JPH09124472A

JPH09124472A - コラゲナーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH09124472A
Application number: JP7303897A
Authority: JP
Inventors: Sachiko Sakaki; 幸子榊; Hitoshi Masaki; 仁正木
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 1995-10-27
Filing date: 1995-10-27
Publication date: 1997-05-13
Anticipated expiration: 2015-10-27
Also published as: JP3854326B2

Abstract

(57)【要約】【課題】高いコラゲナーゼ阻害活性を示し、しかも副
作用がなく安全で、さらに種々の製剤基剤中での安定性
の高いコラゲナーゼ阻害剤を得る。【解決手段】ジカルボン酸の１種又は２種以上を基剤
に配合する。ジカルボン酸としては、炭素数５〜２２の
飽和二塩基酸が好ましい。さらに金属キレート剤の１種
又は２種以上を併用すると、コラゲナーゼ阻害作用を相
乗的に強化することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が属する技術分野】本発明は、結合組織の構成タ
ンパク質であるコラーゲンを特異的に切断し、皮膚の老
化，骨粗しょう症等の代謝性疾患，炎症性疾患，リュー
マチ関節炎，骨関節炎等の関節性疾患などの緩和，治療
に副作用なく安全に使用し得るコラゲナーゼ阻害剤に関
する。さらに詳しくは、ジカルボン酸或いはこれと金属
キレート剤を含有して成るコラゲナーゼ阻害剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】コラーゲンは動物の結合組織を構成する
主要タンパク質であり、種々の組織においてＩ型〜ＸII
I型の１３種類の存在が知られている。コラゲナーゼ
は、かかるコラーゲンタンパク質を特異的に切断する酵
素であり、加齢や紫外線による皮膚のしわの発生や粘弾
性の低下、骨粗しょう症等の代謝性疾患、表皮水疱症，
角膜潰瘍，歯根病等の炎症性疾患、リューマチ関節炎，
骨関節炎等の関節性疾患など、実に幅広く多くの疾患に
関与する。

【０００３】従って、コラゲナーゼ活性を阻害すること
により、上記のような疾患を緩和或いは治療する試みが
多くなされており、コラゲナーゼ阻害剤として、羊膜由
来物質（特開平６−３４５６３６），ソバ殻タンパク質
抽出物（国際公開９４２０５４１），ケイガイ，ハッカ
抽出物（特開平６−１８３９９０），水溶性糖誘導体
（特開平６−１８３９４１），ラクトフェリン（特開平
５−１８６３６８），コーヒー酸又はその塩（特開平５
−１１７１４５），アスコルビン酸，エリソルビン酸及
びこれらの塩の混合物（特開平４−２９０８１９），ア
セチルポリアミド（フランス国特許２６６９６２９），
ガロタンニン（特開平４−６６５２４），κ-カゼイン
（特開平４−４１４１７），カカオ殻の抽出物（特開平
３−４４３３１），ヒドロキサム酸テトラペプチド（特
開平１−１６０９９７），1,3-ビス-置換-ナフチルアミ
ノカルボニルフェニル尿素誘導体（特公昭６３−８１０
１）などが開示されている。

【０００４】また、コラゲナーゼは金属プロテアーゼで
あるため、ディフェロキサミン（deferoxamine），エチ
レンディアミン四酢酸（ethylenediamine tetraacetic
acid，ＥＤＴＡ）塩，酒石酸，クエン酸等の金属キレー
ト剤もコラゲナーゼ阻害剤として用いられる。

【０００５】しかしながら、少量で高い阻害活性を示
し、しかも副作用が少なくさらに安定性の高いコラゲナ
ーゼ阻害剤としては、いまだに満足なものが得られてい
ないのが現状である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は少量
の適用で高いコラゲナーゼ阻害活性を示し、しかも副作
用がなく安全で、さらに種々の製剤基剤中で安定性が高
く、いろいろな剤型の医薬品や化粧料等に応用すること
のできるコラゲナーゼ活性阻害剤を得ることを目的とす
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
め、種々の物質のコラゲナーゼ阻害活性をスクリーニン
グした結果、ジカルボン酸類がやはり金属キレート作用
を有し、しかも生体に対する作用が穏和で副作用がほと
んどなく、また種々の形態の基剤中で安定であることを
見い出し、本発明を完成するに至った。

【０００８】本発明においては、ジカルボン酸より１種
又は２種以上を選択して基剤に配合する。ジカルボン酸
としては、グルタル酸，アジピン酸，ピメリン酸，スベ
リン酸，アゼライン酸，セバシン酸，1,9-ノナメチレン
ジカルボン酸，1,10-デカメチレンジカルボン酸の炭素
数５〜１２の飽和二塩基酸が特に好ましい。配合量とし
ては、製剤全量に対して０．０１重量％〜１０．０重量
％程度が適当である。

【０００９】また、ジカルボン酸の１種又は２種以上に
加えて金属キレート剤の１種又は２種以上を併用する
と、コラゲナーゼ阻害活性が相乗的に増強される。金属
キレート剤としては、ディフェロキサミン（deferoxami
ne），エチレンジアミン四酢酸（ethylenediamine tetr
aacetic acid，ＥＤＴＡ）のナトリウム塩，リン酸，ク
エン酸，アスコルビン酸，コハク酸，グルコン酸，ポリ
リン酸ナトリウム，メタリン酸ナトリウム等が挙げら
れ、これらより１種又は２種以上を選択して配合する。

【００１０】

【作用】本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、少量の添加で
優れたコラゲナーゼ阻害作用を示し、且つ生体に対する
作用が穏和で、製剤中における安定性にも優れる。その
結果、本発明のコラゲナーゼ阻害剤の適用により、加齢
や紫外線による皮膚のしわの発生や粘弾性の低下、骨粗
しょう症等の代謝性疾患、表皮水疱症，角膜潰瘍，歯根
病等の炎症性疾患、リューマチ関節炎，骨関節炎等の関
節性疾患などを緩和或いは治療することができ、また、
創傷の治癒をも促進する。

【００１１】一例として、アゼライン酸のコラゲナーゼ
阻害作用について以下に示す。コラゲナーゼを最終濃度
で０〜１５μg/ml含む水溶液に、アゼライン酸を最終濃
度が８mM及び１６mMとなるように加え、次いでフルオレ
セインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識を行ったコ
ラーゲンを最終濃度４０μg/mlとなるように加えて、３
７℃で１時間インキュベーションした。エタノール添加
により酵素反応を停止させた後、未反応のＦＩＴＣ標識
コラーゲンを除去するため遠心分離を行い、上清中の蛍
光強度を励起波長４９５nm，蛍光波長５２０nmで測定し
た。アゼライン酸を含まない溶媒のみを添加した系につ
いても同様に蛍光強度を測定し、対照とした。結果は表
１に示す。

【００１２】

【表１】表１には、式（１）により求めたコラゲナーゼ阻害率を
併記した。これより、アゼライン酸はコラゲナーゼによ
るＦＩＴＣの遊離に対して、８mMで４８〜５８％程度、
１６mMで２８〜３１％程度まで抑制することが示され
た。すなわち、コラゲナーゼ阻害率はアゼライン酸の濃
度に依存して増加し、８mMで４１．５〜５２．３、１６
mMで６８．９〜７１．８％となった。

【数１】

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明に係るコラゲナーゼ阻害剤
は、粉末状，水性懸濁液，アルコール等の極性有機溶媒
を含む水性基剤に可溶化した形態或いは乳剤の形態で提
供でき、食品，飲料，医薬品，化粧料等に添加，配合し
て用いることができる。食品においては、油脂製品や乳
化製品、清涼飲料等に添加することができる。医薬品で
は、経口製剤，注射剤，皮膚外用剤等への添加が考えら
れる。化粧料としては、化粧水，乳液，クリーム等の
他、洗口剤など口腔用組成物への添加も可能である。

【００１４】

【実施例】さらに本発明の特徴について、実施例により
詳細に説明する。まず、本発明の実施例１〜実施例３と
して、含エタノール水性製剤タイプのコラゲナーゼ阻害
剤について表２に示す。表２中、ジカルボン酸をエタノ
ールに溶解し、キレート剤を溶解した精製水と混合，可
溶化して調製する。

【表２】

【００１５】表３には、乳剤タイプのコラゲナーゼ阻害
剤である実施例４〜実施例６の処方を示した。表３中、
油相にジカルボン酸を添加して７５℃に加熱して溶解，
均一化する。一方、水相にキレート剤を添加して加熱，
溶解して７５℃に保ち、これに前記油相成分を徐々に添
加して乳化した後、冷却して調製する。

【表３】

【００１６】表４には、クリームタイプのコラゲナーゼ
阻害剤である実施例７〜実施例９の処方を示した。表４
中、油相にジカルボン酸を添加して７５℃に加熱して溶
解，均一化する。一方、水相にキレート剤を添加して加
熱，溶解して７５℃に保ち、これに前記油相成分を徐々
に添加して乳化した後、冷却して調製する。

【表４】

【００１７】上記の本発明の実施例について、炎症性潰
瘍に対する治癒効果を評価した。マウス５匹を１群と
し、背部に界面活性剤処理により炎症性潰瘍を生じさせ
た。この部位に試料を１日２回０．５gずつ７日間塗布
し、７日後の潰瘍の治癒状況を観察した。治癒状況は
「完全治癒」，「ほぼ治癒」，「治癒不完全」の３段階
にて評価し、各評価を得たマウスの数を示した。なお、
表２〜表４において、ジカルボン酸をガロタンニンに、
キレート剤としてアスコルビン酸を用いたものをそれぞ
れ比較例１〜比較例３とした。

【００１８】また、製剤を２５℃で３カ月間保存した際
の安定性及び皮膚刺激性についても評価した。保存安定
性は「○；状態の変化は認められない」，「△；変退色
或いは成分の分離が若干認められる」，「×；変退色或
いは成分の分離が顕著に認められる」として評価し、皮
膚刺激性は男性パネラー２０名による４８時間閉塞貼付
試験により、表５に示す判定基準に従って皮膚刺激指数
を求め、２０名の平均値を算出して評価した。以上の結
果は表６にまとめて示した。

【表５】

【００１９】

【表６】表６より、本発明の実施例塗布群においては、いずれも
皮膚潰瘍の治癒傾向が認められ、治癒が不完全なマウス
は見られなかった。特に実施例８及び実施例９塗布群で
良好な治癒を認めた。これに対し、比較例塗布群では完
全治癒を認めたマウスはなく、ほぼ半数のマウスにおい
て治癒が不完全であった。

【００２０】また、本発明の実施例については、３カ月
経過後においても、いずれも製剤の状態に変化は認めら
れなかった。これに対して、比較例ではすべてに変色が
認められた。皮膚刺激性についても、エタノールを５０
重量％配合する実施例１〜実施例３で若干皮膚刺激指数
は高くなっているが、それでも実用的には全く問題のな
い程度であった。一方、比較例ではいずれも各実施例に
比べて皮膚刺激指数は有意に高い結果となった。

【００２１】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明により、安
定性及び安全性に優れ、良好な阻害活性を有するコラゲ
ナーゼ阻害剤を提供することができた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ジカルボン酸の１種又は２種以上を含有
して成るコラゲナーゼ阻害剤。
【請求項２】ジカルボン酸の１種又は２種以上と、金
属キレート剤の１種又は２種以上とを含有して成るコラ
ゲナーゼ阻害剤。
【請求項３】ジカルボン酸が、炭素数５〜炭素数１２
の飽和二塩基酸であることを特徴とする、請求項１又は
請求項２に記載のコラゲナーゼ阻害剤。