JPH0834730A - アミリン凝集阻害剤 - Google Patents
アミリン凝集阻害剤Info
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- JPH0834730A JPH0834730A JP6174185A JP17418594A JPH0834730A JP H0834730 A JPH0834730 A JP H0834730A JP 6174185 A JP6174185 A JP 6174185A JP 17418594 A JP17418594 A JP 17418594A JP H0834730 A JPH0834730 A JP H0834730A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規なアミリン凝集阻害剤を提供する。
【構成】 リファマイシン類又はその薬学的に許容され
る塩を有効成分として含有するアミリン凝集阻害剤。
る塩を有効成分として含有するアミリン凝集阻害剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アミリン凝集阻害剤に
関する。さらに詳しくは、リファマイシン類を活性成分
として含有するアミリン凝集に起因する細胞毒性に基づ
く疾患の治療剤または予防剤に関する。
関する。さらに詳しくは、リファマイシン類を活性成分
として含有するアミリン凝集に起因する細胞毒性に基づ
く疾患の治療剤または予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】アミリンは糖尿病患者の膵臓β細胞に蓄
積するアミロイド蛋白の主要構成成分として同定された
３７アミノ酸からなるペプチドである（例えば、P. Wes
termark ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第８４巻：
３８８１〜３８８５頁（１９８７年）、G. J. S. Coope
r ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第８４巻：８６２
８〜８６３２頁（１９８７年）、G. J. S. Cooper ら、
Proc. Natl. Acad. Sci.USA、第８５巻：７７６３〜７
７６６頁（１９８８年）など参照）。アミリンと糖尿病
発症との関係はこれまで必ずしも明確ではなかったが、
つい最近、アミリンが凝集し線維体を形成することによ
り膵臓β細胞に対して細胞毒性を発揮するようになるこ
とが明らかとなった。（例えば、A. Lorenzoら、Natur
e、第３６８巻、７５６〜７６０頁（１９９４年）など
参照）。従って、アミリンの凝集を阻害する薬剤は、ア
ミリンの凝集・沈着によって生ずる膵臓β細胞へのアミ
ロイド蛋白の蓄積を阻害し、ひいてはアミリン凝集体に
よって惹起される膵臓β細胞の障害を阻害し得ることが
期待され、糖尿病治療薬及び／または予防薬として有用
であることが期待される。しかし、かかる阻害活性を有
する低分子化合物の報告はない。
積するアミロイド蛋白の主要構成成分として同定された
３７アミノ酸からなるペプチドである（例えば、P. Wes
termark ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第８４巻：
３８８１〜３８８５頁（１９８７年）、G. J. S. Coope
r ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第８４巻：８６２
８〜８６３２頁（１９８７年）、G. J. S. Cooper ら、
Proc. Natl. Acad. Sci.USA、第８５巻：７７６３〜７
７６６頁（１９８８年）など参照）。アミリンと糖尿病
発症との関係はこれまで必ずしも明確ではなかったが、
つい最近、アミリンが凝集し線維体を形成することによ
り膵臓β細胞に対して細胞毒性を発揮するようになるこ
とが明らかとなった。（例えば、A. Lorenzoら、Natur
e、第３６８巻、７５６〜７６０頁（１９９４年）など
参照）。従って、アミリンの凝集を阻害する薬剤は、ア
ミリンの凝集・沈着によって生ずる膵臓β細胞へのアミ
ロイド蛋白の蓄積を阻害し、ひいてはアミリン凝集体に
よって惹起される膵臓β細胞の障害を阻害し得ることが
期待され、糖尿病治療薬及び／または予防薬として有用
であることが期待される。しかし、かかる阻害活性を有
する低分子化合物の報告はない。
【０００３】一方、リファマイシン類は、Streptomyces
mediterranei の生産する抗生物質、例えばリファマイ
シンＢ、リファマイシンＳなど、及びその半合成誘導体
である抗生物質、例えばリファマイシンＳＶ、リファン
ピシンであり、結核菌等に対して強い抗菌作用を示すこ
とが知られている。しかし、かかるリファマイシン類
が、アミリンの凝集を阻害する活性を有することは報告
されていない。
mediterranei の生産する抗生物質、例えばリファマイ
シンＢ、リファマイシンＳなど、及びその半合成誘導体
である抗生物質、例えばリファマイシンＳＶ、リファン
ピシンであり、結核菌等に対して強い抗菌作用を示すこ
とが知られている。しかし、かかるリファマイシン類
が、アミリンの凝集を阻害する活性を有することは報告
されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明はアミリンの凝
集を阻害する薬剤を提供することを目的としている。さ
らに本発明は、アミリンの凝集阻害作用を介する、アミ
リン凝集に起因する細胞毒性に基づく疾患の治療剤また
は予防剤を提供することを目的としている。
集を阻害する薬剤を提供することを目的としている。さ
らに本発明は、アミリンの凝集阻害作用を介する、アミ
リン凝集に起因する細胞毒性に基づく疾患の治療剤また
は予防剤を提供することを目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、アミリン
凝集を阻害する薬剤の可能性を鋭意検討した結果、本発
明におけるリファマイシン類がアミリン凝集を阻害する
活性を有し、さらにはアミリンによる細胞毒性を抑制す
る作用を有することを見出し、本発明に到達した。
凝集を阻害する薬剤の可能性を鋭意検討した結果、本発
明におけるリファマイシン類がアミリン凝集を阻害する
活性を有し、さらにはアミリンによる細胞毒性を抑制す
る作用を有することを見出し、本発明に到達した。
【０００６】
【発明の構成及び作用効果】すなわち本発明は、下記式
［Ｉ］
［Ｉ］
【０００７】
【化７】
【０００８】（ここでＲ1 は水素原子または下記式［I
I］
I］
【０００９】
【化８】
【００１０】で表される基を表し、Ｒ2 は水酸基、下記
式［III ］または［IV］
式［III ］または［IV］
【００１１】
【化９】
【００１２】で表される基を表し、またはＲ1 とＲ2 が
一緒になって下記式［Ｖ］
一緒になって下記式［Ｖ］
【００１３】
【化１０】
【００１４】で表される環状構造を表してもよい。）、
または下記式［VI］
または下記式［VI］
【００１５】
【化１１】
【００１６】（ここでＲ3 とＲ4 は一緒になってこれら
が結合している炭素原子とともにカルボニル基を形成す
るか、または下記式［VII ］
が結合している炭素原子とともにカルボニル基を形成す
るか、または下記式［VII ］
【００１７】
【化１２】
【００１８】で表される基を表す。）で表されるリファ
マイシン類またはその薬学的に許容される塩を活性成分
として含有するアミリンの凝集阻害剤、及び有効成分と
してのリファマイシン類として、上記式［Ｉ］または上
記式［VI］で表されるリファマイシン類またはその薬学
的に許容される塩を含有する、アミリン凝集阻害作用を
介する、アミリン凝集に起因する細胞毒性に基づく疾患
の治療剤または予防剤である。
マイシン類またはその薬学的に許容される塩を活性成分
として含有するアミリンの凝集阻害剤、及び有効成分と
してのリファマイシン類として、上記式［Ｉ］または上
記式［VI］で表されるリファマイシン類またはその薬学
的に許容される塩を含有する、アミリン凝集阻害作用を
介する、アミリン凝集に起因する細胞毒性に基づく疾患
の治療剤または予防剤である。
【００１９】本発明のリファマイシン類が前記式［Ｉ］
で表される場合、式［Ｉ］におけるＲ1 及びＲ2 の組合
せとしては、例えばＲ1 が水素原子でＲ2 が水酸基、前
記式［III ］、または前記式［IV］で表される基である
リファマイシン類（各々、リファマイシンＳＶ、リファ
マイシンＢ、リファマイシンＢジエチルアミド）、Ｒ 1
が前記式［II］で表される基でＲ2 が水酸基であるリフ
ァマイシン類（リファンピシン）、Ｒ1 とＲ2 が一緒に
なって前記式［Ｖ］で表される環状構造を表すリファマ
イシン類（リファキシミン）等を挙げることができる。
これらＲ1 及びＲ2 の組合わせのなかでも好ましい組合
せとしてＲ1 が水素原子でＲ2 が水酸基または前記式
［II］で表される基であるリファマイシン類、Ｒ1 が前
記式［II］で表される基でＲ2 が水酸基であるリファマ
イシン類を挙げることができる。
で表される場合、式［Ｉ］におけるＲ1 及びＲ2 の組合
せとしては、例えばＲ1 が水素原子でＲ2 が水酸基、前
記式［III ］、または前記式［IV］で表される基である
リファマイシン類（各々、リファマイシンＳＶ、リファ
マイシンＢ、リファマイシンＢジエチルアミド）、Ｒ 1
が前記式［II］で表される基でＲ2 が水酸基であるリフ
ァマイシン類（リファンピシン）、Ｒ1 とＲ2 が一緒に
なって前記式［Ｖ］で表される環状構造を表すリファマ
イシン類（リファキシミン）等を挙げることができる。
これらＲ1 及びＲ2 の組合わせのなかでも好ましい組合
せとしてＲ1 が水素原子でＲ2 が水酸基または前記式
［II］で表される基であるリファマイシン類、Ｒ1 が前
記式［II］で表される基でＲ2 が水酸基であるリファマ
イシン類を挙げることができる。
【００２０】これら好ましい具体例の場合のリファマイ
シン類の構造式は、次の（１）〜（３）の通りである。
シン類の構造式は、次の（１）〜（３）の通りである。
【００２１】（１）リファンピシン
【００２２】
【化１３】
【００２３】（２）リファマイシンＳＶ
【００２４】
【化１４】
【００２５】（３）リファマイシンＢ
【００２６】
【化１５】
【００２７】本発明のリファマイシン類が前記式［VI］
で表される場合、Ｒ3 とＲ4 は一緒になってこれらが結
合している炭素原子とともにカルボニル基を形成する
か、または下記式［VII ］で表される基を表すが、具体
的にかかる好ましいリファマイシン類としてそれぞれリ
ファマイシンＳ、リファマイシンＯを挙げることができ
る。
で表される場合、Ｒ3 とＲ4 は一緒になってこれらが結
合している炭素原子とともにカルボニル基を形成する
か、または下記式［VII ］で表される基を表すが、具体
的にかかる好ましいリファマイシン類としてそれぞれリ
ファマイシンＳ、リファマイシンＯを挙げることができ
る。
【００２８】これらのなかでも特に本発明の上記式
［Ｉ］で表されるリファマイシン類としては、前記式
［Ｉ］においてＲ1 が前記式［II］で表される基でＲ2
が水酸基であるリファンピシンが好ましい。
［Ｉ］で表されるリファマイシン類としては、前記式
［Ｉ］においてＲ1 が前記式［II］で表される基でＲ2
が水酸基であるリファンピシンが好ましい。
【００２９】なお本発明のリファマイシン類には、その
分子中に存在する場合の酸性基又は塩基性基に起因して
公知の塩基又は酸（例えば無機酸・有機酸）と形成され
得る薬学的に許容される塩が存在する場合にはそのよう
な塩も含まれる。
分子中に存在する場合の酸性基又は塩基性基に起因して
公知の塩基又は酸（例えば無機酸・有機酸）と形成され
得る薬学的に許容される塩が存在する場合にはそのよう
な塩も含まれる。
【００３０】本発明に関わるリファマイシン類は、いず
れも公知の化合物であり、例えば、リファンピシン、リ
ファマイシンＳＶ、リファマイシンＢなどは試薬として
も入手可能である。またリファマイシンＳは試薬として
入手可能なリファマイシンＳＶより、公知の方法（Ｍｎ
Ｏ2 やＨ2 Ｏ2 を用いた酸化反応）で容易に合成可能で
ある。
れも公知の化合物であり、例えば、リファンピシン、リ
ファマイシンＳＶ、リファマイシンＢなどは試薬として
も入手可能である。またリファマイシンＳは試薬として
入手可能なリファマイシンＳＶより、公知の方法（Ｍｎ
Ｏ2 やＨ2 Ｏ2 を用いた酸化反応）で容易に合成可能で
ある。
【００３１】本発明のアミリンの凝集阻害剤は、好まし
くは製薬学的に許容される担体を配合することによっ
て、本発明のアミリンの凝集阻害剤として用いることが
できる。この場合の製薬学的に許容される担体として
は、後記賦形剤と同様のものを挙げることができる。こ
の場合の本発明の化合物と担体との配合量については、
後記のような活性成分の投与量に従うが、特に限定され
ず広範囲に選択され、通常本発明のリファマイシン類抗
生物質は全組成物中１〜７０重量％、好ましくは５〜５
０重量％である。得られた組成物は、さらに公知の方法
で適当な賦形剤等を用いて軟カプセル剤、硬カプセル
剤、錠剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤等
の経口剤、注射剤、坐剤または外用剤として提供され
る。かかる賦形剤としては植物油（例えばトウモロコシ
油、綿実油、ココナッツ油、アーモンド油、落花生油、
オリーブ油等）、中鎖脂肪酸グリセライド油等の油状エ
ステル、鉱物油、トリカプリリン、トリアセチン等のグ
リセリンエステル類、エタノール等のアルコール類、生
理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ール、ワセリン、動物油脂、セルロース誘導体（結晶セ
ルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ
プロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ポリ
ビニルピロリドン、デキストリン、乳糖、マンニトー
ル、ソルビトール、デンプン等が挙げられる。
くは製薬学的に許容される担体を配合することによっ
て、本発明のアミリンの凝集阻害剤として用いることが
できる。この場合の製薬学的に許容される担体として
は、後記賦形剤と同様のものを挙げることができる。こ
の場合の本発明の化合物と担体との配合量については、
後記のような活性成分の投与量に従うが、特に限定され
ず広範囲に選択され、通常本発明のリファマイシン類抗
生物質は全組成物中１〜７０重量％、好ましくは５〜５
０重量％である。得られた組成物は、さらに公知の方法
で適当な賦形剤等を用いて軟カプセル剤、硬カプセル
剤、錠剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤等
の経口剤、注射剤、坐剤または外用剤として提供され
る。かかる賦形剤としては植物油（例えばトウモロコシ
油、綿実油、ココナッツ油、アーモンド油、落花生油、
オリーブ油等）、中鎖脂肪酸グリセライド油等の油状エ
ステル、鉱物油、トリカプリリン、トリアセチン等のグ
リセリンエステル類、エタノール等のアルコール類、生
理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ール、ワセリン、動物油脂、セルロース誘導体（結晶セ
ルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ
プロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ポリ
ビニルピロリドン、デキストリン、乳糖、マンニトー
ル、ソルビトール、デンプン等が挙げられる。
【００３２】本発明のリファマイシン類またはその薬学
的に許容される塩は、アミリンの凝集を阻害する活性を
有し、そのため、アミリン凝集に起因する細胞毒性を抑
制し、ひいてはこの細胞毒性に基づく疾患、例えば糖尿
病なかでもII型糖尿病、耐グルコース能低下糖尿病、肥
満症、およびインシュリン抵抗性糖尿病等の治療剤また
は予防剤として有用である。これらの疾患の中でも、糖
尿病の治療剤または予防剤を、なかでもII型糖尿病の治
療剤または予防剤を好ましいものとして挙げることがで
きる。これらの治療剤または予防剤としては、本発明の
リファマイシン類またはその薬学的に許容される塩のな
かでも有効成分としてのリファマイシン類が、前記式
［Ｉ］で表されるリファマイシン類またはその薬学的に
許容される塩であって、該式［Ｉ］において、Ｒ1 が水
素原子でＲ2 が水酸基または前記式［III ］で表される
基であるか、Ｒ1 が前記式［II］で表される基でありＲ
2 が水酸基であるものを好ましいものとしてあげること
ができる。そのなかでも有効成分としてのリファマイシ
ン類が、前記式［Ｉ］で表されるリファマイシン類また
はその薬学的に許容される塩であって、該式［Ｉ］にお
いて、Ｒ1 が式［II］で表される基でありＲ2 が水酸基
であるリファマイシン類がさらに好ましい。
的に許容される塩は、アミリンの凝集を阻害する活性を
有し、そのため、アミリン凝集に起因する細胞毒性を抑
制し、ひいてはこの細胞毒性に基づく疾患、例えば糖尿
病なかでもII型糖尿病、耐グルコース能低下糖尿病、肥
満症、およびインシュリン抵抗性糖尿病等の治療剤また
は予防剤として有用である。これらの疾患の中でも、糖
尿病の治療剤または予防剤を、なかでもII型糖尿病の治
療剤または予防剤を好ましいものとして挙げることがで
きる。これらの治療剤または予防剤としては、本発明の
リファマイシン類またはその薬学的に許容される塩のな
かでも有効成分としてのリファマイシン類が、前記式
［Ｉ］で表されるリファマイシン類またはその薬学的に
許容される塩であって、該式［Ｉ］において、Ｒ1 が水
素原子でＲ2 が水酸基または前記式［III ］で表される
基であるか、Ｒ1 が前記式［II］で表される基でありＲ
2 が水酸基であるものを好ましいものとしてあげること
ができる。そのなかでも有効成分としてのリファマイシ
ン類が、前記式［Ｉ］で表されるリファマイシン類また
はその薬学的に許容される塩であって、該式［Ｉ］にお
いて、Ｒ1 が式［II］で表される基でありＲ2 が水酸基
であるリファマイシン類がさらに好ましい。
【００３３】活性成分の投与量は、疾患の程度、患者の
年令等にもよるが、通常１０〜１０００ｍｇ／日／人程
度で、好ましくは１００〜６００ｍｇ／日／人であり、
このような条件を満足するように製剤するのが好まし
い。
年令等にもよるが、通常１０〜１０００ｍｇ／日／人程
度で、好ましくは１００〜６００ｍｇ／日／人であり、
このような条件を満足するように製剤するのが好まし
い。
【００３４】本発明において用いられた各種試験方法及
び測定方法は以下のとおりである。
び測定方法は以下のとおりである。
【００３５】（１）アミリン凝集阻害活性の試験方法 チオフラビンＴ（ＴｈＴ）を用いる方法により実施し
た。
た。
【００３６】チオフラビンＴ（ＴｈＴ）は、アミリンと
同じくアミロイド蛋白に属するアミロイドβ蛋白などの
凝集した蛋白のβシート構造に結合して、遊離の状態で
は示さなかった新たな蛍光（４８２ｎｍ）を発する色素
であり、その蛍光の強さは結合する蛋白の凝集の程度に
比例することが報告されている（Harry LeVine III.１
９９３、Protein Science ２，４０４〜４１０）。従っ
て、薬剤を含むアミリンの凝集の程度をそれに結合する
ＴｈＴの蛍光の強さで測定することにより、薬剤のアミ
リン凝集阻害活性を調べることができる。
同じくアミロイド蛋白に属するアミロイドβ蛋白などの
凝集した蛋白のβシート構造に結合して、遊離の状態で
は示さなかった新たな蛍光（４８２ｎｍ）を発する色素
であり、その蛍光の強さは結合する蛋白の凝集の程度に
比例することが報告されている（Harry LeVine III.１
９９３、Protein Science ２，４０４〜４１０）。従っ
て、薬剤を含むアミリンの凝集の程度をそれに結合する
ＴｈＴの蛍光の強さで測定することにより、薬剤のアミ
リン凝集阻害活性を調べることができる。
【００３７】具体的には、ある薬剤を含むアミリンの試
料溶液から１０μｌを取り、これを５０ｍＭリン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６．０）に３μＭの濃度で溶かされ
たＴｈＴの溶液１ｍｌに加え、攪拌する。攪拌後、すみ
やかに、スペクトロフルオロメーター（ＪＡＳＣＯ製）
を用いて、励起波長４５０ｎｍ、蛍光波長４８２ｎｍで
溶液の蛍光を測定する。経時的に測定を行ない、薬剤を
含まないアミリンのみの溶液と比較して、一定期間蛍光
の上昇が抑えられれば、その薬剤はアミリン凝集阻害活
性を持つと判定される。
料溶液から１０μｌを取り、これを５０ｍＭリン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６．０）に３μＭの濃度で溶かされ
たＴｈＴの溶液１ｍｌに加え、攪拌する。攪拌後、すみ
やかに、スペクトロフルオロメーター（ＪＡＳＣＯ製）
を用いて、励起波長４５０ｎｍ、蛍光波長４８２ｎｍで
溶液の蛍光を測定する。経時的に測定を行ない、薬剤を
含まないアミリンのみの溶液と比較して、一定期間蛍光
の上昇が抑えられれば、その薬剤はアミリン凝集阻害活
性を持つと判定される。
【００３８】（２）ＰＣ１２細胞を用いたアミリンの細
胞毒性測定法 （ａ）細胞の調製 理化学研究所細胞バンクより分与されたＰＣ１２細胞
（ＲＣＢ０００９、Ｌｏｔ６）を用いた。本細胞はラッ
ト副腎髄質由来のクローン細胞であり、ＮＧＦ存在下で
培養することにより交感神経節細胞様に分化する（Gree
ne及びTischler,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, ７３：
２４２４〜２４２８，１９７６）ことから、神経細胞の
モデル系として汎用されている。
胞毒性測定法 （ａ）細胞の調製 理化学研究所細胞バンクより分与されたＰＣ１２細胞
（ＲＣＢ０００９、Ｌｏｔ６）を用いた。本細胞はラッ
ト副腎髄質由来のクローン細胞であり、ＮＧＦ存在下で
培養することにより交感神経節細胞様に分化する（Gree
ne及びTischler,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, ７３：
２４２４〜２４２８，１９７６）ことから、神経細胞の
モデル系として汎用されている。
【００３９】培養は１０％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏ製）及
び５％準胎児ウシ血清（三菱化成製）を含むＲＰＭＩ
１６４０（Ｇｉｂｃｏ製）を培地として用い、３７℃、
５％ＣＯ2 存在下で行う。細胞を５，０００／ｗｅｌｌ
で９６穴培養プレート（住友ベークライト製、ＳＵＭＩ
ＬＯＮ ＣＥＬＬＴＩＧＨＴ Ｃ―１）に巻き込み、翌
日にＤ―ｇｌｕｃｏｓｅ不含、５０ｎｇ／ｍｌ／ＮＧＦ
（シグマ製、ラット顎下腺由来）含有の培地に交換し、
さらに４日後に培地交換して培養を続け、７日後に以下
の測定に用いる。
び５％準胎児ウシ血清（三菱化成製）を含むＲＰＭＩ
１６４０（Ｇｉｂｃｏ製）を培地として用い、３７℃、
５％ＣＯ2 存在下で行う。細胞を５，０００／ｗｅｌｌ
で９６穴培養プレート（住友ベークライト製、ＳＵＭＩ
ＬＯＮ ＣＥＬＬＴＩＧＨＴ Ｃ―１）に巻き込み、翌
日にＤ―ｇｌｕｃｏｓｅ不含、５０ｎｇ／ｍｌ／ＮＧＦ
（シグマ製、ラット顎下腺由来）含有の培地に交換し、
さらに４日後に培地交換して培養を続け、７日後に以下
の測定に用いる。
【００４０】（ｂ）アミリンによるＰＣ１２細胞のＭＴ
Ｔ還元能低下作用の測定 上記（ａ）の培養７日目のＰＣ１２細胞を培地交換（１
８０μｌ／ｗｅｌｌ）後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）に溶解したアミリン（バケム製）を２０μｌ／ｗｅ
ｌｌ添加する。４０時間後、ＭＴＴ（シグマ製）の５ｍ
ｇ／ｍｌ ＰＢＳ溶液を２５μｌ／ｗｅｌｌずつ添加
し、３７℃、５％ＣＯ2 存在下で培養を続ける。４時間
後に培地を吸い取り、０．０４Ｎ ＨＣｌ／イソプロパ
ノールを１００μｌ／ｗｅｌｌ加えてホルマザンを溶か
し、マイクロプレートリーダー（モレキュラー・デバイ
セス製、Ｖｍａｘ）を用いて比色定量（５７０〜６５０
ｎｍ）を行い、ＰＣ１２細胞のＭＴＴ還元能の変化を測
定する。
Ｔ還元能低下作用の測定 上記（ａ）の培養７日目のＰＣ１２細胞を培地交換（１
８０μｌ／ｗｅｌｌ）後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）に溶解したアミリン（バケム製）を２０μｌ／ｗｅ
ｌｌ添加する。４０時間後、ＭＴＴ（シグマ製）の５ｍ
ｇ／ｍｌ ＰＢＳ溶液を２５μｌ／ｗｅｌｌずつ添加
し、３７℃、５％ＣＯ2 存在下で培養を続ける。４時間
後に培地を吸い取り、０．０４Ｎ ＨＣｌ／イソプロパ
ノールを１００μｌ／ｗｅｌｌ加えてホルマザンを溶か
し、マイクロプレートリーダー（モレキュラー・デバイ
セス製、Ｖｍａｘ）を用いて比色定量（５７０〜６５０
ｎｍ）を行い、ＰＣ１２細胞のＭＴＴ還元能の変化を測
定する。
【００４１】
【実施例】以下、実施例によって本発明を詳細に説明す
る。なお、実施例等における％表示は特に断りがない限
り重量／体積％を示す。
る。なお、実施例等における％表示は特に断りがない限
り重量／体積％を示す。
【００４２】［実施例１］リファンピシンをＤＭＳＯに
１０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解した。アミリン（バケ
ム製）を２回脱イオン水に１００μｇ／ｍｌとなるよう
に溶かし、０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
４）と１：１で混合して、終濃度５０μｇ／ｍｌのアミ
リン溶液を得た。この溶液を６本のエッペンドルフチュ
ーブに２００μｌずつ分注した。上で調製した１０ｍｇ
／ｍｌのリファンピシン溶液をアミリン溶液を含む３本
のチューブに２μｌずつ加えた（リファンピシンの終濃
度１００μｇ／ｍｌ；（Ｂ））。残りの３本のチューブ
には何も加えずに、これをコントロールとした（Ａ）。
１０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解した。アミリン（バケ
ム製）を２回脱イオン水に１００μｇ／ｍｌとなるよう
に溶かし、０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
４）と１：１で混合して、終濃度５０μｇ／ｍｌのアミ
リン溶液を得た。この溶液を６本のエッペンドルフチュ
ーブに２００μｌずつ分注した。上で調製した１０ｍｇ
／ｍｌのリファンピシン溶液をアミリン溶液を含む３本
のチューブに２μｌずつ加えた（リファンピシンの終濃
度１００μｇ／ｍｌ；（Ｂ））。残りの３本のチューブ
には何も加えずに、これをコントロールとした（Ａ）。
【００４３】リファピシン含有アミリン溶液（Ｂ）およ
びコントロールのアミリン溶液（Ａ）を室温に静置し
た。前記試験方法（（１）アミリン凝集阻害活性の試験
方法）に従って、経時的にそれぞれの溶液の一部を取っ
て、アミリンの凝集の程度を測定した。
びコントロールのアミリン溶液（Ａ）を室温に静置し
た。前記試験方法（（１）アミリン凝集阻害活性の試験
方法）に従って、経時的にそれぞれの溶液の一部を取っ
て、アミリンの凝集の程度を測定した。
【００４４】その結果、図１に示すように、コントロー
ルのアミリン溶液（Ａ）では、アミリン溶解後２日目か
ら蛍光の上昇、すなわちアミリンの凝集が認められた。
これに対し、リファンピシンを１００μｇ／ｍｌ含むア
ミリン溶液（Ｂ）は４日目でも蛍光の上昇は見られなか
った。以上の結果は、リファンピシンがアミリンの凝集
を抑制することを示している。
ルのアミリン溶液（Ａ）では、アミリン溶解後２日目か
ら蛍光の上昇、すなわちアミリンの凝集が認められた。
これに対し、リファンピシンを１００μｇ／ｍｌ含むア
ミリン溶液（Ｂ）は４日目でも蛍光の上昇は見られなか
った。以上の結果は、リファンピシンがアミリンの凝集
を抑制することを示している。
【００４５】［実施例２］前記試験方法（（２）ＰＣ１
２細胞を用いたアミリンの細胞毒性測定法）において、
実施例１において得られたリファンピシン含有アミリン
溶液（Ｂ）とコントロールのアミリン溶液（Ａ）とを室
温にて４日間静置した後、各々ＰＣ１２細胞に添加する
ことにより、アミリンのＰＣ１２細胞ＭＴＴ還元能低下
作用に対する効果を調べた。すなわち、各溶液をアミリ
ンの終濃度が５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．０
５μｇ／ｍｌとなるようにＰＣ１２細胞に添加し、２日
間培養後ＭＴＴ還元能を調べた。その結果、図２に示し
たように、アミリンはＰＣ１２細胞に対し濃度依存的な
ＭＴＴ還元能低下作用を示し、これに対しリファンピシ
ンはアミリンによるＭＴＴ還元能低下作用を抑制した。
この結果は、リファンピシンがアミリンの細胞毒性を抑
制する効果を有することを示している。
２細胞を用いたアミリンの細胞毒性測定法）において、
実施例１において得られたリファンピシン含有アミリン
溶液（Ｂ）とコントロールのアミリン溶液（Ａ）とを室
温にて４日間静置した後、各々ＰＣ１２細胞に添加する
ことにより、アミリンのＰＣ１２細胞ＭＴＴ還元能低下
作用に対する効果を調べた。すなわち、各溶液をアミリ
ンの終濃度が５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．０
５μｇ／ｍｌとなるようにＰＣ１２細胞に添加し、２日
間培養後ＭＴＴ還元能を調べた。その結果、図２に示し
たように、アミリンはＰＣ１２細胞に対し濃度依存的な
ＭＴＴ還元能低下作用を示し、これに対しリファンピシ
ンはアミリンによるＭＴＴ還元能低下作用を抑制した。
この結果は、リファンピシンがアミリンの細胞毒性を抑
制する効果を有することを示している。
【００４６】［実施例３］カプセル剤の製造 １カプセルが次の組成からなるリファンピシン１００ｍ
ｇを含有するカプセル剤を製造した。
ｇを含有するカプセル剤を製造した。
【００４７】 リファンピシン １００．００ｍｇ 乳糖 ５０．００ｇ エチルセルロース １．５０ｇ ステアリン酸 １．５０ｇ リファンピシンと乳糖を混合し、次いでエチルセルロー
スの塩化メチレン溶液で加湿して、最終的に微小顆粒を
得た。これに微粉砕ステアリン酸を混合して粉体を得
た。こうして得られた粉体をカプセル（＃２）充填して
カプセル剤を得た。
スの塩化メチレン溶液で加湿して、最終的に微小顆粒を
得た。これに微粉砕ステアリン酸を混合して粉体を得
た。こうして得られた粉体をカプセル（＃２）充填して
カプセル剤を得た。
【００４８】
【発明の効果】本発明の前記式［Ｉ］または前記式［V
I］で表されるリファマイシン類を活性成分として含有
する薬剤はアミリンの凝集を抑制するという作用を有
し、さらにはアミリンによる細胞毒性をも抑制する作用
を有することから、例えば糖尿病の治療薬及び／または
予防薬として有用であると期待される。
I］で表されるリファマイシン類を活性成分として含有
する薬剤はアミリンの凝集を抑制するという作用を有
し、さらにはアミリンによる細胞毒性をも抑制する作用
を有することから、例えば糖尿病の治療薬及び／または
予防薬として有用であると期待される。
【図１】図１は、実施例１における、本発明のリファピ
シンによるアミリンの凝集抑制作用を示す。図中、Ａ，
Ｂは各々、無添加（コントロール）（Ａ）、リファンピ
シン（Ｂ）に対応し、各棒グラフａ〜ｅは各々、第０
日、第１日、第２日、第３日、第４日に対応している。
シンによるアミリンの凝集抑制作用を示す。図中、Ａ，
Ｂは各々、無添加（コントロール）（Ａ）、リファンピ
シン（Ｂ）に対応し、各棒グラフａ〜ｅは各々、第０
日、第１日、第２日、第３日、第４日に対応している。
【図２】図２は、実施例２における、本発明のリファン
ピシンによるＰＣ１２細胞の生存率に対する作用を示
す。図中、棒グラフのうち、濃い棒グラフはアミリンの
みを添加した場合（リファンピシン無添加）を、淡い棒
グラフはアミリンとリファンピシンとの混合液を添加し
た場合（リファンピシン添加）のＰＣ１２細胞の生存率
を示す。
ピシンによるＰＣ１２細胞の生存率に対する作用を示
す。図中、棒グラフのうち、濃い棒グラフはアミリンの
みを添加した場合（リファンピシン無添加）を、淡い棒
グラフはアミリンとリファンピシンとの混合液を添加し
た場合（リファンピシン添加）のＰＣ１２細胞の生存率
を示す。
Claims (7)
- 【請求項１】 下記式［Ｉ］ 【化１】 （ここでＲ1 は水素原子または下記式［II］ 【化２】 で表される基を表し、Ｒ2 は水酸基、下記式［III ］ま
たは［IV］ 【化３】 で表される基を表し、またはＲ1 とＲ2 が一緒になって
下記式［Ｖ］ 【化４】 で表される環状構造を表してもよい。）または下記式
［VI］ 【化５】 （ここでＲ3 とＲ4 は一緒になってこれらが結合してい
る炭素原子とともにカルボニル基を形成するか、または
下記式［VII ］ 【化６】 で表される基を表す。）で表されるリファマイシン類ま
たはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有す
るアミリン凝集阻害剤。 - 【請求項２】 上記式［Ｉ］において、Ｒ1 が水素原子
でＲ2 が水酸基または上記式［III ］で表される基であ
るか、Ｒ1 が上記式［II］で表される基でありＲ2 が水
酸基である請求項１記載のアミリン凝集阻害剤。 - 【請求項３】 上記式［Ｉ］において、Ｒ1 が上記式
［II］で表される基でありＲ2 が水酸基である請求項１
記載のアミリン凝集阻害剤。 - 【請求項４】 有効成分としてのリファマイシン類とし
て、上記式［Ｉ］または上記式［VI］で表されるリファ
マイシン類またはその薬学的に許容される塩を含有す
る、アミリン凝集阻害作用を介する、アミリン凝集に起
因する細胞毒性に基づく疾患の治療剤または予防剤。 - 【請求項５】 有効成分としてのリファマイシン類が、
上記式［Ｉ］で表されるリファマイシン類またはその薬
学的に許容される塩であって、該式［Ｉ］において、Ｒ
1 が水素原子でＲ2 が水酸基または上記式［III ］で表
される基であるか、Ｒ1 が上記式［II］で表される基で
ありＲ2 が水酸基である請求項４記載の治療剤または予
防剤。 - 【請求項６】 有効成分としてのリファマイシン類が、
上記式［Ｉ］で表されるリファマイシン類またはその薬
学的に許容される塩であって、該式［Ｉ］において、Ｒ
1 が式［II］で表される基でありＲ2 が水酸基である請
求項４記載の治療剤または予防剤。 - 【請求項７】 該疾患が糖尿病である請求項４〜６のい
ずれか１項に記載の治療剤または予防剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6174185A JPH0834730A (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | アミリン凝集阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6174185A JPH0834730A (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | アミリン凝集阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0834730A true JPH0834730A (ja) | 1996-02-06 |
Family
ID=15974210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6174185A Pending JPH0834730A (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | アミリン凝集阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0834730A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7709634B2 (en) | 2007-09-20 | 2010-05-04 | Apotex Pharmachem Inc. | Amorphous form of rifaximin and processes for its preparation |
| CN104780763A (zh) * | 2012-09-13 | 2015-07-15 | 萨利克斯药品公司 | 给予利福昔明用于重量减轻和肥胖治疗的方法 |
-
1994
- 1994-07-26 JP JP6174185A patent/JPH0834730A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7709634B2 (en) | 2007-09-20 | 2010-05-04 | Apotex Pharmachem Inc. | Amorphous form of rifaximin and processes for its preparation |
| CN104780763A (zh) * | 2012-09-13 | 2015-07-15 | 萨利克斯药品公司 | 给予利福昔明用于重量减轻和肥胖治疗的方法 |
| JP2015528506A (ja) * | 2012-09-13 | 2015-09-28 | サリックス ファーマスーティカルズ，インコーポレーテッド | 体重減少及び肥満の治療のためのリファキシミンの投与の方法 |
| EP2894983A4 (en) * | 2012-09-13 | 2016-04-13 | Salix Pharmaceuticals Inc | METHOD FOR THE ADMINISTRATION OF RIFAXIMINE FOR WEIGHT REDUCTION AND TREATMENT OF GRAVITY |
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