JPH09503221A - 血液凝固のカスケードにおいて治療上活性である新規ペプチド誘導体、その製造方法、及びそれらを含有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）：H-phe-A₁-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro-Glu-Glu-A₂-Leu-glu-OH （式中、Ａ₁及びＡ₂は、説明中に定義した通りである）の誘導体。本発明は、また該誘導体を含有する医薬組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 血液凝固のカスケードにおいて治療上活性である新規ペプチド誘導体、 その製造方法、及びそれらを含有する医薬組成物 本発明は、血液凝固のカスケードにおいて治療上活性である新規ペプチド誘導 体、その製造方法、及びそれらを含有する医薬組成物に関する。 血液中の前凝固及び抗凝固因子の間のバランスが崩れると、血栓又は血餅が形 成されることは、現在広く知られている。血栓症の発症は、本質的に、血流の停 滞又は低下、凝固亢進状態、及び血管壁内皮の病巣の３つの主要な病原因子によ る影響を受ける。従って、これらの病原に対して、その主要要素の１つが抗凝固 剤である治療法を確立することが勧められている。 抗凝固剤は、事実、急性静脈性血栓症、肺塞栓症、四肢の動脈性塞栓症、心筋 梗塞などの動脈性血栓症、アテローム性動脈硬化、その他のすべての血栓塞栓症 の症状発現の治療、ならびに特に体外循環における血液のホメオスタシスの保持 に使用することができる。 公知の抗凝固剤のうち、６５個のアミノ酸からなるポリペプチドであるヒルジ ンは、医用ヒルの唾液腺から単離された特異的トロンビン阻害剤である(Biochem istry 25，4622-28，1986)。 トロンビン阻害剤として使用することのできるヒルジンの変種については、す でに記載されている。例えば、特許ＥＰ２０９０６１又はＥＰ３３２５２３記載 の化合物は、これに相当する。更に、抗凝固特性を有するヒルジン断片の合成ア ナログもまた記載されている。例えば、特許ＥＰ２７６０１４、ＥＰ２９１９８ １、ＥＰ２９１９８２及びＥＰ３３３３５６において請求されている化合物は、 これに相当する。天然のモデルと比較すると、これらのより短い断片（１０〜２ ０のアミノ酸）に は、「より扱いやすい」との利点、詳細には、その合成が簡単であるとの利点が ある。 より最近では、ヨーロッパ特許出願ＥＰ０，３７２，５０３は、天然アミノ酸 が、合成アミノ酸により置換されている、ヒルジンのアナログであるペプチドを 請求している。 ヨーロッパ特許出願ＥＰ０，４４３，５９８は、天然アミノ酸が、スルホン化 又はホスホン酸化誘導体により置換されている、ヒルジンのアナログであるペプ チドを請求している。 出願ＰＣＴ９１／０１３２８及びＥＰ４４３４２９は、その修飾が、非天然ア ミノ酸の導入ばかりでなく、スルホノ−オキソ又はホスホノ−オキソ−アミノ酸 の導入の形をとっている、ヒルジンのアナログを請求している。 本発明は、より詳細には、式（Ｉ）： H-phe-A₁-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro- Glu-Glu-A₂-Leu-glu-OH (I) （式中、 Ａ₁は、プロリン残基（Ｐｒｏ）、オクタヒドロインドール−２−カルボニル（ Ｏｉｃ）、２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボニル（Ａｂｈ ）又は２−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−カルボニル（Ａｂｏ）を 示し、 Ａ₂は、パラ又はメタにおいて基：ＰＯ₃Ｈ₂により置換されたフェニルアラニン 残基（Ｐｈｅ（ｐＰＯ₃Ｈ₂）又はＰｈｅ（ｍＰＯ₃Ｈ₂））を示す） により示される化合物又はその薬学的に許容しうる酸もしくは塩基による付加塩 であって、本ペプチド配列の各アミノ酸が、場合により純粋であ り、各アミノ酸のα炭素が、Ｄ又はＬ配置を有する化合物に関する。 薬学的に許容しうる酸としては、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、ホスホン酸 、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル 酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、メ タンスルホン酸及びショウノウ酸などが挙げられるが、これらに限定されること を意味するわけではない。 薬学的に許容しうる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリ エチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチル−アミンなどが挙げられるが、これらに限定さ れることを意味するわけではない。 本発明はまた、逐次固相合成、断片合成及び溶液中でのそのカップリング、酵 素的合成、クローニングによる遺伝子合成及び形質転換細菌における遺伝子の発 現などの各種方法、又はこれらの技術の各種組み合わせによって得ることのでき る式（Ｉ）の誘導体を調製する方法にも及ぶ。 固相ペプチド合成のための一般的方法は、B.W．Erickson及びR.B.Merrifield ("The Proteins"，Solid-phase Peptide Synthesis，3rdedition，257-527，197 6) に記載されている。 固相合成は、反復的かつプログラム可能な方法により、ペプチド鎖へのアミノ 酸の逐次的導入に必要な、脱保護化、カップリング及び洗浄のサイクルを行う自 動化機械によって行うことができる。アミノ酸、好ましくはＣ末端アミノ酸を、 通常、ポリペプチドの調製に使用される樹脂、好ましくはジビニルベンゼン０． ５〜３．０％により架橋され、最初のアミノ酸が樹脂に共有結合するのを可能と するためのクロロメチレン又はヒドロキシメチレンなどの活性化残基を備えたポ リスチレンに結合させる。樹脂を適宜選択することによって、Ｃ末端カルボン酸 、アミド又はアルコール官能基の固定が可能となる。 次に、アミノ酸を、オペレーターが決定した順序により、一つづつ導入する。 アミノ酸の導入に対応するそれぞれの合成サイクルは、脱保護化、好ましくはペ プチド鎖のＮ末端の脱保護化、試薬の除去又は樹脂の膨潤のための連続洗浄、ア ミノ酸の活性化によるカップリング、及び新規洗浄からなる。これらの操作のそ れぞれに続けて、ろ過を行うが、これは、合成を行う反応器内に導入したガラス ろ過器で行う。 用いるカップリング試薬は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及び ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）もしくはベンゾトリアゾール−１− イル−オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェ ート（ＢＯＰ）あるいはジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）などのペプチ ド合成のための通常の試薬である。 混合無水物の形成による活性化も、可能である。 樹脂の置換の程度に対して、約４倍過剰量、そしてカップリング試薬に対して 、ほぼ当量で、それぞれのアミノ酸を、反応器に導入する。カップリング反応は 、E．Kaiser et al．(Analyt．Biochem.，34，595，1970)記載のニンヒドリン反 応試験によって、合成のそれぞれの段階で、チェックすることができる。 樹脂上にペプチド鎖を組み立てた後、トリフルオロ酢酸、又はフッ化水素酸な どの強酸により、アニソール、エタンジチオール又は２−メチルインドールの存 在下で処理することによって、ペプチドを樹脂から分離させるとともに、ペプチ ドからその保護基を除去することができる。次に化合物を、通例の精製技術、特 にクロマトグラフィー技術により精製する。 本発明のペプチドは、固相上又は溶液中のいずれかで調製することのできる選 択的に保護されたペプチド断片を、溶液中でカップリングさせるこ とによっても得ることができる。保護基の使用及びその安定性の相違を利用する ことは、樹脂へのペプチド鎖の結合を除いては、固相法に類似している。Ｃ末端 カルボキシル基は、例えば、メチルエステル又はアミド官能基により保護する。 カップリングの間の活性化方法も、固相合成に使用する方法に類似している。 式（Ｉ）の化合物は、非常に興味深い薬理学的特性を有している。これらは、 抗凝固及び抗血栓症特性を有し、従って、血餅を溶解することによって、血栓塞 栓症後の合併症を予防するために、又はこれらを直接的かつ速やかに作用する抗 凝固剤として使用することによって、血栓症の過程の延長を予防するための薬剤 として使用することができる。薬理学的試験により得られた結果により、本発明 化合物が、参考化合物であるヒルログ−１(J.M．Maraganoreら，Biochem.，29， 7095-7101，1990)のそれよりも大きく優れた抗血栓活性を有することが示されて いる。優れた活性が得られたのは、トロンビンの触媒性部位がより大きく阻害さ れるためである。 また、本発明の主題は、活性成分として、少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物 又はその薬学的に許容しうる酸もしくは塩基による付加塩を、単独で、又は一つ もしくはそれ以上の無毒の不活性賦形剤もしくは担体と組み合わせて含む医薬組 成物である。 本発明による医薬組成物としては、より詳細には、経口、非経口又は鼻腔内投 与に適したもの、裸錠もしくは糖衣錠、舌下錠、サシェエト、パケット、カプセ ル、グロセット、トローチ、座剤、クリーム、軟膏、皮膚用ゲル、エーロゾル、 経口投与用もしくは注射用アンプルなどが挙げられる。 用量は、患者の年齢及び体重、病状の特性及び重症度、及び投与経路に よりまちまちである。 投与経路は、経口、鼻腔内、直腸内、又は非経口投与であることができる。一 般的には、治療のためには、０．０５〜３０mgを、２４時間当たり１回又は複数 回に分割して投与する。 以下の実施例は、本発明を説明するものであり、いかなる方法によっても、本 発明を限定するものではない。 以下に示す実施例においては、その略語が大文字で始まるアミノ酸は、Ｌ配置 のものである。その略語が小文字で始まるアミノ酸は、Ｄ配置のものである。 Ａｂｏと称するアミノ酸は、３Ｓ配置のものである。 Ｏｉｃと称するアミノ酸は、２Ｓ、３ａＳ、７ａＳ配置のものである。 Ｐｈｅ（ｐＰＯ₃Ｈ₂）は、基： を示す。 Ｐｈｅ（ｍＰＯ₃Ｈ₂）は、基： を示す。 調製例Ａに記載の化合物は、式（Ｉ）の化合物の合成において有用である中間 体である。 調製例Ａ：Ｎ−Ｆｍｏｃ−４−（ジメトキシホスホリル）−Ｌ−フェニルアラニ ン（又はＦｍｏｃ−Ｐｈｅ (ｐＰＯ₃(Ｍｅ)₂） 段階Ａ：Ｎ−Ｂｏｃ−４［（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ］−Ｌ −フェニルアラニンベンジルエステル 氷浴上で冷却したジクロロメタン１０mlに、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンベンジ ルエステル６．８mmol及びフェニルビス（（トリフルオロメチル）スルホニル） アミン７．４mmolを含む溶液に、トリエチルアミン７．４mmolを、滴下して加え た。混合物を、０℃で１時間、そして室温で２時間撹拌した。ジエチルエーテル ６０mlを加えた後、有機層を、水、１Ｎ水酸化ナトリウム、水、次に飽和塩化ナ トリウム溶液で洗浄し、乾燥して、蒸発させた。次に、溶離剤としてペンタン／ 酢酸エチル混合物（８０／２０）を用い、シリカカラムクロマトグラフィーで精 製後、予想生成物を、油状物質として得た。 段階Ｂ：Ｎ−Ｂｏｃ−４−（ジメトキシホスホリル）−Ｌ−フェニルアラニンベ ンジルエステル 無水アセトニトリル３mlに、前段階で得られた化合物１．１mmol、メチルモル ホリン１．４mmol、（ＥｔＯ）₂ＰＯＨ１．３２mmol及びＰｄ（Ｏ）（ｐＰＨ₃）₄ ０．０３２mmolを含む懸濁液を、窒素雰囲気下、７０℃で１５時間撹拌した。 冷却後、酢酸エチル４０mlを加えた。有機層を、５％クエン酸、次に１０％炭酸 水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥して、蒸発させた。次に、溶離剤として酢酸 エチル／ペンタン混合物（３／７）を用い、シリカカラムクロマトグラフィーで 精製後、予想生成物を、油状物質 として得た。 段階Ｃ：Ｎ−Ｂｏｃ−４−（ジメトキシホスホリル）−Ｌ−フェニルアラニン メタノール６０ml及び水４０mlに、前段階で得られた化合物１４．４mmolを含 む溶液を、触媒として１０％パラジウム／炭素を用い、水素圧下で還元した。ろ 過及び溶媒の留去後、予想生成物を、油状物質として得た。 段階Ｄ：Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ（ｐＰＯ₃(Ｍｅ)₂） 前段階で得られた化合物を、B．Gutteら(J．Biol．Chem.，246,1922-1941，19 71)記載の技術により、脱保護化して、Carpinoら(J．Org．Chem.，37，3404-340 9，1972)記載の技術により、Ｆｍｏｃ基を導入した。 実施例１：H-phe-Pro-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile- Pro-(Glu)₂-Phe(pPO₃H₂)-Leu-glu-OH Ｆｍｏｃ−ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ ０．３３mmol/gにより置換された樹脂 ２ｇから、以下の反復操作に従って、実施例１の化合物を合成した。 これらの操作はそれぞれ溶媒３０ml中、室温で撹拌しながら行い、次に合成が 進行しているガラスセル（反応器）内に導入したガラスろ過器を用いてろ過した 。フィルターは、成長するペプチド鎖の結合した樹脂を保持していた。 選択した保護アミノ酸を、以下の順序で、導入した： カップリングのための活性化（操作６）は、ＨＯＢｔ３６０mgにより保護され たアミノ酸４当量（２．６４mmol）を、ＤＭＦ３０mlに溶解し、室温で３０分後 、ＤＣＣ６１８mgを加えることによって、各サイクルで得られた。この溶液を、 ジクロロメタン１０mlと共に、反応セル中に、速やかに導入した。 次に、アニソール及びエタンジチオールの存在下、９５％トリフルオロ 酢酸（ＴＦＡ）により、樹脂を通例通りに処理し、９０％ＴＦＡ、５％（ＣＨ₃ ）₃ＳｉＢｒ、及び５％チオアニソールを含む溶液により、ホスフェート基のメ チルを、選択的に脱保護化した後に、予想生成物を得た。次に、本ペプチドを、 分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥した。 これを、６Ｎ塩酸中、１１０℃で１８時間加水分解することによって、アミノ 酸に分解し、ＨＰＬＣによって得られたアミノ酸の定量分析により、得られた生 成物の分析を行った。 質量スペクトル(FAB):MH⁺,m_/z=2381 以下の実施例化合物は、実施例１記載の方法を用いて調製した。 実施例２：H-phe-Oic-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile- Pro-(Glu)₂-Phe(pPO₃H₂)-Leu-glu-OH 質量スペクトル(FAB):MH⁺,m_/z=2435 実施例３：H-phe-Abh-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile- Pro-(Glu)₂-Phe(pPO₃H₂)-Leu-glu-OH 実施例４：H-phe-Abo-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile- Pro-(Glu)₂-Phe(pPO₃H₂)-Leu-glu-OH 実施例５：H-phe-Pro-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile- Pro-(Glu)₂-Phe-(mPO₃H₂)-Leu-glu-OH 本発明化合物の薬理学的研究 実施例６：抗血栓活性 用いた実験的血栓症モデルは、雄性ＯＦＡラットの下大静脈を結紮することに よって誘発した静脈性血栓症である(Millet ら，Thrombosis Res.,45:123-133， 1987)。試験動物に、ペントバルビタールナトリウム（５０mg/kg、腹腔内投与） を投与して、麻酔をかけた。結紮の１５分前に、静脈内投与により、動物を被験 化合物で処理した。結紮の２５分後、大静脈から血餅を引き出し、乾燥（６０℃ で２４時間）後、重量を測定した。本発明化合物を、０．０５〜１mg/kgまでの 投与量で試験し、ヒルログ−１(０．１及び１mg/kg)と比較した。本試験の結果 、本発明化合物が、参考化合物であるヒルログ−１で観察されるよりも大きい、 血餅重量の有意な低下をもたらすことが示された。本モデルにおいて、実施例１ の化合物は、ヒルログ−１よりも２０倍活性、実施例２の化合物は１０倍活性で あった。 血餅重量の低下（％） 実施例７：抗凝固活性、トロンビン時間の測定、及び活性化ケファリン時間の測 定 トロンビン又は活性化ケファリンの標準量の存在下、正常血漿は、トロンビン 時間（ＴＴ）及び活性化ケファリン時間（ＡＣＴ）と呼ばれる、限定された一定 の時間内に凝固する。薬理学的物質によるこれらの凝固時間 の延長は、抗凝固効果を反映するものである。 本発明生成物のin vitroにおける効果を、ヒト血漿を用いて測定した。静脈穿 刺により、血液を、クエン酸を含む試験管に採取した。デカンテーション（１， ２００ｇ、１０分間）後、血小板含有量の低い血漿を、デカンテーションして、 次に凝固試験を行った。本発明化合物は、ＴＴ及びＡＣＴを有意に延長した。実 施例１の化合物は、０．０５μM の濃度でＴＴを、そして０．１４μM の濃度で ＡＣＴを２倍に延長した。本活性は、ヒルログ−１ ０．０７μM及び０．２μM のそれよりもそれぞれ有意に大きかった。 生成物の効果を、ペントバルビタールナトリウム（６０mg/kg、腹腔内投与） で麻酔を行ったＯＦＡラットにおいて、ex vivoで試験した。頸動脈及び頸静脈 にカテーテルを挿入した。カテーテルの設置後、動脈血１．５cm³を、クエン酸 （０．１０９M ）に採取した。３０分後、被験生成物を、１mlの容積で、静脈内 投与した。動脈血試料（１．５cm³）を、１．５分、３分、５分、１５分、３０ 分、及び６０分後に採取した。試料のそれぞれの採取時に、クエン酸を加えた生 理学的血清１．５cm³を、頸動脈を介して、動物に再注入した。本発明化合物は 、ラットにおいて、ex vivoで、ＴＴ及びＡＣＴを有意に延長した。これらの化 合物は、ヒルログ−１よりも大きく、ＴＴ（増加因子）及びＡＣＴ（増加因子） を延長した。 ＴＴの延長： ＡＣＴの延長： 実施例８：トロンビン及び凝固セリンプロテアーゼの阻害 本発明生成物の、ヒトトロンビン（Sigma 社、特異的活性３２３０NIHU/mg)に 対する阻害活性を、in vitroで評価するために、ヒトフィブリノーゲン（精製又 は血漿性）（Ｆｇ）又は色素形成性基質Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｉｐ−Ａｒｇ−ｐＮ ａ（０．６６nM、Ｓ２２３８、Kabi社）を、被験阻害剤と共に、又は被験阻害剤 を含まずにあらかじめインキュベート（２０℃、１０分間）した所定量のトロン ビン（０．７又は２nM）に加えた。 本生成物の、各種凝固セリンプロテアーゼに対するin vitroにおける選択性を 評価するために、同様の操作を、精製ヒトプラスミン（２nM、Stago 社）、精製 ヒト活性化Ｘ因子（２nM、Stago 社）、カリクレイン（２nM、Sigma 社）、ウロ キナーゼ（２nM、Sigma 社）、プラスミノーゲン組織活性化因子（ｔ−ＰＡ；２ nM、Stago 社）、及び精製ヒト活性化プ ロテインＣ（２nM、Stago 社）に、基質として各種パラニトロアニリド含有ペプ チドを用いて、適用した。阻害剤、酵素及び基質は、同一の緩衝剤（０．０１mM リン酸緩衝液、pH７．４、塩化ナトリウム０．１２M 及びウシ血清アルブミン０ ．０５％を含む）で希釈し、５０μl の量で、ポリスチレンミクロプレートに分 配した。 トロンビンにより形成されるフィブリン、又はセリンプロテアーゼの作用によ り放出されるパラニトロアニリドを、２０℃で、１５〜３０分間反応させた後に 、４０５nmで、分光測光法により測定した。 以下に示す結果は、フィブリノーゲン及び色素形成性基質に関して、ヒルログ −１と比較した場合の、本発明物質によるトロンビンの阻害を示す。結果は、酵 素活性を５０％阻害する濃度をnMで示した値であるＩＣ₅₀で示す。本発明化合物 は、ヒルログ−１よりも高い活性を有した。色素形成性基質の存在下での場合に 特にそうであり、トロンビンの触媒部位に対する本発明生成物の優れた阻害活性 を証明している。 ヒルログ−１と同様に、本発明生成物は、トロンビンに対して非常に選択的で あった。その他の凝固及び繊維素溶解セリンプロテアーゼに関するＩＣ₅₀値は、 いずれも３３μM よりも大きかったからである。 実施例９：医薬組成物：注射用溶液 注射用溶液： 実施例１の化合物： ５mg 注射用蒸留水適量を加えて、２５mlとする。 錠剤： １，０００錠のための調製処方 実施例１の化合物 ５ｇ 小麦デンプン １０ｇ トウモロコシデンプン １０ｇ 乳糖 ６０ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ シリカ、ヒドロキシプロピルセルロース ２ｇ 更に外皮があれば、薬剤の胃における耐性を確保するのに有用であろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９５年７月２４日 【補正内容】 は、「より扱いやすい」との利点、詳細には、その合成が簡単であるとの利点が ある。 より最近では、ヨーロッパ特許出願ＥＰ０，３７２，５０３は、天然アミノ酸 が、合成アミノ酸により置換されている、ヒルジンのアナログであるペプチドを 請求している。 ヨーロッパ特許出願ＥＰ０，４４３，５９８は、天然アミノ酸が、スルホン化 又はホスホン酸化誘導体により置換されている、ヒルジンのアナログであるペプ チドを請求している。 出願ＰＣＴ９１／０１３２８、ＥＰ４４３４２９及びＥＰ５５２９９９は、そ の修飾が、非天然アミノ酸の導入ばかりでなく、スルホノ−オキソ又はホスホノ −オキソ−アミノ酸の導入の形をとっている、ヒルジンのアナログを請求してい る。 最後に、P．Bourdonら(FEBS Letters，294(3)，163-166，1991）は、ペプチド とトロンビンとの相互作用に関する構造活性の研究を行っている。 本発明は、より詳細には、式（Ｉ）： H-phe-A₁-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro- Glu-Glu-A₂-Leu-glu-OH (I) （式中、 Ａ₁は、プロリン残基（Ｐｒｏ）、オクタヒドロインドール−２−カルボニル（ Ｏｉｃ）、２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボニル（Ａｂｈ ）又は２−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−カルボニル（Ａｂｏ）を 示し、 Ａ₂は、パラ又はメタにおいて基：ＰＯ₃Ｈ₂により置換されたフェニルアラニン 残基（Ｐｈｅ（ｐＰＯ₃Ｈ₂）又はＰｈｅ（ｍＰＯ₃Ｈ₂））を示 す） により示される化合物又はその薬学的に許容しうる酸もしくは塩基による付加塩 であって、本ペプチド配列の各アミノ酸が、場合により純粋であり、各アミノ酸 のα炭素が、Ｄ又はＬ配置を有する化合物に関する。 薬学的に許容しうる酸としては、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、ホスホン酸 、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル 酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、メ タンスルホン酸及びショウノウ酸などが挙げられるが、これらに限定されること を意味するわけではない。 薬学的に許容しうる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリ エチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチル−アミンなどが挙げられるが、これらに限定さ れることを意味するわけではない。 本発明はまた、逐次固相合成、断片合成及び溶液中でのそのカップリング、酵 素的合成、クローニングによる遺伝子合成及び形質転換細菌における遺伝子の発 現などの各種方法、又はこれらの技術の各種組み合わせによって得ることのでき る式（Ｉ）の誘導体を調製する方法にも及ぶ。 固相ペプチド合成のための一般的方法は、B.W．Erickson 及びR.B．Merrifiel d ("The Proteins"，Solid-phase Peptide Synthesis，3rdedition，257-527，1 976) に記載されている。 固相合成は、反復的かつプログラム可能な方法により、ペプチド鎖へのアミノ 酸の逐次的導入に必要な、脱保護化、カップリング及び洗浄のサイクルを行う自 動化機械によって行うことができる。アミノ酸、好ましくはＣ末端アミノ酸を、 通常、ポリペプチドの調製に使用される樹脂、好ましくはジビニルベンゼン０． ５〜３．０％により架橋され、最初のアミノ酸が樹脂に共有結合するのを可能と するためのクロロメチレン又はヒドロキ シメチレンなどの活性化残基を備えたポリスチレンに結合させる。樹脂を適宜選 択することによって、Ｃ末端カルボン酸、アミド又はアルコール官能基の固定が 可能となる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＥＤ 9051−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/64 ＡＢＸ Ｃ０７Ｋ 7/08 9051−4Ｃ ＡＥＤ (72)発明者 ヴェルボラン，トニー フランス国、エフ―78540 ヴェルニュイ ユ、リュ・アリスティド―ブリアン、60ビ ス (72)発明者 リュパン，アラン フランス国、エフ―37510 サヴォニエー ル、ラ・サントリー（番地なし) (72)発明者 シモネ，セルジュ フランス国、エフ―78700 コンフラン― サン―トノラン、リュ・デジレ―クレマ ン、43

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ）： H-phe-A₁-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro- Glu-Glu-A₂-Leu-glu-OH (I) （式中、 Ａ₁は、プロリン残基（Ｐｒｏ）、オクタヒドロインドール−２−カルボニル（ Ｏｉｃ）、２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボニル（Ａｂｈ ）又は２−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−カルボニル（Ａｂｏ）を 示し、 Ａ₂は、パラ又はメタにおいて基：ＰＯ₃Ｈ₂により置換されたフェニルアラニン 残基（Ｐｈｅ（ｐＰＯ₃Ｈ₂）又はＰｈｅ（ｍＰＯ₃Ｈ₂））を示す） により示される化合物又はその薬学的に許容しうる酸もしくは塩基による付加塩 であって、本ペプチド配列の各アミノ酸が、場合により純粋であり、各アミノ酸 の炭素が、Ｄ又はＬ配置を有する化合物。 ２．Ａ₁が、プロリン残基（Ｐｒｏ）を示す請求の範囲第１項記載の式（Ｉ）の 化合物。 ３．Ａ₂が、（ｐＰＯ₃Ｈ₂）フェニルアラニン残基を示す請求の範囲第１項記載 の式（Ｉ）の化合物。 ４．H-phe-Pro-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro-(G1u)₂-Phe( pPO₃H₂)-Leu-glu-OHである請求の範囲第１項記載の式（Ｉ）の化合物。 ５．H-phe-Oic-Arg-Pro-(Gly)₄-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Abo-Ile-Pro-(Glu)₂-Phe( pPO₃H₂)-Leu-glu-OHである請求の範囲第１項記載の式（Ｉ）の化合物。 ６．保護されたアミノ酸からの逐次固相合成、溶液中でのペプチド断片からの合 成、場合によりこれらの二つの技術の組み合わせによって請求の範囲第１項記載 の式（Ｉ）の化合物を製造し、所望であれば、式（Ｉ）の誘導体を、その薬学的 に許容しうる酸又は塩基による付加塩に変換する方法。 ７．活性成分として、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項記載の少なくとも一 つの化合物を、単独で、又は一つもしくはそれ以上の薬学的に許容しうる無毒の 不活性賦形剤もしくは担体と組み合わせて含む医薬組成物。 ８．請求の範囲第１〜５項のいずれか１項記載の少なくとも一つの活性成分を含 む請求の範囲第７項記載の医薬組成物であって、急性静脈性血栓症、肺塞栓症、 四肢の動脈性塞栓症、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化、及び血栓塞栓症の症状 発現の治療において抗凝固剤として、ならびに特に体外循環における血液のホメ オスタシスの保持に有効である医薬組成物。