JPH0912477A - 新規物質ｄｑ９０ａ、その製造方法及び該ｄｑ９０ａを含有する蛋白質分解酵素阻害剤 - Google Patents
新規物質ｄｑ９０ａ、その製造方法及び該ｄｑ９０ａを含有する蛋白質分解酵素阻害剤Info
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- JPH0912477A JPH0912477A JP7166033A JP16603395A JPH0912477A JP H0912477 A JPH0912477 A JP H0912477A JP 7166033 A JP7166033 A JP 7166033A JP 16603395 A JP16603395 A JP 16603395A JP H0912477 A JPH0912477 A JP H0912477A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 蛋白質分解酵素阻害活性を有する新規な化合
物を提供する。 【構成】 式（Ｉ）で示される新規物質ＤＱ９０Ａ，そ
の製造方法ならびに当該物質を有効成分とする蛋白質分
解酵素阻害剤。
物を提供する。 【構成】 式（Ｉ）で示される新規物質ＤＱ９０Ａ，そ
の製造方法ならびに当該物質を有効成分とする蛋白質分
解酵素阻害剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規物質ＤＱ９０Ａ、
その製造方法及びＤＱ９０Ａを有効成分とする蛋白質分
解酵素阻害剤に関する。
その製造方法及びＤＱ９０Ａを有効成分とする蛋白質分
解酵素阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】蛋白質分解酵素阻害剤に関しては、すで
に多数のものが研究用試薬や、抗炎剤として知られてい
る。例えば、ロイペプチンアナログのＡｃ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｎｌｅ−ａｌが、Saito ら、Neuroscience Lette
rs、８９巻、１０２頁（１９８８）に記載されている。
又、チロスタチン(tyrostatin)が Odaら、Agric. Biol.
Chem.、５３巻、４０５頁（１９８９）］に開示されて
いる。しかしながら、研究上の様々な問題を解決する上
では、蛋白質分解酵素阻害活性を有する新規な化合物の
出現が常に要望されている。
に多数のものが研究用試薬や、抗炎剤として知られてい
る。例えば、ロイペプチンアナログのＡｃ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｎｌｅ−ａｌが、Saito ら、Neuroscience Lette
rs、８９巻、１０２頁（１９８８）に記載されている。
又、チロスタチン(tyrostatin)が Odaら、Agric. Biol.
Chem.、５３巻、４０５頁（１９８９）］に開示されて
いる。しかしながら、研究上の様々な問題を解決する上
では、蛋白質分解酵素阻害活性を有する新規な化合物の
出現が常に要望されている。
【発明が解決しようとする課題】本発明は、蛋白質分解
酵素阻害活性を有する新規な化合物を提供することを目
的とする。
酵素阻害活性を有する新規な化合物を提供することを目
的とする。
【課題を解決するための手段】本発明者等は、ストレプ
スミセス属に属する１菌株の培養液中から蛋白質分解酵
素阻害活性を有する新規物質ＤＱ９０Ａを単離し、本発
明を完成した。本発明は、式（Ｉ）で示される新規物質
ＤＱ９０Ａを提供する。
スミセス属に属する１菌株の培養液中から蛋白質分解酵
素阻害活性を有する新規物質ＤＱ９０Ａを単離し、本発
明を完成した。本発明は、式（Ｉ）で示される新規物質
ＤＱ９０Ａを提供する。
【０００３】
【化２】
【０００４】本発明は、又、上記化合物ＤＱ９０Ａを有
効成分とする蛋白質分解酵素阻害剤を提供する。本発明
は、又、ストレプトミセス属に属するＤＱ９０Ａ物質生
産菌を培養し、培養物からＤＱ９０Ａ物質を採取するこ
とを特徴とするＤＱ９０Ａ物質の製造方法を提供する。
本発明のＤＱ９０Ａ物質生産菌としては、ストレプトミ
セス属に属し、ＤＱ９０Ａ物質生産能を有するものであ
ればいずれでも使用できる。具体的には、ストレプトミ
セス ハルステデイ（Streptmyces halstedii ）２７２
３−ＳＶ２株（以下「ＤＱ−９０株」という）が有利に
使用できる。ＤＱ−９０株 ＤＱ９０Ａ物質生産能を有するストレプトミセス属の菌
株として本発明者等の見い出しているＤＱ−９０株は下
記の内容のものである。
効成分とする蛋白質分解酵素阻害剤を提供する。本発明
は、又、ストレプトミセス属に属するＤＱ９０Ａ物質生
産菌を培養し、培養物からＤＱ９０Ａ物質を採取するこ
とを特徴とするＤＱ９０Ａ物質の製造方法を提供する。
本発明のＤＱ９０Ａ物質生産菌としては、ストレプトミ
セス属に属し、ＤＱ９０Ａ物質生産能を有するものであ
ればいずれでも使用できる。具体的には、ストレプトミ
セス ハルステデイ（Streptmyces halstedii ）２７２
３−ＳＶ２株（以下「ＤＱ−９０株」という）が有利に
使用できる。ＤＱ−９０株 ＤＱ９０Ａ物質生産能を有するストレプトミセス属の菌
株として本発明者等の見い出しているＤＱ−９０株は下
記の内容のものである。
【０００５】１）由来及び寄託番号 ＤＱ−９０株は、静岡県箱根峠で採取した土壌試料より
分離された放線菌であり、平成７年６月１３日に工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されて「微工研寄託第
５１３５号」（ＦＥＲＭ ＢＰ−５１３５）の番号を得
ている ２）菌学的性状 ＤＱ−９０株の菌学的性状は以下の通りである。放線菌
ＤＱ−９０株の特徴づけは、「特許庁産業別審査基準」
の記載方法に従って行なった。本菌株の基生菌糸は分断
しない。気菌糸は主軸を形成し、それより不規則に分枝
した先端に、１０〜５０個又はそれ以上からなる直状又
は曲状の胞子鎖を形成する。この胞子鎖は鳥の巣状（ne
st-like ）の密集塊を形成する。胞子は非運動性で、円
柱形あるいは長楕円形を呈し、幅0.３〜0.５μｍ、長さ
1.０〜1.２μｍで、胞子表面は平滑である。菌核、胞子
のう、その他の特殊形態は観察されない。細胞壁化学型
はＩ型で、ＬＬジアミノピメリン酸を含んでいる。培養
性状を表１に示す。集落表面の菌叢色は灰色系列に属す
る。裏面色は不鮮明色を呈し、ｐＨで変化しない。拡散
性色素は淡橙色から明茶味灰色が認められた。
分離された放線菌であり、平成７年６月１３日に工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されて「微工研寄託第
５１３５号」（ＦＥＲＭ ＢＰ−５１３５）の番号を得
ている ２）菌学的性状 ＤＱ−９０株の菌学的性状は以下の通りである。放線菌
ＤＱ−９０株の特徴づけは、「特許庁産業別審査基準」
の記載方法に従って行なった。本菌株の基生菌糸は分断
しない。気菌糸は主軸を形成し、それより不規則に分枝
した先端に、１０〜５０個又はそれ以上からなる直状又
は曲状の胞子鎖を形成する。この胞子鎖は鳥の巣状（ne
st-like ）の密集塊を形成する。胞子は非運動性で、円
柱形あるいは長楕円形を呈し、幅0.３〜0.５μｍ、長さ
1.０〜1.２μｍで、胞子表面は平滑である。菌核、胞子
のう、その他の特殊形態は観察されない。細胞壁化学型
はＩ型で、ＬＬジアミノピメリン酸を含んでいる。培養
性状を表１に示す。集落表面の菌叢色は灰色系列に属す
る。裏面色は不鮮明色を呈し、ｐＨで変化しない。拡散
性色素は淡橙色から明茶味灰色が認められた。
【０００６】
【表１】 表１ 培養性状 培地 集落表面の菌叢色 集落の裏面色 拡散性色素 シュクロース・ 気菌糸なし 明茶味灰色 なし硝酸塩寒天 （３ec） グルコース・アス 灰色系列 明茶色 淡橙色パラギン寒天 （２fe） （４le〜４ni） （４ea) グリセリン・アス 灰色系列 明茶味灰色 明茶味灰色パラギン寒天 （２fe） （４ge） （４ec） 無機塩・スターチ寒天 灰色系列 明茶味灰色 なし （５fe） （４ge） チロシン寒天 灰色系列 淡黄味茶色 なし （ｃ〜ｄ） （３gc〜３le） 栄養寒天 気菌糸なし 淡黄色 なし （２db） イースト・麦芽寒天 灰色系列 赤味茶色 淡茶色 （５fe） （６le〜６li) （４gc） オートミール寒天 灰色系列 明茶色から茶色 明茶味灰色 （５fe） （４lg〜４ni) （５ec） ＊（ ）内はカラー・ハーモニー・マニユアル（コンテナー・コポレーション ・オブ・アメリカ、1950）の色標コード。 生理的性状を表２に示す。本菌株は、中温性で炭素源の
同化能はグルコース、アラビノース、キシロース、フラ
クトースを利用する。本菌株の形態的性状と細胞壁化学
型から、ストレプトミセス（ Streptmyces、以後Ｓ．と
略す。）属に位置する。
同化能はグルコース、アラビノース、キシロース、フラ
クトースを利用する。本菌株の形態的性状と細胞壁化学
型から、ストレプトミセス（ Streptmyces、以後Ｓ．と
略す。）属に位置する。
【０００７】
【表２】 表２ 生理的性状 生育温度範囲 ２０〜３７℃ 最適温度 ２０〜３０℃ メラニン様色素 チロシン寒天 − ペプトン・イースト鉄寒天 ± トリプトン・イースト・ブロス − スターチの加水分解 ＋ ゼラチンの液化 − 脱脂粉乳のペプトン化 − 脱脂粉乳の凝固 ＋ 硝酸塩の還元 ＋ 炭素源の同化 Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ シュクロース ＋ Ｌ−ラムノース − ラフィノース − ｉ−イノシトール − Ｄ−マンニット −
【０００８】上述の諸性状を基に「細菌名承認リスト、
１９８０」およびそれ以後の有効名リストに記載された
Ｓ．属の種について検索し、近縁種を選出した。Ｓ．ニ
グリファシエンス（S. nigrifaciens ）の診断的性状を
選択すると本菌株とＳ．ニグリファシエンス（S.nigrif
aciens）の性状は炭素源の同化能に僅かな違いがある
が、その他はよく一致している（表３）。しかしながら
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.
4 において、 Williams 等はＳ．ニグリファシエンスを
Ｓ．ハルステデイ（S.halstedii ) の異名（シノニム）
としている。従って本菌株２７２３−ＳＶ２は、ストレ
プトミセス ハルステデイ（Streptmyceshalstedii ）
２７２３−ＳＶ２株と称する。
１９８０」およびそれ以後の有効名リストに記載された
Ｓ．属の種について検索し、近縁種を選出した。Ｓ．ニ
グリファシエンス（S. nigrifaciens ）の診断的性状を
選択すると本菌株とＳ．ニグリファシエンス（S.nigrif
aciens）の性状は炭素源の同化能に僅かな違いがある
が、その他はよく一致している（表３）。しかしながら
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.
4 において、 Williams 等はＳ．ニグリファシエンスを
Ｓ．ハルステデイ（S.halstedii ) の異名（シノニム）
としている。従って本菌株２７２３−ＳＶ２は、ストレ
プトミセス ハルステデイ（Streptmyceshalstedii ）
２７２３−ＳＶ２株と称する。
【０００９】
【表３】 表３ 本菌株と近縁種との比較 本菌株 ストレプトミセス ストプトミセス 2732−SV2 ニグリファシエンス ハルステディ 胞子鎖形態 直・曲状 ＋ ＋ ＋ 胞子表面 平滑 ＋ ＋ ＋ 菌叢色 灰色 ＋ ＋ ＋ 裏面色 不鮮明色 ＋ ＋ ＋ ｐＨ感受性 − − − 拡散性色素産生 ＋ ＋ − ｐＨ感受性 − − − メラニン色素産生 − − − スターチの加水分解 ＋ ＋ ＋ 硝酸塩の還元 ＋ ＋ ＋ 生育温度 ｌ０℃ − − − ３７℃ ＋ ＋ ＋ ４５℃ − − − 炭素源の同化 アラビノース ＋ ＋ ＋ キシロース ＋ ＋ ＋ イノシトール − − − マンニット − ＋ − ラムノース − − − ラフィノース − − − シュクロース ＋ − −
【００１０】ＤＱ９０Ａ物質生産菌の培養法 ＤＱ９０Ａ物質は、ストレプトミセス属に属するＤＱ９
０Ａ物質生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養物
から目的物を分離・精製することによって製造すること
ができる。培地は、通常の微生物が利用しうる栄養物を
含有する物である。栄養源としては、従来放線菌の培養
に利用されている公知のものが使用できる。具体的に
は、炭素源としてはグルコース、水飴、デキストリン、
澱粉、糖蜜、油脂類などが使用できる。また、窒素源と
しては大豆粉、小麦胚芽、綿実粕、コーンスティプリカ
ー、肉エキス、ペプトン、酵母エキスなどの有機物なら
びに硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、などの無機
物が使用できる。その他必要に応じて、ナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、
燐酸、硫酸及びその他のイオンを生成することができる
無機塩類を添加することができる。また、菌の発育を助
け、ＤＱ９０Ａ物質の生産を促進するような有機および
無機物を適当に添加することができる。
０Ａ物質生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養物
から目的物を分離・精製することによって製造すること
ができる。培地は、通常の微生物が利用しうる栄養物を
含有する物である。栄養源としては、従来放線菌の培養
に利用されている公知のものが使用できる。具体的に
は、炭素源としてはグルコース、水飴、デキストリン、
澱粉、糖蜜、油脂類などが使用できる。また、窒素源と
しては大豆粉、小麦胚芽、綿実粕、コーンスティプリカ
ー、肉エキス、ペプトン、酵母エキスなどの有機物なら
びに硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、などの無機
物が使用できる。その他必要に応じて、ナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、
燐酸、硫酸及びその他のイオンを生成することができる
無機塩類を添加することができる。また、菌の発育を助
け、ＤＱ９０Ａ物質の生産を促進するような有機および
無機物を適当に添加することができる。
【００１１】培養方法としては、一般に行なわれている
抗生物質の生産方法と同じく、好気的液体培養法が最も
適している。培養に適当な温度は、２０〜３０℃である
が、多くの場合２７℃付近で培養する。ＤＱ９０Ａ物質
の生産は培地や培養温度により異なるが、液体培養にお
いては通常１〜３日間でその蓄積が最高に達する。この
ようにしてＤＱ９０Ａ物質が蓄積した培養物から目的物
質を単離精製する。ＤＱ９０Ａ物質の精製方法 本発明によって得られるＤＱ９０Ａ物質の培養物からの
採取に当たっては、その性状を利用した通常の分離手
段、例えば濾過、遠心分離、透析、濃縮、乾燥、凍結、
吸着、脱着、各種有機溶媒に対する溶解度の差を利用す
る方法、クロマトグラフィー等の手段を、単独でまたは
適宜組み合わせて抽出精製することができる。例えば、
合成吸着剤ＨＰ−２０（三菱化学社製）、ＯＤＳカラム
クロマトグラフィーやＭＰＬＣ、ＨＰＬＣを適宜組み合
わせて実施することができる。このようにして得られた
ＤＱ９０Ａ物質は下記の物理化学的性状を有するもので
あり、各種スペクトルデータの解析の結果、前記式
（Ｉ）で示される化学構造を有することがわかった。
抗生物質の生産方法と同じく、好気的液体培養法が最も
適している。培養に適当な温度は、２０〜３０℃である
が、多くの場合２７℃付近で培養する。ＤＱ９０Ａ物質
の生産は培地や培養温度により異なるが、液体培養にお
いては通常１〜３日間でその蓄積が最高に達する。この
ようにしてＤＱ９０Ａ物質が蓄積した培養物から目的物
質を単離精製する。ＤＱ９０Ａ物質の精製方法 本発明によって得られるＤＱ９０Ａ物質の培養物からの
採取に当たっては、その性状を利用した通常の分離手
段、例えば濾過、遠心分離、透析、濃縮、乾燥、凍結、
吸着、脱着、各種有機溶媒に対する溶解度の差を利用す
る方法、クロマトグラフィー等の手段を、単独でまたは
適宜組み合わせて抽出精製することができる。例えば、
合成吸着剤ＨＰ−２０（三菱化学社製）、ＯＤＳカラム
クロマトグラフィーやＭＰＬＣ、ＨＰＬＣを適宜組み合
わせて実施することができる。このようにして得られた
ＤＱ９０Ａ物質は下記の物理化学的性状を有するもので
あり、各種スペクトルデータの解析の結果、前記式
（Ｉ）で示される化学構造を有することがわかった。
【００１２】 物理化学的性状 （１）外観 ：白色粉末 （２）融点 ：２１５〜２１７℃（分解） （３）分子式 ：Ｃ28Ｈ39Ｎ3 Ｏ5 （４）高分解能マススペクトル（ｍ／ｚ） ：４９8.２９４２（Ｍ＋Ｈ）+ 実測値 ：４９8.２９７０ 計算値 （５）比旋光度 ：−２8.６。（ｃ＝0.０２８、メタノール） （６）溶解性 ：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、 水、クロロホルムに不溶である。 （７）紫外吸収スペクトル λ max nm （メタノール中） ：２５９（１２００），２６９（１７００）， ２７９（１７００）
【００１３】 （８）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法） 図１に示す。 ：３２６９，２９６０〜２８７０，１６３３， １５４０〜１４４０，１３８７， １２２３（cm-1） （９） 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，重ジメチルスルホキシド） 図２に示す。 （10）13Ｃ ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，重ジメチルスルホキシド） 図３に示す。
【００１４】ＤＱ９０Ａ物質の生物活性 本発明によるＤＱ９０Ａ物質の蛋白質分解酵素パパイン
に対する阻害作用について述べる。ここでは、パパイン
の合成基質ＢＡＮＡ（α−Ｎ−benzoil −DL−arginine
−β−naphtylamide hydrochroride) 加水分解反応の阻
害で評価した。 〔試薬〕 ａ）緩衝液（使用時調製） ３2.４ｍｇ Ｌ−システイン／１００ｍｌ * ＥＤＴＡ
リン酸緩衝液（ｐＨ 6.０）* ＥＤＴＡリン酸緩衝液（ｐＨ 6.０） 0.４９５ｇ Ｎａ2 ＥＤＴＡ １2.０ ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 2.１４ ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ／ｄＨ2 Ｏ １
０００ｍｌ ｂ）基質 ４０ｍｇ ＢＡＮＡ／１ｍｌ ＤＭＳＯ（ジメチルスル
フォキシド）
に対する阻害作用について述べる。ここでは、パパイン
の合成基質ＢＡＮＡ（α−Ｎ−benzoil −DL−arginine
−β−naphtylamide hydrochroride) 加水分解反応の阻
害で評価した。 〔試薬〕 ａ）緩衝液（使用時調製） ３2.４ｍｇ Ｌ−システイン／１００ｍｌ * ＥＤＴＡ
リン酸緩衝液（ｐＨ 6.０）* ＥＤＴＡリン酸緩衝液（ｐＨ 6.０） 0.４９５ｇ Ｎａ2 ＥＤＴＡ １2.０ ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 2.１４ ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ／ｄＨ2 Ｏ １
０００ｍｌ ｂ）基質 ４０ｍｇ ＢＡＮＡ／１ｍｌ ＤＭＳＯ（ジメチルスル
フォキシド）
【００１５】ｃ）カップリング試薬（（Ｉ）、（II）を
等量混合し３０分以内に使用） （Ｉ）１０ｍＭ ＰＣＭＢ（パラクロロ安息香酸第２水
銀）／５０ｍＭ ＥＤＴＡ 2.４０ｇ ＮａＯＨ １8.６ｇ Ｎａ2 ＥＤＴＡ 3.５７ｇ ＰＣＭＢ ９５０ｍｌ ｄＨ2 Ｏ ＨＣｌでｐＨ 6.０に調整し、ｄＨ2 Ｏで１０００ｍｌ
とする。 （II) 0.５ｍｇ FAST GARNET GBC/1ml ４％ Twee
n ２０ ｄ）酵素液 パパイン（３０００Ｕ／ｍｇ）を 0.０１％ ＢＳＡ
（牛血清アルブミン）で希釈する。（希釈は、標準反応
液の５２０ｎｍにおける吸光度が約1.５となるようにし
た） 〔方法〕酵素液（ｄ）、緩衝液（ａ）、サンプルを混合
し、４０℃でプレインキューベーションする。（全量で
２ｍｌ）これに、基質（ｂ）を加えて混合し、４０℃で
１０分間反応させた。１０分後にカップリング試薬
（ｃ）２ｍｌを加えて反応を停止させ、１０分放置後に
分光光度計で５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。な
お、活性は標準に対する阻害により判定した。
等量混合し３０分以内に使用） （Ｉ）１０ｍＭ ＰＣＭＢ（パラクロロ安息香酸第２水
銀）／５０ｍＭ ＥＤＴＡ 2.４０ｇ ＮａＯＨ １8.６ｇ Ｎａ2 ＥＤＴＡ 3.５７ｇ ＰＣＭＢ ９５０ｍｌ ｄＨ2 Ｏ ＨＣｌでｐＨ 6.０に調整し、ｄＨ2 Ｏで１０００ｍｌ
とする。 （II) 0.５ｍｇ FAST GARNET GBC/1ml ４％ Twee
n ２０ ｄ）酵素液 パパイン（３０００Ｕ／ｍｇ）を 0.０１％ ＢＳＡ
（牛血清アルブミン）で希釈する。（希釈は、標準反応
液の５２０ｎｍにおける吸光度が約1.５となるようにし
た） 〔方法〕酵素液（ｄ）、緩衝液（ａ）、サンプルを混合
し、４０℃でプレインキューベーションする。（全量で
２ｍｌ）これに、基質（ｂ）を加えて混合し、４０℃で
１０分間反応させた。１０分後にカップリング試薬
（ｃ）２ｍｌを加えて反応を停止させ、１０分放置後に
分光光度計で５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。な
お、活性は標準に対する阻害により判定した。
【００１６】
【表４】 〔反応系〕 ──────────────────────────── ブランク 標 準 テスト 酵素 − 0.５ｍｌ 0.５ｍｌ 緩衝液 1.９ｍｌ 1.４ｍｌ 1.４ｍｌ メタノール 0.１ｍｌ 0.１ｍｌ − サンプル − − 0.１ｍｌ 基質 ５０μｌ ５０μｌ ５０μｌ サンプル：（ＤＱ９０Ａ物質のメタノール溶液） その結果、ＤＱ９０Ａ物質の蛋白質分解酵素パパインに
対する５０％活性阻害濃度（ＩＣ50値）は、0.１μｇ／
ｍｌであった。このように、本発明のＤＱ９０Ａ物質は
蛋白質分解酵素パパインに対する阻害作用を有すること
から、研究用試薬としての利用や、他にも抗炎剤として
の利用の可能性も考えられる。
対する５０％活性阻害濃度（ＩＣ50値）は、0.１μｇ／
ｍｌであった。このように、本発明のＤＱ９０Ａ物質は
蛋白質分解酵素パパインに対する阻害作用を有すること
から、研究用試薬としての利用や、他にも抗炎剤として
の利用の可能性も考えられる。
【００１７】
【発明の効果】本発明によれば、蛋白質分解酵素パパイ
ンに対する阻害作用を有し、研究用試薬や抗炎剤として
有用な新規化合物ＤＱ９０Ａを提供することができた。
次ぎに実施例により本発明を説明する。
ンに対する阻害作用を有し、研究用試薬や抗炎剤として
有用な新規化合物ＤＱ９０Ａを提供することができた。
次ぎに実施例により本発明を説明する。
【００１８】
【実施例】実施例 １ １）種母１の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解してｐＨ７２に調整したものである。 可溶性澱粉 １0.０ｇ モラセス １0.０ｇ ポリペプトン １0.０ｇ 肉エキス １0.０ｇ 上記培地１５ｍｌを大試験管に分注し、殺菌後、ストレ
プトミセス ハルステデイ ２７２３−ＳＶ２株（以下
ＤＱ−９０株）をスラントより１白金耳接種し、２７℃
にて１日間振とう培養したものを種母１とした。
溶解してｐＨ７２に調整したものである。 可溶性澱粉 １0.０ｇ モラセス １0.０ｇ ポリペプトン １0.０ｇ 肉エキス １0.０ｇ 上記培地１５ｍｌを大試験管に分注し、殺菌後、ストレ
プトミセス ハルステデイ ２７２３−ＳＶ２株（以下
ＤＱ−９０株）をスラントより１白金耳接種し、２７℃
にて１日間振とう培養したものを種母１とした。
【００１９】２）種母２の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解してｐＨ7.０に調整したものである。 グリセリン ２0.０ｇ モラセス １0.０ｇ カゼイン 5.０ｇ ポリペプトン 1.０ｇ 炭酸カルシウム 4.０ｇ 上記培地１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコ（７
本）に分注し、殺菌後、これに前記種母１（各１ｍｌ）
を接種し、２７℃にて１日間振とう培養した。 ３）培養 使用した培地は、２）で示したものである。この培地２
７リットルを５０リットル容ジャーファーメンターに入
れ、殺菌後、これに前記種母２（全７本）を接種し、攪
拌速度２００ｒｐｍ．通気量３０リットル／分条件下で
２７℃にて１日間通気撹拌培養した。
溶解してｐＨ7.０に調整したものである。 グリセリン ２0.０ｇ モラセス １0.０ｇ カゼイン 5.０ｇ ポリペプトン 1.０ｇ 炭酸カルシウム 4.０ｇ 上記培地１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコ（７
本）に分注し、殺菌後、これに前記種母１（各１ｍｌ）
を接種し、２７℃にて１日間振とう培養した。 ３）培養 使用した培地は、２）で示したものである。この培地２
７リットルを５０リットル容ジャーファーメンターに入
れ、殺菌後、これに前記種母２（全７本）を接種し、攪
拌速度２００ｒｐｍ．通気量３０リットル／分条件下で
２７℃にて１日間通気撹拌培養した。
【００２０】４）ＤＱ９０Ａ物質の精製 上記条件で培養後、培養液８０リットルを遠心分離して
得た培養上清を、「ダイヤイオンＨＰ−２０」（三菱化
学社製）カラムに吸着させた。これを水、続いて３０％
メタノールで洗浄後、７０％メタノールを通し、得られ
た７０％メタノール溶液を濃縮乾固した。このようにし
て得た粗活性画分を MPLC LiChroprep C18 (MERCK社
製）カラムに供し、ＤＱ９０Ａ物質を含む画分を得た。
さらにこの画分を濃縮後、HPLC TSKgel-80TM ODS (TOS
OH社製）カラムによって、ＤＱ９０Ａ物質１００ｍｇを
得た。
得た培養上清を、「ダイヤイオンＨＰ−２０」（三菱化
学社製）カラムに吸着させた。これを水、続いて３０％
メタノールで洗浄後、７０％メタノールを通し、得られ
た７０％メタノール溶液を濃縮乾固した。このようにし
て得た粗活性画分を MPLC LiChroprep C18 (MERCK社
製）カラムに供し、ＤＱ９０Ａ物質を含む画分を得た。
さらにこの画分を濃縮後、HPLC TSKgel-80TM ODS (TOS
OH社製）カラムによって、ＤＱ９０Ａ物質１００ｍｇを
得た。
【図１】ＤＱ９０Ａ物質の赤外吸収スペクトルである。
【図２】ＤＱ９０Ａ物質の重ジメチルスルホキシド溶液
中での５００MHz 1 Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
中での５００MHz 1 Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図３】ＤＱ９０Ａ物質の重ジメチルスルホキシド溶液
中での１２５MHz 13Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
中での１２５MHz 13Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 柘植 信昭 大阪府東大阪市御厨栄町１丁目５番７号 ハウス食品株式会社内 (72)発明者 平尾 宜司 大阪府東大阪市御厨栄町１丁目５番７号 ハウス食品株式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】 式（Ｉ）で示される新規物質ＤＱ９０
Ａ。 【化１】 - 【請求項２】 請求項１記載の化合物ＤＱ９０Ａを有効
成分とする蛋白質分解酵素阻害剤。 - 【請求項３】 ストレプトミセス属に属するＤＱ９０Ａ
物質生産菌を培養し、培養物からＤＱ９０Ａ物質を採取
することを特徴とするＤＱ９０Ａ物質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7166033A JPH0912477A (ja) | 1995-06-30 | 1995-06-30 | 新規物質ｄｑ９０ａ、その製造方法及び該ｄｑ９０ａを含有する蛋白質分解酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7166033A JPH0912477A (ja) | 1995-06-30 | 1995-06-30 | 新規物質ｄｑ９０ａ、その製造方法及び該ｄｑ９０ａを含有する蛋白質分解酵素阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0912477A true JPH0912477A (ja) | 1997-01-14 |
Family
ID=15823704
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7166033A Pending JPH0912477A (ja) | 1995-06-30 | 1995-06-30 | 新規物質ｄｑ９０ａ、その製造方法及び該ｄｑ９０ａを含有する蛋白質分解酵素阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0912477A (ja) |
-
1995
- 1995-06-30 JP JP7166033A patent/JPH0912477A/ja active Pending
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