JPH09316068A - 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３ - Google Patents

骨吸収阻害物質ａ−７５９４３

Info

Publication number
JPH09316068A
JPH09316068A JP13792996A JP13792996A JPH09316068A JP H09316068 A JPH09316068 A JP H09316068A JP 13792996 A JP13792996 A JP 13792996A JP 13792996 A JP13792996 A JP 13792996A JP H09316068 A JPH09316068 A JP H09316068A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
compound
formula
ethyl acetate
sank
methanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP13792996A
Other languages
English (en)
Inventor
Aiya Satou
藹也 佐藤
Tadaaki Morishita
忠昭 森下
Masaaki Miyamoto
政章 宮本
Ryuzo Enokida
竜三 榎田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sankyo Co Ltd
Original Assignee
Sankyo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co Ltd filed Critical Sankyo Co Ltd
Priority to JP13792996A priority Critical patent/JPH09316068A/ja
Publication of JPH09316068A publication Critical patent/JPH09316068A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 骨吸収阻害活性を有し、骨粗鬆症および高カ
ルシウム血症の治療に有用な新規化合物、該化合物の製
造方法および該化合物の生産菌を提供する。 【解決手段】 式： 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、骨粗鬆症、高カル
シウム血症等の治療薬として有用な新規化合物および該
化合物の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】骨は生体の体重を支えるだけでなく、そ
の構成成分であるカルシウムやリンなどのミネラルの貯
蔵庫としても重要な機能を果たしている。骨は一旦形成
された後、全く不変な構築物ではなく、その構造及び量
は常に形成されては分解されている。骨細胞には、骨を
形成する骨芽細胞と骨を吸収する破骨細胞が存在し、両
作用の均衡を保つことによって、骨の形成維持と共に血
中カルシウム濃度が維持される。この均衡が失われる事
により、骨粗鬆症、高カルシウム血症、低カルシウム血
症等の病態が現れる。
【０００３】骨粗鬆症や高カルシウム血症は、骨吸収が
異常に亢進し骨量が減少し骨が脆くなり、骨折などを起
こしやすくなる慢性疾患である。特に閉経後の女性に多
く見られる。
【０００４】従来、骨粗鬆症の治療法としては、カルシ
ウム剤の直接投与、骨吸収を抑制する薬剤であるカルシ
トニンやビスフォスフォネート等の使用、閉経により低
下した女性ホルモンの補充投与、またはカルシウム吸収
を促進し、骨代謝機能を活発化させるビタミンＤ3 の投
与等の方法が実施されている［森井浩世他 (1993) 医学
のあゆみ １６５巻９号参照］が、本発明の化合物と類
似の化合物が骨粗鬆症治療剤として報告された例はな
い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、強力
かつ選択性の高い、骨粗鬆症治療薬および／または高カ
ルシウム血症治療薬として有用な新規化合物、および該
化合物の製造法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、 （１） 式：
【０００７】
【化４】
【０００８】で示される化合物Ａ−７５９４３、 （２） 式：
【０００９】
【化５】
【００１０】で示される（１）記載の化合物、 （３） 下記の性状を有するＡ−７５９４３； １）物質の性状： 無色泡沫状 ２）旋光度： ［α］25 D −２．７°（ｃ ０．５
２，クロロホルム中 ) ３）分子式： Ｃ15Ｈ23ＮＯ4 （高分解能ＦＡＢ−マス
スペクトル法により測定） ４）分子量： 281 （ＦＡＢ−マススペクトル法により
測定） ５）紫外線吸収スペクトル（エタノ−ル中）： 末端吸
収のみ ６）赤外線吸収スペクトル： νmax ｃｍ-1 (クロロホ
ルム中 )3528, 3411, 1710, 1686, 1592, 1457, 1450,
1386. ７） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δ：ｐｐｍ，重ピリ
ジン中) ：0.98 (3H, d), 1.09 (3H, d), 1.42 (1H, t
d), 1.45 (1H, dd),1.69 (1H, m), 1.73 (1H, dt), 1.9
4 (1H, m), 2.00 (1H, m),2.29 (1H, m), 2.45 (2H,
d), 2.46 (1H, dd), 2.47 (1H, m),2.70 (1H, dt), 2.7
8 (1H, m), 3.01 (1H, ddd), 4.87 (1H, ddd). ８）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δ：ｐｐｍ，重ピリ
ジン中) ：14.7 (q), 18.0 (q), 27.1 (d), 29.3 (t),
32.8 (t), 35.0 (t),35.6 (t), 40.5 (d), 42.26 (t),
42.33 (t), 69.6 (d), 78.1 (d),170.7 (s), 173.3
(s), 211.0 (s). ９）溶解性： メタノ−ル、エタノ−ル、エ−テル、酢
酸エチル、クロロホルム、アセトン、アセトニトリル、
ピリジン、ジメチルスルフォキシドに可溶；ヘキサン、
水に不溶、 （４） ストレプトマイセス（Streptomyces）属に属す
るＡ−７５９４３生産菌を培養し、次いで、該培養物よ
りＡ−７５９４３を回収することを特徴とするＡ−７５
９４３の製造方法、 （５） ストレプトマイセス属に属するＡ−７５９４３
生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces
sp.）ＳＡＮＫ ６１２９６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０
５）である、（４）記載の製造方法、 （６） ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces
sp.）ＳＡＮＫ ６１２９６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０
５）、 （７） 式：
【００１１】
【化６】
【００１２】で示される化合物を酸化することを特徴と
する、Ａ−７５９４３の製造方法、 （８） Ａ−７５９４３を含むことからなる医薬、 （９） Ａ−７５９４３を含むことからなる骨粗鬆症治
療剤、 （１０） Ａ−７５９４３を含むことからなる高カルシ
ウム血症治療剤、に関する。
【００１３】本発明者らは、骨粗鬆症および／または高
カルシウム血症の予防・治療薬を天然資源に求め、鋭意
研究を行った結果、ストレプトマイセス属に属する菌株
の培養液中に強い骨吸収阻害作用を見いだし、その活性
本体を単離した。また、シクロヘキシミドを出発原料と
して該化合物を化学合成することに成功し、本発明を完
成させた。
【００１４】本発明の化合物Ａ−７５９４３は、種々の
異性体を有する。上記式（Ｉ）においては、これらの異
性体およびこれらの異性体の混合物がすべて単一の式で
示されている。本発明はこれらの異性体およびこれらの
異性体の混合物をもすべて含むものである。これら異性
体の中では、上記式（Ｉ’）で示される配位を有する化
合物がより好適である。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明の化合物の製造において用
いられるストレプトマイセス（Streptomyces）属に属す
る菌株としては、例えばストレプトマイセス・エスピー
（Streptomyces sp.）ＳＡＮＫ ６１２９６株（以下
「ＳＡＮＫ ６１２９６株」という）を挙げることがで
きる。ＳＡＮＫ ６１２９６株の菌学的特徴は、次の通
りである。
【００１６】１．形態学的特徴 ＳＡＮＫ ６１２９６株はＩＳＰ「インターナショナル
・ストレプトマイセス・プロジェクト（International
Streptomyces Project）」規定の培地上で２８℃、１４
日間の培養により次のような形態学的特徴を示した。光
学顕微鏡による観察ではＳＡＮＫ ６１２９６株の基生
菌糸は良好に伸長、分岐し黄味茶色を示すが、ノカルデ
ィア（ Nocardia ）属菌株様の断裂やジグザグ伸長は観
察されない。気菌糸は単純分岐する。およそ１０ないし
５０個またはそれ以上の胞子の連鎖を形成し、胞子連鎖
の形態は螺旋状を示す。走査型電子顕微鏡による観察で
は胞子は楕円形で、その表面構造は平滑状（Smooth）を
示す。胞子の大きさは０．６〜０．８ｘ０．９〜１．７
μｍである。胞子は気菌糸上にのみ形成される。また、
胞子嚢、気菌糸の車軸分岐、気菌糸の断裂、菌核などの
特殊器官は認められない。
【００１７】２．各種培養基上の諸性質 各種培養基上で２８℃、１４日培養後の性状は表１に示
した通りである。色調の表示はマンセル方式による日本
色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバーを
表す。
【００１８】
【表１】 （＊１：Ｇ：生育、ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素） ３．生理学的性質 ２８℃で培養後、２ないし２１日間に観察したＳＡＮＫ
６１２９６株の生理学的性質は以下の通りである：
【００１９】
【表２】 （＊：イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2) ） また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地（ISP 9 ）を基
礎培地１、および同培地にイーストエキスを０．１％添
加したものを基礎培地２として使用して、２８℃、１４
日間培養後に観察したＳＡＮＫ ６１２９６株の炭素源
の資化性は表３に示した通りである。
【００２０】
【表３】 （＋：資化する、±：弱く資化する） ４．化学分類学的性質 ＳＡＮＫ ６１２９６株の細胞壁は長谷川らの方法［Ha
segawa, T., et al. (1983) J. Gen. Appl. Microbiol.
29, 319-322参照］に従い検討した結果、ＬＬ−ジアミ
ノピメリン酸が検出された。また、ＳＡＮＫ ６１２９
６株の全細胞中の主要糖成分をレシェバリエの方法［Le
chevalier, M. P. (1968) Journal of Laboratory and
Clinical Medicine, 71, 934-944参照］に従い検討した
結果、特徴的な成分は検出されなかった。
【００２１】以上の菌学的性質からＳＡＮＫ ６１２９
６株は放線菌の中でもストレプトマイセス（Streptomyc
es）属に属することが明らかにされた。シャーリングと
ゴトリーブによるＩＳＰ菌株記載［Shirling, E. B. an
d Gottlieb, D., Int. J. Syst. Bacteriol.; 18, 68-1
89 and 279-392 (1968); 19, 391-512 (1969); 22, 265
-394 (1972) 参照］、ワックスマン著、ジ・アクチノミ
セテス第２巻［Waksman, S. A. (1961) The Actinomyce
tes 2 参照］、ブキャナンとギボンズ編バージーズマニ
ュアル［Buchanan, R. E. and Gibbons N. E. (1974) B
ergey's Manualof Determinative Bacteriology, 8th E
dition 参照］、ウィリアムズ等編バージーズ・マニュ
アル第４巻［Williams, S. T., et al. (1989) Bergey'
s Manualof Systematic Bacteriology 4 参照］、およ
びストレプトマイセス（Streptomyces）属放線菌に関す
る最近の文献に記載されている菌種と比較したところ、
ＳＡＮＫ ６１２９６株に類似する種は検索されなかっ
た。従って、ＳＡＮＫ ６１２９６株はストレプトマイ
セス（Streptomyces）属に属する一新菌株と同定され
た。該菌株はストレプトマイセス・エスピー（Streptom
yces sp.）ＳＡＮＫ６１２９６と命名表示されて、平成
８年４月１２日付けで工業技術院生命工学工業技術研究
所に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０５
が付された。
【００２２】以上、本発明の化合物Ａ−７５９４３の生
産菌について説明したが、放線菌は自然界において、ま
たは人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、
化学薬品処理等）により、変異を起こしやすく、本発明
のＳＡＮＫ ６１２９６株もこの点は同じである。本発
明にいうＳＡＮＫ ６１２９６株はそのすべての変異株
を包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学的
方法、例えば組換え、形質導入、形質転換等により得ら
れたものも包含される。すなわち、本発明の化合物Ａ−
７５９４３を生産する、ＳＡＮＫ ６１２９６株および
その変異株およびそれらと明確に区別されない菌株は、
すべてＳＡＮＫ ６１２９６株に包含されるものであ
る。
【００２３】本発明の化合物Ａ−７５９４３生産菌を培
養するに際し使用される培地としては、炭素源、窒素
源、無機イオンおよび有機栄養源等より選択されたもの
を適宜含有する培地であれば、合成または天然培地のい
ずれでも使用可能である。該栄養源としては、従来真菌
類や放線菌類の菌株の培養に利用されている公知の、微
生物が資化できる炭素源、窒素源および無機塩が使用で
きる。
【００２４】具体的には、例えば炭素源としてはグルコ
ース、フルクトース、マルトース、スクロース、マンニ
トール、グリセロール、デキストリン、オートミール、
ライ麦、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ、ダイズ粉、綿
実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一で、あるいは併
用して用いることができる。培地中の該炭素源の含量
は、一般には培地量の１〜１０重量％で変量するが、こ
の範囲に限定されない。
【００２５】また、窒素源としては、一般にタンパク質
またはその水解物を含有する物質を用いることができ
る。好適な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、落
花生粉、綿実油、綿実粉、カゼイン加水分解物、ファー
マミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エ
キス、生イースト、乾燥イースト、イーストエキス、マ
ルトエキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム等である。窒素源は、単一でまたは併用し
て培地量の０．２〜０．６重量％の範囲で用いられるこ
とが好ましい。
【００２６】さらに栄養無機塩としては、ナトリウム、
アンモニウム、カルシウム、フォスフォネート、サルフ
ェート、クロリド、カーボネート等のイオンを得ること
のできる通常の塩類を使用し得る。また、カリウム、コ
バルト、マンガン、マグネシウム等の微量の金属も使用
され得る。
【００２７】なお、液体培養に際しては、シリコン油、
植物油、界面活性剤を消泡剤として用いることもでき
る。
【００２８】ＳＡＮＫ ６１２９６株を培養して本発明
の化合物を生産するための培地のｐＨは６．５〜９．
０、好適には７．５〜９．０、最適には８．０〜９．０
である。
【００２９】また、ＳＡＮＫ ６１２９６株の生育温度
は、２０〜３５℃、好適には２５〜３０℃、最適には２
６〜２８℃である。
【００３０】本発明の化合物Ａ−７５９４３は、ＳＡＮ
Ｋ ６１２９６株を好気的に培養することにより得られ
る。好気的培養法としては、液体振とう培養法、通気撹
拌液体培養法等、通常用いられる公知の好気的培養法が
用いられ得る。
【００３１】前述の炭素源、窒素源および無機塩より調
製し、１２０℃、２０分間加熱滅菌したシード培地中
に、ＳＡＮＫ ６１２９６株を接種し、２６〜２８℃で
７日間前培養する。その後、生産培養培地へ接種して２
６〜２８℃で７日間本培養する。培養は、三角フラス
コ、ジャー、タンク中で行われる。
【００３２】培養終了後、培養液を遠心分離するか、ま
たはセライトを濾過助剤とした濾過操作により菌体と上
清とに分離する。上清をｐＨ３に調整し、再度酢酸エチ
ルで抽出する。この酢酸エチル抽出物を、さらに吸着
剤、例えば活性炭、アンバーライトＸＡＤ−１、同ＸＡ
Ｄ−４（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオン
ＨＰ−２０、同ＣＨＰ−２０Ｐおよび同ＨＰ−５０（三
菱化学（株）社製）等を用いて精製できる。このように
して得られたエキスは、さらにセファデックスＬＨ−２
０（ファルマシア社製）等の分配カラムクロマトグラフ
ィーあるいはデシル、オクタデシル化されたシリカゲル
を充填剤として用いた低圧逆相カラム（ローバーリクロ
プレップＲＰ−８、ＲＰ−１８；メルク社製）クロマト
グラフィー、ＨＰＬＣ［センシュウパックＯＤＳ−Ｈ，
Ｓ；ペガシルＯＤＳ（センシュウ科学社製）］等で精製
できる。
【００３３】一方、本発明の化合物Ａ−７５９４３は、
シクロヘキシミドを出発原料とする化学合成によっても
得ることができる。すなわち、コーンフェルドらの方法
［Kornfeld, E. C., et al. (1949) J. Am. Chem. Soc.
71, 150-159 参照］に従い、市販のシクロヘキシミド
（シグマ社製）より合成したジヒドロシクロヘキシミド
（ＩＩＩ）のイミド環を温和な条件下選択的加水分解
（第１工程）することにより得られる酸アミドアルコ−
ル（ＩＶ）を酸化剤を用いて酸化して（第２工程）本発
明の化合物（Ｉ）へ導く事ができる。
【００３４】また、（ＩＩＩ）を前記コーンフェルドら
の方法に従って加水分解して得られるカルボン酸（Ｖ）
を、カルボキシル基のアミド化反応（第３工程）、続い
て水酸基の酸化反応（第２工程）により（Ｉ）へ導く事
もできる。
【００３５】第１工程 選択的加水分解 ジヒドロシクロヘキシミド（ＩＩＩ）をアルカリを用い
て選択的にイミド環を加水分解する工程である。すなわ
ち、（ＩＩＩ）をメタノールやエタノール等のアルコー
ル類、テトラヒドロフランやジオキサン等の環状エーテ
ル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフォキシド
等と水の混合溶媒中で行われるが、メタノールやエタノ
ールが最適である。反応温度は室温〜１００℃が好まし
く、４０〜６０℃が最適である。用いるアルカリは、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、
水酸化バリウムなどのアルカリ金属やアルカリ土類金属
水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸
カリウム、炭酸カルシウム等のアルカリ金属およびアル
カリ土類金属炭酸塩、トリエチルアミン等のアミン類を
用いるが、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸
カリウム等のアルカリ金属およびアルカリ土類金属炭酸
塩が最適である。このようにして得た反応物を酸性にす
る事により、目的とする（ＩＶ）を得ることができる。
【００３６】
【化７】
【００３７】第２工程 酸化反応 第１工程で得た（ＩＶ）を酸化により（Ｉ）へ導く工程
である。用いる酸化剤として、無水クロム酸、ジクロム
酸ピリジニウム、クロロクロム酸ピリジニウム、ジクロ
ム酸ナトリウム等のクロム酸類およびその塩類、過マン
ガン酸ナトリウムや過マンガン酸カリウム等の過マンガ
ン酸塩類、Ｎ−ブロモコハク酸イミド、Ｎ−クロロコハ
ク酸イミド、Ｎ−ブロモアセトアミド、ｔ−ブチルヒポ
クロライト等のハロゲン化物を挙げることができる。無
水クロム酸、ジクロム酸ピリジニウム、クロロクロム酸
ピリジニウムが最適である。反応に用いる溶媒は、用い
る酸化剤によって異なるが、塩化メチレン、クロロホル
ム等のハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン、ジ
オキサン等の環状エーテル類、酢酸、ジメチルホルムア
ミド等を挙げることができる。
【００３８】
【化８】
【００３９】第３工程 加水分解 この工程は、第１工程で用いた（ＩＩＩ）を、前記コー
ンフェルドらの方法に従い、水酸化ナトリウムで加水分
解して得た（Ｖ）のカルボキシル基をアンモニアと縮合
させる工程である。縮合剤としては、シアノリン酸ジエ
チル、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩
酸塩が用いられる。また、（Ｖ）を塩化チオニル、オキ
サリルクロリド等で相当する酸クロリドとし、これをア
ンモニアと反応させてもよい。溶媒としては、試薬と反
応しなければ特に限定しないが、無水溶媒を必要とす
る。そのような無水溶媒としては、例えば、テトラヒド
ロフラン、ジオキサン、エーテル等のエーテル類、塩化
メチレンやクロロホルム等のハロゲン化炭化水素、酢酸
エチル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフォキシ
ド等が好適である。
【００４０】
【化９】
【００４１】本発明の化合物Ａ−７５９４３は種々の形
態で投与される。その投与形態としては、例えば錠剤、
カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投
与、または注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、
坐剤等による非経口投与を挙げることができる。これら
の各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩
壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コー
ティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用
しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００４２】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱
粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロ
ップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキ
シメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リ
ン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥
澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、
炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチ
レンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリ
ウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩
壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等
の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸
ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿
剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状
ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸
末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等が例示でき
る。さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、
たとえば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルム
コーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることがで
きる。
【００４３】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、
カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガ
ント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン
寒天等の崩壊剤等が例示できる。
【００４４】坐剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
ポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコー
ル、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グ
リセリド等を挙げることができる。
【００４５】注射剤として調製される場合には、液剤お
よび懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ま
しく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形する
に際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているも
のをすべて使用でき、例えば水、エタノール、プロピレ
ングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることがで
きる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに十
分な量の塩化ナトリウム、グルコース、あるいはグリセ
リンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶
解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
【００４６】さらに必要に応じて着色剤、保存剤、香
料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有せしめてもよ
い。
【００４７】上記医薬製剤中に含まれる有効成分化合物
の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通
常全組成物中１〜７０重量％、好ましくは１〜３０重量
％含まれる量とするのが適当である。
【００４８】上記医薬製剤の投与方法は特に限定はな
く、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾
患の程度等に応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、液
剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には
経口投与される。また注射剤の場合には単独であるいは
グルコース、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内
投与され、さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮内、
皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内
投与される。
【００４９】その使用量は症状、年齢、体重、投与方法
および剤形等によって異なるが、通常は成人に対して１
日あたり、上限として１０００ｍｇ（好ましくは５００
ｍｇ）であり、下限として０．０１ｍｇ（好ましくは
０．１ｍｇ、さらに好ましくは１ｍｇ）を投与すること
ができる。
【００５０】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、その前に骨吸収阻害活性の測定方法について
参考例で説明する。
【００５１】（参考例）１． 骨吸収抑制作用 北村の方法［Kitamura, K. (1993) Bone 14, 829-834参
照］に従って行った。まず、１８−２０日齢のＩＣＲ系
マウスより大腿骨および脛骨を摘出後、ハサミで細く切
り、１０ｍｌの培地（１０％のウシ胎児血清（以下「Ｆ
ＢＳ」という）を含むダルベッコ最小必須培地（以下
「ＤＭＥＭ」という））中で３０秒間撹拌した。２分間
静置後、回収した上清を８００ｒｐｍで遠心し、破骨細
胞および前破骨細胞を含む全骨細胞からなる沈渣を得
た。この沈渣を適量の培地に浮遊させ、５×１０-8Ｍの
ラット副甲状腺ホルモン断片（１−３４；シグマ社製）
を添加し、３７℃、５％炭酸ガス通気中６日間培養し
た。
【００５２】培養終了後、容器に付着した細胞をトリプ
シン−ＥＤＴＡにて剥がし、培地で２回洗浄してから、
５×１０5 ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整して、直径６ｍｍ、
厚さ１５０μｍにスライスした象牙片（新日本象牙社
製）を留置した９６穴ウエルに２００μｌ／ウエルにな
るように播種した。同時に、ジメチルスルフォキシドに
溶解した被検検体を添加し、３７℃、５％炭酸ガス下で
２日間培養した。象牙片に接着した細胞を除去し、アシ
ッドヘマトキシリン（シグマ社製）にて象牙片を１０分
間染色した後、水で洗浄した。顕微鏡下で、象牙片上に
染色された吸収窩の数を計測し、被検検体無添加の対照
群において形成された吸収窩の数を１００％としたとき
の、被検検体添加群の吸収窩形成抑制率を算出した。
【００５３】２． 急性骨吸収亢進モデルに対する作用 トレクセルらの方法［Trechsel, U., et al.(1987) J.
Clin. Invest. 80, 1679-1686 参照］に準拠して行っ
た。まず、８週齢の雄性ウィスターイマミチ系ラットの
両側甲状腺と副甲状腺を摘出した。手術後、１、２、３
および５日目に１０％エタノール−９０％ポリエチレン
グリコール４０００に溶解したレチノイド誘導体Ｒｏ１
３６２９８［Trechsel, U., et al.(1987) J. Clin. In
vest. 80,1679-1686 参照］を３０μｇ皮下投与して急
性骨吸収モデルラットとした。被検検体は、１０％エタ
ノール−９０％リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）の混合
溶液に溶解し、１ｍｌ／ｋｇの用量にて各群６匹の急性
骨吸収モデルラットに７日目まで１日１回皮下投与され
た。５日目と７日目にラット尾静脈より採血し、血中カ
ルシウム濃度を市販の測定キット（カルシウムＣテス
ト；和光純薬（株）社製）を用いて測定した。
【００５４】７日目の採血後、ラットを殺し、左右の大
腿骨を摘出し、二重エネルギーＸ線吸収測定装置（ＤＣ
Ｓ−６００Ｒ；アロカ社製）を用いて骨密度を測定し
た。甲状腺と副甲状腺を摘出してＲｏ１３６２９８のみ
を投与した群を対照群とし、血漿カルシウム濃度と骨密
度について被検検体を投与した群との比較を行った。
【００５５】実施例１ フラスコ培養 ストレプトマイセス・エスピー ＳＡＮＫ ６１２９６
（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０５）株をそのスラントから１
２０℃、２０分間滅菌したシード培地（１００ｍｌ）を
入れた５００ｍｌバッフル付き三角フラスコに白金耳接
種した。次いで、これを２８℃で７日間、２００ｒｐｍ
の振とう機で前培養した。この前培養液（２ｍｌ／フラ
スコ）を、それぞれ滅菌した生産培地１００ｍｌを含む
５００ｍｌバッフル付き三角フラスコ８０本に分注し、
２８℃で７日間振とう培養した。
【００５６】培養終了後、培養物を遠心分離（３０００
ｒｐｍ）し、その上清を３リットルの酢酸エチルで２回
抽出した。水層を濃塩酸でｐＨ３に調整した後、再度３
リットルの酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を水洗
し、さらに飽和食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。硫酸ナトリウムを濾別し、その濾液を減圧
下濃縮して暗赤色油状物（３．５ｇ）を得た。 このうち
３．４ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｓｉ
６０、６００ｇ；メルク社製）を用いて精製した。ま
ず、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１（１．２リットル）
で溶出し、次いでヘキサン：酢酸エチル＝２：８（０．
８リットル）、酢酸エチル（０．５リットル）、酢酸エ
チル：メタノール＝９：１（１．５リットル）、メタノ
ール（１リットル）で連続的に溶出し、それぞれの溶出
液を濃縮して参考例１に記載した方法で骨吸収阻害活性
を測定した結果、酢酸エチル：メタノール＝９：１の画
分に活性があり、他の画分には活性が認められなかっ
た。次に、該活性画分（１．１０ｇ）を、低圧カラムク
ロマトグラフィー（ローバーリクロプレップＲＰ−１
８、Ｃ−サイズ；メルク社製）を用いて精製した。ま
ず、メタノール：アセトニトリル：水＝３：１：７（５
００ｍｌ）で溶出した後、メタノール：アセトニトリ
ル：水＝４：１：５（６００ｍｌ）で溶出し、メタノー
ル：アセトニトリル：水＝３：１：７（８００ｍｌ）で
溶出した。各溶出画分の骨吸収阻害活性を参考例の１に
記載した方法で測定した結果、メタノール：アセトニト
リル：水＝４：１：５の溶出画分に活性が集中してい
た。さらに、該活性画分（１９０ｍｇ）をシリカゲル
（Ｓｉ６０、３８０ｇ；メルク社製）を用いた低圧カラ
ムクロマトグラフィーで精製した。０．４％メタノール
／塩化メチレン（３６０ｍｌ）で溶出後、４％メタノー
ル／塩化メチレン（５４０ｍｌ）で溶出し、１８ｍｌず
つ集めた各フラクションの活性を参考例の１に記載した
方法で測定した結果、２３〜３０番目のフラクションに
活性が認められた。
【００５７】活性のあったフラクションをまとめ、さら
に低圧カラムクロマトグラフィー（ローバーリクロプレ
ップＳｉ６０、Ａ−サイズ；メルク社製）で精製した。
酢酸エチル：アセトン＝９：１（１００ｍｌ）で溶出
後、酢酸エチル：アセトン＝３：１（４００ｍｌ）で溶
出し、フラクションコレクターを用いて各１１ｍｌずつ
集めた各フラクションの活性を参考例の１に記載した方
法で測定した結果、１３〜２０番目のフラクションに活
性があった。これらをまとめて濃縮することにより無色
泡沫状物質（Ｉ）（１０．５ｍｇ）を得た。
【００５８】シード培地組成： グルコース １．０ｇ スクロース １．０ｇ グリセロール １．０ｇ オートミール ０．５ｇ 生イースト １．０ｇ ソイビーンミール ２．０ｇ ビタミンフリーカザミノ酸 ０．５ｇ 炭酸カルシウム ０．５ｇ 消泡剤 ０．１ｇ （ＣＢ−４２２；日本油脂（株）社製） 水道水 １００ｍｌ （ｐＨ７．０）生産培地組成 ： グルコース ３０ｇ 三共イーストＰ １０ｇ ソイビーンミール ３０ｇ 炭酸カルシウム ４ｇ 硫酸マグネシウム七水和物 ２ｇ 消泡剤（ＣＢ−４２２） ０．５ｇ 水道水 １０００ｍｌ （ｐＨ７．０）実施例２． ジャー培養 フラスコ培養時と同様にして得た前培養液を生産培地の
２％をそれぞれ生産培地（７．５リットル）を入れた容
積３０リットルのジャーファーメンター２基に接種し７
日間通気撹拌培養した。培養終了後、セライト（１．２
ｋｇ）を濾過助剤として加え濾過した。濾液２３リット
ルと湿菌体（５．０ｋｇ）を得た。濾液は４０リットル
の酢酸エチルで２回抽出した。抽出液は、水洗後、飽和
食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧
下、酢酸エチルを留去して濾液脂溶性エキス（２３．４
３ｇ）を得た。菌体は、８０％含水アセトン（１５リッ
トル）、続いてアセトン（１２リットル）を用いて抽出
し、両者を併せて減圧下アセトンを溜去した。残渣を１
５リットルの酢酸エチルで３回抽出した。抽出液は、水
で洗浄後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。減圧下、酢酸エチルを溜去して菌体脂溶性エ
キス（５０．１０ｇ）を得た。
【００５９】濾液脂溶性エキス（２３．４３ｇ）をシリ
カゲルカラム（Ｓｉ６０、３００ｇ；メルク社製）に添
加し、５０％酢酸エチル／ヘキサン、酢酸エチル、２５
％メタノール／酢酸エチル、５０％メタノール／酢酸エ
チル、メタノールの順でそれぞれ１リットル分溶出し
た。参考例の１に記載した方法で各画分の活性を測定し
た結果、活性は５０％酢酸エチル／ヘキサン画分に集ま
っていた。次いで、該画分を濃縮したもの（５．２０
ｇ）を低圧クロマトグラフィーカラム（ローバーリクロ
プレップＲＰ−１８、Ｃ−サイズ；メルク社製）に添加
し、メタノール：アセトニトリル：水＝３：１：７（１
０００ｍｌ）で溶出した後、メタノール：アセトニトリ
ル：水＝３：１：６（２５０ｍｌ）で溶出した結果、メ
タノール：アセトニトリル：水＝３：１：６の画分（２
４６ｍｇ）に活性が集まった。さらに、この活性画分を
低圧クロマトグラフィーカラム（ローバーリクロプレッ
プ ジオール、Ｂ−サイズ；メルク社製）に添加し、２
％メタノール／クロロホルム（２００ｍｌ）で溶出され
る活性分画（７２．６ｍｇ）を得た。これを再度低圧ク
ロマトグラフィーカラム（ローバーリクロプレップ ジ
オール、Ｂ−サイズ）に添加し、２％メタノール／クロ
ロホルム＋０．３％トリフルオロ酢酸で溶出して活性物
質（Ｉ）（４６．２ｍｇ）を無色泡沫状物質として得
た。
【００６０】実施例３． 化学合成 （１）選択的加水分解 シクロヘキシミド（１７４ｍｇ、シグマ社製）のメタノ
ール（２ｍｌ）溶液に重曹（４００ｍｇ）の水（８ｍ
ｌ）溶液を加えて、５０℃で１５時間加熱した。反応終
了後、減圧下で溶媒を溜去した後の残渣を１Ｎ塩酸で酸
性とし、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和重
曹水で洗浄した後、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。減圧下で溶媒を溜去して得られた残渣
を酢酸エチルから再結晶後濾過して、（ＩＶ）（６９．
８ｍｇ）を得た。濾液は溶媒溜去後、シリカゲルカラム
（Ｓｉ６０、３ｇ；メルク社製）に添加し、５％メタノ
ール／クロロホルム（２０ｍｌ）で溶出した後、１０％
メタノール／クロロホルム（２０ｍｌ）で溶出、得られ
た結晶を酢酸エチルで再結晶してさらに（ＩＶ）（１
４．２ｍｇ）を得た。
【００６１】（２）選択的加水分解 シクロヘキシミド（７３６ｍｇ）をエタノール（７ｍ
ｌ）と水（７ｍｌ）に溶解した。この溶液に５％炭酸カ
リウム水溶液（９ｍｌ）を加えて、５０℃で７０分間加
熱した。反応終了後、減圧下で溶媒を溜去した。この残
渣を１Ｎ塩酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出した。酢酸
エチル層を飽和重曹水で洗浄した後、飽和食塩水で洗
浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を溜
去して得られた残渣を酢酸エチルから再結晶後濾過し
て、（ＩＶ）（２４０．５ｍｇ）を得た。濾液は溶媒溜
去後、シリカゲルカラム（Ｓｉ６０、２０ｇ；メルク社
製）に添加し、５％メタノール／クロロホルム（１００
ｍｌ）で溶出した後、１０％メタノール／クロロホルム
（１００ｍｌ）で溶出した。１０％メタノール／クロロ
ホルム画分を濃縮して得られた結晶を酢酸エチルで再結
晶して、（ＩＶ）（３３．６ｍｇ）を得た。
【００６２】飽和重曹水洗浄液は１Ｎ塩酸で酸性とした
後、ダイアイオンＨＰ−２０カラム（１００ｍｌ；三菱
化学（株）社製）に吸着させた。水洗後、５０％含水ア
セトンおよび１００％アセトンで溶出して得られた結晶
（１８１．７ｍｇ）を少量の含水メタノールから再結晶
して（Ｖ）（１０２．７ｍｇ）を得た。 （３）加水分解反応 （Ｖ）（３．３７５ｇ）を無水テトラヒドロフラン（２
５ｍｌ）に溶解し、氷水で冷却した。この溶液にアンモ
ニアガスを白い沈澱が析出しなくなるまで通した。これ
にシアノリン酸ジエチル（２．４０ｇ）を加え、さらに
アンモニアガスを３０分通した。反応終了後、減圧下溶
媒を溜去して酢酸エチルで抽出した。飽和食塩水で洗浄
した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を
溜去して、（ＩＶ）（１．９５ｇ）を得た。
【００６３】（４）酸化反応 （ＩＶ）（２５０ｍｇ）を塩化メチレン（１２ｍｌ）と
ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）の混合溶媒に溶解し
た。 この溶液にジクロム酸ピリジニウム（１．００ｇ）
と触媒量のトリフルオロ酢酸ピリジニウムを加えて、室
温で２４時間撹拌した。反応終了後、酢酸エチルと水を
加えて分配した。酢酸エチル層を水洗し、飽和食塩水で
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒
を溜去して得られた残渣をシリカゲルカラム（Ｓｉ６
０、１０ｇ；メルク社製）に添加し、１０％アセトン／
酢酸エチル（４０ｍｌ）で溶出した後、３０％アセトン
／酢酸エチルによる溶出液をフラクションコレクターで
１３ｍｌづつ集めた。活性のある１０〜２０番目のフラ
クションを濃縮して、（Ｉ）（２１７．５ｍｇ）を無色
泡沫状物質として得た。
【００６４】
【発明の効果】実施例１で得られたＡ−７５９４３の骨
吸収阻害活性を、参考例１に記載した方法で調べた結
果、吸収窩形成を５０％抑制するＡ−７５９４３の濃度
（ＩＣ50）は、０．３５μＭであった。また、参考例２
に記載した方法で調べたＡ−７５９４３の活性は以下に
示す表４および表５の通りであった。
【００６５】
【表４】 血中カルシウム濃度 （ｎ＝６）
【００６６】
【表５】 骨密度 （ｎ＝１２） 以上のごとく、本発明の化合物Ａ−７５９４３は低濃度
で骨吸収阻害作用を示す新規化合物であり、骨粗鬆症お
よび／または高カルシウム血症の治療薬として有用であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 榎田 竜三 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】式： 【化１】 で示される化合物Ａ−７５９４３。
  2. 【請求項２】式： 【化２】 で示される請求項１記載の化合物。
  3. 【請求項３】下記の性状を有するＡ−７５９４３； １）物質の性状： 無色泡沫状 ２）旋光度： ［α］25 D −２．７°（ｃ ０．５
    ２，クロロホルム中 ） ３）分子式： Ｃ１５Ｈ23ＮＯ4 （高分解能ＦＡＢ−マ
    ススペクトル法により測定） ４）分子量： 281 （ＦＡＢ−マススペクトル法により
    測定） ５）紫外線吸収スペクトル（エタノ−ル中）： 末端吸
    収のみ ６）赤外線吸収スペクトル： νmax ｃｍ-1 (クロロホ
    ルム中 )3528, 3411, 1710, 1686, 1592, 1457, 1450,
    1386. ７） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（δ：ｐｐｍ, 重ピリ
    ジン中) ：0.98 (3H, d), 1.09 (3H, d), 1.42 (1H, t
    d), 1.45 (1H, dd),1.69 (1H, m), 1.73 (1H, dt), 1.9
    4 (1H, m), 2.00 (1H, m),2.29 (1H, m), 2.45 (2H,
    d), 2.46 (1H, dd), 2.47 (1H, m),2.70 (1H, dt), 2.7
    8 (1H, m), 3.01 (1H, ddd), 4.87 (1H, ddd). ８）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（δ：ｐｐｍ，重ピリ
    ジン中) ：14.7 (q), 18.0 (q), 27.1 (d), 29.3 (t),
    32.8 (t), 35.0 (t),35.6 (t), 40.5 (d), 42.26 (t),
    42.33 (t), 69.6 (d), 78.1 (d),170.7 (s), 173.3
    (s), 211.0 (s). ９）溶解性： メタノ−ル、エタノ−ル、エ−テル、酢
    酸エチル、クロロホルム、アセトン、アセトニトリル、
    ピリジン、ジメチルスルフォキシドに可溶；ヘキサン、
    水に不溶。
  4. 【請求項４】ストレプトマイセス（Streptomyces）属に
    属するＡ−７５９４３生産菌を培養し、次いで、該培養
    物よりＡ−７５９４３を回収することを特徴とするＡ−
    ７５９４３の製造方法。
  5. 【請求項５】ストレプトマイセス属に属するＡ−７５９
    ４３生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Streptom
    yces sp.）ＳＡＮＫ ６１２９６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
    ５０５）である、請求項４記載の製造方法。
  6. 【請求項６】ストレプトマイセス・エスピー（Streptom
    yces sp.）ＳＡＮＫ ６１２９６（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
    ５０５）。
  7. 【請求項７】式： 【化３】 で示される化合物を酸化することを特徴とする、Ａ−７
    ５９４３の製造方法。
  8. 【請求項８】Ａ−７５９４３を含むことからなる医薬。
  9. 【請求項９】Ａ−７５９４３を含むことからなる骨粗鬆
    症治療剤。
  10. 【請求項１０】Ａ−７５９４３を含むことからなる高カ
    ルシウム血症治療剤。
JP13792996A 1996-05-31 1996-05-31 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３ Pending JPH09316068A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP13792996A JPH09316068A (ja) 1996-05-31 1996-05-31 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP13792996A JPH09316068A (ja) 1996-05-31 1996-05-31 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH09316068A true JPH09316068A (ja) 1997-12-09

Family

ID=15209994

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP13792996A Pending JPH09316068A (ja) 1996-05-31 1996-05-31 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPH09316068A (ja)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2007291075A (ja) 新規化合物ステレニン及びその製造方法
HU211514A9 (en) Fr 901228 substance and preparation thereof
EP0895981A1 (en) Novel terphenyl compounds and medicines containing the same
US6432978B1 (en) SF2809-I,II,III,IV,V and VI substances exhibiting chymase-inhibiting activities
JPWO2000042062A1 (ja) 新規デプシペプチド化合物
JPH02131588A (ja) 生理活性物質ｔａｎ―９３１、その誘導体、それらの製造法及び用途
EP0499489A1 (en) Polyhydroxycyclopentane derivatives, their preparation and their therapeutic use
JPH09316068A (ja) 骨吸収阻害物質ａ−７５９４３
WO1996027594A1 (en) Antitumour isocoumarins
JP3124373B2 (ja) 免疫抑制物質
JPH08151394A (ja) ジペプチド化合物
JP3156006B2 (ja) テトロン酸誘導体、その製造法及び用途
JP2000169495A (ja) 糖脂質、その製造法および用途
EP0629184A1 (en) TETRALIN DERIVATIVES AS HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS
JPH07123995A (ja) トリペプチド化合物
JPH05271267A (ja) Ｆｒ９０１４５９物質、その製法及び用途
JP2799581B2 (ja) 化合物ｔａｎ―１１４０およびその製造法
JPH06199892A (ja) Ｔａｎ−１６６６関連化合物
JPWO2000032587A1 (ja) キマーゼ阻害作用を有するｓｆ２８０９−ｉ、ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ、ｖおよびｖｉ物質
JPH09286779A (ja) 新規化合物レブラスタチン
JPH09169756A (ja) 生理活性物質ｅｉ−１９４１類
JP2001286292A (ja) 新規化合物ｆ−９０５５８及びその製造法
JPH08301862A (ja) Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種の抗生物質シリアノンおよびその化学誘導体並びにその製造法および使用
JP2004161745A (ja) 新規発酵生産物及びその製造法
JPH05301857A (ja) Ｗｓ６３９６７物質、その製法及び用途