JPH08501067A

JPH08501067A - ペプチド化合物

Info

Publication number: JPH08501067A
Application number: JP6500363A
Authority: JP
Inventors: ウンネアイム，チエル; クレミンガー，ペーテル; ハルトマン，ミヒアエル
Original assignee: ハフスルンド・ニユコメド・アクシエセルカペト
Priority date: 1992-06-02
Filing date: 1993-06-02
Publication date: 1996-02-06
Also published as: EE03101B1; NO944670L; WO1993024524A1; LV10287B; EP0643725A1; LV10287A; NO944670D0; LTIP608A; TW329427B; AU4340493A; US5629293A; ZA933866B; GB9211668D0; LT3615B; CN1085912A

Abstract

(57)【要約】非末端アミノ酸のＣα原子が請求項１において定義された基-Aによって置換されている単一鎖ペプチド化合物が開示されている。基-Aに結合したＣα原子の天然のα-側鎖は存在しない。本発明のペプチド誘導体は細胞増殖、とくに骨髄造血細胞および骨髄細胞の増殖を阻害するのに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチド化合物本発明は、細胞増殖に対して抑制作用を有するペプチドの使用、および特異的および／または一般的細胞抑制作用を有する新規なペプチドに関する。哺乳動物の生休には、極めて多様な構造および機能をもった細胞が含まれていて、分化および発生の機構は多くの研究の焦点とされてきた。連続的な代謝回転を有する細胞系には、共通な機構として、分裂し絶えず新たな細胞をその系に供給する多能性幹細胞の貯蔵部が包含されることが知られている。初期には均一であっても、「貯蔵部」から供給された幹細胞は、間もなく何らかの形態学的方向づけを受け、ついで要求された機能細胞へと分化していくことになる。このような幹細胞系の例には骨髄内の造血系ならびに上皮および表皮系がある。幹細胞分裂に対する操作や調節には治療的観点から高い可能性が考えられ、それに包含される機構および関与する化学的メッセンジャ−の解明を目指して多くの研究が続けられている。現在までに、その過程内の工程の刺激または阻害のいずれかによって、細胞の産生および分化にある役割を有するものとして、いくつかの生体内分子が同定されている。この関係では、骨髄造血がとくによく研究されていて、その調節に関与する分子には、コロニー刺激因子(CSF)たとえば顆粒球コロニー剌激因子(G-CSF)、マクロファージコロニー剌激因子(M-CSF)、顆粒球 −マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、多能性コロニー剌激因子(multi-C SF; IL- ３)〔Metcalf， Science 229: 16(1985)参照〕、インターロイキン11(IL-11)〔Paulら、Pro Natl Acad Sci USA 87:7521(1990)参照〕、ラクトフェリン〔Broxmeyerら、Blood Ce lls 11:429(1986)参照〕、プロスタグランジン〔Pelusら、J.Immunol 140:429(1 988)参照〕、酸性（Ｈ−サブユニット）フェリチン〔Broxmeyerら、Blood 68:12 57(1986)参照〕、インターフェロン（α，β，γ）〔Pelusら、前出、およびBro xmeyerら、J.Immunol.131:1300(1983)参照〕、腫瘍壊死因子（α，β）〔Broxme yerら、J.Immunol.136:4487(1986)参照〕、トランスフォーミング成長因子−β 〔Ottmanら、J.Immunol.140:2661(1988)参照〕ならびにアクチビンおよびインヒビン〔Broxmeyerら、Pro Natl Acad Sci USA 86:779(1989)参照〕が包含される。また造血調節ペンタペプチド(pEEDCK)が骨髄造血細胞の増殖を選択的に阻害することも見出され〔Paukovitsら、Z.Naturforsch37:1297(1982)参照〕、狭い一般式に相当する他のペプチドが造血に同様の阻害効果を示すことが発見されている〔EP-A-112656およびW090／02753参照〕。ペプチドモノマーの酸化によりシステイン橋で連結したダイマー分子が生じ、これらのダイマー分子が骨髄造血を剌激することが見出されている〔Laerumら、Exp．Hematol 16:274(1988)〕。この( pEEDCK)₂ダイマーおよび他の類似の化合物はWO-A-88／03535に開示されている。さらに、EP-A-408371には、ジスルフィド結合が選択されたペプチド鎖を連結する炭素または炭素／硫黄橋で置換されたダイマーペプチド化合物が開示されている。したがって、このブリッジは加水分解に対して比較的安定であるが、それ自体は不活性で、受容体−ダイマー相互作用に参与することはできない。理論的考察によって限定することを意図するものではないが、現在のところ、このようなペプチド化合物はインビボにおいて間質細胞と相互作用し、間質細胞は他の可溶性因子を介して細胞分裂の刺激または阻害に関与するものと考えられている。すなわち、ダイマーは刺激性細胞調節因子の間質産生を誘導または促進し、一方モノマーペプチドはその過程を抑制し、または細胞分裂を防止もしくは遮蔽する因子の産生を起こさせると考えられている。すなわち、最近の考え方では、間質細胞は、ダイマーおよびモノマーペプチドそれぞれの剌激および抑制作用を増幅するように働くとされている。インビボにおいて細胞増殖を有効に抑制できるペプチド化合物の必要性は常にある。この点に関しては、ある種の臨床状態に応じて最も適当な抑制程度は異なり、またとくに個々の細胞タイプに選択的な抑制が重要であることに留意すべきである。本発明は、単一鎖の造血調節たとえば造血阻害ペプチドからなり、その非末端アミノ酸のＣα原子が基-Aによって置換され、そのＣα原子は天然のα−側鎖をもたないペプチド誘導体であって、ＡはCR^AR^A′-Zであり、この式中、 R^Aは独立に水素原子または基-R^A″、-OR^A″、-SR^A″、-NR^A″R^A″、-CONR^A″R^A ″もしくは-COOR^A″であり、 R^A′は水素原子または基R^A″であり、 R^A″はアルキル、シクロアルキル、アルカノイル、ヒドロキシアルキル、アニジン基、または炭素環もしくは異項環基であり、Ｚは-OR^B、NR^CR^C、CR^DR^ER^F、または置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環（ただし非置換フェニルを除く）であり、この場合、各R^Bは直鎖状または分岐状の、飽和もしくは不飽和炭化水素基たとえばアルキル、アラールキルもしくはアリール基であって、所望により１個もしくは２個以上のR^A基（R^A基は上に定義した通りである）で置換されていてもよく、また所望により１個もしくは２個以上の-N-、-0-もしくは-S-ヘテロ原子が挿入されていてもよく、 R^Cは水素原子または基R^Bであり、 R^Dは水素原子または基R^Fであり、 R^Eは水素原子もしくは基R^Fであるか、または基R^DとともにC=0基を形成し、 R^Fは基-R^B、-OR^B、-NR^CR^Cもしくは-SR^B、またはヒドロキシ、カルボキシ、アミノカルボニルもしくはアルコキシ基であるか、あるいはＣα原子に結合した窒素原子に連結するメチレン基であるか、R^Dとともにアルキリジン基を形成し、またはR^A、R^A′、R^DおよびR^Eが水素以外の基である場合には水素原子である。基R^AまたはR^BがＣ−結合有機基である場合には、１〜10個の炭素原子、とくに１〜６個の炭素原子を含むことが好ましい。アルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、６〜10個の炭素原子を有するアリール基（すなわち、アラールキル基を形成する）、アルコキシ、ヒドロキシ、アシルオキシ、アミノ、アジド、アシルアミノ、アミノカルボニルまたはカルボキシ基で置換されていてもよい。アリール基には、５−または６−員の、Ｏ、ＮまたはＳから選ばれる１個または２個以上の異項環アリール基たとえばフリール、イミダゾール、ピロイル、ピリジニルおよびチエニル基が包含される。アリール基上に存在してもよい置換基には、C_l-6 アルキル基、ヒドロキシおよびカルボキシ基が包含される。たとえばメチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチル、ペンチル、カルボキシエチルおよびベンジル基である。一実施態様においては、Ｚは置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環であるが、ただし非置換フェニル以外の基である。とくに好ましいＺ基には、ベンジル、インドリル、ヒドロキシフェニル、イミダゾリル、ナフチル、チエニル、ピリジニル、フラニル、イソキサゾリル、３，５−ジメチルイソキサゾリルまたはシクロヘキシル基がある。他の実施態様においては、Ｚは基-OR^B（R^Bは上に定義した通りである）または CHR^DR^F（式中、R^Dは水素原子または基CH₃を表し、R^Fはヒドロキシル、アミノまたはアジド基で置換されていてもよいアルキル基を表し、R^DとR^Fは両者でアルキリジン基を形成する）である。 R^AおよびR^A′はいずれも水素であることが好ましく、したがって-AはCH₂-Zである。造血調節作用を示す任意の単一鎖ペプチドは、本発明によって置換されているペプチドとして適当である。別の形で表現すると、本発明は、上記造血調節ペプチド鎖が式 R^a-R^b-R^C-R^d-(Ｒ^e)_n-R^f （Ｉ）〔式中、R^aはを表し、R^bはを表し、R^Cはを表し、R^dはを表し、R^eはを表し、R^fはを表し（これらの式中、ｎおよびｍは独立に０または１であり、ｐ、ｑおよびｒは独立に１または２であり、ｓは３または４であり、 R¹およびR²はいずれも水素原子であるか、または両者でオキソ基を表し、 R³およびR⁴はいずれも水素原子であるかまたは両者で炭素−炭素結合を表し、 R⁵は水素またはアシル基であり、 R⁶およびR⁷はそれぞれ独立にヒドロキシ基またはアミノ基を表すが、好ましくはヒドロキシ基であり、 R⁸は水素、C_2-6アルキル基、１個もしくは２個以上のヒドロキシ、アミノもしくはメトキシ置換基をもっていてもよいC_7-20アラールキル基、代謝的に不安定なＳ−保護基を表し、 R⁹は水素またはメチル基であり、 R¹⁰はヒドロキシまたは置換もしくは非置換アミノ基、アミノ酸グルタミンもしくはＮ−末端グルタミン単位を有するペプチドの残基である）、およびそれらの塩を表す〕によって表されるペプチドを包含する本発明の化合物を提供する。上記アミノ酸残基はすべて、Ｄ型でもＬ型でもよい。しかしながら、Ｌ型のアミノ酸が好ましい。Ｎ−末端保護基R⁵が存在する場合には、これは上述のように、これは１〜20個の炭素原子を有するアシル基、たとえば１〜５の炭素原子を有する低級アルカノイル基たとえばアセチル基、または炭素原子７〜20個の炭素原子を有するアロイルもしくはアラールカノイル基たとえばベンゾイルもしくはフェニルアセチル基とすることができる。 R⁵はまた、アミノ酸またはペプチド鎖から誘導されるアシル基であってもよい。とくに、R⁵はセリンまたは以下のアミノ酸配列 Lys-Ile-Ile−His-Glu-Asp-Gly-Tyr-Ser のＮ−末端アミノ酸を連続的に除去することによって誘導される任意のペプチドに由来するアシル基とすることもできる。式（Ｉ）の全ペプチドの末端アミノ基は好ましくは、たとえばアシル化によって、アルカノイル、アラール基で保護される。 R⁸がC_2-6アルキル基である場合には、これはたとえば、エチル、ブチルまたはヘキシル基とすることができる。R⁸がアラールキル基である場合には、これはアリールメチル基たとえばベンジル、ジフェニルメチルまたはトリフェニルメチル基とすることが便利である。R⁸が代謝的に不安定な基である場合には、これはたとえば、５〜10個の炭素原子を有するアリールチオ基たとえばピリジルチオ基、または上述のようなアシル基とすることができる。本発明の化合物は好ましくはペンタペプチドであり、すなわちｎは０であることが好ましい。 R^a残基における環状基は好ましくは５−員環であり、すなわちｍは好ましくは０である。上記式Ｉによって定義されるペプチドに関する限り、造血調節活性は低いか無視できる程度のものであるが、これらは本発明によるペプチド化合物誘導体の中においては、細胞増殖の抑制に有効である。式Ｉに記載のペプチド鎖から形成されるペプチド化合物誘導体における鎖の置換はR^dに行われることが好ましい。とくに好ましい本発明のペプチド化合物誘導体は式II （式中、R^a、R^b、R^C、R^d、R^e、R^f、Ａおよびｎはすべて上に定義した通りであり、基-NH-CH-CO-は、基-A結合するR^dの誘導体型を形成し、その天然の側鎖が存在しないように結合基-Aに結合している）のペプチドである。本発明はまた、Ａが隣接する基-N-CH-CO-とともにプロリン残基を形成する式IIの化合物も包含する。式II一つの好ましいペプチド化合物は、（式中、基-Aは上述の基である）である。本発明のペプチド誘導体が、造血系に加えてまたはそれらを除いて、広範囲の細胞の増殖を阻害する能力は、過剰な細胞増殖が処置を必要な場合たとえば乾癖で、または癌治療が特定の細胞集団を傷害すると思われる場合に、医薬として価値がある。多くの種類の細胞が、抗癌療法に用いられる細胞毒性薬剤または放射線照射にとくに感受性が高く、一つの知られた技術では、抗癌療法時に造血系の細胞のような細胞の増殖を阻害し、ついで阻害薬剤の効果が消失した時点で正常な増殖が回復する薬剤を使用する。本発明のペプチドはこのような治療に適当な短い生物学的半減期を有するように思われる。同様に、癌治療に感受性の選ばれた細胞集団の増殖は癌細胞自体とともに阻害され、抗癌療法は、癌細胞が増幅の感受性相に到達して、一方、正常細胞がそれほど感受性ではない相にあるときに開始される。一つのタイプの細胞増殖は、細胞たとえば骨髄細胞、食細胞または顆粒球では、治療時にCSF薬剤によって刺激された場合に起こる。細胞増殖の阻害によっても、このような細胞では正常の増殖率を復元できる。多くの自己免疫疾患では、患者は彼ら自身の組織に対して活性な白血球を産生する。白血球の機能を阻害することによって、少なくともある時間、このような自己免疫反応には相応した低下が生じる。他の臨床的適用には、相当するダイマーまたはWO-A-88／03535に開示されているような関連造血刺激剤と組合わせて骨髄細胞の高活性および低活性のピークの変動を誘発させ、その結果、造血の自然の日内リズムを増幅させることが考えられる。この方法で、骨髄の活性が低い期間に細胞抑制療法を行い、骨髄の傷害の危険を低下させ、一方、それに続く活性ピークによって再生を促進することが可能になる。一般的に、阻害作用を発揮させるためには、本発明のペプチドはヒト患者に経口的または注射により、１日体重70kgあたり0.001〜100mgたとえば１〜５mgの用量範囲で投与することができる。静脈内または皮下に投与する場合には、用量は１日体重70kgあたり１〜10mgの用量範囲たとえば10日まで約６mgとすることができる。経鼻、局所（経皮）または経直腸的投与ももちろん可能である。原理的には、患者細胞外液中に約I0^-13Ｍ〜10^-15Ｍのペプチド濃度を生成させることが好ましい。本発明のさらに他の特徴によれば、本発明は、活性成分として１種または２種以上の上に定義したペプチド化合物誘導体またはそれらの生理的に適合性のある塩を、医薬用担体または賦形剤とを配合してなる医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、たとえば、経口、経鼻、非経口または経直腸投与に適当な形態で提供される。本明細書において用いられる「医薬」の語には、本発明の獣医学的応用が包含される。本発明の化合物は、慣用の薬理学的投与剤形、たとえば錠剤、コート錠、経鼻投与用スプレー、溶液、乳化液、粉末、カプセルまたは持続放出剤形として提供される。慣用の医薬用賦形剤ならびに通常の製造方法がこれらの剤形の製造に使用できる。錠剤は、たとえば、単数または複数の活性成分を既知の賦形剤たとえば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはラクトースのような希釈剤、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸のような崩壊剤、デンプンまたはゼラチンのような結合剤、ステアリン酸マグネシウムまたはタルクのような滑沢剤および／または持続性放出が得られるような試剤たとえばカルボキシポリメチレン、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、またはポリビニルアセテートと混合することによって製造できる。所望により、錠剤はいくつかの層から構成させることができる。コー卜錠は、錠剤と同様にして得られた核錠を錠剤のコーティングに一般に用いられる試剤、たとえばポリビニルピロリドンもしくはセラック、アラビアゴム、タルク、酸化チタンまたは糖でコーティングすることによって製造できる。持続放出性を得るためまたは非適合性を回避するために、核錠もいくつかの層から構成させることができる。持続放出性を得るためにはまた、錠剤−コートをいくつかの層とすることも可能で、この場合、錠剤の場合について上述した賦形剤を用いることができる。臓器特異的担体系もまた使用できる。注射用溶液は、たとえば、慣用の様式で、たとえば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルのような防腐剤、またはEDTAのような安定化剤を添加することによって製造できる。この溶液はついで、注射液用のバイアルまたはアンプルに充填される。経鼻用スプレーは同様に水溶液中に製剤化され、エアゾル噴射剤とともにスプレー容器に充填するか、または手動圧縮用の手段とともに提供される。１種もしくは数種の活性成分を含有するカプセル剤はたとえば、活性成分を不活性担体たとえばラクトースまたはソルビトールと混合し、この混合物をゼラチンカプセル中に充填することによって製造できる。適当な坐剤はたとえば、活性成分または活性成分の配合物を、この目的に意図される慣用の担体たとえば天然の油脂またはポリエチレングリコールもしくはその誘導体と混合することによって製造できる。本発明の化合物を含有する投与単位は式（Ｉ）のペプチドまたはその塩0.1〜1 0mg、たとえば１〜５mgを含有するのが好ましい。本発明は、細胞分裂とくに骨髄造血および骨髄再生の阻害に使用する、上述のペプチド化合物および組成物を提供する。本発明のペプチド化合物の細胞分裂たとえば骨髄造血および骨髄再生を阻害する医薬の製造における使用もさらに、本発明の別の態様を形成する。本発明のさらに他の特徴によれば、本発明は、上に定義された化合物または医薬組成物の有効量を患者に投与することからなる、細胞分裂とくに骨髄造血の阻害方法を提供する。しかしながら、この新規ペプチド化合物誘導体のさらに大きな用途は、免疫学的アッセイ技術のための材料の製造にある。このペプチドはついで、適当な高分子量担体たとえばアルブミン、ポリリジンまたはポリプロリンに共有結合させて、抗体産生動物（たとえば、ウサギ、モルモットまたはヤギ）に注射することができる。インビトロ免疫処置技術を使用することもできる。高分子量担体を用いて、よく知られた吸収技術により、高い特異性の血清が得られる。ペプチド分子中に放射活性（³Ｈ、¹²⁵Ｉ、¹⁴Ｃ、³⁵Ｓ）を導入することにより、放射イムノアッセイを設計し、様々な生物学的液体たとえば血清（血漿）、尿および脳脊髄液中のペプチドの測定に使用することができる。本発明のペプチドは任意の便利な方法によって合成できる。アミノ酸単位を形成するのに適当な方法は、たとえば、Robert M.Williams著の、"Synthesis of O ptically Active α-Amino Acids"(Pergamon Press.1989)に記載されている。一般的に、存在する反応性の側鎖基（アミノ、チオールおよび／またはカルボキシル）は全合成のカップリング反応時には保護されることになるが、一部の側鎖基（ヒドロキシ基、イミダゾール基、一級アミド基、ピロGluのような環状アミノ酸内のアミド基）は、全合成操作時に、保護しないままにして置くことが可能である。したがって、最終工程は、一般式Ｉのペプチドの完全にまたは部分的に保護された誘導体の脱保護であり、このような過程はさらに本発明の態様を形成する。 Schoel lkopfらは金属化ついでビス−ラクチムエーテルのアルキル化による各種アミノ酸の製造を記載している〔たとえば、Tetrahedron 39:2085(1983)およびTopics Curr Chem 109:65 (1983)参照〕。この方法の適用は、本発明の基礎となる置換アミノ酸の製造にとくに有用であることが明らかにされている。とくに、バリン−グリシンジペプチドから誘導されるビス−ラクチムエーテルは以下に要約されるような置換反応に有用な出発化合物を形成する。（式中、Ｘは離脱基たとえば臭素原子である） (S)α−アミノ酸誘導体は、ビス−ラクチムエーテルを形成させるためにＤ− バリンを最初に用いれば、この方法で製造できる。同様に、(R)−α−アミノ酸誘導体はＬ−バリンの使用によって形成できる。したがって、本発明はまた、本発明のペプチド化合物を製造する方法において、それらの部分的または完全保護誘導体の脱保護からなる方法を提供する。本発明はさらに、本発明のペプチド化合物の製造方法において、 a)ビス−ラクチムエーテルを金属化し、ついでアルキル化して、ビス−ラクチムジペプチドエーテルを形成させ、 b)工程(a)のビス−ラクチムジペプチドエーテルを加水分解して式NH₂-CH(A)-COOH（式中、Ａは上に定義した通りである）のアミノ酸を形成させ、 c)ペプチド鎖中の残余のアミノ酸を導入し、ついで d)保護基を脱保護することからなる方法を提供する。この方法で製造される置換ビス−ラクチムジペプチドエーテルおよび置換α− アミノ酸は、さらに本発明の態様をなすものである。さらに本発明はまた、アミノ保護、ヒドロキシル保護、チオール保護および／またはカルボキシル保護された本発明のペプチド誘導体を包含する。置換α−アミノ酸が形成されたならば、ペプチド鎖中の残余のアミノ酸は慣用の技術を用いて導入できる。ペプチド鎖の構築においては、原理的にはＣ−末端またはＮ−末端のいずれから出発してもよいが、Ｃ−末端出発操作のみが通常使用され、アミノ酸配列が完成される。したがって、最初のアミノ酸の適当に保護された誘導体を第二のアミノ酸の適当に保護された誘導体と反応させることによって、Ｃ−末端から出発することができる。最初のアミノ酸誘導体は遊離のα−アミノ基を有し、一方、他の反応剤は遊離または活性化されたカルボキシル基と保護されたアミノ基をもつことになる。カップリング後、中間体はたとえばクロマトグラフィーによって精製し、ついで選択的にＮ−脱保護すると、さらに次のＮ−保護された遊離または活性化アミノ酸残基の付加が可能になる。この操作が、所望のアミノ酸配列が完成するまで継続される。使用できるカルボン酸活性化置換基にはたとえば、対称もしくは混合無水物、または活性化エステルたとえばｐ−ニトロフェニルエステル、２，４，５−トリクロロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル(0Bt)、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル(0Su)もしくはぺンタフルオロフェニルエステル(OPFP)が包含される。遊離アミノおよびカルボキシル基のカップリングは、たとえば、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)を用いて行うことができる。使用できる他のカップリング剤にはたとえば、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)がある。一般に、カップリング反応は、低温たとえば−20℃から室温までの温度で、便利には適当な溶媒系中たとえばテトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、メチレンクロリドまたはこれらの溶媒の混合物中において行われる。合成は固相樹脂支持体上で行うのがさらに便利である。クロロメチル化ポリスチレン（１％ジビニルベンゼンで架橋）が一つの有用な支持体であり、この場合、合成はＣ−末端を、たとえばＮ−保護リジンを支持体にカップリングさせることによって出発することになる。多数の適当な固相技術が、Eric Atherton, Christopher J.LoganおよびRobert C.Sheppard,J.Chem.Soc.Perkin I,538-46(1981),James P.Tam,Foe S.TjoengおよびR.B.Merrifield,J.Am.Chem.Soc.102,6117-27(1980),James P.Tam,RichardD. DimarchiおよびR.B.Merrifield,Int.J.Peptide ProteinRes.16,412-25(1980),Ma nfred MutterおよびDieter Bellof,Helv.Chim.Acta 67,2009-16(1984)に記載されている。カップリング反応を溶液中で実施することも可能である。アミノ酸の保護基には広範囲の選択が知られていてSchroeder,EおよびLuebke, K.,The Peptides, １および２巻、Academic Press,New YorkおよびLondon,1965 および1966,Pettit,G.R.,Synthetic Peptides,１〜４巻、Van Nostrand, Reinho ld, NewYork,1970,1971,1975および1976,Houben-Weyl,Methoden der Organische n Chemie,Synthese von Peptiden, 15巻、Gerg ThiemeVerlag Stuttgart, NY, 1 983,The Peptides,Analysis,Synthesis,Biology,１〜７，Erhard Gross,Johanne s Meienhofer編、AcademicPress, NY,San Fransisco, London, Solid phase pep tide synthesis,第２版、John M.Stewart,Janis D.Young，Pierce Chemical Com panyに例示されている。すなわち、使用できるアミン保護基にはたとえば、カルボベンゾキシ(Z-)、ｔ −ブトキシカルボニル(Boc-)、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル(Mtr-)、および９−フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc-)のような保護基が包含される。ペプチドがＣ−末端から構築される場合には、アミノ保護基は添加されるそれぞれの新しい残基のα−アミノ基上に存在し、次のカップリングに先立って選択的に除去される必要がある。固相システムでこのような一次的アミン保護にとくに有用な基の一つは、有機溶媒中ピペリジンで処理して選択的に除去できるFmoc基である。溶液中での合成には、Boc−が好ましい保護基であり、これは慣用の方法で導入および除去が可能である。アミノ酸およびペプチドは、保護前にたとえばFmocの付加の前に、有機溶媒中のそれらの溶解度を改善するために、シリル化する必要がある場合が多い。シリル化およびFmoc保護反応は以下のように要約される。使用できるカルボキシル保護基にはたとえば、容易に切断されるエステル基、たとえばベンジル(-OBZI)、ｐ−ニトロベンジル(-ONB)、またはｔ−ブチル(-t0Bu) が包含され、また固体支持体上のカップリングにはたとえば、ポリスチレンに連結したメチル基がある。チオール保護基には、ｐ−メトキシベンジル(Mob)、トリチル(Trt)およびアセトアミドメチル(Acm)が包含される。広範囲の他のこのような基は上述の参考文献に詳細に記載されていて、上述の方法におけるこのようなすべての基の使用は本発明の範囲内に包含されるものであることに留意すべきである。アミン−およびカルボキシル−保護基の除去には広範囲の操作がある。しかしながら、これらは使用した合成戦略と一貫するものでなければならない。側鎖の保護基は、次のカップリング工程に先立って一時的なα−アミノ保護基の除去に用いられる条件に安定なものでなければならない。アミン保護基たとえばBocおよびカルボキシル保護基たとえばt0Buは酸処理たとえばトリフルオロ酢酸によって同時に除去することができる。チオール保護基たとえばTrtは酸化剤たとえばヨウ素を用いて選択的に除去できる。システイン含有ペプチドは、教科書に記載されている方法により、最後の合成工程として、チオール保護基を含めたすべての保護基を除去して合成できる。以下の実施例は例示のためにのみ示されるものである。例１ (S)−２−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）−５−フェニル−４ −(E)−ペンテン−１−酸 (S)−２−アミノ−５−フェニル−４−(E)−ペンテン−１−酸は、(R)−（− ）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピルピラジンおよびシンナミルブロミドから、U.Schollkopf, U．GrothおよびC．Deng，Angew. Chem．93(1 981)793に記載の操作と同様にして製造された。このようにして得られたアミノ酸（４．０ミリモル）をヘキサメチルジシラザン（15ml）とトリメチルクロロシラン（2.0ml）の混合物に加え、混合物をN₂下に撹拌しながら一夜100℃に加熱する。ついで過剰のシリル化剤を留去し、残留物をCH₂Cl₂(10ml)に溶解し、乾燥したCH₂CI₂（５ml）中９−フルオレニルメトキシカルボニルクロリド（4.1ミリモル）の溶液を加え、混合物を室温でN₂下に３時間撹拌し、ついでCH₂C1₂を蒸発させ、残留物をTHF（９ml）および水（１ml）に溶解し、溶液を30分間撹拌し、蒸発させて、残留物をEt0Ac中に溶解して、乾燥し（MgS0₄）、蒸発させると、標記化合物が生成し、次のペプチド合成に使用する。例２ (2S,R,5R)−Ｎ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−N′−ベジルオキシカルボニル−4,5−ジヒドロキシ−4,5−0,0−イソプロピリデンリジンａ） (2R,3R)−１−ブロモ−４−〔(2R,5S)−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピル−2,5−ジヒドロ−５−ピラジニル〕−2,3−ジヒドロキシ−2,3−0,0−イソプロピリデン−ブタン 3.24g（17.36ミリモル）の(2R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピルピラジンを60mlの無水THFに溶解し、この溶液を−78℃に冷却した。ヘキサン中BuLi溶液（10.85ml、17.36ミリモル）を加え、この溶液を30分間撹拌した。7.8mlの1,3−ジメチル−２−イミダゾリジノンの添加後、撹拌をさらに15分間継続した。5.0g（17.36ミリモル）の(2R,3R)−1,4−ジブロモ−2,3−ジヒドロキシ−2,3−0,0−イソプロピリデン−ブタンの10ml THF中溶液を滴下し、溶液の温度を一夜で室温まで上昇させた。リン酸塩緩衝液（pH７）で加水分解したのち、反応混合物を数回ジエチルエーテルで抽出し、有機溶液を乾燥し（MgS0₄）、濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル９／１）により精製した。収量：3.00g(44.1％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ 0.7(d,3H)，1.04(d,3H)，1.40(s,3H)，1.41(s,3H)，1 .95-2.30(m,3H)，3.40-3.58(m,2H)，3.68(s,3H)，3.70(s,3H)，3.97(dd,1H)，4. 03-4.20(m,3H) ¹³C NMR （CDCl₃）：δ 16.74，19.03，27.29，27.46，31.88，32.66，37.83 ，52.40，52.42，52.55，60.76，79.80，109.22， 163.21，164.00 FAB-MSシグナルm／z、391.2(72)、141.1(100) ｂ） (2R,3R)−１−アジド−４−〔(2R,5S)−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピル−2,5−ジヒドロ−５−ピラジニル〕−2,3−ジヒドロキシ−2,3−0,0−イソプロピリデン−ブタン (2R,3R)−１−ブロモ−４−〔(2R,5S)−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピル −2,5−ジヒドロ−５−ピラジニル〕−2,3−ジヒドロキシ−2,3−イソプロピリデン−ブタン（5.51g、14.11ミリモル）をDMF 50mlに溶解し、2.93gのNaN₃（45 ミリモル）および0.1gのNBu₄Iを添加した。この溶液を70〜80℃に一夜保持させ、50mlの水で希釈した。クロロホルムで抽出したのち、有機層を集め、乾燥した（MgS04）。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル７／３）により精製した。収量：4.06g（81.5％） ¹H NMR （CDCl₃）：δ 0.68（d,3H），1.03（d,3H），1.40（s,3H），1.42（ s,3H），1.95-2.30（m,3H），3.20-3.80（m,2H），3.65（s,3H），3.68（s,3H），3.95（dd,1H），4.00-4.15（m,3H） ¹³C NMR （CDCl₃）：δ 16.72，19.02，26.92，27.27，31.85，37.52，52.10 ，52.36，52.41，52.47，60.70，75.09，79.64，109.13，163.17，164.00 FAB-MS シグナル m／z、354.3（100）、141.1（75）ｃ）（2R,3R）−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−〔（2R,5S）−3, 6−ジメトキシ−２−イソプロピル−2,5−ジヒドロ−５−ピラジニル〕−2,3− ジヒドロキシ−2,3−0,0−イソプロピリデン−ブタン（2R,3R）−１−アジド−４−〔（2R,5S）−3,6−ジメトキシ−２−イソプロピル−2,5−ジヒドロ−５−ピラジニル〕−2,3−ジヒドロキシ−2,3−0,0−イソプロピリデン−ブタン（3.57g、10.12ミリモル）を60mlのEtOHに溶解し、1.3gの Pd／Cを加えた。この溶液をアルゴンで脱気した。溶液中に水素を通じ、水素下に一夜保持し、セライトを通してろ過した。残留物を真空下に乾燥し、30mlのジオキサンに溶解した。１ＭのNaHCO₃、15ml（15ミリモル）を加え、ついで０℃で 1.84mlのCbzCl（13ミリモル）を添加した。この溶液をこの温度で１時間撹拌し、水で希釈し、クロロホルムで抽出した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル８／２）により精製した。収量：2.20g（44.1％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ 0.67（d,3H），1.03（d,3H），1.35（s,3H），1.38（s ,3H），1.90-2.05（m,1H），2.10-2.30（m,2H），3.30-3.55（m,2H），3.64（s, 3H），3.68（s,3H），3.92-4.15（m,4H），5.09（s,2H），5.45（m,1H），7.26- 7.38（m,5H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ 16.70，19.05，27.17，31.83，37.69，42.94，52.26 ，52.41，52.52，60.65，66.72，75.69，79.41，108.61，128.02，128.07，128. 47，136.54，156.40，163.24，164.11 FAB-MS シグナル m／z、462.3（56）、141.1（47）、91.0（100） C₂₄H₃₅N₃O₆（461.6）：計算値： C 62.45 H 7.64 N 9.10 実測値： C 62.99 H 7.67 N 8.77 ｄ）（2R,4R,5R）−N′−ベンジルオキシカルボニル−4,5−ジヒドロキシ-4,5-0,0-イソプロピリデン-リジンメチルエステル（2R,3R）-１-ベンジルオキシカルボニルアミノ-４-〔（2R,5S）-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ-５-ピラジニル〕-2,3-ジヒドロキシ-2,3-0 ,0-イソプロピリデンブタン（0.5g、1.08ミリモル）をジオキサン5mlに溶解し、 4.20mlの0.5Ｍ HCl（2.10ミリモル）を滴下し、アルゴン下に室温で５時間撹拌した。pHが９になるまでアンモニア溶液を加え、この溶液をクロロホルムで抽出し、乾燥し（MgSO₄）、バルブ対バルブ蒸留（0.05Torr、25℃）によりバリンメチルエステルを除去した。収量：0.40g（100％）。 ¹H NMR （CDCl₃）：δ1.35（s,6H），1.70-2.20（m,4H），3.20-3.60（m,3H），3.70（s,3H），3.73-3.90（m,2H），5.09（s,2H），5.32（m,1H），7.26-7.40 （m,5H） ¹³C NMR （CDCl₃）：δ27.01，27.05，37.56，42.11，51.99，52.38，66.79， 75.79，79.82，108.99，128.00，128.44，136.39，156.46，175.30（2R,4R,5R）-N′-ベンジルオキシカルボニル-4,5-ジヒドロキシ -4,5-0,0-イソプロピリデン-リジン（2R,4R,5R）-N′-ベンジルオキシカルボニル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-0,0-イソプロピリデン-リジンメチルエステル（0.40g、1.08ミリモル）を3.5mlの水および4mlのジオキサンに溶解し、０℃に冷却した。0.54mlの２Ｎ LiOH溶液（1.0 8ミリモル）を加え、溶液をアルゴン下に一夜撹拌した。TLC対照は（2R,4R,5R） -N′-ベンジルオキシカルボニル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-イソプロピリデンリジンの定量的生成を示した。この粗製溶液を次工程にそのまま使用した。（2S,4R,5R）-Ｎ-９-フルオレニルメチルオキシカルボニル-N′-ベンジルオキシカルボニル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-0,0-イソプロピリデンリジン（2R,4R,5R）-N′-ベンジルオキシカルボニル-4,5-ジヒドロキシ-4,5-イソプロピリデン-リジンの粗製溶液に、2.5mlの１Ｍ NaOH溶液（2.5ミリモル）と９- フルオレニルオキシカルボニルクロリド0.518g（2.00ミリモル）のジオキサン３ ml中溶液を加えて、混合物を一夜撹拌した。溶液にKHSO₄−溶液を添加してpH２の酸性にし、酢酸エチルによって抽出して、乾燥して（MgSO₄）、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／MeOH ８／２）により精製した。収量：310mg（50.0％） ¹H NMR （DMSO／D₂O）：δ1.19（s,3H），1.22(s,3H），1.60-2.10（m,2H）， 2.90-3.30（m,2H），3.50-4.00（m,3H），4.00-4.40（m,3H），4.95（s,2H），7 .20-8.00（m,13H） ¹³C NMR （DMSO／D₂O）：δ27.59，27.81，37.14，43.15，53.94，65.92，66. 01，76.98，80.16，108.40，120.61，125.67，125.79，127.66，128.16，128.22 ，128.32，128.89，137.55，141.18，144.36，156.14，156.87，176.09 FAB-MS シグナル m／z、497.1（3）、429.1（4）、179.1（31）、91.0（64） C₃₂H₃₄N₂O₈（574.6）：計算値： C 66.89 H 5.96 N 4.88 実測値： C 62.53 H 5.60 N 5.03 例３ (S)-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-６-アジドヘキサン酸ａ）１-ブロモ-４-〔（2R,5S）-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ-５-ピラジニル〕-ブタン 3.76g（20.43ミリモル）の（2R）-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピルピラジンを60mlの無水ＴＨＦに溶解し、この溶液を−78℃に冷却した。ヘキサン中ｎ-BuLiの溶液（20.43ミリモル、12.77ml）を加え、この溶液を30分間撹拌した。10mlのTHF中1,4−ジブロモブタン（4.41g、20.43ミリモル）の溶液を滴下し、溶液の温度を一夜で室温まで上昇させた。リン酸塩緩衝液（pH７）で加水分解したのち、反応混合物を数回ジエチルエーテルで抽出し、有機溶液を乾燥し（MgSO₄）、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル９／１）により精製した。収量：3.88g（59.6％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ0.68（d,3H），1.04（d,3H），1.23-1.47（m,2H），1.63 -1.91（m,4H），2.25（m,1H），3.38（t,2H），3.67（s,3H），3.68（s,3H），3 .90-4.05（m,2H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ16.58，19.03，23.29，31.75，32.63，33.13，33.58，5 2.33，55.13，60.78，163.60 ｂ）１-アジド-４-〔（2R,5S）-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ-５-ピラジニル〕-ブタン１-ブロモ-４-〔（2R,5S）-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ- ５-ピラジニル〕-ブタン（3.81g、11.95ミリモル）を、40mlのDMFに溶解し、3.2 5gのNaN₃（50ミリモル）と0.1 gのNBu₄Ｉを添加した。この溶液を70〜80℃に一夜保持させ、50mlの水で希釈した。クロロホルムで抽出したのち、有機層を集め、乾燥した（MgSO₄）。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル９／１）により精製した。収量：2.17g（64.6％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ0.68（d,3H），1.04（d,3H），1.20-1.50（m,2H），1.53 -1.91（m,4H），2.26（m,1H），3.25（t,2H），3.68（s,3H），3.69（s,3H），3 .90-4.07（m,2H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ16.58，19.05，21.83，28.72，31.76，33.56，51.32，5 2.35，55.16，60.79，163.63 ｃ） (S)-２-アミノ-６-アジドヘキサン酸メチルエステル１-アジド-４-〔（2R,5S）-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ- ５-ピラジニル〕-ブタン（2.17g、7.72ミリモル）を30mlのジオキサンに溶解し、30mlの水中1.28mlの濃塩酸の溶液（15.45ミリモル）を滴下し、混合物をアルゴン下室温で一夜撹拌した。pHが９になるまでアンモニア溶液を加え、この溶液をクロロホルムで抽出し、乾燥し（MgSO₄）、バルブ対バルブ蒸留（0.05Torr、2 5℃）によりバリンメチルエステルを除去した。収量：1.44g（100％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ1.40-1.87（m,8H），3.28（t,2H），3.43（dd,1H），3.7 3（s,3H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ22.93，28.63，34.36，51.22，51.98，54.26，176.37 ｄ） (S)-２-アミノ-６-アジドヘキサン酸 (S)-２-アミノ-６-アジドヘキサン酸メチルエステル（1.44g、 7.73ミリモル）を４mlのジオキサンに溶解し、０℃に冷却した。3.87mlの２Ｎ L iOH溶液（7.74ミリモル）を加え、溶液をアルゴン下に一夜撹拌した。TLC対照は (S)-２-アミノ-６-アジドヘキサン酸の定量的生成を示した。この粗製溶液を次工程にそのまま使用した。ｅ） (S)-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-６-アジドヘキサン酸 (S)-２-アミノ-６-アジドヘキサン酸（7.73ミリモル）の粗製溶液に、１Ｎ N aHCO₃溶液11.6ml（11.6ミリモル）および９-フルオレニルオキシカルボニルクロリド3.00g（11.6ミリモル）のジオキサン12ml中溶液を加え、一夜アルゴン下に撹拌した。溶液にKHSO₄-溶液を加えてpH２の酸性にし、酢酸エチルで抽出し、乾燥して（MgSO₄）、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／酢酸７／３／0.5）により精製した。収量：2.00g＝65.6％ ¹H NMR（DMSO）：δ1.20-1.80（m,2H），3.31（t,2H），3.94（m,1H），4.27 （m,3H），7.20-8.00（m,8H） ¹³C NMR（DMSO）：δ23.32，28.26，30.73，47.10，50.94，54.09，66.01，12 0.48，125.65，127.44，128,02，141.11，144.19，144.25，156.54，174.22例４ (S)-Ｎ-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニル）-Ｏ-メチルセリンａ） (2R,5S)-3,6-ジメトキシ-５-（メトキシメチル）-２-イソプロピル-2,5- ジヒドロピラジン (R)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピルピラジン5.35g（30ミリモル）の無水THF（80ml）中溶液に、ヘキサン中n-BuLiの1.6Ｍ溶液（10.85ml、17. 36ミリモル）を−78℃で加えた。この溶液に30分後、THF（20ml）中ブロモメチルメチルエーテル（4.5g、36ミリモル）の溶液を滴下した。反応混合物を放置して温度を一夜で20℃まで上昇させ、１Ｍリン酸塩緩衝液（pH７、80ml）を加えて反応を停止させた。白濁した混合物を10分間撹拌し、水（250ml）およびジエチルエーテル（180ml）で希釈した。層を分離し、水相をジエチルエーテル（２×1 50ml）で抽出した。有機層を合せて乾燥し（Na₂SO₄）、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：ジエチルエーテル５：１）で精製すると生成物5.61gが得られた。他のジアステレオーマーの最終不純物を除去するため、この物質をアセトニトリルから−30℃で結晶化し、冷沈殿物をCH₂Cl₂に再溶解し、乾燥し（MgSO₄）、濃縮した。収量：4.24g（18.6ミリモル、62％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ4.05（q,1H,J3.5Hz），3.99（t,1H,J3.5Hz），3.80-3.64 （m,8H），3.34（s,3H），2.29（dsept,1H,J3.5,7.0Hz），1.05（d,3H），0.68 （d,3H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ164.79，161.58，74.13，60.76，59.51，56.82，52.42 FAB-MSシグナルm／z、229〔M⁺＋1〕 C₁₁H₂₀N₂O₃（228.29）：ｂ） (S)-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-３-メトキシプロピオン酸メチルエステル (2R,5S)-3,6-ジメトキシ-５-（メトキシメチル）-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロピラジン（2.1g、9.2ミリモル）のジオキサン（18ml）中溶液に、１Ｍ HCl（18.4ml、18.4ミリモル）を加え、混合物を室温で一夜撹拌した。揮発性成分を蒸発させ、残留物をジオキサンに溶解し、再度蒸発させた。粗製の残留物をジオキサンに溶解し、FmocCl（5.71g、2.21ミリモル）を加えた。２分後に、１Ｍ−NaHCO₃（44.2ml、44.2ミリモル）を加えた。15分後に、混合物を水（50ml）およびCHCl₃（100ml）で希釈した．層を分離し、水相をCHCl₃（２×7 5ml）で抽出した。有機層を合せて乾燥し（Na₂SO₄）、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル２：１）で精製した。収量：2.68g（7.54ミリモル、82％） ¹H NMR（300MHz，CDCl₃）：δ 7.78（d,2H,J7Hz），7.63（t,2H,J7Hz），7.41 （t,2H,7Hz），4.56-4.35（m,3H），4.25（t,1H,J3.0,9.3Hz），3.84（dd,1H,J3 .0,9.3Hz），3.70（s,3H），3.65（dd,1H,J3.6,9.3Hz），3.36（s,3H） ¹³C NMR（75 MHz，CDCl₃）：δ170.77，156.01，143.88，143.75，141.25，12 8.03，127.66，127.02，125.12，125.07，119.92，72.27，67.11，59.23，54.37 ，53.44，52.54，47.12 ｃ） (S)-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-３-メトキシプロピオン酸 (S)-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-３-メトキシプロピオン酸メチルエステル（2.18g、6.13ミリモル）のジオキサン（31ml）中溶液に、６Ｍ-HCl（31ml、184ミリモル）を加えた。この混合物を放置して冷却させ、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸10：10：１）で精製した。収量：凍結乾燥後1.91g（5.60ミリモル、91％） ¹H NMR（DMSO-d₆）：δ7.87（d,2H,J7.5Hz），7.74（d,2H,J7.5Hz），7.41（d t,2H,J0.6Hz,7.5Hz），7.31（dt,2H,J0.6Hz,7.5Hz），4.29-4.19（m,4H），3.65 -3.54（m,2H），3.24（s,3H） ¹³C NMR（DMSO-d₆）：δ172.07，156.46，144.23，144.21，141.11，127.46， 125.73，120.48，71.80，66.19，58.60，54.47，47.05例５ (S)-６-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-４-ヘキシン酸ａ）１-クロロ-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ -５-ピラジニル〕-２-ブチン 21.23g（100ミリモル）の(R)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピルピラジンのTHF（200ml）中溶液に、−78℃で1.6Ｍのn-BuLi（62.5ml、100ミリモル）を滴下した。30分後、この溶液を−78℃において、1,4-ジクロロ-２-ブチン（49.2g、400ミリモル）のTHF（400ml）中溶液に移した。混合物を放置して温度を一夜で20℃まで上昇させた。１Ｍ-リン酸塩緩衝液（250ml）を加えて反応を停止させた。混合物をジエチルエーテル（300ml）および水（300ml）で希釈した。水層を分離し、ジエチルエーテル（２×300ml）で抽出した。有機層を合せて乾燥し（Na₂SO₄）、ろ過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：ジエチルエーテル10：１）で精製した。収量：24.8g（83ミリモル、83％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ 4.39-4.00（m,8H），2.78（m,AA′X,2H），2.30（dsept ,1H,J3.5,9.5Hz），1.38-1.20（m,6H），1.05（d,3H,7Hz），0.70（d,3H,7Mz） ¹³C NMR（CDCl³）：δ161.03，159.25，83.76，60.90，54.21，31.68，30.95 ，25.48，20.62，19.03，15.85，14,21 ｂ）１-アジド-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ -５-ピラジニル〕-２-ブチン１-クロロ-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-２-イソプロピル-2,5-ジヒドロ-５- ピラジニル〕-２-ブチン（19.4g，65ミリモル）およびテトラブチルアンモニウムクロリド（2g）の無水DMF（200ml）中溶液を一夜20℃で撹拌した。大部分のDM Fを減圧下（0.01 Torr）で除去した。残留物をジエチルエーテル（250ml）および水（250ml）に分配した。水層をエーテル（２×250ml）で抽出した。有機層を合せ乾燥し（Na₂SO₄）、濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：ジエチルエーテル８：１）で精製した。収量：18.06g（59ミリモル、91％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ4.25-3.99（m,4H），3.84（m,6H），3.84（m，2H），2.8 3-2.77（m,AA′X,2H），2.33-2.26（m,1H），1.35-1.27（m,6H），1.05（d,3H,J 7.2Hz），0.71（d,3H,J7.2Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ164.24，161.16，84.54，73.50，61.00，60.74，54.31 ，40.20，31.84，25.31，19.03，16.62，14,27，14.21 ｃ）１-ベンジルオキシカルボニルアミノ-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-2,5- ジヒドロ-２-イソプロピル-５-ピラジニル〕-２-ブチン THF（236ml）中１-アジド-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-２-イソプロピル-2, 5-ジヒドロ-５-ピラジニル〕-２-ブチン（3.6g、11.8ミリモル）の溶液に、20℃ で、トリフェニルホスフィン（3.7g、14.16ミリモル）および水（680ml、37.8ミリモル）を加えた。直ちにN₂の発生が観察された。反応混合物を２時間撹拌し、ついで濃縮した。残留物のジオキサン（29ml）中溶液に、１ＭのNaHCO₃（14.2ml 、14.2ミリモル）およびCbz-クロリド（2.42g、14.2ミリモル）を０℃で添加した。混合物をこの温度に１時間保持し、次いでジエチルエーテル（３×50ml）で抽出した。有機層を乾燥し（Na₂SO₄）、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン：酢酸エチル４：１）で精製した。収量：4.1g（9.92ミリモル、84％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ7.37-7.33（m,5H），5.10（s,2H），4.24-4.03（m,6H），3.97-3.90（m,4H），2.70-2.67（m,AA′X,2H），2.32-2.25（m，1H），1.27（ t,4H,J7Hz），1,04(d,3H,J7Hz），0.69（d,3H,J7Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ164.11，161.35，136.31，128,46，128.42，128.05，12 7.53，126.89，80.41，66.85，65.25，60.85，60.69，60.65，54.43，31.66，25 .32，19.054，16.53，14.29，14.21 ｄ） (S)-２-アミノ-６-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-２-ヘキシン酸エチルエステル１-ベンジルオキシカルボニルアミノ-４-〔(2R,5S)-3,6-ジエトキシ-2,5-ジヒドロ-２-イソプロピル-５-ピラジニル〕-２-ブチン（４g、9.67ミリモル）のジオキサン（38ml）中溶液に１ＭのHCl（38.7ml、38.7ミリモル）を加えた。この混合物を室温で一夜撹拌した。大部分のジオキサンを減圧下に除去し、水性残留物をを水（100m l）で希釈した。この混合物をエーテル（100ml）で抽出した。ついで、溶液のpH を濃NH₃を加えて９に調整すると、白色の油状物が生成した。この混合物をCHCl₃ （３×50ml）で抽出し、CHCl₃層を合せて乾燥し（MgSO₄）、ろ過し、濃縮した。残留物をクーゲルロール蒸留に付して、50℃（0.1Torr）でバリンエチルエステルを除去した。残った物質は純粋な生成物であった。収量：2.57g（8.44ミリモル、87.3％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ 7.34（s,5H），5.11（s,2H），4.18（q,2H,J7Hz），3.9 6(m,2H），3.57（t,1H,J6Hz），2.60（AA′X,2H），1.27（t,3H,J7Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ173.73，160.35，136.24，128.44，128.10，128.05，79 .02，78.66，66.93，61.19，53.22，31.15，25.10，14.15 ｅ） (S)-６-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-４-ヘキシン酸 (S)-２-アミノ-６-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-４-ヘキシン酸エチルエステル塩酸塩（520mg、1.71ミリモル）のジオキサン（５ml）中溶液に、１Ｍ NaHCO₃（2.05ml、2.05ミリモル）および水（３ml）を加えた。５時間後、ジオキサン（５ml）中FmocCl（530mg、2.05ミリモル）を加えた。ほとんど即時に沈殿が生成した。この混合物に１Ｍ HClを加えて酸性としてCHCl₃（３×30ml）で抽出した。有機層を濃縮してフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸10：10：１）によって精製した。収量：720mg（1.44ミリモル、84.5％） ¹H NMR（300 MHz，DMSO-d₆）：δ7.87（d,2H,J7.5Hz），7.71（d,2H, J7.5Hz），7.42-7.28（m,9H），5.00（s,2H），4.30-4.20（m,3H），4.10（m,1H ），3.77（m,2H），2.58（m,2H） ¹³C NMR（300 MHz，DMSO-d₆）：δ172.41，156.28，144.20，141.10，137.35 ，128.73，128.21，128.03，127.48，125.68，120.49，100.09，79.37，79.03， 66.21，65.93，53.49，47.04，30.63，21.78例６ (S)-２-アミノ-３-（２-フリール）プロピオン酸ａ） (2R,5S)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-５-フルフリルピラジンヘキサン中ブチルリチウムの1.55Ｍ溶液（6.45ml、10ミリモル）をシリンジにより、THF（50ml）中（2R）-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピルピラジン（1.84g、10ミリモル）の撹拌溶液に−78℃で添加し、この溶液を−78℃ で１時間撹拌した。THF（10ml）中２-クロロメチルフラン（1.3g、11ミリモル）の溶液を徐々に加え、撹拌を一夜継続した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチル（50ml）に溶解し、リン酸塩緩衝液（pH７）で抽出した。水相を酢酸エチル（２×20ml）で２回抽出した。有機層を乾燥し（MgSO₄）、溶媒を減圧下に蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ジエチルエーテル／ヘキサン15／１、シリカゲル）によって精製した。収量：2.0g（76％）無色粘稠な液体 ¹H NMR（CDCl₃）：δ0.65（d,3H,J6.7Hz），1.00（d,3H,J6.7Hz），2.20（m,1 H），3.11（d,2H,J5Hz），3.62（t,1H,J3.5Hz），3.65（d,3H,J0.9Hz），3.70（ d,3H,J0.9Hz），4.26（dd,1H,J5,J8.5Hz），5.96（d,1H, J3.1Hz），6.23（dd,1H,J1.8,J3.1Hz），7.26（dd,1H,J1.0,J0.8Hz） ¹³C NMR （CDCl₃）：δ16.54，19.07，31.43，33.03，52.33，52.41，54.95，60.48，107 .10，110.24，141.28，152.27，162.53，164.10 ｂ） (S)-２-アミノ-３-（２-フリール）プロピオン酸 (2R,5S)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-５-フルフリルピラジン（２g、7.6ミリモル）、１Ｍ HCl（7.6ml、7.6ミリモル）およびジオキサン（7.6ml）の混合物をN₂下、室温で一夜撹拌した。ジオキサンを減圧下に除去し、水相をジエチルエーテル（20ml）で抽出した。水相にpHが９になるまでアンモニア水を加え、CHCl₃（３×30ml）で抽出し、乾燥し（MgSO₄）、溶媒を減圧下に除去した。40〜50℃（0.05ミリバール）でバルブ対バルブ蒸留してバリンメチルエステルを除去した。蒸留されない標記化合物をさらに精製することなく使用した。収量：1.0g（86％） ¹H NMR（CDCl₃）：δ1.5（s,2H），2.92（dd,1H,J15,J7.2Hz），3.04（dd,1H, J15,J5Hz），3.68（d,3H,J0.5Hz），3.73（dd,1H,J7.2,J5.1Hz），6.06（dd,1H, J0.7,J3.2Hz），6.24（dd,1H,J2.9,J2Hz），7.28（dd,1H,J0.7,J1.9Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ33.45，52.00，53.67，107.44，110.20，141.83，151.3 2，174.97 ｃ） (S)-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-３-（２-フリール）プロピオン酸 (S)-２-アミノ-３-（２-フリール）プロピオン酸メチルエステル（１g、6.5ミリモル）を０℃で２Ｍ LiOH（3.27ml、6.5ミリモル）およびジオキサン（3.27ml）と混合し、N₂下に一夜撹拌した。翌日、反応混合物のTLC管理（CHCl₃／MeOH／NH₃水１／１／0.1）ではエステルは存在しないことを示した。１Ｍ NaHCl₃（9.75ml、9.75ミリモル）および９-フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（2.5g、9.75ミリモル）をジオキサン（10ml）に溶解し、これを上記溶液に加え、さらに１時間撹拌を継続した。ジオキサンを減圧下に除去し、水溶液を10％ KHSO₄溶液でpH２の酸性とした。この溶液をCHCl₃ （３×20ml）で抽出し、乾燥し（MgSO₄）、蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／酢酸10／10／１）によって精製した。収量：1.3g（53％）、白色結晶 ¹H NMR（CDCl₃）：δ 2.95（dd,1H,J9.9,J15.2Hz），3.08（dd,1H,J4.4,J15.2 Hz），3.6（br.s,1H），4.16-4.26（m,4H），6.12（d,1H,J2.9Hz），6.33（t,1H ,J2.3Hz），7.29（t,2H,J7.32Hz），7.39（t,2H,J7.48Hz），7.49（br.s,1H）， 7.64（dd,2H,J7.17,J2.14Hz），7.85（d,2H,J7.48Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ29.8，46.98，66.04，107.45，110.85，120.48，125.57 ，125.63，127.50，128.07，141.06，142.21，144.09，151.84，156,26，160.35例７ (S)-２-アミノ-３-（3,5-ジメチル-４-イソキサゾリル）プロピオン酸ａ） (2R,5S)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-５-（3,5-ジメチル-４-イソキサゾリルメチル）ピラジン (2R)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-ピラジン（2.85g、15.5ミリモル）のTHF（50ml）中溶液を−78℃で撹拌しながら、これにヘキサン中ブチルリチウム1.55Ｍ溶液（10ml、15.5ミリモル）をシリンジで添加した。THF（10ml）中４-クロロメチル-3,5-ジメチルイソキサゾール（2.3 4g、16ミリモル）の溶液を徐々に加え、撹拌を一夜継続した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチル（50ml）に溶解し、リン酸塩緩衝液（pH７）で抽出した。水相を酸性エチル（２×20ml）で２回抽出した。有機層を乾燥し（MgSO₄）、溶媒を減圧下に蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ジエチルエーテル／ヘキサン４／１、シリカゲル）によって精製した。収量：３g（64％）、無色粘稠な液体 ¹H NMR（CDCl₃）：δ0.60（d,3H,J6.7Hz），0.97（d,3H,J6.7Hz），2.17（s,3 H），2.26（s,3H），2.73（dd,1H,J5.9,J14.6Hz），2.86（dd,1H,J4.4,J14.7Hz ），3.59（t,1H,J3.4Hz），3.63（d,3H,J0.3Hz），3.68（d,3H,J0.3Hz），4.11 （m,1H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ10.21，11.16，16.41，18.99，26.99，31.29，52.26，5 2.33，55.93，60.46，109.82，160.18，162.33，164.24，166.34 ｂ） (S)-２-アミノ-３-（3,5-ジメチル-４-イソキサゾリル）プロピオン酸メチルエステル (2R,5S)-2,5-ジヒドロ-3,6-ジメトキシ-２-イソプロピル-５-（3,5-ジメチル- ４-イソキサゾリルメチル）ピラジン（２g、6.8ミリモル）、1.0Ｍ HCl（13.6ml 、13.6ミリモル）およびジオキサン（13.6ml）の混合物をN₂下に室温で一夜撹拌した。ジオキサンを減圧下に除去し、水相をジエチルエーテル（20ml）で抽出した。水相にpHが９になるまでアンモニア水を加え、CHCl₃（３×30ml）で抽出し、乾燥し（MgSO₄）、溶媒を減圧下に除去した。40〜50℃（0.05ミリバール）でバルブ対バルブ蒸留を行ってバリンメチルエステルを除去した。蒸留されない標記化合物をさらに精製することなく使用した。収量：1.3g ¹H NMR（CDCl₃）：δ1.52（br.s,2H），2.21（s,3H），2.31（s,3H），2.56（ dd,1H,J7.5,J14.6Hz），2.74（dd,1H,J6.2,J14.6Hz），3.55（t,1H,J6.7Hz），3 .69（s,3H） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ0.18，11.06，27.94，52.06，54.45，109.45，159.63， 166.31，175.18 ｃ） (S)-２-（９-フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）-３-（3,5-ジメチル-４-イソキサゾリル）プロピオン酸 (S)-２-アミノ-３-（3,5-ジメチル-４-イソキサゾリル）-プロピオン酸メチルエステル（1.3g、6.6ミリモル）を２Ｍ LiOH（3.3ml、6.6ミリモル）およびジオキサン（3.3ml）に０℃で混合し、N₂下に一夜撹拌した。翌日の反応混合物のTLC 管理（CHCl₃／MeOH／NH₃水１／１／0.1）ではエステルは存在しないことを示した。１Ｍ NaHCl₃（10ml、10ミリモル）、およびジオキサン（10ml）に溶解した９-フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（2.6g、10ミリモル）を上記溶液に添加し、さらに１時間撹拌を継続した。ジオキサンを減圧下に除去し、水溶液を10％ KHSO₄溶液でpH２の酸性とした。この溶液をCHCl₃（３×20ml）で抽出し、乾燥し（MgSO₄）、蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／酢酸10／10／１）で精製した。収量：1.6g（59％）、白色結晶 ¹H NMR（CDCl₃）：δ2.10（s,3H），2.19（s,3H），2.65（dd,1H,J9.46,J14.6 5Hz），2.76（dd,1H,J5.4,J14.65Hz），3.5-4.2（m,4H），7.24-7.40（m,4H）， 7.63（d,2H,J7.32Hz），7.82（t,2H,J7.63Hz） ¹³C NMR（CDCl₃）：δ10.02，10.90，24.27，46.94，53.81，66.73，110.16， 120.44，125.51，127.46，128.06，141.06，144.12，156.27，159.83，166.51， 173.02ペプチドの固相合成固相ペプチド合成は基本的に、フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）-ポリアミド法の原理に従って実施した（Atherton & Sheppard, Solid phase pepti de synthesis: a practical approach. Oxford: IRL Press at Oxford Universi ty Press,1989）。市販の合成樹脂を使用した。手動のまたは半自動装置（Labor atory Peptide Synthesizer 5P 650）を用いたバッチ合成では、これらは酸安定性ポリスチレン（Wang，J．Am．Chem．Soc.,95，1328-1333，1973）または酸超安定性連結剤（Mergerら、Tetrahedron Letters 29，4005-4008，1988）とした。別法として、ペプチドは、LKB Biolynx 4170 Automated Pertide Synthesizer を用い、流動樹脂上完全に自動化された様式で組立てた（Athertonら、J．Chem. Soc., Chem．Commun., 1151-2，1981）。すでに保護された所望のＣ-末端Fmoc- アミノ酸残基を含有する合成樹脂を購入した。鎖の延長は、側鎖保護Fmoc-アミノ酸ペンタフルオロフェニルエステルにより（Kisfaludy & Schoen，Synthesis, 325-327，1983）。ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）／１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）（Koenig & Geiger，Chem．Ber., 103，2034-2040， 1970）を用いるかまたはカップリング試剤PyBOP（Costeら、Tetrahedron Lett., 31，205-208，1990）を用い、様々に行った。リジン側鎖アミノ基はｔ-ブチルオキシカルボニル基によって保護し、グルタミン酸およびアスパラギン酸の側鎖カルボキシル基はｔ-ブチルエステルとして保護した。所望の配列の固相組立てが完成したのち、適当なスカベンジャー試剤を予め添加したトリフルオロ酢酸（Kingら、Int．J．Peptide Protein Res., 36，255-26 8，1990）を用いて、ペプチドを合成樹脂から切断し、同時に側鎖の脱保護を行った。蒸発させたのち、ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させて単離し、乾燥した。製造用逆相高速液体クロマトグラフィーによって精製した。 HOBt ＝ヒドロキシベンゾトリアゾール Pfp ＝ペンタフルオロフェニル Fmoc ＝９-フルオレニルメトキシカルボニル Boc ＝ｔ-ブトキシカルボニル DCC ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド Cin ＝(S)-２-アミノ-５-フェニル-４-(E)-ペンテン-１-酸 BuLi＝ｎ-ブチルリチウム THF＝テトラヒドロフラン DMF＝ジメチルホルムアミドpGlu-Glu-Asp-〔Cin〕-Lys ペプチドはLabortec Peptide Synthesizerを用いて合成する。Fmoc-Lys(Boc)- サスリンポリマー（1.0g、0.6ミリモル、BachemA.G.；置換0.6ミリモル／g）を1 00mlの反応フラスコに充填した。DMF（20ml）中(S)-２-（９-フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）-５-フェニル- ４-(E)-ペンテン-１-酸（578mg、1.4ミリモル）、DCC（290mg、1.4ミリモル）およびHOBt（211mg、1.4ミリモル）をポリマーに加え、反応を９時間進行させる。ついでポリマーをCH₂Cl₂、CH₂Cl₂中30 %MeOHおよびDMFで洗浄する（カイザー試験陰性）。合成の残部は、Fmoc-Asp(OtBu)-Opfp（0.89g、1.5ミリモル）、Fmoc-Glu(OtBu )-Opfp（0.90g、1.5ミリモル）およびpGlu-ペンタクロロフェニルエステル（0.5 7g、1.5ミリモル）を用い、標準プロトコールによって実施する。HOBt（0.23mg 、1.5ミリモル）を各カップリング工程で加え、１時間この工程を行わせる。カップリングの完結は陰性のカイザー試験によって確認される。Fmoc-アミノ酸とのカップリング後、ポリマーをDMFで洗浄し、保護基をDMF中に20%ピペリジンによって切断し、ポリマーを再びDMFで洗浄する。最後のカップリング後、ポリマーをMeOH／CH₂Cl₂およびCH₂Cl₂で洗浄し、乾燥する。ポリマーからペプチドをTF A：CH₂Cl₂ １：１で切断し、溶液を凍結乾燥し、残留物を水に溶解し、濾過し（ 0.45μ）、ついで濾液を凍結乾燥する。さらに精製するには粗製ペプチドを水に溶解し、Beckman Ultrasphere ODSに、溶液A：H₂O中0.1%TFA、B：MeCN：H₂O 40：6 0中0.1%TFAを用いて製造用HPLCに付した。均一なペプチドを含有する分画を集めて凍結乾燥すると純粋なペプチド（＞95％）が得られる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年７月２８日【補正内容】請求の範囲１．式Ｉ〔式中、R^aはを表し、R^bはを表し、R^Cはを表し、R^dはを表し、R^eはを表し、R^fはを表し（これらの式中、ｎおよびｍは独立に０または１であり、ｐ、ｑおよびｒは独立に１または２であり、ｓは３または４であり、 R¹およびR²はいずれも水素原子であるか、または両者でオキソ基を表し、 R³およびR⁴はいずれも水素原子であるかまたは両者で炭素一炭素結合を表し、 R⁵は水素またはアシル基であり、 R⁶およびR⁷はそれぞれ独立にヒドロキシ基またはアミノ基を表すが、好ましくはヒドロキシ基であり、 R⁸は水素、C_2-6アルキル基、１個もしくは２個以上のヒドロキシ、アミノもしくはメトキシ置換基をもっていてもよいC_7-20アラールキル基、代謝的に不安定なＳ-保護基を表し、 R⁹は水素またはメチル基であり、 R¹⁰はヒドロキシもしくはアミノ基、アミノ酸グルタミンもしくはＮ-末端グルタミン単位を有するペプチドの残基である）、 -Aは基CR^AR^A′-Zであり、この式中、 R^Aは独立に水素原子または基-R^A″、-OR^A″、-SR^A″、−NR^A″R^A″、-CONR^A″ R^Aもしくは-COOR^A″であり、 R^A′は水素原子または基R^A″であり、 R^A″はアルキル、シクロアルキル、アルカノイル、ヒドロキシアルキル、アニジン基、または炭素環もしくは異項環基であり、Ｚは-OR^B、NR^CR^C、CR^DR^ER^F、または置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環（ただし非置換フェニルを除く）であり、この場合、各R^Bは直鎖状または分岐状の、飽和もしくは不飽和炭化水素基たとえばアルキル、アラールキルもしくはアリール基であって、所望により１個もしくは２個以上のR^A基（R^A基は上に定義した通りである）で置換されていてもよく、また所望により１個もしくは２個以上の-N-、-O-もしくは-S-ヘテロ原子が挿入されていてもよく、 R^Cは水素原子または基R^Bであり、 R^Dは水素原子または基R^Fであり、 R^Eは水素原子もしくは基R^Fであるか、または基R^DとともにC=O基を形成し、 R^Fは基-R^B、-OR^B、-NR^CR^Cもしくは-SR^B、またはヒドロキシ、カルボキシ、アミノカルボニルもしくはアルコキシ基であるか、あるいはＣα原子に結合した窒素原子に連結するメチレン基であるか、R^Dとともにアルキリジン基を形成し、またはR^A、R^A′、R^DおよびR^Eが水素以外の基である場合には水素原子である〕の単一鎖造血調節ペプチドからなるペプチド化合物誘導体。２．Ｚは置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環であるが、ただし非置換フェニル以外の基である請求項１に記載のペプチド化合物。３．-Aは-CH₂-Z（式中、Ｚは置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環であるが、ただし非置換フェニル以外の基である）である請求項２に記載のペプチド化合物。４．Ｚは、ベンジル、インドリル、ヒドロキシフェニル、イミダゾリル、ナフチル、チエニル、ピリジニル、フラニル、イソキサゾリル、3,5-ジメチルイソキサゾリルまたはシクロヘキシル基である請求項３に記載のペプチド化合物。５．-Aは基-CH₂-Z〔式中、Ｚは-OR^B（R^Bは請求項１に定義した通りである）またはCHR^DR^F（式中、R^Dは水素原子または基CH₃を表し、R^Fはヒドロキシル、アミノもしくはアジド基で置換されていてもよいアルキル基を表すか、またはR^DとR^Fは両者でアルキリジン基を形成する）である請求項１に記載のペプチド化合物。６．式Ｉのペプチド鎖において、ｎは０である請求項１〜５に記載のペプチド化合物。７．式Ｉのペプチド鎖において、ｍは０である請求項１〜６に記載のペプチド化合物。８．式（式中、-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）の請求項１〜７のいずれかに記載のペプチド化合物。９．請求項１〜８のいずれかに記載の化合物のアミノ保護、ヒドロキシル保護、チオール保護および／またはカルボキシル保護誘導体。 10．請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物と医薬用担体または賦形剤からなる医薬組成物。 11．細胞分裂の阻害に使用するための請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物。 12．骨髄造血または骨髄再生の阻害に使用するための請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物。 13．細胞分裂の阻害用の医薬の製造における請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物の使用。 14．骨髄造血または骨髄再生の阻害用の医薬の製造における請求項13に記載の使用。 15．細胞分裂の阻害のための請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物の使用。 16．骨髄造血または骨髄再生の阻害のための請求項15に記載の使用。 17．請求項１〜８のいずれかに記載の化合物の有効量を患者に投与することからなる、患者における細胞分裂の阻害方法。 18．骨髄造血または骨髄細胞の分裂を阻害する請求項17に記載の方法。 19．請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物の製造方法において、その部分的にまたは完全に保護された誘導体を脱保護することからなる方法。 20．請求項１〜８のいずれかに記載のペプチド化合物の製造方法において、 a)ビス-ラクチムエーテルを金属化し、ついでアルキル化して、ビス-ラクチムジペプチドエーテルを形成させ、 b)工程(a)のビス-ラクチムジペプチドエーテルを加水分解して式NH₂-CH(A)-COOH（式中、Ａは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）のアミノ酸を形成させ、 c)ペプチド鎖中の残余のアミノ酸を導入し、ついで d)保護基を脱保護することからなる方法。 21．式（式中、-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）のアミノ酸誘導体。 22．式（式中、-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）のラクチムジペプチドエーテル。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｄ 241/18 8615−4Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ (72)発明者ハルトマン，ミヒアエルオーストリア国アー―4643 ペテンバハ. ミテンドルフ 130

Claims

【特許請求の範囲】１．単一鎖の造血調節たとえば造血阻害ペプチドからなり，その非末端アミノ酸のＣα原子が基-Aによって置換され，そのＣα原子には天然のα−側鎖は存在しないペプチド化合物誘導体であって、ＡはCR^AR^A′-Zであり、この式中、 R^Aは独立に水素原子または基-R^A″、-OR^A″、-SR^A″、-NR^A″R^A″、-CONR^A″R^A ″もしくは-COOR^A″であり、 R^A′は水素原子または基R^A″であり、 R^A″はアルキル、シクロアルキル、アルカノイル、ヒドロキシアルキル、アニジン基、または炭素環もしくは異項環基であり、Ｚは-OR^B、NR^cR^c、CR^DR^ER^F、または置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環（ただし非置換フェニルを除く）であり、この場合、各R^Bは直鎖状または分岐状の、飽和もしくは不飽和炭化水素基たとえばアルキル、アラールキルもしくはアリール基であって、所望により１個もしくは２個以上のR^A基（R^A基は上に定義した通りである）で置換されていてもよく、また所望により１個もしくは２個以上の-N-、-0-もしくは-S-ヘテロ原子が挿入されていてもよく、 R^Cは水素原子または基R^Bであり、 R^Dは水素原子または基R^Fであり、 R^Eは水素原子もしくは基R^Fであるか、または基R^DとともにC=0基を形成し、 R^Fは基-R^B、-OR^B、-NR^CR^Cもしくは-SR^B、またはヒドロキシ、カルボキシ、アミノカルボニルもしくはアルコキシ基であるか、あるいはＣα原子に結合した窒素原子に連結するメチレン基であるか、RDとともにアルキリジン基を形成し、またはR^A、R^A′、R^DおよびR^Eが水素以外の基である場合には水素原子である、ペプチド化合物。２．Ｚは置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環であるが、ただし非置換フェニル以外の基である請求項１に記載のペプチド化合物。３．-Aは-CH₂-Z（式中、Ｚは置換もしくは非置換、芳香族もしくは非芳香族、炭素環もしくは異項環であるが、ただし非置換フェニル以外の基である）である請求項２に記載のペプチド化合物。４．Ｚは、ベンジル、インドリル、ヒドロキシフェニル、イミダゾリル、ナフチル、チエニル、ピリジニル、フラニル、イソキサゾリル、３，５-ジメチルイソキサゾリルまたはシクロヘキシル基である請求項３に記載のペプチド化合物。５．-Aは基-CH₂-Z〔式中、Ｚは-OR^B（R^Bは請求項１に定義した通りである）またはCHR^DR^F（式中、R^Dは水素原子または基CH₃を表し、R^Fはヒドロキシル、アミノもしくはアジド基で置換されていてもよいアルキル基を表すか、またはR^DとR^Fは両者でアルキリジン基を形成する）である請求項１に記載のペプチド化合物。６．単一鎖の造血調節ペプチドは式Ｉ R^a-R^b-R^C-R^d-(R^e)_n-R^f （Ｉ）〔式中、R^aはを表し、R^bはを表し、R^Cはを表し、R^dはを表し、R^eはを表し、R^fはを表し（これらの式中、ｎおよびｍは独立に０または１であり、ｐ、ｑおよびｒは独立に１または２であり、ｓは３または４であり、 R¹およびR²はいずれも水素原子であるか、または両者でオキソ基を表し、 R³およびR⁴はいずれも水素原子であるかまたは両者で炭素−炭素結合を表し、 R⁵は水素またはアシル基であり、 R⁶およびR⁷はそれぞれ独立にヒドロキシ基またはアミノ基を表すが、好ましくはヒドロキシ基であり、 R⁸は水素、C_2-6アルキル基、１個もしくは２個以上のヒドロキシ、アミノもしくはメトキシ置換基をもっていてもよいC_7-20アラールキル基、代謝的に不安定なＳ−保護基を表し、 R⁹は水素またはメチル基であり、 R¹⁰はヒドロキシまたは置換もしくは非置換アミノ基、アミノ酸グルタミンもしくはＮ−末端グルタミン単位を有するペプチドの残基である）、およびその塩を表す〕によって表されるペプチドである請求項１〜５のいずれかに記載のペプチド化合物。７．式Ｉのペプチド鎖において、ｎは０である請求項６に記載のペプチド化合物。８．式Ｉのペプチド鎖において、ｍは０である請求項６に記載のペプチド化合物。９．基-Aは式Ｉのアミノ酸R^dのＣα原子に結合している請求項６〜８のいずれかに記載のペプチド化合物。 10.式II （式中、Ａは請求項１〜５のいずれかにおいて定義された通りであり、R^a、R^b、 R^C、R^d、R^e、R^f、およびｎは請求項６において定義した通りである）の請求項６〜８のいずれかに記載のペプチド化合物。 11.式（式中、基-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）の請求項１〜10 のいずれかに記載のペプチド化合物。 12.請求項１〜11のいずれかに記載の化合物のアミノ保護、ヒドロキシル保護、チオール保護および／またはカルボキシル保護誘導体。 13.請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物と医薬用担体または賦形剤からなる医薬組成物。 14.細胞分裂の阻害に使用するための請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物。 15.骨髄造血または骨髄再生の阻害に使用するための請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物。 16.細胞分裂の阻害用の医薬の製造における請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物の使用。 17.骨髄造血または骨髄再生の阻害用の医薬の製造における請求項15に記載の使用。 18.細胞分裂の阻害のための請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物の使用。 19．骨髄造血または骨髄再生の阻害のための請求項18に記載の使用。 20.請求項１〜11のいずれかに記載の化合物の有効量を患者に投与することからなる、患者における細胞分裂の阻害方法。 21.骨髄造血または骨髄細胞の分裂を阻害する請求項20に記載の方法。 22.請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物の製造方法において、その部分的にまたは完全に保護された誘導体を脱保護することからなる方法。 23.請求項１〜11のいずれかに記載のペプチド化合物の製造方法において、 a)ビス−ラクチムエーテルを金属化し、ついでアルキル化して、ビス−ラクチムジペプチドエーテルを形成させ、 b)工程(a)のビス−ラクチムジペプチドエーテルを加水分解して式NH₂-CH(A)-C OOH（式中、Ａは上に定義した通りである）のアミノ酸を形成させ、 c)ペプチド鎖中の残余のアミノ酸を導入し、ついで d)保護基を脱保護することからなる方法。 24.式（式中、-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）のアミノ酸誘導体。 25.式（式中、-Aは請求項１〜５のいずれかに定義した通りである）のラクチムジペプチドエーテル。