JPH0764740B2 - 連続放出性ペプチド組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 製剤調合物（pharmaceutical preparation）を、長く
伸ばされた時間の間に亘って一様に連続放出する方法お
よび組成物の開発において遭遇される困難は、広く公知
である。

医薬（drug）の放出を制御する領域での最近の発展とし
て、生物分解性のマトリックス内にマイクロカプセル化
および封じこめによって、医薬の放出を制御するための
方法を記載する発展が開示されている。

本発明は、長く伸ばされた時間の間に亘って、事実上一
様で連続な量のペプチドを非経口的に投与するための新
規な組成物にして、水系生理環境中で或る程度の溶解度
を示す、押し固められた、一部コーティングされたペプ
チドの脂肪酸塩からなる組成物を提供する。本組成物中
で使用するのが好適なペプチドは、 his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ である。

驚くべきことに、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ の押し固められた炭素数10〜20の脂肪酸塩の、一部コー
ティングされた埋めこみ体（implant）に対して、塩が
未だコーティングの時にはそうではないのに、一般にそ
の溶解速度が、塩を製造するのに使用される脂肪酸の炭
素含有量の増加とともに減少するということが見出され
た。

本発明は、また、該組成物の製造および投与にも関す
る。

第１図は、未コーティングの押し固められた炭素数10〜
20の脂肪酸ペプチド塩の溶解のグラフである。

第２図は、押し固められ一部コーティングされた炭素数
10〜20の脂肪酸ペプチド塩の溶解のグラフである。

第３図は、ペプチドのトリステアレート塩の溶解性向に
及ぼす異なるコーティングの効果を示すグラフである。

本発明の好ましい具体例 本発明の組成物の放出速度および投薬量は、異なる脂肪
酸塩およびコーティング材料を使用することによって調
整し得る。本発明で使用するのが好ましい一群の脂肪酸
塩には、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ の炭素数10〜20の脂肪酸塩が含まれる。

本発明の組成物の利点は、投与すべきペプチドの、押し
固められた部分コーティング脂肪酸塩の溶解特性が一度
決定されると、その塩は、純粋な押し固め塩が埋めこみ
体であるかの如く分析することができ、これによって投
薬量の正確な制御が提供される。本発明の組成物の更に
もう一つの利点は、その溶解性向の線型の性質である。

本発明の組成物は、場合により、約50重量％までの希釈
剤もしくは希釈剤の混合物、および約５重量％までの潤
滑剤もしくは潤滑剤の混合物を含有し得る。本発明に対
して好適な希釈剤は、エチルセルロースおよびカスター
ワックス（castorwax）である。本発明に対して好適な
潤滑剤はステアリン酸マグネシウムである。

「水系生理環境」なる語句は、温血動物の体、並びに35
℃乃至40℃の温度にあるリン酸塩緩衝溶液の如き、水系
液体によって模做し得る、かかる試験管環境をも意味す
るものである。

ペプチドの投与のための埋めこみ体は、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ をメタノールの如き有機溶媒中で、十分な量の望みの脂
肪酸と混和して完全な塩生成をもたらすことによって製
造し得る。塩は、次に、溶媒を除去し、洗浄して、乾燥
させることによって単離され得る。単離された純粋な塩
は、、埋めこみ体、好ましくは円柱状の埋めこみ体に押
し固め或いは押出成型することによってプレスする。押
し固められた材料に、通常の技術で、生物分解性もしく
は非生物分解性のコーティングを施す。埋めこみに先立
って、コーティングの特定の面積を除いて、押し固めら
れた塩を露出させる。例えば、コーティングを、円柱状
の埋めこみ体の一端もしくは両端で切り去ることができ
る。

生物体中における雄牛の研究において、本発明の組成物
の望ましい溶解特性が維持されること、および生物体中
における放出と試験管中での溶解に関する放出性向が相
似であり、ペプチドの脂肪酸塩の非経口投与に対する本
発明の組成物の有効性を例示していることが示された。
照査実験において、上記ペプチドのトリステアレート塩
の埋めこみ体は、試験管中で日当1.6％であるのと比較
して、生物体中では埋めこみ体中に存在するペプチドを
日当平均1.8％放出した。

本発明を以下の非限定実施例によって更に詳細に例示す
る。

実施例１ his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂のトリス
テアレート塩の製造 ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lay−NH₂ （1.0g、0.9ミリモル）のメタノール（15mL）中の溶液
にステアリン酸（1.025g、3.6ミリモル）を加え、その
結果得られる溶液を温水浴中で３時間加熱する。減圧下
でメタノールを蒸発させることにより、白色粉末生成物
が生成し、これをエーテル（2440mL）で洗浄し、瀘過
し、乾燥させると、元素分析がC,67.13;H,9.23;N,9.83
％の望みのトリステアレート塩が0.509g、74.7％の収率
で得られる。C₉₉H₁₆₅N₁₂O₁₅に対する分析計算値は、C,6
7.43;H,9.43;N,9.53％である。

実施例２〜10 実施例１の手順を用い、適当な炭素数10〜20の脂肪酸で
置換することによって、下記第Ｉ表列記の、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ の三脂肪炭素数10〜20脂肪酸塩が生成される。

実施例11〜20 ペプチドの炭素数10〜20の三脂肪酸塩の部分コーティン
グされた押し固め埋めこみ体の製造 埋めこみ体は、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ の望みの炭素数10〜20三脂肪酸塩を、トリアセテート当
量として約200mgのペプチドを提供するのに十分な量を
秤量として製造される。塩を次にカーバープレス（carv
er press）上で3/16″直径の円筒形の型の中で1000乃
至5000psigで押し固める。より小さな埋めこみ体（〜53
mgのペプチドトリアセテート当量を提供）は、適当な量
の炭素数10〜20三脂肪酸塩を、ロータリータブレットプ
レス（rotary tablet press）上で、1/8″直径のパン
チ型と用いて押し固めて、円柱状の埋めこみ体とするこ
とによって製造する。

上記製造の埋めこみ体に、下記の手順ＡおよびＢによっ
て、生物分解性および非生物分解性の両方のコーティン
グを施す。

手順Ａ 非生物分解性シリコンポリマー 純粋な品級のシリコンエラストマー（10部）を、とけい
皿上でスパチュラを用いて加硫剤（１部）と混合する。
このものを、デシケーター中で30分間脱気する。埋めこ
み体をピンセットで端部をつかみ、シリコンポリマーの
中に巻きこみ、アルミニウムホイル上に立てて置き、40
℃で５時間加硫させる。端部の一方もしくは両方をかみ
そりの刃で取り去り、円柱の「シャフト部」はコーティ
ングされたままに残す。

或いは、埋めこみ体は、ヘキサン中に分散された、ダウ
コーニング（Dow Corning）からシラスティック（SILA
STIC ）なる商標で販売されている医用接着剤20％乃至
40％でディップコーティングし、乾燥させ、コーティン
グを底部端の一方もしくは両方から取り除く前に、40℃
乃至50℃で終夜加硫させ得る。

手順Ｂ 生物分解性コーティング ポリマーもしくはコポリマー（１部）をクロロホルム
（３乃至８部）中に溶かす。各埋めこみ体をピンセット
で端部つかみ、ポリマー溶液に浸し、そして次にクロロ
ホルムを室温で蒸発させる。各埋めこみ体を二回コーテ
ィングする。コーティングを室温で終夜乾燥させた後、
ポリマー端部をかみそりの刃で取り去り、長さ方向の円
柱状「シャフト部」はコーティングされたままに残す。
下記第II表および第III表は、こうして製造されたコー
ティングされた埋めこみ体に関する物理的データの要約
を示す。

実施例21 溶解実験 溶解実験は、振とうボトル法（shaking bottle metho
d）を用いて、39℃で行なう。pH7.1に調整されたリン酸
塩緩衝食塩水（PBS）を溶解媒質とする（蒸留水に3.45g
のNaH₂PO₄・H₂O、3.55gのNa₂HPO₄および9.50gのNaClを
溶かして1000mLとする）。

埋めこみ体を、使い捨てのポリプロピレン平底管（No
67.790のフタを有するSarstedt No 58.537）の中に入
れ、30mLのPBSを加える。管を39℃のフィッシャー振と
う式水浴（Fisher Shaking Water Bath）（モデル12
9−シェーカーの設定は2 3/4）の中に入れる。PBSは毎
日とりかえ、試料は210nmにおける光学密度測定によっ
て分析して、溶解性向を得る。

これらの実験の結果を添付図面第１図、第２図および第
３図に要約する。第１図は、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ の炭素数10〜20脂肪酸塩の未コーティング押し固め埋め
こみ体の、水系生理環境中39℃おける10乃至48日の溶解
を示す。溶解の動力学および速度は、円柱状埋めこみ体
をコーティングすることにより、および端部の一方もし
くは両方を曝露させることによって、変えられる。第２
図は、埋めこみ体の多くのものに対して完全な溶解が10
0日後にも起らなかったことを示している。押し固め埋
めこみ体上の種々のコーティングと組み合わせて異なる
炭素数10〜20脂肪酸塩を使用することによって引き伸ば
された時間の間に亘るペプチドの放出速度を調整する手
段が提供される。第３図は、幾つかの異なる生物分解性
および非生物分解性コーティング材料を用いて得られ
る、ペプチド his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ のトリステアレート塩を用いて得られる、放出性向の変
化を表わす。第３図において、Ａは非生物分解性シリン
コンポリマーであり、Ｂは生物分解性（Ｌ−ラクチド／
グリコリド,57/43）であり、Ｃは生物分解性（Ｌ−ラク
チド／グリコリド,71.6/28.4）、生物分解性（ポリ−Ｌ
−ラクチド）であり、Ｅは生物分解性（テトラメチレン
カーボネート／グリコリド50/50）である。

実施例22 雄牛に投与された時の（生物体中）his−trp−ala−trp
−Ｄ−phe−lys−NH₂のトリステアレート塩の一部コー
ティング押し固め埋めこみ体の溶解特性 I.H³標識ペプチドトリステアレート塩の製造 H³標識ペプチドトリアセテート（17.2mgH³、0.24mCi/m
g,0.015mMおよび413mg非標識体、0.378mM）を、遠心分
離管（ファルコン（Falcon）No 2070−プラスチック）
中で、蒸留水（45mL）に溶かす。水酸化アンモニウム
（30％NH₃）を塩基性（pH10）になるまで滴下して加え
る。白色粒子が直ちに沈殿される。10分後、管を氷水の
ビーカーの中へ入れ20分放置する。管を15分間遠心分離
する（〜2600rpm、デモン−IEC臨床遠心分離機（Damon
−IEC Clinical Centrifuge）モデルCL、モデルNo 8
01 ローター付）。水をデカンテーションで別の遠心分
離管に移し、三滴の水酸化アンモニウムを加える。５分
後、管を氷水のビーカーの中へ入れ、20分間放置する。
３本の管を上記の如く遠心分離する。水層を１パイント
のプラスチックびんの中へ、冷凍、貯蔵および再使用の
ためにデカンテーションで入れる。固体遠心分離材料の
各々の管をメタノール（15mL）に溶かし、１個の200mL
回収フラスコの中へ入れる。ステアリン酸（1.32g、4.7
2mM）を加え、フラスコを温水の600mLビーカーの中に入
れる。このメタノール溶液を溶けるまで撹拌し、そして
次に更に３時間撹拌する。生成物を真空中で濃縮して白
色固体を得る。これをエーテル（２×40mL）で洗浄し、
濾過し、デシケーター中乾燥剤（drierite）上で終夜乾
燥させると、662.3mg（4.49mCi）の収量が得られる。

II.埋めこみ体構成 埋めこみ体構成には、カーバープレス（モデルＭ、25ト
ンプレス）を使用する。溶解埋めこみ体用のH³標識塩
を、コールド（cold）なトリステアレートと共に（1:3
ホット（hot）体コールド）切断し、圧縮の前に乳鉢お
よび乳棒で完全に混合するが、一方、動物埋めこみ体は
H³塩から直接製造する。２個のトリステアレート塩埋め
こみ体（１個は溶解用、１個は動物埋めこみ用）を、通
常製の3/16″の型の中で5,000psiで押し固めて円柱状物
とする。

III.埋めこみ体コーティング ポリ（グリコール酸／乳酸）コポリマー（1g、71.6/28.
4L−ラクチド／グリコリド比、ηinh0.51）をクロロホ
ルム（3mL）に溶かすことによって生物分解性ポリマー
コーティングを施す。埋めこみ体の各々のものをピンセ
ットで端をつかみ、このポリマー溶液の中へ浸し、次に
フードの中で室温でクロロホルムを蒸発し去らせる。各
々の埋めこみ体を２回コーティングし、室温で終夜乾燥
させ、ポリマー端部をかみそりの刃で取り除き、長さ方
向の円柱状「シャフト部」を、コーティングされたまま
に残しておく。

IV.ペプチド埋めこみ体投与および生物体中での挙動 局部麻酔のもとで、750 lbの雄牛の耳の底部に小さな
スリットをつける。ポケット状部を皮下に設け、H³標識
トリステアレート塩埋めこみ体をピンセットでそう入す
る。スリットを縫合して、埋めこみ体が出てくるのを防
ぐ、雄牛は、家畜用新陳代謝ケージ（cattle metaboli
sm cage）中で飼う。毎日10lbsまでの家畜飼育用糧食
（Cattle Grower Ration）No 632を与える。干草と
水は任意に受給させる。尿および糞の全量を毎日集め、
容量および重量を測定し、代表的な試料を放射能測定に
送る。血液試料を周期的に採って、ペプチド血液水準を
分析する。

生物体中におけるペプチド放出の計算は、尿および糞の
中に現れる放射能の毎日の全量に基づいて行なう。

V.比較の試験管中溶解 溶解実験は、振とうボルト法を用いて、39℃で行なう。
pH＝7.1に調整されたリン酸塩緩衝食塩水（PBS）を溶解
媒質とする（蒸留水に3.45gのNaH₂PO₄.H₂O、3.55gのNa₂
HPO₄および9.50gのNaClを溶かして1000mLとする）。

埋めこみ体を、使い捨てのポリプロピレン平底管（No
67.790のフタを有するSarstedt No 58.537）の中に入
れ、30mLのPBSを加える。管を39℃のフィッシャー振と
う式水浴（モデル 129−シェーカーの設定は２ 3/4）
の中に入れる。

PBSは毎日とりかえ、試料を、放出されたペプチドにつ
いて、シンチレーションカウンターを用いて計数するこ
とによって分析する。実験の過程の中で、試料のうちの
幾つかのものは、計数の前にPBSで１乃至10に希釈しな
ければならなかった。

VI.結果および考察 第VI表は、試験管内および生物体中の雄牛の標識された
トリステアレートデータを要約するものである。試験管
内の放出性向では、埋めこみ体は、pGLA（コポリ−Ｌ−
ラクチド／グリコリド）コーティングが３習慣後に竪固
性を失い始めるまで、最初の充発（burst）後1.6〜2.5m
g/日放出した。生物体中の放出系は、放射性標識材料の
毎日の排泄から計算すると、試験管内の性向と同様であ
る。生物体中の埋めこみ体は、43日の実験に亘って平均
3.2mg/日放出した。ペプチドは、雄牛の血中に、長期に
亘って亢進する水準で見出される。

【図面の簡単な説明】

添付図面は、本発明に従う、ペプチドを非経口的に投与
するための組成物の、長く伸ばされた時間の間に亘る、
事実上一様で連続な溶解性向を例示する概略の図面であ
り、 第１図は、未コーティングの押し固められた炭素数10〜
20の脂肪酸ペプチド塩の溶解のグラフ、 第２図は、押し固められ一部コーティングされた炭素数
10〜20の脂肪酸ペプチド塩の溶解のグラフ、そして 第３図は、ペプチドのトリステアレート塩の溶解性向に
及ぼす異なるコーティングの効果を示すグラフである。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】長時間に亘って、次式 his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ で示されるペプチドの実質的に一様な連続量を非経口的
   に投与するための組成物であって、 押し固められそして部分的にコーテイングされた該ペプ
   チドの脂肪酸塩を含んでなり、 該脂肪酸塩がC₁₀−C₂₀脂肪酸から選ばれた脂肪酸から形
   成されるものであり、 該コーテイングが生物分解性または非生物分解性であ
   り、かつ該組成物が水系環境中で或る程度の溶解性を示
   す、 前記組成物。
2. 【請求項２】前記脂肪酸塩がトリステアレートである特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。
3. 【請求項３】長時間に亘って、次式 his−Ｄ−trp−ala−trp−Ｄ−phe−lys−NH₂ で示されるペプチドの実質的に一様な連続量を非経口的
   に投与するための組成物であって、 押し固められそして部分的にコーテイングされた該ペプ
   チドの脂肪酸塩を含んでなり、 該脂肪酸がC₁₀−C₂₀脂肪酸から選ばれた脂肪酸から形成
   されるものであり、 該コーテイングが生物分解性または非生物分解性であ
   り、かつ 該組成物が水系環境中で或る程度の溶解性を示す、 前記組成物の調製方法であって、 前記ペプチドの脂肪酸塩をプレスする工程、 押し固められた前記ペプチドの脂肪酸塩を生物分解性ま
   たは非生物分解性コーテイング剤でコーテイングする工
   程、および 前記工程でコーテイングされたペプチドの脂肪酸塩から
   コーテイングの一部を除去して前記ペプチドを露出させ
   る工程、 を含んでなる方法。
4. 【請求項４】組成物が埋めこみ体の形態である特許請求
   の範囲第３項記載の方法。
5. 【請求項５】前記脂肪酸塩がトリステアレートである特
   許請求の範囲第４項記載の方法。