JPH08157375A - 新規抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記一般式（Ｉ）で示される３′位末端リン
酸化ホスホロチオエート結合型オリゴデオキシヌクレオ
チドから選択される１種または２種以上を有効成分とし
て含有する抗ＨＩＶ剤。 （Ｇｓ）_ｎＧｐ （Ｉ） （式中、Ｇはデオキシグアノシン構造を表わし、ｓは隣
接するＧとエステル結合を形成しているホスホロチオリ
ン酸残基を表わし、各ｓは、それぞれ式中向かって左側
のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧとはその
５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成しているも
のであり、右端のｐは隣接するＧとエステル結合を形成
しているリン酸残基を表わし、３′位末端水酸基とエス
テル結合を形成しているものであり、ｎは２〜７の整数
を表わす。） 【効果】 ＨＩＶ（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾
患、ＡＩＤＳ、ＡＲＣの治療に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【技術分野】本発明は、ＨＩＶ（Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕ
ｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ）による疾患に
ついて、優れた抗ウィルス作用を示す３′位末端リン酸
化ホスホロチオエート結合型オリゴデオキシヌクレオチ
ドを有効成分とする抗ＨＩＶ剤に関するものである。

【０００２】

【背景技術】オリゴホモデオキシヌクレオチドに関する
従来の知見としては、１５塩基および２０塩基のホスホ
ロチオエート結合体にＨＩＶ増殖阻止作用があることが
アグラワル等により報告され、その効果は、鎖長に起因
し塩基の種類に依存しないと報告されている（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７０
７９，１９８８）。また、マツクラ等により２８塩基の
デオキシシチジンホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増
殖阻止作用があることが報告されている（Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，７７０６，
１９８７）。

【０００３】さらに最近、ワイアット等により８塩基の
ホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増殖阻止作用がある
ことが報告された（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ，９１，１３５６，１９９４）。しかし、
いずれも８塩基以上の長鎖ヌクレオチドのため、これを
調製する上で問題があり、また、生体内に投与した場合
の吸収性、安定性の点においても問題がある。

【０００４】本発明者は、かかる問題点を解決するた
め、ＨＩＶ増加阻止作用を有するオリゴヌクレオチド化
合物の低分子化について種々研究を重ね、先に４〜８塩
基の短鎖オリゴデオキシグアニル酸および２〜８塩基の
短鎖オリゴグアニル酸がＨＩＶ増殖阻止作用を有するこ
とを見出した。本発明者は更に研究を重ねた結果、３′
位末端リン酸化ホスホロチオエート結合型短鎖オリゴデ
オキシグアニル酸が優れたＨＩＶ増殖阻止作用を有する
ことを見出した。本発明はかかる知見に基づくものであ
る。

【０００５】

【発明の開示】本発明は、下記一般式（Ｉ）で示される
３′位末端リン酸化ホスホロチオエート結合型オリゴデ
オキシヌクレオチドから選択される１種又は２種以上を
有効成分として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤を
提供するものである。 （Ｇｓ）_ｎＧｐ （Ｉ） （式中、Ｇはデオキシグアノシン構造を表わし、ｓは隣
接するＧとエステル結合を形成しているホスホロチオリ
ン酸残基を表わし、各ｓは、それぞれ式中向かって左側
のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧとはその
５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成しているも
のであり、右端のｐは隣接するＧとエステル結合を形成
しているリン酸残基を表わし、３′位末端水酸基とエス
テル結合を形成しているものであり、ｎは２〜７の整数
を表わす。）

【０００６】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分である上記
一般式（Ｉ）で表わされる３′位末端リン酸化ホスホロ
チオエートオリゴデオキシヌクレオチドは、一般に、オ
リゴヌクレオチド合成に通常用いられる手法により合成
することができる（Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ １８ ５４３３；Ｄａｍｈ
ａ ＆ Ｏｇｉｌｖｉｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２０８１；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５４ ３６７）。

【０００７】たとえば、ホスホアミダイト法で固相合成
する場合について詳細に説明すると、３′位末端リン酸
化試薬（２−〔２−（４，４′−ジメトキシトリチロキ
シ）エチルスルホニル〕エチルコハク酸）が、市販のコ
ントロールポアグラス（ＣＰＧ）等の支持体に結合した
ものを出発原料とし、このものの保護基である４，４′
ジメトキシトリチル基をトリクロロ酢酸等で除いた後、
テトラゾールを縮合剤として、市販の単量体としての核
酸塩基のアミノ基をイソブチリル基で保護したアミダイ
ト試薬〔５′−ｏ−ジメトキシトリチル−３′−メトキ
シ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンデオキシ
グアノシン）を縮合させる。この際未反応の水酸基は、
無水酢酸、ジメチルアミノピリジン等によるアセチル化
基の導入等により保護しておくことが好ましい。この
後、ヨウ素を用いてリン酸部分の酸化を行ないトリエス
テル体とした後、３′位末端に相当するデオキシヌクレ
オチドの５′位水酸基の保護基である４，４′ジメトキ
シトリチル基を除去する。次に、３′位末端側からの２
番目に相当するアミダイト試薬を、テトラゾールを縮合
剤として縮合させた後、テトラエチルチウラム ジスル
ヒド（または３Ｈ−１２−ベンゾジチオル−３−オン
１，１−ジオキサイド）を用いてリン部分の硫化を行
い、ホスホロチオトリエステル体とする。この後、上記
一般式（Ｉ）のｎが３〜７の各オリゴヌクレオチドにつ
いては、以上の反応を目的とする鎖長になるまで繰り返
した後、最終的にはチオフェノール処理により、各イン
ターヌクレオチドをトリエステル体からジエステル体に
変換し、その後、アンモニア処理により、支持体より切
り出すと同時に塩基部の脱保護を行ない、目的とする
３′位末端リン酸化ホスホロチオエート結合型オリゴデ
オキシヌクレオチドを得る。また本発明の抗ＨＩＶ剤の
有効成分である３′位末端リン酸化ホスホロチオエート
結合型短鎖オリゴグアニルは、市販のもの（アメリカ合
衆国オレゴン州ウィルソンビル、オリゴエトセトラ社な
どにより合成、精製）を使用することもできる。

【０００８】

【実験例】次に実験例を挙げ、本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明の趣旨はこれら実験例により制約され
るものではない。

【０００９】＜ＭＴ−４細胞（Ｔ細胞系）を用いた抗エ
イズウィルス（ＨＩＶ）活性試験＞予め段階希釈した各
種オリゴデオキシヌクレオチドが入っている９６穴マイ
クロプレートにＭＴ−４細胞を６×１０^４細胞／穴の量
で撒き、さらにエイズウィルス〔ＨＩＶ−１（ＩＩＩ
Ｂ）又はＨＩＶ−２（ＲＯＤ）：：５０ＴＣＩＤ
_５０（５０％培養細胞感染濃度）／穴〕を感染させ、３
７℃、５％二酸化炭素下で５日間培養した。感染による
細胞障害抑制判定は、５日間培養後の生細胞をＭＴＴ法
（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０，３０９，１
９８８）で測定することにより求めた。この結果を表１
に示す。表中、式で表示した各オリゴデオキシヌクレオ
チドにおいて、式中のＧ、ｓおよびｐの意味は、前記一
般式（Ｉ）について記述した定義と同一の意味を表わ
す。

【００１０】

【００１１】表１に示されているとおり、本発明の抗Ｈ
ＩＶ剤の有効成分である３′位末端リン酸化ホスホロチ
オエート結合型オリゴグアニル酸酸は、ＨＩＶ−１に対
して、その３塩基結合体から極めて優れた抗ＨＩＶ作用
を有することが認められた。他方、１００μｇ／ｍｌの
濃度において細胞毒性は認められなかった。

【００１２】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分である３′
位末端リン酸化ホスホロチオエート結合型オリゴデオキ
シグアニル酸の安全性については、４塩基結合体を用い
て、マウスに２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与を行ってこれ
を確認した。また別の試験において同物質の１００ｍｇ
／ｋｇの経口投与において死亡例が認められなかった。

【００１３】本発明に係る新規な抗ＨＩＶ剤は、ＡＩＤ
Ｓ等のレトロウィルス感染症治療剤として特に有用なも
のであり、その投与形態については、特定されず、公知
の医薬用担体を用いて錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒
剤、散剤等の経口投与剤や、注射剤、点滴用剤、坐薬な
どの非経口投与剤とすることができる。経口剤としての
所要量は、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なる
が、通常、成人での投与量は約０．１ｇ〜６ｇを１日に
数回に分けて服用する。

【００１４】上記の錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口
投与剤を調製するには、例えば、デンプン、乳糖、白
糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、無機塩
類等を賦形剤としてを用いて常法に従って製造される。
この種の製剤には、前記賦形剤の他に適宜、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を選択し、使用することができる。それぞ
れの具体例は、以下に示すとおりである。

【００１５】〔結合剤〕デンプン、デキストリン、アラ
ビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロー
ス、エチルセルロース、ポリビニルセルロース、マクロ
ゴール。 〔崩壊剤〕デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カ
ルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロー
ス、低置換ヒドロキシプロピルセルロース。

【００１６】〔界面活性剤〕ラウリル硫酸ナトリウム、
大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート
８０。 〔滑沢剤〕タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂
肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレ
ングリコール。 〔流動性促進剤〕軽質無水ケイ酸、乾燥水素化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム。

【００１７】前記の一般式（Ｉ）で表わされるオリゴデ
オキシヌクレオチドは、懸濁液、エマルジョン液、シロ
ップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、こ
れらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有させる
ことができる。非経口剤としての所要量は、患者の年
齢、体重、疾患の程度によって異なるが、通常、成人で
前記のオリゴデオキシヌクレオチド１日１〜１００ｍｇ
程度の量であり、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射
により投与される。

【００１８】この非経口剤は慣用の方法で製造すること
ができる。その場合、希釈剤としては、一般に、注射用
蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、
ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プ
ロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用い
ることができる。また、必要に応じて、殺菌剤、防腐
剤、安定剤を加えることができる。この非経口剤は、安
定性の観点からは、バイアル等に充填した後、冷凍し、
通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍
結乾燥物として、使用時に、この凍結乾燥物から液剤を
再調製することができる。製剤化に際しては、必要に応
じて、適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を
加えることもできる。その他の非経口剤の例としては、
外用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸投与のための坐剤等が
挙げられ、これらは、いずれも慣用の方法で製造するこ
とができる。

【００１９】

【実施例】次に実施例を示し、本発明を詳細に説明する
が、下記の実施例により本発明は制限されるものではな
い。 実施例１

【００２０】上記の処方に従ってとおよびの一部
を均質になるまで混合し、圧縮成型した後、粉砕し、
の残量とを加えて混合し、打錠機にて圧縮成型して、
一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この一錠中には、ＧｓＧ
ｓＧｓＧｐ ２０ｍｇが含有されている。この錠剤は、
成人１日４〜８錠を数回に分けて服用される。

【００２１】実施例２

【００２２】上記の処方に従ってとととを均質に
なるまで混合し、常法により捏和し、押し出し造粒機に
より、乾燥・破砕した後、これにととを混合し、打
錠機にて圧縮成型して、一錠２００ｍｇの錠剤を得た。
この一錠中には、ＧｓＧｓＧｓＧｐ ２０ｍｇが含有さ
れている。この錠剤は、成人１日４〜８錠を数回に分け
て服用される。

【００２３】実施例３ に対し、ととを溶解させた後、５ｍｌのアンプル
に注入し、１２１℃で１５分間加熱滅菌を行って注射剤
を得た。

【００２４】

【発明の効果】本発明に係る新規な抗ＨＩＶ剤は、ＨＩ
Ｖ（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾患、ＡＩＤＳ、Ａ
ＲＣの治療に有効である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で示される３′位末端
   リン酸化ホスホロチオエート結合型オリゴデオキシヌク
   レオチドから選択される１種また２種以上を有効成分と
   して含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤。 （Ｇｓ）_ｎＧｐ （Ｉ） （式中、Ｇはデオキシグアノシン構造を表わし、ｓは隣
   接するＧとエステル結合を形成しているホスホロチオリ
   ン酸残基を表わし、各ｓは、それぞれ式中向かって左側
   のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧとはその
   ５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成しているも
   のであり、右端のｐは隣接するＧとエステル結合を形成
   しているリン酸残基を表わし、３′位末端水酸基とエス
   テル結合を形成しているものであり、ｎは２〜７の整数
   を表わす。）
2. 【請求項２】 前記一般式（Ｉ）中のｎが３であるＧｓ
   ＧｓＧｓＧｐで示される３′位末端リン酸化ホスホロチ
   オエート結合型オリゴデオキシヌクレオチドを有効成分
   として含有する請求項１に記載の抗ＨＩＶ剤。