JPH0768144B2 - 静脈内投与可能なＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＭ含有薬物の製造方法 - Google Patents
静脈内投与可能なＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＭ含有薬物の製造方法Info
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- JPH0768144B2 JPH0768144B2 JP1299902A JP29990289A JPH0768144B2 JP H0768144 B2 JPH0768144 B2 JP H0768144B2 JP 1299902 A JP1299902 A JP 1299902A JP 29990289 A JP29990289 A JP 29990289A JP H0768144 B2 JPH0768144 B2 JP H0768144B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、人血から分画によって得られ、濃縮した形の
免疫グロブリンＧ（IgG）及び、免疫グロブリンＡ（Ig
A）並びに免疫グロブリンＭ（IgM）を含む蛋白質分画を
処理して行なう静脈内投与に適した免疫グロブリン溶液
の製造方法に関する。
免疫グロブリンＧ（IgG）及び、免疫グロブリンＡ（Ig
A）並びに免疫グロブリンＭ（IgM）を含む蛋白質分画を
処理して行なう静脈内投与に適した免疫グロブリン溶液
の製造方法に関する。
（従来の技術並びに発明が解決しようとする課題） 血漿又は血清を分画することによって得た蛋白質画分
（例えばコーン画分III）をコロイドケイ酸で処理して
リポイドを除き、ジエチルアミノエチル基を含む架橋デ
キストラン又はセルロース、好ましくは、ファルマシア
社（Pharmacia）製のジエチルアミノエチル・セファデ
ックスA50（登録商標）で処理し、次にβプロピオラク
トンで温度20ないし37℃、pH値7.0ないし8.5で２ないし
10時間にわたってpH値が一定になるまで処理する静脈内
投与可能なIgM含有蛋白質溶液の製造方法が欧州特許第0
013901号に記載されている。コーン画分IIIは所望の免
疫グロブリンのほかに多量の変性蛋白質、リポイド及び
多くのプロテナーゼを含む。コーン画分IIIの静脈内禁
忌性の原因はIgG重合体と蛋白質分解活性が高いプロテ
ィナーゼ及びその他の変性蛋白質にある。
（例えばコーン画分III）をコロイドケイ酸で処理して
リポイドを除き、ジエチルアミノエチル基を含む架橋デ
キストラン又はセルロース、好ましくは、ファルマシア
社（Pharmacia）製のジエチルアミノエチル・セファデ
ックスA50（登録商標）で処理し、次にβプロピオラク
トンで温度20ないし37℃、pH値7.0ないし8.5で２ないし
10時間にわたってpH値が一定になるまで処理する静脈内
投与可能なIgM含有蛋白質溶液の製造方法が欧州特許第0
013901号に記載されている。コーン画分IIIは所望の免
疫グロブリンのほかに多量の変性蛋白質、リポイド及び
多くのプロテナーゼを含む。コーン画分IIIの静脈内禁
忌性の原因はIgG重合体と蛋白質分解活性が高いプロテ
ィナーゼ及びその他の変性蛋白質にある。
欧州特許第0013901号で使用されるコロイドケイ酸は適
当なリポイド除去剤であるが、凝固因子を接触活性化
し、こうして更にコーン画分IIIに含まれる蛋白質分解
活性蛋白質の量を増加する。従って欧州特許第0013901
号の方法ではこのプロティナーゼの吸着のためにジエチ
ルアミノエチル・セファデックスA50（登録商標）型の
陰イオン交換体を使用することが必要である。プロティ
ナーゼの非特異的活性化の場合は、たいてい膨大な量の
適当な吸着剤を使用して初めてこのプロティナーゼの確
実な定量的除去が可能である。凝固系及びキニン系の蛋
白質の接触活性化の際に、陰イオン交換体に結合しない
蛋白質分解活性が解放される可能性がない訳でない。
当なリポイド除去剤であるが、凝固因子を接触活性化
し、こうして更にコーン画分IIIに含まれる蛋白質分解
活性蛋白質の量を増加する。従って欧州特許第0013901
号の方法ではこのプロティナーゼの吸着のためにジエチ
ルアミノエチル・セファデックスA50（登録商標）型の
陰イオン交換体を使用することが必要である。プロティ
ナーゼの非特異的活性化の場合は、たいてい膨大な量の
適当な吸着剤を使用して初めてこのプロティナーゼの確
実な定量的除去が可能である。凝固系及びキニン系の蛋
白質の接触活性化の際に、陰イオン交換体に結合しない
蛋白質分解活性が解放される可能性がない訳でない。
（課題を解決するための手段並びに作用、効果） 本発明の目的とするところは、コーン画分IIIを用いて
又は、血漿又は血清を分画することによって得られると
共に濃縮した形の免疫グロブリンを含む蛋白質画分を使
用してIgG、IgA、及びIgMの静脈内投与可能な無菌溶液
を製造する方法を見出すことである。
又は、血漿又は血清を分画することによって得られると
共に濃縮した形の免疫グロブリンを含む蛋白質画分を使
用してIgG、IgA、及びIgMの静脈内投与可能な無菌溶液
を製造する方法を見出すことである。
意外なことに、IgG、IgA、及びIgMの静脈内投与可能な
溶液を製造するには、コロイドケイ酸に吸着してコーン
画分IIIからリポイドを除去する処理を行なわないでよ
いことが判明した。第１図は本発明方法の略図を示し、
第２図には変法が示されている。
溶液を製造するには、コロイドケイ酸に吸着してコーン
画分IIIからリポイドを除去する処理を行なわないでよ
いことが判明した。第１図は本発明方法の略図を示し、
第２図には変法が示されている。
欧州特許第0013901号に基づくコーン画分IIIの処理は、
総蛋白質含量5g％であって、次の量的分配、即ち、IgG4
000mg％、IgA500mg％、IgM500mg％の免疫グロブリンを
含む静脈内投与に適合した溶液をもたらす。従ってこの
製剤のIgGとIgMの比は8:1である。細菌感染の治療の時
のこの製品の有効成分としては、IgM分子だけでなく、
製品に含まれるIgGも関与する。
総蛋白質含量5g％であって、次の量的分配、即ち、IgG4
000mg％、IgA500mg％、IgM500mg％の免疫グロブリンを
含む静脈内投与に適合した溶液をもたらす。従ってこの
製剤のIgGとIgMの比は8:1である。細菌感染の治療の時
のこの製品の有効成分としては、IgM分子だけでなく、
製品に含まれるIgGも関与する。
ヒトIgGは異なる化学的生物学的性質を持つ４つのサブ
クラス（IgG1、IgG2、IgG3及びIgG4）から成る。細菌と
の一次接触の後にまずIgM型抗体が生産され、細菌を凝
集させ、最後に補体に関係する溶解現象を生じる。遅れ
て現われるIgG抗体は通常、抗原に対するに応じて親和
性が高く、IgGサブクラスに応じてFc受容体依存性のフ
ァゴサイトーシス又は補体による破壊を誘起する（F.Sh
akib、Derby「IgGサブクラスの基本的及び臨床的特徴」
モノグラフス・イン・アレルギー［Monogruphes in All
ergy］19巻［1986年］Karger刊）。
クラス（IgG1、IgG2、IgG3及びIgG4）から成る。細菌と
の一次接触の後にまずIgM型抗体が生産され、細菌を凝
集させ、最後に補体に関係する溶解現象を生じる。遅れ
て現われるIgG抗体は通常、抗原に対するに応じて親和
性が高く、IgGサブクラスに応じてFc受容体依存性のフ
ァゴサイトーシス又は補体による破壊を誘起する（F.Sh
akib、Derby「IgGサブクラスの基本的及び臨床的特徴」
モノグラフス・イン・アレルギー［Monogruphes in All
ergy］19巻［1986年］Karger刊）。
細菌感染後のIgGサブクラスの分配が若干の研究論文で
研究されたが、しかしそれは主として種痘後の話しであ
る。特定の抗体活性と特定のIgGサブクラスの相互関係
は今日なお科学的調査研究の対象である。しかし相互関
係を解明することが不可能な場合には、IgG含有免疫グ
ロブリン製剤に、可能な限り、通常のプール血漿の抗体
活性に相当するIgGサブクラス分配を比定することが望
ましい。
研究されたが、しかしそれは主として種痘後の話しであ
る。特定の抗体活性と特定のIgGサブクラスの相互関係
は今日なお科学的調査研究の対象である。しかし相互関
係を解明することが不可能な場合には、IgG含有免疫グ
ロブリン製剤に、可能な限り、通常のプール血漿の抗体
活性に相当するIgGサブクラス分配を比定することが望
ましい。
表１はIgG含有免疫グロブリン製造の時にコロイドケイ
酸を使用することが望ましくないリポイドの濃度を下げ
るだけではなくIgG3の損失をもたらすことを示す。
酸を使用することが望ましくないリポイドの濃度を下げ
るだけではなくIgG3の損失をもたらすことを示す。
免疫グロブリン濃度の決定は次の種々の方法で行なわれ
た。即ちベーリングヴェルケ（Behringwerk）のパルテ
ィゲンプラッテ(R)（Partigenplatte）、カレンシュタ
ット（Kallestad）のクウォンティプレート(R)（Quanti
plate）及びベックマン（Beckmann）の比濁計Auto ICS
IIによるマンツィーニ（Mancini）法である。IgG、Ig
A、及びIgMの標準材料は、100IU/mlを含むWHO標準67/86
であった。ポリクローナル・サブクラス抗血清（Scha
f）を使用してアガロースプレート上で半径方向免疫拡
散によりIgGサブクラスを決定した（Janssen社）。標準
血清として免疫グロブリン決定用のWHO標準血清プール
を使用した。IgGサブクラスの決定のための公式のWHO標
準がまだないからである。Ｅ・メルク社の試薬を用いて
総リポイドを決定した。蛋白質溶液を濃硫酸と共に熱
し、次に燐酸ワニリン試薬と反応させた。
た。即ちベーリングヴェルケ（Behringwerk）のパルテ
ィゲンプラッテ(R)（Partigenplatte）、カレンシュタ
ット（Kallestad）のクウォンティプレート(R)（Quanti
plate）及びベックマン（Beckmann）の比濁計Auto ICS
IIによるマンツィーニ（Mancini）法である。IgG、Ig
A、及びIgMの標準材料は、100IU/mlを含むWHO標準67/86
であった。ポリクローナル・サブクラス抗血清（Scha
f）を使用してアガロースプレート上で半径方向免疫拡
散によりIgGサブクラスを決定した（Janssen社）。標準
血清として免疫グロブリン決定用のWHO標準血清プール
を使用した。IgGサブクラスの決定のための公式のWHO標
準がまだないからである。Ｅ・メルク社の試薬を用いて
総リポイドを決定した。蛋白質溶液を濃硫酸と共に熱
し、次に燐酸ワニリン試薬と反応させた。
欧州特許第0013901号に基づく濃度３％アエロジル（Aer
osil）のコロイドケイ酸の使用は望ましくないリポイド
を減少させるが、しかしながらIgG3の損失も招く。
osil）のコロイドケイ酸の使用は望ましくないリポイド
を減少させるが、しかしながらIgG3の損失も招く。
蛋白質溶液からIgG3を優先的に吸着するコロイドケイ酸
の特性は、表１に示したように既に高度に精製されたIg
G溶液に関係するだけでなく、一般的にIgG含有蛋白質溶
液にも関係する。（表２参照） 本発明に基づく製品は通常の血清プールに相当する濃度
のIgG3を含むが、３％アエロジル(R)で（AE）処理した
製剤は、次の表３に示すようにIgG3に欠けるものであ
る。。
の特性は、表１に示したように既に高度に精製されたIg
G溶液に関係するだけでなく、一般的にIgG含有蛋白質溶
液にも関係する。（表２参照） 本発明に基づく製品は通常の血清プールに相当する濃度
のIgG3を含むが、３％アエロジル(R)で（AE）処理した
製剤は、次の表３に示すようにIgG3に欠けるものであ
る。。
血漿画分は感染の危険が高い。この危険性は特にＢ型肝
炎と非Ａ型／非Ｂ型肝炎及び幼児期のHIV（human immun
deficiency virusヒト免疫不全ウィルス）の伝染と関連
する。診断学的処置によって血漿プールから肝炎の恐れ
のない血液製剤を作ることはできないので、血液成分の
種々の殺菌法が開発された。低温殺菌（10時間60℃）が
アルブミンに対して効果的に使用されているが、一方、
数年前に安定剤例えばアミノ酸、単糖類又はオリゴ糖類
及び糖アルコールの使用によって敏感な血漿蛋白質例え
ば凝固因子II、VIII及びXIIIを低温殺菌することも記述
されている（欧州特許第0018561号）。この安定剤の存
在での低温殺菌の効果はまだ評価が出ておらず、目下検
討中である。しかしながら免疫グロブリンを63℃に10分
間熱するとその抗補体活性が急増するので、低温殺菌は
免疫グロブリンの殺菌に不適当である（R.van Furth,A.
G.P.Braat,P.C.J.Leih,A.Gardi「静脈内免疫グロブリン
製剤のオプソニン物性と物理化学的特性」Vox Sang.53
巻70−75頁［1987年］）。
炎と非Ａ型／非Ｂ型肝炎及び幼児期のHIV（human immun
deficiency virusヒト免疫不全ウィルス）の伝染と関連
する。診断学的処置によって血漿プールから肝炎の恐れ
のない血液製剤を作ることはできないので、血液成分の
種々の殺菌法が開発された。低温殺菌（10時間60℃）が
アルブミンに対して効果的に使用されているが、一方、
数年前に安定剤例えばアミノ酸、単糖類又はオリゴ糖類
及び糖アルコールの使用によって敏感な血漿蛋白質例え
ば凝固因子II、VIII及びXIIIを低温殺菌することも記述
されている（欧州特許第0018561号）。この安定剤の存
在での低温殺菌の効果はまだ評価が出ておらず、目下検
討中である。しかしながら免疫グロブリンを63℃に10分
間熱するとその抗補体活性が急増するので、低温殺菌は
免疫グロブリンの殺菌に不適当である（R.van Furth,A.
G.P.Braat,P.C.J.Leih,A.Gardi「静脈内免疫グロブリン
製剤のオプソニン物性と物理化学的特性」Vox Sang.53
巻70−75頁［1987年］）。
静脈内免疫グロブリン製剤によるＢ型肝炎及び非Ａ型／
非Ｂ型肝炎の伝染を記述した最近の一連の刊行物から、
免疫グロブリン製剤にも殺菌処理を施すことが必要であ
ることが明らかである:J.Bjrkander,C.Cunnigham−Ru
ndles,P.Lundin,R.Sderstrm,L.A.Hanson（1988年）
「IgGサブクラス不全ガンマグロブリン欠乏症患者77人
中16人に肝臓障害を引き起こす静脈内免疫グロブリン予
防」Am.J.Med.84巻107−111頁。
非Ｂ型肝炎の伝染を記述した最近の一連の刊行物から、
免疫グロブリン製剤にも殺菌処理を施すことが必要であ
ることが明らかである:J.Bjrkander,C.Cunnigham−Ru
ndles,P.Lundin,R.Sderstrm,L.A.Hanson（1988年）
「IgGサブクラス不全ガンマグロブリン欠乏症患者77人
中16人に肝臓障害を引き起こす静脈内免疫グロブリン予
防」Am.J.Med.84巻107−111頁。
J.T.John,G.T.Ninan,M.S.Rajagopalan,F.Johnその他（1
979年）「市販のヒト免疫グロブリンによって引き起こ
された流行性Ｂ型肝炎」Lancet:1074頁。
979年）「市販のヒト免疫グロブリンによって引き起こ
された流行性Ｂ型肝炎」Lancet:1074頁。
A.M.Lever,A.V.D.Webster,D.Brown,H.C.Thomas（1984
年）「静脈内免疫グロブリンによりガンマグロブリン血
漿患者に生じる非Ａ型、非Ｂ型肝炎」Lancet II:1062−
1064頁。
年）「静脈内免疫グロブリンによりガンマグロブリン血
漿患者に生じる非Ａ型、非Ｂ型肝炎」Lancet II:1062−
1064頁。
D.Lockner,G.Bratt,A.Lindborg,E.Trnebohm（1987
年）「インタフェロンで治療に成功した静脈内γグロブ
リンによる低γグロブリン血漿患者の未確認の急性肝
炎」Acta.Med.Scand.221:413−415頁。
年）「インタフェロンで治療に成功した静脈内γグロブ
リンによる低γグロブリン血漿患者の未確認の急性肝
炎」Acta.Med.Scand.221:413−415頁。
P.E.Williams,P.L.Yap,J.Gillon,R.J.Crawford,G.Gale
a,B.Cuthbertson（1988年）「静脈内免疫グロブリンに
よる非Ａ型、非Ｂ型肝炎の伝染」Lancet II:501頁。
a,B.Cuthbertson（1988年）「静脈内免疫グロブリンに
よる非Ａ型、非Ｂ型肝炎の伝染」Lancet II:501頁。
LoGrippoが記述した低温除菌法はβプロピオラクトン及
び紫外線照射によるヒト血漿の併合処理である（G.A.Lo
Grippo及びH.Hayashi:ヘンリー・フォード病院医学雑誌
21号［1973年］181頁;G.A.LoGrippo及びF.W.Hartmann:B
ibl.Haematol.7号［1958年］225頁）。
び紫外線照射によるヒト血漿の併合処理である（G.A.Lo
Grippo及びH.Hayashi:ヘンリー・フォード病院医学雑誌
21号［1973年］181頁;G.A.LoGrippo及びF.W.Hartmann:B
ibl.Haematol.7号［1958年］225頁）。
LoGrippoが発表したデータが示すところでは、βプロピ
オラクトンと紫外線照射の組合わせだけがウィルスに対
して安全な血漿をもたらした（G.A.LoGrippo「ベータプ
ロン及びベータプロンと紫外線照射の組合せで処理した
血漿の10年間の臨床研究」Pacific Melicine and Surge
ry72巻［1964］298−302頁）。
オラクトンと紫外線照射の組合わせだけがウィルスに対
して安全な血漿をもたらした（G.A.LoGrippo「ベータプ
ロン及びベータプロンと紫外線照射の組合せで処理した
血漿の10年間の臨床研究」Pacific Melicine and Surge
ry72巻［1964］298−302頁）。
欧州特許第0013901号ではβプロピオラクトンが静脈内
投与可能な免疫グロブリンの製造のためのIgM含有蛋白
質溶液の処理に使用されている。
投与可能な免疫グロブリンの製造のためのIgM含有蛋白
質溶液の処理に使用されている。
本発明に基づく方法はβプロピオラクトン処理を行わず
とも、IgMを濃縮した免疫グロブリン溶液をもたらす。
その抗補体活性は約600CH50/g蛋白質である。βプロピ
オラクトン又は燐酸トリｎブチルによる補助処理でこの
製品によるウイルス感染を排除することができる。即ち
チンパンジーでの実験で示されたように、非Ａ型／非Ｂ
型肝炎の伝染も確実に排除するためには、補助紫外線照
射をせずにβプロピオラクトンによる免疫グロブリン溶
液の単独処理で十分である。
とも、IgMを濃縮した免疫グロブリン溶液をもたらす。
その抗補体活性は約600CH50/g蛋白質である。βプロピ
オラクトン又は燐酸トリｎブチルによる補助処理でこの
製品によるウイルス感染を排除することができる。即ち
チンパンジーでの実験で示されたように、非Ａ型／非Ｂ
型肝炎の伝染も確実に排除するためには、補助紫外線照
射をせずにβプロピオラクトンによる免疫グロブリン溶
液の単独処理で十分である。
欧州特許第0013901号と本発明方法との間のもう一つの
重要な相違は、陰イオン交換体による吸着に関するもの
である。欧州特許第0013901号ではコーン画分IIIがカプ
リル酸処理の前に更に陰イオン交換体で処理されるが、
本発明方法は、コーン画分IIIの処理の時に現われる蛋
白質分解活性を確実に除去するために、カプリル酸と活
性炭による免疫グロブリン溶液の処理の後に初めてこの
処理段階を実施する。
重要な相違は、陰イオン交換体による吸着に関するもの
である。欧州特許第0013901号ではコーン画分IIIがカプ
リル酸処理の前に更に陰イオン交換体で処理されるが、
本発明方法は、コーン画分IIIの処理の時に現われる蛋
白質分解活性を確実に除去するために、カプリル酸と活
性炭による免疫グロブリン溶液の処理の後に初めてこの
処理段階を実施する。
欧州特許第0013901号の目的は、IgG、IgA、及びIgM含有
蛋白質画分（コーン画分III）から静脈内投与可能なこ
の蛋白質の溶液を製造することであった。それには原料
の抗補体活性を減少するためにβプロピオラクトンを使
用することが必要であった。ところが意外なことに本発
明方法によって原画分の抗補体活性が既に著しく改善さ
れたので、血液製品の殺菌に適した他の物質、例えばβ
プロピオラクトンの燐酸トリｎブチルを使用することも
できることが判明した。本発明方法により製造された製
剤と対照製剤の抗補体活性（ACA）及び生体適合性の値
を表４に示す。
蛋白質画分（コーン画分III）から静脈内投与可能なこ
の蛋白質の溶液を製造することであった。それには原料
の抗補体活性を減少するためにβプロピオラクトンを使
用することが必要であった。ところが意外なことに本発
明方法によって原画分の抗補体活性が既に著しく改善さ
れたので、血液製品の殺菌に適した他の物質、例えばβ
プロピオラクトンの燐酸トリｎブチルを使用することも
できることが判明した。本発明方法により製造された製
剤と対照製剤の抗補体活性（ACA）及び生体適合性の値
を表４に示す。
免疫グロブリンの抗補体活性を決定するために、所定量
の被検製品と所定量のモルモット補体を培養し、補体の
残留量を滴定した。ACAを免疫グロブリンｇ当りのCH−5
0消費として示した。このACA決定法はM.Mayerが発表し
た方法にほぼ相当した（M.M.Mayer「補体及び補体の固
定」実験免疫化学２版133−240頁所載、C.Thomas、Spri
ngfield,II.）。
の被検製品と所定量のモルモット補体を培養し、補体の
残留量を滴定した。ACAを免疫グロブリンｇ当りのCH−5
0消費として示した。このACA決定法はM.Mayerが発表し
た方法にほぼ相当した（M.M.Mayer「補体及び補体の固
定」実験免疫化学２版133−240頁所載、C.Thomas、Spri
ngfield,II.）。
蛋白質ｇ当り1500CH50の抗補体活性（ACA）が静脈内
投与可能なIgG製品に体する基準値とみなされる。コー
ン画分IIIは＞1500CH50/g蛋白質のACA値を示し、経験上
静脈内不都合である。
投与可能なIgG製品に体する基準値とみなされる。コー
ン画分IIIは＞1500CH50/g蛋白質のACA値を示し、経験上
静脈内不都合である。
欧州特許第0013901号のIgM含有製品は300CH50/g蛋白質
のACAを示し、経験上静脈内投与によく適合する。Bleek
erその他によれば、生体適合性試験のための生体モデル
はラットモデルである（W.K.Bleeker,J.Agterberg,G.Ri
ghter,A.de Vriesvan Rossen,J.C.Bakker「免疫グロブ
リン製剤の低圧性副作用の検出のための動物モデル」Vo
x Sang.52巻281−290頁［1987年］）。
のACAを示し、経験上静脈内投与によく適合する。Bleek
erその他によれば、生体適合性試験のための生体モデル
はラットモデルである（W.K.Bleeker,J.Agterberg,G.Ri
ghter,A.de Vriesvan Rossen,J.C.Bakker「免疫グロブ
リン製剤の低圧性副作用の検出のための動物モデル」Vo
x Sang.52巻281−290頁［1987年］）。
このモデルの免疫グロブリンに対する適合性パラメータ
は血圧である。静脈内不適合の製剤は明瞭な血圧低下を
招く。静脈内不適合な製剤、即ち、i.m.（筋肉内）適用
可能な製剤と欧州特許第0013901号の製品及び実施例１
及び２の本発明製品との比較が示すところでは、本発明
に基づき製造される製品はラットの血圧降下がi.m.製品
の場合より著しく小さい（前記表４を参照）。
は血圧である。静脈内不適合の製剤は明瞭な血圧低下を
招く。静脈内不適合な製剤、即ち、i.m.（筋肉内）適用
可能な製剤と欧州特許第0013901号の製品及び実施例１
及び２の本発明製品との比較が示すところでは、本発明
に基づき製造される製品はラットの血圧降下がi.m.製品
の場合より著しく小さい（前記表４を参照）。
（実施例） 下記の実施例は本発明を説明する。
実施例１ コーン画分IIIに、そのペースト1Kg当り3Kgの蒸溜水を
加える。製品の温度を４℃に冷却した。蒸溜水1Kgにつ
き0.0055Kgの酢酸ナトリウム（Natriumacetat）・3H2O
を加えた。96％酢酸の添加によってpH値をpH5.05に調製
した。それぞれ50Kgのペーストを＋４℃の120の緩衝
溶液に懸濁させた。懸濁液のpH値を96％酢酸でpH5.05に
調製した。Cepa遠心分離器で遠心分離して沈澱物を分離
した。沈澱物から分離した溶液を＋25℃に熱した。上澄
み液1Kgにつき25mlのカプリル酸を加えた。カプリル酸
の添加は滴下漏斗で行なった。溶液のpH値を4.8に調製
し、バッチを＋20℃で１時間静置した。そのバッチに1K
g当り4gの燐酸三カルシウムを加え、更にそのバッチを2
0℃で45分間静置してから沈澱物の除去のためにバッチ
を遠心分離に掛けた。遠心分離の後に上澄み液を濾過
し、続いて限外濾過した。酢酸塩緩衝液に対して限外濾
過した溶液を蛋白値５％、pH値6.7に調製した。室温で
ゆっくり掻き混ぜながら、この溶液1Kgにつき5gの活性
炭を加えた。吸着時間は１時間であった。次に活性炭を
遠心分離で除き、上澄み液を濾過した。0.08Mの酢酸ナ
トリウム溶液で膨潤した。蛋白値1g当り40mgの量のジエ
チルアミノエチル・セファデックスA50（登録商標）を
濾過した溶液に加えた。セファデックス吸着をpH6.5で
行なった。セファデックスを分離した後、溶離液の蛋白
質含量を40g/に調製し、pHを8.0−8.1に一定に保ちな
がら上澄み液１につき1.40mlのβプロピオラクトンを
加えた。1NのNaOHを加えてpH値を一定に保った。βプロ
ピオラクトン処理の後に溶液を殺菌した。イオン濃度と
蛋白質の調製のために殺菌溶液を限外濾過及び濾過し
た。この溶液を殺菌し、１リットル入り無菌瓶に詰め
た。
加える。製品の温度を４℃に冷却した。蒸溜水1Kgにつ
き0.0055Kgの酢酸ナトリウム（Natriumacetat）・3H2O
を加えた。96％酢酸の添加によってpH値をpH5.05に調製
した。それぞれ50Kgのペーストを＋４℃の120の緩衝
溶液に懸濁させた。懸濁液のpH値を96％酢酸でpH5.05に
調製した。Cepa遠心分離器で遠心分離して沈澱物を分離
した。沈澱物から分離した溶液を＋25℃に熱した。上澄
み液1Kgにつき25mlのカプリル酸を加えた。カプリル酸
の添加は滴下漏斗で行なった。溶液のpH値を4.8に調製
し、バッチを＋20℃で１時間静置した。そのバッチに1K
g当り4gの燐酸三カルシウムを加え、更にそのバッチを2
0℃で45分間静置してから沈澱物の除去のためにバッチ
を遠心分離に掛けた。遠心分離の後に上澄み液を濾過
し、続いて限外濾過した。酢酸塩緩衝液に対して限外濾
過した溶液を蛋白値５％、pH値6.7に調製した。室温で
ゆっくり掻き混ぜながら、この溶液1Kgにつき5gの活性
炭を加えた。吸着時間は１時間であった。次に活性炭を
遠心分離で除き、上澄み液を濾過した。0.08Mの酢酸ナ
トリウム溶液で膨潤した。蛋白値1g当り40mgの量のジエ
チルアミノエチル・セファデックスA50（登録商標）を
濾過した溶液に加えた。セファデックス吸着をpH6.5で
行なった。セファデックスを分離した後、溶離液の蛋白
質含量を40g/に調製し、pHを8.0−8.1に一定に保ちな
がら上澄み液１につき1.40mlのβプロピオラクトンを
加えた。1NのNaOHを加えてpH値を一定に保った。βプロ
ピオラクトン処理の後に溶液を殺菌した。イオン濃度と
蛋白質の調製のために殺菌溶液を限外濾過及び濾過し
た。この溶液を殺菌し、１リットル入り無菌瓶に詰め
た。
実施例２ 原料は実施例１で述べたようにコーン画分IIIであっ
た。これを＋４℃ペースト50Kgにつき120の緩衝液に
懸濁させた。96％酢酸でpH値をpH5.05に調製した。室温
で滴下漏斗により懸濁液1Kg当り40mlのカプリル酸を加
えた。次に15分間攪拌し、1NのNaOHでpH値をpH5.05に調
製した。次にバッチに1Kg当り4gの燐酸三カルシウムを
加え、そのバッチを室温で攪拌しながら１時間置いた。
次に遠心分離した。上澄み液を実施例１で説明したよう
に限外濾過し、活性炭、ジエチルアミノエチル・セファ
デックスA50（登録商標）及びβプロピオラクトンで処
理した上で、溶液を限外濾過し、殺菌し、瓶詰めにし
た。
た。これを＋４℃ペースト50Kgにつき120の緩衝液に
懸濁させた。96％酢酸でpH値をpH5.05に調製した。室温
で滴下漏斗により懸濁液1Kg当り40mlのカプリル酸を加
えた。次に15分間攪拌し、1NのNaOHでpH値をpH5.05に調
製した。次にバッチに1Kg当り4gの燐酸三カルシウムを
加え、そのバッチを室温で攪拌しながら１時間置いた。
次に遠心分離した。上澄み液を実施例１で説明したよう
に限外濾過し、活性炭、ジエチルアミノエチル・セファ
デックスA50（登録商標）及びβプロピオラクトンで処
理した上で、溶液を限外濾過し、殺菌し、瓶詰めにし
た。
実施例３ 原料は実施例１で述べたようにコーン画分IIIであっ
た。これを＋４℃でペースト50Kgにつき120の緩衝液
に懸濁させた。カプリル酸処理と燐酸カルシウム吸着を
実施例１で述べたように行なった。遠心分離の後濾過し
た上澄み液を濃度１％のポリオキシエチレン誘導体Twee
n80(R)と混合し、15分後に燐酸トリｎブチルを濃度0.3
％まで加えた。バッチを＋25℃で８時間攪拌した。次に
５％大豆油を添加し、攪拌後30分して水相を油相から傾
斜し、水溶液を酢酸塩緩衝液に対して限外濾過した。蛋
白質を５％に、pH値を6.7に調製した。室温でゆっくり
掻き混ぜながらこの溶液1Kgにつき5gの活性炭を加え
た。吸着時間は１時間であった。次に活性炭を遠心分離
で除き、上澄み液を濾過した。
た。これを＋４℃でペースト50Kgにつき120の緩衝液
に懸濁させた。カプリル酸処理と燐酸カルシウム吸着を
実施例１で述べたように行なった。遠心分離の後濾過し
た上澄み液を濃度１％のポリオキシエチレン誘導体Twee
n80(R)と混合し、15分後に燐酸トリｎブチルを濃度0.3
％まで加えた。バッチを＋25℃で８時間攪拌した。次に
５％大豆油を添加し、攪拌後30分して水相を油相から傾
斜し、水溶液を酢酸塩緩衝液に対して限外濾過した。蛋
白質を５％に、pH値を6.7に調製した。室温でゆっくり
掻き混ぜながらこの溶液1Kgにつき5gの活性炭を加え
た。吸着時間は１時間であった。次に活性炭を遠心分離
で除き、上澄み液を濾過した。
0.08Mの酢酸ナトリウム溶液で膨潤した。蛋白質ｇ当り4
0mgの量のジエチルアミノエチル・セファデックスA50
（登録商標）を溶液に加えた。セファデックス吸着をpH
6.5で行なった。セファデックスの分離の後にイオン濃
度と蛋白質の調製のために溶液を限外濾過及び濾過し
た。この溶液を殺菌し、１リットル入り無菌瓶に詰め
た。
0mgの量のジエチルアミノエチル・セファデックスA50
（登録商標）を溶液に加えた。セファデックス吸着をpH
6.5で行なった。セファデックスの分離の後にイオン濃
度と蛋白質の調製のために溶液を限外濾過及び濾過し
た。この溶液を殺菌し、１リットル入り無菌瓶に詰め
た。
第１図は本発明製造方法の１実施例の工程図、第２図は
その変形例の工程図である。
その変形例の工程図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ウォルフガング ステファン ドイツ連邦共和国 デー‐6072 ドライア イヒ フィリップ‐ホルツマン‐ストラー セ 84 (72)発明者 デトレフ ピエチャクツェク ドイツ連邦共和国 デー‐6115 ミューン スター ダルムステットター ストラーセ 54 (72)発明者 ディーター ルドニク ドイツ連邦共和国 デー‐6072 ドライア イヒ フライエル‐ホン‐スタイン スト ラーセ １
Claims (7)
- 【請求項１】人血から分画によって得られ、濃縮した形
の免疫グロブリンＧ（IgG）及び、免疫グロブリンＡ（I
gA）並びに免疫グロブリンＭ（IgM）を含む蛋白質画分
を処理して行なう、静脈内投与に適した免疫グロブリン
溶液の製造法において、 イ）蛋白質画分を酢酸塩緩衝液と混合し、 ロ）燐酸カルシュウム及びカプリル酸で処理し、 ハ）遠心分離し、 ニ）上澄み液を分離し、 ホ）ジエチルアミノエチル基を有する架橋デキストラン
である陰イオン交換体で吸着を行ない、 ヘ）吸着剤の分離の後に新たに得られる溶液を殺菌する ことを特徴とする方法。 - 【請求項２】酢酸塩緩衝液に不溶の成分を遠心分離によ
って除去することを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】吸着の前に上澄み液を活性炭で処理するこ
とを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項４】免疫グロブリン溶液をβプロピオラクトン
で処理することを特徴とする請求項１ないし３のいずれ
か１つに記載の方法。 - 【請求項５】４％免疫グロブリン溶液100mlにつき0.05
ないし0.15mlの量のβプロピオラクトンを使用すること
を特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】免疫グロブリン溶液を燐酸トリｎブチルで
処理することを特徴とする請求項１ないし３のいずれか
１つに記載の方法。 - 【請求項７】５％免疫グロブリン溶液100mlにつき0.10
ないし1.0mlの量の燐酸トリｎブチルを使用することを
特徴とする請求項６に記載の方法。
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| US6955917B2 (en) * | 1997-06-20 | 2005-10-18 | Bayer Healthcare Llc | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies |
| US5886154A (en) | 1997-06-20 | 1999-03-23 | Lebing; Wytold R. | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies |
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| DE3825429C2 (de) * | 1988-07-27 | 1994-02-10 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verabreichbaren polyklonalen Immunglobulin-Präparates mit hohem IgM-Gehalt |
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-
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- 1990-07-30 ES ES90114575T patent/ES2070960T3/es not_active Expired - Lifetime
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