JPH092954A

JPH092954A - Ｉｌ−８産生抑制剤及びｍｃａｆ産生抑制剤

Info

Publication number: JPH092954A
Application number: JP7154923A
Authority: JP
Inventors: Akira Matsumori; 昭松森
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1995-06-21
Filing date: 1995-06-21
Publication date: 1997-01-07
Anticipated expiration: 2015-02-14
Also published as: JP3008010B2

Abstract

(57)【要約】【構成】本発明は、一般式【化１】［式中Ｒはフェニル環上に低級アルコキシ基を有するこ
とのあるベンゾイル基を示す。カルボスチリル骨格の３
位と４位との炭素間結合は一重結合又は二重結合を示
す。］で表わされるカルボスチリル誘導体及び／又はそ
の塩を有効成分とするＩＬ−８産生抑制剤及びＭＣＡＦ
産生抑制剤を提供する。【効果】本発明のＩＬ−８産生抑制剤及びＭＣＡＦ産
生抑制剤は、ＩＬ−８及びＭＣＡＦの異常産生を抑制
し、これらの異常産生に起因する疾患、例えば皮膚の乾
癬、血管炎、肺線維症等の予防及び治療に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬上有用な下記一般
式（１）で表わされるカルボスチリル誘導体及び／又は
その塩を有効成分とするＩＬ−８産生抑制剤及びＭＣＡ
Ｆ産生抑制剤に関する。

【０００２】

【従来技術とその課題】炎症は種々の刺激（物理・化学
的、微生物など）による組織障害において、生体の恒常
性を保持するために生じる生体防御反応である。該炎症
には、血管透過性の亢進、好中球やマクロファージなど
の炎症細胞浸潤、免疫応答としてのリンパ球浸潤、組織
の修復などの複数のフェーズがある。この炎症には、炎
症の場を構成する種々の細胞や、血管を介して炎症巣に
浸潤してくる白血球など、多彩な細胞が関与している。

【０００３】これらの細胞により産生され、複雑な炎症
反応の形成に関与する、ポリペプチド性の活性因子を炎
症性サイトカインと称している。これらのサイトカイン
のうち、白血球走化能を有するサイトカインが近年多数
発見され、それらの構造と機能が解明されてきている。
上記サイトカインは総称してケモカイン（ｃｈｅｍｏｋ
ｉｎｅｓ）と呼ばれ、炎症における白血球浸潤に重要な
役割を担っていることが判明されてきた。

【０００４】上記ケモカインという名称は、１９９２年
国際白血球走化因子シンポジウムにおいて白血球に特異
的に走化活性を有するポリペプチド性の因子についてつ
けられたものである。これらの因子はアミノ酸配列の相
同性が高く、構造的に４つのシスティン残基を有してお
り、分子量約１万という共通の特徴を持っている。この
システィン（Ｃｙｓ）の結合様式により、ケモカイン
は、現在Ｃｙｓ−Ｘ−Ｃｙｓ及びＣｙｓ−Ｃｙｓの二つ
のサブファミリーに分類されており、ＩＬ−８（Ｉｎｔ
ｅｒｌｅｕｋｉｎ−８）は前者の、ＭＣＡＦ（Ｍｏｎｏ
ｃｙｔｅＣｈｅｍｏｔａｃｔｉｃａｎｄＡｃｔｉ
ｖａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒ）：別名ＭＣＰ−１（Ｍｏ
ｎｏｃｙｔｅＣｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔＰｒ
ｏｔｅｉｎ−１）は後者の代表的なサイトカインであ
る。

【０００５】またこれらの両サイトカインはホルモン型
レセプターに結合するとされている。これらのうちＩＬ
−８は分子量８ＫＤａのポリペプチドで、７２個のアミ
ノ酸により構成されている。

【０００６】ＩＬ−８（別名ＮＡＰ−１：Ｎｅｕｔｒｏ
ｐｈｉｌＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＰｅｐｔｉｄｅ−１）
は、１９８７年にＬＰＳ刺激したヒト末梢血単核球培養
上清中より好中球走化性因子（ＮＣＦ）として単離・精
製され［Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８
４，９２３３（１９８７）］、その後、Ｔリンパ球の走
化性因子（ＴＣＦ）も同様に単離・精製され［Ｌａｓｅ
ｎ，Ｃ．Ｇ．，ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４
３，１９８３（１９８９）］、これらは同一因子である
ことが明らかとなりＩＬ−８と名付けられた。

【０００７】該ＩＬ−８は好中球の遊走を惹起するとと
もに、好中球を活性化する。ＩＬ−８の作用としては好
中球走化能の亢進だけでなく、脱顆粒やスパーオキサイ
ドの産生を促進する作用、ライソゾーム酵素放出亢進作
用、ＬＴＢ₄，５ＨＥＴＥ産生亢進作用、接着分子（Ｃ
Ｄ１１ａｂｃ，ＣＤ１８）発現亢進作用、ＣＲ−１発現
亢進作用、非刺激血管内皮細胞への付着亢進作用、サイ
トカイン刺激血管内皮細胞への付着抑制作用、カンジダ
・アルビカンス増殖抑制作用、Ｔ細胞及び好塩基球の走
化能の亢進作用などが報告され、好塩基球からのヒスタ
ミン、ロイコトリエン放出亢進や、更には血管内皮細胞
に対する血管新生作用なども報告されている。

【０００８】該ＩＬ−８の関与が考えられる疾患として
は皮膚の乾癬、慢性関節リウマチ、気管支喘息、急性心
筋梗塞、成人呼吸切迫症候群（ＡＲＤＳ）、敗血症、血
管炎症、肝炎などが挙げられている［高橋将文、臨床
医，１９（９），４２−４５（１９９３）］。

【０００９】一方、ＭＣＡＦは単球走化性因子として１
９８９年に単離・精製された［Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，
Ｔ．，ｅｔａｌ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６９，１
４４９（１９８９）］、該ＭＣＡＦはＬＰＳで刺激され
た単球やＩＬ−１、ＴＮＦなどの炎症性サイトカインで
刺激された血管内皮細胞、線維芽細胞、血管平潤筋細胞
など種々の細胞で産生され、単球走化性及び活性化作用
を有し、更にはＴリンパ球や好塩基球の走化能の亢進作
用を有していると報告されている。その他、ＭＣＡＦは
スパーオキサイドの産生を促進する作用、ライソゾーム
酵素放出亢進作用、抗腫瘍活性増強作用、サイトカイン
産生亢進作用、接着分子（ＣＤ１１ｂｃ）発現亢進作
用、好塩基球からのヒスタミン放出の亢進作用などが報
告されている。該ＭＣＡＦが関与している疾患としては
動脈硬化症、リウマチ性関節炎、肺線維症、悪性グリオ
ーマ、メラノーマ、線維肉腫、悪性線維性組織球腫［高
橋将文，臨床医，１９（９），４２−４５（１９９
３）］などが考えられている。

【００１０】上記各疾患とＩＬ−８及びＭＣＡＦとの関
連より、上記各疾患の予防及び治療には、ＩＬ−８及び
ＭＣＡＦの生体内での過剰産生を抑制する働きを有する
薬剤が有効であると考えられ、かかる薬剤の開発が当業
界で望まれている。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記ＩＬ−８
異常産生の抑制及び／又はＭＣＡＦの異常産生の抑制、
或はＩＬ−８とＭＣＡＦとの異常産生の同時抑制によっ
て、該ＩＬ−８及び／又はＭＣＡＦの異常産生に起因す
る各種疾患の治療を行ない得る、新しいＩＬ−８産生抑
制剤及びＭＣＡＦ産生抑制剤を提供する点にある。

【００１２】本発明者らは、上記目的により鋭意研究を
重ねた結果、以前に強心剤有効成分として開発した下記
一般式（１）で表わされるカルボスチリル誘導体及び／
又はその塩が、上記目的に合致する所望のＩＬ−８産生
抑制作用を有することを見出すと共に、ＭＣＡＦ産生抑
制作用をも有し、上記目的に合致する薬剤として有効で
あるという事実を見出し、ここに本発明を完成するに至
った。

【００１３】即ち、本発明は一般式

【００１４】

【化３】

【００１５】［式中Ｒはフェニル環上に低級アルコキシ
基を有することのあるベンゾイル基を示す。カルボスチ
リル骨格の３位と４位との炭素間結合は一重結合又は二
重結合を示す。］で表わされるカルボスチリル誘導体及
び／又はその塩を有効成分とするＩＬ−８産生抑制剤及
びＭＣＡＦ産生抑制剤に係わる。

【００１６】本発明の有効成分として用いられるカルボ
スチリル誘導体は、例えば特公平１−４３７４７号公報
及び米国特許番号ＵＳ４４１５５７２号公報に記載され
る通り、強心剤として有用であることが既に公知であ
る。また、該カルボスチリル誘導体及び／又はその塩の
うちの一つはうつ血性心不全の患者において、血行力学
的指標と運動耐用量の改善が証明されている［Ｉｎｏｕ
ｅｅｔａｌ．，ＨｅａｒｔＶｅｓｓｅｌｓ，２，
１６６−１７１（１９８６）；Ｓａｓａｙｍａｅｔａ
ｌ．，ＨｅａｒｔＶｅｓｓｅｌｓ，２，２３−２８
（１９８６）；Ｆｅｌｄｍａｎｅｔａｌ．，Ａｍ．
ＨｅａｒｔＪ．，１１６，７７１−７７７（１９８
８）］。

【００１７】上記カルボスチリル誘導体の変力作用に関
連したメカニズムはカリウム電流の低下［Ｉｉｊｉｍａ
ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔ
ｈｅｒ．，２４０，６５７−６６２（１９８７）］、フ
ォスフォジエステラーゼの軽度の抑制とカルシウム電流
の内向きの流れの上昇を含んでいる［Ｙａｔａｎｉｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．，１３，８１２−８１９（１９８９）；Ｔａｉｒ
ａｅｔａｌ．，Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓ
ｈｕｎｇ，３４，３４７−３５５（１９８４）］。

【００１８】上記カルボスチリル誘導体は更にリポポリ
サッカライド（ＬＰＳ）刺激した末梢血単核球の細胞
（ＰＢＭＣ）によるＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１
β、ＩＬ−２及びＩＦＮ−γを含む種々のサイトカイン
の産生を抑制することが報告されている［Ｂｕｓｃｈ，
Ｆ．ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．，４２，６２９−６３４（１９９２）；Ｍａ
ｒｕｙａｍａｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．，１９５，１２６４−
１２７１（１９９３）；Ｓｈｉｏｉ，Ｔ．ｅｔａ
ｌ．，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，５４（１），ＰＬ
１１−１６（１９９４）；Ｍａｔｓｕｍｏｒｉ，Ａ．ｅ
ｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８９（３），９
５５−９５８（１９９４）〕。

【００１９】更に上記カルボスチリル誘導体はウイルス
誘導された心筋傷害の改善と該心筋傷害の改善時におけ
るナチュラル・キラー細胞（ＮＫＣｅｌｌ）の抑制作
用を有することも報告されている［Ｍａｔｓｕｉ
Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，
９４，１２１２−１２１７（１９９４）〕。

【００２０】上記作用に加えて、該カルボスチリル誘導
体はアポトーシス調整作用を有することが報告され、該
作用に基づく、癌の治療及び癌転移の抑制、自己免疫疾
患、ウイルス疾患等への有用性も報告されている［ヨー
ロッパ特許公開ＥＰ０５５２３７３；Ｎａｋａｉｅｔ
ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，ａｂ
ｓｔｒｕｃｔ，ａｎｄＰｒｏｃ．Ｊｐｎ．Ｃａｎｃｅ
ｒＡｓｓｏｃ．，５８１（１９９３）；Ｍａｒｕｙａ
ｍａｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９５，１２６４−１２
７１（１９９３）］。

【００２１】しかして、上記一般式（１）で表わされる
カルボスチリル誘導体及び／又はその塩が、前記したよ
うにＩＬ−８産生抑制作用及びＭＣＡＦ産生抑制作用を
有する報告は未だない。

【００２２】本発明のＩＬ−８産生抑制剤及びＭＣＡＦ
産生抑制剤において、殊に好ましい有効成分化合物とし
ての上記カルボスチリル誘導体としては、６−［４−
（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラジニ
ル］−３，４−ジヒドロカルボスチリルを例示できる。

【００２３】本発明薬剤の有効成分とするカルボスチリ
ル誘導体を表わす上記一般式（１）において示される各
基としては、より具体的にはそれぞれ次の各基を例示で
きる。

【００２４】即ち、低級アルコキシ基としては、例えば
メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブ
トキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシ
ルオキシ基等の炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖状アルコ
キシ基を例示できる。

【００２５】フェニル環上に置換基として低級アルコキ
シ基を有することのあるベンゾイル基としては、例えば
ベンゾイル、２−メトキシベンゾイル、３−メトキシベ
ンゾイル、４−メトキシベンゾイル、２−エトキシベン
ゾイル、３−エトキシベンゾイル、４−エトキシベンゾ
イル、３−イソプロポキシベンゾイル、４−ブトキシベ
ンゾイル、２−ペンチルオキシベンゾイル、３−ヘキシ
ルオキシベンゾイル、３，４−ジメトキシベンゾイル、
２，５−ジメトキシベンゾイル、３，４，５−トリメト
キシベンゾイル基等の、フェニル環上に置換基として炭
素数１〜６の直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基の１〜３個
を有することのあるベンゾイル基を例示できる。

【００２６】また上記一般式（１）で表されるカルボス
チリル誘導体の塩には、薬理学的に許容される酸付加塩
が包含される。該塩を形成する酸性化合物としては、具
体的には例えば硫酸、リン酸、硝酸、塩酸、臭化水素酸
等の無機酸、蓚酸、マレイン酸、フマール酸、リンゴ
酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸等の有機酸を例示する
ことができる。

【００２７】本発明薬剤の有効成分である一般式（１）
で表わされるカルボスチリル誘導体及び／又はその塩
は、通常、一般的な医薬製剤の形態で用いられる。かか
る製剤は、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付
湿剤、崩壊剤、表面活性剤、潤沢剤等の希釈剤乃至賦形
剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種の形
態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとし
ては錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、
カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）、点眼剤
等を例示できる。

【００２８】錠剤の形態に形成するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプ
ン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロ
ップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボ
キシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、
リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾
燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミ
ナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル
硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプ
ン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバタ
ー、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩
基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリ
ン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、
ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タル
ク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコー
ル等の滑沢剤等を例示できる。更に錠剤は必要に応じて
通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包
錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重
錠、多層錠とすることもできる。

【００２９】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カ
オリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガン
ト末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナランカ
ンテン等の崩壊剤等を使用できる。

【００３０】坐剤の形態に成形するに際しては、担体と
して従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレ
ングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコ
ールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を
使用できる。

【００３１】注射剤として調製される場合には、液剤、
乳剤、懸濁剤などは殺菌され且つ血液と等張であるのが
好ましく、これらの液剤、乳剤、懸濁剤などの形態に成
形するに際しては、希釈剤としてこの分野において慣用
されているものを全て使用できる。その例としては例え
ば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エト
キシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソス
テアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂
肪酸エステル類等を挙げることができる。尚、この場合
等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖、
グリセリン等を医薬製剤中に含有させてもよく、また通
常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよ
い。更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、
甘味剤等や他の医薬品を医薬製剤中に含有させてもよ
い。

【００３２】本発明薬剤中に有効成分として含まれる一
般式（１）の化合物の量は、特に限定されず広範囲より
適宜選択されるが、通常全組成物中約１〜７０重量％、
好ましくは約１〜３０重量％程度の範囲とするのが適当
である。

【００３３】かくして得られる本発明医薬製剤の投与方
法は特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性
別、その他の条件、疾患の程度に応じて決定される。例
えば、注射剤形態の医薬製剤は、静脈内、筋肉内、皮
下、皮内、腹膣内投与などにより投与され得る、これは
必要に応じてブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合
して静脈内投与することもできる。錠剤、丸剤、顆粒
剤、カプセル剤などの固剤形態や経口投与用液剤形態の
本発明医薬製剤は、経口投与又は経腸投与され得る。坐
剤は直腸内投与できる。また点眼剤は目に適用できる。

【００３４】本発明薬剤の投与量は、広範囲から適宜選
択でき、特に限定されるものではないが、通常の臨床利
用に際しては、一般式（１）のカルボスチリル誘導体
（及びその塩）が、通常一日当り体重１ｋｇ当り約０．
５〜３０ｍｇ程度の範囲から選択される量とされるのが
よく、前記投与単位形態中には有効成分が約１〜１００
０ｍｇ含有されるのが適当である。また本発明薬剤の投
与は、一日１回又は一日３〜４回に分けることもでき
る。

【００３５】

【発明の効果】本発明のＩＬ−８産生抑制剤及びＭＣＡ
Ｆ産生抑制剤は、ＩＬ−８及びＭＣＡＦの異常産生を抑
制し、これらの異常産生に起因する疾患、例えば皮膚の
乾癬、血管炎、肺線維症等の予防及び治療に有効であ
る。

【００３６】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため製剤
例及び薬理試験例を挙げる。

【００３７】

【製剤例１】６−〔４−（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラジニル〕−３，４− ジヒドロカルボスチリル５ｍｇデンプン１３２ｍｇマグネシウムステアレート１８ｍｇ乳糖４５ｍｇ計２００ｍｇ１錠中、上記組成物の錠剤を製造した。

【００３８】

【製剤例２】６−〔４−（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラジニル〕−３，４− ジヒドロカルボスチリル１５０ｇアビセル（商標名，旭化成（株）製）４０ｇコーンスターチ３０ｇステアリン酸マグネシウム２ｇヒドロキシプロピルメチルセルロース１０ｇポリエチレングリコール−６０００３ｇヒマシ油４０ｇメタノール４０ｇ上記有効成分化合物、アビセル、コーンスターチ及びス
テアリン酸マグネシウムを混合研磨後、糖衣Ｒ１０ｍｍ
のキネで打錠する。得られた錠剤をヒドロキシプロピル
メチルセルロース、ポリエチレングリコール−６００
０、ヒマシ油及びメタノールからなるフィルムコーティ
ング剤で被覆を行ない、フィルムコーティング錠を製造
する。

【００３９】

【製剤例３】６−〔４−（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラジニル〕−３，４− ジヒドロカルボスチリル１５０．０ｇクエン酸１．０ｇラクトース３３．５ｇリン酸ニカルシウム７０．０ｇプルロニックＦ−６８３０．０ｇラウリル硫酸ナトリウム１５．０ｇポリビニルピロリドン１５．０ｇポリエチレングリコール（カルボワックス１５００）４．５ｇポリエチレングリコール（カルボワックス６０００）４５．０ｇコーンスターチ３０．０ｇ乾燥ラウリル硫酸ナトリウム３．０ｇ乾燥スタアリン酸マグネシウム３．０ｇエタノール適量上記有効成分化合物、クエン酸、ラクトース、リン酸二
カルシウム、プルロニックＦ−６８及びラウリル硫酸ナ
トリウムを混合する。

【００４０】上記混合物をＮｏ．６０スクリーンにて篩
別し、ポリビニルピロリドン、カルボワックス１５００
及びカルボワックス６０００を含むアルコール性溶液で
湿式粒状化する。必要に応じてアルコールを添加し、粉
末をペースト状塊にする。コーンスターチを添加し、均
一な粒子が形成されるまで混合を続ける。Ｎｏ．１０ス
クリーンを通過させ、トレイに入れ、１００℃のオーブ
ンで１２〜１４時間乾燥する。乾燥粒子をＮｏ．１６ス
クリーンで篩別し乾燥ラウリル硫酸ナトリウム及び乾燥
ステアリン酸マグネシウムを加え、混合し、打錠機で所
望の形状に圧縮成形する。

【００４１】上記芯部をワニスで処理し、タルクを散布
して湿気の吸収を防止する。芯部の周囲に下塗り層を被
覆する。内服用のために充分な回数のワニス被覆を行な
う。錠剤を完全に丸く且つ滑らかにするために、更に下
塗り層及び平滑被覆を適用する。所望の色合いが得られ
るまで着色被覆を行なう。乾燥後、被覆錠剤を磨いて均
一な光沢の錠剤を調製する。

【００４２】

【薬理試験例１】供試化合物として６−［４−（３，４
−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラジニル］−３，
４−ジヒドロカルボスチリル（以下、「化合物１」とい
う）を用いて、以下の通りＩＬ−８産生及びＭＣＡＦ産
生に対する該供試化合物の産生抑制作用を試験した。

【００４３】（１）ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を健
常成人者からショ糖密度勾配遠心分離法により分離器
（ファルマシア社製）を用いて単離し、得られた細胞を
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した後、最
終的に、１０％加熱不活性胎児牛血清（ＦＢＳ：ギブコ
社製）、１００単位／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシン（ギブコ社製）及び５０μＭ２−
メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ−１６４０培地
（ギブコ社製）に再懸濁させ、５％ＣＯ₂下、３７℃で
培養した。

【００４４】化合物１を１Ｎ塩酸に溶解し、ＦＢＳで１
ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈して、−２０℃で保存した。

【００４５】貯蔵液を更に培地で希釈し、１ＮＮａＯ
ＨでｐＨを７．０に調製した。

【００４６】リポポリサッカライド（ＬＰＳ：ディフコ
社製）をＰＢＳ中に３ｍｇ／ｍｌ貯蔵液として調整し
た。

【００４７】ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌ１２−ｍｙｒｉ
ｓｔａｔｅ１３−ａｃｅｔａｔｅ：シグマ社製）をジ
メチルスルホキシド中に１ｍｇ／ｍｌ貯蔵液として調整
した。

【００４８】（２）サイトカインの産生及び測定ＰＢＭＣ（２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ）を１０μｇ／ｍｌの
ＬＰＳと１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡで刺激した。試験にお
いて化合物１の５μＭ及び１５μＭ濃度をＬＰＳ刺激と
同時に加えた。２４時間インキュベーション後上清を得
て−２０℃でサイトカインの測定まで保存した。培養を
２回行ない、合計１０サンプルを測定した。また化合物
１無添加で刺激したウェルをコントロールとした。

【００４９】次に刺激により産生されたＩＬ−８及びＭ
ＣＡＦ量の測定を市販のＩＬ−８及びＭＣＡＦ測定キッ
ト（どちらも東レ株式会社製）を用いて行なった。

【００５０】ＩＬ−８及びＭＣＡＦ測定はキットに添付
の測定手順に従って行ない、４５０ｎｍの吸光度で測定
し、両標準液の測定値から得られた検量線を作成し、各
サンプル中のヒトＩＬ−８及びＭＣＡＦの濃度を読み取
った。

【００５１】上記の結果を図１及び図２に示す。

【００５２】図１中、縦軸はコントロール（ＬＰＳ刺激
のみ、ＬＰＳとして示す）、化合物１の５μＭ添加時
（Ｖｅｓ−５として示す）及び１５μＭ添加時（Ｖｅｓ
−３×５として示す）のそれぞれのＭＣＡＦの産生量
（ｐｇ／ｍｌ）を示す。

【００５３】図２中、縦軸はコントロール（ＬＰＳ刺激
のみ、ＬＰＳとして示す）、化合物１の５μＭ添加時
（Ｖｅｓ−５として示す）及び１５μＭ添加時（Ｖｅｓ
−３×５として示す）のそれぞれのヒトＩＬ−８の産生
量（ｐｇ／ｍｌ）を示す。

【００５４】上記の結果から、化合物１は、ＰＢＭＣの
ＬＰＳ刺激によって産生されるＭＣＡＦ及びＩＬ−８の
産生を抑制することが明らかである。

【００５５】

【薬理試験例２】（１）ヒト内皮細胞の培養ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）をＧｉｍｂｒｏｎｅ
らの方法［ＧｉｍｂｒｏｎｅＭ．Ａ．ｅｔａｌ．，
Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，６０，６７３−６８４（１
９７４）］を修飾した方法を用いて単離し、２０％胎児
牛血清（ＦＣＳ）、３０μｇ／ｍｌの内皮細胞成長促進
剤（ＥＣＧＳ；シグマ社製）及び９０μｇ／ｍｌのヘパ
リンを含む１９９培地（シグマ社製）の培地を用いて以
下の通り培養した。

【００５６】即ち、臍静脈を抽出し、０．０５％のコラ
ーゲナーゼ溶液（ワシントン・バイオケミカル・コーポ
レーション：ＷｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＵＳＡ社製）で満
たし、３７℃で２０分間インキュベートした。内容物を
培地を含んでいる円錐形のチューブの中に注ぎ込み、遠
心分離した。ペレット細胞をゼラチンでプレコートして
ある組織培養プラスチックプレート上に播いて培養し、
５％ＣＯ₂下において、３７℃で組織培養インキュベー
ター中に維持培養した。この試験に用いられたＨＵＶＥ
Ｃは３から５段階レベルのものが含まれていた。

【００５７】化合物１を塩酸に溶解し、ＦＢＳで１ｍｇ
／ｍｌの濃度に希釈して、−２０℃で保存した。貯蔵液
を更に培地で希釈し、１ＮＮａＯＨでｐＨを７．０に
調整した。ＩＬ−１（Ｇｅｎｚｙｍｅ社製）及びＴＮＦ
−α（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製）を上記培養液で希
釈し、それぞれ１０ｎｇ／ｍｌの濃度になるように調整
した。

【００５８】（２）サイトカインの産生及び測定２４ウェルのプレートに上記培地にて調整したＨＵＶＥ
Ｃ（２ｘ１０⁵細胞／ｍｌ）を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−
１と１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αでそれぞれ刺激した。
試験において化合物１の２．６μＭ及び２６μＭ濃度を
加えた後、上記刺激剤を加えた。３７℃で２４時間イン
キュベーション後上清を得て−２０℃でサイトカインの
測定まで保存した。

【００５９】各群名３サンプルを測定した。また化合物
１無添加で刺激したウェルをコントロールとした。

【００６０】次に刺激により産生されたＩＬ−８及びＭ
ＣＡＦ量の測定を上記薬理試験例１と同様の方法にて測
定した。

【００６１】上記の結果を図３及び図４に示す。

【００６２】図３中、縦軸はコントロール（無刺激、−
として示す）、化合物１のみ添加（Ｖ２６として示
す）、ＩＬ−１刺激のみ（ＩＬ−１として示す）、ＴＮ
Ｆ−α刺激のみ（ＴＮＦとして示す）、各刺激剤プラス
化合物１の２．６μＭ添加時（それぞれ＋Ｖ２．６とし
て示す）及び２６μＭ添加時（それぞれ＋Ｖ２６として
示す）のそれぞれのＩＬ−８の産生量（１００ｐｇ／ｍ
ｌ）を示す。

【００６３】図４中、縦軸はコントロール（無刺激、−
として示す）、化合物１のみ添加（Ｖ２６として示
す）、ＩＬ−１刺激のみ（ＩＬ−１として示す）、ＴＮ
Ｆ−α刺激のみ（ＴＮＦとして示す）、各刺激剤プラス
化合物１の２．６μＭ添加時（それぞれ＋Ｖ２．６とし
て示す）及び２６μＭ添加時（それぞれ＋Ｖ２６として
示す）のそれぞれのＭＣＡＦの産生量（１００ｐｇ／ｍ
ｌ）を示す。

【００６４】上記の結果から、化合物１は、ＨＵＶＥＣ
においてＩＬ−１及びＴＮＦ刺激によって産生されるＩ
Ｌ−８の産生を抑制することが明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】薬理試験例１に従う試験の結果を示すグラフで
ある。

【図２】薬理試験例１に従う試験の結果を示すグラフで
ある。

【図３】薬理試験例２に従う試験の結果を示すグラフで
ある。

【図４】薬理試験例２に従う試験の結果を示すグラフで
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 // Ｃ０７Ｄ 215/38 Ｃ０７Ｄ 215/38

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】［式中Ｒはフェニル環上に低級アルコキシ基を有するこ
とのあるベンゾイル基を示す。カルボスチリル骨格の３
位と４位との炭素間結合は一重結合又は二重結合を示
す。］で表わされるカルボスチリル誘導体及び／又はそ
の塩を有効成分とするＩＬ−８産生抑制剤。
【請求項２】一般式【化２】［式中Ｒはフェニル環上に低級アルコキシ基を有するこ
とのあるベンゾイル基を示す。カルボスチリル骨格の３
位と４位との炭素間結合は一重結合又は二重結合を示
す。］で表わされるカルボスチリル誘導体及び／又はそ
の塩を有効成分とするＭＣＡＦ産生抑制剤。