JPH0923893A - フェノール誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 副生物を実質的に含まず、基質の部位が特異
的に水酸化されたフェノール誘導体を高い収率で得るフ
ェノール誘導体を製造する方法を提供する。 【解決手段】 微生物による水酸化反応を利用した芳香
族化合物からフェノール誘導体の製造方法において、下
記式（Ｉ）で表される芳香族化合物を原料として微生物
を利用した水酸化反応を行うことによって下記式（Ｉ
Ｉ）で表されるフェノール誘導体を製造することを特徴
とする、フェノール誘導体の製造方法。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、フェノール誘導体
の製造方法に関するものである。さらに詳しく述べる
と、本発明は、微生物を利用した水酸化反応によって位
置特異的に水酸基を導入し、フェノール誘導体を製造す
る方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】フェノール誘導体は、フェノールをはじ
めとしてｏ−、ｍ−及びｐ−クレゾール、３，５−キシ
レノール、カルバクロール、チモール、α−及びβ−ナ
フトール等の一価フェノール、カテコール、レゾルシン
及びハイドロキノン等の二価フェノール、ピロガロール
及びフロログルシン等の三価フェノール、およびシアノ
フェノール、ヒドロキシフェニルアセトニトリル及びア
セトアミノフェノールなど、多くの化合物の総称であ
り、合成樹脂、合成洗剤、医農薬等の広範囲な用途に使
用されている重要な有機化学工業用原料である。

【０００３】従来フェノール誘導体の製造方法として
は、化学合成法や石油精製や石炭ガス化等の多くの工業
的工程からの水性廃液流から回収する方法などが挙げら
れる。しかしながら、前者の方法では、多置換体や異性
体が生成するため転換率を低く押さえる必要があるこ
と、および酸化反応での転換率が低く、未反応物が多い
という問題が存在する。また、後者の方法では、フェノ
ール誘導体の回収効率が十分でなく限られた成果を与え
るにすぎない。

【０００４】このような問題および生化学的な酸化は選
択性が大きく副生物が少ないという長所を考慮して、微
生物を用いた酸化方法が提案された（特開昭５４−１５
７，８９５号公報、特開昭５７−６５，１８７号公報、
特開昭５８−４７，４９６号公報、特開昭５８−１９
３，６９１号公報、特開昭６０−２１０，９９１号公
報、特開昭６０−２１０，９９２号公報及び特公昭６２
−４７，５１７号公報）。しかしながら、例えば、特開
昭５８−１９３，６９１号公報に示される方法では使用
される菌がＣ₁ 化合物を利用する菌に限られている、特
開昭５８−４７，４９６号公報ではベンゼンを基質とし
てハイドロキノンを製造する方法が、さらに、特公昭６
２−４７，５１７号公報、特開昭６０−２１０，９９１
号公報及び特開昭６０−２１０，９９２号公報では、ベ
ンゼンおよび／またはフェノールを基質としてハイドロ
キノンを製造する方法がそれぞれ開示されているにすぎ
ない、また、酸化反応によって複数部位が酸化されてし
まうことがあるなど、依然として様々な問題が存在して
いる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明
は、微生物を用いて下記式（Ｉ）で表される芳香族化合
物を基質として水酸化し、下記式（ＩＩ）で表されるフ
ェノール誘導体を特異的に生成するフェノール誘導体の
製造方法を提供することを目的とするものである。

【０００６】

【化２】

【０００７】

【課題を解決するための手段】上記目的は、微生物によ
る水酸化反応を利用した芳香族化合物からフェノール誘
導体の製造方法において、下記式（Ｉ）で表される芳香
族化合物を原料として用いて微生物を利用した水酸化反
応を行うことによって下記式（ＩＩ）で表されるフェノ
ール誘導体を製造することを特徴とする、フェノール誘
導体の製造方法によって達成される。

【０００８】

【化３】

【０００９】本発明は、上記水酸化反応に用いる微生物
がマイコバクテリウム(Mycobacterium) 属に属する微生
物であるフェノール誘導体の製造方法を示すものであ
る。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明のフェノール誘導体の製造
方法は、微生物のモノオキシゲナーゼにより下記式
（Ｉ）で表される芳香族化合物を基質として水酸化し、
下記式（ＩＩ）で表されるフェノール誘導体を生成する
ことを特徴とするものである。

【００１１】

【化４】

【００１２】以下、本発明を詳細に説明する。

【００１３】本発明のフェノール誘導体の製造方法の一
実施態様を以下の通りに説明する。

【００１４】肉汁寒天培地に生育させたマイコバクテリ
ウム エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycobacterium sp.
NS12523) を一白金耳、表１に示される培地組成を有す
る培地（以下、Ａ培地と称する）に適当な炭素源を添加
した培地（以下、増殖培地と称する）５ｍｌに接種、培
養することによって、種培養液を調製する。次いで、こ
の種培養液を１００ｍｌの上記増殖培地を入れた５００
ｍｌ容の坂口フラスコに接種し、増殖が定常期に入るま
で培養し、一定量の菌体を含む培養液を調製する。この
ようにして調製された培養液から遠心分離（１，０００
〜１０，０００×ｇ、５〜２０分）によって菌体を回収
し、菌体を新鮮なＡ培地１００ｍｌ及び誘導基質として
の炭素源を入れた５００ｍｌ容の坂口フラスコに接種、
培養することによって、フェノール誘導体の生成活性の
高い活性菌体を調製する。培養液を遠心分離（１，００
０〜１０，０００×ｇ、５〜２０分）することによって
培養液から活性菌体のみを回収し、必要であれば、水、
緩衝液または生理食塩水等で菌体を洗浄する。このよう
にして回収された活性菌体を５０ｍＭ リン酸緩衝液
（０．０２％ ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏを含む５０ｍＭ
ＫＨ₂ ＰＯ₄ 水溶液；ｐＨ：７．０）中に菌体濃度が
０．１〜５０ｇ湿重量／１００ｍｌ、好ましくは０．５
〜２０ｇ湿重量／１００ｍｌになるように懸濁し、目的
とするフェノール誘導体の生成反応における触媒として
の菌体懸濁液を調製する。この菌体懸濁液１００ｍｌを
５００ｍｌ容のフラスコに入れ、基質およびエネルギー
源を添加し、２０〜４０℃で所望時間好気条件下で往復
振盪（５０〜３００ｒｐｍ）することによって基質の水
酸化反応を行い、目的とするフェノール誘導体を得る。

【００１５】

【表１】

【００１６】本発明において、微生物によるフェノール
誘導体の生成反応に使用される基質は、下記式で表され
る芳香族化合物であれば特に制限されないが、具体的に
は、アセトアニリド、ホルムアニリド、プロピオンアニ
リド、ベンゾニトリル、フェニルアセトニトリル、フェ
ニルプロピオニトリル、フェニルブチロニトリル、フェ
ニルアラニン、フェニルグリシン、サリチル酸、および
ｏ−クレゾールなどが挙げられる。これらのうち、アセ
トアニリド、ベンゾニトリル、フェニルアセトニトリ
ル、フェニルアラニン、サリチル酸及びｏ−クレゾール
を基質として用いることが好ましい。上記基質の添加濃
度は、１００〜５０，０００ｐｐｍ、好ましくは５００
〜３０，０００ｐｐｍである。

【００１７】

【化５】

【００１８】本発明によるフェノール誘導体は、使用す
る基質によってその化学式が決まる下記式で表される化
合物である。具体的には、アセトアニリド、ホルムアニ
リド、プロピオンアニリド、ベンゾニトリル、フェニル
アセトニトリル、フェニルプロピオニトリル、フェニル
ブチロニトリル、フェニルアラニン、フェニルグリシ
ン、サリチル酸及びｏ−クレゾールを基質として用いた
場合、それぞれｐ−アセトアミノフェノール、ｐ−ヒド
ロキシホルムアニリド、ｐ−ヒドロキシプロピオンアニ
リド、ｐ−シアノフェノール、ｐ−ヒドロキシフェニル
アセトニトリル、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオニト
リル、ｐ−ヒドロキシフェニルブチロニトリル、チロシ
ン、ｐ−ヒドロキシフェニルグリシン、ゲンチジン酸及
びメチルハイドロキノンがフェノール誘導体として得ら
れる。

【００１９】

【化６】

【００２０】本発明におけるフェノール誘導体の生成反
応をより効率的に行うために、反応液にエネルギー源と
なる物質を添加することが好ましい。該エネルギー源と
は、水酸化反応において必要な補酵素であるＮＡＤＨや
ＮＡＤＰＨを供給するのに利用される物質を示す。

【００２１】本発明において、微生物によるフェノール
誘導体の生成反応に使用されるエネルギー源としては、
菌株がその物質を分解して得られるエネルギーで補酵素
であるＮＡＤやＮＡＤＰを還元してそれぞれＮＡＤＨや
ＮＡＤＰＨを生成できるものであれば特に制限されない
が、具体的には、グルコース及びシュークロースなどの
糖類、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタ
ノールなどのアルコール類、酢酸などの有機酸、および
アセトン及びメチルエチルケトンなどのケトン類等の炭
素源が挙げられる。これらのうち、グルコース、エタノ
ール及び酢酸が微生物によって効率よく分解され、エネ
ルギー源として使用できるという点で好ましく使用され
る。なお、変換反応に用いる基質がフェノール誘導体へ
変換されると同時にその一部分が微生物によって分解、
資化されるものである場合には、菌体はそれによってエ
ネルギーを獲得できうると考えられるので、該エネルギ
ー源としての炭素源の供給は特に必要とされない。ま
た、上記エネルギー源の添加濃度は、反応基質のモル濃
度に対し、０．１〜１０倍、好ましくは０．２〜５倍で
ある。

【００２２】本発明における水酸化反応は、分子酸素が
酸素供給源として必要である。従って、菌体懸濁液、基
質及びエネルギー源からなる反応液中に過不足なく酸素
を供給する必要がある。反応液への酸素の供給方法とし
ては、例えば、攪拌、振盪及び通気攪拌槽における空気
または酸素の通気及び攪拌操作などが挙げられる。通気
攪拌または振盪によって酸素を供給する場合の条件は特
に制限されず、用いる装置の大きさ、形状及び菌体懸濁
液の量によって適宜決定される。

【００２３】また、本発明における微生物によるフェノ
ール誘導体の生成反応は、基質及び生成するフェノール
誘導体の性質に適したｐＨの範囲内で行われる。本発明
において、上記ｐＨの範囲は、５〜９、好ましくは６〜
８である。これから、本発明において使用できる活性菌
体を懸濁するための緩衝液は上記ｐＨの範囲内に入るも
のであれば使用できるが、代表例としては、リン酸緩衝
液、ジメチルグルタル酸緩衝液及びトリス塩酸緩衝液等
が挙げられる。また、水酸化反応系において、反応の間
のｐＨ変化が少ない場合には、あるいはｐＨ変化を制御
できる装置等を用いる場合には、あえて緩衝液を用いる
必要はなく、生理食塩水などの無機塩水あるいは水を用
いることができる。

【００２４】上記実施態様においては、菌体の分離を遠
心分離によって行ったが、菌体の分離は、この方法に制
限されず、瀘過及び沈降分離等、一般的な菌体の分離方
法によって行われる。

【００２５】また、上記実施態様においては、マイコバ
クテリウム エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycobacteri
um sp. NS12523) を微生物として利用したフェノール誘
導体の生成反応に使用したが、本発明において使用でき
る微生物は上記微生物に限られるものではなく、フェノ
ール誘導体を生成できる、即ちモノオキシゲナーゼ活性
を有する微生物であれば特に制限されないが、具体的に
は、メチロシヌス属(Methylosinus)、メチロコッカス属
(Methylococcus) 、ロドコッカス属(Rhodococcus) 、マ
イコバクテリウム属(Mycobacterium) 、ノカルディア属
(Nocardia)及びシュードモナス属(Pseudomonas) 等に属
する微生物が挙げられる。これらのうち、マイコバクテ
リウム属(Mycobacterium) 、ノカルディア属(Nocardia)
及びロドコッカス属(Rhodococcus) に属する微生物が好
ましく使用でき、より好ましくはマイコバクテリウム
エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycobacterium sp. NS125
23) が使用される。なお、マイコバクテリウム エスピ
ー ＮＳ１２５２３株(Mycobacterium sp. NS12523)
は、本発明者らによって発見された芳香族化合物を酸化
しフェノール誘導体等へ変換する能力を有するマイコバ
クテリウム属(Mycobacterium) に属する新規な微生物で
ある。

【００２６】上記実施態様において使用されたマイコバ
クテリウム エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycobacteri
um sp. NS12523) の菌学的性質を以下に示す。

【００２７】（ａ）形態的性質 細胞の形および大きさ： 不規則な形態を有する桿
菌で、大きさが約１μｍ×３〜６μｍである 細胞の多形性の有無： 培養時期によって、細胞の
長さが変化する 運動性の有無： なし 胞子の有無： なし 抗酸性： 陰性〜陽性（培養時期によって変化す
る） （ｂ）培養的性質 肉汁寒天平板培養（３０℃）： 周縁部が波状で乾
燥した白色のコロニーを形成する。コロニーの大きさ
は、３０℃で３日間培養した際、直径約３〜１０ｍｍで
ある。 肉汁液体培養： 表面にも生育する。直径０．３〜
１ｍｍ程度の細胞集塊を形成する。 肉汁ゼラチン穿刺培養： ゼラチンの液化なし リトマス・ミルク： アルカリ性 （ｃ）生理的性質 グラム染色性： 陽性 硝酸塩の還元： ＋ 脱窒反応： − ＭＲテスト： − ＶＰテスト： − インドールの生成： − 硫化水素の生成（ＴＳＩ培地）： − デンプンの加水分解： ＋ クエン酸の利用：シモンズ(Simmons) の培地： − クリステンセン(Christensen) の培地： ＋ 無機窒素源の利用： ＋ 色素の生成：キングＡ(King A)培地： − キングＢ(King B)培地： − ＳＣＤ寒天培地： − 肉汁寒天培地： − ウレアーゼ：クリステンセン(Christensen) の培地： ＋ オキシダーゼ： − カタラーゼ： ＋ 生育の範囲（ＳＣＤ培地）： 生育可能ｐＨが４．５〜８．９ 生育可能温度が１４．０〜４７．５℃ 酸素に対する態度： 好気性 Ｏ−Ｆテスト（Hugh Leifson法）： Ｆ型（反応は弱い） （ｄ）下記の糖類からの酸及びガスの生成の有無

【００２８】

【表２】

【００２９】（ｅ）その他の特徴的な生理的性質 サリチル酸の分解性： ＋ 安息香酸の分解性： ＋ ペニシリンＧの耐性： ＋ ミコール酸に関して、薄層クロマトグラフィーにより既
知の微生物であるマイコバクテリウム ヴァッカエ Ｉ
ＦＯ１４１１８株(Mycobacterium vaccae IFO14118) と
比較したところ、マイコバクテリウム ヴァッカエ Ｉ
ＦＯ１４１１８株とミコール酸スポットのＲｆ値と近似
する位置にミコール酸スポットが複数個認められた。

【００３０】本菌株について、バージーズ マニュアル
オブ システマティック バクテリオロジー、第二巻
(Bergey´s Manual of Systematic Bacteriology 2nd)
（１９８６年）を参考にして検索を行った結果、本菌株
はマイコバクテリウム属(Mycobacterium) 微生物のマイ
コバクテリウム スメグマティス(Mycobacterium smegm
atis) に類似する特徴を有していることがわかった。し
かし、タイプカルチャーである、マイコバクテリウム
スメグマティス ＩＦＯ３０８２、３１５３、３１５４
及び１３１６７株と本菌株を比較したところ、いずれの
タイプカルチャーもメチルエチルケトンを炭素源とする
完全合成培地でほとんど生育しなかった点で、本菌株と
は異なっていた。さらに、いずれのタイプカルチャーも
モノオキシゲナーゼ活性を有しないあるいは活性が非常
に低かった。これらの結果より、本菌株は従来知られる
菌種とは異なる性質を有することから、本菌株をマイコ
バクテリウム エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycobacte
rium sp. NS12523) （以下、単に「ＮＳ１２５２３株」
と称する）と命名した。

【００３１】このＮＳ１２５２３株は、平成７年５月３
０日付で工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託さ
れ、その受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−１４９５８号であ
る。

【００３２】本発明において、微生物の培養に使用する
培地は、固体または液体培地のいずれでもよく、また、
使用する菌株が資化しうる炭素源、適量の窒素源、無機
塩及びその他の栄養素を含有する培地であれば、合成培
地または天然培地のいずれでもよい。

【００３３】本発明の菌株の培養において使用できる炭
素源としては、本菌株が良好に生育し、フェノール誘導
体を生成する活性を発現しうるものであれば特に制限さ
れず、グルコース、プロパン、ブタン、ペンタン、アセ
トン、メチルエチルケトン、メチルプロピルケトン、メ
チルブチルケトン、イソプロパノール、２−ブタノー
ル、２−ペンタノールプロパン、エタノール、プロパノ
ール、１−ブタノール、酢酸及びシュークロース等が挙
げられる。これらのうち、菌株の生育を考慮すると、グ
ルコース、シュークロース、酢酸、アセトン、メチルエ
チルケトン、エタノール、プロパノール、１−ブタノー
ル及び２−ブタノール等が炭素源として好ましく使用さ
れ、また、フェノール誘導体の生成活性を高める、即ち
モノオキシゲナーゼ活性を高めることを考慮すると、プ
ロパン、ブタン、アセトン、メチルエチルケトン及び２
−ブタノールなどが好ましく使用される。この際、上記
炭素源の添加量は、０．０１〜５重量％、好ましくは
０．１〜３重量％である。これらの炭素源は、単独ある
いは２種以上の混合物の形態で使用できる。

【００３４】本発明の菌株の培養において使用できる窒
素源としては、肉エキス、ペプトン、バクトペプトン、
ポリペプトン、酵母エキス、大豆加水分解物、大豆粉
末、ミルクカゼイン、カザミノ酸、各種アミノ酸及びコ
ーンスティープリカー等の有機窒素化合物、およびアン
モニア、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム及び塩化
アンモニウムなどのアンモニウム塩、硝酸カリウム及び
硝酸ナトリウムなどの硝酸塩、尿素等の無機窒素化合物
等が挙げられる。これらの窒素源も、単独あるいは２種
以上の混合物の形態で使用できる。

【００３５】本発明において使用できる無機塩として
は、一般的な細菌の培養に用いられるものが使用できる
が、例えば、マグネシウム、マンガン、カルシウム、ナ
トリウム、カリウム、銅、鉄及び亜鉛などのリン酸塩、
塩酸塩、硫酸塩及び酢酸塩等から選ばれた１種または２
種以上を使用することができる。これらのうち、フェノ
ール誘導体を効率よく生成するためには鉄塩を無機塩と
して比較的高濃度で添加することが好ましく、鉄塩の添
加濃度としては、鉄に換算して、１リットルの培養液
中、０．３〜６０ｍｇ、好ましくは１〜３０ｍｇであ
る。

【００３６】ここで、本発明においてＮＳ１２５２３株
を使用する際に好ましく使用できるＡ培地以外の培地の
一組成例を以下の表３に示し、以下、この培地をＢ培地
と称する。これらのＡ培地およびＢ培地は、これらの培
地に上記したような所定の炭素源を添加して調製した培
地でＮＳ１２５２３株を培養すると、ＮＳ１２５２３株
は直径１ｍｍ以下の小さい集塊を形成しながら増殖し、
培養液を静置すると速やかに沈降し、容易に菌体のみを
回収できるため、本発明における微生物の培養に好まし
く使用できる。

【００３７】

【表３】

【００３８】本発明においてフェノール誘導体を生成す
る完全合成培地としてはＡ培地に誘導基質としての上記
したような炭素源を加えた培地が好ましく使用され、増
殖をさらに促進するための有機態窒素源培地としてはＢ
培地の組成に上記したような炭素源を加えた培地が好ま
しく使用される。

【００３９】本発明において、微生物の培養は、上記実
施態様において詳細に記載した培養に限られるものでは
なく、使用する微生物が適切に培養できる公知の培養方
法によって行われる。一般的には、本発明による微生物
の培養は、好気的条件下で行われ、その際の培養条件
は、使用する微生物の種類、培地の組成や培養法によっ
て適宜選択され、使用する菌株が増殖しモノオキシゲナ
ーゼ活性が発現できる条件であれば特に制限されない。
通常は、培養温度が、２０〜４５℃、好ましくは３０〜
４０℃であり、また、培養に適当な培地のｐＨは、４．
５〜９、好ましくは６〜８である。

【００４０】また、本発明によると、誘導基質としての
炭素源が培地中で消失するとモノオキシゲナーゼ活性が
低下するため、高いモノオキシゲナーゼ活性を有する菌
体を得るためには、誘導基質としての炭素源が培地中に
残存している段階で微生物の培養を終了させることが重
要である。ただし、単に目的量の菌体を得る場合には、
モノオキシゲナーゼ活性の低下に関係なく、定常期に達
するまで菌体の増殖を継続してもよい。このため、上記
実施態様において示したように、一定量の菌体を得るた
めの培養段階及びこのような培養段階で得られた菌体に
誘導基質を添加して短時間培養を行うことによってモノ
オキシゲナーゼ活性の高い菌体を得ることを目的とした
培養段階に分けて、微生物の培養を行うことが好ましい
が、前述したような２段階からなる培養を行わずに、誘
導基質濃度を一定に制御することができる培養装置を用
いて菌体の増殖とモノオキシゲナーゼ活性の発現の両方
を一段階で行い、活性菌体を得てもよい。

【００４１】培養時間は、使用する微生物の種類、培養
温度及びｐＨや菌体の初期濃度等の培養条件および培養
方法によって異なるが、例えば、一定量の菌体を得るた
めの培養段階では、ＮＳ１２５２３株を一白金耳、１重
量％のメチルエチルケトンを炭素源として加えたＡ培地
５ｍｌに接種し３０℃で３日間培養して種培養液を調製
し、この種培養液を上記と同様の培地１００ｍｌを入れ
た５００ｍｌ容の坂口フラスコに接種し、３０℃で振盪
培養（１４０ｒｐｍ）を行った場合、２〜５日である。
また、活性菌体を得るための培養段階では、上述の培養
段階で得たモノオキシゲナーゼ活性が十分高くない菌体
を誘導基質としてメチルエチルケトンを１重量％添加し
た新鮮なＡ培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の坂口
フラスコに接種して３０℃で振盪培養（１４０ｒｐｍ）
を行った場合、６〜７２時間である。このような方法に
よって、目的とする水酸化反応に供試できるモノオキシ
ゲナーゼ活性を有する菌体を調製することができる。

【００４２】このようにして得られた活性菌体を用い
て、所望の物質変換反応を行うことができる。

【００４３】

【実施例】以下、実施例を参照しながら本発明をさらに
具体的に説明する。

【００４４】実施例１ 肉汁寒天培地（ディフコ(Difco) 社製）に生育させたマ
イコバクテリウム エスピー ＮＳ１２５２３株(Mycob
acterium sp. NS12523) を一白金耳、炭素源として１重
量％のメチルエチルケトンを添加したＡ培地５ｍｌを入
れた試験管に接種し、３０℃で３日間培養することによ
って、種培養液を調製した。次いで、この種培養液を上
記と同様の培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の坂口
フラスコに接種し、さらに３０℃で３日間培養し、培養
液を調製した。このようにして得た培養液から遠心分離
（６，０００×ｇ、５分）によって菌体を回収し、菌体
を新鮮な同培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の坂口
フラスコに接種して３０℃でさらに２４時間培養して、
フェノール誘導体の生成効率の高い活性菌体を調製し
た。このようにして得られた培養液を遠心分離（６，０
００×ｇ、５分）することによって培養液から活性菌体
のみを回収し、菌体を０．０２％ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂
Ｏを含む５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ：７）中に菌体
濃度が５ｇ湿重量／１００ｍｌになるように懸濁した。
この菌体懸濁液１０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコ
に入れ、基質としてアセトニトリド、エネルギー源とし
てグルコースをそれぞれ１，０００ｐｐｍになるように
添加し、反応を開始した。反応開始後、３０℃で２４時
間往復振盪（１４０ｒｐｍ）することによって反応を行
った。所定時間経過した後、反応液を回収し、高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって反応液中
に含まれる生成物の同定及び定量を行った。なお、生成
物の同定及び定量は、それぞれ標準化合物との保持時間
及びピークの大きさの比較によって行った。

【００４５】ＨＰＬＣ分析の結果を表４に示す。表４か
ら示されるように、ｐ−アセトアミノフェノールと保持
時間が一致するピークが得られ、目的とするｐ−アセト
アミノフェノールが生成したことが確認された。

【００４６】実施例２ 実施例１と同様の操作で調製した活性菌体を用い、基質
としてアセトニトリドの代わりにベンゾニトリルを添加
する以外は実施例１と同様にして水酸化反応を行った。
結果を表４に示す。この結果、目的とするｐ−シアノフ
ェノールが生成したことが確認された。

【００４７】実施例３ 実施例１と同様の操作で調製した活性菌体を用い、基質
としてアセトニトリドの代わりにフェニルアセトニトリ
ルを添加する以外は実施例１と同様にして水酸化反応を
行った。結果を表４に示す。この結果、目的とするｐ−
ヒドロキシフェニルアセトニトリルが生成したことが確
認された。

【００４８】実施例４ 実施例１と同様の操作で調製した活性菌体を用い、基質
としてアセトニトリドの代わりにフェニルアラニンを添
加する以外は実施例１と同様にして水酸化反応を行っ
た。結果を表４に示す。この結果、目的とするチロシン
が生成したことが確認された。

【００４９】実施例５ 実施例１と同様の操作で調製した活性菌体を用い、基質
としてアセトニトリドの代わりにサリチル酸を添加する
以外は実施例１と同様にして水酸化反応を行った。結果
を表４に示す。この結果、目的とするゲンチジン酸が生
成したことが確認された。

【００５０】実施例６ 実施例１と同様の操作で調製した活性菌体を用い、基質
としてアセトニトリドの代わりにｏ−クレゾールを添加
する以外は実施例１と同様にして水酸化反応を行った。
結果を表４に示す。この結果、目的とするメチルハイド
ロキノンが生成したことが確認された。

【００５１】

【表４】

【００５２】

【発明の効果】以上述べたように、本発明のフェノール
誘導体の製造方法は、微生物による水酸化反応を利用し
た芳香族化合物からフェノール誘導体の製造方法におい
て、下記式（Ｉ）で表される芳香族化合物を原料として
微生物を利用した水酸化反応を行うことによって下記式
（ＩＩ）で表されるフェノール誘導体を製造することを
特徴とするものである。したがって、本発明の方法を用
いることによって、副生物を実質的に含まず、基質の特
定部位が水酸化されたフェノール誘導体が高い収率で得
られる。

【００５３】

【化７】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｃ 37/58 9155−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 37/58 39/08 9155−4Ｈ 39/08 65/05 9450−4Ｈ 65/05 229/36 9450−4Ｈ 229/36 231/12 231/12 233/25 233/25 (Ｃ１２Ｐ 13/00 Ｃ１２Ｒ 1:32） (Ｃ１２Ｐ 7/22 Ｃ１２Ｒ 1:32） (Ｃ１２Ｐ 7/42 Ｃ１２Ｒ 1:32） (Ｃ１２Ｐ 13/02 Ｃ１２Ｒ 1:32） (Ｃ１２Ｐ 13/22 Ｃ１２Ｒ 1:32）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 微生物による水酸化反応を利用した芳香
   族化合物からフェノール誘導体の製造方法において、下
   記式（Ｉ）で表される芳香族化合物を原料として用いて
   微生物を利用した水酸化反応を行うことによって下記式
   （ＩＩ）で表されるフェノール誘導体を製造することを
   特徴とする、フェノール誘導体の製造方法。 【化１】
2. 【請求項２】 該水酸化反応に用いる微生物がマイコバ
   クテリウム(Mycobacterium) 属に属する微生物である、
   請求項１に記載のフェノール誘導体の製造方法。