JPH09295928A - 老化防止化粧料 - Google Patents
老化防止化粧料Info
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- JPH09295928A JPH09295928A JP8110822A JP11082296A JPH09295928A JP H09295928 A JPH09295928 A JP H09295928A JP 8110822 A JP8110822 A JP 8110822A JP 11082296 A JP11082296 A JP 11082296A JP H09295928 A JPH09295928 A JP H09295928A
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Abstract
は水による抽出物を含有することを特徴とする老化防止
化粧料。 【効果】 皮膚線維芽細胞の増殖を活性化し、細胞外マ
トリックス産生を増加させることにより、皮膚のはり・
しわを改善する皮膚老化防止効果に優れた老化防止化粧
料に関する。
Description
を活性化し、細胞外マトリックス産生を増加させること
により、皮膚のはり・しわを改善する皮膚老化防止効果
に優れた老化防止化粧料に関する。
ことが、老若男女を問わず、重大な関心事になってい
る。ところが、肌は、加齢などの内的因子や紫外線、活
性酸素などの外的因子によって、皮膚が本来維持してい
る収縮性、柔軟性、保湿性などの機能が衰え、様々なト
ラブルを発生する。これらのトラブルのひとつであるし
わは、真皮の細胞外マトリックスを産生する細胞数の減
少、分裂速度の衰えなどの細胞機能の老化や、コラーゲ
ン線維の減少および変性、皮下脂肪組織の減少などによ
り、皮膚の弛緩および弾力性の損失が起こることが原因
となって発生する。従来、皮膚老化への対処法として
は、老化によって失われるコラーゲン、ヒアルロン酸な
どの物質を皮膚に塗布し補う組成物や、紫外線や活性酸
素から皮膚を守るための防御物質を配合した間接的な老
化防止剤が主流であった。
の方法は満足のいく効果を奏するものではなかった。ま
た、老化を根本的に改善しようとする試みとしてはレチ
ノイン酸などがあるが、安全性に問題があり、長期使用
に耐え得るものではなかった。従って、皮膚の老化を改
善し、しかも皮膚に弊害がなく、安全に使用できる老化
防止化粧料の開発が望まれている。
情に鑑み鋭意検討した結果、ハイビスカス自体又はその
有機溶媒及び/又は水による抽出物が、皮膚線維芽細胞
の細胞増殖を活性化し、細胞外マトリックスの産生を増
加させることにより、皮膚のはり・しわの改善に顕著な
作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
はその有機溶媒及び/又は水による抽出物を含有するこ
とを特徴とする老化防止化粧料を提供するものである。
Hibiscus sabdariffa L.)は通常、各種溶剤で抽出し、
抽出物(エキス)として使用するが、抽出液をそのまま
使用してもよいし、乾燥粉体として使用してもよい。ま
た、ハイビスカスをそのまま小片に裁断して小片状で使
用しても、或いは乾燥後、粉砕して粉末状で使用しても
よい。
の方法が利用できる。植物抽出物は上記ハイビスカス、
好ましくは乾燥末化したものを水もしくは有機溶媒(ヘ
キサン、エーテル、酢酸エチル、ブタノール、アセト
ン、プロパノール、エタノール、メタノール、プロピレ
ングリコール、1,3ブチレングリコール)あるいはそれ
らを一定の比率で混合した溶媒、たとえば水性アルコー
ルを用い、通常4℃〜100℃で抽出して得られる。こうし
て得られた抽出物は、必要に応じて活性炭又は活性白土
等により精製する。一般的には配合量は目的に応じ、0.
001〜100重量%を任意に配合、使用する。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
として、ハイビスカスの乾燥物を300g使用した。前記原
材料300gにイオン交換水450mlを加え、60℃で3時間加熱
抽出した後No.2濾紙にて濾過する。全ての濾液を合わ
せ、HP-20(三菱化成社製:φ=50mm,h=500mm)カラムク
ロマトグラフィーに付し、HP-20未吸着画分を、ロータ
リーエバポレーターにて減圧濃縮、凍結乾燥し、ハイビ
スカス抽出物120gを得た(収量40%)。
ate buffered saline。蒸留水1lあたり、NaCl 8.0g, K
Cl 0.2g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4・12H20 2.9g)に0.1(w
/v)%になるように溶解後、0.2μmメンブランフィルタ
ーにて濾過滅菌し、適宜希釈したものを、試験溶液とし
た。 (2)細胞培養 正常ヒト2倍体線維芽細胞HFSKF-II(理化学研究所製)
を、Ham-F12(大日本製薬社製)に15(v/v)%の牛胎児
血清を添加したもので培養した。前記培地にて1×105c
ell/mlに調整した細胞を、内径16mmの滅菌プラスチック
24穴プレートに0.5mlずつ接種し、24時間培養後、試験
溶液を10(v/v)%含む培地に交換し、その後48時間培
養した。 (3)細胞数測定 前記のように培養後、24穴プレートの培地を捨て、C
a2+,Mg2+不含有PBSで細胞を洗浄後、トリプシンを用い
て細胞を剥離し、細胞数を測定し、細胞増殖作用を検討
した。これらの結果を第1表に示す。なお、ネガティブ
コントロールとしてはCa2+,Mg2+不含有PBSを用いた。
は皮膚線維芽細胞の増殖効果を有することが見いだされ
た。
゛ロマイト゛)は生細胞中に取り込まれるとミトコンドリア中
の酵素の作用を間接的に受けてTetrazolium環が還元的
に開裂し、青色のFormazanを形成する。細胞中で生成さ
れるFormazan量は細胞のミトコンドリアのエネルギー代
謝(呼吸酵素活性)と良好な相関があるため、MTT還元
法によって細胞賦活効果を評価できる。 (1)試験溶液調製 前記ハイビスカス抽出物をCa2+,Mg2+不含有PBSで希釈
し、0.2μmメンブランフィルターにて濾過滅菌したもの
を、試験溶液とした。 (2)MTTストック溶液の調製 MTT(3-(4,5-シ゛メチルチアソ゛ール-2-イル)-2,5-シ゛フェニルーテトラソ゛リウムフ
゛ロマイト゛)5mgをCa2+,Mg 2+不含有PBS 1mlに溶解した溶液
をフィルターで濾過後、滅菌してMTTストック溶液を調
製した。 (3)細胞培養 正常ヒト2倍体線維芽細胞HFSKF-IIを、Ham-F12(大日
本製薬社製)に15(v/v)%の牛胎児血清を添加したも
ので培養した。前記培地にて1×105cell/mlに調整した
細胞を、内径16mmの滅菌プラスチック24穴プレートに0.
5mlずつ接種し、24時間培養後、試験溶液を10(v/v)%
含む培地に交換し、その後48時間培養した。24穴プレー
トの培地を捨て、Ca2+,Mg2+不含有PBSで細胞を洗浄後、
前記MTTストック溶液を10mlMTTストック/100μl培地と
なるように加え、4時間培養した。培地を除去し、酸性
イソプロパノール(特級塩酸を0.04Nになるようイソプ
ロパノールに添加した溶液)を各ウェルに600μl添加、
攪拌後、波長570nmで吸光度を測定し、波長650nmで測定
した濁度の吸光度を差し引いてFormazanの生成量として
評価した。これらの結果を表2に示す。なお、ネガティ
ブコントロールとしてはCa2+,Mg2+不含有PBSを用いた。
は線維芽細胞賦活効果を有することが見いだされた。
成促進試験 (1)試験溶液調製 前記ハイビスカス抽出物をCa2+,Mg2+不含有PBSで希釈
し、0.2μmメンブランフィルターにて濾過滅菌したもの
を、試験溶液とした。 (2)細胞培養 正常ヒト2倍体線維芽細胞HFSKF-IIを、Ham-F12(大日
本製薬社製)に15(v/v)%の牛胎児血清を添加したも
ので培養した。前記培地にて1×105cell/mlに調整した
細胞を、内径32mmの滅菌プラスチック12穴プレートに1.
0mlずつ接種し、120時間培養後、試験溶液を10(v/v)
%含む無血清線維芽細胞増殖培地F-GM(クラボウ社製)
に交換し、その後48時間培養を行った。 (3)細胞数の測定 前記のように培養後、12穴シャーレの培地を捨て、C
a2+,Mg2+不含有PBSで細胞を洗浄し、トリプシンを用い
て細胞を剥離し、細胞数を測定した。試験溶液のネガテ
ィブコントロールとしてはCa2+,Mg2+不含有PBSを使用し
た。 (4)培地内コラーゲン量の測定 培地内コラーゲン量は、前記(2)のように培養後、12
穴プレートの各ウェルの培地を採取し、Ca2+,Mg2+不含
有PBSにより細胞を洗浄した液を加えた溶液中に存在す
るヒドロキシプロリンの含量を定量することにより測定
した。ヒドロキシプロリンはコラーゲンに特徴的なアミ
ノ酸である。ヒドロキシプロリン量は、Inayama,Shibat
a,Ohtuki,Saitoの方法(藤本大三郎、永井裕(1985)、コラ
ーケ゛ン実験法、pp.51-56、講談社)に準じ、以下の方法に
より測定した。まず、培地に等容の12N-HClを加え、110
℃、24時間加熱する。加水分解後、HClはロータリーエ
バポレーターで除去しておく。蒸留水2ml、KCl 1.5g、
ホウ酸緩衝液(蒸留水1l当たり、ホウ酸 61.84g、KCl 2
25g、pH8.7)0.5mlを加え、室温で20分間静置する。ク
ロラミンT溶液(p-トルエンスルホンクロロアミドナト
リウム三水和物 1.41gを2ーメトキシエタノール25mlに溶
解)0.5mlを加えて25分間適宜振とうし、さらに3.6Mチ
オ硫酸ナトリウム溶液 1.5mlを加え、密栓し、100℃で3
0分間加熱する。冷却した後、トルエンを2.5ml加え5分
間振とう後、トルエン層を採取し、無水硫酸ナトリウム
のカラム(6mm2×30mm)を通過させる。流出液1.0mlを
とり、p-ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液 0.5ml
(p-ジメチルアミノベンズアルデヒド 120gをエタノー
ル 200mlに溶解した液と、濃硫酸 27.4mlをエタノール
200mlに溶解した液を、氷冷下で混合)と混合し、室温
で30分間放置後、560nmの吸光度を測定する。 コラーゲ
ン量を前記(3)で測定した細胞数で割り、細胞数あた
りの培地内コラーゲン量を算出する。試験溶液のネガテ
ィブコントロールとしてはCa2+,Mg2+不含有PBSを使用し
た。コラーゲン合成促進率は次式を用い、ネガティブコ
ントロールのコラーゲン量を100%として計算を行った。
培地内コラーゲン量 Cx;Ca2+,Mg2+不含有PBSを添加したウェルにおける細胞
数あたりの培地内コラーゲン量 これらの結果を表3に示す。なお、ネガティブコントロ
ールとしてはCa2+,Mg2 +不含有PBSを用いた。
は皮膚線維芽細胞のコラーゲン合成促進効果を有するこ
とが見いだされた。
リカンにて剃毛した背部皮膚にハイビスカスエキスを10
(v/v)%エタノールに溶解した溶液を1日1回0.2ml、
5日/週、塗布した。4週間後、マウス背部から直径12m
mの皮膚を採取した。採取した皮膚はを重量を測定後、
アセトンにて脱水・脱脂後均質化し、実験例3(4)に
示したInayama,Shibata,Ohtuki,Saitoの方法(藤本大三
郎、永井裕(1985)、コラーケ゛ン実験法、pp.51-56、講談社)
に準じてコラーゲン量を算出した。これらの結果を表4
に示す。なお、ネガティブコントロールとしては10(v/
v)%エタノール溶液を用いた。
はマウス皮膚のコラーゲン量を増加させる効果を有する
ことが見いだされた。
その有機溶媒及び/又は水による抽出物を含有した安全
な老化防止化粧料が提供され、該老化防止化粧料は皮膚
全体の老化を根本的に改善することができるため、いつ
までもみずみずしくはりのある肌を保つことができる。
Claims (2)
- 【請求項1】ハイビスカス自体又はその有機溶媒及び/
又は水による抽出物を含有することを特徴とする老化防
止化粧料。 - 【請求項2】ハイビスカス自体又はその有機溶媒及び/
又は水による抽出物を含有し、皮膚のはり・しわを改善
することを特徴とする老化防止化粧料。
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|---|---|---|---|
| JP11082296A JP3748941B2 (ja) | 1996-05-01 | 1996-05-01 | 老化防止化粧料 |
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