JPH09509955A - ウィルス感染を治療する薬剤の調製におけるインターフェロンのサブタイプの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の個々のサブタイプは異なる細胞型において異なる抗ウィルス活性を有することが分かっているため、最も活性の高い細胞型においてウィルス感染を予防するまたは治療するのに使用される。選択された個々のサブタイプは副作用の危険性を減少するために他の細胞型では比較的低い抗ウィルス活性を有する。ＩＦＮ−α₁₀及びＩＦＮ−α₁₇は肺のウィルス感染を治療するのに好ましく使用され、ＩＦＮ−α₈は肝臓のウィルス感染を治療するのに好ましく使用される。

Description

【発明の詳細な説明】 ウィルス感染を治療する薬剤の調製におけるインターフェロンの サブタイプの使用 本発明は、インターフェロン（ＩＦＮ）によるウィルス感染の治療または予防 に関するものである。 タイプＩインターフェロン（Type Ｉ interferon）（ＩＦＮ）は、多くのＩＦ Ｎ−αのサブタイプ及び一つのＩＦＮ−βの亜種（subspecies）を含む密接に関 連した糖タンパク質の一科である。少なくとも２３個の異なるヒトのＩＦＮ−α のサブタイプがヒトのｃＤＮＡライブラリーの分析によっておよび刺激されたリ ンパ芽球細胞（lymphoblastoid cell）によって産生されたＩＦＮのタンパク質 分析によって同定された。このような異質性に関する理由は不明である。従来の 研究により、すべてのタイプＩ ＩＦＮ（Type Ｉ IFN）は同一のレセプターに 結合することから同一の効果を有することが示唆された。しかしながら、ＩＦＮ −βにのみ応答しＩＦＮ−αには応答しない突然変異型の細胞系が同定されたこ とから、これらの２つのＩＦＮ亜種は異なるレセプターに結合する、即ち異なる 効果を有することが示された。最近同定された膜内外のヒトＩＦＮレセプターに 関する研究から、このレセプターをマウス細胞中にトランスフェクションさせる と、その細胞は幾つかのＩＦＮサブタイプにのみ応答することが示され、これよ り第二のレセプター成分が細胞をＩＦＮに応答させるために必要であり、さらに 、この成分に対応するマウスは異なるＩＦＮのサブタイプを区別することができ ることが示された。ヒトのタイプＩ ＩＦＮのレセプターの分子の分析によって 、このレセプターが異なるＩＦＮのサブタイプを識別できることが示唆されたが 、 異なるサブタイプが本当に異なる効果を有しているかは不明である。多くの研究 がヒトの細胞系の抗ウィルス活性に関する様々なＩＦＮ−αのサブタイプの効果 を比較してきた。ズーン（Zoon）ら（ジェー バイオル ケム（J．Biol．Chem. ）２６７：頁１５２１０〜１５２１６（１９９２年））は、天然のＩＦＮをＨＰ ＬＣにより精製することにより得られたＩＦＮを研究したところ、これらの抗ウ ィルス活性には大きな相違がないことを発見した。しかしながら、スペルバー（ Sperber）ら、ジェー インターフェロン レス（J．Interferon．Res.）１２： 頁３６３〜３６８（１９９２年）がヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）を感染させ た細胞に関する様々な組換ＩＦＮ−αのサブタイプの効果を調べたところ、これ らの抗ウィルス特性には顕著な相違があることを発見した。 スペルバー（Sperber）らの調査は特定のウィルス（ＨＩＶ−１）に対するＩ ＦＮ−αの様々なサブタイプの効果に限られるので、ＩＦＮ−αのサブタイプの 抗ウィルス効果はウィルスに感染した細胞型（cell type）により異なることが 分かった。さらに、ＩＦＮ−αのサブタイプによっては抗ウィルス剤として有効 な（antivirally effective）ＩＦＮ−αに対する部分的なアゴニストとして作 用すると考えられる。したがって、本発明により、各細胞型の治療を目的とした ＩＦＮ−αの特定のサブタイプの使用が示される。 本発明によると、特定の器官または細胞型（cell type）のウィルス感染を予 防するまたは治療することを目的とした薬剤の調製における単一のインターフェ ロン−α（IＦＮ−α）サブタイプの使用を提供するものである。 細胞型は、通常、スペルバー（Sperber）らによる従前の研究を考慮すると、 Ｔリンパ球ではない。しかしながら、上記で引用されたスペルバー（Sperber） らの文献には、ＩＦＮ−αが細胞型に特異的な抗ウィルス 活性を発揮することは何等示唆されていない。 特に好ましいＩＦＮ−αのサブタイプはＩＦＮ−α₈である。これは、肝臓の ウィルス感染を治療するまたは予防するのに特に好ましい。正常な細胞系におけ る強力な抗ウィルス効果に加えて、ＩＦＮ−α₈はまた、他のＩＦＮ−αのサブ タイプには応答しない突然変異型の細胞系（１１、１（ペレグリニ（Pellegrini ）ら、モル セル バイオル（Mol．Cell．Biol.）、９：頁４６０５〜４６１２ （１９８９年）））においても活性を有する。 臨床で使用される特定のＩＦＮ−αのサブタイプは感染した細胞型によって変 化する。特定の細胞型に関する好ましいサブタイプは、副作用の可能性を抑制で きるように、その特定の細胞型に対しては強力な抗ウィルス活性を有すると同時 に他の細胞型に関しては比較的低い活性を有するものである。 例えば、肺の感染症に使用することを目的としてＩＦＮ−αのサブタイプを選 択する場合には、肺癌細胞系に関するインビトロの研究が注目され、これにより 、ＩＦＮ−α₂、ＩＦＮ−α₅、ＩＦＮ−α₈、ＩＦＮ−α₁₄及びＩＦＮ−α₁₇が 最も強力な試験されたサブタイプであり、ＩＦＮ−α₁₀が高い活性を有すること が示された。しかしながら、ＩＦＮ−α₂、ＩＦＮ−α₅、ＩＦＮ−α₈及びＩＦ Ｎ−α₁₄は肝臓の細胞系においても非常に強い抗ウィルス活性を示した。このた め、肺のウィルス感染を治療するまたは予防するための好ましいサブタイプはＩ ＦＮ−α₁₀及びＩＦＮ−α₁₇である。 肝臓の感染症に使用することを目的としてＩＦＮ−αのサブタイプを選択する 場合には、肝臓の細胞系に関するインビトロの研究が注目され、これにより、Ｉ ＦＮ−α₂、ＩＦＮ−α₅及びＩＦＮ−α₈が最も強力な試験されたサブタイプで あることが示された。ＩＦＮ−α₂及びＩＦ Ｎ−α₅は、上述したように、肝臓の細胞系において強い抗ウィルス活性を示し た。しかしながら、同様のことがＩＦＮ−α₈についてもいえるが、インビトロ では、細胞がウィルスの感染に応答してＩＦＮ−α₈を産生するらしいことも観 察された。したがって、肝臓のウィルス感染を治療するまたは予防するために好 ましいサブタイプはＩＦＮ−α₈である。 少数（２、３または４等）の特定のＩＦＮ−αの混合物もまた、本発明の概念 に含まれる。それぞれは、通常、上記したガイドラインに従って選択される。 ＩＦＮ−αのサブタイプは、正確な投与形態及び投与量は常に医師または医療 従事者の裁量の範囲内であるが、公知の手段によってかつ当該分野における既知 の量に匹敵する投与量で投与される。 本発明は、有効に抗ウィルス特性を発揮する量（antiviral amount）の単一の インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）のサブタイプを投与することからなる、特 定の器官または細胞型のウィルス感染を予防するまたは治療する方法に適用され る。 本発明を下記実施例により詳細に説明する。 実施例は図１を参照するものであり； 図１は、様々な細胞系に対する種々のＩＦＮ−αのサブタイプに関する相対的 なＥＤ ５０を示すものである。実施例 ａ）インターフェロン ウェルフェロン（商標）（WELLFERON^TM）のリンパ芽球のインターフェロン（l ymphoblastoid interferon）を、ザ ウェルカム ファウンデーション リミテ ッド（The Wellcome Foundation Limited）から得た。ヒトのタイプＩインター フェロンを、センダイウィルス（Sendai virus）に よりナマルワ細胞（Namalwa cell）を刺激した後、前述した（ズーン（Zoon）ら 、ジェー バイオル ケム（J．Biol．Chem.）２６７：頁１５２１０〜１５２１ ６（１９９２年））のと同様にして、抗体による沈降（antibody precipitation ）及びＨＰＬＣによる精製を用いてＩＦＮ混合物を精製及び分画することによっ て調製した。また、ＩＦＮを、同様にして、センダイウィルス（Sendai virus） で処置したヒトの末梢血の単核細胞（インターフェロン サイエンセス インコ ーポレイテッド（Interferon Sciences Inc）製）の上清から調製した。精製し たＩＦＮのサブタイプの分画の同一性をカラム溶出物の分画をミクロシークエン シングすることによって確認し、最終産物の濃度を市販のキット（シグマ（Sigm a）製）を用いて測定した。 ｂ）抗ウィルス検定 ヒトの細胞系（ＨｕＨ７、Ａ５４９及びＳＨＳＹ）を１０％ＦＣＳを添加した ＤＭＥＭ培地で成育させた。抗ウィルス検定を上記（ズーン（Zoon）ら、上記参 照）したのと同様にして行った。簡潔にいうと、細胞を９６穴のミクロタイター プレート（microtitre plate）（１．５〜２×１０⁴細胞／穴）に移し、２３時 間ＩＦＮの存在下で成育させた。このＩＦＮ含有培地を除いて、細胞を１時間ウ ィルス（ＥＭＣウィルスまたはＨＡＶ）と共にインキュベートした。ウィルスを 除去した後、細胞を２４時間放置し、生存細胞をメチルバイオレットで染色した 。生存細胞の数を各穴の光学濃度を測定することによって決定した。各検定はＩ ＦＮの６個の５倍希釈液を２連で行い、少なくとも４回検定をそれぞれ繰り返し た。各サブタイプの抗ウィルス活性を既知の活性（１０⁸ＩＵ／ｍｌ）のリンパ 芽球のＩＦＮ（lymphoblastoid INF）（ウェルフェロン（商標）（WELLFERON^TM ））と比較した。 結果 ａ）抗ウィルス活性 ＥＭＣウィルスでチャレンジした（challenge）ＨｕＨ７（肝臓）、Ａ５４９ （肺）及びＳＨＳＹ（神経芽腫）細胞における異なるＩＦＮのサブタイプの抗ウ ィルス効果を、すべての異なるサブタイプについてＥＤ５０（ウィルスの複製を ５０％阻害するＩＦＮの投与量）で表わして、図１に示す。 異なるサブタイプの効力は他の肝臓細胞系（ＨｅｐＧ２）と同等であり（デー タは示さず）、ＨｕＨ７細胞を他のウィルス（Ａ型肝炎ウィルス）でチャレンジ した（challenge）際に同様の傾向が見られた。細胞系間で異なるサブタイプの 相対的な効力には顕著な相違があった：肝臓細胞系では、ＩＦＮ−α₈、−α₅及 び−α₂は非常に強力な抗ウィルス活性を示したが、ＩＦＮ−α₁₇は比較的低い 抗ウィルス活性を有していた。肺癌細胞系では、ＩＦＮ−α₈、−α₁₇、−α₁₀ 、−α₅及び−α₁₄が最も強力な試験サブタイプであった。ＩＦＮ−α₁は非常に 低い活性を有していた。 様々なサブタイプの抗ウィルス効果をインターフェロン耐性細胞系１１、１を 用いて分析したところ、ＩＦＮ−α₈のみが細胞変性効果を阻害したことから、 このようなタイプのサブタイプは他のＩＦＮ−αのサブタイプでは分けられない 独特の特性を有することが示された。 ディスカッション １．細胞系間で、異なるサブタイプ間で抗ウィルス活性には相違がある；したが って、臨床において各細胞型の感染を治療するためには特定のサブタイプを使用 することが必要である：肝臓及び肺の感染には異なるＩＦＮのサブタイプが必要 である。 ２．ＩＦＮ−α₂、ＩＦＮ−α₈及びＩＦＮ−α₅が肝臓及び肺の細胞系の両方に 対して活性を有する；したがって、これらは患者に最も副作 用を誘発する−副作用を抑制するために細胞に特異的なサブタイプを使用すべき である（例えば、肝細胞に対してはα₈）。 ３．しかしながら、ウィルス感染に対する細胞の応答、即ち、ＩＦＮ−α₈の産 生を考慮すると、このサブタイプは通常選択されるサブタイプである。 ４．突然変異型の細胞系におけるＩＦＮ−α₈の特異的な活性を考慮すると、こ のサブタイプはさらに望ましい性質を有しており、他のサブタイプが活性を持た ない際に有効である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 トーマス，ホワード，クリストファー イギリス国，ロンドン ダブル２ １ピー ジー，セント メリーズ ホスピタル メ ディカル スクール，クイーン エリザベ ス ザ クイーン マザー ウィング，デ パートメント オブ メディシン（番地な し)

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．特定の器官または細胞型のウィルス感染を予防するまたは治療することを目 的とした薬剤の調製における単一のインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）のサブ タイプの使用。 ２．該サブタイプが特定の細胞型に対しては強力な抗ウィルス活性を有するが他 の細胞型に関しては比較的低い活性を有するものである、請求の範囲第１項に記 載の使用。 ３．肺のウィルス感染を予防するまたは治療することを目的とした薬剤の調製に おけるＩＦＮ−α₁₀および／またはＩＦＮ−α₁₇の使用。 ４．特定の器官または細胞型のウィルス感染を予防するまたは治療することを目 的とした薬剤の調製におけるＩＦＮ−α₈の使用。 ５．該器官が肝臓である、請求の範囲第４項に記載の使用。 ６．該ウィルス感染が肝炎ウィルスによって引き起こされるものである、請求の 範囲第５項に記載の使用。 ７．有効に抗ウィルス特性を発揮する量の単一のインターフェロン−α（ＩＦＮ −α）のサブタイプを投与することからなる、特定の器官または細胞型のウィル ス感染を予防するまたは治療する方法。 ８．該インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）のサブタイプがＩＦＮ−α₈である 、請求の範囲第７項に記載の方法。 ９．該器官が肝臓である、請求の範囲第７項に記載の方法。 １０．該ウィルス感染が肝炎ウィルスによって引き起こされるものである、請求 の範囲第９項に記載の方法。