JPH08333267A - 抗アレルギー剤 - Google Patents
抗アレルギー剤Info
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- JPH08333267A JPH08333267A JP7158783A JP15878395A JPH08333267A JP H08333267 A JPH08333267 A JP H08333267A JP 7158783 A JP7158783 A JP 7158783A JP 15878395 A JP15878395 A JP 15878395A JP H08333267 A JPH08333267 A JP H08333267A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 安全性が確認されている天然物由来の物質の
中から抗アレルギー剤として使用可能なものを見いだ
し、医薬、化粧品、飲食品等に随意に配合可能な抗アレ
ルギー剤として提供する。 【構成】 ローズマリー、タイムおよびメリッサからな
る群から選ばれたシソ科植物を水または水と親水性有機
溶剤との混合物を用いて抽出処理し、得られたヒアルロ
ニダーゼ阻害性抽出物を抗アレルギー剤として利用す
る。
中から抗アレルギー剤として使用可能なものを見いだ
し、医薬、化粧品、飲食品等に随意に配合可能な抗アレ
ルギー剤として提供する。 【構成】 ローズマリー、タイムおよびメリッサからな
る群から選ばれたシソ科植物を水または水と親水性有機
溶剤との混合物を用いて抽出処理し、得られたヒアルロ
ニダーゼ阻害性抽出物を抗アレルギー剤として利用す
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品、化粧品、食品
等の各分野で使用可能な抗アレルギー剤に関するもので
ある。
等の各分野で使用可能な抗アレルギー剤に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】従来、抗アレルギー剤としてはヒスタミ
ン遊離抑制物質およびヒスタミンに対する競合拮抗物質
たとえばマレイン酸クロルフェニラミン、ジフェンヒド
ラミンおよびその類縁物質等が提案され、使用されてき
た。また、近年はＩ型アレルギー反応に伴って起こる肥
満細胞からのヒスタミン、セロトニンなどの起炎物質の
遊離を阻害するものとしてトラニラスト、クロモグリク
酸ナトリウム、バイカレン等が報告されている。これら
の抗アレルギー剤は、作用部位に選択的にはたらいてす
ぐれた効果を示すが、副作用を伴うことが多く、用途や
使用条件が厳しく制限されるという問題点があった。
ン遊離抑制物質およびヒスタミンに対する競合拮抗物質
たとえばマレイン酸クロルフェニラミン、ジフェンヒド
ラミンおよびその類縁物質等が提案され、使用されてき
た。また、近年はＩ型アレルギー反応に伴って起こる肥
満細胞からのヒスタミン、セロトニンなどの起炎物質の
遊離を阻害するものとしてトラニラスト、クロモグリク
酸ナトリウム、バイカレン等が報告されている。これら
の抗アレルギー剤は、作用部位に選択的にはたらいてす
ぐれた効果を示すが、副作用を伴うことが多く、用途や
使用条件が厳しく制限されるという問題点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、古来
食品や民間薬等の分野で使用されて安全性が確認されて
いる天然物由来の物質の中から抗アレルギー剤として使
用可能なものを見いだし、医薬、化粧品、飲食品等に随
意に配合可能な抗アレルギー剤として提供することにあ
る。
食品や民間薬等の分野で使用されて安全性が確認されて
いる天然物由来の物質の中から抗アレルギー剤として使
用可能なものを見いだし、医薬、化粧品、飲食品等に随
意に配合可能な抗アレルギー剤として提供することにあ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、ローズマリ
ー、タイムおよびメリッサからなる群から選ばれたシソ
科植物を水または水と親水性有機溶剤との混合物を用い
て抽出処理して得られた抽出物が強いヒアルロニダーゼ
阻害作用を示すという、本発明者らによる新規な知見に
基づくものであって、該抽出物に含まれるヒアルロニダ
ーゼ疎外性物質を有効成分とする抗アレルギー剤を提供
するものである。
ー、タイムおよびメリッサからなる群から選ばれたシソ
科植物を水または水と親水性有機溶剤との混合物を用い
て抽出処理して得られた抽出物が強いヒアルロニダーゼ
阻害作用を示すという、本発明者らによる新規な知見に
基づくものであって、該抽出物に含まれるヒアルロニダ
ーゼ疎外性物質を有効成分とする抗アレルギー剤を提供
するものである。
【０００５】
【作用】植物体等、天然物から得られた抽出物は組成が
複雑であるから、それが抗アレルギー作用を示す場合に
該抗アレルギー作用にかかわる成分は単一ではなく、か
つ個々の有効成分によって作用部位が異なることが多
い。そのため、天然物系のものの抗アレルギー作用の評
価に当たっては単一の評価法だけでなく様々な観点から
の総合的評価を行うことが望ましいとされる。従来、抗
アレルギー作用の指標とされる作用は幾つかあるが、そ
の代表的なものは、肥満細胞からヒスタミン等起炎物質
が遊離するのを抑制する作用、ヒアルロニダーゼ阻害作
用、血小板凝集抑制作用等であり、動物アレルギーモデ
ルを用いる試験も行われる。
複雑であるから、それが抗アレルギー作用を示す場合に
該抗アレルギー作用にかかわる成分は単一ではなく、か
つ個々の有効成分によって作用部位が異なることが多
い。そのため、天然物系のものの抗アレルギー作用の評
価に当たっては単一の評価法だけでなく様々な観点から
の総合的評価を行うことが望ましいとされる。従来、抗
アレルギー作用の指標とされる作用は幾つかあるが、そ
の代表的なものは、肥満細胞からヒスタミン等起炎物質
が遊離するのを抑制する作用、ヒアルロニダーゼ阻害作
用、血小板凝集抑制作用等であり、動物アレルギーモデ
ルを用いる試験も行われる。
【０００６】ヒアルロニダーゼは人体内のヒアルロン酸
レベルの維持のみならずアレルギーの発症にも強く関与
している。すなわち、アレルゲンに対する免疫応答によ
って自血球などの細胞が出現するとこの細胞が保有する
ヒアルロニダーゼにより細胞膜の組織が崩壊し、組織の
透過性と細胞内外の物質の拡散が促進されることによっ
てアレルギー症状が生じる。また、ヒアルロニダーゼは
肥満細胞中にもあって、ＩgＥ−抗原複合体がレセプタ
ーに結合すると活性化され、ヒスタミンの放出を促して
アレルギーを悪化させる。そして、このヒアルロニダー
ゼの作用を抑制することによって多くのアレルギー症状
が改善されることが既に確認されている。
レベルの維持のみならずアレルギーの発症にも強く関与
している。すなわち、アレルゲンに対する免疫応答によ
って自血球などの細胞が出現するとこの細胞が保有する
ヒアルロニダーゼにより細胞膜の組織が崩壊し、組織の
透過性と細胞内外の物質の拡散が促進されることによっ
てアレルギー症状が生じる。また、ヒアルロニダーゼは
肥満細胞中にもあって、ＩgＥ−抗原複合体がレセプタ
ーに結合すると活性化され、ヒスタミンの放出を促して
アレルギーを悪化させる。そして、このヒアルロニダー
ゼの作用を抑制することによって多くのアレルギー症状
が改善されることが既に確認されている。
【０００７】ローズマリー、タイムおよびメリッサから
なる群から選ばれたシソ科植物を水または水と親水性有
機溶剤との混合物を抽出溶媒に用いて得られる抽出物は
優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を示し、さらに血小板
凝集抑制作用やヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用（ヒス
タミン遊離抑制作用の指標となる）も示すので、多くの
アレルギー症状の治療に有効である。
なる群から選ばれたシソ科植物を水または水と親水性有
機溶剤との混合物を抽出溶媒に用いて得られる抽出物は
優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を示し、さらに血小板
凝集抑制作用やヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用（ヒス
タミン遊離抑制作用の指標となる）も示すので、多くの
アレルギー症状の治療に有効である。
【０００８】次に本発明による抗アレルギー剤の製造法
について説明する。ローズマリー（Rosmarinus officin
alis L.）はシソ科マンネンロウ属の植物であって、マ
ンネンロウとも呼ばれ、料理用の香料として使われるほ
か、解熱・発汗・健胃等のための民間薬としても知られ
ている。
について説明する。ローズマリー（Rosmarinus officin
alis L.）はシソ科マンネンロウ属の植物であって、マ
ンネンロウとも呼ばれ、料理用の香料として使われるほ
か、解熱・発汗・健胃等のための民間薬としても知られ
ている。
【０００９】タイム（Thymus vulgaris L.）はシソ科イ
ブキジャコウソウ属の植物であって、タチジャコウソウ
とも呼ばれ、食品・化粧品等の香料の原料、気管支炎等
に有効な民間薬などに利用されている。メリッサ（Meli
ssa officinalis L.）はシソ科セイヨウヤマハッカ属の
植物であって、セイヨウヤマハッカ、コウスイハッカ、
メリッサソウ等の名でも呼ばれ、食品や化粧品の香料の
製造原料として利用されている。また、ヨーロッパで
は、その浸出液が発汗、頭痛、歯痛等に効くと言われて
いる。
ブキジャコウソウ属の植物であって、タチジャコウソウ
とも呼ばれ、食品・化粧品等の香料の原料、気管支炎等
に有効な民間薬などに利用されている。メリッサ（Meli
ssa officinalis L.）はシソ科セイヨウヤマハッカ属の
植物であって、セイヨウヤマハッカ、コウスイハッカ、
メリッサソウ等の名でも呼ばれ、食品や化粧品の香料の
製造原料として利用されている。また、ヨーロッパで
は、その浸出液が発汗、頭痛、歯痛等に効くと言われて
いる。
【００１０】これらローズマリー、タイムまたはメリッ
サは、全草または地上部を抽出原料として利用すること
ができる。抽出溶媒として適当なものは、水、または水
と親水性有機溶剤（たとえばメタノール、エタノール、
アセトン、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等）と
の混合物である。中でも好ましいのは、水、水／エタノ
ール混合物（エタノール含有率５０％程度まで）等であ
る。
サは、全草または地上部を抽出原料として利用すること
ができる。抽出溶媒として適当なものは、水、または水
と親水性有機溶剤（たとえばメタノール、エタノール、
アセトン、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等）と
の混合物である。中でも好ましいのは、水、水／エタノ
ール混合物（エタノール含有率５０％程度まで）等であ
る。
【００１１】有効成分の抽出は、抽出原料を重量比で５
〜１５倍程度の抽出溶媒に、常温または還流加熱下に浸
漬すればよい。抽出液から溶媒を留去して得られる抽出
物は、そのまま、あるいは簡単な脱色処理を施すだけで
も、本発明の抗アレルギー剤として利用可能であるが、
ヒアルロニダーゼ阻害活性の向上に有効な任意の精製処
理を施してから抗アレルギー剤としての利用に供しても
よいことはいうまでもない。
〜１５倍程度の抽出溶媒に、常温または還流加熱下に浸
漬すればよい。抽出液から溶媒を留去して得られる抽出
物は、そのまま、あるいは簡単な脱色処理を施すだけで
も、本発明の抗アレルギー剤として利用可能であるが、
ヒアルロニダーゼ阻害活性の向上に有効な任意の精製処
理を施してから抗アレルギー剤としての利用に供しても
よいことはいうまでもない。
【００１２】ローズマリー、タイムまたはメリッサの抽
出物中にあってヒアルロニダーゼ阻害作用を示す有効成
分としては、ローズマリー抽出物ではジテルペン化合物
であるカルノソール、タイムではフラボノイド化合物で
あるエリオジシトールやビフェニル化合物類、たとえば
3,4,3′,4′-テトラヒドロキシ-5,5′-ジイソプロピル-
2,2′-ジメチルビフェニル等が確認されているが、ほか
にも幾つかの成分がヒアルロニダーゼ阻害活性に関与し
ているものと推察される。
出物中にあってヒアルロニダーゼ阻害作用を示す有効成
分としては、ローズマリー抽出物ではジテルペン化合物
であるカルノソール、タイムではフラボノイド化合物で
あるエリオジシトールやビフェニル化合物類、たとえば
3,4,3′,4′-テトラヒドロキシ-5,5′-ジイソプロピル-
2,2′-ジメチルビフェニル等が確認されているが、ほか
にも幾つかの成分がヒアルロニダーゼ阻害活性に関与し
ているものと推察される。
【００１３】本発明の抗アレルギー剤は、ローズマリ
ー、タイムまたはメリッサのいずれかから抽出されたヒ
アルロニダーゼ阻害物質、それらの混合物、または他の
抗アレルギー剤との混合物であってもよい。
ー、タイムまたはメリッサのいずれかから抽出されたヒ
アルロニダーゼ阻害物質、それらの混合物、または他の
抗アレルギー剤との混合物であってもよい。
【００１４】本発明の抗アレルギー剤は、医薬品、医薬
部外品としてそのまま使用するほか、任意の化粧品、飲
食品等に配合して、化粧の機会に皮膚に適用されたり日
常的な飲食を通じて摂取されるようにしてもよい。皮膚
化粧料たとえば化粧水、クリーム、乳液、シャンプー、
ベビーパウダー、リンス、ヘアトニック、石鹸、浴用
剤、パック、ファンデーション、リップクリーム、口
紅、衛生紙綿類（ガーゼ、ティッシュペーパー、ウェッ
トティッシュペーパー等）等に配合すれば、抗アレルギ
ー作用を有する化粧料が提供される。
部外品としてそのまま使用するほか、任意の化粧品、飲
食品等に配合して、化粧の機会に皮膚に適用されたり日
常的な飲食を通じて摂取されるようにしてもよい。皮膚
化粧料たとえば化粧水、クリーム、乳液、シャンプー、
ベビーパウダー、リンス、ヘアトニック、石鹸、浴用
剤、パック、ファンデーション、リップクリーム、口
紅、衛生紙綿類（ガーゼ、ティッシュペーパー、ウェッ
トティッシュペーパー等）等に配合すれば、抗アレルギ
ー作用を有する化粧料が提供される。
【００１５】化粧料に配合する場合、本発明の抗アレル
ギー剤の好適配合量は、平均的なヒアルロニダーゼ阻害
活性を有する未精製の抽出物からなるものの場合で約
０.０１〜１０重量％である。
ギー剤の好適配合量は、平均的なヒアルロニダーゼ阻害
活性を有する未精製の抽出物からなるものの場合で約
０.０１〜１０重量％である。
【００１６】
実施例１ ローズマリー、タイムまたはメリッサの全草風乾粉砕物
５０ｇを５００mlの抽出溶媒で２時間抽出処理し、得ら
れた抽出液を濃縮乾固して抽出物を得る。
５０ｇを５００mlの抽出溶媒で２時間抽出処理し、得ら
れた抽出液を濃縮乾固して抽出物を得る。
【００１７】種々の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行
なった結果を表１に示す。（抽出は水の場合９０℃で、
その他の場合は還流加熱下に行なった。水とアルコール
の混合比は体積比である。）
なった結果を表１に示す。（抽出は水の場合９０℃で、
その他の場合は還流加熱下に行なった。水とアルコール
の混合比は体積比である。）
【００１８】
【表１】 抽出物収率（重量％） 抽出原料 抽出溶媒 ローズマリー タイム メリッサ 水 １６.１ ２６.７ ２５.４ 水／エタノール（１／１） １５.１ ２２.２ ３０.７ エタノール ２０.１ ２４.２ １２.６ 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) ２０.５ ２５.３ ２２.４
【００１９】得られた各抽出物について、下記の方法に
よりヒアルロニダーゼ阻害作用を調べた。ヒアルロニダ
ーゼ阻害活性試験法：試料溶液２０μlと緩衝液0.18ml
およびヒアルロニダーゼ溶液0.1mlを混合し、３７℃で
２０分間インキュベートする。次いで活性化剤溶液0.2m
lを加えて３７℃で２０分間インキュベートする。これ
にヒアルロン酸カリウム溶液0.5mlを加え、３７℃で４
０分間反応させた後、0.4Ｎ-ＮaＯＨ水溶液0.2mlを加え
て反応を停止させる。氷中で冷却した後、反応液にホウ
酸溶液0.2mlを加え、３分間煮沸したのち冷却し、p-Ｄ
ＡＢＡ試薬６mlを加え、３７℃で２０分間インキュベー
トした後、585nmにおける吸光度Ａを測定する。別に、
酵素溶液を添加しないほかは上記と同様に操作して吸光
度Ｂを測定し、試料溶解に用いた溶媒についても上記と
同様に操作して吸光度Ｃを測定し、さらに試料溶解に用
いた溶媒について酵素溶液を添加しないほかは同様に操
作して吸光度Ｄを測定する。測定された吸光度Ａ〜Ｄか
ら、次式により阻害率を算出する。 阻害率（％）＝〔（Ｃ−Ｄ）−（Ａ−Ｂ）〕×１００
／（Ｃ−Ｄ）
よりヒアルロニダーゼ阻害作用を調べた。ヒアルロニダ
ーゼ阻害活性試験法：試料溶液２０μlと緩衝液0.18ml
およびヒアルロニダーゼ溶液0.1mlを混合し、３７℃で
２０分間インキュベートする。次いで活性化剤溶液0.2m
lを加えて３７℃で２０分間インキュベートする。これ
にヒアルロン酸カリウム溶液0.5mlを加え、３７℃で４
０分間反応させた後、0.4Ｎ-ＮaＯＨ水溶液0.2mlを加え
て反応を停止させる。氷中で冷却した後、反応液にホウ
酸溶液0.2mlを加え、３分間煮沸したのち冷却し、p-Ｄ
ＡＢＡ試薬６mlを加え、３７℃で２０分間インキュベー
トした後、585nmにおける吸光度Ａを測定する。別に、
酵素溶液を添加しないほかは上記と同様に操作して吸光
度Ｂを測定し、試料溶解に用いた溶媒についても上記と
同様に操作して吸光度Ｃを測定し、さらに試料溶解に用
いた溶媒について酵素溶液を添加しないほかは同様に操
作して吸光度Ｄを測定する。測定された吸光度Ａ〜Ｄか
ら、次式により阻害率を算出する。 阻害率（％）＝〔（Ｃ−Ｄ）−（Ａ−Ｂ）〕×１００
／（Ｃ−Ｄ）
【００２０】試料溶液の濃度を段階的に変更して上記阻
害率を測定し、５０％抑制濃度すなわち阻害率が５０％
になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表２
のとおりであった。アルコールのみを用いて得られた抽
出物のヒアルロニダーゼ阻害活性は水または含水アルコ
ールを用いて得られた抽出物のそれよりも劣っていた。
害率を測定し、５０％抑制濃度すなわち阻害率が５０％
になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表２
のとおりであった。アルコールのみを用いて得られた抽
出物のヒアルロニダーゼ阻害活性は水または含水アルコ
ールを用いて得られた抽出物のそれよりも劣っていた。
【００２１】
【表２】 抽出原料 抽出溶媒 ５０％抑制濃度(ppm) ローズマリー 水 １２２ 〃 水／エタノール（１／１） １１５ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) ２２０ 〃 エタノール ３８０ タイム 水 １０４ 〃 水／エタノール（１／１） １４８ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) １２０ 〃 エタノール ２４６ メリッサ 水 ６２ 〃 水／エタノール（１／１） ９２ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) ９５ 〃 エタノール ２９６
【００２２】実施例２ 実施例１で得られたローズマリー水抽出物、タイム水抽
出物、メリッサ水抽出物、ローズマリーエタノール抽出
物、タイムエタノール抽出物およびメリッサエタノール
抽出物について、下記の方法により血小板凝集抑制作用
を調べた。
出物、メリッサ水抽出物、ローズマリーエタノール抽出
物、タイムエタノール抽出物およびメリッサエタノール
抽出物について、下記の方法により血小板凝集抑制作用
を調べた。
【００２３】洗浄血小板浮遊液の調製：日本種白色家兎
の血液に77mＭ-ＥＤＴＡを１／１０量添加し、1000rpm
で１０分間遠心分離して沈殿物を除く。上清を2100rpm
で１０分間遠心分離し、沈殿した血小板を採取する。得
られた血小板を血小板洗浄液に浮遊させ、2100rpmで１
０分間遠心分離する。沈殿した血小板を採取し、血小板
数が３０万個／μlになるように血小板浮遊液に浮遊さ
せる。
の血液に77mＭ-ＥＤＴＡを１／１０量添加し、1000rpm
で１０分間遠心分離して沈殿物を除く。上清を2100rpm
で１０分間遠心分離し、沈殿した血小板を採取する。得
られた血小板を血小板洗浄液に浮遊させ、2100rpmで１
０分間遠心分離する。沈殿した血小板を採取し、血小板
数が３０万個／μlになるように血小板浮遊液に浮遊さ
せる。
【００２４】試験方法：上記方法で得られた洗浄血小板
浮遊液223μlにＣaＣl2溶液１μlを加え、３７℃に１分
間保温する。そこに試料溶液１μlを加えてさらに２分
間同温度に保温したのち、１分間撹拌する。次いでコラ
ーゲン溶液を２５μl添加し、３７℃で１０分経過後、
可視光線透過率Ａを測定して血小板凝集状態の指標とす
る。別に、試料溶液を添加しないほかは上記と同様にし
て、可視光線透過率Ｂを測定する。測定された可視光線
透過率より次式により血小板凝集抑制率を算出する。 血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ｂ−Ａ）／Ｂ〕×１００
浮遊液223μlにＣaＣl2溶液１μlを加え、３７℃に１分
間保温する。そこに試料溶液１μlを加えてさらに２分
間同温度に保温したのち、１分間撹拌する。次いでコラ
ーゲン溶液を２５μl添加し、３７℃で１０分経過後、
可視光線透過率Ａを測定して血小板凝集状態の指標とす
る。別に、試料溶液を添加しないほかは上記と同様にし
て、可視光線透過率Ｂを測定する。測定された可視光線
透過率より次式により血小板凝集抑制率を算出する。 血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ｂ−Ａ）／Ｂ〕×１００
【００２５】試料溶液の濃度を段階的に変更して上記血
小板凝集抑制率を測定し、５０％抑制濃度すなわち血小
板凝集抑制率が５０％になる試料溶液濃度を内挿法によ
り求める。試験結果は表３のとおりであった。アルコー
ルのみを用いて得られた抽出物の血小板凝集抑制作用は
水または含水アルコールを用いて得られた抽出物のそれ
よりも劣っていた。
小板凝集抑制率を測定し、５０％抑制濃度すなわち血小
板凝集抑制率が５０％になる試料溶液濃度を内挿法によ
り求める。試験結果は表３のとおりであった。アルコー
ルのみを用いて得られた抽出物の血小板凝集抑制作用は
水または含水アルコールを用いて得られた抽出物のそれ
よりも劣っていた。
【００２６】
【表３】 抽出原料 抽出溶媒 ５０％抑制濃度(ppm) ローズマリー 水 ３２５ 〃 水／エタノール（１／１） ２８０ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) ７５０ 〃 エタノール 活性微弱で測定不能 タイム 水 １７８ 〃 水／エタノール（１／１） １９０ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) ３６０ 〃 エタノール ３３０ メリッサ 水 ２９５ 〃 水／エタノール（１／１） ３２０ 〃 水/1,3-ブチレングリコール(1/1) １０５０ 〃 エタノール 活性微弱で測定不能
【００２７】実施例３ 実施例１で得られたローズマリー水抽出物、タイム水抽
出物およびメリッサ水抽出物について、ヘキソサミニダ
ーゼ遊離抑制率を指標とする下記の方法によりヒスタミ
ンの遊離抑制作用を調べた。
出物およびメリッサ水抽出物について、ヘキソサミニダ
ーゼ遊離抑制率を指標とする下記の方法によりヒスタミ
ンの遊離抑制作用を調べた。
【００２８】試験方法：ＲＢＬ-２Ｈ３細胞1.0×106個
を、２５mlのフラスコに入れた１５％ＦＢＳ添加ＭＥＭ
培地に接種して５％ＣＯ2下３７℃で４日間培養し、そ
の後、トリプシン処理および遠心処理（1000rpm,２分
間）を行なって、細胞画分を沈殿物として得る。これを
上記培地と同じ培地に4.0×105cell/mlになるように懸
濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニ
ル基ＩgＥ（DNP-specificＩgＥ）を５μl添加し、濃度
を0.5μg/mlとする。得られた細胞浮遊液を96wellsplat
eに８０μl播種し、５％ＣＯ2下３７℃で２４時間培養
する。培養終了後、各well中の培地を除去し、Siragani
an緩衝液にて洗浄する（500μl×２回）。次に上記緩衝
液３０μlを新たに加え、さらに試料溶液１０μlを加
え、３７℃で１０分間インキュベートする。次いでジニ
トロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）
溶液１０μlを加え、再度３７℃で１０分間インキュベ
ートする。その後、氷冷下で上清１０μlを新たな96wel
ls plateに移しかえ、これに１mＭ p-ニトロフェニル-
Ｎ-アセチル-β-D-グルコサミド溶液１０μlを加えて３
７℃で１時間インキュベートする。反応終了後、０.１
Ｍ Ｎa2ＣＯ3・ＮaＨＣＯ3緩衝液２５０μlを加え、マイ
クロプレートリーダーにて415nmでの吸光度Ａを測定す
る。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の
処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度を
Ｂとする）。また、細胞浮遊液の代わりに上記緩衝液を
用いて同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定さ
れる吸光度をＣとする）。そして、次式によりヘキソサ
ミニダーゼ遊離抑制率を算出する。
を、２５mlのフラスコに入れた１５％ＦＢＳ添加ＭＥＭ
培地に接種して５％ＣＯ2下３７℃で４日間培養し、そ
の後、トリプシン処理および遠心処理（1000rpm,２分
間）を行なって、細胞画分を沈殿物として得る。これを
上記培地と同じ培地に4.0×105cell/mlになるように懸
濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニ
ル基ＩgＥ（DNP-specificＩgＥ）を５μl添加し、濃度
を0.5μg/mlとする。得られた細胞浮遊液を96wellsplat
eに８０μl播種し、５％ＣＯ2下３７℃で２４時間培養
する。培養終了後、各well中の培地を除去し、Siragani
an緩衝液にて洗浄する（500μl×２回）。次に上記緩衝
液３０μlを新たに加え、さらに試料溶液１０μlを加
え、３７℃で１０分間インキュベートする。次いでジニ
トロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）
溶液１０μlを加え、再度３７℃で１０分間インキュベ
ートする。その後、氷冷下で上清１０μlを新たな96wel
ls plateに移しかえ、これに１mＭ p-ニトロフェニル-
Ｎ-アセチル-β-D-グルコサミド溶液１０μlを加えて３
７℃で１時間インキュベートする。反応終了後、０.１
Ｍ Ｎa2ＣＯ3・ＮaＨＣＯ3緩衝液２５０μlを加え、マイ
クロプレートリーダーにて415nmでの吸光度Ａを測定す
る。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の
処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度を
Ｂとする）。また、細胞浮遊液の代わりに上記緩衝液を
用いて同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定さ
れる吸光度をＣとする）。そして、次式によりヘキソサ
ミニダーゼ遊離抑制率を算出する。
【００２９】ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝
〔１−(Ａ−Ｃ)/(Ｂ−Ｃ)〕×１００ 別に、ポジティブコントロールとしてバイカリンを用い
た試験も行なった。試験結果は表４のとおりで、ローズ
マリー水抽出物、タイム水抽出物およびメリッサ水抽出
物は公知の活性物質であるバイカリンよりも強い活性を
示し、顕著なヒスタミン遊離抑制作用を有することが確
認された。
〔１−(Ａ−Ｃ)/(Ｂ−Ｃ)〕×１００ 別に、ポジティブコントロールとしてバイカリンを用い
た試験も行なった。試験結果は表４のとおりで、ローズ
マリー水抽出物、タイム水抽出物およびメリッサ水抽出
物は公知の活性物質であるバイカリンよりも強い活性を
示し、顕著なヒスタミン遊離抑制作用を有することが確
認された。
【００３０】
【表４】 試 料 ２５ppmにおける抑制率（％） ローズマリー水抽出物 １８.４ タイム水抽出物 ３１.６ メリッサ水抽出物 ２６.２ バイカリン（陽性対照） １３.５
【００３１】実施例４ 接触性皮膚炎モデルによるIV型アレルギー抑制作用を指
標にして、実施例１によるローズマリー水抽出物、タイ
ム水抽出物およびメリッサ水抽出物の抗アレルギー作用
を調べた。試験方法は次のとおりである。
標にして、実施例１によるローズマリー水抽出物、タイ
ム水抽出物およびメリッサ水抽出物の抗アレルギー作用
を調べた。試験方法は次のとおりである。
【００３２】試験方法：購入後１週間予備飼育したddy
系雄性マウス（８週令；１群５匹）の腹部２５×２０mm
の範囲の毛をカミソリで剃る。そこに、翌日、感作用抗
原（７％塩化ピクリル・エタノール溶液）を１００μl
滴下し、満遍なく塗布する。６日後、右耳介の厚さを測
定したのち、右耳介の表裏にチャレンジ用抗原（１％塩
化ピクリル・オリーブ油溶液）２０μlを塗布して一次
誘発を行う。塗布後２４時間を経過してから、右耳介の
厚さを測定する。次に、上記一時誘発による右耳介の腫
張度が高かったマウス（一次誘発で十分に感作が成立し
ている）を選び、試料溶液（１％水溶液）を右耳介の表
裏に毎日２０μl、１週間続けて塗布した後、再び上記
と同じ感作用抗原１００μlを腹部剃毛部に滴下して塗
布し、感作を行う。その後、試料溶液を右耳介の表裏に
毎日２０μl、１週間続けて塗布した後、右耳介の厚さ
ｄを測定する。その後、右耳介の表裏にチャレンジ用抗
原２０μlを塗布して誘発を行い、２４時間後に右耳介
の厚さＤを測定し、測定値より浮腫率〔（Ｄ−ｄ）×１
００／ｄ〕を求める。対照群には試料溶液の代わりに水
を塗布し、同様の測定を行う。測定結果から、次式によ
り抑制率を算出する。
系雄性マウス（８週令；１群５匹）の腹部２５×２０mm
の範囲の毛をカミソリで剃る。そこに、翌日、感作用抗
原（７％塩化ピクリル・エタノール溶液）を１００μl
滴下し、満遍なく塗布する。６日後、右耳介の厚さを測
定したのち、右耳介の表裏にチャレンジ用抗原（１％塩
化ピクリル・オリーブ油溶液）２０μlを塗布して一次
誘発を行う。塗布後２４時間を経過してから、右耳介の
厚さを測定する。次に、上記一時誘発による右耳介の腫
張度が高かったマウス（一次誘発で十分に感作が成立し
ている）を選び、試料溶液（１％水溶液）を右耳介の表
裏に毎日２０μl、１週間続けて塗布した後、再び上記
と同じ感作用抗原１００μlを腹部剃毛部に滴下して塗
布し、感作を行う。その後、試料溶液を右耳介の表裏に
毎日２０μl、１週間続けて塗布した後、右耳介の厚さ
ｄを測定する。その後、右耳介の表裏にチャレンジ用抗
原２０μlを塗布して誘発を行い、２４時間後に右耳介
の厚さＤを測定し、測定値より浮腫率〔（Ｄ−ｄ）×１
００／ｄ〕を求める。対照群には試料溶液の代わりに水
を塗布し、同様の測定を行う。測定結果から、次式によ
り抑制率を算出する。
【００３３】 抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００ （Ａ：対照群の浮腫率；Ｂ：試料溶液処理群の浮腫率） 試験結果を表５に示す。
【００３４】
【表５】 浮腫率（％） 抑制率（％） 対照群 １０１.９±６.０４ − ローズマリー抽出物処理群 ６５.７±４.２０ ３５.５＊ タイム抽出物処理群 ６９.７±１.６５ ３１.６＊ メリッサ抽出物処理群 ８５.９±４.４６ １５.８＊ （＊：危険率１％以下）
【００３５】
【発明の効果】上述のように、本発明の抗アレルギー剤
は抗アレルギー作用において優れているだけでなく、古
くから食品や化粧品の分野で利用されてきた植物体の抽
出物を有効成分とするものであるから、安全性にも優れ
ている。
は抗アレルギー作用において優れているだけでなく、古
くから食品や化粧品の分野で利用されてきた植物体の抽
出物を有効成分とするものであるから、安全性にも優れ
ている。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 片岡 志津子 広島県尾道市向東町14703−10丸善製薬株 式会社内 (72)発明者 水谷 健二 広島県尾道市向東町14703−10丸善製薬株 式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】 ローズマリー、タイムおよびメリッサか
らなる群から選ばれたシソ科植物より水で抽出されるヒ
アルロニダーゼ阻害物質を有効成分とする抗アレルギー
剤。 - 【請求項２】 ローズマリー、タイムおよびメリッサか
らなる群から選ばれたシソ科植物を水または水と親水性
有機溶剤との混合物を用いて抽出処理して得られたヒア
ルロニダーゼ阻害性抽出物よりなる抗アレルギー剤。 - 【請求項３】 ローズマリー、タイムおよびメリッサか
らなる群から選ばれたシソ科植物を水または水とエタノ
ールとの混合物を用いて抽出処理して得られた抽出物よ
りなる抗アレルギー剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7158783A JPH08333267A (ja) | 1995-06-02 | 1995-06-02 | 抗アレルギー剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7158783A JPH08333267A (ja) | 1995-06-02 | 1995-06-02 | 抗アレルギー剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08333267A true JPH08333267A (ja) | 1996-12-17 |
Family
ID=15679246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7158783A Pending JPH08333267A (ja) | 1995-06-02 | 1995-06-02 | 抗アレルギー剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08333267A (ja) |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0821967A1 (en) * | 1996-08-02 | 1998-02-04 | Institute For Advanced Skin Research Inc. | Composition for enhancing hyaluronic acid productivity and method for preparing same |
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| JPH10139679A (ja) * | 1996-11-05 | 1998-05-26 | Noevir Co Ltd | ケミカルメディエーター遊離抑制剤及びこれを含有する化粧料，医薬品並びに食品 |
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| WO2020209701A1 (ko) * | 2019-04-12 | 2020-10-15 | 이연제약 주식회사 | 타임 추출물을 포함하는 피부질환 개선, 치료 또는 예방용 조성물 |
-
1995
- 1995-06-02 JP JP7158783A patent/JPH08333267A/ja active Pending
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