JPH09502175A

JPH09502175A - 免疫およびｃｎｓ療法に有用な新規トリペプチド

Info

Publication number: JPH09502175A
Application number: JP7507652A
Authority: JP
Inventors: ゴールドスタイン，ギデオン; シエンバガムルテイ，ポニアー; ケーニグ，ジエイムズ・アイ
Original assignee: イミユノバイオロジー・リサーチ・インスチチユート・インコーポレーテツド
Priority date: 1993-08-26
Filing date: 1994-08-17
Publication date: 1997-03-04
Also published as: AU7868194A; ZA946008B; WO1995005841A1; DE69428909D1; NO960710L; ATE207757T1; KR960703612A; BR9407357A; HU9600432D0; FI960839A7; HUT73777A; EP0723454B1; US5639729A; FI960839A0; FI960839L; IL110585A0; CN1133563A; CA2169072A1; NO960710D0; PL313257A1

Abstract

(57)【要約】哺乳類の免疫および／または中枢神経系の細胞の機能を調整することができるトリペプチド、それらのペプチドを含有する製薬組成物およびそれらの使用方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】免疫およびＣＮＳ療法に有用な新規トリペプチド発明の技術分野本発明は一般的に免疫および中枢神経系の療法に有用なペプチドの分野に関し、さらに詳しくは生物学的に活性である新規のペプチドに関する。発明の背景免疫調節タンパク質のサイモポイエチンはウシおよびヒトの胸腺から単離されている。さらに、サイモポイエチンの生物学的活性を模倣した小さいペプチドが化学的に合成されている。例えば、米国特許第４，５０５，８５３号明細書および対応する欧州公開第１４６，２６６号明細書参照。かかるタンパク質および合成ペプチド1-関する大量の報告および特許が公開されている。米国特許第４，１９０，６４６号明細書には、サイモポイエチンの活性部位であり、配列Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号：１）を有するペンタペプチドのサイモペンチン、並びにこのペンタペプチドのアミノ末端および／またはカルボキシル末端に種々の基が置換しているペプチド誘導体が開示されている。サイモポイエチンはコリン作用性神経筋伝達を調整することが知られている［Ｇ．ＧｏｌｄｓｔｅｉｎａｎｄＷ．Ｗ．Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，３１：４５３−４５９（１９６８）；およびＧ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２４７：１１−１４（１９７４）］。サイモポイエチンはサイモポイエチン受容体（ＴＰＲ）と同様に脳内に存在するので、脳機能に関与していることは殆ど確実である。さらに最近、サイモペンチンが、ストレス保護活性を示す、ストレス誘発変化の拮抗物質として同定された［Ｖ．Ｋｌｕｓａｅｔａｌ．，ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ，２７：３５５−３６５（１９９０）］。老化および種々の身体的症状に付随する障害を含めて、ヒトおよび他の哺乳類の免疫系の機能障害を治療するのに有用な診断薬および／または治療薬として有用なペプチド、並びに中枢神経系機能の障害を治療するのに有用なさらなるペプチドの必要性は該技術分野でいまだ存在する。発明の要旨本発明は、生物学的に活性であり、そして診断薬としてまた免疫障害および中枢神経系障害を治療するのに有用である新規のトリペプチドを提供する。これらのペプチドは特に安定で吸収が良好であるので、経口経路の投与によっても活性である。従って、１つの態様において、本発明は式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ｒ₁（式中、Ｒ、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＲ₁は下記の詳細な説明中に記載した通りである）で示される新規ペプチドを提供する。これらのペプチドは免疫および／または中枢神経系の調整に有用である。もう一つ態様として、本発明は上記のペプチドを溶液合成、固相合成または酵素的合成によって製造する方法を提供する。さらにもう一つの態様において、本発明は１種またはそれ以上の上記のペプチドを薬学的に許容される担体との組合せで含んでなる製薬組成物を提供する。本発明のさらなる態様は、免疫系、特に胸腺の長年に亙る収縮に起因する老化効果に関連する種々の障害および欠損症を治療する方法を提供する。本発明はまた、不安およびうつ病のような精神障害を含む中枢神経系の障害、並びに慢性感染症、免疫不全およびストレスを治療する方法を提供する。これらの方法は患者に本発明の製薬組成物の有効量を投与することを含んでなる。本発明の他の態様および利点は、現在の好適な実施例を含有する以下の詳細な記述中に開示される。図面の簡単な説明図１はラットにおける血漿中ＡＣＴＨ濃度（ｐｇ／ｍｌ）（Ｙ軸）に対するインスリン誘発低血糖症の効果を示すグラフである。Ｘ軸は腹腔中に投与されたインスリン投与量（ＩＵ／ｋｇ）である。図２は、インスリン誘発ＡＣＴＨ分泌に対する、本発明のペプチド、アセチル −Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの効果を、特別に経口投与（丸印し）対皮下投与（三角印）で比較して示すグラフである。Ｙ軸は血漿中のインスリン誘発ＡＣＴＨ（ｐｇ／ｍｌ）であり、Ｘ軸はペプチドの投与量（ｍｇ／ｋｇ）である。図３は、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド（ＩＲＩ−６９５）を投与した時、実施例１１に記載の不安についての高度プラス迷路試験によって評価された、ラットにおける社会的ストレスに対する行動反応の低下を示すグラフである。Ｙ軸はオープンアーム上での消費時間のパーセントであり、Ｘ軸は、ストレスありとストレスなし、およびペプチド前処理ありとペプチド前記処理なしのラット群である。図４はアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドの薬物速度論を示すグラフであり、ラット（Ｎ＝４／時点）への一回投与後のペプチドの血漿中平均濃度（±Ｓ．Ｄ．）として報告されている。Ｔ軸はペプチド濃度（ｎｇ／ｍｌ）であり、Ｘ軸は投与後の時間（分）である。報告された投与量は５ｍｇ／ｋｇ（白丸印）、５０ｍｇ／ｋｇ（白三角印）および３００ｍｇ／ｋｇ（白正方形印）であった。発明の詳細な記述本発明は、式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＹはＰｒｏ、デヒドロ−Ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）で示されるペプチドを提供する。驚くべきことに、本発明者らは、置換アミド基を含有するこれらのトリペプチドが４または５個のアミノ酸の鎖長さであるサイモペンチンペプチド類似体と同様な様式で作用することを今回見出した。従って、本発明のトリペプチドは哺乳類の免疫システムを調整しそしてそれに作用することができる。それらはまた中枢神経系も調整することができる。次のペプチドが特に好適である：アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド。この開示内容を通して、それらの製剤中で使用されるペプチドおよびある種の物質のアミノ酸成分は便宜上略語で表す。各アミノ酸についての３文字略語は大部分良く知られている。本明細書で定義されるように、低級アルキルは１ないし１０個の炭素原子（Ｃ₁−Ｃ₁₀）を有するアルキル、即ち、一般式ＣＨ_nＨ_2n+1（ｎは１ないし１０である）で示される化合物と定義される。同様に、低級アルカノイルは１ないし１０個の炭素原子を有するアルカノイル、即ち、一般式（式中、ｎは０ないし９である）で示される化合物と定義される。本発明のペプチドは一般的に既知技術によって製造することができる。好都合には、本発明のポリペプチドの合成的製造は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．，８５：２１４９−２１５４（１９６３）に記載の固相合成法によるものとすることができる。この技法は良く知られていて、ペプチド合成の慣用方法である。合成の固相法には、固体の樹脂粒子に共有結合によって結合している成長中のペプチドに、保護されたアミノ酸が段階的に付加されることを含む。この方法によれば、試薬および副産物は濾過によって除去され、従って中間体を精製する必要がなくなる。この方法の一般的概念は、固体重合体にペプチド鎖の第一アミノ酸を共有結合によって結合することに依存する。所望の配列が集成されるまで、保護されたアミノ酸を毎回１個（段階的方法）か、またはブロック（区分的方法）で連続して付加する。最後に、保護されたペプチドを固体の樹脂支持体から取り出し、保護基を切断し去る。アミノ酸は樹脂としていずれの適切な重合体にも結合させることができる。樹脂は、第一の保護されたアミノ酸が共有結合によってしっかりと結合できる官能基を含有しなければならない。セルロース、ポリビニルアルコール、ポリメチルメタクリレートおよびポリスチレンのような種々の重合体はこの目的に適している。適切な樹脂は市販されていて、当業者には良く知られている。かかる合成で使用できる適切な保護基として、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、トシル（Ｔｏｓ）、ｏ−ブロモ−フェニルメトキシカルボニル（ＢｒＺ）、２，６−ジクロロベンジル（ＢｚｌＣｌ₂）、およびフェニルメトキシカルボニル（ＺまたはＣＢＺ）が挙げられる。追加の保護基はＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，上記文献，並びにＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，「有機化学における保護基」（ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ），ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７３に記載されている。これら両文献は引用することによって本明細書中に取り込まれる。本発明のペプチドの製造の一般操作法には、先ず最初に、保護されたカルボキシ末端アミノ酸を樹脂に結合させることが含まれる。結合の後、樹脂を濾過し、洗浄し、そしてカルボキシ末端アミノ酸のαアミノ基上の保護基（望ましくはｔ −ブチルオキシカルボニル）を除去する。この保護基の除去は勿論、そのアミノ酸と樹脂との間の結合を損なうことなく行なわねばならない。次いで、アミノ基、および必要な場合、側鎖が保護された次のアミノ酸を樹脂上のアミノ酸の遊離 α−アミノ基に連結させる。この連結は第二アミノ酸の遊離カルボキシル基と樹脂に結合した第一アミノ酸のアミノ基との間のアミド結合の形成によって起る。すべてのアミノ酸が樹脂に結合するまで、この作業手順をアミノ酸について逐次反復する。最後に、保護されたペプチドを樹脂から切断し、保護基を除去して所望のペプチドを得る。ペプチドを樹脂から分離しそして保護基を除去する切断方法は樹脂および保護基の選択に依存し、ペプチド合成の当業者には既知である。ペプチド合成の他の技法はＢｏｄａｎｓｚｋｙｅｔａｌ．，ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版（Ｊｏｈｎ，ＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ：１９７６）に記載されている。例えば、本発明のペプチドはまた標準溶液ペプチド合成方法を使用して合成することもでき、アミド結合形成の化学的または酵素的方法を使用してアミノ酸またはペプチド断片を段階的またはブロック的に連結することを含む［例えば、Ｈ．Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ，「ペプチド、分析、合成、生物学」（ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｂｉｏｌｏｇｙ），ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（ＮｅｗＹｏｒｋ１９８７），ｐ．１０３−１６５；Ｊ．Ｄ．Ｇｌａｓｓ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ１６７−１８４；および欧州特許出願公開第０３２４６５９号明細書参照、これらは酵素的ペプチド合成法を記載している］。これらの溶液合成法は当業界では既知である。本発明のペプチドはまた当業者に既知である他の技法、例えば、遺伝子工学技術によって製造することもできる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，「分子クローニング、実験室手引書（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ），第二版，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８９）参照。これらのペプチドの酸−または塩基付加塩もまた診断薬および／または治療薬として使用されることが本発明によって開示される。これらのペプチドと塩を形成し得る酸として、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸およびリン酸などのような無機酸が挙げられる。有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、くえん酸、ケイ皮酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸なども本発明の塩を形成するのに使用することができる。酸性部分を有するそれらのペプチドと塩を形成し得る塩基の非専用の表には、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなどのような無機塩が含まれる。かかる使用のための有機塩基として、それらに限定されることはないが、モノ−、ジ−、とトリ−アルキルおよびアリールアミン（例えば、トリメチルアミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン）および場合により置換されたエタノールアミン（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン）が挙げられる。本発明のペプチドは哺乳類およびヒトの免疫および／または中枢神経系に及ぼす種々の調節作用を持つのに十分な生物学的利用能を有する。特異的に、本発明のペプチドは、下記の実施例１１に記載の薬学速度論研究によって示されるように、約５０ないし１００分の消失半減期を有する。これらのペプチドおよびこれらのペプチドを含有する組成物は驚くべきことに、哺乳類の免疫および／または中枢神経系に及ぼす種々の調整作用を示す。例えば、本発明のペプチドは自己免疫疾患、並びに免疫系の障害を特徴とする他の症状に対する処置治療を提供する。本ペプチドはこの免疫調節特性を有するために、それらは哺乳類の免疫系での変化に作用することができるから、それらはヒトおよび多分他の動物の処置において治療学的に有用である。本発明のペプチドはまた抗不安治療薬として有用であることもできる。例えば、本発明のペプチドで患者を前処理すると、ストレス反応を媒介するコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）の水準を減少させることができる。さらに、本発明のペプチドで前処理したラットでは、高度プラス迷路試験（げっ歯類での不安についての動物モデル）によって測定されたように、社会的ストレスに対する行動反応の低下が観察されている。この試験は潜在的な抗不安性化合物の種類を同定ものとして当業界で十分確立され、そしてラットでの社会的ストレスに対する行動反応を研究するのに使用されてきた［Ｐｉｃｈ，Ｅ．Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１８：４９５−５０７（１９９３）；Ｐｅｌｌｏｗ，Ｓ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．，１４：１４９−１６７（１９８５）参照］。従って、本発明のペプチドは抗うつ病療法として有用であり、同様に他のストレス誘発疾患の治療に有用である。また、本発明によるペプチドは免疫系に及ぼす老化の効果を減少させるのに使用することができる。胸腺が年齢と共に収縮するにしたがって、胸腺誘導的ポリペプチドであるサイモポイエチンの濃度が低下し、その結果ＣＲＦ、ストレス誘発アドレノコルチコトロピンホルモン（ＡＣＴＨ）およびコルチコステロイドの濃度が比例して増加する。従って、サイモポイエチンと同様の生物学的活性を有する本発明のペプチドを投与すると、無能または非機能的免疫系に関連する老化効果を減少させるのに役立つ。これらのペプチドはまた、慢性感染または免疫系の不全を有する患者に投与した場合、免疫刺激剤として有用であることができる。免疫不全は癌またはその治療、ＨＩＶおよび単純ヘルペスを含むウイルス感染その他の結果に起因することがある。その他、ペプチドは大手術の間のストレスまたは他の外傷、例えば、熱傷に付随するストレスを治療するのに有用である。本発明はさらに１種もしくはそれ以上の上記のペプチドまたはそれらの酸もしくは塩基付加塩を含有する製薬組成物を提供する。本ペプチド或いはペプチドまたはそれらの酸もしくは塩基塩を含有する製薬組成物は一般的に、細胞性免疫が主体であり、特に免疫に不全があるいずれの領域においても有用であると考えられる。本発明の製薬組成物はまた中枢神経系の不均等を調整するのに有用である。本発明は被検者の免疫系および／または中枢神経系の疾患を原因とする症状を治療する方法を提供し、その方法は本発明の少なくとも１種のペプチドまたは製薬組成物の治療的有効量を前記被検者に投与することを含んでなる。本明細書で使用されるように、用語「治療的有効量」とは、上記の症状を治療するのに有効である量を意味する。本発明の製薬組成物を製造するためには、活性成分として本発明のペプチドを通常の製剤配合技法に従って製剤担体との密接な混合物に配合する。この担体は、投与に望ましい製剤、例えば、経口剤、経直腸剤、点鼻剤、または注射剤の形態に依存して、多種類の形態を取ることができる。現在、好適な剤形は経口的なものである。組成物を好適な経口投与形態に製造する場合、いずれの使用可能な製剤媒体も使用することができる。経口液体製剤の場合（例えば、懸濁剤、エリキシル剤および液剤）、例えば、水、油、アルコール、香味剤、保存剤、着色剤などを包含する媒体を使用することができる。経口固体剤（例えば、散剤、カプセル剤および錠剤）を製造するには、澱粉、砂糖、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを包含する媒体を使用することかできる。制御放出形態も使用することができる。錠剤およびカプセル剤は投与が容易であるから、最も有利な単位経口投与形態であり、その場合固体の製剤担体が使用されることは明らかである。所望の場合、錠剤は標準技法によって糖コーティングまたは腸溶性コーティングとすることができる。注射剤製品の場合、担体は通常無菌水を含んでなるが、他の成分、例えば、溶解を促進する、または保存の目的のための成分を含むことができる。注射用懸濁剤もまた製造することができ、その場合適切な液体担体、懸濁剤などを使用することができる。本発明のトリペプチドは一般的に約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重以上ないし約３０ｍｇ／ｋｇ体重の量で非経口的に投与する場合に有効である。好適な量は約０．３ｍｇ／ｋｇである。本発明のペプチドは経口的に投与する場合、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重以上ないし約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で一般的に活性である。好適な量は約３ｍｇ／ｋｇである。これらのペプチドはこの濃度で活性であるので、経口投与のための錠剤粒径の製薬剤型に特に適合する。上記の投与量はヒトの場合、例えば、毎日投与ないし週少なくとも２回投与の範囲内の変わる期間で投与するのが適当である。現在の好適な投与周期は週３回である。しかし、究極的には、投薬養生法は患者の身体状況および治療される症状、例えば、ウイルス性疾患の持続期間に依存し、養生法は病気の持続期間について選択される。慢性疾患、例えば、ストレス、ＨＩＶなどの場合、養生法は症状の持続期間に依存する。次の実施例は本発明を制限することなく本発明を説明するために提供するものである。実施例中および明細書を通して、別記しない限り、部は重量単位である。上記の略語の外に、実施例では次の略語が使用される：トリフルオロ酢酸にはＴＦＡ；酢酸にはＨＯＡｃ；メチレンクロリドにはＣＨ₂Ｃｌ₂；アセトニトリルにはＣＨ₃ＣＮ；ジメチルホルムアミドにはＤＭＦ；酢酸アンモニウムにはＮＨ₄ＯＡｃ；水酸化アンモニウムにはＮＨ₄ＯＨ；ｎ−プロパノールにはｎ−ＰｒｏＯＨ；ｎ−ブタノールにはｎ−ＢｕＯＨ；ピリジンにはＰｙｒ；ジシクロヘキシル−カルボジイミドにはＤＣＣ；１−ヒドロキシ−ベンゾトリゾールにはＨＯＢｔ；ジメチルアミノピリジンにはＤＭＡＰ；フッ化水素にはＨＦ；トリクロロ酢酸にはＴＣＡ；ベンズヒドリルアミンにはＢＨＡ；ｐ−メチルベンズヒドリルアミンにはｐ−ＭＢＨＡ；ジイソプロピルカルボジイミドにはＤＩＣ；Ｎ−メチルモルホリンにはＮＭＭ；メタノールにはＭｅＯＨ。他の標準的な略語は、「ペプチド、分析、合成、生物学」（ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ），第１巻および第２巻、Ｅ．ＧｒｏｓｓａｎｄＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（ＮｅｗＹｏｒｋ１９８７）、および「生物化学学名命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会」（“ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎｏｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ”），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４５：６４８９−６４９７（１９７０）およびＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５０：３２１５−３２１６（１９７５）を参照して確認することができる。これらの実施例によって、本発明のペプチドを製造する好適な方法が説明される。これらの実施例は本発明の範囲を説明するだけものであって、本発明の範囲を制限するものではない。実施例１− ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの合成Ａ．Ｎ−イソブチルアミノメチル樹脂の製造Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂（２０ｇ、１．０６ｍモルのＣｌ／ｇ）をイソブチルアミン（２００ｍＬ）で４５℃で７２時間処理した。フラスコを大気圧下でロータリーエバポレーター中でのゆるやかな回転によって撹拌した。７２時間後、過剰のイソブチルアミンを濾過によって除去し、樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂（３×１００ｍＬ）、ＤＭＦ（３×１００ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３×１００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×１００ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３×１００ｍＬ）および無水エーテル（３× １００ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を減圧下で乾燥した（２０．０５ｇ）。Ｂ．ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの固体相合成上記のペプチドは段階的連結を経る固体相方法によって合成した。合成は３ｍモルのＮ−イソブチルアミノメチル樹脂（３ｇ、１ｍモル／ｇの樹脂）を用いて開始した。アミノ酸はすべてαアミノ基をＢｏｃ基で保護した。Ａｒｇのグアニジノ側鎖を保護するためにＴｏｓ基を使用した。Ａｓｐの側鎖カルボキシル基はＢｚｌで保護した。連結はすべてジイソプロピルカルボジイミド−ＨＯＢｔ法によって下記のプロトコールに従って行った：各段階の試薬時間（分）１．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分２．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×５分３．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×２５分４．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分５．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の１０％ＮＭＭ２×５分６．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分７．ＤＭＦ洗浄２×１分８．ＤＭＦ中のＢｏｃ−アミノ酸（９ｍモル）および１×３分ＨＯＢｔ（３ｍモル）９．ＤＩＣ（９ｍモル）を上記のものに添加し振盪する１×１８０分１０．必要な場合、段階４−９を反復して再連結する１１．ＤＭＦ洗浄３×１分。ＡｒｇのＮ−末端Ｂｏｃ基を除去し中和した後、得られたペプチド−樹脂をＨＯＢｔ（１２ｍモル）およびＤＩＣ（１２ｍモル）の存在下でヘキサン酸（１．５ｍＬ、１２ｍモル）と連結させた。次いで、樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（３×５０ｍＬ）で洗浄し、最後に真空オーブン中で３０℃で乾燥した（４．４６ｇ）。無水液体ＨＦ（４５ｍＬ）、ｐ−クレゾール（１．４ｍＬ）、ｐ−チオクレゾール（１．４ｍＬ）、およびジメチルスルフィド（１．４ｍＬ）中で０℃で１時間および２０℃で３時間撹拌することによって、２バッチ（２．２３ｇ／バッチ）中のペプチドを樹脂支持体から切断した。減圧下で過剰のＨＦを除去した後、樹脂−ペプチド混合物を無水ジエチルエーテル（３×２００ｍＬ）で抽出した。エーテル抽出物は廃棄した。次いで、３０％酢酸（３×１００ｍＬ）で切断ペプチドを抽出した。減圧下で溶媒を除去した後、得られた残渣を水（６０ｍＬ）中に溶解し、真空凍結乾燥した（１．１ｇ）。この固体を３０％酢酸（２０×２０ｍＬ）中に溶解し、３０％酢酸中のアンバーライトＩＲＡ−６８（酢酸塩型）イオン交換カラム（６０ｇ、１．６ｍ当量／ｍｌ、２．７３ｃｍ内径×１８ｃｍ長さ）に６０ｍＬ／時間の流速で通塔した。適切なフラクションを合併し、真空凍結乾燥した（９３０ｍｇ）。粗ペプチドをＶｙｄａｃ２１８ＴＰ１０２２カラム（２２×２５０ｍｍ）を使用する分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。使用した移動相は下記の通りである：Ａ＝０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂ＯＢ＝０．１％ＴＦＡ／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏ４：１ｖ／ｖ。６０分に亙る５％Ｂから２０％Ｂへの線状勾配を１５ｍＬ／分の流速で使用した。関連フラクションを合併し、溶媒を減圧下で除去した。水性残渣を真空凍結乾燥して、最終生成物（５１５ｍｇ）を得た。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＭｅｒｃｋＦ−２５４シリカプレート（５×１０ｃｍ）上で次の溶媒系（ｖ／ｖ）で行った：Ｒｆ（１）＝０．４７（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ）４：１：１）Ｒｆ（２）＝０．６８（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：ＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、１：１：１：１）Ｒｆ（３）＝０．８３（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｐｙｒ：Ｈ₂Ｏ、５：４：４：２）。アミノ酸分析（ＡＡＡ）：Ａｒｇ１．０４（１）、Ｐｒｏ１．００（１）、Ａｓｐ０．９７（１）。液体クロマトグラフィー質量スペクトロメトリー（ＬＣ−ＭＳ）：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝５４０ａ．ｍ．ｕ．（分子量５３９．６９）、式中、ＭＨ⁺は陽電荷質量イオンを表し；ｍ／ｚは質量／電荷であり；ａ．ｍ．ｕ．は原子質量単位である。実施例２− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの合成上記のペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルを実施例１に記載の固体相合成法によって合成した。保護されたアミノ酸を順番にＮ −イソブチルアミノメチル樹脂（３．４ｇ、３．２ｍモル）に付加した。ＡｒｇのＮ−末端Ｂｏｃ基を除去し中和した後、得られたペプチド−樹脂を、４−ジメチルアミノピリジン（１２０ｍｇ）を含有するＣＨ₂Ｃｌ₂（７０ｍＬ）中の酢酸無水物（８ｍＬ）を使用して３０分間でアセチル化した。次いで、樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（３×５０ｍＬ）で洗浄し、最後に３０℃の真空オーブン中で乾燥した。ペプチドを液体フッ化水素を使用して固体支持体から切断し、実施例１に記載のＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．３６、Ｒｆ（２）＝０．６２、Ｒｆ（３）＝０．８１ＡＡＡ：Ａｒｇ０．９９（１）、Ｐｒｏ０．９７（１）、Ａｓｐ１．０５（１）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４８４ａ．ｍ．ｕ．（分子量４８３．５７）。実施例３− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの溶液相合成Ａ．Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル −１５℃の酢酸エチル（７０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ（６．４６ｇ、２０ｍモル）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（２．２ｍＬ、２０ｍモル）およびイソブチルクロロホルメート（２．６ｍＬ、２０ｍモル）を添加した。−１５℃で１０分の活性化時間の後、イソブチルアミン（２．０ｍＬ、２０ｍモル）を添加した。反応混合物を−１５℃で３０分間撹拌し、次いで室温まで放温した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を５％炭酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）で急冷した。透明な２層を分別漏斗に移し、有機層を連続して５％炭酸ナトリウム溶液（２×５０ｍＬ）、水（３×５０ｍＬ）、５％くえん酸（２×５０ｍＬ）および水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、白色固体を得た。収量６．０５ｇ（理論値の７９．９％）。Ｂ．ＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル酢酸エチル（２０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル（１．８９ｇ、５ｍモル）の溶液に、５ＮＨＣｌ−酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加した。溶液を４０分間撹拌し、減圧下で濃縮して、油として生成物、ＨＣＬ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチルを得た。生成物をＫＯＨペレット上で真空中で一晩乾燥した。Ｃ．Ｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル０℃のＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＺ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−Ｐｒｏ−ＯＨ（２．２１ｇ、５ｍモル）の溶液に、０．５ＭＨＯＢｔ／ＤＭＦ（１０ｍＬ）および０．５ＭＤＣＣ／ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）を添加した。０℃で３０分間撹拌した後、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル（１．５７ｇ、５ｍモル）およびＮＭＭ（１．１ｍＬ、１０ｍモル）の溶液を添加した。反応混合物を０℃で２時間、室温で一晩撹拌した。沈殿したジシクロヘキシル尿素を濾過し去り、濾液を減圧下で濃縮して、粗ペプチドＺ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチルを固体として得た（２．８４ｇ、８４％）。Ｄ．アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルＺ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチル（２．８４ｇ）を酢酸（１００ｍＬ）中に溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ（２．７ｇ）を添加した。この溶液を４５ｐｓｉの水素ガスで水素化処理した。反応をＴＣＬによって監視し、２４時間後に触媒を濾過し去った。溶媒を減圧下で除去して生成物、Ａｒｇ− Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルを油として得た。この生成物を氷酢酸（１０ｍＬ）中に溶解し，５部分の酢酸無水物（毎回１ｍＬ）で処理することによってアセチル化した。４時間撹拌した後、反応を水の添加（５ｍＬ）によって停止させ、溶媒を減圧下で除去した。残渣を水（４９ｍＬ）中に溶解し、真空凍結乾燥した。粗ペプチドを実施例１に記載の操作法に従って分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。生成物を一定重量にまで冷凍真空乾燥した（１８０ｍｇ）。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．３６、Ｒｆ（２）＝０．６０、Ｒｆ（３）＝０．７０ＡＡＡ：Ａｒｇ０．９９（１）、Ｐｒｏ１．０１（１）、Ａｓｐ１．０１（１）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４８４ａ．ｍ．ｕ．（分子量４８３．５７）。実施例４− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ−イソブチルの合成Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチルは、実施例３Ａに記載の操作法に従って、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（ＯＢｚｌ）−ＯＨをイソブチルアミンと連結させることによって製造した。これをＨＣｌ−酢酸エチルを使用して除タンパク質し、ペプチドの塩酸塩を真空中で乾燥した。Ａｃ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨとＨＣｌ．Ｓｅｒ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチルの連結は実施例３Ｃに記載の操作法に従って行なった。保護されたトリペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソブチルを３Ｄに記載の操作法に従って水素化処理してベンジル基を除去した。粗ペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ−イソブチルをＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．３８、Ｒｆ（２）＝０．４０、Ｒｆ（３）＝０．６４ＡＡＡ：Ａｒｇ０．９８（１）、Ｐｒｏ１．０２（１）。ペプチド加水分解の条件下では、Ｓｅｒは分解を受けたので、検出できなかった。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４５６ａ．ｍ．ｕ．（分子量４５５．５６）。実施例５− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−ＮＨ−イソブチルの合成位置３のＳｅｒの代わりにＴｈｒを置換したペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−ＮＨ−イソブチルを実施例４に記載の通り合成した。このペプチドの特徴は次の通りである：ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．４、Ｒｆ（２）＝０．６４、Ｒｆ（３）＝０．７７ＡＡＡ：Ａｒｇ１．０１（１）、Ｐｒｏ０．９９（１）、。ペプチド加水分解の条件下では、Ｔｈｒは分解を受けたので、検出できなかった。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４７０ａ．ｍ．ｕ．（分子量４６９．５９）。実施例６− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−フェニルエチルの合成Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−フェニルエチルは、実施例３Ａに記載の操作法に従って、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨとフェニルエチルアミンとを連結させることによって製造した。これを４ＮＨＣｌ−ジオキサンの使用によって除タンパク質し、ペプチドの塩酸塩をＮａＯＨペレット上で真空中で一晩乾燥した。アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨとＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−フェニルエチルとの連結は実施例３Ｃに記載の操作法に従って行なった。保護されたトリペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−フェニルエチルは、実施例３Ｄに記載の操作法に従って、触媒的水素化処理してベンジル基を除去した。粗ペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−フェニルエチルをＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．３２、Ｒｆ（２）＝０．６０、Ｒｆ（３）＝０．７５ＡＡＡ：Ａｒｇ０．９８（１）、Ｐｒｏ１．０１（１）、Ａｓｐ１．０２ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝５３２ａ．ｍ．ｕ．（分子量５３１．６２）。実施例７− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ−イソブチルの合成アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ−イソブチルは、実施例１Ｂに記載の通り、固体樹脂粒子に共有結合によって結合した成長中のペプチド鎖に、保護されたアミノ酸を段階的に付加することを含む固体相法によって合成した。合成は４．５ｍモルのＮ−イソブチルアミノメチル樹脂（４．５ｇ、１ｍモル／ｇの樹脂）を用いて開始した。アミノ酸はすべてＢｏｃ基によってそのαアミノ基を保護した。Ａｒｇのεアミン側鎖を保護するのに２−クロロベンジルオキシカルボニル基を使用した。連結はジイソプロピルカルボジイミド−ＨＯＢｔ法によって下記のプロトコールに従って行った：各段階の試薬時間（分）１．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分２．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×５分３．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×２５分４．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分５．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の１０％ＮＭＭ２×５分６．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分７．ＤＭＦ洗浄２×１分８．ＤＭＦ中のＢｏｃ−アミノ酸（１３．５ｍモル）１×３分およびＨＯＢｔ（１３．５ｍモル）９．ＤＩＣ（１３．５ｍモル）を上記のものに添加し１×１８０分振盪する１０．必要な場合、段階４−９を反復して再連結する１１．ＤＭＦ洗浄３×１分。ＡｒｇのＮ−末端Ｂｏｃ基を除去し中和した後、得られたペプチド−樹脂を４ −ジメチルアミノピリジン（１２０ｍｇ）を含有するＣＨ₂Ｃｌ₂（７０ｍＬ）中の酢酸無水物（１０ｍＬ）を使用して３０分間アセチル化した。次いで樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（３×５０ｍＬ）で洗浄し、最後に３０ ℃の真空オーブン中で乾燥した（６．８ｇ）。保護されたペプチド−樹脂を、脱除剤としてｐ−クレゾール、ｐ−チオクレゾールおよびジメチルスルフィドの存在下、常時撹拌して、０℃で１時間そして２０℃で３時間、液体フッ化水素で処理した。過剰のＨＦを真空で除去し、残渣をエーテルで処理して脱除剤の生成物を除去した。ペプチドを３０％酢酸（３×５０ｍＬ）で抽出し、溶媒を真空で蒸発させ、生成物を真空凍結乾燥した（１．０５１ｇ）。粗ペプチドを先ず最初にアンバライトＩＲＡ−６８イオン交換カラムで精製し；さらに分取Ｃ₁₈カラムでの数回の逆相ＨＰＬＣ溶出によって、精製を行なった。使用した溶媒は：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有する水（緩衝液Ａ）および０．１％ＴＦＡを含有するＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏ（４：１）（緩衝液Ｂ）であった。特定の溶出に依存して、１２０分までの間の０−５０％Ｂの線形勾配を使用した。ペプチドを含有する適切なフラクションを収集し、溶媒を真空で蒸発させて、生成物、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ−イソブチル＝ＴＦＡを真空凍結乾燥した。このペプチドのＴＦＡ塩をイオン交換カラムを使用して酢酸塩型に転化した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をＭｅｒｃｋＦ−２５４プレート（５× １０ｃｍ）上で次の溶媒系（ｖ／ｖ）で行なった：Ｒｆ（１）＝０．４３（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、４：１：１）Ｒｆ（２）＝０．６８（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：ＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、１：１：１：１）Ｒｆ（３）＝０．８６（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｐｙｒ：Ｈ₂Ｏ、５：４：４：２）。アミノ酸分析（ＡＡＡ）：Ａｒｇ１．２０（１）、Ｐｒｏ１．１７（１）、Ｖａｌ０．６４（１）。液体クロマトグラフィー質量スペクトロメトリー（ＬＣ−ＭＳ）：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４６８．５ａ．ｍ．ｕ．。実測分子量＝４６７．５（理論分子量＝４６７．６２）。ＭＨ⁺、ｍ／ｚおよびａ．ｍ．ｕ．は上記の通りである。実施例８− デスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの固体相合成Ｒ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４（１９６３）に記載の固体相法によって、上記のペプチドを合成した。固体相合成法には、固体樹脂粒子に共有結合によって結合している成長中のペプチド鎖に、保護されたアミノ酸を段階的に付加することが含まれる。４ｍモルのＮ−イソブチルアミノメチル樹脂（４．ｇ、１ｍモル／ｇの樹脂）を用いて、合成を開始した。アミノ酸はすべてＢｏｃ基によってそのアミノ基を保護した。Ａｓｐのβカルボキシル基を保護するのにベンジル基を使用した。すべての連結はジイソプロピルカルボジイミド−ＨＯＢｔ法によって下記のプロトコールに従って行った：各段階の試薬時間（分）１．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分２．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×５分３．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の４０％ＴＦＡ−１０％アニソール１×２５分４．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分５．ＣＨ₂Ｃｌ₂中の１０％ＮＭＭ２×５分６．ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄３×１分７．ＤＭＦ洗浄２×１分８．ＤＭＦ中のＢｏｃ−アミノ酸（１２ｍモル）１×３分およびＨＯＢｔ（１２ｍモル）９．ＤＩＣ（１２ｍモル）を上記のものに添加し１×１８０分振盪する１０．必要な場合、段階４−９を反復して再連結する１１．ＤＭＦ洗浄３×１分。保護されたアミノ酸誘導体、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨおよびＢｏｃ−５−アミノバレリアン酸を連続して、上記のプロトコールに従ってＮ−イソブチルアミノメチル樹脂に付加した。５−アミノバレリアン酸のＮ−末端Ｂｏｃ基を除去して中和した後、得られたペプチド−樹脂をＤＭＦ中の３，５−ジメチル−１−ピラゾリルホルムアミニジウム＝ニトレート（１２ｇ）およびジイソプロピルエチルアミン（５ｍＬ）で３時間処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（３×６０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（３×６０ｍＬ）で洗浄し、最後に３０℃ の真空オーブン中で乾燥した（６．９７ｇ）。保護されたペプチド−樹脂（３．３８ｇ）を、脱除剤としてｐ−クレゾール、ｐ−チオクレゾールおよびジメチルスルフィドの存在下、常時撹拌して、０℃で１時間そして２０℃で３時間、液体フッ化水素で処理した。過剰のＨＦを真空で除去し、残渣をエーテルで処理して脱除剤の生成物を除去した。ペプチドを３０％酢酸（３×１５０ｍＬ）で抽出し、溶媒を真空で蒸発させ、生成物を真空凍結乾燥した。粗ペプチドを３０％酢酸中に溶解し、３０％酢酸水溶液中のアンバライトＩＲＡ−６８（酢酸塩型）イオン交換カラム（６０ｇ、１．６ｍ当量／ｍＬ、２．７３ｃｍ内径×１８ｃｍ長さ）に６０ｍＬ／時間の流速で通塔した。適切なフラクションを合併し、真空凍結乾燥した。粗ペプチドを０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ中に溶解し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって、Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰ１０２２カラム（２２×２５０ｍｍ）を使用して精製した。使用した移動相は下記の通りである：Ａ＝０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂ＯＢ＝０．１％ＴＦＡ／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏ４：１ｖ／ｖ。１００分に亙る０％Ｂから１０％Ｂへの線形勾配を１５ｍＬ／分の流速で使用した。フラクションをＨＰＬＣによって分析し、純粋のペプチドを含有するフラクションを合併し、有機溶媒を減圧下で除去した。残渣を水中に溶解し、イオン交換カラムに通塔することによって酢酸塩型に転化し、真空凍結乾燥した（１８５ｍｇ）。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＭｅｒｃｋＦ−２５４シリカプレート（５×１０ｃｍ）上で次の溶媒系（ｖ／ｖ）で行った：Ｒｆ（１）＝０．２５（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、４：１：１）Ｒｆ（２）＝０．４９（１−ＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：ＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、１：１：１：１）Ｒｆ（３）＝０．８０（１−ＢｕＯＨ：Ｐｙｒ：ＨＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、５：４：４：２）。アミノ酸分析（ＡＡＡ）：Ｐｒｏ１．００（１）、Ａｓｐ０．６６（１）。液体クロマトグラフィー質量スペクトロメトリー（ＬＣ−ＭＳ）：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４２７ａ．ｍ．ｕ．．実測分子量＝４２６（理論分子量＝４２６．２６）。ＭＨ⁺は陽電荷質量イオンを表し；ｍ／ｚは質量／電荷であり；ａ．ｍ．ｕ．は原子質量単位である。実施例９−神経筋アッセイこのアッセイはペプチドが神経筋伝達に影響する能力を測定する。この能力がペプチドとニコチン様アセチルコリン受容体との相互作用によって可能になることは理論化されている。サイモポイエチンおよびサイモペンチンは神経筋伝達に対して阻害効果を有することが知られている。Ａ．マウスで行うアッセイ試験ペプチドの種々の投与量をリン酸緩衝食塩水中に溶解し、体重２５−３０ｇの雌性マウス（ＣＤ１株）中に経口投与した。筋電図アッセイはＧ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．，３１：４５３−４５９（１９６８）による操作法を改変したものであり、報告に記載のペプチドの投与２４時間後よりむしろ４８時間後にアッセイを行った。マウスは０．５ｍＬの１０％ウレタン溶液で麻酔した。神経をＧｒａｓｓＳ−４８刺激器およびＧｒａｓｓＳＩＵ−５Ａ刺激アイソレーションユニット（Ｇｒａｓｓｍｅｄｉｃａｌｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｑｕｉｎｃｙ，ＭＡ）で刺激し、５Ａ２１Ｎ差動増幅器および５Ｂ１０Ｎタイムベース（Ｔｅｋｔｒｏｎｉｘ，Ｂｅａｖｅｒｔｏｎ，ＯＲ）に連結したＴｅｋｔｒｏｎｉｘストレージオシロスコープ−５１１１で筋電図反応を記録した。毎秒３０インパルスの超最高神経刺激の場合について、第１０筋肉活動電位の高さを第１のパーセントとして表した。対照と試験化合物との間の統計的差異を試験するためのＰ値はドンネット（Ｄｕｎｎｅｔ）の２テールドｔ検定によって算出した。試験ペプチドを用いた神経筋アッセイで得られた結果を以下の表１にで示す。Ｂ．ラットで行うアッセイ種々の投与量の試験ペプチドをリン酸緩衝食塩水中に溶解し、体重２５０−３００ｇの雌性ラット（ＣＤ１株）に経口投与した。筋電図アッセイはＧ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．，３１：４５３−４５９（１９６８）による操作法を改変したものであり、アッセイは報告に記載の各ペプチドの投与２４時間後よりむしろ４８時間後に行った。ラットは１ｍＬの４０％ウレタン溶液で麻酔した。ＧｒａｓｓＳ−４８刺激器およびＧｒａｓｓＳＩＵ−５Ａ刺激アイソレーションユニット（ＧｒａｓｓＭｅｄｉｃａｌＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｑｕｉｎｃｙ，ＭＡ）で神経を刺激し、５Ａ２１Ｎ差動増幅器および５Ｂ１０Ｎタイムベース（Ｔｅｋｔｒｏｎｉｘ，Ｂｅａｖｅｒｔｏｎ，ＯＲ）に連結したＴｅｋｔｒｏｎｉｘストレージオシロスコープ−５１１１で筋電図反応を記録した。毎秒２０インパルスの超最高神経刺激の場合について、第１０筋肉活動電位の高さを第１のパーセントとして表した。対照と試験化合物との間の統計的差異を試験するためのＰ値はドンネット（Ｄｕｎｎｅｔ）の２テールドｔ検定によって算出した。この化合物の１ｍｇ／ｋｇ投与の場合、４回の実験を行った。アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ−イソブチルを用いた神経筋アッセイで得られた結果を以下の表ＩＩに示す。デスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルを用いた神経筋アッセイで得られた結果を大文字「Ｐ」で表し、以下の表ＩＩＩに示す。アセチル− Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチルの_P値は、低い場合の「_p」によって示され、比較のために含まれる。実施例１０−インスリン・チャレンジ試験グルコースの血漿中濃度は神経およびホルモン機構によって生理学的設定点に維持される。膵臓から誘導されたインスリンおよびグルカゴンはそれぞれ血糖値を低下および上昇させる主要なホルモンである。しかし、成長ホルモン、エピネフリンおよび副腎グルココルチコイドを含む他の多種類のホルモンは糖調節に重要な役割を演じる。正常な設定点からのグルコース濃度の偏差は脳の視床下部領域内に存在する神経細胞によって感知される。血糖値の降下を感知すると、これらの細胞は脳中の不鮮明な神経経路を活性化して、アミノ酸４１個のペプチドであるコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）およびアミノ酸９個のペプチドであるアルギニンバソプレシン（ＶＰ）を産生する他の視床下部細胞を興奮させる。これらの視床下部因子は、脳から特定の視床下部下垂体の毛細門脈網中に分泌され、血液によって真性内分泌様式で下垂体前葉に運ばれる。前方下垂体において、これらのホルモンは下垂体コルチコトロピン細胞上に存在する受容体に高い親和性をもって結合する。ＣＲＦおよび／またはＶＰによる受容体の活性化は細胞を脱分極し、カルシウムの内向き流動を増加させ、末梢血管中へのアドレノコルチコトロピン（ＡＣＴＨ）の分泌を増加させる。ＡＣＴＨはその名称が意味するように、副腎皮質を刺激して、一次グルココルチコイドホルモン、コルチゾール（ヒトの場合）およびコルチコステロン（げっ歯類の場合）を合成し放出する。次いでこれらのホルモンはグルコースの血漿中濃度を増加するように作用する。従って、正常な被験者（ヒトまたはげっ歯類）へのインスリンの投与は、ストレスに対する被験者の反応を決定する挑発的チャレンジ試験として使用することができる。この場合、ストレスとは、外因性インスリンによる被験者の正常な糖調節機構の調節不能な混乱と定義することができる。かかるストレスを実験的に誘発することは、ストレスの多い状況を改善することに関与する補償機構を決定するのに有用である。その他、かかる挑発的チャレンジ試験は、ストレス誘発内分泌変化およびそれら変化に起因する障害を転調する薬理学的作用薬の効能を決定するのに有用である。Ａ．ＡＣＴＨ分泌に及ぼすインスリンの作用薬物がストレス反応を改善することができるかどうかを決定するためには、ストレス自体が特徴づけられなければならない。この目的を達成するためには、成体雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット［ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ］を、一晩の断食後、腹腔内的に０．０５ないし５ＩＵ／ｋｇの範囲内で増加するインスリン［Ｈｕｍｕｌｉｎ，ＥｌｉＬｉｌｌｙＣｏ．］および食塩水を投与して処理した。インスリン投与の３０分後に、動物を断首によって犠牲にし、胴体血液を４℃の４００μｌの１０％ＥＤＴＡを含有するポリプロピレンチューブ中に収集した。血漿を遠心分離で分離し、ＡＣＴＨ測定に使用するまで−８０℃で貯蔵した。ＡＣＴＨの血漿中濃度を、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，３０：２５９−２６５（１９８４）に記載の通り、放射性免疫測定法によって、抗血清［ＩｇＧＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ］および¹²⁵Ｉ標識ＡＣＴＨ［ＩＣＮＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＣｏｓｔａＭｅｓａ，ＣＡ］を使用して決定した。図１は雄性ラットにおけるＡＣＴＨ分泌に及ぼすインスリン誘発低血糖症の効果を示す。食塩水担体の投与（「０」）は実験動物中のＡＣＴＨの基底濃度（血漿中ＡＣＴＨ濃度４２．１±４．２ｐｇ／ｍｌ）に影響しなかった。最低投与量（０．０５ＩＵ／ｋｇ）の試験インスリンの場合、ＡＣＴＨ濃度は上昇しなかった。０．１ＩＵ／ｋｇの場合、血漿中ＡＣＴＨ濃度は担体処理の対照の場合よりかなり高くなり、そしてインスリン投与量をさらに高くすると、比例して高いＡＣＴＨ反応が表れ、５ＩＵ／ｋｇの投与量で平坦域が始まる。これらのデータに基いて、０．５ＩＵ／ｋｇの投与量を将来の実験研究のために選択した。この投与量が、ＲＩＡによって容易に検出されるが最高の反応ではない高程度のＡＣＴＨ反応を生起するからである。さらに高い投与量のインスリンを使用した場合、反応の平坦域に接近し、インスリンによって誘発されるストレス効果がその後に逆転するのを検出するのが困難になり、他方、０．５ＩＵ／ｋｇの投与量は投与量−反応曲線の最大勾配部分上にあり、ＡＣＴＨ分泌反応の有意の改変を検出するのが容易になる。Ｂ．インスリン誘発ＡＣＴＨ分泌に及ぼす本発明のペプチドの効果上記のように、生体がストレスにどのように反応するかおよび反応を調節することができるかを決定する挑発的チャレンジ試験としてインスリン投与を使用することができる。図１から、ラットではインスリン投与によってＡＣＴＨの血漿中濃度が増加することが示された。この反応が本発明のペプチド、例えば、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソブチル（以下、「ペプチド」という）によって調節することができることを示すために、次の実験を行った。これらの実験では成体雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用した。一晩の断食の後、ペプチドおよび食塩水を経口強制投与または皮下注射によって実験被検体に投与した。ペプチドの投与量は経口経路では０１ないし１０ｍｇ／ｋｇの範囲内てあり、皮下注射では００３ないし３．０ｍｇ／ｋｇの範囲内であった。４８時間後、全動物をインスリンで処理し（０．５ＩＵ／ｋｇ）、３０分後に断首によって犠牲にした。上記のように、胴体血液を４ ℃の４００μｌの１０％ＥＤＴＡを含有するポリプロピレンチューブ中に収集した。血漿を遠心分離で分離し、ＡＣＴＨ測定に使用するまで−８０℃で貯蔵し、ＡＣＴＨ濃度は、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎｅｔａｌ．（上記）に記載のＲＩＡによって、抗血清［ＩｇＧＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ］および¹²⁵Ｉ標識ＡＣＴＨ［ＩＣＮＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ］を使用して決定した。食塩水の経口強制投与または皮下注射によって前処理した動物において、０．５ＩＵ／ｋｇのインスリンを腹腔内投与すると、血漿中ＡＣＴＨ濃度が１６．８ ±０．８ｐｇ／ｍｌから約２００ｐｇ／ｍｌに上昇した（図２）。ペプチドを０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下経路で投与すると、インスリンに対するＡＣＴＨ反応が少し抑制された。インスリン投与の４８時間前に投与した場合、インスリン誘発ＡＣＴＨ分泌を顕著に抑制するペプチドのいき値投与量は０．３ｍｇ／ｋｇ皮下投与であった。ペプチドは１．０および３．０ｍｇ／ｋｇの皮下投与量でもＡＣＴＨ反応を抑制した。経口強制投与法（ｐ．ｏ．）によってペプチドを投与しても、インスリンに対するＡＣＴＨ反応が抑制された。１ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．でのペプチド投与では、インスリン誘発ＡＣＴＨ分泌に及ぼす効果が小さいものに過ぎなかった。ペプチドのさらに高い投与量（３．０および１０．０ｍｇ／ｋｇ）によって、インスリンに対するＡＣＴＨ反応の大きさは極めて顕著に減少した。それ故、これらの実験から、本発明のペプチドはストレス誘発ＡＣＴＨ分泌を抑制する能力を有することがで示された。この挑戦的チャレンジ試験において、経口または皮下投与経路によって投与されたペプチドは有効であることは図２から明らかである。さらに、皮下経路投与による最小有効投与量はｐ．ｏ．経路による投与量の場合よりも１０倍低く、このことは消化管吸収障壁がペプチドによって通過されることを示している。実施例１１−社会的ストレスに対する行動的反応の低下社会的闘争ストレスに対する行動的反応（定住個体／侵入パラダイム）［Ｅ．Ｍ．Ｐｉｃｈｅｔａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１８：４９５−５０７（１９９３）］は、成体ウスターラットでの不安についての高度プラス迷路試験［Ｓ．Ｐｅｌｌｏｗｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．，１４：１４９−１６７（１９８５）］によって評価された。５ｍｇ／ｋｇの経口投与のアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドおよび担体（対照）で前もって２日間実験群を処理した。社会的衝突は、攻撃的な雄性の定住個体の縄張り中に実験ラットを侵入させることによってが始められた。ラットの群を分けて、ラットは社会的相互反応のない新規のケージ中に３０分間入れられるか（ストレスなし）、またはラットは社会的に敗北して３０分間定住ラットに露呈された（社会的ストレス）。社会的闘争の直後、５分試験のクローズ・アームに面する中央プラットホーム中に動物を個別に入れた。５分試験は全体活性（オープンおよびクローズ・アームに入場の数）おお迷路のオープン・アームおよびクローズ・アーム上での消費時間の両方をコンピューター自動測定する方法を提供した。ストレス・ラットはオープン・アーム上で消費する時間が顕著に少く、クローズ・アームの制限スペースを好んだ。図３に示されるように、担体で前もって２日間予備処理されたストレス・ラットはオープン・アーム上での消費する時間は顕著に少なく（Ｐ＝０．００８）、一方ペプチドで前もって２日間前処理されたラットはストレスによるこの行動的変化を表さなかった。即ち、それらは非ストレスラットとの有意差を全く示さず（Ｐ＝０．１９９）、担体対照を与えられ、同等にストレスされたラットよりも顕著に多くの時間をオープン・アーム上で消費した。従って、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、５ｍｇ／ｋｇ投与、は社会的ストレスによって生まれる不安原性様−行動的変化を遮断した。実施例１２− ラットにおけるアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドの薬物速度論アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド＝ペプチドの溶液［注射用無菌水、Ｕ．Ｓ．Ｐ．（ＷＦＩ）、５、５０、または３００ｍｇ／ｋｇ］中の一回経口投与量の上記ペプチドをラットに与えた。投与後の数時点で、ラットから血液試料を収集した。Ｊ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒｅｔａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６６：２３５６−２３６１（Ｊｕｌｙ１９９４）に既に記載の通り、血漿からペプチドを抽出した後、血漿中ペプチド濃度を液体クロマトグラフィーエレクトロスプレイ質量スペクトロメトリーによって決定した。図４に示すように、ラットにおいて、５、５０、または３００ｍｇ／ｋｇの一回経口投与の後、ペプチドはそれぞれ２２、３１４、および１２９４ｎｇ／ｍＬの平均ピーク血漿中濃度（Ｃ_max）にまで急速に吸収された。対応する時間（Ｔ_max）は投与後３０ないし６０分であった。消失半減期（Ｔ_1/2 ）は５１ないし９９分であった。ラット中でのペプチドのＣ_maxおよび血漿中濃度曲線下面積（ＡＵＣ）はペプチド投与量に比例することが見出され、このことはアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドの線形薬物速度論を示唆した。実施例１３− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−メチルの合成実施例３Ａに記載の操作法に従って、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨとメチルアミンとを連結させることによって、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ− メチルを製造した。これを４ＭＨＣＬ−ジオキサンを使用して除タンパク質し、ペプチドの塩酸塩を真空で乾燥した。アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨとＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−メチルとの連結は実施例３Ｃに記載の操作法に従って行った。実施例３Ｄに記載の操作法に従って、保護されたトリペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−メチルを触媒的水素化処理して、ベンジル基を除去した。粗ペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−メチルをＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．２６、Ｒｆ（２）＝０．５３、Ｒｆ（３）＝０．８７ＡＡＡ：Ａｒｇ１．０２（１）、Ｐｒｏ０．９８（１）、Ａｓｐ０．７４（１）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４４２．９ａ．ｍ．ｕ．（分子量４４１．４９）実施例９の神経筋アッセイにおいて１ｍｇ／ｋｇの投与量で試験した場合、このペプチドのＰ値は＜０．００１であった。反対に、ペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ₂のＰ値（１ｍｇ／ｋｇ投与量）は０．１５０であった。対照と試験化合物との群間比較は、最終測定値の初回測定値に対する比率について二標本ｔ検定（２テールド（ｔａｉｌｅｄ））によって行った。実施例１４− アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソプロピルの合成実施例３Ａに記載の操作法に従って、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨとイソプロピルアミンとの連結によってＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソプロピルを製造した。これを４ＭＨＣＬ−ジオキサンを使用して除タンパク質し、ペプチドの塩酸塩を真空で乾燥した。アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨとＨＣｌ．Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソプロピルとの連結は実施例３Ｃに記載の操作法に従って行った。実施例３Ｄに記載の操作法に従って、保護されたトリペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＮＨ−イソプロピルを触媒的水素化処理して、ベンジル基を除去した。粗ペプチド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＮＨ−イソプロピルをＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ（１）＝０．１４、Ｒｆ（２）＝０．４０、Ｒｆ（３）＝０．６５ＡＡＡ：Ａｒｇ１．００（１）、Ｐｒｏ１．００（１）、Ａｓｐ１．０１（１）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚでの［ＭＨ⁺］＝４７１ａ．ｍ．ｕ．（分子量４７０．５６）実施例９の神経筋アッセイにおいて１ｍｇ／ｋｇの投与量で試験した場合、このペプチドのＰ値は＜０．００１であった。本発明の多数の改変および変化は上記の明細書中に含まれ、当業者には自明のことと期待される。本発明の組成物および製造方法に関するかかる改変および変更は明細書に添付される特許請求の範囲中に包含されると考えられる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年７月１１日【補正内容】請求の範囲１．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）からなるトリペプチドまたはそれらの薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩。２．アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択されるトリペプチド。３．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；ＹはＰｒｏ、デヒドロ−Ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）からなる少なくとも１種のトリペプチドまたはそれらの薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩の治療的有効量を薬学的に許容される剤型中に含んでなる製薬組成物。４．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり：そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）を有するトリペプチドまたはそれらの薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩を製造する方法において、前記方法が固体相合成を含んでなる製造方法。５．請求項４に記載の方法において、前記トリペプチドがアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択される方法。６．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）を有するトリペプチドまたはそれらの薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩を製造する方法において、前記方法が溶液相合成を含んでなる製造方法。７．請求項６に記載の方法において、前記トリペプチドがアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択される方法。８．免疫系障害を有する被検者の免疫系を調整するのに適した組成物の製造のための、請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩の使用。９．ストレス、不安またはうつ病に罹っている被検者の神経系を調整するのに適した組成物の製造のための、請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩の使用。１０．請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩を含んでなる診断試薬。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ケーニグ，ジエイムズ・アイアメリカ合衆国ニユージヤージイ州08826 グレンガードナー・スプルースヒルズドライブ1310

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−Ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）からなるトリペプチド。２．アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択される請求項１に記載のトリペプチド。３．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；ＹはＰｒｏ、デヒドロ−Ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）からなる少なくとも１種のトリペプチドの治療的有効量を薬学的に許容される剤型中に含んでなる製薬組成物。４．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり；Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）を有するトリペプチドを製造する方法において、前記方法が固体相合成を含んでなる製造方法。５．請求項４に記載の方法において、前記トリペプチドがアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択される方法。６．式Ｒ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−ＮＨＲ₁ （式中、ＸはＡｒｇまたはデスアミノＡｒｇのＬ型またはＤ型であり；ＲはＨ、低級アルキル、または低級アルカノイルであり：Ｙはｐｒｏ、デヒドロ−ｐｒｏ、またはヒドロキシ−ＰｒｏのＤ型またはＬ型であり；ＺはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、β−Ａｓｐ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択されたアミノ酸のＤ型またはＬ型であり；そしてＲ₁は、１ないし６個の炭素原子を有し、場合によりアリール基またはハロゲンもしくは直鎖のいずれかで置換されたアリールで置換された直鎖式または枝分れ鎖式のアルキルまたはアルケニル、１ないし６個の炭素原子を有する枝分れ鎖式アルキルまたはアルケニル、或いは３ないし７個の炭素原子を有する環式メチレン基よりなる群から選択される）を有するトリペプチドを製造する方法において、前記方法が溶液相合成を含んでなる製造方法。７．請求項６に記載の方法において、前記トリペプチドがアセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−イソブチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−イソブチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソプロピルアミド、アセチル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−フェニルエチルアミド、ホルミル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、ヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−メチルアミド、およびデスアミノ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−イソブチルアミドからなる群から選択される方法。８．免疫系障害を有する被検者の免疫系を調整するのに適した組成物の製造のための、請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩の使用。９．ストレス、不安またはうつ病に罹っている被検者の神経系を調整するのに適した組成物の製造のための、請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩の使用。１０．請求項１に記載のペプチドまたはそれらの薬学的に許容される塩を含んでなる診断薬。