JPH0637519B2 - 新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法 - Google Patents
新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法Info
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- JPH0637519B2 JPH0637519B2 JP61036620A JP3662086A JPH0637519B2 JP H0637519 B2 JPH0637519 B2 JP H0637519B2 JP 61036620 A JP61036620 A JP 61036620A JP 3662086 A JP3662086 A JP 3662086A JP H0637519 B2 JPH0637519 B2 JP H0637519B2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規抗生物質グロボペプチン(Globopeptin)、
その製造法および新菌種に関するものである。
その製造法および新菌種に関するものである。
従来の技術 ストレプトミセス属微生物の培養によつて得られた各種
の抗生物質が知られている。たとえば、ストレプトミセ
ス・エスピー(Streptomycessp.)SF2049株（微工研菌寄
第4486号）の培養によつて得られたペプチド型抗生物質
SF-2049物質（特公昭60-46958）、ストレプトミセス・
サブフラブス・サブエスピー・イルマエンシス(Strepto
mycessubflavussubsp.irumaensis)AM-3603株（微工研菌
寄第5619号）によつて生産されたマクロライド型抗生物
質イルママイシン(irumamycin)（特開昭57-48996号）な
どは、とくに真菌類例えばある種の植物病源性真菌類の
生育を強く抑制するが、細菌類に対しては活性を有しな
い。本発明は、本発明者が土壌から分離したある種のス
トレプトミセス属微生物が、真菌に対して強い抑制活性
を示す抗生物質（本発明者によりグロボペプチンと命名
された）を産生する能力を有するという知見に基いてい
る。
の抗生物質が知られている。たとえば、ストレプトミセ
ス・エスピー(Streptomycessp.)SF2049株（微工研菌寄
第4486号）の培養によつて得られたペプチド型抗生物質
SF-2049物質（特公昭60-46958）、ストレプトミセス・
サブフラブス・サブエスピー・イルマエンシス(Strepto
mycessubflavussubsp.irumaensis)AM-3603株（微工研菌
寄第5619号）によつて生産されたマクロライド型抗生物
質イルママイシン(irumamycin)（特開昭57-48996号）な
どは、とくに真菌類例えばある種の植物病源性真菌類の
生育を強く抑制するが、細菌類に対しては活性を有しな
い。本発明は、本発明者が土壌から分離したある種のス
トレプトミセス属微生物が、真菌に対して強い抑制活性
を示す抗生物質（本発明者によりグロボペプチンと命名
された）を産生する能力を有するという知見に基いてい
る。
発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、真菌類に対して強い活性を有する新規
抗生物質グロボペプチン、その製造方法およびその生産
菌株を提供することにある。
抗生物質グロボペプチン、その製造方法およびその生産
菌株を提供することにある。
問題点を解決するための手段 本発明により提供される構成物質の理化学的性状は次の
とおりである。
とおりである。
(1)元素分析：Ｃ47.8％，Ｈ 5.0％，Ｎ15.3％，Ｓ12.0
％ (2)分子量：通常のマススペクトルによる方法では測定
できなかつた。蒸気圧法による結果から分子量は約900
と推定されるが確定した値は得られなかつた。
％ (2)分子量：通常のマススペクトルによる方法では測定
できなかつた。蒸気圧法による結果から分子量は約900
と推定されるが確定した値は得られなかつた。
(3)融点：２００℃ (4)比旋光度：▲〔α〕25 D▼＋６２°（ｃ＝1.0、クロ
ロホルム／メタノール＝１：１） (5)紫外線吸収スペクトル：メタノール中で224nm、270nm
に吸収極大を示し、 はそれぞれ、536、262である（第１図）。
ロホルム／メタノール＝１：１） (5)紫外線吸収スペクトル：メタノール中で224nm、270nm
に吸収極大を示し、 はそれぞれ、536、262である（第１図）。
(6)赤外線吸収スペクトル：第２図のとおりである。
（KBr法） (7)アミノ酸分析：封管中６規定塩酸で110℃、18時間加
水分解した後、アミノ酸分析計によりアスパラギン酸、
スレオニン、プロリン、グリシン、シスチンが等モルず
つ検出される。
水分解した後、アミノ酸分析計によりアスパラギン酸、
スレオニン、プロリン、グリシン、シスチンが等モルず
つ検出される。
(8)呈色反応：ドラーゲンドルフ反応、アニスアルデヒ
ド−硫酸反応に陽性であり、ニンヒドリン反応、アニリ
ンフタレート反応に陰性である。
ド−硫酸反応に陽性であり、ニンヒドリン反応、アニリ
ンフタレート反応に陰性である。
(9)溶剤に対する溶解性：クロロホルム／メタノール
（１：１）に易溶、水，メタノールに可溶、エタノー
ル，アセトン，酢酸エチル，エチルエーテル，ベンゼン
に難溶である。
（１：１）に易溶、水，メタノールに可溶、エタノー
ル，アセトン，酢酸エチル，エチルエーテル，ベンゼン
に難溶である。
(10)酸性、中性、塩基性の区別： 中性物質である。
(11)物質の色：白色の物質である。
本物質は紫外線吸収スペクトルや溶剤に対する溶解性の
点でSF-2049物質（特公昭60-46958）に類似するが、次
に述べる通り、構成アミノ酸と塩基性、酸性、中性の区
別の点で明らかに異なる。すなわち、本発明の物質は、
酸加水分解後アミノ酸分析計によりアスパラギン酸、ス
レオニン、プロリン、グリシンおよびシスチンが検出さ
れ、他にニンヒドリン陽性アミノ酸は検出されない。こ
れに対してSF-2049物質においてはアスパラギン酸、ス
レオニン、プロリン、グリシンが検出され、シスチンは
検出されず、他に少なくとも３つの未同定アミノ酸が検
出される。また本発明の物質は中性物質であるが、SF-2
049物質は酸性物質である。そのほか両物質は元素分析
値においても明らかに異なる。
点でSF-2049物質（特公昭60-46958）に類似するが、次
に述べる通り、構成アミノ酸と塩基性、酸性、中性の区
別の点で明らかに異なる。すなわち、本発明の物質は、
酸加水分解後アミノ酸分析計によりアスパラギン酸、ス
レオニン、プロリン、グリシンおよびシスチンが検出さ
れ、他にニンヒドリン陽性アミノ酸は検出されない。こ
れに対してSF-2049物質においてはアスパラギン酸、ス
レオニン、プロリン、グリシンが検出され、シスチンは
検出されず、他に少なくとも３つの未同定アミノ酸が検
出される。また本発明の物質は中性物質であるが、SF-2
049物質は酸性物質である。そのほか両物質は元素分析
値においても明らかに異なる。
上記の理化学的性質および後述する生物活性を有する物
質を記載した文献を見出すことができなかつたので、本
物質は新規物質であると考えられる。本物質をグロボペ
プチン(Globopeptin)と命名した。
質を記載した文献を見出すことができなかつたので、本
物質は新規物質であると考えられる。本物質をグロボペ
プチン(Globopeptin)と命名した。
グロボペプチンは５種のアミノ酸を含むが、ニンヒドリ
ン反応に陰性である。従つて本抗生物質は発色団部分と
ペプチド部分からなる構造を有するものと想像される。
ン反応に陰性である。従つて本抗生物質は発色団部分と
ペプチド部分からなる構造を有するものと想像される。
本物質の生物学的性質は次のとおりである。
(1)抗菌活性 寒天希釈法による最小発育阻止濃度(MIC)は第１表に示
すとおりである。なお試験培地はポテト−グルコース寒
天培地(pH6)を用い、27℃での生育を接種後３日目に判
定した。
すとおりである。なお試験培地はポテト−グルコース寒
天培地(pH6)を用い、27℃での生育を接種後３日目に判
定した。
(2)毒性 本抗生物質をマウス腹腔内投与した場合のLD50は200mg/
kg以上である。
kg以上である。
本発明による抗生物質グロボペプチンは、ストレプトミ
セス属に属し、かつグロボペプチン産生能を有する微生
物を培地に好気的に培養し、培養物中にグロボペプチン
を蓄積させ、培養物から採取することによつて得られ
る。
セス属に属し、かつグロボペプチン産生能を有する微生
物を培地に好気的に培養し、培養物中にグロボペプチン
を蓄積させ、培養物から採取することによつて得られ
る。
本発明の目的に使用される菌株として抗生物質グロボペ
プチン生産能を有するストレプトミセス属の微生物を用
いることができる。その実用的な例は、本発明者らによ
つて東京都清瀬市の土壌から分離された放線菌、ストレ
プトミセス・ナーセイ(Streptomycesnoursei)MA-23株で
ある。この菌株は、1984年11月９日に工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第7933として寄託されてい
る。
プチン生産能を有するストレプトミセス属の微生物を用
いることができる。その実用的な例は、本発明者らによ
つて東京都清瀬市の土壌から分離された放線菌、ストレ
プトミセス・ナーセイ(Streptomycesnoursei)MA-23株で
ある。この菌株は、1984年11月９日に工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第7933として寄託されてい
る。
本菌株の菌学的性状は次のとおりである。
Ｉ．形態学的性質 栄養菌糸は合成培地および天然培地においてともによく
発達し、通常は培地の中に浸透して生育する。気菌糸は
グルコース・アスパラギン寒天培地、酵母エキス・麦芽
エキス寒天培地等の合成培地、天然培地で豊富に着生
し、その色調は白から灰色を基調とするが、シユクロー
ス・硝酸塩培地およびグルコース・硝酸塩培地で淡紅色
を呈する。顕微鏡下の観察では、20個以上の長い胞子鎖
が不規則に分岐し、その先端はらせん状を呈する。電子
顕微鏡下では、0.8〜0.9μｍ×0.7μｍの大小の円柱状
の胞子が観察れ、胞子の表面はとげ状になつている。菌
核、胞子嚢および遊走子は見出されない。
発達し、通常は培地の中に浸透して生育する。気菌糸は
グルコース・アスパラギン寒天培地、酵母エキス・麦芽
エキス寒天培地等の合成培地、天然培地で豊富に着生
し、その色調は白から灰色を基調とするが、シユクロー
ス・硝酸塩培地およびグルコース・硝酸塩培地で淡紅色
を呈する。顕微鏡下の観察では、20個以上の長い胞子鎖
が不規則に分岐し、その先端はらせん状を呈する。電子
顕微鏡下では、0.8〜0.9μｍ×0.7μｍの大小の円柱状
の胞子が観察れ、胞子の表面はとげ状になつている。菌
核、胞子嚢および遊走子は見出されない。
II．各種寒天倍地での性状 イー・ビー・シヤーリング(E.B.Shirling)らの方法〔イ
ンターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システイマチツ
ク・バクテリオロジー(International Journal of Syst
ematic Bacteriogy)第16巻、313頁、1966年〕に従い、
それに公知の培地および実験方法を合わせて使用した。
色調は標準色表としてカラー・ハーモニー・アニユアル
(Color Harmony Manual)第４版〔コンテナー・コーポレ
ーション・オブ・アメリカ(Container Corporation of
America)、シカゴ、1958年〕を用いて決定し、色票名と
ともに括弧内にそのコードを併記した。特記しない限
り、27℃、２週間目に観察した。その結果は第２表のと
おりである。
ンターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システイマチツ
ク・バクテリオロジー(International Journal of Syst
ematic Bacteriogy)第16巻、313頁、1966年〕に従い、
それに公知の培地および実験方法を合わせて使用した。
色調は標準色表としてカラー・ハーモニー・アニユアル
(Color Harmony Manual)第４版〔コンテナー・コーポレ
ーション・オブ・アメリカ(Container Corporation of
America)、シカゴ、1958年〕を用いて決定し、色票名と
ともに括弧内にそのコードを併記した。特記しない限
り、27℃、２週間目に観察した。その結果は第２表のと
おりである。
III．生理的諸性質 (1)メラニン色素の形成 (イ)チロシン寒天培地 陰性 (ロ)ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地 陰性 (ハ)グリコース・ペプトン・セラチン培地 穿刺（27℃） 陰性 (ニ)トリプトン・酵母エキス液体培地 陰性 (2)チロシナーゼ反応 陰性 (3)硫化水素生産能 陰性 (4)硝酸塩の還元（グリコース・硝酸塩 培地） 陽性 (5)スターチの加水分解 陽性 (6)ゼラチンの液化（グルコース・ペプ トン・ゼラチン培地） 陰性 (7)脱脂乳の凝固（27℃） 陰性 (8)脱脂乳のペプトン化（27℃） 陽性 (9)セルロースの分解 陰性 (10)生育温度範囲 15〜51℃ (11)炭素源の利用性〔プリーダム・ゴツトリーブ(Pridh
am・Gottlieb)寒天培地〕 よく利用する：Ｄ−キシロース、ｉ−イノシトール やや利用する：Ｄ−グリコール、Ｌ−アラビノース、ラ
フイノース、メリビオース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−フ
ルクトース、シユクロース VI．細胞の化学分析 細胞壁組成：ジアミノピメリン酸はＬＬ型である。
am・Gottlieb)寒天培地〕 よく利用する：Ｄ−キシロース、ｉ−イノシトール やや利用する：Ｄ−グリコール、Ｌ−アラビノース、ラ
フイノース、メリビオース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−フ
ルクトース、シユクロース VI．細胞の化学分析 細胞壁組成：ジアミノピメリン酸はＬＬ型である。
従つて、レシエバリエ(Lechevalier)（インターナショ
ナル・ジヤーナル・オブ・システイマチツク・バクテリ
オロジー，20巻，435〜443頁，1970年）の分類に従つた
本菌の細胞壁組成(cell wall type)はＩ型となる。ま
た、その形態において、気菌糸は20個以上の長い胞子鎖
を有していることから、本菌株はストレプトミセス属に
属すると認められる。
ナル・ジヤーナル・オブ・システイマチツク・バクテリ
オロジー，20巻，435〜443頁，1970年）の分類に従つた
本菌の細胞壁組成(cell wall type)はＩ型となる。ま
た、その形態において、気菌糸は20個以上の長い胞子鎖
を有していることから、本菌株はストレプトミセス属に
属すると認められる。
また、MA-23株は次の菌学的特徴を有している。すなわ
ち、胞子鎖はらせん状であり、胞子の形態は卵型ないし
楕円型であり、その表面はとげ状である。気菌糸の色調
は白色ないし灰色であり、裏面の色調は淡黄ないし褐色
である。
ち、胞子鎖はらせん状であり、胞子の形態は卵型ないし
楕円型であり、その表面はとげ状である。気菌糸の色調
は白色ないし灰色であり、裏面の色調は淡黄ないし褐色
である。
以上の特徴から本菌株はストレプトミセス・ナーセイ(S
treptomycesnoursei)に近縁と考えられる。バージース
・マニユアル・オブ・デイターミネイテイブ・バクテリ
オロジー(Bergey′s Manual of Determinative Bacteri
ology)782頁（1974年）記載のストレプトミセス・ナー
セイの性質と比較したところ、糖の資化性に若干の差異
があるものの、これは本質的な差異とは認め難く、他の
性質は一致した。従つて、MA-23株はストレプトミセス
・ナーセイ(Streptomycesnoursei)に属する菌株である
と判断される。
treptomycesnoursei)に近縁と考えられる。バージース
・マニユアル・オブ・デイターミネイテイブ・バクテリ
オロジー(Bergey′s Manual of Determinative Bacteri
ology)782頁（1974年）記載のストレプトミセス・ナー
セイの性質と比較したところ、糖の資化性に若干の差異
があるものの、これは本質的な差異とは認め難く、他の
性質は一致した。従つて、MA-23株はストレプトミセス
・ナーセイ(Streptomycesnoursei)に属する菌株である
と判断される。
本発明による抗生物質グロボペプチン生産菌を培養する
ための培地としては、ストレプトミセス属の微生物の培
養に適する炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその
他の栄養物を程良く含有する合成培地または天然培地を
使用することができる。
ための培地としては、ストレプトミセス属の微生物の培
養に適する炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその
他の栄養物を程良く含有する合成培地または天然培地を
使用することができる。
培地に使用される炭素源、窒素源は、使用菌株の利用可
能なものならばいずれの種類でもよい。すなわちたとえ
ば炭素源としてはグルコース、グリセロール、フラクト
ース、マルトース、マンニツト、キシロース、ガラクト
ース、リボース、澱粉またはその加水分解物等の種々の
炭水加物が使用できる。その濃度は通常、培地に対して
0.2％〜５％（グリコース換算）が好ましい。またグリ
コン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機酸、グリ
シン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ酸、さら
にはメタノール、エタノール等のアルコール類やノルマ
ルパラフイン等の各種の非芳香族炭化水素、あるいは植
物性もしくは動物性の各種の油脂等も使用可能である。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、NZ−アミン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、
フイツシユミールあるいはその消化物、大豆粉あるいは
その消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、蛹加水分物
等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミン
酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
能なものならばいずれの種類でもよい。すなわちたとえ
ば炭素源としてはグルコース、グリセロール、フラクト
ース、マルトース、マンニツト、キシロース、ガラクト
ース、リボース、澱粉またはその加水分解物等の種々の
炭水加物が使用できる。その濃度は通常、培地に対して
0.2％〜５％（グリコース換算）が好ましい。またグリ
コン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機酸、グリ
シン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ酸、さら
にはメタノール、エタノール等のアルコール類やノルマ
ルパラフイン等の各種の非芳香族炭化水素、あるいは植
物性もしくは動物性の各種の油脂等も使用可能である。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、NZ−アミン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、
フイツシユミールあるいはその消化物、大豆粉あるいは
その消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、蛹加水分物
等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミン
酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグネシウム、食塩
等、さらに微量の重金属塩が使用される。
等、さらに微量の重金属塩が使用される。
また栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は、天然物を含む培地を使用す
る場合にはとくに添加を必要としない場合がある。
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は、天然物を含む培地を使用す
る場合にはとくに添加を必要としない場合がある。
醗酵は振盪培養または通気撹拌深部培養等の好気的条件
下で行なう。培養温度は通常20〜40℃で、pHは４〜９
（とくに７付近）である。培養期間は通常１〜７日で菌
体内外に抗生物質グロボペプチンが生成蓄積する。
下で行なう。培養温度は通常20〜40℃で、pHは４〜９
（とくに７付近）である。培養期間は通常１〜７日で菌
体内外に抗生物質グロボペプチンが生成蓄積する。
培養終了後に培養物より抗生物質グロボペプチンをたと
えば次の方法で採取する。培養物を遠心分離により液
と沈澱物とに分離する。液から多孔性高分子樹脂に吸
着させ、溶出させることにより抽出する。抽出物を適宜
濃縮乾固することによりグロボペプチンの粗物質を得
る。粗物質はさらに、水溶性物質の精製に通常用いられ
る公知の方法、すなわち、例えばイオン交換樹脂、シリ
カゲル等の吸着剤、ゲル過剤などを用いる各種クロマ
トグラフイー法、濃縮法、塩析法などを単独または適宜
組み合わせることにより精製する。グロボペプチンの精
製に好適な方法の例としてシリカゲルを用い、溶出溶液
としてクロロホルムとメタノールの混液を用いる直線濃
度勾配溶出法によるカラムクロマトグラフイー法があげ
られる。これらの方法で得られる活性画分を濃縮乾固す
ることにより抗生物質グロボペプチンの精製粉末を得る
ことができる。
えば次の方法で採取する。培養物を遠心分離により液
と沈澱物とに分離する。液から多孔性高分子樹脂に吸
着させ、溶出させることにより抽出する。抽出物を適宜
濃縮乾固することによりグロボペプチンの粗物質を得
る。粗物質はさらに、水溶性物質の精製に通常用いられ
る公知の方法、すなわち、例えばイオン交換樹脂、シリ
カゲル等の吸着剤、ゲル過剤などを用いる各種クロマ
トグラフイー法、濃縮法、塩析法などを単独または適宜
組み合わせることにより精製する。グロボペプチンの精
製に好適な方法の例としてシリカゲルを用い、溶出溶液
としてクロロホルムとメタノールの混液を用いる直線濃
度勾配溶出法によるカラムクロマトグラフイー法があげ
られる。これらの方法で得られる活性画分を濃縮乾固す
ることにより抗生物質グロボペプチンの精製粉末を得る
ことができる。
本発明において、抗生物質グロボペプチンの検出および
定量は、シリカゲル薄層クロマトグラフイー（メルク社
製、シリカゲル、薄層板NO.5554、厚さ0.2mm、展開溶
媒；クロロホルム／メタノール＝２：１、抗生物質グロ
ボペプチンのRf値0.45付近）およびムコール・ラセモサ
ス(Mucor racemosus)KF-223を用いる生物学的検定法によ
つた。
定量は、シリカゲル薄層クロマトグラフイー（メルク社
製、シリカゲル、薄層板NO.5554、厚さ0.2mm、展開溶
媒；クロロホルム／メタノール＝２：１、抗生物質グロ
ボペプチンのRf値0.45付近）およびムコール・ラセモサ
ス(Mucor racemosus)KF-223を用いる生物学的検定法によ
つた。
次に本発明の実施例を示す。下記実施例において培地の
pHを使用前に７に調整した。
pHを使用前に７に調整した。
実施例１ ストレプトミセス・ナーセイ(Streptomycesnoursei)MA-
23株（微工研菌寄第7933号）の斜面培養から−白金耳を
100mの種培地（グルコース2.0％、ペプトン0.5％、肉
エキス0.5％、塩化ナトリウム0.5％、乾燥酵母0.3％、
炭酸カルシウム0.3％）を入れた500m容の坂口フラス
コに接種し、27℃で１日間振盪培養して種培養を得た。
この種培養600mを30mの生産培地（スターチ2.0％、
グリセロール1.0％、大豆粉1.5％、塩化ナトリウム0.2
％、リン酸マグネシウム0.5％）を入れた50ジヤーフ
アーメンターに接種し、27℃で４日間通気撹拌培養（通
気量15／min、撹拌200r.p.m.）を行なつた。
23株（微工研菌寄第7933号）の斜面培養から−白金耳を
100mの種培地（グルコース2.0％、ペプトン0.5％、肉
エキス0.5％、塩化ナトリウム0.5％、乾燥酵母0.3％、
炭酸カルシウム0.3％）を入れた500m容の坂口フラス
コに接種し、27℃で１日間振盪培養して種培養を得た。
この種培養600mを30mの生産培地（スターチ2.0％、
グリセロール1.0％、大豆粉1.5％、塩化ナトリウム0.2
％、リン酸マグネシウム0.5％）を入れた50ジヤーフ
アーメンターに接種し、27℃で４日間通気撹拌培養（通
気量15／min、撹拌200r.p.m.）を行なつた。
培養液28をシヤープレス型遠心分離機を用いて遠心分
離し、菌体を除去し、上清液20を得た。この上清液か
らグロボペプチンを18のノルマルブタノールで抽出
し、その抽出液を濃縮乾固した後２の水に溶解した。
この液を500mの吸着型合成樹脂ダイヤイオンHP-20
（三菱化成社製）を充填したカラムに通した後、50％ア
セトン水３で溶出し、約200mずつ分画した。活性画
分（NO.12〜14）を集めて減圧下濃縮し、アセトンを除
去した後、凍結乾燥することにより粗物質1.32gを得
た。
離し、菌体を除去し、上清液20を得た。この上清液か
らグロボペプチンを18のノルマルブタノールで抽出
し、その抽出液を濃縮乾固した後２の水に溶解した。
この液を500mの吸着型合成樹脂ダイヤイオンHP-20
（三菱化成社製）を充填したカラムに通した後、50％ア
セトン水３で溶出し、約200mずつ分画した。活性画
分（NO.12〜14）を集めて減圧下濃縮し、アセトンを除
去した後、凍結乾燥することにより粗物質1.32gを得
た。
この粗物質を20mの水に溶解し、ここに80mのアセト
ンを加え、生じた沈澱を集めた。沈澱物370mgを２ｍ
クロロホルム・メタレール（３：１）に溶解し、あらか
じめクロロホルム／メタノール（３：１）に懸濁させた
シリカゲル（95g、メルク社製）を充填したカラム（3.2
×70cm）の上端に負荷した。カラムをクロロンホルム／
メタノール（３：１）700mで溶出し、その後溶出溶媒
をクロロホルム／メタノール（２：１）に代えて溶出
し、いずれも約10mずつ分画した。活性画分（NO.100
〜150）を集めて減圧下で濃縮することにより、抗生物
質グロボペプチンの白色精製粉末を46mg得た。本試料は
薄層クロマトグラフイー上単一スポツトを与え、理化学
的性質は前記の通りであつた。
ンを加え、生じた沈澱を集めた。沈澱物370mgを２ｍ
クロロホルム・メタレール（３：１）に溶解し、あらか
じめクロロホルム／メタノール（３：１）に懸濁させた
シリカゲル（95g、メルク社製）を充填したカラム（3.2
×70cm）の上端に負荷した。カラムをクロロンホルム／
メタノール（３：１）700mで溶出し、その後溶出溶媒
をクロロホルム／メタノール（２：１）に代えて溶出
し、いずれも約10mずつ分画した。活性画分（NO.100
〜150）を集めて減圧下で濃縮することにより、抗生物
質グロボペプチンの白色精製粉末を46mg得た。本試料は
薄層クロマトグラフイー上単一スポツトを与え、理化学
的性質は前記の通りであつた。
実施例２−４ 実施例１で使用したストレプトミセス・ナーセイMA-23
株（微工研菌寄第7933号）を種菌として用いた。大豆粉
１％、Nacl 0.2％、リン酸マグネシウム0.5％からなる
基礎培地に炭素源としてグリセロール、グリコースある
いはスターチを各３％添加した生産培地（pH7.0）をそ
れぞれ100mずつ500m容坂口フラスコに分注し、殺菌
した。実施例１と同様にして得た種培養液を２ｍずつ
各々の坂口フラスコに移植し、27℃で３日間、常法によ
り往復振盪培養した。培養終了後、培養液に等量のエタ
ノールを加えて撹拌し、遠心後、上清液中のグロボペプ
チンの生産量を測定したところ、第３表に示すとおりで
あつた。なお、クロボペプチンの定量はムコール・ラセ
モサス(Mucorrecemosus)を試験菌とする公知の微生物学
定量法により、また標品は実施例１のとおりにして得ら
れがグロボペプチンの純品を用いた。
株（微工研菌寄第7933号）を種菌として用いた。大豆粉
１％、Nacl 0.2％、リン酸マグネシウム0.5％からなる
基礎培地に炭素源としてグリセロール、グリコースある
いはスターチを各３％添加した生産培地（pH7.0）をそ
れぞれ100mずつ500m容坂口フラスコに分注し、殺菌
した。実施例１と同様にして得た種培養液を２ｍずつ
各々の坂口フラスコに移植し、27℃で３日間、常法によ
り往復振盪培養した。培養終了後、培養液に等量のエタ
ノールを加えて撹拌し、遠心後、上清液中のグロボペプ
チンの生産量を測定したところ、第３表に示すとおりで
あつた。なお、クロボペプチンの定量はムコール・ラセ
モサス(Mucorrecemosus)を試験菌とする公知の微生物学
定量法により、また標品は実施例１のとおりにして得ら
れがグロボペプチンの純品を用いた。
発明の効果 抗生物質グロボペプチンは毒性が低く、主として植物病
原性真菌に活性を示すもので、例えば農薬として有用性
が期待される。
原性真菌に活性を示すもので、例えば農薬として有用性
が期待される。
第１図は抗生物質グロボペプチンの紫外線吸収スプエク
トル（メタノール溶液中で測定）、第２図は赤外線吸収
スペクトル（KBr法）を示す。
トル（メタノール溶液中で測定）、第２図は赤外線吸収
スペクトル（KBr法）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (2)
- 【請求項１】次の理化学的性質を有する抗生物質グロボ
ペプチン。 元素分析：Ｃ47.8％，Ｈ5.0％，Ｎ15.3％，Ｓ12.0％ 融点：２００℃ 比旋光度：▲［α］25 D▼＋６２°（ｃ＝1.0、クロロ
ホルム／メタノール＝１：１） 紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：第１図のと
おり 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：第２図のとおり アミノ酸分析： アスパラギン酸１モル，スレオニン１モル，プロリン１
モル，グリシン１モル，シスチン１モル 呈色反応：ドラーゲンドルフ反応、アニスアルデヒド
−硫酸反応には陽性であり、ニンヒドリン反応、アニリ
ンフタレート反応には陰性である。 溶剤に対する溶解性： クロロホルム／メタノール（１：１）に易溶、水，メタ
ノールに可溶、エタノール，アセトン，酢酸エチル，エ
チルエーテル，ベンゼンに難溶である。 酸性、中性、塩基性の区別： 中性物質である。 物質の色：白色の物質である。 - 【請求項２】ストレプトミセス属に属し、下記の理化学
的性質を有する抗生物質グロボペプチンを生産する能力
を有する菌株を培地に好気的に培養し、培養物中に抗生
物質グロボペプチンを蓄積させ、これを採取することを
特徴とする抗生物質グロボペプチンの製造法。 元素分析：Ｃ47.8％，Ｈ5.0％，Ｎ15.3％，Ｓ12.0％ 融点：２００℃ 比旋光度：▲［α］25 D▼＋６２°（ｃ＝1.0、クロロ
ホルム／メタノール＝１：１） 紫外線吸収スペクトル（メタノール中）： 第１図のとおり 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）： 第２図のとおり アミノ酸分析： アスパラギン酸１モル，スレオニン１モル，プロリン１
モル，グリシン１モル，シスチン１モル 呈色反応：ドラーゲンドルフ反応、アニスアルデヒド
−硫酸反応には陽性であり、ニンヒドリン反応、アニリ
ンフタレート反応には陰性である。 溶剤に対する溶解性： クロロホルム／メタノール（１：１）に易溶、水，メタ
ノールに可溶、エタノール，アセトン，酢酸エチル，エ
チルエーテル，ベンゼンに難溶である。 酸性、中性、塩基性の区別： 中性物質である。 物質の色：白色の物質である。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61036620A JPH0637519B2 (ja) | 1986-02-21 | 1986-02-21 | 新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61036620A JPH0637519B2 (ja) | 1986-02-21 | 1986-02-21 | 新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62195399A JPS62195399A (ja) | 1987-08-28 |
| JPH0637519B2 true JPH0637519B2 (ja) | 1994-05-18 |
Family
ID=12474845
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61036620A Expired - Lifetime JPH0637519B2 (ja) | 1986-02-21 | 1986-02-21 | 新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0637519B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4006060A1 (de) * | 1989-02-27 | 1990-08-30 | Laurel Bank Machine Co | Vorrichtung zur kontrolle der muenzenanzahl eines muenzenstapels in einer muenzeneinwickelmaschine |
-
1986
- 1986-02-21 JP JP61036620A patent/JPH0637519B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4006060A1 (de) * | 1989-02-27 | 1990-08-30 | Laurel Bank Machine Co | Vorrichtung zur kontrolle der muenzenanzahl eines muenzenstapels in einer muenzeneinwickelmaschine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62195399A (ja) | 1987-08-28 |
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