JPH0772155B2

JPH0772155B2 - 補酵素ｑの精製法

Info

Publication number: JPH0772155B2
Application number: JP16683786A
Authority: JP
Inventors: 士郎梶山; 正飯野; 徳夫松田; 巌寺尾
Original assignee: Mitsubishi Gas Chemical Co Inc
Current assignee: Mitsubishi Gas Chemical Co Inc
Priority date: 1986-07-17
Filing date: 1986-07-17
Publication date: 1995-08-02
Anticipated expiration: 2010-08-02
Also published as: JPS6327455A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は補酵素Ｑの精製方法に関するものであり、さら
に詳しくは、互いに直列に接続された複数の吸着カラム
クロマトを使用することにより大量の粗製補酵素Ｑを精
製する新規な方法を提供するものである。

補酵素Ｑは生体内では末端呼吸系の電子伝達系に関与
し、重症筋無力症および肺気腫などの各種の疾病に対し
て優れた薬理効果を示す有用な物質である。

〔従来の技術および発明が解決しようとする問題点〕

補酵素Ｑは合成または微生物菌体もしくは天然物からの
抽出などの方法により得られるが、これらの方法により
得られた粗製補酵素Ｑは補酵素Ｑとともに多くの不純物
を含み純度がきわめて低いものである。補酵素Ｑを医薬
などとして使用するときには、この補酵素Ｑは極めて高
い純度であることが必要とされているが、そのため工業
的に優れた精製方法が要求される。

ここで工業的に優れた精製方法とは精製された補酵素Ｑ
（以下精製補酵素Ｑと記す）の純度が高く、かつ、単位
精製補酵素Ｑ当りの吸着カラムクロマトに使用する充填
剤使用量（ｇ−充填剤/g−精製補酵素Ｑ）及び溶媒使用
量（−溶媒/g−精製補酵素Ｑ）が少ない精製方法であ
る。

粗製補酵素Ｑから吸着カラムクロマトグラフイにより精
製補酵素Ｑを得るには、以下に示す様な多くの方法が知
られている。すなわち、充填剤として無機吸着担体を用
いる方法があり、担体としてシリカゲルを使用する方法
には、たとえば特開昭54−52790号、特開昭57−18988
号、特開昭59−33354号、特公昭58−53917号、特公昭59
−26273号、特公昭57−21309号および特開昭56−30941
号などに記載されている方法が知られている。一方、担
体としてフロリジルを使用する方法には、たとえば、特
開昭54−110389号、特公昭58−12266号および特開昭54
−122795号に記載されている方法があり、また、担体と
してアルミナを使用する方法としては、たとえば、特開
昭59−45894号に記載されている方法など極めて多数の
方法がある。

これらの無機吸着担体を用いた精製方法はすべて一本の
カラムを用いたクロマトグラフイーである。

また無機吸着担体を用いた方法で純度の高い精製補酵素
Ｑを収得しようとする場合には、回収率（精製補酵素Q/
粗製補酵素Ｑ）が極端に低く、単位精製補酵素Ｑ当りの
充填剤使用量及び溶媒使用量を多量にしなければならな
いのが一般である。従つて、工業規模での精製のために
は精製装置を大規模とする必要があるが、大規模化する
場合にはカラム内での溶媒の局部的な偏流、混合、粗製
補酵素Ｑの拡散問題等があり、吸着カラムクロマトグラ
フイの性質上、大規模化が非常に困難である。

また、充填剤として多孔性合成樹脂を用いる方法があ
る。すなわち非極性の多孔性合成樹脂を使い、使用溶媒
として極性溶媒を用いる吸着カラムクロマトとしては、
たとえば、特開昭55−39701号、特開昭56−121490号、
特開昭57−2686号、特公昭57−6910号、特公昭59−5064
8号などがあり、また、極性の多孔性合成樹脂および非
極性溶媒を用いる吸着カラムクロマトとしては、たとえ
ば特公昭57−11302号などが知られているが、前記の無
機吸着単体を使用したときと同様の理由により工業規模
での純度の高い精製補酵素Ｑを収得することが困難であ
り、そのうえ多孔性合成樹脂を用いた吸着カラムクロマ
トグラフイの性質上、純度の高い精製補酵素Ｑを高回収
率で収得するためには、吸着カラムクロマトグラフイに
引続いてさらに無機吸着担体を用いた吸着カラムクロマ
トおよび再結晶化などの精製が必要である。

本発明の目的は、従来の吸着カラムクロマトグラフイに
よる粗製補酵素Ｑの精製は大規模化に不適であることお
よびこの精製だけでは通常は満足すべき程十分に高い純
度の補酵素Ｑが得られないとの問題点を解決しうる補酵
素Ｑの精製方法を提供するにある。

〔問題を解決するための手段、作用〕

本発明者らは、吸着カラムクロマトグラフイによる方法
でありながら、工業規模での精製が可能であり、さらに
後処理をしなくても十分に純度の高い補酵素Ｑを得るた
めに鋭意研究を重ねた結果、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、粗製補酵素Ｑを吸着カラムクロマ
トグラフイで精製するに際し、互いに直列に接続された
複数のカラムを使用し、粗製補酵素Ｑ溶液を該カラムへ
順次通過させて各カラムから前カツト区分を系外へ排出
させ、最終カラムから主成分が補酵素Ｑである区分を回
収することを特徴とする補酵素Ｑの精製法である。

本発明の粗製補酵素Ｑとは、補酵素Q₄〜Q₁₂の少なくと
も１種とともに、１種あるいは多種類の不純物を多量に
含有する補酵素Ｑ含有物そのもの、または予め抽出、濃
縮およびまたは結晶化などのそれ自体公知の精製を経た
ものである。補酵素Ｑ含有物は、その製法および由来に
は特に制限はなく、具体的には、たとえば、微生物菌
体、動物臓器および血合肉などの生物体からの抽出物な
らびに合成により得られた反応生成物またはその濃縮物
などが挙げられる。

本発明において粗製補酵素Ｑは溶液となして互いに直列
に接続された複数のカラムを順次通過させることによ
り、その中の不純物の含有量は順次低下させられるが、
そのための手段として、各カラムの塔底から不純物（前
カツト）を順次排出する手段がある。

本発明を図面によつて具体的に説明する。この説明に使
用される粗製補酵素Ｑは第１図に示したような溶出パタ
ーンを有するものとする。すなわち、この粗製補酵素Ｑ
の主成分は補酵素Ｑであり、補酵素Ｑよりも早く時間の
経過に伴つて順次溶出される不純物x₁、x₂およびx₃（不
純物x₁、x₂およびx₃のそれぞれを含有する区分を前カツ
ト区分と記す。以下同様）と、補酵素Ｑよりも遅く時間
の経過に伴つて順次溶出される不純物x₄、x₅およびx
₆（不純物x₄、x₅およびx₆のそれぞれを含有する区分を
後カツト区分と記す。以下同様）を含有している。しか
して補酵素Ｑと各不純物とは、いずれもその曲線は長く
据をひき、各成分は載然と区分されることはなく常に少
量乃至微量の他の成分を互いに含有する。

本発明のために使用される精製装置のフローシートの例
を第２図に示す。すなち、この装置は第１カラム１、
第２カラム２および第３カラム３の３本のカラムを
有している。各カラムの塔底にはそれぞれ第１塔底管
５、第２塔底管６および第３塔底管７がある。各塔底管
にはそれぞれ第１塔底弁８、第２塔底弁９および第３塔
底弁10が設けられている。また、各塔底管には各カラム
の塔底と各塔底弁との間にそれぞれ第１検出器11、第２
検出器12および第３検出器13が設けられている。第１塔
底管５の第１塔底弁８と第１検出器11との間の部分と、
第２カラム２の塔頂とは第１連絡管14で連絡され、以つ
て第１カラム１と第２カラム２とは互いに直列に接続さ
れる。これと同様に第２カラム２と第３カラム３とは第
２連絡管15で互いに直列に接続されている。各連絡管に
はそれぞれ第１連絡弁16および第２連絡弁17が設けられ
ている。第１カラム１の塔頂には供給管18が設けられて
いる。なお各カラムの塔底の検出器としては、たとえば
紫外線吸収測定器（UVモニター）および赤外線吸収測定
器などをそれぞれ使用することができる。またこれらの
測定器にかえて、予め実験的に求められたタイムスケジ
ユールによつて弁を開閉させることもできる。

この装置を使用して、粗製補酵素Ｑ中の不純物（前カツ
ト）を各カラムの塔底から順次排出させるための操作に
ついて説明する。すなわち、溶媒に粗製補酵素Ｑを溶解
させた溶液を供給管18から第１カラム１に供給し、各成
分を展開させ第１カラム１内の充填剤に吸着させる。次
いで、第１塔底弁８から液を系外へ排出させながら第１
塔頂管４から溶媒を注下して、主成分が不純物x₁である
前カツト区分を第１カラム１から第１塔底弁８を経て系
外に排出させる。

第１カラム１からのこの排出液を補酵素Ｑが第１検出器
11で検出された時点でたゞちに第１塔底弁８を閉め第１
連絡弁16を開け第１カラム１からの排出液を第１連絡管
14を経由して第２カラム２へ移行させ、第１カラム１で
の残留液のほゞ全量を第２カラム２に移行させる。第２
カラム２では、前記第１カラム１におけると同様に各成
分は展開せしめられ吸着され、ついで、主成分が不純物
x₂である前カツト区分を第２塔底弁９を開けて第２塔底
管６から系外に排出させる。第２検出器12で第２カラム
２からの排出液中の補酵素Ｑが検出された時点で前記の
ようにこの排出液を第３カラム３に移行させ第２カラム
での残留液のほゞ全量を第３カラム３に移行させる。

第３カラム３でも第１カラム１および第２カラム２にお
けると同様に、各成分の展開、分離および溶出が行わ
れ、第３カラム３の第３塔底弁10から不純物x₃を主成分
として含有する前カツト区分、補酵素Ｑを主成分として
含有する区分および不純物x₄、x₅、x₆のそれぞれを主成
分として含有する各後カツト区分が順次排出される。こ
の排出液中の補酵素Ｑを第３検出器13によつて検出し、
主成分が補酵素Ｑである区分を回収する。

各カラムに残留している不純物を含有する区分を溶媒で
洗い出し各カラムの充填剤は再生され、各カラムは再
度、吸着カラムクロマトグラフイに供される。各カラム
での各成分の展開吸着、溶出および不純物の洗い出しの
時間を適宜組合わせる−たとえば第１カラム１での不純
物の洗い出しと併行して、第２カラム２では各成分の展
開、吸着、第３カラム３では少量の残存不純物の洗い出
しを行なう−ことにより各カラムの遊び時間を削減し各
カラムを有効に利用することができる。

本発明で使用される充填剤には特に制限はなく、従来、
一般に使用されている充填剤が使用可能であるが、代表
例を挙げれば次の如くである。

すなわち、無機充填剤としてはシリカゲル、アルミナ、
フロリジル、活性炭、ヒドロキシアパタイトなどがあげ
られる。また、シリカゲルの市販品の例を挙げると、ワ
コーゲルＣ−200およびワコーゲルＣ−300（いずれも和
光純薬製）、シリカゲルアート（Art）9385およびシリ
カゲルアート7734（いずれもメルク社製）、ならびにシ
リカゲルKT−3063およびシリカゲル4B（いずれもフジゲ
ル社製）などがある。

また、有機充填剤としては一般に多孔性合成樹脂が使用
されるが、この代表例として非極性合成樹脂としてたと
えばアンバーライトXAD−２（ローム・アンド・ハース
社製）、アンバーライトXAD−４（ローム・アンド・ハ
ース社製）およびハイポーラスポリマーHP（三菱化成工
業株式会社製）のようなスチレン−ジビニル共重合体な
どがあり、極性合成樹脂として、たとえばアンバーライ
トXAD−７（ローム・アンド・ハース社製）およびアン
バーライトXAD−８（ローム・アンド・ハース社製）な
どのポリアクリルエステル、アンバーライトXAD−９
（ローム・アンド・ハース社製）のようなスルホキシ
ド、およびアンバーライトXAD−11（ローム・アンド・
ハース社製）のような極性合成樹脂があげられる。

各カラムに充填される充填剤は互いに同じであつてもよ
く、また異なつてもよい。同じであることが好ましい。
同じ種類の無機充填剤であることが特に好ましい。

本発明において粗製補酵素Ｑを溶解するための溶媒およ
び各カラムに注加される溶媒は粗製補酵素を溶解しうる
溶媒であればよく、単一溶媒および混合溶媒のいずれを
も使用しうる。

通常は、無機充填剤を用いる場合において、単一溶媒と
しては非極性溶媒が好ましく、たとえば、ｎ−ヘキサ
ン、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘプタン、イソオクタン、シク
ロヘキサンおよびこれらの混合物、石油エーテルなどの
炭化水素が実用上特に好ましい。混合溶媒としては、前
記の非極性溶媒にエチルエーテルなどのエーテル系、酢
酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系、あるいはアセ
トン、メチルエチルケトンなどケトン系の有機溶媒を加
えた混合溶媒が特に好ましい。また充填剤として多孔性
合成樹脂を用いる場合において、非極性多孔性合成樹脂
を使用する場合にはメタノール、エタノール、イソプロ
パノール、ｎ−プロパノール、アセトン、メチルエチル
ケトン、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジオキサン、メチルセロソルブ、ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリルおよび水などの極性溶媒を単独また
は相互の混合物として使用することができ、混合溶媒が
好ましい。メタノールと水、メタノールとアセトン、メ
タノールとｎ−ヘキサン、アセトンと水などの混合溶媒
が特に好適に使用される。一方、極性多孔性樹脂を使用
する場合には、ベンゼン、トルエン、ｎ−ヘキサン、石
油エーテル、石油ベンゼン、イソペンタン、四塩化炭素
およびクロロホルムなどの非極性の溶媒を単独または相
互の混合物として使用することができる。また、これら
の溶媒にアセトン、エーテルおよび酢酸エチルのそれぞ
れを混合した混合溶媒も使用しうる。一般に混合溶媒が
好ましい。ｎ−ヘキサンと、アセトン、エーテルおよび
酢酸エチルのそれぞれとの混合溶媒が特に好ましい。

第１カラムの塔頂から注入される溶媒は、カラムに充填
されている充填剤の種類、粗製補酵素Ｑに含有されてい
る不純物の種類、数および量ならびに処理温度などに応
じて条件に適した溶媒を使用することが一般である。ま
た、第１カラムの塔頂から供給される溶媒は供給の途中
で別の溶媒に変更してもよい。

なお、溶媒を途中で変更するときには、各カラムとも無
機充填剤が充填されている場合および極性多孔性樹脂が
充填されている場合には順次溶媒の極性を大きくするこ
とが好ましい。反面、各カラムとも非極性多孔性樹脂が
充填されている場合には順次溶媒の極性を小さくするこ
とが好ましい。なお、溶媒の極性を調節するためには、
常法の如く極性の異る複数の溶媒を混合すればよい。

たとえば、ヘキサン／アセトン（容量比）を100/0、98/
2、95/5、の比率で混合すればその極性はこの順で大き
くなる。また、メタノール／アセトン（容量比）を7/
3、5/5、3/7で混合すればその極性はこの順で小さくな
る。

カラムの温度、カラムに供給される粗製補酵素Ｑ溶液の
温度、供給速度、第１カラムに注下される溶媒量および
供給速度などは、使用される充填剤の種類、粗製補酵素
Ｑ中の不純物の数、種類および量ならびに溶媒の種類な
どによつて異なり一概に特定しえない。これらの条件
は、それぞれ適した条件を選択すればよいが、各カラム
での条件をかえてもよく、また、各カラムの条件を同じ
くすることもでいる。しかして実用上、通常はつぎのよ
うな条件が採用される。すなわち、たとえば、カラムに
供給される粗製補酵素Ｑ溶液の温度およびカラムの温度
はそれぞれ充填剤が吸着能を失なわず、粗製補酵素Ｑ中
の補酵素Ｑが溶剤に溶解し、溶媒の沸点より低い温度で
あればよく、通常は15〜50℃、好ましくは室温乃至常温
であり、特に加熱、冷却の必要はないが、加熱、冷却す
ることを妨げない。なおカラムの温度は後のカラムほど
高くすることが好ましい。

粗製補酵素Ｑ溶液の供給量は、無機充填剤を用いた場合
には、通常は各カラムで使用した充填剤合計重量（ｇ）
の50重量％パーセント以下とされ、実用上30重量パーセ
ント以下とすることが好ましい。

また、充填剤として多孔性合成樹脂を用いた場合には、
通常は各カラムで使用した充填剤合計容積（ml）の50重
量パーセント（ｇ−粗製補酵素Q/ml−充填剤合計容積）
以下とされ、実用上、35重量パーセント以下とすること
が好ましい。なお、ここで充填剤合計容積（ml）とは見
掛の容積ではなく実容積である。

粗製補酵素Ｑを溶解する溶媒の量は、特に制限はない
が、通常は粗製補酵素Q1gに対して0.5〜5mlの割合とさ
れ、1.3〜2.5mlの割合が好ましい。

本発明で使用する各カラム間の充填剤重量（ｇ）の割合
には、特に制限はないが、最大充填量（重量）と最小充
填量（重量）との比は実用上、通常は0.1〜１とされ
る。

本発明で第１カラムに注下される溶媒の見掛けのカラム
空筒速度には、特に制限はないが、実用上、通常0.001〜0.3cm/s
ec、好ましくは0.01〜0.1cm/secである。さらにカラム
内上部圧力は分離上好ましくは供給溶媒の見掛けの空筒
速度が維持されれば常圧でも加圧下または減圧下でもよ
い。

〔実施例〕

次に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。し
かしながら本発明はこれらの実施例によつて限定される
ものではない。

実施例微生物菌体から得られた粗製補酵素54g（補酵素Q₁₀含量
37.8g）を、第２図に示した装置を用いて精製した。
カラム３本（すべて径22mm、長さ450mm）の円筒のそれ
ぞれに、ｎ−ヘキサンに懸濁させたワコーゲルＣ−300
210gを70gずつ各カラムに充填した。

25℃のｎ−ヘキサン 108mlに、前記の粗製補酵素54gを
溶解した溶液を第１カラム１上部に供給した。

ついで第１カラム１の塔底から液を系外へ抜き出しつ
ゝ、塔頂から溶媒（アセトン含有率0.5容量％のアセ
トンとｎ−ヘキサンとの混合溶媒以下同様）を注下し
た。溶媒の供給速度を684ml/hr、見掛けのカラム空筒
速度を0.05cm/secとしてカラム温度を25℃に保つた。

この操作により第１カラム１の第１塔底弁14から不純物
の溶液200mlを系外に取り出したときに第１検出器17（U
Vモニター波長254nm 以下同様）で補酵素Ｑが検出され
た。この時に第１塔底弁８を閉め、第１連絡弁16および
第２塔底弁９を開け、補酵素Q₁₀を含有する区分を第２
カラム２へ移行させた。

この時、第１カラム１に供給される溶媒を溶媒（ア
セトン含有率1.0容量％のアセトンとｎ−ヘキサンとの
混合溶媒以下同様）に変更した。なお、供給速度は溶
媒と同様684ml/hrである。

第２カラム２の温度も25℃とした。また、第１カラム１
および第２カラム２のそれぞれの塔頂圧力はそれぞれ0.
3Kg/cm²−Ｇおよび0.1Kg/cm²−Ｇであつた。

ここで第１カラム１および第２カラム２での溶媒の見掛
けの空筒速度はともに0.044cm/secであつた。

第２カラム２の第２塔底弁９からの溶出液を第２検出器
12で検出して不純物だけを含む溶出区分560mlおよび不
純物と微量の補酵素Q₁₀とを含む区分190mlの２つの区分
として溶出順に分取し系外に取り出した。

次に第２塔底弁９を閉め、第２連絡弁17および第３塔底
弁10を開け、おもに補酵素Q₁₀だけを含有する区分およ
び不純物（後カツト）と微量の補酵素Q₁₀を含有する区
分を第３カラム３に移行させた。

第１カラム１および第２カラム２の温度はそれぞれ変更
せず、第３カラム３の温度を35℃とした。

各カラムの塔頂圧力はそれぞれ0.4Kg/cm²−Ｇ、0.2Kg/c
m²−Ｇおよび0.1Kg/cm²−Ｇであつた。

吸着カラムクロマトグラフイ開始から溶出液合計量が20
60ml（第１カラム１塔底から200ml、第２カラム２塔底
から750ml、第３カラム３塔底から1110ml）に達した時
に、第１カラム１に注下された溶媒を溶媒（アセト
ン含有率3.0容量％のアセトンとｎ−ヘキサンとの混合
溶媒以下同様）に、変更した。なお供給速度は溶媒
と同様684ml/hrとした。

次いで第３カラム３の第３塔底弁10からの溶出液を、不
純物だけを含む溶出区分、不純物と微量の補酵素Q₁₀と
を含む区分、おもに補酵素Q₁₀だけを含む区分および不
純物（後カツト）と微量の補酵素Q₁₀とを含む区分の４
つの区分として溶出順に分取した。これらの溶出液量は
それぞれ2370ml、620ml、1750mlおよび410mlであつた。
また、吸着カラムクロマトグラフイ開始からの溶媒使用
合計量は6100ml（第１カラム１塔底から200ml、第２カ
ラム２塔底から750ml、第３カラム３の塔底から5150m
l）であつた。

おもに補酵素Q₁₀だけを含む区分1750mlから溶媒を除去
して26.27gの補酵素Q₁₀を得た。この補酵素Q₁₀の融点は
48℃で、逆相および順相高速液体クロマトグラフイーな
らびにマススペクトル、赤外線吸収スペクトルにより純
度100％の補酵素Q₁₀であることが確認された。

収得した精製補酵素Q₁₀の回収率は69.5、であり、収得
精製補酵素Q₁₀ 1g当りの溶媒使用合計量および充填剤使
用合計量はそれぞれ232mlおよび8.0gであつた。

なお、第１カラム１および第２カラム２には多量の不純
物が残留していた。

比較例第１カラム１および第２カラム２のそれぞれの塔底から
系外へ液を排出しなかつたほかは実施例に準じて行なつ
た。すなわち、25℃のｎ−ヘキサン 108mlに実施例と
同様の粗製補酵素Q₁₀ 54gを溶解した溶媒を第１カラム
１に供給した。第３塔底弁７を開け、前記の粗製補酵素
Q₁₀を各カラムを順次通過させて各成分を展開、吸着さ
せた。

第１カラム１の塔底から溶媒を、供給速度を684ml/h
r、見掛けの空筒速度を0.05cm/secとし、200ml注下し
た。

各カラムの温度をそれぞれ25℃に保つた。

ついで溶媒から溶媒に変更し、供給速度を変更しな
いで、溶媒 3240mlを注下した。

また、各カラムの温度をそれぞれ35℃に変更した。第１
カラム１、第２カラム２および第３カラム３の塔頂圧力
はそれぞれ0.4Kg/cm²−Ｇ、0.2Kg/cm²−Ｇおよび0.1Kg/
cm²−Ｇであつた。

第３塔底弁16からの溶出液を、不純物だけを含む溶出区
分、不純物と補酵素Q₁₀とを含む区分、おもに補酵素Q₁₀
だけを含む区分および不純物と補酵素Q₁₀とを含む区分
の４つの区分として、溶出順に分取した。それぞれの溶
出液量は3200ml、1190ml、1050mlおよび800mlであつ
た。おもに補酵素Q₁₀だけを含む区分1050mlから溶媒を
除去して、純度99％の補酵素Q₁₀ 16.9gを得た。

収得した精製補酵素Q₁₀の回収率は44.7％、収得精製補
酵素Q₁₀（純度99％）1g当りの溶媒使用合計量および充
填剤使用合計量はそれぞれ384mlおよび12.4gであつた。
この比較例２で得られた回収率は実施例と比して著しく
劣り、また精製補酵素Q₁₀純度は実施例に比して劣つて
いた。

また、精製補酵素1g当りの溶媒使用合計量および充填剤
使用合計量はいずれも実施例に比して極めて多かつた。

〔発明の効果〕

本発明において補酵素Ｑの回収率は著しく向上し、また
精製補酵素単位重量当りの充填剤使用量および溶剤使用
量が大きく節減される。従つて、本発明は吸着カラムク
ロマトグラフイによる方法でありながら、補酵素Ｑの工
業規模での精製が可能となる。しかも本発明によつて得
られた補酵素Ｑの純度は高い。

【図面の簡単な説明】

第１図は粗製補酵素Ｑの溶出パターンの一例を示し、第
２図は本発明のために使用される精製装置のフローシー
トの一例を示す。なお、図面において１……第１カラム、２……第２カラム、３……第３カラ
ム、４……第１塔頂管、５……第１塔底管、６……第２
塔底管、７……第３塔底管、８……第１塔底弁、９……
第２塔底弁、10……第３塔底弁、11……第１検出器、12
……第２検出器、13……第３検出器、14……第１連絡
管、15……第２連絡管、16……第１連絡弁、17……第２
連絡弁および18……供給管

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】粗製補酵素Ｑを吸着カラムクロマトグラフ
イで精製するに際し、互いに直列に接続された複数のカ
ラムを使用し、粗製補酵素Ｑ溶液を該カラムへ順次通過
させて、各カラムから前カツト区分を系外へ排出させ、
最終カラムから主成分が補酵素Ｑである区分を回収する
ことを特徴とする補酵素Ｑの精製法