JPH08211056A - 免疫反応媒体組成物、酵素標識抗体組成物、該組成物の安定化方法、該組成物を用いる免疫学的測定法及び免疫学的測定法用キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 非特異反応抑制効果が高く、保存安定性に優
れた免疫反応組成物及び酵素標識抗体組成物を提供する
こと。又は、再現性の高い免疫学的測定法及び簡便な免
疫学的測定法用キットの提供。 【構成】 血清を含有し、かつ、フェノール誘導体、第
４級アンモニウム化合物又は低級脂肪酸から選ばれるい
ずれか一つあるいは複数種を含有することを特徴とする
免疫反応媒体組成物、酵素標識抗体組成物、該組成物の
安定化方法、該組成物を用いる免疫学的測定法及び免疫
学的測定法用キット。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫反応媒体組成物及び
酵素標識抗体組成物並びにこれら組成物の安定化方法に
関する。また、これら組成物を用いる免疫学的測定法及
び免疫学的測定法用キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】免疫反応時において、免疫反応物質の非
特異反応の有無あるいはその程度は、その免疫反応系の
感度、精度に大きく影響する。そこで非特異反応を低減
させるために、免疫反応前あるいは反応時に各種タンパ
ク質をブロッキング剤として共存させることが一般的に
行われてる。しかし、反応系における非特異反応を誘引
する妨害物質は多様であり、免疫反応系の特質に左右さ
れ、非特異反応低減に効果のない場合もある。更に、免
疫反応緩衝液、検体希釈液、酵素標識抗体液など免疫反
応媒体組成物などにタンパク質を含ませることは、雑菌
の繁殖などが起こり腐敗しやすく、またそれに基ずく性
能劣化など組成物の品質として長期保存性に劣る場合が
多い。

【０００３】また、酵素標識抗体液にペルオキシダーゼ
を標識化酵素として用いる場合、溶液中において抗体に
結合している酵素は、それが特に低濃度で存在する際は
酵素活性が不安定であり、短時間で失活することがあ
る。酵素標識抗体液中にタンパク質を含有させること
は、ペルオキシダーゼ安定化および免疫反応時において
非特異反応抑制に効果があがる一方で、長期保存性に劣
ることは上記と同様な理由である。加えて、ペルオキシ
ダーゼ活性保持、防菌静菌作用を持つフェノールおよび
その誘導体の一部は、防菌静菌作用を優先させる添加量
ではタンパク質を変性させてしまう可能性がある。特開
平6-133772号に記述の範囲では、例えばフェノールを0.
04％の濃度で添加した酵素抗体液は、少なからず酵素活
性を含む免疫反応系に影響を与えることが明らかであっ
た。

【０００４】ペルオキシダーゼ活性保持など安定化法に
おいて、安定なペルオキシダーゼ組成物として、ペルオ
キシダーゼ、血清を含む媒質にハロゲン化フェノールを
添加したもの（特開昭61-78385号）、ペルオキシダーゼ
安定化のためにアルコキシフェノールを添加したもの
（特開昭64-63380号）、ペルオキシダーゼおよび抗体の
安定化のために、特定のハメットシグマ値で規定した置
換基を有するフェノールを添加すること（特開平2-4298
2号）などが知られている。しかし、免疫反応系への影
響を与えずに保存性に優れかつ非特異反応抑制できるも
のはなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、非特
異反応抑制効果が高く、保存安定性に優れた免疫反応組
成物及び酵素標識抗体組成物を提供することである。本
発明の別の目的は、再現性の高い免疫学的測定法及び簡
便な免疫学的測定法用キットの提供にある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明の上記目的は、下
記構成により達成される。

【０００７】１） 血清を含有し、かつフェノール誘導
体、第４級アンモニウム化合物又は低級脂肪酸から選ば
れる少なくとも一種を含有することを特徴とする免疫反
応媒体組成物。

【０００８】２） 酵素標識抗体、血清及びフェノール
誘導体を含有し、かつ第４級アンモニウム化合物及び低
級脂肪酸から選ばれる少なくとも一種を含有することを
特徴とする酵素標識抗体組成物。

【０００９】３） 酵素標識抗体、血清及び0.01(w/v)
％から0.80(w/v)％のフェノール誘導体を含有し、かつ
第４級アンモニウム化合物及び脂肪酸から選ばれる少な
くとも一種を含有することを特徴とする酵素標識抗体組
成物。

【００１０】４） 血清を含む免疫反応媒体組成物にフ
ェノール誘導体、第４級アンモニウム化合物又は低級脂
肪酸から選ばれる少なくとも一種を添加することを特徴
とする免疫反応媒体組成物の安定化方法。

【００１１】５） 酵素標識抗体と血清及び0.01％から
0.80％のフェノール誘導体を含有し、かつ第４級アンモ
ニウム化合物及び脂肪酸から選ばれる少なくとも一種を
添加することを特徴とする酵素標識抗体組成物の安定化
方法。

【００１２】６） 上記免疫反応媒体組成物または上記
酵素標識抗体組成物を用いることを特徴とする免疫学的
測定法。

【００１３】７） 上記免疫反応媒体組成物または上記
酵素標識抗体組成物を用いることを特徴とする免疫学的
測定法用キット。

【００１４】本発明において、免疫反応を行う際に反応
を媒体とする、例えば免疫一次反応緩衝液、酵素標識抗
体液に血清、ヒドロキシ安息香酸系フェノール誘導体、
デヒドロ酢酸等の脂肪酸又は塩化ベンザルコニウム等の
第４級アンモニウム化合物を規定量含有させることによ
り、非特異反応抑制効果が高く、酵素や抗体価の活性を
保持し、長期保存安定性に優れた免疫反応組成物が得ら
れた。

【００１５】本発明の免疫反応媒体組成物は、おもに抗
原抗体反応の行われる場に供することができる。

【００１６】本発明の組成物に含まれる血清は、経時的
に不活化してしまう抗体ならびに抗体結合酵素の安定
化、さらに免疫反応時における非特異反応の抑制に寄与
する。

【００１７】血清としては、ヤギ、ヒツジ、ウサギの各
血清等が使用され、特に好ましくはウサギの血清等が用
いられる。血清は多量に用いてもその効果は飽和するば
かりでなく、かえって感度低下の遠因になることもあり
うる。また、各種雑菌が繁殖しやすくなるなどの問題が
生じる。一方、少量では本発明の効果を発揮するに至ら
ない。そのため血清等の添加量は、該組成物に対して0.
01(V/V)％〜50(V/V)％、好ましくは１(V/V)％〜20(V/V)
％で用いられる。なお、血清以外の血清成分として、血
清タンパクグロブリン画分等の血清粗精製タンパク質に
代替することも可能である。

【００１８】本発明の組成物において、抗体に結合させ
る酵素はペルオキシダーゼを好ましく用いることができ
る。ペルオキシダーゼは、それが動物、植物、微生物由
来などのものを用いることが可能である。特にＨＲＰ
（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）が好ましい。

【００１９】ペルオキシダーゼと結合する免疫活性をも
つ物質は直接的に抗原、抗体などを挙げることができ
る。抗原あるいは抗体に酵素を結合させる方法は、物理
的結合、イオン結合、共有結合等いずれでもよく、特に
共有結合が望ましい。その結合方法は、例えばグルタル
アルデヒドを架橋剤とし、結合双方の物質のアミノ基を
共有結合させる方法、あるいはペルオキシダーゼの糖鎖
を過ヨウ素酸で酸化処理し、導入したアルデヒド基に目
的抗体のアミノ基を結合させる方法等を挙げることがで
きる。ペルオキシダーゼの結合量は、その抗体とのモル
比で1.2対１から10対１程度であることが、測定時の発
色感度がよく好ましい。

【００２０】このペルオキシダーゼの酵素活性は過酸化
水素を含む基質と発色剤、例えばオルトフェニレンジア
ミン等を用い、比色により定量が可能である。

【００２１】本組成物におけるフェノール誘導体は，抗
体活性を含む酵素活性を安定にする働きがある。また本
来有する静菌的作用により微生物繁殖による血清等の腐
敗を抑制し、性能面では血清に由来する非特異抑制効果
を長期にわたり安定化させることに寄与する。ここで用
いるフェノール誘導体は、フェノールがカルボキシル基
またはそのエステル各種のいずれか１種または複数種で
１個または複数個置換されているフェノール誘導体が好
ましい。例えば、o-，m-，p-ヒドロキシ安息香酸及びそ
の塩、またはそのメチル、エチル、プロピルエステル、
さらにその置換基が低級アルキル鎖等（炭素数が２ない
し４個）を介しているもの、例えばp-クマル酸、p-クマ
リン酸、さらにp-ヒドロキシフェニル-プロピオン酸、o
-ヒドロキシフェニル酢酸等が挙げられる。好ましく
は、p-ヒドロキシ安息香酸、p-ヒドロキシ安息香酸メチ
ル、p-ヒドロキシ安息香酸エチルが挙げられる。

【００２２】上記フェノール誘導体は、免疫反応組成物
に用いる際、多量に含有させる場合には免疫反応系に阻
害を与えることがある。逆に含有量が少量である場合は
本発明の目的を達成することができない。本発明の組成
物の基準では0.01％〜0.80％、好ましくは0.05％〜0.40
％がよい。

【００２３】本組成物における第４級アンモニウム化合
物は、好ましくはベンザルコニウムクロライド、セチル
ピリジウムクロライドが用いられる。特に好ましくはベ
ンザルコニウムクロライドが用いられる。同じく脂肪酸
は炭素数が２〜４個程度のものが用いられる。具体的に
はデヒドロ酢酸、ソルビン酸、プロピオン酸及びその塩
であり、好ましくはデヒドロ酢酸塩、ソルビン酸塩が用
いられる。組成物に含有させる量は、単独で含有させる
場合はそれぞれ0.001％〜1.2％、0.01％〜3.0％の範囲
であり、本発明に述べる作用を発する。複数種組み合わ
せる場合は、組み合わせの種類により変化するが、より
低い濃度でも効果を発揮することができる。

【００２４】本発明の組成物には、任意の緩衝剤、塩化
ナトリウム、塩化カリウムなどの塩類、水を含んでもよ
い。緩衝剤は通常使われるものが使用可能で、具体的に
は、トリス系、リン酸系、酢酸系、炭酸系、グリシン系
等を挙げることができる。溶液中のpＨは酵素の失活、
免疫反応系への影響を考慮して、pＨ3.5〜11.5を示すも
のが好ましい。

【００２５】以上のようにして安定化された免疫反応組
成物は、医療、生物学等の各分野で免疫学的測定法を用
いた測定検査薬に使用される。好ましくは、酵素免疫測
定法に使用される。

【００２６】また、前記測定法を利用し、本組成物を組
み込んだ非特異反応が少なく、安定性に優れた測定用検
査キットを提供可能とした。

【００２７】

【実施例】以下、本発明を実施例にて説明する。

【００２８】実施例１ 〈ACTa-ＥＩＡキットの調製〉 １．材料の調製 a.抗体固定化ビーズ ポリスチレン製のビーズ(ｄ；1/4inch)を適当数用意し
た。これをマヨネーズ瓶にいれ、エタノールを適当量加
え15分置き、軽く振盪して油分など汚れを除去した。蒸
留水でよくビーズを洗いエタノールを完全に除いた。さ
らに、0.2Ｍ炭酸バッファー；pＨ9.1で数回濯ぎ、抗Ａ
ＣＴ関連物抗体（特開平6-7191号記載）を20μg／mlの
濃度で含有する上記炭酸バッファーをビーズが浸る量加
えた。４℃温度条件下で24±２時間静置し、上記抗体を
該ビーズに固定化させた。燐酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)
で数回ビーズを洗い、0.5％のカゼインを含むＰＢＳ中
に37℃の温度条件下で18±２時間ビーズを置き、ブロッ
キング反応を行った。

【００２９】b.酵素標識抗体液 市販のウサギ抗ヒトα１-アンチキモトリプシン抗体
（(株)医学生物学研究所製）をＡＣＴを固定化したアフ
ィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製した。
ついで過ヨウ素酸法（石川栄治ら；酵素免疫測定法）に
従い、ペルオキシダーゼ（西洋わさび）を上記抗体に結
合させ酵素標識化を行った。それを0.05％のカゼインを
含有するＰＢＳに適当量加えて希釈し、酵素標識抗体液
を調製した。酵素標識抗体液には0.05％のp-ヒドロキシ
安息香酸、0.05％のp-ヒドロキシ安息香酸メチルを加
え、４℃で保存した。

【００３０】c.発色剤、基質液 発色剤は、オルトフェニレンジアミンニ塩酸塩30mgを使
い、安定化剤としてトリポリ燐酸50mgを含む純水に溶か
した後、凍結乾燥させた。0.02％過酸化水素水を含むク
エン酸炭酸緩衝液(pＨ5.0)10mlを添加し、発色液として
用いた。

【００３１】d.反応停止液 発色反応停止は１Ｎ硫酸を用いた。

【００３２】e.免疫反応用緩衝液 ＰＢＳに含有量0.5％となるようにカゼインを溶解し、
免疫反応用緩衝液とした。これに0.05％p-安息香酸メチ
ルを添加した。各調製した緩衝液は４℃で保存した。

【００３３】f.標準液 標準液は抗原(ACTa)を含有する腹水を、0.05％カゼイン
を含むＰＢＳで希釈して360mU／mlの標準液を調製し
た。０mU／mlの標準液は0.05％カゼインを含むＰＢＳを
用いた。

【００３４】２．測定 検体等サンプルにおける吸光度を以下の操作に従い、測
定した。

【００３５】〈測定操作〉サンプル100μl、次いで緩衝
液150μlをチューブ（トレイ）へ分注した。

【００３６】ビーズをピンセットで１個ずつ加えた。シ
ールをして37℃水浴中、1.5時間静置した。次に1.5ml以
上のＰＢＳで３回洗浄した。その後、250μlの酵素標識
抗体液を加え、室温(15〜25℃)で1.5時間静置した。続
いて1.5ml以上のＰＢＳで４回洗浄した。ビーズを別の
チューブへ移動させ、300μlの発色液を加え、室温で30
分間静置した。１mlの反応停止液を加え、反応を停止し
た。溶液の波長492nmの吸光度を分光光度計により測定
した。

【００３７】〈各添加剤の反応系への影響〉免疫反応緩
衝液を、ACTa-ＥＩＡキット（検体の吸光度測定などの
用法は下記に詳細）の構成部品である緩衝液の代わり
に、本発明組成物を緩衝液代替として、以下にある各条
件で調製して用いた。濃度は断りがなければ、すべて(W
/V)％とする。

【００３８】１．検体の調製 検体には管理血清（健常人プール血清）を用いた。

【００３９】２．免疫反応媒体組成物 リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)にウサギ血清（ギブコ
社）を３(V/V)％添加し、p-ヒドロキシ安息香酸メチル
(ＭＨＢ)とデヒドロ酢酸ナトリウム(ＳＤＡ)またはソル
ビン酸カリ(ＰＳ)（それぞれ関東化学(株)）の添加量を
それぞれ段階的に変化させたものをACTa-ＥＩＡキット
内の緩衝液の代替として用いた。

【００４０】３．反応系への影響 上記２の緩衝液を用いてキットの用法に従い、管理血清
における吸光度を測定した。結果を表１に示す。

【００４１】

【表１】

【００４２】免疫一次反応において、規定量以上の上記
添加物を含有させると、吸光度の低下がみられることか
ら、免疫反応系に対し、それらの添加が何らかの影響を
与えている。従って、免疫反応系では、該添加物の添加
限界量が存在する。表１から本実施例では、免疫一次反
応緩衝液に用いる場合、ＭＨＢは0.3％、ＳＤＡは1.2
％、ＰＳは3.0％以下に添加量を抑えると免疫反応系は
安定である。

【００４３】〈血清の添加と免疫非特異反応抑制〉 １．検体の調製 管理血清（健常人プール血清）に、おもに免疫反応阻害
因子となりうる物質を次の通り添加した。すなわち２％
イントラリピッド、１％ヘモグロビン、0.1％ビリルビ
ン、570IU／mlリウマチ因子(ＲＦ)を添加し、阻害因子
添加検体（阻害検体）とした。対照に因子を添加しない
管理血清を阻害因子非添加検体（非阻害検体）として用
いた。

【００４４】２．免疫反応希釈液の調製 免疫反応緩衝液にそれぞれウサギ、ヤギ、ヒツジ血清を
濃度を０〜50(v/v)％の範囲で変化させ添加した。ま
た、ＭＨＢ、ソルビン酸カリ(ＰＳ)（関東化学）をそれ
ぞれ0.15％、0.5％添加した。

【００４５】３．非特異反応抑制効果 上記添加検体、非添加検体の吸光度を比較することで行
い、結果を表２に示す。

【００４６】

【表２】

【００４７】表２から、本実施例によると、本キット緩
衝液において免疫非特異反応抑制効果は、血清添加量0.
01(V/V)％から見受けられ、５(V/V)％添加でほぼ非特異
反応は抑制され、50(V/V)％添加まで非特異反応抑制効
果は変化なく、免疫反応系は安定している。

【００４８】実施例２ 〈保存安定性の試験〉 １．ＳＤＡとＭＨＢ相互添加量と保存安定性 免疫反応組成物の保存安定性を以下の方法で確認した。

【００４９】実施例１と同様に、ACTa-ＥＩＡキットの
緩衝液としてにウサギ血清５％を添加し、ＳＤＡとＭＨ
Ｂの添加量を表３にあるように相互に変化させた。緩衝
液は42℃で10日間放置し、強制劣化を行った。検体には
非添加検体を用いた。強制劣化開始10日後に該緩衝液を
用いて非阻害検体を測定し、その吸光度を調べた。な
お、強制劣化を行わない(４℃保存)緩衝液を対照として
用いた。

【００５０】また、バックグラウンドの変化を調べるた
めに、検体を添加せず（緩衝液のみ）に、以下全く同様
に吸光度を調べた。結果を表３に示す。

【００５１】

【表３】

【００５２】表３から本実施例によれば、保存安定性に
優れるＭＨＢ，ＳＤＡ各添加範囲はＭＨＢでは0.01％以
上、ＳＤＡでは0.10％以上である。さらに免疫反応系に
影響を与えない範囲では、添加上限が、ＭＨＢの場合0.
30％、ＳＤＡの場合では0.80％である。相互に組み合わ
せて添加する場合は表３にあるようにこの限りでない。

【００５３】このように、ＭＨＢ，ＳＤＡを双方または
一方を規定量添加することにより、本発明の免疫反応組
成物が保存安定性に優れることがわかる。

【００５４】実施例３ 免疫反応緩衝液を、ACTa-ＥＩＡキットの第二次反応標
識抗体液の代替として以下に示すように調製し用いた。

【００５５】〈各添加剤の反応系への影響〉 １．検体の調製 実施例１と同様に調製した。

【００５６】２．酵素標識抗体含有組成物 リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)にウサギ血清タンパク画
分（硫安沈殿による粗精製物）を３(w/V)％添加し、Ｍ
ＨＢ，ＳＤＡ，p-ヒドロキシ安息香酸(ＨＢ)（関東化
学）の添加量をそれぞれ段階的に変化させたものをACTa
-ＥＩＡキット内の酵素標識抗体液の代替として用い
た。

【００５７】３．反応系への影響 上記２の酵素標識抗体液を用いてキットの用法に従い、
非添加検体における吸光度を測定した。結果を表４に示
す。

【００５８】

【表４】

【００５９】表４から本実施例において、酵素標識抗体
液中ＭＨＢ，ＨＢは添加濃度が０．８０％を越えると、
またＳＤＡは１．０％を越えると酵素活性低下あるいは
免疫反応を阻害するという影響が現れる。フェノール(P
hOH)は、0.10％以上添加すると免疫反応系へ少なからず
影響を与えることがわかる。つまり、フェノール系誘導
体はその添加量の総量が0.8％以下で、ＳＤＡは1.0％以
下の添加量で抑えると免疫反応系は安定である。

【００６０】〈血清の添加と免疫非特異反応抑制〉 １．検体の調製 実施例１と同様に調製した。

【００６１】２．免疫反応希釈液の調製 ACTa-ＥＩＡキットの酵素標識抗体液にウサギ、ヤギあ
るいはヒツジ血清のいずれかを、その濃度が０〜50(v/
v)％の範囲になるよう変化させ添加した。また、p-ヒド
ロキシ安息香酸(ＨＢ)、ＭＨＢ、塩化ベンザルコニウム
(ＢＣ)をそれぞれ0.05％，0.15％，0.002％添加した。

【００６２】３．吸光度の測定 実施例１に準じた。結果を表５に示す。

【００６３】

【表５】

【００６４】表５から本実施例において、酵素標識抗体
液の免疫非特異反応抑制効果は、血清添加量0.01(V/V)
％から見受けられ、ウサギ血清では1.0(V/V)％、ヒツジ
及びヤギ血清では５(V/V)％を添加するとほぼ非特異反
応は抑制され、50(V/V)％まで添加してもその性能は維
持される。

【００６５】実施例４ 〈酵素標識抗体液の保存安定性〉 １．ＳＤＡ、塩化ベンザルコニウム(ＢＣ)及びＭＨＢの
相互添加量と保存安定性、酵素標識抗体液の保存安定性
を以下の方法で確認した。

【００６６】実施例１と同様に、ACTa-ＥＩＡキットの
酵素標識抗体液の緩衝液として、ＰＢＳにウサギ血清３
(V/V)％、ＨＢを0.05％添加し、さらに、ＳＤＡを0.4
％、ＭＨＢを0.2％添加し本実施例とした。比較例１は
ＳＤＡを上記構成から除去し、比較例２はＳＤＡとＭＨ
Ｂを除去し、比較例３はＳＤＡ、ＭＨＢ及びＨＢを除去
し、比較例４はこれら添加物を総て除去した。酵素標識
抗体液は42℃で10日間放置し、強制劣化を行った。検体
は阻害血清、非阻害血清を用いた。なお、強制劣化を行
わない(４℃保存)同様の処方を施したものを対照として
用い結果を表６、表７に示す。

【００６７】

【表６】

【００６８】

【表７】

【００６９】次いで異なる添加剤を用いて保存安定性を
調べた、実施例１と同様に、酵素標識抗体液の緩衝液と
して、ＰＢＳにウサギ血清３(V/V)％、ＨＢを0.05％添
加し、ＳＤＡ、塩化ベンザルコニウム、ＭＨＢのうち２
種を組み合わせ、表８〜表10にあるように添加量を相互
に変化させた。酵素標識抗体液は42℃で10日間放置し、
強制劣化を行った。検体には非阻害血清を用いた。強制
劣化開始10日後に該抗体液を用いて検体を測定し、その
吸光度を調べた。なお、強制劣化を行わない(４℃保存)
緩衝液を対照として用いた。

【００７０】また、バックグラウンドの変化を調べるた
めに、検体を添加せず（緩衝液のみ）に、以下同様に吸
光度を調べた。結果を表８〜表10に示す。

【００７１】

【表８】

【００７２】

【表９】

【００７３】

【表１０】

【００７４】表６〜表10から本実施例においては、強制
劣化に起因する血清の有する非特異抑制効果作用の低減
を最小限に抑え、長期保存安定性に優れた標識抗体液を
提供できることが明らかになった。

【００７５】

【発明の効果】本発明により、免疫反応を行う際、反応
を媒体とする、例えば免疫一次反応緩衝液、酵素標識抗
体液に規定量の血清、ヒドロキシ安息香酸エステル等フ
ェノール誘導体、デヒドロ酢酸等低級脂肪酸、塩化ベン
ザルコニウム等第４級アンモニウム化合物を規定量含有
させることにより、非特異反応抑制効果が高く、保存安
定性に優れた免疫反応組成物の提供が可能となった。ま
た、該組成物を免疫一次及び／または、二次反応時に用
いたＥＩＡ法では、１ステップサンドイッチＥＩＡ法と
ともに、特にその効果が高いと言える。本発明はこうし
た免疫学的測定法、さらにそれを応用したキットを同時
に提供可能とした。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 血清を含有し、かつ、フェノール誘導
   体、第４級アンモニウム化合物又は低級脂肪酸から選ば
   れる少なくとも一種を含有することを特徴とする免疫反
   応媒体組成物。
2. 【請求項２】 酵素標識抗体、血清及びフェノール誘導
   体を含有し、かつ第４級アンモニウム化合物及び低級脂
   肪酸から選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴
   とする酵素標識抗体組成物。
3. 【請求項３】 酵素標識抗体、血清及び0.01(w/v)％か
   ら0.80(w/v)％のフェノール誘導体を含有し、かつ第４
   級アンモニウム化合物及び脂肪酸から選ばれる少なくと
   も一種を含有することを特徴とする酵素標識抗体組成
   物。
4. 【請求項４】 血清を含む免疫反応媒体組成物にフェノ
   ール誘導体、第４級アンモニウム化合物又は低級脂肪酸
   から選ばれる少なくとも一種を添加することを特徴とす
   る免疫反応媒体組成物の安定化方法。
5. 【請求項５】 酵素標識抗体と血清及び0.01％から0.80
   ％のフェノール誘導体を含有し、かつ第４級アンモニウ
   ム化合物及び脂肪酸から選ばれる少なくとも一種を添加
   することを特徴とする酵素標識抗体組成物の安定化方
   法。
6. 【請求項６】 上記免疫反応媒体組成物または上記酵素
   標識抗体組成物を用いることを特徴とする免疫学的測定
   法。
7. 【請求項７】 上記免疫反応媒体組成物または上記酵素
   標識抗体組成物を用いることを特徴とする免疫学的測定
   法用キット。