋白質吸着を減少させるのに高塩含有
緩衝剤条件が提案されている。ラウエル・エイチ・エイ
チ及びマクマニギル・ディー、トレンズ・オブ・アナリ
ティカル・ケミストリー (Lauer, H.H. & McManigill,
D., Trends Anal. Chem.) ５：１１（１９８６）参照。
しかし、緩衝液の塩濃度を増加することは毛管の電気伝
導度を高める効果があり、そのため管内部の熱を激しく
増大させることになる。温度の上昇は泳動ゾーンを拡散
状態にし、ゾーンの分解を減少させる。そのような熱の
生成を避けるために毛管に適用する電位を大きく減少さ
せねばならない。しかし、このことは試料の分析に必要
な時間を増加させるという好ましくない効果をもってい
る。
質中の陽イオン部位と壁のケイ酸塩部分との間のイオン
交換相互作用によるものであることが理論化されてい
る。ヨルゲンソン・ジェー・ダブリウ「毛管電気泳動」
第１３章「電気泳動法の新しい方向」(Jorgenson, J.W.
"Capillary Electrophoresis", Chpt. 13, New Direct
ion in Electrophoretic Methods.) ACS Symp. Ser. 33
5, 1987 (Jorgenson, J.W. & Phillips, M., Eds.)参
照。したがって、蛋白質吸着を減少させるのに高塩含有
緩衝剤条件が提案されている。ラウエル・エイチ・エイ
チ及びマクマニギル・ディー、トレンズ・オブ・アナリ
ティカル・ケミストリー (Lauer, H.H. & McManigill,
D., Trends Anal. Chem.) ５：１１（１９８６）参照。
しかし、緩衝液の塩濃度を増加することは毛管の電気伝
導度を高める効果があり、そのため管内部の熱を激しく
増大させることになる。温度の上昇は泳動ゾーンを拡散
状態にし、ゾーンの分解を減少させる。そのような熱の
生成を避けるために毛管に適用する電位を大きく減少さ
せねばならない。しかし、このことは試料の分析に必要
な時間を増加させるという好ましくない効果をもってい
る。
【００１０】毛管ゾーン電気泳動はイオン種の分離用と
して非常に有力な手段であるから、上述したような激し
い有害な障害に煩わされない蛋白質及び蛋白質部分（ペ
プチド）試料のＣＺＥ分析法に対する要望が存在する。
して非常に有力な手段であるから、上述したような激し
い有害な障害に煩わされない蛋白質及び蛋白質部分（ペ
プチド）試料のＣＺＥ分析法に対する要望が存在する。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明はこの要望を、未
処理毛管を用いるＣＺＥにおいて臨床試料の分析に有用
な緩衝剤を提供することによって満たす。その緩衝剤は
糖蛋白質の糖部分と錯体形成することができる少なくと
も１つの試薬を含んでなるものである。錯体形成試薬の
例としてはホウ酸、例えば炭素原子数約１から約２０の
アルキル部分を有するホウ酸アルキルのようなホウ酸塩
誘導体、リン酸（ＰＯ4 ）のアルカリ金属塩、炭素原子
数約１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキルリン酸アンモニウム、炭
酸（ＣＯ3 ）のアルカリ金属塩、及び炭素原子数約１か
ら約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、トリ−、
及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムが含まれる。
処理毛管を用いるＣＺＥにおいて臨床試料の分析に有用
な緩衝剤を提供することによって満たす。その緩衝剤は
糖蛋白質の糖部分と錯体形成することができる少なくと
も１つの試薬を含んでなるものである。錯体形成試薬の
例としてはホウ酸、例えば炭素原子数約１から約２０の
アルキル部分を有するホウ酸アルキルのようなホウ酸塩
誘導体、リン酸（ＰＯ4 ）のアルカリ金属塩、炭素原子
数約１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキルリン酸アンモニウム、炭
酸（ＣＯ3 ）のアルカリ金属塩、及び炭素原子数約１か
ら約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、トリ−、
及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムが含まれる。
【００１２】その緩衝剤には好ましくはｐＨ調節剤が添
加される。「ｐＨ調節剤」とは緩衝剤のｐＨを調整する
のに用いることができ、錯体形成試薬と相容性があり、
かつ好ましくは一価のカチオンを含む試薬を意味する。
適当なｐＨ調節剤には水酸化リチウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水酸化セシウ
ム、水酸化フランシウムなどのアルカリ金属水酸化物、
及び炭素原子数約１から約８のアルキル部分を有するモ
ノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキル水酸化アン
モニウムが含まれる。緩衝剤のｐＨは分析される試料の
実質的にすべての成分のｐＩよりも大きい。ｐＨ調節剤
は少なくとも１つの錯体形成試薬を含んでなる緩衝剤に
その緩衝剤のｐＨが指定のｐＩよりも高くなるように添
加することができる。
加される。「ｐＨ調節剤」とは緩衝剤のｐＨを調整する
のに用いることができ、錯体形成試薬と相容性があり、
かつ好ましくは一価のカチオンを含む試薬を意味する。
適当なｐＨ調節剤には水酸化リチウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水酸化セシウ
ム、水酸化フランシウムなどのアルカリ金属水酸化物、
及び炭素原子数約１から約８のアルキル部分を有するモ
ノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキル水酸化アン
モニウムが含まれる。緩衝剤のｐＨは分析される試料の
実質的にすべての成分のｐＩよりも大きい。ｐＨ調節剤
は少なくとも１つの錯体形成試薬を含んでなる緩衝剤に
その緩衝剤のｐＨが指定のｐＩよりも高くなるように添
加することができる。
【００１３】以下に本発明を詳細に説明する。哺乳類分
泌蛋白質は非哺乳類分泌蛋白質（例えば、細菌として
Ｅ．ｃｏｌｉを用いる組み替えＤＮＡ技術によって作ら
れる蛋白質など）と違って、主として糖蛋白質、すなわ
ち、その脊骨上に糖部分を含有するものである。そのよ
うな蛋白質は図式的に次のように示される。
泌蛋白質は非哺乳類分泌蛋白質（例えば、細菌として
Ｅ．ｃｏｌｉを用いる組み替えＤＮＡ技術によって作ら
れる蛋白質など）と違って、主として糖蛋白質、すなわ
ち、その脊骨上に糖部分を含有するものである。そのよ
うな蛋白質は図式的に次のように示される。
【００１４】
【化１】
【００１５】記号は蛋白質内に含まれる個々の電荷を示
すものである。この電荷分布は、ヘテロ多価電解質と称
され、等電点（ｐＩ）がｐＨと等しい時正及び負に荷電
した部分が等しくなり、蛋白質全体の電荷は中性である
ことを示す。ｐＨがｐＩより高い時蛋白質の電荷分布は
全体の電荷が負になるようになる。ＣＺＥ法は未処理毛
管を用い非哺乳類分泌蛋白質の分析に成功して用いられ
てきた。前述の問題が生じるのは哺乳類分泌蛋白質の場
合のみである。これは非哺乳類分泌蛋白質は糖蛋白質で
はないから哺乳類蛋白質の糖部分が吸着問題にある役割
を演じていると本発明者は考えている。本発明者は電解
質緩衝剤に哺乳類蛋白質の糖部分と錯体形成することが
できる少なくとも１つの試薬を含有させることによって
上記の問題を回避した。その試薬は、効果として、蛋白
質と結合してそれが毛管壁に吸収されるのを防ぎ、同時
に蛋白質自体に悪影響しない保護基として作用する。
すものである。この電荷分布は、ヘテロ多価電解質と称
され、等電点（ｐＩ）がｐＨと等しい時正及び負に荷電
した部分が等しくなり、蛋白質全体の電荷は中性である
ことを示す。ｐＨがｐＩより高い時蛋白質の電荷分布は
全体の電荷が負になるようになる。ＣＺＥ法は未処理毛
管を用い非哺乳類分泌蛋白質の分析に成功して用いられ
てきた。前述の問題が生じるのは哺乳類分泌蛋白質の場
合のみである。これは非哺乳類分泌蛋白質は糖蛋白質で
はないから哺乳類蛋白質の糖部分が吸着問題にある役割
を演じていると本発明者は考えている。本発明者は電解
質緩衝剤に哺乳類蛋白質の糖部分と錯体形成することが
できる少なくとも１つの試薬を含有させることによって
上記の問題を回避した。その試薬は、効果として、蛋白
質と結合してそれが毛管壁に吸収されるのを防ぎ、同時
に蛋白質自体に悪影響しない保護基として作用する。
【００１６】この試薬の例としてはホウ酸、例えば炭素
原子数約１から約２０、より好ましくは約１から約８、
最も好ましくは約１のアルキル部分を有するホウ酸アル
キルのようなホウ酸塩誘導体、リン酸（ＰＯ4 ）のアル
カリ金属塩（リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン
酸カリウム、リン酸ルビジウム、リン酸セシウム、リン
酸フランシウム）、炭素原子数約１から約８、好ましく
は約１から約３、最も好ましくは１のアルキル部分を有
するモノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキルリン
酸アンモニウム、炭酸（ＣＯ3 ）のアルカリ金属塩（炭
酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ルビ
ジウム、炭酸セシウム、及び炭酸フランシウム）、及び
炭素原子数約１から約８、好ましくは約１から約３、最
も好ましくは１のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムが含ま
れる。本発明の最も好ましい態様においてはホウ酸が錯
体形成剤である。
原子数約１から約２０、より好ましくは約１から約８、
最も好ましくは約１のアルキル部分を有するホウ酸アル
キルのようなホウ酸塩誘導体、リン酸（ＰＯ4 ）のアル
カリ金属塩（リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン
酸カリウム、リン酸ルビジウム、リン酸セシウム、リン
酸フランシウム）、炭素原子数約１から約８、好ましく
は約１から約３、最も好ましくは１のアルキル部分を有
するモノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキルリン
酸アンモニウム、炭酸（ＣＯ3 ）のアルカリ金属塩（炭
酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ルビ
ジウム、炭酸セシウム、及び炭酸フランシウム）、及び
炭素原子数約１から約８、好ましくは約１から約３、最
も好ましくは１のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムが含ま
れる。本発明の最も好ましい態様においてはホウ酸が錯
体形成剤である。
【００１７】緩衝剤中の試薬の濃度は試薬が臨床試料中
の蛋白質成分と結合するのに必要な量の過剰量存在する
ように選ばれる。これにより蛋白質成分の全ての糖部分
が試薬によって錯体化されるのを確実にする。したがっ
て、緩衝剤中の試薬の濃度は試料中の蛋白質濃度に対し
て化学量論的過剰でなければならない。好ましくは緩衝
剤中の試薬の濃度は約２０ｍＭよりも大きい。ホウ酸及
びホウ酸塩誘導体は好ましくは約７０ｍＭと約４００ｍ
Ｍの間、より好ましくは約７５ｍＭと約２５０ｍＭの間
の濃度で存在する。最も好ましいホウ酸の濃度は約８０
ｍＭである。リン酸及び炭酸両方の誘導体については、
約２０ｍＭから約１００ｍＭの濃度で存在させるべきで
ある。
の蛋白質成分と結合するのに必要な量の過剰量存在する
ように選ばれる。これにより蛋白質成分の全ての糖部分
が試薬によって錯体化されるのを確実にする。したがっ
て、緩衝剤中の試薬の濃度は試料中の蛋白質濃度に対し
て化学量論的過剰でなければならない。好ましくは緩衝
剤中の試薬の濃度は約２０ｍＭよりも大きい。ホウ酸及
びホウ酸塩誘導体は好ましくは約７０ｍＭと約４００ｍ
Ｍの間、より好ましくは約７５ｍＭと約２５０ｍＭの間
の濃度で存在する。最も好ましいホウ酸の濃度は約８０
ｍＭである。リン酸及び炭酸両方の誘導体については、
約２０ｍＭから約１００ｍＭの濃度で存在させるべきで
ある。
【００１８】緩衝剤のｐＨは分析される試料中の実質的
に全ての成分種のｐＩ値より大きい。これにより実質的
に全ての成分種が所要の実質負電荷を持つのを確実にす
る。臨床試料の場合、これは約８．００より大きい値、
好ましくは約９．００と約１２．００の間、より好まし
くは約１０．００と約１１．００の間のｐＨを必要とす
る。最も好ましい態様では、ｐＨは約１０．２５±０．
１０である。これらのｐＨ値は臨床試料の実質的に全て
の蛋白質種の等電点以上である。
に全ての成分種のｐＩ値より大きい。これにより実質的
に全ての成分種が所要の実質負電荷を持つのを確実にす
る。臨床試料の場合、これは約８．００より大きい値、
好ましくは約９．００と約１２．００の間、より好まし
くは約１０．００と約１１．００の間のｐＨを必要とす
る。最も好ましい態様では、ｐＨは約１０．２５±０．
１０である。これらのｐＨ値は臨床試料の実質的に全て
の蛋白質種の等電点以上である。
【００１９】ホウ酸は約８．０のｐＨにおいて糖蛋白質
の糖部分と錯体を形成し、かつホウ酸は約８．０から約
１０．０の間のｐＨにおいて良好な緩衝能力を持ってい
る。すなわち、約８．０以上のｐＨにおいてホウ酸は次
式で図式的に示されるように糖蛋白質の糖部分と相互作
用する。
の糖部分と錯体を形成し、かつホウ酸は約８．０から約
１０．０の間のｐＨにおいて良好な緩衝能力を持ってい
る。すなわち、約８．０以上のｐＨにおいてホウ酸は次
式で図式的に示されるように糖蛋白質の糖部分と相互作
用する。
【００２０】
【化２】
【００２１】この条件下で、蛋白質−ホウ酸錯体は正味
負の電荷を維持し、さもなければホウ酸は蛋白質に悪影
響しない。イオン化によって未処理の毛管の内壁は負に
荷電する。同じく負に荷電している蛋白質−ホウ酸錯体
は負に荷電した内壁によって反発される。それゆえ、錯
体の負に荷電した毛管内壁への吸着は阻止されるか大い
に低減される。
負の電荷を維持し、さもなければホウ酸は蛋白質に悪影
響しない。イオン化によって未処理の毛管の内壁は負に
荷電する。同じく負に荷電している蛋白質−ホウ酸錯体
は負に荷電した内壁によって反発される。それゆえ、錯
体の負に荷電した毛管内壁への吸着は阻止されるか大い
に低減される。
【００２２】ｐＨ調節剤は好ましくは緩衝液のｐＨを分
析されるべき試料の成分種の等電点より高く維持するよ
う添加される。ｐＨ調節剤は好ましくは一価のカチオン
を含むものであるが、多価のカチオンは負に荷電した未
処理の毛管の内壁と結合する傾向があり、そのため毛管
中の電気浸透が損なわれるからである。ｐＨ調節剤のの
例としてはアルカリ金属の水酸化物（水酸化リチウム、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウ
ム、水酸化セシウム、及び水酸化フランシウム）、及び
炭素原子数約１から約８、好ましくは約１から約３，最
も好ましくは１のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキル水酸化アンモニウムが含
まれる。発明の最も好ましい態様においては、ｐＨ調節
剤は水酸化ナトリウムである。
析されるべき試料の成分種の等電点より高く維持するよ
う添加される。ｐＨ調節剤は好ましくは一価のカチオン
を含むものであるが、多価のカチオンは負に荷電した未
処理の毛管の内壁と結合する傾向があり、そのため毛管
中の電気浸透が損なわれるからである。ｐＨ調節剤のの
例としてはアルカリ金属の水酸化物（水酸化リチウム、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウ
ム、水酸化セシウム、及び水酸化フランシウム）、及び
炭素原子数約１から約８、好ましくは約１から約３，最
も好ましくは１のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキル水酸化アンモニウムが含
まれる。発明の最も好ましい態様においては、ｐＨ調節
剤は水酸化ナトリウムである。
【００２３】緩衝剤へ添加するｐＨ調節剤の量は試薬を
含んでなる緩衝剤のｐＨを試料中の成分種の等電点より
高くに調整及び維持するのに有効な量でなければならな
い。したがって、試薬を含んでなる緩衝剤のｐＨを決め
ることにより、研究者は緩衝剤へ添加すべきｐＨ調節剤
の量を、例えば緩衝剤のｐＨをｐＨ調節剤を添加しなが
ら監視することによって容易に決めることができる。
含んでなる緩衝剤のｐＨを試料中の成分種の等電点より
高くに調整及び維持するのに有効な量でなければならな
い。したがって、試薬を含んでなる緩衝剤のｐＨを決め
ることにより、研究者は緩衝剤へ添加すべきｐＨ調節剤
の量を、例えば緩衝剤のｐＨをｐＨ調節剤を添加しなが
ら監視することによって容易に決めることができる。
【００２４】本発明による最も好ましい電解質緩衝剤は
次のようにして調製することができる： ホウ酸（分子量６１．８３） ： ４．９５
ｇ 水酸化ナトリウム（分子量６１．８３） ： ４．８６
ｇ 蒸留水 ： １ リッ
トル ｐＨ（１Ｎ・ＮａＯＨの滴加により調整）： １０．２
５±０．１０ 水酸化ナトリウムはホウ酸を含んでなる緩衝剤のｐＨを
上げるため指示量を直接緩衝剤に添加することができ
る。すなわち、水酸化ナトリウムが存在しないと、ホウ
酸溶液のｐＨは約８．００であり、水酸化ナトリウムの
添加により約１０．００のｐＨとなる。最終ｐＨは約１
０．２５なるよう水酸化ナトリウムの滴加により調整す
ることができる。
次のようにして調製することができる： ホウ酸（分子量６１．８３） ： ４．９５
ｇ 水酸化ナトリウム（分子量６１．８３） ： ４．８６
ｇ 蒸留水 ： １ リッ
トル ｐＨ（１Ｎ・ＮａＯＨの滴加により調整）： １０．２
５±０．１０ 水酸化ナトリウムはホウ酸を含んでなる緩衝剤のｐＨを
上げるため指示量を直接緩衝剤に添加することができ
る。すなわち、水酸化ナトリウムが存在しないと、ホウ
酸溶液のｐＨは約８．００であり、水酸化ナトリウムの
添加により約１０．００のｐＨとなる。最終ｐＨは約１
０．２５なるよう水酸化ナトリウムの滴加により調整す
ることができる。
【００２５】
【実施例】ここに開示した本発明の好ましい態様に従っ
て実施例を以下に述べるが、これらの例は本発明及び請
求項を限定するものではない。 Ｉ．材料及び方法 Ａ．毛管電気泳動法 臨床試料及び対照の毛管電気泳動分析はベックマン・イ
ンスツルメンツ社の高性能毛管電気泳動システム (Beck
man Instruments, Inc., Fullerton, CA.,USA,Model N
o. 357575) で行った。データ解析はシステム・ゴール
ド・ソフトウエア (System GoldTM software) （ベック
マン・インスツルメンツ社）により行った。前記の毛管
電気泳動分析システムにはオンライン検出用に２１４，
２５４，２８０及び４１５ｎｍの狭幅フィルターが内蔵
されている。電気泳動は内径７５μｍ、長さ２５ｃｍの
溶融シリカ管（ポリミクロ・テクノロジーズ社 (Polymi
cro Technologies, Inc., Phoenix, AZ. USA.)製品番号
ＴＳＰ０７５３７５）中で行った。検出ウインドウはカ
ラム出口から約６．５ｃｍに位置していた。
て実施例を以下に述べるが、これらの例は本発明及び請
求項を限定するものではない。 Ｉ．材料及び方法 Ａ．毛管電気泳動法 臨床試料及び対照の毛管電気泳動分析はベックマン・イ
ンスツルメンツ社の高性能毛管電気泳動システム (Beck
man Instruments, Inc., Fullerton, CA.,USA,Model N
o. 357575) で行った。データ解析はシステム・ゴール
ド・ソフトウエア (System GoldTM software) （ベック
マン・インスツルメンツ社）により行った。前記の毛管
電気泳動分析システムにはオンライン検出用に２１４，
２５４，２８０及び４１５ｎｍの狭幅フィルターが内蔵
されている。電気泳動は内径７５μｍ、長さ２５ｃｍの
溶融シリカ管（ポリミクロ・テクノロジーズ社 (Polymi
cro Technologies, Inc., Phoenix, AZ. USA.)製品番号
ＴＳＰ０７５３７５）中で行った。検出ウインドウはカ
ラム出口から約６．５ｃｍに位置していた。
【００２６】臨床試料及び対照は上記の毛管電気泳動シ
ステムの入り口トレイ上に置いた。臨床試料及び対照は
３〜１０秒間に１ｋＶでの界面動電法により自動的に毛
管中に注入された。分析はカラム電圧勾配２００Ｖ／ｃ
ｍを用い１０分未満の時間で行われた。毛管は各運転間
に洗浄及び再調整（ＮａＯＨ中で１８秒、蒸留水中０，
１％のトリトン−Ｘ１００ (Triton-X 100TM) で１２
秒）した。
ステムの入り口トレイ上に置いた。臨床試料及び対照は
３〜１０秒間に１ｋＶでの界面動電法により自動的に毛
管中に注入された。分析はカラム電圧勾配２００Ｖ／ｃ
ｍを用い１０分未満の時間で行われた。毛管は各運転間
に洗浄及び再調整（ＮａＯＨ中で１８秒、蒸留水中０，
１％のトリトン−Ｘ１００ (Triton-X 100TM) で１２
秒）した。
【００２７】Ｂ．アガロースゲル電気泳動 アガロースゲル電気泳動（「スラブ」電気泳動）による
比較血清蛋白質分析及びヘモグロビン検定分析をＳＰＥ
ゲルを用いるパラゴン (PARAGONR) 電気泳動システム
（ベックマン・インスツルメンツ社、部品Ｎｏ．６５５
９０５、PARAGONRはベックマン・インスツルメンツ社の
商標である）により実施した。全ての操作はメーカーの
指示書にしたがって行なった。
比較血清蛋白質分析及びヘモグロビン検定分析をＳＰＥ
ゲルを用いるパラゴン (PARAGONR) 電気泳動システム
（ベックマン・インスツルメンツ社、部品Ｎｏ．６５５
９０５、PARAGONRはベックマン・インスツルメンツ社の
商標である）により実施した。全ての操作はメーカーの
指示書にしたがって行なった。
【００２８】Ｃ．対照及び患者からの試料 血清蛋白質の対照（コントロール）試料はベックマン・
インスツルメンツ社から得た。正常の血清及び尿試料
（ベックマン・インスツルメンツ社）を利用した。患者
の血清、尿及び脳脊髄液はブレア・コミュニティ病院
(Brea Comminuty Hospital, Brea CA) から得た。 血清試料は血清対緩衝剤１：２０に希釈した。緩衝剤は
７５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウムと２０ｍｍｏｌ／ｌ
のリン酸カリウムを含有し、緩衝剤のｐＨは７．０であ
った。尿及び脳脊髄液試料は受け取ったままで使用し
た。
インスツルメンツ社から得た。正常の血清及び尿試料
（ベックマン・インスツルメンツ社）を利用した。患者
の血清、尿及び脳脊髄液はブレア・コミュニティ病院
(Brea Comminuty Hospital, Brea CA) から得た。 血清試料は血清対緩衝剤１：２０に希釈した。緩衝剤は
７５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウムと２０ｍｍｏｌ／ｌ
のリン酸カリウムを含有し、緩衝剤のｐＨは７．０であ
った。尿及び脳脊髄液試料は受け取ったままで使用し
た。
【００２９】Ｄ．電解質緩衝剤 すべての薬品は少なくともＡＣＳ級であった。電解質緩
衝剤は４．９５ｇのホウ酸（分子量６１．８３）及び
４．８６ｇの水酸化ナトリウム（分子量４０．００）を
蒸留水Ｈ2 Ｏに溶解した。ホウ酸の最終濃度は８０ｍＭ
／ｌで水酸化ナトリウムの最終濃度は１２１．６ｍＭ／
ｌであった。毛管洗浄液及び再コンディション溶液は上
記した通りであった。
衝剤は４．９５ｇのホウ酸（分子量６１．８３）及び
４．８６ｇの水酸化ナトリウム（分子量４０．００）を
蒸留水Ｈ2 Ｏに溶解した。ホウ酸の最終濃度は８０ｍＭ
／ｌで水酸化ナトリウムの最終濃度は１２１．６ｍＭ／
ｌであった。毛管洗浄液及び再コンディション溶液は上
記した通りであった。
【００３０】ＩＩ．実施例例１ 正常な対照血清のスラブ電気泳動分析 前述の正常な対照血清を前述のパラゴン・ゲル電気泳動
システムによりＳＰＥゲルによって分析し、図２の電気
泳動グラフを得た。
システムによりＳＰＥゲルによって分析し、図２の電気
泳動グラフを得た。
【００３１】例２ 正常な対照血清のＣＺＥ 例１で用いた対照を前述のベックマス毛管ゾーン電気泳
動システムを用い、２１４ｎｍでの検出、５ｋＶの電圧
下で分析した。分析結果は１０分間未満の時間で得られ
た。分析により図１に示す電気泳動グラフが得られた。
動システムを用い、２１４ｎｍでの検出、５ｋＶの電圧
下で分析した。分析結果は１０分間未満の時間で得られ
た。分析により図１に示す電気泳動グラフが得られた。
【００３２】例３ 血清試料−ＩｇＧカッパ骨髄腫−ス
ラブ電気泳動分析 ＩｇＧカッパ骨髄腫患者からの血清試料の例１に記載し
たのと同じ条件を用いた分析で図３に示す電気泳動グラ
フが得られた。
ラブ電気泳動分析 ＩｇＧカッパ骨髄腫患者からの血清試料の例１に記載し
たのと同じ条件を用いた分析で図３に示す電気泳動グラ
フが得られた。
【００３３】例４ 血清試料−ＩｇＧカッパ骨髄腫−Ｃ
ＺＥ ＩｇＧカッパ骨髄腫患者からの血清試料を例２に記載し
たのと同じ条件を用い分析した。分析により図４に示す
電気泳動グラフが得られた。
ＺＥ ＩｇＧカッパ骨髄腫患者からの血清試料を例２に記載し
たのと同じ条件を用い分析した。分析により図４に示す
電気泳動グラフが得られた。
【００３４】例５ 脳骨髄液試料ＣＺＥ 患者脳骨髄液試料を例２に記載したのと同じ条件を用い
分析した。分析により図５に示す電気泳動グラフが得ら
れた。
分析した。分析により図５に示す電気泳動グラフが得ら
れた。
【００３５】例６ 脳骨髄液試料ＣＺＥ 同じ患者脳骨髄液試料を１４ドルトン・カットオフの分
子量で透析し、例２に記載したのと同じ条件を用い分析
した。分析により図６に示す電気泳動グラフが得られ
た。
子量で透析し、例２に記載したのと同じ条件を用い分析
した。分析により図６に示す電気泳動グラフが得られ
た。
【００３６】例７ 正常な尿試料ＣＺＥ 正常な患者例２に記載した条件を用い分析した。分析に
より図７の電気泳動グラフが得られた。
より図７の電気泳動グラフが得られた。
【００３７】例８ 尿試料−ベンス・ジョーンス蛋白質
−ＣＺＥ ベンス・ジョーンス蛋白質を含む患者尿試料を例７に記
載した条件を用い分析した。分析により図８の電気泳動
グラフが得られた。
−ＣＺＥ ベンス・ジョーンス蛋白質を含む患者尿試料を例７に記
載した条件を用い分析した。分析により図８の電気泳動
グラフが得られた。
【００３８】例９ ＣＺＥ再現性 例２に記載した条件と試料を用いＣＺＥ分析の再現性研
究を行い、図９に示す結果を得た。電気泳動グラフＡは
試料の１回目の運転であり、電気泳動グラフＢは試料の
２０回目の運転の結果である。
究を行い、図９に示す結果を得た。電気泳動グラフＡは
試料の１回目の運転であり、電気泳動グラフＢは試料の
２０回目の運転の結果である。
【００３９】上記のデータは未処理毛管中の臨床試料の
毛管ゾーン電気移動分析がここに開示の電解質緩衝剤を
利用して行えることを実証している。同じ試料のＣＺＥ
及び従来のスラブ電気泳動を用いた比較試験は結果が殆
ど同じパターンとなることを示している。さらに、例９
に記載したデータは、２０回の繰り返し運転後のピーク
の溶出時間の変化が１０秒未満であり、このシステムの
優れた再現性を示している。このように、上記のデータ
は未処理毛管中の臨床試料ＣＺＥ分析からもたらされる
利点と便益を実証している。
毛管ゾーン電気移動分析がここに開示の電解質緩衝剤を
利用して行えることを実証している。同じ試料のＣＺＥ
及び従来のスラブ電気泳動を用いた比較試験は結果が殆
ど同じパターンとなることを示している。さらに、例９
に記載したデータは、２０回の繰り返し運転後のピーク
の溶出時間の変化が１０秒未満であり、このシステムの
優れた再現性を示している。このように、上記のデータ
は未処理毛管中の臨床試料ＣＺＥ分析からもたらされる
利点と便益を実証している。
【００４０】前述の標準及び方法は相当詳細にかつ好ま
しい態様に基いて説明したものであるが、これらは本開
示を何等限定しょうとするものではない。本発明はここ
に述べたベックマン高性能毛管電気泳動システムに限定
されるものではない。この技術分野の範囲内でなされる
修正及び変化は本発明の請求範囲内に相当するものであ
る。
しい態様に基いて説明したものであるが、これらは本開
示を何等限定しょうとするものではない。本発明はここ
に述べたベックマン高性能毛管電気泳動システムに限定
されるものではない。この技術分野の範囲内でなされる
修正及び変化は本発明の請求範囲内に相当するものであ
る。
【００４１】
【発明の効果】本発明によれば、蛋白質含有試料、特に
臨床試料の各成分種を毛管電気泳動により正確かつ迅速
に再現性よく定量することができる。
臨床試料の各成分種を毛管電気泳動により正確かつ迅速
に再現性よく定量することができる。
【図１】正常な対照血清試料のＣＺＥによる成分分離の
電気泳動グラフである。
電気泳動グラフである。
【図２】図１の正常な対照血清試料のスラブ電気泳動に
よる成分分離の電気泳動グラフである。
よる成分分離の電気泳動グラフである。
【図３】ＩｇＧカッパ骨髄腫患者血清試料のスラブ電気
泳動による成分分離の電気泳動グラフである。
泳動による成分分離の電気泳動グラフである。
【図４】図３のＩｇＧカッパ骨髄腫患者血清試料のＣＺ
Ｅによる成分分離の電気泳動グラフである。
Ｅによる成分分離の電気泳動グラフである。
【図５】脳骨髄液試料のＣＺＥによる成分分離の電気泳
動グラフである。
動グラフである。
【図６】図５と同じ脳骨髄液試料の１４ｋドルトン・カ
ットオフの分子量で透析したもののＣＺＥによる成分分
離の電気泳動グラフである。
ットオフの分子量で透析したもののＣＺＥによる成分分
離の電気泳動グラフである。
【図７】正常な尿試料のＣＺＥによる成分分離の電気泳
動グラフである。
動グラフである。
【図８】ベンス・ジョーンス蛋白質を含む患者尿試料の
ＣＺＥによる成分分離の電気泳動グラフである。
ＣＺＥによる成分分離の電気泳動グラフである。
【図９】正常な血清蛋白質をＣＺＥにより成分分離した
電気泳動グラフを２つ重ねたもので、そのうち電気泳動
グラフＡは１回目の運転、電気泳動グラフＢは２０回目
の運転結果である。
電気泳動グラフを２つ重ねたもので、そのうち電気泳動
グラフＡは１回目の運転、電気泳動グラフＢは２０回目
の運転結果である。
Claims (43)
- 【請求項１】糖蛋白質の糖部分と錯体形成することがで
きる少なくとも１つの試薬を含んでなる糖蛋白質成分の
毛管ゲル電気泳動分離用緩衝剤。 - 【請求項２】前記錯体形成試薬がホウ酸、炭素原子数約
１から約２０のアルキル部分を有するホウ酸アルキル、
リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、
リン酸ルビジウム、リン酸セシウム、リン酸フランシウ
ム、炭素原子数約１から約８のアルキル部分を有するモ
ノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキルリン酸アン
モニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ルビジ
ウム、炭酸セシウム、炭酸フランシウム、及び炭素原子
数約１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、
トリ−、及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムからな
る群から選ばれる請求項１記載の緩衝剤。 - 【請求項３】前記ホウ酸アルキルが炭素原子数約１から
約８のアルキル部分を有している請求項２記載の緩衝
剤。 - 【請求項４】前記ホウ酸アルキルが炭素原子数１のアル
キル部分を有している請求項２記載の緩衝剤。 - 【請求項５】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−
アルキルリン酸アンモニウムの少なくとも１つのアルキ
ル基が炭素原子数約１から約３を有している請求項２記
載の緩衝剤。 - 【請求項６】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−
アルキル炭酸アンモニウムの少なくとも１つのアルキル
基が炭素原子数約１から約３を有している請求項２記載
の緩衝剤。 - 【請求項７】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度が
試料の糖蛋白質に対し化学量論的過剰である請求項１記
載の緩衝剤。 - 【請求項８】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度が
約２０ｍＭより大きいものである請求項１記載の緩衝
剤。 - 【請求項９】前記錯体形成試薬がホウ酸である請求項１
記載の緩衝剤。 - 【請求項１０】前記緩衝剤中の前記ホウ酸の濃度が約７
０ｍＭと約４００ｍＭの間にある請求項９記載の緩衝
剤。 - 【請求項１１】前記緩衝剤中の前記ホウ酸の濃度が約７
５ｍＭと約２５０ｍＭの間にある請求項９記載の緩衝
剤。 - 【請求項１２】前記緩衝剤中の前記ホウ酸の濃度が約８
０ｍＭである請求項９記載の緩衝剤。 - 【請求項１３】さらに少なくとも１つのｐＨ調節剤を有
効量含んでなる請求項１記載の緩衝剤。 - 【請求項１４】前記ｐＨ調節剤が水酸化リチウム、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水
酸化セシウム、水酸化フランシウム、及び炭素原子数約
１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、トリ
−、及びテトラ−アルキル水酸化アンモニウムからなる
群から選ばれる請求項１３記載の緩衝剤。 - 【請求項１５】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ
−アルキル水酸化アンモニウムの少なくとも１つのアル
キル基が炭素原子数約１から約３を有する請求項１４記
載の緩衝剤。 - 【請求項１６】前記ｐＨ調節剤が水酸化ナトリウムであ
る請求項１３記載の緩衝剤。 - 【請求項１７】前記緩衝剤のｐＨが少なくとも約８．０
０である請求項１記載の緩衝剤。 - 【請求項１８】糖蛋白質を含有する臨床試料成分の毛管
ゾーン電気泳動分離に用いられる緩衝剤であって、 ａ）糖蛋白質の糖部分と錯体形成することができる少な
くとも１つの試薬、及び ｂ）少なくとも１つのｐＨ調節剤 を含んでなり、少なくとも約８．００のｐＨを有する緩
衝剤。 - 【請求項１９】前記錯体形成試薬がホウ酸、炭素原子数
約１から約２０のアルキル部分を有するホウ酸アルキ
ル、リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウ
ム、リン酸ルビジウム、リン酸セシウム、リン酸フラン
シウム、炭素原子数約１から約８のアルキル部分を有す
るモノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキルリン酸
アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ル
ビジウム、炭酸セシウム、炭酸フランシウム、及び炭素
原子数約１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ
−、トリ−、及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムか
らなる群から選ばれる請求項１８記載の緩衝剤。 - 【請求項２０】前記ホウ酸アルキルが炭素原子数約１か
ら約８のアルキル部分を有している請求項１９記載の緩
衝剤。 - 【請求項２１】前記ホウ酸アルキルが炭素原子数１のア
ルキル部分を有している請求項１９記載の緩衝剤。 - 【請求項２２】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ
−アルキルリン酸アンモニウムの少なくとも１つのアル
キル基が炭素原子数約１から約３を有している請求項１
９記載の緩衝剤。 - 【請求項２３】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ
−アルキル炭酸アンモニウムの少なくとも１つのアルキ
ル基が炭素原子数約１から約３を有している請求項１９
記載の緩衝剤。 - 【請求項２４】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度
が試料の糖蛋白質に対し化学量論的過剰である請求項１
８記載の緩衝剤。 - 【請求項２５】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度
が約２０ｍＭより大きいものである請求項１８記載の緩
衝剤。 - 【請求項２６】前記錯体形成試薬がホウ酸である請求項
１８記載の緩衝剤。 - 【請求項２７】前記緩衝剤中の前記ホウ酸の濃度が約７
０ｍＭと約４００ｍＭの間にある請求項２６記載の緩衝
剤。 - 【請求項２８】前記ｐＨ調節剤が水酸化リチウム、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水
酸化セシウム、水酸化フランシウム、及び炭素原子数約
１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、トリ
−、及びテトラ−アルキル水酸化アンモニウムからなる
群から選ばれる請求項１８記載の緩衝剤。 - 【請求項２９】前記モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ
−アルキル水酸化アンモニウムの少なくとも１つのアル
キル基が炭素原子数約１から約３を有する請求項２８記
載の緩衝剤。 - 【請求項３０】前記ｐＨ調節剤が水酸化ナトリウムであ
る請求項１８記載の緩衝剤。 - 【請求項３１】前記緩衝剤のｐＨが約９．０と約１２．
０の間にある請求項１８記載の緩衝剤。 - 【請求項３２】分離すべき糖蛋白質成分を含む試料の毛
管ゾーン電気泳動分析法であって、 ａ）前記試料を糖蛋白質の糖部分と錯体形成することが
できる少なくとも１つの試薬を含んでなる電解質緩衝剤
を含有する未処理毛管中に導入し、 ｂ）前記試料を毛管ゾーン電気泳動処理に付し、そして ｃ）前記試料の糖蛋白質を検出する 段階を有してなる方法。 - 【請求項３３】前記錯体形成試薬がホウ酸、炭素原子数
約１から約２０のアルキル部分を有するホウ酸アルキ
ル、リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウ
ム、リン酸ルビジウム、リン酸セシウム、リン酸フラン
シウム、炭素原子数約１から約８のアルキル部分を有す
るモノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキルリン酸
アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ル
ビジウム、炭酸セシウム、炭酸フランシウム、及び炭素
原子数約１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ
−、トリ−、及びテトラ−アルキル炭酸アンモニウムか
らなる群から選ばれる請求項３２記載の方法。 - 【請求項３４】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度
が試料の糖蛋白質に対し化学量論的過剰である請求項３
２記載の方法。 - 【請求項３５】前記緩衝剤中の前記錯体形成試薬の濃度
が約２０ｍＭより大きいものである請求項３２記載の方
法。 - 【請求項３６】前記錯体形成試薬がホウ酸である請求項
３２記載の方法。 - 【請求項３７】前記緩衝剤中の前記ホウ酸の濃度が約７
０ｍＭと約４００ｍＭの間にある請求項３６記載の方
法。 - 【請求項３８】前記緩衝剤のｐＨが少なくとも約８．０
０である請求項３２記載の方法。 - 【請求項３９】前記緩衝剤がさらに少なくとも１つのｐ
Ｈ調節剤を有効量含んでなる請求項３２記載の方法。 - 【請求項４０】前記ｐＨ調節剤が水酸化リチウム、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水
酸化セシウム、水酸化フランシウム、及び炭素原子数約
１から約８のアルキル部分を有するモノ−、ジ−、トリ
−、及びテトラ−アルキル水酸化アンモニウムからなる
群から選ばれる請求項３９記載の緩衝剤。 - 【請求項４１】前記ｐＨ調節剤が水酸化ナトリウムであ
る請求項３９記載の方法。 - 【請求項４２】前記緩衝剤のｐＨが約９．０と約１２．
０の間である請求項３２記載の方法。 - 【請求項４３】前記試料が全血液、血清、血漿、尿及び
脳骨髄液からなる群から選ばれる請求項３２記載の方
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/708,272 US5120413A (en) | 1991-05-31 | 1991-05-31 | Analysis of samples utilzing capillary electrophoresis |
| US708,272 | 1991-05-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05322846A JPH05322846A (ja) | 1993-12-07 |
| JPH0760147B2 true JPH0760147B2 (ja) | 1995-06-28 |
Family
ID=24845108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4163337A Expired - Lifetime JPH0760147B2 (ja) | 1991-05-31 | 1992-06-01 | 毛管電気泳動を利用する試料の分析 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5120413A (ja) |
| EP (1) | EP0518475B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0760147B2 (ja) |
| AT (1) | ATE151533T1 (ja) |
| AU (1) | AU662138B2 (ja) |
| CA (1) | CA2069053C (ja) |
| DE (1) | DE69218832T2 (ja) |
| ES (1) | ES2100285T3 (ja) |
Families Citing this family (25)
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|---|---|---|---|---|
| US5259939A (en) * | 1991-08-30 | 1993-11-09 | Beckman Instruments, Inc. | Capillary electrophoresis buffer |
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