JPH09511146A

JPH09511146A - 遺伝物質の配達に関する組成物および方法

Info

Publication number: JPH09511146A
Application number: JP7525890A
Authority: JP
Inventors: カーラノ，リチャード・エイ
Original assignee: アポロン・インコーポレーテッド
Priority date: 1994-04-01
Filing date: 1995-03-30
Publication date: 1997-11-11
Also published as: EP0772437A1; WO1995026718A1; EP0772437B9; AU709659B2; PT772437E; AU2236695A; DE69535035D1; ES2265147T3; EP0772437B1; US5739118A; DE69535035T2; EP1616578A1; ATE328589T1; CA2186913A1; EP0772437A4; US6197755B1; DK0772437T3

Abstract

(57)【要約】個体の細胞内に遺伝子物質を組込ませる方法、ならびに同方法を実施するための組成物およびキットが開示される。この方法は、個体の細胞を遺伝子ワクチン促進剤と接触させ、そしてその細胞に、レトロウイルス粒子を含まない核酸分子を投与する段階を含む。この核酸分子は、病原性抗原または増殖亢進性もしくは自己免疫性疾患に関連する抗原のエピトープと相同であるかもしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む蛋白質、そうでなければ欠損を生じているか、非機能性であるか、もしくは部分的に機能的である遺伝子に起因してその個体から欠失している蛋白質、あるいは個体に治療効果を生じる蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む。個体をＨＩＶに対して予防的および治療的に免疫化する方法が開示される。本発明の方法の実施のための薬剤学的組成物およびキットが開示される。

Description

【発明の詳細な説明】遺伝物質の配達に関する組成物および方法発明の分野本発明は、個体細胞内へ遺伝物質を導入するための組成物および方法に関する。本発明の組成物および方法は、免疫化のためのタンパク質標的および治療用タンパク質をコードする遺伝物質を含む予防薬および／または治療薬を配達するために用いることができる。発明の背景生きている動物への正常な機能遺伝子の直接導入は、欠損遺伝情報を元の位置に戻すための手段として研究されてきた。いくつかの研究では、ＤＮＡは、ウイルス粒子またはその他の感染ベクターを用いずに生存動物細胞中へ直接導入されている。Ｎａｂｅｌ，Ｅ．Ｇ．ら、（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１２８５−１２８８は、マウスの動脈壁内へ直接伝達されたβ−ガラクトシダーゼ遺伝子の生体内（ｉｎｖｉｖｏ）での部位特異的な遺伝子発現について開示している。Ｗｏｌｆｅ，Ｊ．Ａ．ら、（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４７：１４６５− １４６８は、マウス筋肉内へ直接伝達された様々なレポーター遺伝子の生体内での発現について開示している。ＡｃｓａｄｉＧ．ら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５２：８１５−８１８は、ＤＮＡ構築物を筋肉内注射した後の、マウス内でのヒトのジストロフィー遺伝子の発現について開示している。Ｗｏｌｆｅ，Ｊ．Ａ．ら、１９９１ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１１（４）：４７４−４８５は、ここに参照として取り入れられるが、生体内での、げっし動物筋肉への直接的な遺伝子伝達に影響を及ぼす条件について言及している。Ｆｅｌｇｎｅｒ，Ｐ．Ｌ．およびＧ．Ｒｈｏｄｅｓ、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３４９：３５１−３５２は、レトロウイルスを使用しない薬品としての生体内での精製遺伝子の直接配達について開示している。遺伝子を直接伝達することは、他に、抗病原体のワクチン接種の方法として、示唆されてきた。一回の注射によって遺伝子を直接伝達することは、ＨＩＶに対して可能なワクチン接種の方法として、示唆されている。細胞内へＨＩＶｇｐ１２０をコードするプラスミドＤＮＡを導入することによって結果としてＨＩＶｇｐ１２０に対する細胞免疫応答が生ずることが見いだされたと、報告している。ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１５１５、１９９０年１０月４日公告、は、個体細胞内へ裸のポリヌクレオチドを直接注射する単一な手段によって、病原体感染に対して個体を免疫化する方法について開示している。リポフェクチン以外のトランスフェクション剤を使用することは、具体的には、開示された方法から除外されている。接種細胞の刺激については、開示も示唆もされていない。ウイルスタンパク質ｇｐ１２０をコードするポリヌクレオチドを導入することからなるＨＩＶワクチンが、開示されている。このワクチンの接種の可能性については、明示されてない。発明の概要本発明は、個体細胞中への遺伝物質の導入方法に関する。方法は、個体細胞を遺伝子ワクチン促進剤と接触させる段階、および所望のペプチドまたはタンパク質をコードするか、あるいは機能する核酸分子の鋳型として提供されるかのいずれかのヌクレオチド配列からなる核酸分子を細胞に投与する段階からなる。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。核酸分子は、レトロウイルス粒子を用いずに投与される。所望のタンパク質は、個体内で機能するタンパク質であっても、免疫応答の標的として提供されても良い。本発明は、病原体に対して個体を免疫化する方法に関する。方法は、個体細胞を遺伝子ワクチン促進剤と接触させる段階、および病原体抗原上に提示されたエピトープと同一または実質上類似した少なくとも一つのエピトープからなるペプチドをコードするヌクレオチド配列からなり、かつ制御配列に機能可能なように結合している、核酸分子を細胞に投与する段階からなる。核酸分子は、個体細胞内で発現する能力を持つ。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。本発明は、高増殖性疾病または自己免疫病に対して個体を免疫化する方法に関する。方法は、個体細胞を遺伝子ワクチン促進剤と接触させる段階、および高増殖性疾病−関連タンパク質または自己免疫病−関連タンパク質上にそれぞれ提示されたエピトープと同一または実質上類似した少なくとも一つのエピトープからなるペプチドをコードするヌクレオチド配列からなり、かつ制御配列と機能可能なように結合している核酸分子；この核酸分子は、細胞内で発現する能力を持つ；を個体細胞に投与する段階からなる。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。本発明は、個体細胞を遺伝子ワクチン促進剤と接触させる段階、および欠損遺伝子の代わりとして機能するか、または個体中で治療効果を作り出す分子をコードするか、のヌクレオチド配列からなり、かつ制御配列と機能可能なように結合している核酸分子；この核酸分子は、細胞内で発現する能力を持つ；を個体細胞に投与する段階からなる、自己免疫病を病む個体を治療する方法に関する。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。本発明は、核酸分子、および遺伝子ワクチン促進剤からなる医薬組成物に関する。本発明は、核酸分子からなる容器、および遺伝子ワクチン促進剤からなる容器からなる医薬キットに関する。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。図面の簡単な説明図１は、プラスミドｐＭＡＭｎｅｏＢｌｕｅ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）にＨＩＶ −ＨＸＢ２糖タンパク質ｇｐ１６０をコードするＰＣＲ発生フラグメントを挿入することによって作り出されたプラスミドｐＭ１６０の構築について示す図である。図２は、ｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖ．のプラスミド地図である。図３は、ｐＥＮＶのプラスミド地図である。図４は、遺伝子構築物の調製に用いられた４つの骨格、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤを示している。図５は、遺伝子構築物を作り出す骨格中に挿入される４つの挿入物、１、２、３および４を示す。発明の詳細な説明本発明は、核酸分子の取り込み及び機能性を高レベルで提供する動物細胞中に、核酸分子を導入する方法に関する。本発明の方法は、遺伝子ワクチン促進剤を投与することと共に、ウイルス粒子、特にレトロウイルス粒子を用いずに、個体細胞に核酸分子を投与する段階からなる。遺伝子ワクチン促進剤は、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。遺伝子ワクチン促進剤は、望ましくは、炎症応答を増強する、および／または組織内での核酸分子の発現を増強する、および／または細胞による核酸分子の取り込みを促進する。本発明の望ましい実施態様は、感染剤を用いずに個体細胞に核酸分子を配達する方法を提供する。本発明では、細胞に配達される核酸分子は、１）予防免疫化剤および／または治療免疫剤として機能するタンパク質のための遺伝子鋳型；２）欠損、損失または無機能の遺伝子の置換コピー；３）治療用タンパク質のための遺伝子鋳型；４）アンチセンス分子のための遺伝子鋳型；または５）リボザイムのための遺伝子鋳型：として提供されるであろう。タンパク質をコードする核酸分子の場合、核酸分子は、動物細胞内で転写および翻訳されるために必要な制御配列を含むことが望ましい。アンチセンス分子およびリボザイムの鋳型として提供される核酸分子の場合、その様な核酸分子は、それぞれそれによってコードされるアンチセンス分子およびリボザイム分子の十分なコピーを生産するために必要とされる制御エレメントと結合させることが望ましい。核酸分子は、レトロウイルス分子を用いずに、プラスミドの形のＤＮＡとして提供されることが望ましい。また、共薬剤（ｃｏ−ａｇｅｎｔ）は、本明細書中では「遺伝子ワクチン促進剤（ｇｅｎｅｔｉｃｖａｃｃｉｎｅｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）」また「ＧＶＦ」と呼ばれる。ここで用いられているように、「遺伝子ワクチン促進剤」と言う言葉は、遺伝子ワクチンおよび遺伝子治療を含む核酸分子と共に投与される共薬剤を指す。ＧＶＦは、核酸分子との混合物として投与されるか、または核酸分子投与と同時、投与前または後に、別々に投与される。ＧＶＦは、免疫原性標的、治療用タンパク質、リボザイムまたはアンチセンス配列をコードする核酸分子の投与を含む治療法または予防法の一部分として用いられる。本発明中で用いられたＧＶＦは、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素からなる群より選択される。本発明のいくつかの態様では、病原性または異常な疾病関連細胞に対して個体を予防的におよび／または治療的に免疫化する組成物および方法が提供される。遺伝物質は、標的とされる病原体または細胞上に見いだされる免疫原性タンパク質と共に少なくとも一つのエピトープを有するペプチドまたはタンパク質をコードする。遺伝物質は、個体の細胞で発現し、免疫応答を誘発させる免疫原性標的として提供される。得られた免疫応答は、幅広く：ホルモン免疫応答の他に、細胞免疫応答の両腕を誘発させる。本発明の方法は、予防および治療免疫を授与するために有効である。この様に、免疫化の方法には、病原体の挑戦、または特定の細胞の発生あるいは増殖から個体を防御する方法、ならびに病原体感染症、高増殖性疾病または自己免疫病を病む個体の治療方法の両方が含まれる。本発明は、標的タンパク質、即ち、病原体または個体自身の「異常」細胞と具体的に関連するタンパク質、に対する幅広い免疫応答を誘発するのに有用である。病原体タンパク質に対する免疫応答は病原体に対する防御免疫性を提供するので、本発明は、病原性作因および生物体に対して個体を免疫化するのに有用である。本発明は、高増殖性細胞と具体的に関連する標的タンパク質に対する免疫応答を誘発させることによって、癌のような高増殖性疾病および病気と戦うのに有用である。本発明は、自己免疫状態に含まれる細胞と具体的に関連する標的タンパク質に対する免疫応答を誘発することによって自己免疫病および疾病と闘うのに有用である。本発明のいくつかの態様は、遺伝子治療；即ち、個体内で、欠損した、損失した、機能しない、あるいは部分的に機能する遺伝子のいずれかに関連するか、または、治療用タンパク質、即ち、個体内に存在すると個体内で欠落を誘発するであろう、および／または、タンパク質投与の手段を一部変化させてタンパク質を配達する手段を提供することによって、個体内に存在すると個体に治療効果を提供するであろうタンパク質をコードする、外来性遺伝子のコピーを持つ個体細胞中に、核酸分子を導入するするための組成物および方法に関する。ここで用いられているように、「所望のタンパク質」とは、免疫応答のための標的タンパク質として、または遺伝子治療法で治療用あるいは補正タンパク質としてのいずれかで作用する本発明の遺伝子構築物によってコードされるペプチドおよびタンパク質を指す。本発明では、所望のタンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡは、それを発現して、それ故所望のタンパク質を生産する個体細胞中に導入される。所望のタンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡは、個体細胞中での発現に必要な制御エレメントと結合している。ＤＮＡ発現用制御エレメントは、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む。さらに、コザック領域（Ｋｏｚａｋｒｅｇｉｏｎ）のような他のエレメントもまた、遺伝子構築物に含まれて良い。ここで用いられる、「遺伝子構築物」という言葉は、所望のタンパク質をコードする、および、ワクチン接種した個体細胞中で発現を指示する能力を持つプロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む制御エレメントに機能しうるように結合させた開始および終止シグナルを含む、ヌクレオチド配列からなるＤＮＡおよびＲＮＡ分子を指す。ここで用いられる、「発現可能な形」という言葉は、標的タンパク質をコードするコード配列に機能し得るように結合させた必要な制御エレメントを含む遺伝子構築物であって、それ故、個体細胞中に存在するとコード配列を発現させるような遺伝子構築物を指す。ここに用いられる、「遺伝子ワクチン」という言葉は、治療免疫応答を呼び起こすに有用な医薬調製物を含む標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列からなる遺伝子構築物を含む医薬調製物を指す。ここに用いられる、「遺伝子治療物」という言葉は、治療用または補正用タンパク質をコードするヌクレオチド配列からなる遺伝子構築物を含む医薬調製物を指す。代わりに、遺伝子治療物は、発現が所望されない遺伝子の遺伝子発現を阻害するアンチセンス配列をコードしていても良い。さらに、遺伝子治療物は、リボザイムをコードしていても良い。ここに用いられる、「標的タンパク質」という言葉は、免疫応答を誘発させることのできるタンパク質を指す。標的タンパク質は、病原体または癌細胞のような所望されない細胞型または必要とされる免疫化に対する自己免疫病を持つ細胞からのタンパク質と共に少なくとも一つのエピトープを共有する免疫原性タンパク質である。標的タンパク質に対して直接示される免疫応答は、標的タンパク質が関連する特定の感染症または病気に対して個体を保護しかつ個体を治療するであろう。ここに用いられる、「エピトープを共有する」という言葉は、別のタンパク質のエピトープと同一または実質的に類似しているエピトープを少なくとも一つ含むタンパク質を指す。ここに用いられる、「実質的に類似したエピトープ」という言葉は、タンパク質のエピトープと同一ではないが、そのタンパク質と交差反応する細胞またはホルモン免疫応答を呼び起こさせる構造を持つエピトープを指す。ここに用いられる、「治療タンパク質」という言葉は、存在すると個体に治療効果をもたらすようなタンパク質を指す。ここに用いられる、「補正タンパク質」という言葉は、存在すると、欠損している、不完全な、機能しないまたは部分的に機能する外因性遺伝子による完全に機能する外因性生成タンパク質の欠損を補正するタンパク質を指す。遺伝子構築物は、遺伝子発現に必要な制御エレメントに機能しうるように結合した所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列からなる。従って、生きている細胞内へのＤＮＡまたはＲＮＡ分子の取り込みは、結果として、所望のタンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡを発現させ、それ故所望のタンパク質を生産させる。細胞に取り込まれた場合、制御エレメントに機能しうるように結合させた所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物は、機能性のある染色体外分子として細胞中に残るかまたは細胞の染色体ＤＮＡに取り込まれるであろう。ＤＮＡは、プラスミドの形で別に遺伝物質として残る細胞中に導入されても良い。代わりに、染色体中に取り込まれうる直線状ＤＮＡが細胞中に導入されても良い。細胞中にＤＮＡを導入する場合、染色体中へのＤＮＡの取り込みを促進させる試薬が加えられても良い。また、取り込みの促進に有効なＤＮＡ配列を、ＤＡＮ分子中に含ませても良い。代わりに、ＲＮＡを細胞に投与しても良い。また、セントロメア、テロメア、および複製の起源を含む直線状の小染色体として遺伝子構築物を提供することも企画されている。所望のタンパク質をコードする分子は、所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列からなるＤＮＡであっても、ＲＮＡであっても良い。これらの分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡあるいはそのハイブリッド、またはｍＲＮＡのようなＲＮＡ分子であっても良い。したがって、ここで用いられる、「ＤＮＡ構築物」、「遺伝子構築物」および「ヌクレオチド配列」という言葉は、ＤＡＮおよびＲＮＡの両分子を指す。ＤＮＡ分子の遺伝子発現に必要とされる制御エレメントには、プロモーター、開始コドン、終止コドン、およびポリアデニル化シグナル：が含まれる。さらに、エンハンサーが、遺伝子発現に必要とされることもある。これらのエレメントは、所望される蛋白質をコードする配列と機能するように結合させること、および、制御エレメントはそれらが投与される個体中で機能することが必要である。開始コドンおよび終止コドンは、一般的には、所望される蛋白質をコードするヌクレオチド配列の部分にあると考えられている。しかしながら、これらのエレメントは、遺伝子構築物が投与される個体中で機能することが必要である。開始コドンおよび終止コドンは、コード配列とフレームがあっていなくてはならない。用いられるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルは、個体細胞中で機能しなくてはならない。本発明の実施に有効なプロモーターの例としては、特に遺伝子ワクチンの生産においては、これに限定されるわけではないが、サルのウイルス４０（ＳＶ４０）、マウスの乳癌ウイルス（ＭｏｕｓｅＭａｍｍａｒｙＴｕｍｏｒＶｉｒｕｓ）（ＭＭＴＶ）プロモーター、ＨＩＶロングターミナルリピート（ＬｏｎｇＴｅｒｍｉｎａｌＲｅｐｅａｔ）（ＬＴＲ）プロモーターのようなヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、モロニー（Ｍｏｌｏｎｅｙ）ウイルス，ＡＬＶ、シトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時型早期プロモーターのようなＣＭＶ、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）からのプロモーター、ならびにヒト−アクチン、ヒト−ミオシン、ヒト−ヘモグロビン、ヒト− 筋肉クレアチンおよび、ヒト−メタロチオネインのようなヒト遺伝子からのプロモーターが含まれる。本発明の実施に有効なポリアデニル化の例としては、特にヒトの遺伝子ワクチンの生産においては、これに限定されるわけではないが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルおよびＬＴＲポリアデニル化シグナルが含まれる。特に、ｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｎｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏＣＡ）に存在するＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと呼ばれ、用いられる。ＤＮＡ発現に必要な制御エレメントの他に、他のエレメントもまた、ＤＮＡ分子中に含まれても良い。そのような追加エレメントにはエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、これに限定されるわけではないが、ヒト−アクチン、ヒト− ミオシン、ヒト−ヘモグロビン、ヒト−筋肉クレアチン、およびＣＭＶ、ＲＳＶおよびＥＢＶからのエンハンサーのようなウイルスエンハンサー：を含む群より選択されて良い。遺伝子構築物は、構築物を染色体外に維持し、かつ細胞中での構築物のコピーを多数生産するために、ほ乳類の複製起源と共に提供することができる。インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ）社製のプラスミドｐＣＥＰ４およびｐＲＥＰ４は、エプスタインバールウイルスの複製起源および組み込まれずに高コピー数のエピソームを複製する核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域を含んでいる。いくつかの望ましい実施態様では、用いられるベクターは、実施例３６に記載したそれらから選択される。遺伝子治療に関係する本発明の態様では、活性化に必要な抗原を含む複製起源を持つ構築物が望ましい。免疫化への応用に関するいくつかの望ましい実施態様では、遺伝子構築物は、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、さらにそのような標的タンパク質に対して免疫応答を増強するタンパク質の遺伝子を含む。そのような遺伝子の例は、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、血小板誘導成長因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）（ＰＤＧＦ）、ＧＣ−ＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、エピドーマル成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０およびＩＬ−１２のようなサイトカインならびにリンホカインをコードするそれらである。いくつかの実施態様では、ＧＭ− ＣＳＦ遺伝子は免疫化組成物中で用いられている遺伝子構築物に含まれていることが望ましい。さらに、任意の理由で遺伝子構築物を受け入れた細胞を排除することが望ましい場合には、細胞破壊のための標的として供されるエレメントを加えても良い。発現可能な形のヘルペスチミジンキナーゼ（ｔｋ）遺伝子を、遺伝子構築物中に含ませることができる。薬品ｇａｎｇｃｙｃｌｏｖｉｒは、個体に投与することができ、且つこの薬品はｔｋを生産する任意の細胞を選択的に殺傷する原因となり、それ故、遺伝子構築物を含む細胞を選択的に破壊する手段を提供するであろう。タンパク質の生産を最大にするために、構築物が投与される細胞内の遺伝子発現にうまく適した制御配列が選択されても良い。さらに、細胞内で最も効果的に転写されるコドンを選択しても良い。当業者は、細胞に機能的なＤＮＡ構築物を生産することが可能である。発現を試験するために、遺伝子構築物は、投与されるそれと同じ型の組織培養細胞を用いて、生体外で、発現レベルを試験することができる。例えば、遺伝子ワクチンを人の筋肉細胞に投与する場合、横紋筋肉腫の固体筋肉腫瘍細胞のような培養で増殖させた筋肉細胞を、発現レベルを測定するための生体外でのモデルとして用いても良い。本発明で用いられる遺伝子構築物は、レトロウイルス粒子中には取り込まれていない。遺伝子構築物は、レトロウイルス粒子中に取り込まれているレトロウイルスＲＮＡを持つレトロウイルス粒子を細胞に感染させた場合起こるようなレトロウイルス粒子−仲介挿入なしに、細胞によって取り込まれる。ここで用いられる、「レトロウイルス粒子なしに」という言葉は、レトロウイルス粒子中に取り込まれていない遺伝子構築物を指す。ここで用いられる、「感染作因とは関係ない」という言葉は、細胞に感染する能力を持つ、活性、不活性、生存あるいは死滅のいずれかの、ウイルス、細菌または真菌のベクターの一部でない遺伝物質を指す。いくつかの実施態様では、遺伝子構築物は、細胞内への導入時に遺伝子構築物が感染性ウイルス粒子の生産を指示するに十分な遺伝子情報を持たないように、完全な複製可能ウイルスゲノムより小さく構成されている。ここで用いられる、「不完全なウイルスゲノム」という言葉は、そのような遺伝子構築物の細胞内への取り込みが感染性ウイルスの生産に十分な遺伝情報の導入を命令しないような、完全なゲノムより小さいゲノムを含む遺伝子構築物を指す。いくつかの実施態様では、ＤＮＡ分子は、沈殿剤ＣａＰＯ４なしに配達される。いくつかの実施態様では、希釈されたウイルスワクチンは、ウイルス粒子を生産させるに十分な遺伝物質を含む遺伝子構築物として配達されても良い。遺伝子構築物としての希釈ワクチンの配達は、安全で純粋で活性な多量の免疫化生成物をより簡単な方法で生産させる。遺伝子構築物は、ミクロプロジェクティル（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）を用いて投与されても、用いずに投与されても良い。本発明の遺伝子構築物は、固体粒子を用いずに個体細胞に配達されることが望ましい。ここで用いるように、「固体粒子を用いない」という句は、細胞内へ遺伝物質を入れる出入り口を作り出すために、細胞の細胞膜を貫く、穴をあける、または別な方法で貫通させる、手段として用いられるいかなる固体ミクロプロジェクティルも含まない液体を指す。本発明は、ウイルス、原核生物、および単細胞病原性微生物および多細胞寄生虫のような病原性真核生物体のようなすべての病原体に対して個体を免疫化するために用いられても良い。特に、本発明は、細胞に感染し、ウイルス、ならびに淋病、リステリアおよびシゲラのような原核生物のようにカプセル化しないそれらの病原体に対して個体を免疫化するために有用である。さらに、本発明は、また、原生生物病原体が細胞内病原体であるライフサイクル段階に含まれる原生生物病原体に対して個体を免疫化するためにも有用である。ここで用いられる、「細胞内病原体」という言葉は、少なくとも生殖またはライフサイクルの部分が宿主細胞中で行われ、その中で病原体タンパク質が生産されるまたは生産される原因となるようなウイルスまたは病原性生物体を指す。表１は、本発明に従ってワクチンを作ることの出来るいくつかのウイルスの科および属のリストを提供している。表に載せられているそのような抗原のような病原体抗原上に示されたエピトープと同一または実質的に類似している少なくとも一つのエピトープからなるペプチドをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ構築物は、ワクチンとして有用である、さらに、本発明は、また、表２に載せたような原核および真核の原生生物病原体ならびに多細胞寄生虫を含む他の病原体に対して個体を免疫化するためにも、有用である。病原体感染を予防する遺伝子ワクチンを作り出すためには、防御の免疫応答を上昇させることの出来る免疫原性タンパク質をコードする遺伝物質が、遺伝子構築物中に含まれなければならない。病原体が細胞内に感染するか、この場合には本発明は特に有用である、または細胞外に感染するかにかかわらず、すべての病原体抗原が防御応答を誘発することはありそうもない。好ましくない。ＤＮＡおよびＲＮＡは両方とも比較的小さく且つ比較的簡単に生産され得るため、本発明は、複数の病原体抗原をもつワクチンの接種を許すというさらなる利益を提供する。遺伝子ワクチンに用いられる遺伝子構築物は、多くの病原体抗原をコードする遺伝物質を含むことが出来る。例えば、いくつかのウイルス遺伝子は、単一の構築物中に含まれて良く、それ故、複数の標的が提供される。さらに、個体中の異なる細胞に配達されることの出来る複数の接種物は、ある場合には、完全な物、または、より望ましくは、ワクチン中の完全に近い遺伝子のセットのような不完全物を、ひとまとめにして含むように調製することが出来る。例えば、ウイルス遺伝子の完全なセットは、それぞれが異なる部位に投与される異なる半分のゲノムを含む二つの構築物として投与されても良い。それ故、免疫応答は、感染性ウイルスの危険を集めることなく、それぞれの抗原に対して呼び起こされるであろう。このことは、単一の抗原標的より多くの抗原標的の導入を許し、防御抗原を同定する必要性を排除することが出来る。ＤＮＡおよびＲＮＡの扱い易さおよび安価さは、さらに、防御抗原をスクリーニングするより効果的な手段を与える。遺伝子は、タンパク質よりたいそう簡単に分類し、系統的に試験することが出来る。ワクチンが生産されて防御している病原性作因および生物体が選び出され、免疫原性タンパク質が同定される。表１および２は、遺伝子ワクチンを調製して病原体による感染から個体を防御することの出来るいくつかの病原性作因および生物体のリストを含んでいる。いくつかの望ましい実施態様では、病原体に対して個体を免疫化する方法が、ＨＩＶ、ＨＴＬＶまたはＨＢＶに対して、指示されている。本発明のその他の態様は、高増殖性疾病に特徴づけられる高増殖性細胞に対して幅広い防御免疫応答を授与させる方法、および高増殖性疾病を病む個体を治療する方法を提供する。ここに用いられる、「高増殖性疾病」という言葉は、細胞の高増殖性を特徴とする疾病および病気を指す。高増殖性疾病の例としては、癌および乾癬のすべての型が含まれる。免疫原性「高増殖性細胞」関連蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物の個体細胞への導入は、結果として、ワクチン接種した個体細胞中でのそれらのタンパク質の生産を生ずることが見出された。ここに用いられる、「高増殖性関連タンパク質」という言葉は、高増殖性疾病に関係するタンパク質を指す。高増殖性疾病に対して免疫化するために、高増殖性疾病に関連するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が、個体に投与される。高増殖性−関連タンパク質が効果的な免疫原性標的であるためには、そのタンパク質は、正常細胞と比較して、高増殖性細胞中で独占的にまたは高いレベルで生産されるタンパク質でなくてはならない。標的抗原には、そのようなタンパク質、そのフラグメントおよびそのようなタンパク質上に見出されれる少なくとも一つのエピトープからなるペプチドが含まれる。いくつかの場合では、高増殖性 −関連タンパク質は、タンパク質をコードする遺伝子の突然変異体の生成物である。変異したタンパク質とは、正常タンパク質上には見出されない異なるエピトープを結果として作り出す、わずかに異なるアミノ酸配列を持つことを除いて正常なタンパク質と同一に近いタンパク質をコードしている。そのような標的タンパク質には、ｍｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎのようなオンコジーン、ならびに転座遺伝子ｂｃｒ／ａｂｌ、ｒａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｔｒｋおよびＥＧＲＦによってコードされるタンパク質であるそれらが含まれる。標的抗原としてのオンコジーン生成物に加えて、抗癌治療および予防療法用の標的タンパク質には、いくつかの実施態様では、自己免疫病の標的抗原としても用いられる、Ｂ細胞リンパ腫によって作られる抗体の可変領域およびＴ細胞リンパ腫のＴ細胞レセプターの可変領域が含まれる。他の腫瘍関連タンパク質は、モノクローナル抗体１７−１Ａによって認識されるタンパク質を含む腫瘍細胞中に高いレベルで見出されるタンパク質および葉酸塩結合タンパク質のような標的タンパク質として用いられ得る。本発明は、いくつかの型の癌の一つあるいはそれより多くに対して個体を免疫化するために用いられても良いが、本発明は、特に、特定の癌になりやすい、または癌を持っていてそれ故病気がぶり返しやすい個体を予防的に免疫化するために、有用である。遺伝学および技術ならびに疫学の発達は、個体の癌進行の確率および危険性の評価の測定を可能にする。遺伝子スクリーニングおよび／または家族の健康歴を用いると、いくつかの型の癌の内の任意の一つの進行について特定の個人が持つ確率を予測することが可能である。同様に、既にガンが進行した個体および癌を除去治療したかあるいは他の方法で鎮静している個体は、特に、ぶり返しやすく、再発しやすい。治療法の一部として、そのような個体は、再発と戦う目的を持った時点で、診断された癌に対して免疫化することができる。それ故、個体が一つの型の癌を持っていてぶり返す危険性があると分かる場合には、将来のいかなる癌の出現とも戦う免疫システムを準備するために免疫化することができる。本発明は、高増殖性疾病を病む個体を治療する方法を提供する。そのような方法では、遺伝子構築物の導入が免疫治療として役に立ち、標的タンパク質を作り出す高増殖性細胞と戦う個体の免疫システムを支配し促進させる。本発明は、「自己」支配抗体を作り出す細胞レセプターおよび細胞を含む自己免疫に関係する標的に対して幅広い防御免疫応答を与えられたことによる自己免疫性疾病および病気を病む個体を治療する方法を提供する。Ｔ細胞の仲介する自己免疫病には、慢性関節リュウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インシュリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾癬、脈管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、クローン病および潰瘍性大腸炎が含まれる。これらの病気のそれぞれは、Ｔ細胞レセプターが内在性抗原と結合し、自己免疫病に関連する炎症カスケードを始動させることを特徴とする。Ｔ細胞の様々な領域に対するワクチン接種は、そのようなＴ細胞を除去するＣＴＬを含む免疫応答を引き出す。ＲＡでは、病気に関わるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のいくつかの特異的可変領域によって特徴づけられる。これらのＴＣＲには、Ｖβ−３、Ｖβ−１４、Ｖ β−１７およびＶα−１７が含まれる。このように、これらのタンパク質を少なくとも一つコードするＤＮＡ構築物をワクチン接種することは、ＲＡに含まれるＴ細胞を標的とするであろう免疫応答を引き出すであろう。Ｈｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．ら、１９９１Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０９２１−１０９２５；Ｐａｌｉａｒｄ，Ｘ．ら、１９９１Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：３２５−３２９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．ら、１９９２Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：３２６−３３３；これらのそれぞれはここに参照として取り入れられる；を参照のこと。ＭＳでは、病気に関わるＴＣＲのいくつかの特異的な可変領域を特徴とする。これらのＴＣＲは、Ｖβ−７、Ｖα−１０を含む。このように、これらのタンパク質の少なくとも一つをコードするＤＮＡ構築物のワクチン接種は、ＭＳに関わるＴ細胞を標的とする免疫応答を引き出すであろう。Ｗｕｃｈｅｒｐｆｅｎｎｉｎｇ，Ｋ．Ｗ．ら、１９９０Ｓｃｉｅｎｃｅ２４８：１０１６ー１０１９；Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．ら、１９９０Ｎａｔｕｒｅ３４５：３４４−３４６；これらのそれぞれはここに参照として取り入れられる；を参照のこと。強皮症では、病気に関わるＴＣＲのいくつかの特異的可変領域を特徴とする。これらのＴＣＲは、Ｖβ−６、Ｖβ−８、Ｖβー１４およびＶα−１６、Ｖαー３Ｃ、Ｖα−７、Ｖα−１４、Ｖα−１５、Ｖα−１６、Ｖα−２８およびＶα −１２を含む。このように、これらのタンパク質の少なくとも一つをコードするＤＮＡ構築物のワクチン接種は、強皮症に関わるＴ細胞を標的とする免疫応答を引き出すであろう。Ｔ細胞の仲介する自己免疫病、特にＴＣＲの可変領域によって特徴づけられるそれら、を病む患者を治療するために、髄液生体組織検査を行うことが出来る。存在するＴ細胞サンプルを獲得し、標準的な技術を用いて、それらのＴＣＲの可変領域を同定した。遺伝子ワクチンは、この情報を用いて調製することが出来る。Ｂ細胞仲介自己免疫病には、狼瘡（ＳＬＥ）、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、ぜん息、クリオグロブリン血症、原発性胆管硬化症および悪性貧血が含まれる。これらの病気のそれぞれは、内在性抗原と結合して自己免疫病に関連する炎症カスケードを始動させる抗体を特徴とする。抗体の様々な領域に対するワクチン接種は、ＣＴＬを含む免疫応答を引き出して、抗体を生産するそのようなＢ細胞を除去するであろう。Ｂ細胞仲介自己免疫病を病む患者を治療するために、自己免疫活性に関わる抗体の可変領域を同定しなくてはならない。生体組織検査が行われ、炎症側にある抗体サンプルを獲得する。標準的な技術を用いて、それらの抗体の可変領域を同定する。遺伝子ワクチンは、この情報を用いて調製することが出来る。ＳＬＥの場合、一つの抗原はＤＮＡであると信じられている。このように、ＳＬＥに対して免疫化された患者では、それらの血清を抗ＤＮＡ抗体でスクリーニングすることが出来、血清中に見出されたそのような抗ＤＮＡ抗体の可変領域をコードするＤＮＡ構築物を含むワクチンを調製することが出来る。両ＴＣＲと抗体の両者の可変領域の共通の構造形は良く知られている。個々のＴＣＲまたは抗体をコードするＤＮＡ配列は、一般的には、Ｋａｂａｔら、１９８７ＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔＵ．Ｓ．，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＢｅｔｈｅｓｄａＭＤに記載の方法のように良く知られた方法に従って見つけることが出来、ここに参照として取り入れられる。さらに、抗体からの機能的可変領域をクローニングする一般的な方法も、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．ら、１９９０Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：１０６６に見出すことが出来、ここに参照として取り入れられる。遺伝子治療に関する本発明のいくつかの実施態様では、遺伝子構築物は、補正遺伝子または治療タンパク質をコードする遺伝子のいずれかを含む。補正遺伝子の例としては、ジストロフィンまたは機能的フラグメントをコードする遺伝子、嚢胞性線維症を病む患者の欠損遺伝子を補正する遺伝子、インスリン、ＡＤＡを病む患者の欠損遺伝子を補正する遺伝子、およびファクターＶＩＩＩをコードする遺伝子が含まれる。治療用タンパク質をコードする遺伝子の例としては、エリトロポイエチン、インターフェロン、ＬＤＬレセプター、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ− ２、ＩＬ−４、およびＴＮＦをコードする遺伝子が含まれる。さらに、毒性物質と特異的に結合する一本鎖の抗体成分をコードする遺伝子構築物を、投与することが出来る。いくつかの望ましい実施態様では、ジストロフィン遺伝子は、小遺伝子の部分として提供され、筋ジストロフィーを病む個体を治療するために用いられる。いくつかの望ましい実施態様では、部分的なジストロフィンタンパク質をコードする配列を含む小遺伝子が提供される。ジストロフィンの異常は、軽症のベッカー筋ジストロフィー（ＢＭＤ）および重症のデュシューヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の両方に応答する。ＢＭＤでは、ジストロフィンは作られるが、サイズおよび／または量のいずれかが異常である。患者は軽症で徐々に弱っていく。ＤＭＤでは、タンパク質は作られず、患者は１３才迄に車椅子生活になり、通常２０才までに死亡する。いく人かの患者、特にＢＭＤを病む患者では、本発明に従って配達された小遺伝子の発現によって作り出された部分的ジストロフィンタンパク質は、筋肉機能の改善を提供することが出来る。いくつかの望ましい実施態様では、ＩＬ−２、ＩＬ−４、インターフェロンまたはＴＮＦをコードする遺伝子は、現存するかあるいは除去されたかのどちらかの腫瘍遺伝子に配達され、次いで、個体中に再導入される。いくつかの実施態様では、γ−インターフェロンをコードする遺伝子は、多発性硬化症を病む個体に投与される。アンチセンス分子およびリボゾームもまた、そのような活性作因のコピーの鋳型として作用する遺伝子物質を導入することによって、個体細胞に配達されても良い。これらの作因は、その存在が所望されないタンパク質をコードする遺伝子の発現と共に、不活性化、あるいは干渉される。アンチセンス分子をコードする配列を含む構築物は、細胞内でのタンパク質の生産を阻害するまたは妨害するために用いることが出来る。それ故、オンコ遺伝子生成物のような生成タンパク質を除去または減少させることが出来る。同様に、リボザイムは、メッセンジャーＲＮＡがタンパク質に翻訳される前にこれを選択的に破壊することによって、遺伝子の発現を崩壊することが出来る。いくつかの実施態様では、他の治療薬の投与および方法を含む治療法の部分として、アンチセンスまたはリボザイムをコードする構築物を用いる本発明に従って、細胞を治療する。アンチセンス分子およびリボザイムをコードする遺伝子構築物は、コード配列が開始コドンを含まずＲＮＡのタンパク質への翻訳は開始されないが、タンパク質の生成を望む場合に用いるのと同様のベクターを用いる。いくつかの実施態様では、実施例３６記載のベクター、特に複製起源および適当な核抗原発現形を含むベクターが望ましい。リボザイムは、自己切断または他のＲＮＡ分子を切断する能力を持つ触媒ＲＮＡである。ハンマーヘッド、ヘアピン、テトラヒメナグループＩイントロン、アヘッド、およびＲＮアーゼＰのような様々な異なる型のリボザイムが、この技術分野で知られている（Ｓ．Ｅｄｇｉｎｇｔｏｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１９９２１０、２５６ー２６２）。ハンマーヘッドリボザイムは、４０ヌクレオチドより少ないコアにマッピングされる触媒サイトを持っている。植物ウイロイド中のいくつかのリボザイムおよびサテライトＲＮＡは共通の二次構造およびある保存ヌクレオチドを共有している。これらのリボザイムは、本来、それら自身の基質として供されるが、酵素ドメインは、保存された切断サイトに隣接する配列との塩基対合を通して別のＲＮＡ基質を標的とすることが出来る。注文設計リボザイムのこの能力は、そのようなリボザイムを配列特異的ＲＮＡの切断に用いることを可能にする（Ｇ．Ｐａｏｌｅｌｌａら、ＥＭＢＯ１９９２、１９１３ −１９１９）。それ故、ハンマーヘッド触媒配列のように、様々な型のリボザイムからの異なる触媒配列を用いることおよびここに開示した方法でそれらをデザインすることは当業者の範囲の内にあるであろう。リボザイムは、病原体ヌクレオチド配列およびオンコジーン配列を含む様々な標的に対してデザインすることが出来る。本発明のある望ましい実施態様には、切断反応の効率を維持すると同時に、具体的な標的ａｂｌ−ｂｃｒ融合転写物への十分な相補性が含まれる。本発明のいくつかの実施態様では、遺伝子構築物は、針を使わない注入装置を用いて個体に投与される。本発明のいくつかの実施態様では、遺伝子構築物は、針を使わない注入装置を用いて、個体の皮内、皮下および筋肉内に同時に投与される。針を使わない注入装置は、熟知されており、広範囲に手に入れることが出来る。当業者は、本明細書の教えに従って、無針の注入装置を用いて、遺伝物質を個体細胞に配達することが出来る。無針注入装置は、全組織への遺伝物質の配達によく適している。それらは、皮膚および筋肉の細胞に遺伝物質を配達するのに特に有用である。いくつかの実施態様では、無針注入装置は、個体の皮膚表面にＤＮＡ分子を含む液体を発射するために用いられて良い。液体は、皮膚密着時に液体が皮膚表面を貫通し、皮膚および筋肉組織に浸透するに十分な速度で発射される。このようにして、遺伝物質は、皮内、皮下および筋肉内に同時に投与される。いくつかの実施態様では、無針注入装置は、核酸分子をその器官の細胞に導入するために、遺伝物質をその他の器官の組織に配達するために用いても良い。本発明では、遺伝子構築物は、免疫化される個体内に、または、投与後に再移植される個体の除去細胞内に生体外（ｅｘｖｉｖｏ）で、直接投与されて良い。いずれかの経路で、遺伝物質は固体の体内に存在する細胞内へ導入される。投与経路は、これに限定されるわけではないが、筋肉内、腹膜内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼内および経口ならびに経皮または吸入あるいは座薬による経路が含まれる。望ましい投与経路には、筋肉内、腹膜内、皮下および静脈内注入が含まれる。標的タンパク質をコードする遺伝子構築物の配達は、物質が粘膜の免疫化に関係する組織に存在するような投与方式によって、免疫化した個体の粘膜を免疫化することが出来る。このように、いくつかの実施例では、遺伝子構築物は、個体の口内の口腔に投与することによって配達される。遺伝子構築物は、これらに限定されるわけではないが、伝統的な注射器、無針注入装置、または「微小発射砲撃遺伝子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔｇｅｎｅｇｕｎ）」を含む手段によって投与されて良い。代わりに、遺伝子ワクチンを、個体から除去した細胞中に様々な方法で導入しても良い。そのような手段には、例えば、生体外でのトランスフェクション、電気メッキ、微小注入および微小発射砲撃が含まれる。遺伝子構築物を細胞に取り込んだ後、それらは個体に再移植される。たとえワクチン接種した細胞が他の個体を起源としているとしても、そこに取り込まれた遺伝子構築物を持つ非免疫原性細胞を、他の方法で、個体に移植できることが期待される。本発明の遺伝子ワクチンおよび遺伝治療薬は、おおよそ１ｎｇからおおよそ１０００ｍｇのＤＮＡからなる。いくつかの望ましい実施態様では、ワクチンおよび治療薬は、おおよそ１０ｎｇからおおよそ８００ｍｇのＤＮＡからなる。いくつかの望ましい実施態様では、ワクチンおよび治療薬は、おおよそ０．１からおおよそ５００ｍｇのＤＮＡからなる。いくつかの望ましい実施態様では、ワクチンおよび治療薬は、おおよそ１からおおよそ３５０ｍｇのＤＮＡからなる。いくつかの望ましい実施態様では、ワクチンおよび治療薬は、おおよそ２５からおおよそ２５０ｍｇのＤＮＡからなる。いくつかの望ましい実施態様では、ワクチンおよび治療薬は、おおよそ１００ｍｇのＤＮＡからなる。本発明の遺伝子ワクチンおよび遺伝子治療薬は、用いられる投与様式に従って調合される。当業者は、遺伝子構築物からなる医薬組成物を容易に調合することができる。筋肉内注射が選ばれた投与方式である場合、等張調合液を用いるのが望ましい。一般的には、等張性添加物には、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースが含まれうる。ある場合には、リン酸塩緩衝液のような等張溶液が望ましい。安定剤には、ゼラチンおよびアルブミンが含まれる。いくつかの実施態様では、血管収縮剤が、調合物に加えられる。本発明の医薬組成物は、無菌で、かつ発熱物質を含まないで提供される。本発明の遺伝子構築物は、遺伝子ワクチン促進剤と一緒に調合、または投与される。ＧＶＦは、同一の遺伝子ワクチンをＧＶＦ非存在下で投与したときに起こる細胞による遺伝子構築物の取り込みおよび／または発現と比較して、細胞による遺伝子構築物の取り込みおよび／または発現を増加させる。ＧＶＦは、アニオン脂質；細胞外マトリックス−活性酵素；サポニン；レクチン；エストロゲン化合物およびステロイドホルモン；水酸化低級アルキル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；および尿素：よりなる群より選択される。本発明のいくつかの実施態様では、ＧＶＦは、細胞による遺伝子構築物の取り込みを促進する。本発明のいくつかの実施態様では、ＧＶＦは、細胞分裂を刺激し、遺伝子構築物の取り込みを促進する。細胞による遺伝子構築物の取り込みを促進するＧＶＦの投与は、結果として、遺伝物質をより効果的に配達し、発現する。遺伝子ワクチン促進剤は、細胞によるＤＮＡの取り込みを促進するおよび／または炎症応答を強化することが望ましい。遺伝子ワクチン促進剤として有用なアニオン脂質の例として、ラウリン酸塩およびオレイン酸塩、ならびにラウリン酸およびオレイン酸、スルホン酸を中和した硫酸化アルコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびアルキルポリオキシエチレン硫酸を含む、ラウリルアルコールおよびセチルアルコールの酸エステルを含む。また、ジオクチルスルホサクシネートナトリウムのようなスルホン酸塩を用いても良い。ラウリル酸およびオレイン酸のカリウム塩、ナトリウム塩およびアンモニウム塩は、水に可溶であり、良い油脂／水の乳化剤である。これらの脂肪酸のカルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩は、水不溶性であり、結果として水／油脂の乳濁液になる。これらの化合物は、軟膏、歯磨き粉、ならびに乳化剤、洗浄剤および湿潤剤のようなその他の様々な医薬調製物に広く用いられる医薬必需品である。本発明のそのような遺伝子ワクチン促進剤の例としては、ラウリン酸ナトリウム、、ラウリン酸カリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ラウリン酸、オレイン酸、ジオクチルスルホスクシネートナトリウムが上げられる。望ましい遺伝子ワクチン促進剤は、ラウリル硫酸ナトリウムおよびオレイン酸である。ラウリル硫酸ナトリウム、Ｎ．Ｆ．（モノドデシル硫酸ナトリウム）は、主に、商品として医薬仕様で手に入るラウリル硫酸ナトリウム（例えば、Ｄｕｐｏｎｏｌ^RＣ／ＤｕＰｏｎｔ；Ｇａｒｄｉｏｌ^RＷＡ／Ｐｒｏｃｔｏｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）からなるアルキル硫酸ナトリムの混合物である。それは、ＨＬＢ値（親水性親油性比）４０の高親水性化合物である。調製物は、医薬として受け入れうる担体、望ましくは注射用あるいは塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の医薬として受け入れうる水性注射用液体中に、０．１ｍｇから１００ｍｇ、望ましくは１ｍｇから１０ｍｇ／ｍｌのラウリル硫酸ナトリウムを含む遺伝子ワクチン促進剤として非経口投与用に調合されて良い。遺伝子構築物の効果を所望のように促進させる、これ以外の投与量および濃度を用いても良い。本出願では、ラウリル硫酸ナトリウムは、遺伝子構築物投与の前、後、および／または同時のいずれか、望ましくは同時に、遺伝子構築物投与部位に注射される。オレイン酸Ｎ．Ｆ．は、主に、リノレン酸およびステアリン酸のような様々な量の他の脂肪酸と共に、（Ｚ）−９−オクタデセン酸からなる。オレイン酸調製物は、医薬として受け入れうる担体、望ましくは注射用あるいは塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の医薬として受け入れうる水性注射用液体、中に、０．１ｍｇから１００ｍｇ、望ましくは１．０ｍｇから１０ｍｇ／ｍｌのオレイン酸を含む遺伝子ワクチン促進剤として非経口投与用に調合されて良い。遺伝子構築物の効果を所望のように促進させる、これ以外の投与量および濃度を用いても良い。本出願では、オレイン酸は、遺伝子構築物投与の前、後、および／または同時のいずれか、望ましくは同時に、遺伝子構築物投与部位に注射される。組織内の細胞周辺の細胞外マトリックス成分を破損させる加水分解反応を触媒する細胞外マトリックス−活性酵素は、加水分解酵素である。細胞外マトリックス−活性酵素の例としては、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼが含まれ、これらは両方共、抗ウイルスワクチン構築物と共に投与される場合、不完全ウイルスゲノムと共に投与される。さらに、アミラーゼおよびトリプシンのように組織中の構造成分を破壊するその他の酵素が期待される。コラゲナーゼ（クロストリジオペプチダーゼｃｌｏｓｔｒｉｄｉｏｐｅｐｔｉｄａｓｅＡ）は、クロストリジウムヒストリティカム（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）の生成物である。それは、天然型未変性コラーゲンを生理的ｐＨおよび温度で分解するタンパク質分解酵素である。コラーゲンは、約７５％の乾燥重量の皮膚からなる。コラゲナーゼは、Ｋｅｌｌｅｒら、１９６３Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１０１：８１、の方法に従って調製されて良く、この方法はここに参照として取り入れられる。それは、２５０ユニット／ｇ（Ｓａｎｔｙｌ^R、Ｋｎｏｌｌ）を含む軟膏として、商品として手に入れることが出来る。調製物は、医薬として受け入れうる担体、例えば、注射用、塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の医薬として受け入れ可能な水性注入用液体、中に、１．０から１０００単位／ｍｌのコラーゲンを含む非経口投与用に調合されて良い。遺伝子構築物の効果を所望するように促進させる、その他の投与量および濃度、例えば、５．０から５００ユニット、望ましくは１０から１００ユニット、が用いられて良い。本出願では、コラゲナーゼは、遺伝子構築物の投与の前、後、および／または同時のいずれか、望ましくは同時に、遺伝子構築物の投与部位に注入される。ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸型のムコ多糖を加水分解する能力を持つほ乳類の酵素である。注射用ヒアルロニダーゼは、ヒト医薬使用用（Ｗｙｄａｓｅ^R ，Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）として手に入れることが出来る。ヒアルロニダーゼは、器官の柔組織細胞と共に結合する細胞内接合質として供されるヒアルロン酸ポリマーを解重合し、それ故、粒子物質と溶液の両方の皮下への広がりを促進する。この事は、結果として組織空間の薬品の分配をより大きくし、それらの吸収を促進する。吸収は、注入部位から導管システム内への薬品の異動に関連するが、ヒアルロニダーゼは遺伝子ワクチン促進剤としても作用することが示された。本出願では、ヒアルロニダーゼは、遺伝子構築物投与の前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは同時に、遺伝子構築物の投与部位へ注入される。注射用ヒアルロニダーゼは、１５０単位および１５００単位を含む投与量の形で商品として手に入れることが出来る。１５０単位の投与量は、１ｍｌの塩化ナトリウム注射液中に溶解して直接注射して良く、または、皮下注射による投与用に適当な皮下注入溶液でさらに希釈しても良い。遺伝子構築物の効果の所望の促進を達成するその他の投与量および濃度としては、医薬として受け入れうる担体、例えば、注射用あるいは塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の受け入れうる水性注射液体、中の、例えば、１００から１０００単位／ｍｌ、望ましくは１０から１００単位／ｍｌのヒアルロニダーゼを用いても良い。本出願では、ヒアルロニダーゼは、遺伝子構築物の投与の前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは同時に、遺伝子構築物の投与部位内へ注入される。サポニンは、植物中に広く分布するグルコシドの一つの類である。それぞれのサポニンは、分子のアグリコン部分を構成するサポゲニンおよび糖からなる。サポゲニンは、（ジギトニン中では）ステロイドまたは（アエスクリン中では）トリテルペンであってよく、糖分子は、グルコース、ガラクトース、ペントースまたはメチルペントースであって良い。あるサポニンは、伝統的なタンパク質を基本としたワクチンへの免疫応答を増加させるアジュバントとして用いられてきた。以外にも、サポニンは、遺伝子ワクチンの促進剤としても働くことが見出された。様々な成分を含む天然植物抽出物を含む、様々なサポニンを用いることが出来る。サポニンを含む調製物は、医薬として受け入れうる担体中に０．０１ｍｇから１００ｍｇ含まれる非経口投与用として調合されて良い。その他の投与量および濃度、例えば、遺伝子構築物の所望の促進効果を達成する、０．０１ｍｇから１００ｍｇ、望ましくは０．１ｍｇから１０．０ｍｇ／ｍｌ、を用いても良い。本出願では、サポニンは、遺伝子構築物を投与する前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは投与前に、遺伝子構築物の投与部位に注射される。ユッカ植物（サポナリアＳａｐｏｎａｒｉａ種）またはクイルラジャ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）種から調製される様々な商品として入手できる生成物は、そのような有用なサポニンの中に含まれる。様々なサポナリア種を起源とするサポニン、例えばＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，カタログ番号Ｓ２１４９、が望ましい。商品として入手できるサポニンの例として、サポナリン（ｓａｐｏｎａｒｉｎ）およびサルメントシマリン（ｓａｒｍｅｎｔｏｃｙｍａｒｉｎ）が含まれる。サポゲニン（アグリコン）の例として、サルメントゲニン（ｓａｒｍｅｎｔｏｇｅｎｉｎ）、サルササポゲニン（ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ）、およびサルベロゲニン（ｓａｒｖｅｒｏｇｅｎｉｎ）が含まれる。ここに参照として取り入れられる、Ｋｅｎｓｉｌら、米国特許第５，２７３，９６５号は、医薬的に活性な物質の粘膜を横切っての配達に有用な、精製し修飾した様々なサポニンについて記載している。修飾サポニンは、粘膜の刺激感応性を減ずる。以外にも、そのようなサポニン誘導体は、遺伝子構築物を投与する前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは前に、選択された遺伝子構築物の投与部位に、非経口で投与することが出来る。本発明のいくつかの実施態様では、遺伝子構築物と共に投与されるＧＶＦは、レクチンである。レクチンという言葉は、細胞を接合させるおよび／または複合糖質を沈殿する非免疫起源の糖結合タンパク質または糖タンパク質のグループを指す。レクチンは天然に広く分布し、主に植物の種に見出されるが、それらは、根、葉および樹皮、ならびにハマグリ、カタツムリ、カブトガニのような無脊椎動物、およびいく種かの脊椎動物にも存在する。レクチンは、赤血球および多くのその他の細胞型を接合させる能力によって特徴づけられる。レクチンは、ＳＩＧＭＡＣｏ．「研究および診断用試薬としての生化学、有機化合物（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＯｒｇａｎｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＲｅａｇｅｎｔｓ）」カタログ、１９９２年版、１６７０−１６９９頁（ここに参照として取り入れられる）、および１９９４年版、１７９９−１８１０頁（ここに参照として取り入れられる）、に記載されている。レクチンの例としては、コンカナバリンＡ，アブリン、大豆アグルチニンおよび小麦粉アグルチニンが含まれる。いくつかの実施態様では、レクチンは糖タンパク質でないことが望ましい、即ち、糖タンパク質は共有結合炭水化物を欠く。望ましい非糖タンパク質レクチンは、コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ）であり、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌｓＣｏ．Ｓｔ．ＬｏｕｉｓＭｏ．から商品として入手できる。ＣｏｎＡは、たちなたまめ、カナバリアエンシホルミス（ＣａｎａｖａｌｉａＥｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）、パピリオナタエ（Ｐａｐａｌｉｏｎａｔａｅ）（Ｓｕｍｎｅｒ，Ｊ．Ｂ．およびＳ．Ｆ．Ｈｏｗｅｌｌ，１９３６，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．３２：２２７を参照のこと）から分離されるであろう。ＣｏｎＡは、細胞表面レセプターを含むサッカライドとの特異的な相互作用を通して様々な細胞系を凝集する。ＣｏｎＡは、分子量２７，０００であり、ｐＨ６以下ではダイマーとして、生理的ｐＨではテトラマーとして存在する。ＣｏｎＡのアミノ酸配列は、Ｅｄｅｌｍａｎら、１９７２Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉｅｎｃｅＵＳＡ６９：２５８０に報告されており、ここに参照として取り入れる。レクチンを含む調製物は、医薬として受け入れうる担体、望ましくは注射用あるいは塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の医薬として受け入れうる水性注入用液体中に、０．１μｇから１．０ｍｇ、望ましくは１．０μｇから１００μｇ／ｍｌの選択されたレクチンを含む、遺伝子ワクチン促進剤として非経口投与用に調合されても良い。遺伝子構築物の効果を所望のように促進するその他の投与量および濃度を用いても良い。本出願では、レクチンは、遺伝子構築物投与の前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは同時に、遺伝子構築物の投与部位に注入される。ＣｏｎＡを含む調製物は、医薬として受け入れうる担体、望ましくは注射用あるいは塩化ナトリウム注射用無菌水、またはその他の医薬として受け入れうる水性注入用液体中に、０．１μｇから１．０ｍｇ、望ましくは１．０μｇから１００μｇ／ｍｌのＣｏｎＡを含む遺伝子ワクチン促進剤として非経口投与するために調合されて良い。遺伝子構築物の効果を所望のように促進するその他の投与量および濃度を用いても良い。本出願では、ＣｏｎＡは、遺伝子構築物投与の前、後、および／または同時のいずれかに、望ましくは同時に、遺伝子構築物の投与部位に注入される。その他のＧＶＦ群には、エストロゲン化合物およびその誘導体が含まれる。エストロゲン化合物誘導体は、ステロイドホルモンであって良い。望ましいステロイドホルモンは、β−エステラジオールおよびそれと密接に関係する類似体およびその誘導体：からなる群より選択される。天然および合成両方のエストロゲンが用いられて良い。多くの化合物は商品として入手できる。ジエチルスチルベストロールのようなある非ステロイドエストロゲン化合物は、生物より得られ易く、合成するより費用がかからない。例えば、レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ編、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ１８０４２（１９９０）、第５０章、「ホルモン（Ｈｏｒｍｏｎｅｓ）」を参照のこと。エストラジオール、１７−ｂ−エストラジオール、（１７ｂ）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオールは、最も効能のある天然の哺乳類エストロゲンホルモンである。それは、ほとんど水に溶けないので、非経口液体調合物は、エストラジオール３−ベンゾエート、エストラジオール１７ｂ− シピオネート、エストラジオール１７−プロピオネートまたはジプロピオネート、ヘミスクシネート、１７−ヘプタノエート（エナンテート）、１７−ウンデカノエート（ウンデシレート）、１７−バレレートのような医薬として受け入れうるエステルを用いても良い。０．０１％のエステラジオール膣クリームは、局所使用用として入手できる。 α−エステラジオール、およびα−エステラジオール−ジアセテートまたは− ３−ベンゾエートのようなエステル。エステリオール、エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１６，１７ −トリオール、は、エステラジオールのより効能の少ないエストロゲン代謝物である。エストロン、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７ −オン、およびアセテート、プロピオネート、スルフェート、スルフェートピペラジンのようなエステル。エストロンは、２０から５０ｍｇエストロン／１０ｍｌの水性懸濁液として入手できる。複合エストロゲンホルモンは、妊娠した雌馬の尿から得られる混合エストロゲンの複合型を含む水溶性の天然生成物である。それは、水溶性であり、静脈内または筋肉内注射用に２５ｍｇ／５ｍｌの濃度に再構築されるであろう調合物として、および０．６２５ｍｇ複合エストロゲン／ｇ（Ｐｒｅｍａｒｉｎ^R／Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）を含む膣クリームとして商品として入手できる。エチニルエストラジオールのようなエストロゲン同属物を用いても良い。所望のエストロゲン化合物（単数又は複数）はヒト医薬用に商業的に入手可能な多様な製品、好ましくは液体の非経口製剤としての製品から便宜的に選択されることができる。粘膜免疫性、例えば膣粘膜の免疫性を得るために、例えばエストロゲンクリーム又はゼリーのような局所製剤が使用可能である。全身エストロゲン又は他のホルモン活性よりもむしろ核酸投与の部位における核酸活性の促進が望ましいので、有意な全身エストロゲン又は他のホルモン活性なしに所望の局所効果を達成する投与量と濃度が選択されることが好ましい。製薬的に受容されるキャリヤー、好ましくは注射用滅菌水、又は塩化ナトリウム注射液、又は他の製薬的に受容される水性注射液中に１ｍｌにつきエストロゲン化合物０．００１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１．０ｍｇ／ｍｌを含む遺伝的ワクチン促進剤(genetic vaccine facilitating agent:ＧＶＦ) として、エストロゲン製剤を非経口投与用に処方することができる。遺伝的構築体(construct)の効果の所望の促進を達成する他の投与量と濃度を用いることができる。この用途のために、遺伝的構築体の投与前、後及び／又は同時に、好ましくは同時に、遺伝的構築体の投与部位にエストロゲン化合物が注入される。薬理学及び製薬科学に熟練した人によって既知の方法論及びルーチンの実験を用いて、投与量／濃度の最適化を達成することができる。細胞による遺伝的構築体に対する取り込み及び／又は発現若しくは免疫反応の強化を望ましく促進する投与量と濃度を投与することができる。所望のエストロゲン化合物（単数又は複数）を所望の核酸構築体の前、後及び／又は同時に、好ましくは同時に投与することができる。ヒドロキシル化低級アルキルが遺伝的ワクチン促進活性を有することが判明している。ヒドロキシル化低級アルキルはエタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール及びグリセロールを含み；エタノールとグリセロールとが好ましい。エタノールは製薬用に商業的に入手可能であり；これは注射用滅菌水、又は塩化ナトリウム注射液、又は他の製薬的に受容される水性注射液で希釈して、核酸構築体の活性を促進するために０．０１〜１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは０．１〜１０％、より好ましくは約５％の濃度で用いることができる。これは所望の核酸構築体の前、後及び／又は同時に、好ましくは同時に投与することができる。グリセリン又はグリセロール（１，２，３−プロパントリオール）は製薬用に商業的に入手可能であり；これは注射用滅菌水、又は塩化ナトリウム注射液、又は他の製薬的に受容される水性注射液で希釈して、核酸構築体の活性を促進するために０．１〜１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは１．０〜５０％、より好ましくは約２０％（ｖ／ｖ）の濃度で用いることができる。これは所望の核酸構築体の前、後及び／又は同時に、好ましくは同時に投与することができる。他のＧＶＦはＤＭＳＯであり、これは多くの局所投与薬物の浸透を強化する注目すべきな能力を有する非プロトン溶媒である。これは間質性膀胱炎の治療のために膀胱中への滴注に関して実証されている。５０％を越える濃度で局所投与されると、ＤＭＳＯはコラーゲンを分解し、抗炎症性の局所麻酔効果を有する。ＤＭＳＯは注射用滅菌水、又は塩化ナトリウム注射液、又は他の製薬的に受容される水性注射液で希釈して、核酸構築体の活性を促進するために０．１〜１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは１．０〜５０％、より好ましくは約２０％（ｖ／ｖ）の濃度で用いることができる。これは所望の核酸構築体の前、後及び／又は同時に、好ましくは同時に投与することができる。通常は腎臓から排出される、タンパク質代謝の天然最終産物である尿素、Ｈ₂ ＮＣＯＮＨ₂もＧＶＦである。アンモニア２分子が二酸化炭素１分子と反応して、水１分子と尿素１分子とを形成する。尿素は種々な製薬用途のために商業的に入手可能である。脳水腫によって生ずる頭蓋内圧を低下させ、眼内圧を低下させるための浸透性利尿薬として、５％又は１０％デキストロース溶液中の３０％尿素溶液として、尿素は静脈内に投与される。尿素はまた、乾せん、アトピー性皮膚炎を含めた、多様な皮膚科学用途のために、及び過剰なケラチンを皮膚から除去するために局所的に用いられる。尿素を含む製剤は、例えば塩化ナトリウム注射液（米国薬局方）、注射用水（米国薬局方）、５％デキストロース注射液又は１０％デキストロース注射液のような製薬用に受容されるキャリヤー中に０．１〜１０００ｍｇ／ｍｌを含む非経口投与用に処方されることができる。遺伝的構築体の効果を望ましく促進する他の投与量及び濃度、例えば１．０〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは６０ｍｇ／ｍｌ（約１Ｍ）を用いることができる。この用途のために、遺伝的構築体の投与の前、後及び／又は同時に、好ましくは遺伝的構築体の投与の前に遺伝的構築体の投与部位にサポニンが注射される。本発明の幾つかの実施態様では、筋肉内注入による遺伝的ワクチン接種(genet ic vaccination)の前に、個体を最初にＧＶＦ注射に暴露させる。すなわち、ワクチン接種の約１週間〜１０日間前までに、個体を最初にＧＶＦ注射に暴露させる。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体の投与の約１〜５日間前に、個体にＧＶＦを注射する。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体の投与の約２４時間前に、個体にＧＶＦを注入する。或いは、ＧＶＦをワクチン接種と同時に又はワクチン接種の数分間前若しくは数分間後に、ＧＶＦを注射することができる。したがって、ＧＶＦと遺伝的構築体とを組合せて、混合物として同時に注射することができる。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体の投与後に、ＧＶＦを投与する。例えば、遺伝的構築体の投与の約１週間〜１０日間後までに、個体にＧＶＦを注射する。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体の投与の約２４時間後に、個体にＧＶＦを注入する。ワクチン接種の約１〜５日間後に、個体にＧＶＦを注射する。幾つかの実施態様では、ワクチン接種の約１週間〜１０日間後までに、個体にＧＶＦを注射する。本発明の幾つかの実施態様では、ＧＶＦ剤の組合せを遺伝的構築体と共に投与する。さらに、トランスフェクティング剤(transfecting agent)及び／又はレプリケーティング剤(replicating agent)及び／又は炎症剤(inflammatory agent)として機能することができ、ＧＶＦと同時投与することができる他の作用剤は、成長因子、サイトカイン及びリンホカイン、例えばα−インターフェロン、γ−インターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＧＣ−ＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２並びに繊維芽細胞増殖因子、例えば免疫刺激性複合体（ＩＳＣＯＭＳ）のような表面活性剤、Ｆｒｅｕｎｄ不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）を含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド類、キノン類似体類、及び例えばスクアレンのような小胞を含み、スクアレンとヒアルロン酸とは遺伝的構築体と組合せて投与して、用いることもできる。幾つかの実施態様では、これらの作用剤の組合せをＧＶＦ及び遺伝的構築体と共に投与する。遺伝的構築体はエマルジョンとしてコラーゲンと組合せて、非経口投与することができる。コラーゲンエマルジョンはＤＮＡの持効性放出(sustained release )の手段を与える。コラーゲン５０μｌ〜２ｍｌが用いられる。この処方を用いる好ましい実施態様では、ＤＮＡ約１００μｇをコラーゲン１ｍｌと組合せる。他の持効性放出製剤は、例えば、当該技術分野における標準的参考テキスト、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌ（これは本明細書に援用される）に記載されるような製剤である。このような製剤は水性懸濁液、油性溶液と懸濁液、エマルジョンとインプラント並びに溜め(reservoir)と経皮デバイスを含む。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体の時間放出製剤(time release formulation)が好ましい。幾つかの実施態様では、遺伝的構築体が６〜１４４時間に、好ましくは１２〜９６時間に、より好ましくは１８〜７２時間に時間放出されることが好ましい。本発明の幾つかの実施態様では、遺伝的構築体がニードレス(needless)注入デバイスによって注入される。ニードレス注入デバイスは物質を筋肉内的、皮内的及び皮下的に同時投与するために特に有用である。本発明の幾つかの実施態様では、１９９０年７月３１日に発行された米国特許第４，９４５，０５０号（本明細書に援用される）でＳａｎｆｏｒｄ等によって教示されたマイクロプロジェクティル粒子ボンバードメント(microprojectile p article bombardment)手段を用いて、遺伝的構築体をＧＶＦと共に投与する。本発明の幾つかの実施態様では、遺伝的ワクチン促進剤(genetic vaccine fac ilitator agent)と共にリポソーム複合体の一部として遺伝的構築体を投与する。本発明の幾つかの実施態様では、個体を単独ワクチン接種にさらして、完全で広範囲な免疫反応を生じさせる。本発明の幾つかの実施態様では、個体を一連のワクチン接種にさらして、完全で広範囲な免疫反応を生じさせる。本発明の幾つかの実施態様によると、少なくとも２回、好ましくは４〜５回の注射を一定期間にわたって施す。注射間の時間は２４時間の間隔から注射間の２週間までを含み、好ましくは１週間の間隔である。或いは、少なくとも２回及び４回までの分離した注射を異なる部位に同時に施す。本発明の幾つかの実施態様では、完全なワクチン接種が、１種以上の標的エピトープをコードする配列を含有する遺伝的構築体を含む単一接種物(inoculant) の注入を含む。本発明の幾つかの実施態様では、完全なワクチン接種が２種類以上の異なる接種物の異なる部位への注入を含む。例えば、本発明によるＨＩＶワクチンでは、このワクチンは２種類の接種物を含み、これらの各接種物は異なるウイルスタンパク質をコードする遺伝的物質を含む。このワクチン接種方法はウイルス遺伝子のほぼ完全なセットの個体中への導入を感染性ウイルス粒子の組み込み(assembl ing)の危険性なく可能にする。このようにして、ワクチン接種個体においてウイルスの殆ど又は全てに対する免疫反応が誘発されることができる。好ましくは、細胞が両方の遺伝的構築体を確実に受容しないような距離をおいて、各接種物の注入を異なる部位に実施する。他の安全な予防措置として、感染性ウイルス組み込み(assembly)の可能性をさらに防止するために、幾つかの遺伝子を欠失又は変更させることができる。本明細書で用いるかぎり、“製薬キット(pharmaceutical kit)”なる用語は本発明に用いられる多重接種物を集合的に表すように意味する。このようなキットは異なる接種物及び／又はＧＶＦを含む個別の容器を含む。これらのキットが免疫化方法及び／又は治療方法に用いられる接種物セットを含むように形成されることが意図される。本発明の方法はヒト医薬及び獣医学医薬の両方の分野に有用である。したがって、本発明は哺乳動物、鳥類及び魚類の遺伝的免疫化(genetic immunization)に関する。本発明の方法はヒト、牛、羊、豚、馬、犬及び猫種を含む哺乳動物種に特に適用可能である。以下に述べる実施例は本発明の態様の典型的な例を含む。実施例は本発明の範囲の限定を意味せず、むしろ例示の目的を果たす。さらに、本発明の種々な態様を下記説明によって要約することができる。しかし、この説明は本発明の範囲を限定することを意味せず、むしろ本発明の種々な態様を強調することを意味する。当業者は本発明の付加的な態様及び実施態様を容易に理解することができると思われる。実施例実施例１本発明は直接の遺伝的免疫化を用いてＨＩＶワクチンを提供する。個体の細胞中に投与された場合に、発現されて、ＨＩＶタンパク質を産生する遺伝的構築体を提供する。幾つかの実施態様によると、個体の細胞中の全てのウイルス構造タンパク質の産生がＨＩＶ感染を防止する保護免疫反応を誘発する。本発明のＨＩＶワクチンは、未感染個体をＨＩＶ感染から免疫化する又は既に感染した個体のための免疫治療薬として役立つために用いられることができる。本発明のＨＩＶワクチンは、ＨＩＶ感染細胞を認識して攻撃し、ＨＩＶタンパク質に付随する最も広い範囲を認識する免疫反応（ＣＴＬを含めて）を惹起する。このように、未感染個体はＨＩＶ感染から保護される。幾つかの実施態様では、本発明は２種類の接種物の投与によって個体をＨＩＶに対して免疫化する方法に関する。これらの２種類の接種物は、ＨＩＶウイルスの少なくとも２種類、好ましくは２種類より多い、複数の又は全ての遺伝子を含む。しかし、これらの接種物は一緒に投与されない。したがって、接種される個々の細胞は遺伝子の完全な集合体を投与されるわけではない。ワクチンを接種された個体は少なくとも２種類の異なる、好ましくは２種類より多い、さらに好ましくは複数の又は全てのウイルス遺伝子を受容する。次に、免疫反応がＨＩＶタンパク質標的の全体的な集合体に向けられることができる。この対策は、最も有効な標的タンパク質をコードする遺伝的物質がワクチン中に含まれる確率を高め、ウイルスが突然変異を受ける場合に生ずる１種以上のウイルスタンパク質の構造変化にも拘わらず、ウイルス粒子が免疫反応による検出を逃れる見込みを減ずる。したがって、ウイルスタンパク質をコードする遺伝子の多重の、好ましくはほぼ完全又は完全な集合体によって個体にワクチン接種することが望ましい。単一細胞にウイルス遺伝子の完全な集合体を供給する場合には、完全な感染性ウイルスが細胞中に組み込まれる可能性がある。したがって、本発明による遺伝的構築体は遺伝子のこのような完全な集合体を供給されない。さらに、それぞれが遺伝子の不完全なセットを有し、一緒になってウイルス遺伝子の完全な集合体までを有する２種類以上の接種物は、ワクチン形成細胞が偶然に遺伝子の完全なセットに暴露されないことを保証するために、好ましくは相互に異なる部位における異なる細胞に投与される。例えば、ＨＩＶゲノムの一部が第１構築体に挿入され、ＨＩＶの残部が第２構築体に挿入される。第１構築体は個体に遺伝的ワクチンとして１本の腕の筋肉組織に投与され、第２構築体は個体の他方の腕の筋肉組織内に遺伝的ワクチンとして投与される。個体をウイルスの完全なセットに暴露させ、ウイルス全体に対して、感染性ウイルス粒子が組み込まれると言う危険性なしに、本質的にワクチン接種することができる。ささなる安全予防措置として、遺伝的物質が２種類以上の接種物として個体の身体の離れた部分に投与される場合にも、感染性ウイルス粒子が形成されることができないことをさらに保証するために、１個以上の本質的な遺伝子を欠失させるか又は故意に変更することができる。このような実施態様では、個体にウイルス遺伝子の完全機能セットを投与しない。他の安全予防措置は、別々の接種物をそれぞれ構成する、別々の遺伝的構築体上のウイルスゲノムの非重複部分を形成する。したがって、これらの２種類の遺伝的構築体の間の再結合は防止される。本発明の幾つかの実施態様では、構造遺伝子の完全な集合体が提供される。ＨＩＶの構造遺伝子はｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖから成る。これらの３遺伝子は２種類の異なるＤＮＡ又はＲＮＡ構築体上に提供される。したがって、１つの好ましい実施態様では、ｇａｇとｐｏｌとが１つのＤＮＡ又はＲＮＡ構築体上にあり、ｅｎｖは別の構築体上に存在する。他の好ましい実施態様では、ｇａｇが１つのＤＮＡ又はＲＮＡ構築体上にあり、ｐｏｌとｅｎｖは他方の構築体上に存在する。他の好ましい実施態様では、ｇａｇとｅｎｖが１つのＤＮＡ又はＲＮＡ構築体上にあり、ｐｏｌは他方の構築体上に存在する。幾つかの好ましい実施態様では、ｒｅｖを含む構築体がｒｅｖの開始コドンの上流にスプライスアクセプター (acceptor)を有する。幾つかの好ましい実施態様では、ｇａｇを含む構築体がｇａｇ翻訳開始コドンの上流にスプライスドナーを有する。任意に、これらの組合せのいずれにも、ＨＩＶ調節遺伝子も存在することができる。ＨＩＶ調節遺伝子はｖｐｒ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、ｎｅｆ、ｔａｔ及びｒｅｖである。好ましい実施態様におけるＤＮＡ構築体はプロモーター、エンハンサー及びポリアデニル化シグナルから成る。プロモーターはＨＩＶＬＴＲ、ヒトＡｃｔｉｎ、ヒトＭｙｏｓｉｎ、ＣＭＶ、ＲＳＶ、Ｍｏｌｏｎｅｙ、ＭＭＴＶ、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン及びＥＢＶから成る群から選択されることができる。エンハンサーはヒトＡｃｔｉｎ、ヒトＭｙｏｓｉｎ、ＣＭＶ、ＲＳＶ、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン及びＥＢＶから成る群から選択されることができる。ポリアデニル化シグナルはＬＴＲポリアデニル化シグナルとＳＶ４０ポリアデニル化シグナルとから成る群から選択されることができ、特に、ＳＶ４０マイナーポリアデニル化シグナルがとりわけ選択される。幾つかの実施態様では、２種類の接種物ワクチンを個体の空間的に分離した組織において、好ましくは異なる外肢、例えば右腕と左腕において筋肉内投与される。本発明の各接種物は約０．１〜約１０００μｇのＤＮＡを含むことができる。好ましくは、各接種物は約１〜約５００μｇのＤＮＡを含む。より好ましくは、各接種物は約２５〜約２５０μｇのＤＮＡを含む。最も好ましくは、各接種物は約１００μｇのＤＮＡを含む。幾つかの実施態様における接種物は滅菌等張性キャリヤー、好ましくはリン酸塩緩衝化生理的食塩水又は生理的食塩水溶液中に含まれる。幾つかの実施態様では、ワクチン投与の前に、ワクチン接種すべき組織に、上述し、検討したような、遺伝的ワクチン促進剤を注射する。ＧＶＦ類の注入はワクチン接種の約２４時間前までに実施することができる。ＧＶＦ類を遺伝的構築体の投与の直前又はこの投与と同時に投与することが考えられる。ＧＶＦは遺伝的構築体が投与されるべき部位に投与される。ＧＶＦを遺伝的構築体の投与後、例えばこの投与の直後に投与することができることも考えられる。他の実施態様では、上述し、検討したような遺伝的ワクチン促進剤が遺伝的構築体と共に、単一薬剤組成物として投与される。ＧＶＦと遺伝的構築体とはこの混合物の投与の直前に混合することができる。幾つかの好ましい実施態様では、上述し、検討したような遺伝的ワクチン促進剤を遺伝的構築体と共に単一薬剤組成物として処方する。したがって、幾つかの実施態様は２種類の接種物ワクチンを含み、１種類の接種物は２つのＨＩＶ構造遺伝子を有するＤＮＡ又はＲＮＡ構築体を含み、他方の接種物は、一緒にした接種物がＨＩＶ構造遺伝子の完全な集合体を含むように、残りの第３ＨＩＶ構造遺伝子を有するＤＮＡ又はＲＮＡ構築体を含む。各ＤＮＡ構築体上の構造遺伝子はプロモーター、エンハンサー及びポリアデニル化シグナルに作用的に連結する。同じ又は異なる調節要素がウイルス遺伝子の発現を制御することができる。個体にワクチン接種する場合に、２種類の接種物を異なる部位に、好ましくは異なる腕に筋肉内投与する。本発明の幾つかの実施態様では、上述し、検討したような遺伝的ワクチン促進剤を、接種物が投与される予定である部位に投与する。本発明の幾つかの実施態様では、遺伝的ワクチン促進剤を遺伝的構築体と共に製剤に含める。幾つかの実施態様では、ワクチン接種手段を少なくとも１回、好ましくは２回又は３回繰り返す。各ワクチン接種手段は２４時間〜２か月間の間隔をおいて実施される。幾つかの実施態様では、ワクチンをニードレス注入デバイスによって投与する。幾つかの実施態様では、ワクチンをニードレス注入デバイスを用いて皮下投与し、したがって、同時に筋肉内、皮内及び皮下投与し、この物質を間質的に(int erstitially)も投与する。好ましい遺伝的構築体は下記を含む。プラスミドとクローニング方法(cloning strategies)：２種類のプラスミドを構築した：１種類はＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌを含み、他方はＨＩＶｅｎｖを含む。ＮＩＨＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＲｅｆｅｒｅｎｃｅＲｅａｇｅｎｔＰｒｏｇｒａｍ（ＡＲＲＲＰ），ＡＩＤＳ、ＮＩＡＩＤ、ＮＩＨ部門を通してＤｒ．ＭａｌｃｏｌｍＭａｒｔｉｎから、ＨＩＶ−１ゲノムクローンｐＮＬ４３を入手した、これは遺伝的構築体のためのＨＩＶ−１ウイルス遺伝子の出発物質として用いることができる。或いは、感染細胞のＨＩＶ分子クローンを、ポリメラーゼ連鎖テクノロジーの適用によって、ＨＸＢ２クローン、ＭＮクローン並びにＳＦ又はＢＡＬ−１クローンを含む構造のために充分に修飾することができる。ｐＮＬ４３クローンは、ＨＩＶ−１プロウイルス(proviral)ＤＮＡと、ｐＵＣ１８にクローン化した組込み部位から３ｋｂの宿主配列から成る構築体である。ｐＮＬ−ｐｕｒｏ−ｅｎｖ^-プラスミドの構築：このプラスミドはｇａｇｐｏｌの発現のために構築した。ｐＮＬ４３のｎｏｎ−ＨＩＶ５’フランキングヒトＤＮＡの範囲内のＳｔｕＩ部位をＳｔｕＩによる部分的消化とその後の大腸菌(E.coli)ポリメラーゼ１による遊離端部(free en ds)の消化とによって分解した(destroyed)。この線状プラスミドを充填（フィルイン）し、次に自己連結させて(self ligated)、ＨＩＶゲノム内にユニークなＳｔｕＩ部位が残された。このプラスミド（ｐＮＬＤｓｔｕ）を次に平滑化(blunt ing)酵素ＳｔｕＩとＢｓａＢＩとによって消化させて、ｇｐ１２０のコーディング配列の大きな区分を除去した。ＳＶ４０プロモーターとピューロマイシン耐性コーディング領域（ピューロマイシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＣ））とをｐＢＡＢＥ−ｐｕｒｏ［ＭｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎとＬａｎｄ，１９９０，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１８（１２）：３５８７〜３５９６（これは本明細書に援用される）、ＩｍｐｅｒｉａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄのＤｒ．ＨａｒｔｍｕｔＬａｎｄによって好意により提供］から、ＥｃｏＲＩとＣｌａＩとを用いて単離した。このフラグメントを平滑化し、次に、ＳｔｕＩ／ＢｓａＢＩ消化ｐＮＬＤｓｔｕにクローン化した。ＨＩＶの３’ＬＴＲがＰＡＣメッセージのためのポリＡ機能を提供することができるように正確な配向のＳＶ４０−ｐｕｒｏフラグメントによってクローンを選択した。このプラスミドをｐＮＬｐｕｒｏと名付けた。ＨＩＶｇａｇｐｏｌベクターからｖｐｒ調節遺伝子を欠失させるためのクローン化方法：ユニークなｐｆ１ＭＩ部位の丁度上流からｖｉｆ終止コドンの直後までの領域をプライマーを用いてＰＣＲによって増幅し、ｖｐｒのアミノ酸２２に非保存的アミノ酸変化（ｇｌｕ−＞ｖａｌ）と、アミノ酸２２直後のｖｐｒリーディングフレーム中の終止コドンと、この新たな終止コドン直後のＥｃｏＲＩ部位とを導入した。このＰＣＲフラグメントをｐＮＬｐｕｒｏ又はｐＮＬ４３のｐｆ１ＭＩ −ＥｃｏＲＩフラグメントと置換した。この置換はｖｐｒのオープンリーディングフレームの１２２ヌクレオチドの欠失を生じ、したがって、点突然変異方法が必然的に伴う逆転(reversion)の可能性を排除する。得られるプラスミド（ｐＮＬｐｕｒｏ△ｖｐｒ）はｖｐｒの最初の２１天然アミノ酸プラスバリンプラス他の残りのＨＩＶ−１遺伝子及びこれらのネイティブ形のスプライス部位（ジャンクション）をコードする。このような欠失方法(deletion strategy)はｎｅｆ、ｖｉｆ及びｖｐｕにも適用可能であり、構造遺伝子の発現を可能にするが、生存(live)組換えウイルスの発生(generation)から保護する。エンベロープ発現のためのプラスミド構築：ＨＩＶ−１ＨＸＢ２のエンベロープ遺伝子をコードするＤＮＡセグメントをＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＲｅｆｅｒｅｎｃｅＲｅａｇｅｎｔＰｒｏｇｒａｍから入手されたλクローン化ＤＮＡを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅方法によってクローン化した。５’及び３’プライマーは、それぞれ、ＸｈｏＩ部位を組込んだ５’−ＡＧＧＣＧＴＣＴＣＧＡＧＡＣＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＡＡＧＡＡＡＴＧ−３’（配列番号：１）と、ＸｂａＩ部位を組込んだ５’−ＴＴＴＣＣＣＴＣＴＡＧＡＴＡＡＧＣＣＡＴＣＣＡＡＴＣＡＣＡＣ− ３’（配列番号：２）であり、これらはｇｐ１６０、ｔａｔ及びｒｅｖコーディング領域を含む。ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを製造者の使用説明書（Ｐｅｒｋｉｎ−ＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓ社）に従って用いて、遺伝子特異的増幅を実施した。このＰＣＲ反応生成物を０．５μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫによって３７ ℃において３０分間処理して、次にフェノール／クロロホルム抽出とエタノール沈降とによって処理した。回収したＤＮＡを次にＸｈｏ１とＸｂａ１とによって３７℃において２時間消化させ、アガロースゲル電気泳動にさらした。単離し、精製したＸｈｏ１−Ｘｂａ１ＰＣＲフラグメントをＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔプラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社，カリフォルニア州，ラジョラ）にクローン化し、次に、真核発現ベクターｐＭＡＭｎｅｏＢｌｕｅ（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社，カリフォルニア州，パロアルト）にサブクローン化した。得られた構築体をｐＭ１６０と名付けた（図１）。プラスミドＤＮＡをＣｓＣｌグラジエント超遠心分離によって精製した。ＤＮＡ構築体ｐＭ１６０はＨＩＶ−１／ＨＸＢ２（Ｆｉｓｈｅｒ，Ａ．Ｇ．等，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１６：２６２〜２６５）ｇｐ１６０膜結合糖タンパク質を、プロモーターとしてのＭＭＴＶＬＴＲによるＲＳＶエンハンサー要素の制御下でコードする。ＨＩＶ−１ｅｎｖ−ｒｅｖプラスミドと呼ばれる代替えエンベロープ発現プラスミド構築：ＨＩＶ−１ＨＸＢ２のｒｅｖ及びｖｐｕの２つのエキソンと、エンベロープオープンリーディングフレームとをコードする領域をＰＣＲによって増幅し、発現ベクターｐＣＮＤＡ／ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローン化した。このプラスミドはＣＭＶプロモーターによってエンベロープ産生をもたらす。産生と精製：大腸菌（ＤＨ５アルファ）におけるプラスミドを下記のように増殖させる：ＬＢプラスアンピシリン寒天プレートに、凍結ストックからの所望のプラスミド培養物を画線培養する。このプレートを３７℃において一晩（１４〜１５時間）インキュベートする。このプレートから単一コロニーを採取し、ペプトン製剤と５０μｇ／ｍｌのアンピシリンとを含むＬＢ培地１５ｍｌ中に接種する。この培養物を３７℃において振とうしながら（約１７５ｒｐｍ）８〜１０時間成長させる。ＯＤ₆₀₀読取り値は少なくとも１．０であるべきである。ペプトンと５０μｇ／ｍｌのアンピシリンとを含むＬＢ培地１リットルに１．０ＯＤの培養物を接種する。これらのこれらの１〜２リットル培養物を一晩３７℃において振とうしながら（１７５ｒｐｍ）増殖させる。大腸菌（ＤＨ５アルファ菌株）内で増殖させたプラスミドを下記方法によって回収し、精製する。細胞を溶解し、プラスミドを精製するための一般的方法は “ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，第２版，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，１９８９に見いだすことができる。細胞を濃縮し(concentrated)、グルコース−ｔｒｉｓ −ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）緩衝液で洗浄する。濃縮細胞をリソチームによる処理によって溶解し、０．２ＮＫＯＨによって簡単に(briefly)処理し、次に、ｐＨを酢酸カリウム／酢酸緩衝液によって５．５に調節する。遠心によって不溶物を除去する。上清に、２−プロパノールを加えて、プラスミドを沈降させる。プラスミドをｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液中に再溶解し、フェノール／クロロホルム抽出と再度の２−プロパノールによる沈降とによってさらに精製する。下記方法を含めた多様な方法によって、内毒素を任意に除去することができる：例えばポリミキシンのような固定物質による特異的吸着［Ｔａｎｉ等，Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ａｒｔｉｆ．ＣｅｌｌｓＩｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（２〜４）：４５７〜６２（１９９２）；Ｉｓｓｅｋｕｔｚ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ６１（３）：２７５〜８１（１９８３）］；例えば８Ａ１及びＨＡ−１Ａ^TMのような、抗内毒素モノクローナル抗体［Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ；Ｂｏｇａｒｄ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０（１０）：４４３８〜４４４９（１９９３）；Ｒｉｅｔｓｃｈｅｌ等，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３８６３頁（１９９３）］；正帯電デプスフィルター［Ｈｏｕ等，Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４４（４）：２０４〜９（７−８月，１９９０年）］；ポリ（ガンマ−メチルＬ− グルタメート）［Ｈｉｒａｙａｍａ等，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（東京）４０（８）：２１０６〜９（１９９２）］；ヒスチジン［Ｍａｔｓｕｍａｅ等，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２：（２）：１２９〜４０（１９９０）］；疎水性相互作用カラムと膜［Ａｉｄａ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１３２（２）：１９１〜５（１９９０）；Ｕｍｅｄａ等，Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ａｒｔｉｆ．ＣｅｌｌｓＡｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ１８（４）：４９１〜７（１９９０）；Ｈｏｕ等，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１０７３（１）：１４９〜５４（１９９１）；Ｓａｗａｄａ等，Ｊ．Ｈｙｇ．（Ｌｏｎｄｏｎ）９７（１）：１０３〜１４（１９８６）］；例えばＢｒｏｗｎｌｅｅＰｏｌｙｐｏｒｅＲｅｓｉｎ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カリフォルニア州，パロアルト）、ＸＵＳ４０３２３．００（ＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌ，ミシガン州，ミッドランド）、ＨＰ２０，ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化成，米国）、ＨａｍｉｌｔｏｎＰＲＰ−１，ＰＲＰ−ｉｎｆｉｎｉｔｙ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ネバダ州，レノ）、ＪｏｒｄｉＲｅｓｅｒｖｅｄ −ＰｈａｓｅＤＶＢ，ＪｏｒｄｉＧｅｌＤＶＢ，ＰｏｌｙｍｅｒＬａｂｓＰＬｇｅｌ^TM（Ａｌｌｔｅｃｈ，イリノイ州，ディアフィールド）、ＶｙｄａｃＰＬｘTM（ＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓＧｒｏｕｐ，カリフォルニア州，ヘスペリア）のような疎水性ポリスチレン／ジビニルベンゼン又はジビニルベンゼン樹脂を含めた内毒素の除去に有用な、特異的な疎水性樹脂；他の内毒素除去物質及び方法はＤｅｔｏｘｉ−Ｇｅｌ^TM内毒素除去ゲル（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌ，イリノイ州，ロックフォード）；ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＮｏｔｅ２０６（ｐｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ社，ニュージャージー州，ピスカタウェイ）を含む。一般的には、Ｓｈａｒｍａ，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８：５〜２２（１９８６）をも参照のこと。好ましい抗内毒素モノクローナル抗体は内毒素の保存ドメイン、好ましくは脂質Ａに対する抗体、内毒素の最も構造的に保存される部分に結合する。このような抗脂質Ａモノクローナル抗体は高アフィニティネズミＩｇＧモノクローナル抗体８Ａ１と、ヒト抗脂質ＡＩｇＭ（ｋ）モノクローナル抗体ＨＡ−１Ａ^TMとを含む。ＨＡ−１Ａ^TMはヒトＢ大腸菌Ｊ５ワクチンから得られた(drived)。ＨＡ−１Ａ^TMは多様な細菌内毒素（リポ多糖）と広範囲に交差反応性であると報告される。実施例２下記は本発明の方法に使用可能である構築体のリストである。以下に挙げる構築体の多くを製造するための出発物質として用いられるベクターｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏは、Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ，Ｊ．Ｐ．とＨ．Ｌａｎｄ，１９９０Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１８（１２）：３５８７〜３５９６（本明細書に援用される）によって最初に構築され、報告された。ｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏプラスミドは哺乳動物の細胞における外因性遺伝子の発現のために特に有用である。発現されるべきＤＮＡ配列はＭｏｌｏｎｅｙネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）ロングターミナルリピート(Iong terminal repeat)（ＬＴＲ）プロモーターの制御下でクローニング部位に挿入される。このプラスミドはピューロマイシン耐性のための選択可能なマーカーを含む。実施例３プラスミドｐＢａ・Ｖα３は、ｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏのＥｃｏＲＩ部位にクローン化されたＬ、Ｖ及びＪセグメントを含むＴ細胞レセプターＶα３領域をコードする２．７ｋｂＥｃｏＲＩゲノムフラグメントを含む７．８ｋｂプラスミドである。このＴ細胞レセプター誘導標的タンパク質はＴ細胞仲介自己免疫疾患と、クロノタイプ(clonotypic)Ｔ細胞リンパ腫及び白血病とに対する免疫化と治療とに有用である。実施例４プラスミドｐＢａ・ｇａｇｐｏｌ−ｖｐｒは、ｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化されたＨＩＶ／ＭＮからのｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子とｖｉｆ遺伝子とを含む９．８８ｋｂプラスミドである。ｖｐｒ遺伝子は欠失する。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドはＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。ＨＩＶＤＮＡ配列は、Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）に発表される。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９から入手可能である。実施例５プラスミドｐＭ１６０はＨＩＶ−１／３Ｂエンブロープタンパク質と、ｐＭＡＭｎｅｏＢｌｕｅにクローン化されたｒｅｖ／ｔａｔ遺伝子とをコードする２．３ｋｂＰＣＲフラグメントを含む１１．０ｋｂプラスミドである。ｎｅｆ領域は欠失する。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。ＨＩＶ−１／３ＢのＤＮＡ配列は、Ｆｉｓｈｅｒ，Ａ．１９８５Ｎａｔｕｒｅ３１６：２６６７２（本明細書に援用される）に発表される。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．ＫＯ３４５５から入手可能である。実施例６プラスミドｐＢａ・ＶＬは、ＸｂａＩとＥｃｏＲＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された抗ＤＮＡ抗体のＶＬ領域をコードするＰＣＲフラグメントを含む５．４ｋｂプラスミドである。抗体誘導標的タンパク質は、Ｂ細胞仲介自己免疫疾患と、クロノタイプＢ細胞リンパ腫及び白血病とに対する免疫化と治療とに有用である標的タンパク質の例である。抗体からの可変な機能的領域の一般的なクローン化方法は、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．等，１９９０Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：１０６６（本明細書に援用される）に見いだすことができる。実施例７プラスミドｐＯｓｐＡ．Ｂは、ＢａｍＨＩとＳａｌＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された，ライム病の原因であるスピロヘータ、ＢｏｒｒｅｌｉａｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉのＯｓｐＡとＯｓｐＢ抗原をコードするコーディング領域を含む６．８４ｋｂプラスミドである。ＯｓｐＡとＯｓｐＢフラグメントを生成するために用いられるＰＣＲプライマーは５’−ＧＡＡＧＧＡＴＣＣＡＴＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧ−３’（配列番号：３）と、５’ −ＡＣＴＧＴＣＧＡＣＴＴＡＴＴＴＴＡＡＡＧＣＧＴＴＴＴＴＡＡＧ−３’（配列番号：４）である。Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．等，１９９２ＤＮＡａｎｄＣｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．１１（３）：２０７（これは本明細書に援用される）を参照のこと。標的タンパク質をコードする、これらの病原菌遺伝子を含むプラスミドは、ライム病に対する免疫化に有用である。実施例８プラスミドｐＢａ・Ｒｂ−Ｇは、ＢａｍＨＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された狂犬病Ｇタンパク質をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む７．１０ｋｂプラスミドである。狂犬病Ｇタンパク質をコードする、この病原菌遺伝子を含むプラスミドは、狂犬病に対する免疫化に有用である。このＤＮＡ配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ３２７５１から入手可能である。Ａｎｉｌｉｏｎｉｓ，Ａ等，１９８１Ｎａｔｕｒｅ２９４：２７５（これは本明細書に援用される）をも参照のこと。実施例９プラスミドｐＢａ．ＨＰＶ−Ｌ１は、ＢａｍＨＩとＥｃｏＲＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された，ＨＰＶ菌株１６、１８、３１及び３３を含むヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）のＬ１キャプシドタンパク質をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む６．８０ｋｂプラスミドである。このプラスミドは、ＨＰＶ感染とそれによって惹起される癌とに対する免疫化に有用である。このＤＮＡ配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１５７８１に開示される。Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．，１９９０ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，２巻，Ｃｈａｎｎｏｃｋ，Ｒ．Ｍ．等編集，第５８章：１６２５と、Ｓｈａｈ，ＫとＰ．Ｈｏｗｌｅｙ，１９９０ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，２巻，Ｃｈａｎｎｏｃｋ，Ｒ．Ｍ．等編集，第５９章（これらの両方とも本明細書に援用される）をも参照のこと。実施例１０プラスミドｐＢａ・ＨＰＶ−Ｌ２は、ＢａｍＨＩとＥｃｏＲＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された，ＨＰＶ菌株１６、１８、３１及び３３を含むヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）のＬ２キャプシドタンパク質をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む６．８０ｋｂプラスミドである。このプラスミドは、ＨＰＶ感染とそれによって惹起される癌とに対する免疫化に有用である。このＤＮＡ配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１５７８１に開示される。Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．，１９９０ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，２巻，Ｃｈａｎｎｏｃｋ，Ｒ．Ｍ．等編集，第５８章：１６２５と、Ｓｈａｈ，ＫとＰ．Ｈｏｗｌｅｙ，１９９０ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，２巻，Ｃｈａｎｎｏｃｋ，Ｒ．Ｍ．等編集，第５９章（これらの両方とも本明細書に援用される）をも参照のこと。実施例１１プラスミドｐＢａ・ＭＮｐ７は、ＢａｍＨＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された，ＨＩＶＭＮｇａｇ（コアタンパク質）配列を含むｐ７コーディング領域をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む５．２４ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９から入手可能である。実施例１２プラスミドｐＧＡ７３３−２は、結腸直腸癌細胞ラインＳＷ９４８からｐＣＤＭ８ベクター［Ｓｅｅｄ，Ｂ．とＡ．Ａｒｕｆｆｏ，１９８７Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：３３６５（これは本明細書に援用される）］にＢｓｔＸＩ部位においてクローン化された，ＧＡ７３３−２腫瘍表面抗原を含む６．３ｋｂプラスミドである。腫瘍関連標的タンパク質は、例えば癌のような高増殖性疾患に対する免疫化と治療とに有用な標的タンパク質の例である。ＧＡ７３３−２抗原は結腸癌に対する有用な標的抗原である。ＧＡ７３３抗原はＳｚａｌａ，Ｓ．等，１９９０Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：３５４２〜３５４６（これは本明細書に援用される）に報告される。実施例１３プラスミドｐＴ４−ｐＭＶ７は、ＥｃｏＲＩ部位においてｐＭＶ７ベクターにクローン化されたヒトＣＤ４レセプターをコードするｃＤＮＡを含む１１．１５ｋｂプラスミドである。このＣＤ４標的タンパク質はＴ細胞リンパ腫に対する免疫化と治療とに有用である。プラスミドｐＴ４−ｐＭＶ７はＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ，ＣａｔａｌｏｇＮｏ．１５８から入手可能である。実施例１４プラスミドｐＤＪＧＡ７３３は、ＢａｍＨＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化されたＧＡ７３３腫瘍表面抗原を含む５．１ｋｂプラスミドである。腫瘍関連標的タンパク質は、例えば癌のような高増殖性疾患に対する免疫化と治療とに有用な標的タンパク質の例である。ＧＡ７３３抗原は結腸癌に対する有用な標的抗原である。実施例１５プラスミドｐＢａ・ＲＡＳは、最初にｐＺＩＰｎｅｏＲＡＳからサブクローン化され、ＢａｍＨＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化されたｒａｓコーディング領域を含む６．８ｋｂプラスミドである。ｒａｓ標的タンパク質は、細胞質シグナリング分子の例である。ｒａｓのクローニング方法はＷｅｉｎｂｅｒｇ１９８４Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４：１５７７（これは本明細書に援用される）に報告される。Ｒａｓコーディングプラスミドは、例えば癌のような高増殖性疾患、特に、例えば膀胱、筋肉、肺、脳及び骨の癌のようなｒａｓ関連癌に対する免疫化と治療とに有用である。実施例１６プラスミドｐＢａ・ＭＮｐ５５は、ＢａｍＨＩ部位においてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化されたＨＩＶＭＮｇａｇ前駆体（コアタンパク質）配列を含むｐ５５コーディング領域をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む６．３８ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９から入手可能である。実施例１７プラスミドｐＢａ・ＭＮｐ２４は、ＢａｍＨＩ部位とＥｃｏＲＩ部位とにおいてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された完全ＨＩＶＭＮｇａｇコーディング領域を含むｐ２４コーディング領域をコードするｐＭＮ−ＳＦ１鋳型からのＰＣＲ生成フラグメントを含む６．７８ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９から入手可能である。実施例１８プラスミドｐＢａ・ＭＮｐ１７は、ＢａｍＨＩ部位とＥｃｏＲＩ部位とにおいてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された、ＨＩＶＭＮｇａｇ（コアタンパク質）配列を含むｐ１７コーディング領域をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む５．５ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９１２０９２ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列は、本明細書に援用されるＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９から入手可能である。実施例１９プラスミドｐＢａ・ＳＩＶｅｎｖは、ＢａｍＨＩ部位とＥｃｏＲＩ部位とにおいてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化されたｐＢＲ３２２中にＳＩＶ２３９を含む構築体から増幅された２．７１ＰＣＲ生成フラグメントを含む７．８ｋｂプラスミドである。用いられるプライマーは：５’−GCCAGTTTTG GATCCTTAAA AAAGGCTTGG−３’ （配列番号：５）と５’−TTGTGAGGGA CAGAATTCCA ATCAGGG −３’ （配列番号：６）である。このプラスミドはＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＲｅｆｅｒｅｎｃｅＲｅａｇｅｎｔＰｒｏｇｒａｍ；ＣａｔａｌｏｇＮｏ．２１０から入手可能である。実施例２０プラスミドｐｃＴＳＰ／ＡＴＫ・ｅｎｖは、ｐｃＤＮＡ１／ｎｅｏベクターにサブクローン化されたＨＴＬＶ−１／ＴＳＰ及び／ＡＴＫ単離物からの完全ＨＴＬＶエンベロープコーディング領域をコードするＰＣＲ生成フラグメントを含む８．９２ｋｂプラスミドである。用いられるプライマーは：５’−CAGTGATATC CCGGGAGACT CCTC−３’ （配列番号：７）と５’−GAATAGAAGA ACTCCTCTAG AATTC −３’ （配列番号：８）である。プラスミドｐｃＴＳＰ／ＡＴＫ・ｅｎｖは１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：３５９９（これは本明細書に援用される）に報告される。ＨＴＬＶ．ｅｎｖはＨＴＬＶとＴ細胞リンパ腫とによる感染に対する免疫化と治療とに有用である。実施例２１プラスミドｐＢａ・ＭＮｇｐ１６０は、ｐＳＰ７２中にＭＮｅｎｖを含む構築体から増幅され、ＢａｍＨＩ部位とＥｃｏＲＩ部位とにおいてｐＢａｂｅ・ｐｕｒｏにクローン化された、２．８ｋｂＰＣＲ生成フラグメントを含む７．９ｋｂプラスミドである。用いられるプライマーは：５’−GCCTTAGGCG GATCCTATGG CAGGAAG −３’ （配列番号：９）と５’−TAAGATGGGT GGCCATGGTG AATT−３’ （配列番号：１０）である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２，ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列はＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９（これは本明細書に援用される）から入手可能である。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。実施例２２プラスミドｐＣ．ＭＮｐ５５は、ＭＮ単離物のｇａｇ領域から増幅され、ｐＣＥＰ４ベクターにクローン化された１．４ｋｂＰＣＲ生成フラグメントを含む１１．８ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。Ｒｅｉｚ，Ｍ．Ｓ．，１９９２，ＡＩＤＳＲｅｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏ．８：１５４９（これは本明細書に援用される）。この配列はＧｅｎｂａｎｋＮｏ．Ｍ１７４４９（これは本明細書に援用される）から入手可能である。実施例２３ＬＴＲ−２／ｅｒｂＢ−２構築体から切断され、ｐＣＥＰ４ベクターにサブクローン化された領域をコードするヒトｎｅｕ癌遺伝子を有する３．８ｋｂＤＮＡフラグメントを含む１４．２ｋｂプラスミドである。このｐＣ．ＮｅｕプラスミドはＤｉＦｉｏｒｅ１９８７Ｓｃｉｅｎｃｅ２３７：１７８（これは本明細書に援用される）に報告される。ｎｅｕ癌遺伝子標的タンパク質は例えば癌；特に、結腸、胸部、肺及び脳の癌のような、高増殖性疾患に対する免疫化と治療とに標的タンパク質として有用な、成長因子レセプターの例である。実施例２４プラスミドｐＣ．ＲＡＳは、最初にｐＺＩＰｎｅｏＲＡＳからサブクローン化され、ＢａｍＨＩ部位においてｐＣＥＰ４にサブクローン化された、ｒａｓ癌遺伝子コーディング領域を有する１．４ｋｂＤＮＡフラグメントを含む１１．７ｋｂプラスミドである。このｐＣ．ＲＡＳプラスミドはＷｅｉｎｂｅｒｇ１９８４Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４：１５７７（これは本明細書に援用される）に報告される。このｎｅｕ標的タンパク質は細胞質シグナリング分子の１例である。Ｒａｓコーディングプラスミドは、例えば癌；特に、膀胱、筋肉、肺、脳及び骨の癌のような、高増殖性疾患に対する免疫化と治療とに有用である。実施例２５プラスミドｐＮＬｐｕｒｏは、ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌとＳＶ４０−ｐｕｒｏ挿入を含む１５ｋｂプラスミドである。ＨＩＶ標的タンパク質をコードする、これらのＨＩＶウイルス遺伝子を含むプラスミドは、ＨＩＶ感染とＡＩＤＳとに対する免疫化と治療とに有用である。実施例２６プラスミドｐＭ１６０は、ＨＩＶのｅｎｖ部分から１つ以上の遺伝子を発現させるために有用な幾つかのプラスミドの出発物質として使用可能である。ｐＭ１６０の構築は上述する。このプラスミドはｇｐ１６０、ｔａｔ及びｒｅｖコーディング領域を含む。ｎｅｆ遺伝子は存在しない。ｇｐ１６０／ｒｅｖ／ｔａｔ遺伝子発現を制御するプロモーターはＭＭＴＶである。このプロモーターを削除して、Ａｃｔｉｎプロモーター、ミオシンプロモーター、ＨＩＶＬＴＲプロモーター及びＣＭＶプロモーターと置換することができる。アンピシリン耐性を与える遺伝子は削除することも、さもなくば不活化することもできる。ネオマイシン耐性を与える遺伝子は細菌プロモーターの制御下に置くことができる。このプラスミドからラウス肉腫ウイルスエンハンサーを削除することができる。ＲＳＶエンハンサーは筋肉クレアチンエンハンサーと置換することができる。ｇｐ１６０／ｒｅｖ／ｔａｔ遺伝子は異なるリーディングフレームにおいて同じヌクレオチド配列を重複し、共有する。ｒｅｖ遺伝子はその開始コドンを異なるコドンに変えることによって削除することができる。同様に、ｔａｔ遺伝子を同じ手段によって削除することができる。ｇｐ１６０／ｒｅｖ／ｔａｔを制御するためにＨＩＶＬＴＲプロモーターを用いるプラスミド以外の各プラスミドにおいて、ｒｅｖ又はｔａｔ又はｒｅｖとｔａｔの両方を削除することができる。ＨＩＶＬＴＲプロモーターを用いるプラスミドでは、ｔａｔが存在しなければならない。下記表はｐＭ１６０修飾プラスミドを記載する。各プラスミドは不活化アンピシリン遺伝子を有する。各々はＲＳＶエンハンサーを欠失している。幾つかはエンハンサーを有さない（ｎｏ）；また、幾つかはクレアチン筋肉エンハンサー（ＣＭＥ）を有する。幾つかはＨＩＶｒｅｖ遺伝子を有し（ｙｅｓ）、他のプラスミドではＨＩＶｒｅｖ遺伝子が欠失する（ｎｏ）。幾つかはＨＩＶｔａｔ遺伝子を有し（ｙｅｓ）、これは他では欠失する（ｎｏ）。構築体ＲＡ−２９〜ＲＡ−５６は、各場合にネオマイシン遺伝子を制御するプロモーターが細菌プロモーターであることを除いて、それぞれ、ＲＡ−１〜ＲＡ −３２に同じである。実施例２７ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子を発現する幾つかの異なるプラスミドを作製するために、出発物質としてプラスミドｐＮＬｐｕｒｏを用いることができる。上述したように、ｇａｇｐｏｌの発現のために、ｐＮＬｐｕｒｏを構築した。上述したプラスミドｐＮＬｐｕｒｏ△ｖｐｒは、ワクチン接種によって導入される遺伝子セットから必要な調節タンパク質を除去するために、ＨＩＶｇａｇｐｏｌベクターからｖｐｒ調節遺伝子を削除するように設計した。標準的分子生物学テクニックと広範囲に入手可能な出発物質とを用いて当業者によって、プラスミドｐＮＬ４３ｐｕｒｏに、ｖｐｒ以外の他の変化を施すことができる。ＨＩＶ配列のヒトフランキング配列５’と３’は幾つかの方法によって除去することができる。例えば、ＰＣＲを用いて、ＨＩＶ、ＳＶ４０−ｐｕｒｏ及びｐＵＣ１８配列のみを増幅し、再構成することができる。ウイルスのパッケージングに重要であるＨＩＶのｐｓｉ領域をｐＮＬ４３ｐｕｒｏに基づくプラスミドから削除することができる。ｐｓｉ領域を削除するために、ｐＮＬ４３ｐｕｒｏプラスミドをＳａｃＩとＳｐｅＩとによって切断する。この消化はｐｓｉ領域並びにｐｓｉの上流である５’ＬＴＲとｐｓｉの下流であるｇａｇ／ｐｏｌ領域の部分とを除去する。欠失した非ｐｓｉ配列を再挿入するために、ＰＣＲ増幅を実施して、このような配列を再生する。ｐｓｉを再生せずに、ｐｓｉに対するＨＩＶ配列５’と３’の部分を再生するプライマーを設計する。これらのプライマーは５’ＬＴＲのプラスミド５’部分にＳａｃＩ部位を再形成する。プライマーはこのＳａｃＩ部位の上流の部位から下流に移動し、ｐｓｉ領域の５’末端の丁度３’部位に達して、３’末端にＡａｔＩ部位を生成する。ｐｓｉ領域の丁度５’から出発するプライマーもＡａｔＩ部位を生成し、ＳｐｅＩ部位の３’から出発すると、この部位を再生する。ＰＣＲ生成フラグメントをＳａｃＩ、ＡａｔＩ及びＳｐｅＩによって消化させて、ＳａｃＩ／ＳｐｅＩ消化ｐＮＬｐｕｒｏ−ｐｓｉフラグメントと一緒に結合させる。ＨＩＶ５’ＬＴＲプロモーターを削除して、モロニー（Ｍｏｌｏｎｅｙ）ウイルスプロモーター、ＭＭＴＶＬＴＲ、Ａｃｔｉｎプロモーター、ミオシンプロモーター及びＣＭＶプロモーターと置換することができる。ＨＩＶ３’ＬＴＲポリアデニル化部位を削除して、ＳＶ４０ポリアデニル化部位と置換することができる。アンピシリン耐性を与える遺伝子を削除するか、さもなくば不活化することができる。下表は、ＨＩＶｐｓｉとｖｐｒ領域が欠失し、ＨＩＶ配列のヒトフランキング領域５’及び３’が欠失する、ｐＮＬｐｕｒｏに基づく構築体のリストである。構築体ＬＡ−１７〜ＬＡ−３２は、各場合にヒトフランキング配列の少なくとも１つが残留する以外は、それぞれ、ＬＡ−１〜ＬＡ−１６に同じである。実施例２８ｅｎｖ遺伝子を発現するための他の構築では、ＨＩＶのこの領域を商業的に入手可能なプラスミドｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に挿入することができる。ｐＣＥＰ４プラスミドはＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒウイルス複製起点と、組込みなしに高コピーエピソーム複製を生じる核抗原ＥＢＮＡ−１コーディング領域とを含むので、特に有用である。ｐＣＥＰ４はまた、チミジンキナーゼプロモーターとポリアデニル化部位との調節制御下にあるヒグロマイシンマーカーを含む。ＨＩＶｅｎｖコーディング領域はＣＭＶプロモーターとＳＶ４０ポリアデニル化部位との調節制御下に置かれる。ＨＩＶｅｎｖコーディング領域は２．３ｋｂＰＣＲフラグメントとしてＨＩＶ／３Ｂ，Ｇｅｎｅｂａｎｋ配列Ｋ０３４５５から得られた。生じるｐＣＥＰ４に基づくプラスミド，ｐＲＡ−１００は染色体外に維持され、ｇｐ１６０タンパク質を産生する。実施例２９ｅｎｖ遺伝子を発現するための他の構築では、ＨＩＶのこの領域を商業的に入手可能なプラスミドｐＲＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に挿入することができる。ｐＲＥＰ４プラスミドはＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒウイルス複製起点と、組込みなしに高コピーエピソーム複製を生じる核抗原ＥＢＮＡ−１コーディング領域とを含むので、特に有用である。ｐＲＥＰ４はまた、チミジンキナーゼプロモーターとポリアデニル化部位との調節制御下にあるヒグロマイシンマーカーを含む。ＨＩＶｅｎｖコーディング領域はＲＳＶプロモーターとＳＶ４０ポリアデニル化部位との調節制御下に置かれる。ＨＩＶｅｎｖコーディング領域は２．３ｋｂＰＣＲフラグメントとしてＨＩＶ／３Ｂ，Ｇｅｎｅｂａｎｋ配列Ｋ０３４５５から得られた。生じるｐＣＥＰ４に基づくプラスミド，ｐＲＡ−１０１は染色体外に維持され、ｇｐ１６０タンパク質を産生する。実施例３０ｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子を発現するための他の構築では、ＨＩＶのこの領域を商業的に入手可能なプラスミドｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に挿入することができる。ｐＣＥＰ４プラスミドはＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒウイルス複製起点と、組込みなしに高コピーエピソーム複製を生じる核抗原ＥＢＮＡ−１コーディング領域とを含むので、特に有用である。ｐＣＥＰ４はまた、チミジンキナーゼプロモーターとポリアデニル化部位との調節制御下にあるヒグロマイシンマーカーを含む。ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌコーディング領域はＣＭＶプロモーターとＳＶ４０ポリアデニル化部位との調節制御下に置かれる。ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌコーディング領域はＨＩＶＭＮ，Ｇｅｎｅｂａｎｋ配列Ｍ１７４４９から得られ、ｖｉｆ遺伝子を含む。ｖｐｒ遺伝子は含まれない。生じるｐＣＥＰ４に基づくプラスミド，ｐＬＡ−１００は染色体外に維持され、ＧＡＧ５５、逆転写酵素、プロテアーゼ及びインテグラーゼタンパク質を産生する。実施例３１ｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子を発現するための他の構築では、ＨＩＶのこの領域を商業的に入手可能なプラスミドｐＲＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に挿入することができる。ｐＲＥＰ４プラスミドはＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒウイルス複製起点と、組込みなしに高コピーエピソーム複製を生じる核抗原ＥＢＮＡ−１コーディング領域とを含むので、特に有用である。ｐＲＥＰ４はまた、チミジンキナーゼプロモーターとポリアデニル化部位との調節制御下にあるヒグロマイシンマーカーを含む。ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌコーディング領域はＣＭＶプロモーターとＳＶ４０ポリアデニル化部位との調節制御下に置かれる。ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌコーディング領域はＨＩＶＭＮ，Ｇｅｎｅｂａｎｋ配列Ｍ１７４４９から得られ、ｖｉｆ遺伝子を含む。ｖｐｒ遺伝子は含まれない。生じるｐＲＥＰ４に基づくプラスミド，ｐＬＡ−１０１は染色体外に維持され、ＧＡＧ５５、逆転写酵素、プロテアーゼ及びインテグラーゼタンパク質を産生する。実施例３２本明細書でｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖと名付ける下記構築体は、ＨＩＶｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子を発現するために有用である。このプラスミドは、カナマイシン耐性遺伝子と、ＤＮＡ複製のｐＢＲ３２２起点とを含む。転写調節のために提供される配列は、サイトメガロウイルスプロモーターと、ラウス肉腫ウイルスエンハンサーと、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルとを含む。ｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖに含まれるＨＩＶ−１配列は、ｇａｇオープンリーディングフレームのｐ１７、ｐ２４及びｐ１５をコードする配列と；小欠失を含む逆転写酵素をコードする配列と；ｐｏｌリーディングフレームのインテグラーゼの不活性アミノ末端をコードする配列と；ｒｅｖをコードする配列とを含む。ＨＩＶ配列の各々はＨＩＶ−１菌株ＨＸＢ２に由来する。ｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖには、幾つかの安全性特徴(safty feature)が含まれる。これらはＣＭＶプロモーターと非レトロウイルスポリ（Ａ）部位との使用を含む。さらに、ψ配列の欠失はウイルスＤＮＡをパッケージする可能性を制限する。さらに、逆転写酵素の多重突然変異は酵素的に不活性な産物を生じる。さらに、インテグラーゼの大きな欠失は不活性な産物を生じ、細菌の形質転換細胞(t ransformant)を安定化するためにカナマイシン耐性マーカーが用いられる。プラスミドｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖは下記のように構築する：工程１．Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にクローン化されるＨＩＶ−１（ＨＸＢ２）の一部のサブクローンを用いる。ＨＩＶ−１のサブクローンは完全な５’ＬＴＲと、ヌクレオチド５７９５（Ｇｅｎｅｂａｎｋナンバーリング）までのＨＩＶ−１ゲノムの残部とを含む。ＨＩＶ−１配列はＨＸＢ２Ｄプラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）から得られる。工程２．オープンリーディングフレームＨＸＢ２Ｄプラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）からのｇａｇの一部をＰＣＲさせる。ＰＣＲフラグメントをＮｏｔＩとＳｐｅＩとによって切断し、ＮｏｔＩとＳｐｅＩとによって制限された上記ＨＩＶ−１サブクーロンと連結させる。工程３．プライマー配列番号：１１と配列番号：１２とによって、ｇａｇ／ｐｏｌ結合(junction)と、ＨＸＢ２Ｄプラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）からのｐｏｌコーディング配列の一部とをＰＣＲさせる。ＰＣＲ生成物をＣｌａＩによって切断し、連結させる。連結したフラグメントをＢｃＩＩとＳａｌＩとによって切断し、ＢｃＩＩとＳａｌＩとによって消化させた工程２からのプラスミドと連結させる。工程４．工程３からのプラスミドをＢｓｐＭＩとＥｃｏＲＩとによって切断し、リンカーの配列番号：１３と配列番号：１４とをアニーリングすることによって形成されるアダプターと再連結させる。工程５．工程４からのプラスミドをＮｏｔＩとＳａｌＩとによって切断し、ｐＥＮＶ（以下）に関して記載する説明における４ａ又は４ｂからのプラスミドと連結させる。ＮｏｔＩとＳａｌＩとによってまた切断する。工程６．工程５からのプラスミドをＳａｌＩとＭｌｕＩとによって制限し、プライマー配列番号：１５と配列番号：１６とによるｒｅｖのＰＣＲによって得られるＰＣＲ生成物と連結させる。工程７．工程６からのプラスミドをＮｏｔＩによって切断し、プライマー配列番号：１７と配列番号：１８とによる、ＨＸＢ２Ｄプラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）中のｒｅｖ反応性要素(rev responsive element)のＰＣＲによって得られる生成物と連結させる。工程６と７は任意である。実施例３３本明細書でｐＥＮＶと名付ける下記構築体は、ＨＩＶｅｎｖ遺伝子を発現するために有用である。このプラスミドは、カナマイシン耐性遺伝子と、ＤＮＡ複製のｐＢＲ３２２起点とを含む。転写調節のために提供される配列は、サイトメガロウイルスプロモーターと、ラウス肉腫ウイルスエンハンサーと、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルとを含む。ｐＥＮＶに含まれるＨＩＶ−１配列は、ｖｐｕをコードする配列と；ｒｅｖをコードする配列と；ｇｐ１６０をコードする配列と；ｎｅｆの５０％をコードする配列と；ｖｉｆをコードする配列と；１３アミノ酸カルボキシ末端が欠失したｖｐｒをコードする配列とを含む。ｖｐｕ、ｒｅｖ，ｇｐ１６０及びｎｅｆ配列はＨＩＶ−１菌株ＭＮに由来する。ｖｉｆとｎｅｆ配列はＨＩＶ−１菌株ＨＸＢ２に由来する。ｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖには、幾つかの安全性特徴が含まれる。これらはＣＭＶプロモーターと非レトロウイルスポリ（Ａ）部位との使用を含む。さらに、ｔａｔが削除されており、ｎｅｆの５０％削除は“不活性”ｎｅｆ産物を生じる。さらに、ｖｉｆとｖｐｒとは正常配列の外に置かれ、ｖｐｒの部分的削除はさらに不活性なｖｐｒ産物を保証する。プラスミドｐＥＮＶは下記のように構築する：工程１．ＨｉｎｄＩＩＩとＥｃｏＲＩとによって消化させたｐＵＣ１８から出発する。ＣｏｌＥ１複製起点とｌａｃｉ遺伝子とを含む生成フラグメントを、我々の肉腫ウイルスエンハンサーを含むｐＭＡＭｎｅｏＢｌｕｅからのＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントと連結させるべきである。次に、生成プラスミド又はＣｌｏｎｔｅｃｈ（カリフォルニア州，パロアルト）からのｐＭＡＭｎｅｏ −ＢｌｕｅをＨｉｎｄＩＩＩとＢｇＩＩとによって消化させることができる。標準方法を用いて、ｇｅｎｅｂｌｏｃｋプラスミド（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のＰＣＲによって得られるｋａｎ遺伝子を含むフラグメントと連結させる。工程２．ｐＭＡＭｎｅｏ−Ｂｌｕｅを出発プラスミドとして用いる場合には、ＭｌｕＩとＥｃｏＲＩとによって消化させ、末端をポリメラーゼＩのＫｌｅｎｏｗフラグメントによって満たし、再連結させる。工程３．次に、ｐＭＡＭｎｅｏ−Ｂｌｕｅ又はｐＵＣ１８誘導プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩによって消化させ、ＳＶ４０ポリ（Ａ）部位と、プライマー配列番号：１９と配列番号：２０とによるｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州，サンジエゴ）のＰＣＲによって得られる早期スプライシング領域とに連結させる。工程４ａ．ＢａｍＨＩによって消化させ、プライマー配列番号：２１と配列番号：２２とによるｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州，サンジエゴ）のＰＣＲによって得られるＣＭＶプロモーターと連結させる。工程４ｂ．ＢａｍＨＩによって消化させ、プライマー配列番号：２３と配列番号：２４とによるＰＣＲによって得られるＭｏＭＬＶＬＴＲと連結させる。工程５．ＮｏｔＩとＭｌｕＩとによって消化させ、プライマー配列番号：２５と配列番号：２６とによるｐＭＮ−ＳＴＩのＰＣＲによって得られるＧＰ１６０コーディング領域と連結させる。工程６．ＭｌｕＩによって消化させ、ｖｉｆをその全体でコードする配列及び、プライマー配列番号：２７と配列番号：２８とによるＨＸＢ２プラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）のＰＣＲによる１３アミノ酸カルボキシ末端欠失したｖｐｒと連結させる。実施例３４幾つかの実施態様では、本発明は個体を単一接種物の投与によってＨＩＶに対して免疫化する方法に関する。この接種物は少なくとも１種類、好ましくは２種類、より好ましくは２種類より多い、又は複数のＨＩＶウイルス遺伝子或いは構造遺伝子の全てを含有する遺伝的構築体を含む。しかし、この接種物は全てのＨＩＶ遺伝子の完全な集合体を含む訳ではない。単一細胞にウイルス遺伝子の完全な集合体を供給するならば、この細胞内に完全な感染性ウイルスが組込まれうる恐れがある。したがって、本発明による遺伝的構築体は遺伝子のこのような完全な集合体を供給される訳ではない。安全性予防措置として、１種以上の重要な遺伝子を削除するか又は意図的に変化させて、感染性ウイルス粒子が形成されることがありえないことをさらに保証することができる。本発明の幾つかの実施態様では、ＨＩＶ構造遺伝子の１種類、２種類又は全ての少なくとも数部(portions)が与えられる。ＨＩＶ構造遺伝子はｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖから成る。これらの３種類の遺伝子の少なくとも１部が遺伝的構築体に与えられる。これらの３種類の遺伝子の少なくとも１種の数部が遺伝的構築体に与えられる。したがって、幾つかの実施態様では、ｇａｇとｐｏｌの各々の少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられ；幾つかの実施態様では、ｅｎｖの少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられ；幾つかの実施態様では、ｇａｇの少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられ；幾つかの実施態様では、ｐｏｌとｅｎｖの各々の少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられ；幾つかの実施態様では、ｇａｇとｅｎｖの各々の少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられ；幾つかの実施態様では、ｐｏｌの少なくとも１部が遺伝的構築体上に与えられる。任意に、全体の遺伝子が与えられる。任意に、これらの遺伝的構築体のいずれにも、ＨＩＶ調節遺伝子も存在することができる。ＨＩＶ調節遺伝子はｖｐｒ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、ｎｅｆ、ｔａｔ及びｒｅｖである。実施例３５本明細書に用いられる際には、用語「発現単位」は、ポリアデニル化シグナルに機能的に連結されるコーディング配列に機能的に連結されるプロモーターを含む核酸配列を称することが意味される。このコーディング配列は一つもしくは複数の蛋白質もしくはその断片をコードすることがある。好ましい態様では発現単位がプラスミド内に含まれる。本明細書に用いられる際には、用語「ＨＩＶ発現単位」は、ポリアデニル化シグナルに機能的に連結されるコーディング配列に機能的に連結されるプロモーターを含み、そしてそのコーディング配列がＨＩＶ蛋白質上に見いだされるエピトープと同一もしくは実質的に類似するエピトープを含むペプチドをコードする核酸配列を称することが意味される。「実質的に類似するエピトープ」は、ＨＩＶ蛋白質のエピトープには相同ではないが、それにもかかわらずＨＩＶ蛋白質に交差反応する細胞性もしくは液性の免疫応答を誘導する構造を有するエピトープを称することが意味される。好ましい態様ではＨＩＶ発現単位は一つもしくは複数のＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするコーディング配列を含む。好ましい態様ではＨＩＶ発現単位はプラスミド内に含まれる。本発明の幾つかの態様では、一つもしくは複数のＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするＤＮＡ配列を含む単一の発現単位を有する単一の遺伝子構築物が提供される。本明細書に用いられる際には、用語「単一のＨＩＶ発現単位構築物」は、単一のＨＩＶ発現単位を含む単一の遺伝子構築物を称することが意味される。好ましい態様では、単一のＨＩＶ発現単位構築物はプラスミドの形態をとっている。本発明の幾つかの好ましい態様では、一つを上回る発現単位を含み、そしてその各々が一つもしくは複数のＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするＤＮＡ配列を含む単一の遺伝子構築物が提供される。本明細書に用いられる際には、用語「多重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物」は、一つを上回るＨＩＶ発現単位を含む単一のプラスミドを称することが意味される。好ましい態様では多重ＨＩＶ発現単位構築物はプラスミドの形態をとる。本発明の幾つかの態様では、二重ＨＩＶ発現単位を有し、そしてその各々が一つもしくは複数のＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするＤＮＡ配列を含む単一遺伝子構築物が提供される。本明細書で用いられる際には、用語「二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物」は、二重ＨＩＶ発現単位遺伝子発現単位を含む二重ＨＩＶ発現単位（すなわち、多重ＨＩＶ発現単位）遺伝子構築物を含む単一のプラスミドを称することが意味される。二重ＨＩＶ発現単位構築物では、一つのＨＩＶ発現単位が他のＨＩＶ発現単位の反対方向に作動することが好ましい。好ましい態様では、二重ＨＩＶ発現単位構築物はプラスミドの形態をとる。本発明の幾つかの態様では、単一遺伝子構築物を含むＨＩＶ遺伝子ワクチンが提供される。この単一遺伝子構築物は、単一ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物、二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物、もしくは２つを上回るＨＩＶ発現単位を含む多重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物であることができる。本発明の幾つかの態様では、一つを上回る遺伝子構築物を単一の接種物中に含むＨＩＶ遺伝子ワクチンが提供される。本発明の幾つかの態様では、一つを上回る遺伝子構築物を一つを上回る接種物中に含むＨＩＶ遺伝子ワクチンが提供される。本明細書で用いられる際には、用語「多重接種物」は、一つを上回る遺伝子構築物を含み、そしてその各々が個別に投与される遺伝子ワクチンを称することが意味される。本発明の幾つかの態様では、２つの遺伝子構築物を含むＨＩＶ遺伝子ワクチンが提供される。各遺伝子構築物は独立に、単一ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物、二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物、もしくは２つを上回るＨＩＶ発現単位を含む多重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物であることができる。幾つかの態様では、両方の遺伝子構築物が単一発現単位遺伝子構築物である。幾つかの態様では、両方の遺伝子構築物が二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物である。幾つかの態様では、両方の遺伝子構築物が多重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物である。幾つかの態様では、一つの遺伝子構築物が単一ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物であり、かつもう一方のものが二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物である。当業者は、遺伝子ワクチンに用いられる遺伝子構築物の数、および各遺伝子構築物に存在することがあるＨＩＶ発現単位の数に依存する多数の変異物を容易に認識および評価することができる。本発明の遺伝子構築物が所定のＨＩＶ配列、特に、その配列が取り込まれる細胞の染色体物質内に組み込まれるＨＩＶゲノムにおいて、ある役割を担う配列は含まないことが好ましい。本発明の遺伝子構築物がＨＩＶからのＬＴＲ（複数）を含まないことが好ましい。同様に、本発明の遺伝子構築物がＨＩＶからのｐｓｉ部位を含まないことが好ましい。更に、逆転写遺伝子が欠失し、かつインテグラーゼ遺伝子が欠失することが好ましい。欠失には、幾つかのコドンのみの欠失、もしくは本質的にはその遺伝子に欠失をもたらす目的での幾つかのコドンの置換が含まれる。例えば、開始コドンが欠失しているか、もしくは変化しているか、もしくはフレームからずれているかして、不完全および非機能性蛋白質をコードするヌクレオチド配列がもたらされることがある。本発明の遺伝子構築物がＨＩＶからの転写可能なｔａｔ遺伝子を含まないことも好ましい。ｒｅｖ遺伝子と重複するｔａｔ遺伝子は、ｒｅｖをコードするコドンを、ｒｅｖについてと同一のアミノ酸をコードはするがｔａｔがコードされる読み取り枠内で必要とされるｔａｔアミノ酸はコードしない他のコドンでの置換により完全な欠失を生じることがある。別法ではそのコドンの内の幾つかのもののみがスイッチして、ｔａｔ用の開始コドンを変化させる（すなわち、本質的に欠失させる）および／または十分なコドンを変化させる（すなわち、本質的に欠失させる）かのいずれかとなって、不完全かつ非機能性のｔａｔをコードするヌクレオチド配列を生じる。遺伝子構築物が、ＨＩＶｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、もしくはｒｅｖ蛋白質からのエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを有するペプチドをコードするコーディング配列を含むことが好ましい。遺伝子構築物が、ＨＩＶｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、もしくはｒｅｖ蛋白質、あるいはそれらの断片の内の少なくとも一つをコードするコーディング配列を含むことが一層好ましい。遺伝子構築物が、ＨＩＶｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、もしくはｒｅｖ蛋白質からのエピトープと同一であるか、もしくは実質的に類似する一つを上回るエピトープを有するペプチドをコードするコーディング配列を含むことが好ましい。遺伝子構築物が、ＨＩＶｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、もしくはｒｅｖ蛋白質、あるいはそれらの断片の内の一つを上回るものをコードするコーディング配列を含むことが一層好ましい。幾つかの態様では、遺伝子構築物は、ＨＩＶｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、もしくはｎｅｆ蛋白質と同一であるか、もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを有するペプチドをコードするコーディング配列を含む。幾つかの態様では、遺伝子構築物は、ＨＩＶｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、もしくはｎｅｆ蛋白質、あるいはそれらの断片の内の少なくとも一つをコードするコーディング配列を含む。単一ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物は、単一プロモーターおよびポリアデニル化シグナルの調節制御下にある単一発現単位中にＨＩＶ蛋白質もしくはその断片と少なくとも一つのエピトープを共有する一つもしくは複数のペプチドのためのコーディング領域を含むことがある。遺伝子構築物が一つを上回るＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードすることが好ましい。プロモーターはヒト細胞内で機能する任意のプロモーターであることができる。プロモーターがＳＶ４０プロモーターもしくはＣＭＶプロモーター、好ましくはＣＭＶ前初期プロモーターであることが好ましい。ポリアデニル化シグナルはヒト細胞内で機能する任意のポリアデニル化シグナルであることができる。ポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、好ましくはＳＶ４０マイナーポリアデニル化シグナルであることが好ましい。一つを上回るコーディング領域が単一発現単位中に提供される場合には、それらは互いに直に隣接しているか、あるいは非コーディング領域により分断されていることがある。適切に発現させる目的では、コーディング領域は開始コドンおよび停止コドンを有する必要がある。二重ＨＩＶ発現単位遺伝子構築物は、その２つの発現単位の各々についてＨＩＶ蛋白質もしくはその断片を少なくとも一つのエピトープと共有する一つもしくは複数のペプチド用のコーディング領域を含むことがある。幾つかの態様では、遺伝子構築物は一つを上回るＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードすることが好ましい。幾つかの態様では、ｇａｇおよびｐｏｌをコードするヌクレオチド配列が一つの発現単位上に存在し、かつｅｎｖおよびｒｅｖをコードするヌクレオチド配列がもう一方の発現単位上に存在することが好ましい。プロモーターはヒト細胞内で機能する任意のプロモーターであることができる。プロモーターがＳＶ４０プロモーターもしくはＣＭＶプロモーター、好ましくは前初期ＣＭＶプロモーターであることが好ましい。ポリアデニル化シグナルはヒトの細胞で機能する任意のポリアデニル化シグナルであることができる。ポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、好ましくはＳＶ４０マイナーポリアデニル化シグナルであることが好ましい。一つを上回るコーディング領域が一つの発現単位内に提供される場合には、それらは互いに直に隣接しているか、あるいは非コーディング領域により分断されていることがある。適切に発現させる目的では、コーディング領域は開始コドンおよび停止コドンを有する必要がある。本発明の幾つかの態様に従うと、ｅｎｖ中のＭＨＣクラスＩＩ交差反応性エピトープが欠失を生じ、かつＨＩＶＩＩからの類似領域で置換されている。遺伝子構築物がｇａｇおよび／またはｐｏｌを含む場合には、その構築物はｒｅｖも存在するという点で一般的に重要である。ｒｅｖに加え、ｒｅｖ反応性因子がｇａｇおよびｐｏｌと共に、それらの遺伝子の発現増加用に提供されることがある。遺伝子構築物が産生される際には、プラスミド１において用いられるｅｎｖ遺伝子が、ＭＮあるいはＭＮ−様単離物（これにはＭＮに類似する臨床的単離物が含まれる）、好ましくは非シンシチウム誘導性臨床的単離物、好ましくは初期段階臨床単離物からのマクロファージ向性のものから取得されることが好ましい。複数の蛋白質が、選択的スプライシングにより単一発現単位から産生されることがある。スプライシングシグナルが提供されると、異なる蛋白質をコードする異なるメッセージを産生する別のスプライシングが可能となる。実施例３６図４は、４本の主鎖Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤを示す。図５は４つの挿入断片１、２、３、および４を示す。挿入断片１はｇａｇおよびｐｏｌの発現を支援し；ｒｅｖ応答因子がＨＩＶスプライスアクセプターを保存する様式でクローン化されている。挿入断片２は挿入断片１に類似しており、そのため挿入断片２もやはりｇａｇおよびｐｏｌの発現を支援するが、例外はｒｅｖ応答因子がＨＩＶスプライスアクセプターを保存することなくクローン化されたことである。挿入断片３はｇａｇおよびｐｏｌの発現を支援し、インテグラーゼ遺伝子の欠失を含み、そしてｃｉｓ作用性ｒｅｖ応答因子の存在は含まない。挿入断片４はｒｅｖ、ｖｐｕ、およびｅｎｖの発現を支援する。ｅｎｖは交差反応性を除去するように変化させたＭＨＣクラスＩＩ交差反応性エピトープを有することがあり、かつＶ３ループはシンシチウム形成の可能性を除去するように変化させておいてもよい。幾つかの態様では、主鎖Ａが挿入断片１と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＡ１ｏｒｉ＋は、挿入断片１およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ａである。プラスミドｐＡ１ｏｒｉ−は、挿入断片１を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ａである。追加的にｐＡ１ｏｒｉ＋もしくはｐＡ１ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＡ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＡ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＡ１ｏｒｉ＋、ｐＡ１ｏｒｉ−、ｐＡ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＡ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＡ１ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＡ１ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＡ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＡ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ａが挿入断片２と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＡ２ｏｒｉ＋は、挿入断片２およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ａである。プラスミドｐＡ２ｏｒｉ−は、挿入断片２を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ａである。追加的にｐＡ２ｏｒｉ＋もしくはｐＡ２ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＡ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＡ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＡ２ｏｒｉ＋、ｐＡ２ｏｒｉ−、ｐＡ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＡ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＡ２ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＡ２ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＡ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＡ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｂが挿入断片１と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＢ１ｏｒｉ＋は、挿入断片１およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｂである。プラスミドｐＢ１ｏｒｉ−は、挿入断片１を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｂである。追加的にｐＢ１ｏｒｉ＋もしくはｐＢ１ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＢ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＢ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＢ１ｏｒｉ＋、ｐＢ１ｏｒｉ−、ｐＢ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＢ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＢ１ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＢ１ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＢ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＢ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｂが挿入断片２と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＢ２ｏｒｉ＋は、挿入断片２およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｂである。プラスミドｐＢ２ｏｒｉ−は、挿入断片２を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｂである。追加的にｐＢ２ｏｒｉ＋もしくはｐＢ２ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＢ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＢ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＢ２ｏｒｉ＋、ｐＢ２ｏｒｉ−、ｐＢ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＢ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＢ２ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＢ２ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＢ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＢ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ａマイナスｒｅｖが挿入断片３と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋は、挿入断片３およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ａである。プラスミドｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−は、挿入断片３を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ａマイナスｒｅｖである。追加的にｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋もしくはｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＡ／ｒ− ３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋、ｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−、ｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−ＲＴ−、ｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＡ／ｒ−３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ−を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｃが挿入断片１と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＣ１ｏｒｉ＋は、挿入断片１およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｃである。プラスミドｐＣ１ｏｒｉ−は、挿入断片１を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｃである。追加的にｐＣ１ｏｒｉ＋もしくはｐＣ１ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＣ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＣ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＣ１ｏｒｉ＋、ｐＣ１ｏｒｉ−、ｐＣ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＣ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＣ１ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＣ１ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＣ１ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＣ１ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｃが挿入断片２と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＣ２ｏｒｉ＋は、挿入断片２およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｃである。プラスミドｐＣ２ｏｒｉ−は、挿入断片２を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｃである。追加的にｐＣ２ｏｒｉ＋もしくはｐＣ２ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＣ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＣ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＣ２ｏｒｉ＋、ｐＣ２ｏｒｉ−、ｐＣ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＣ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＣ２ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＣ２ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＣ２ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＣ２ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｃが挿入断片３と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＣ３ｏｒｉ＋は、挿入断片３およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｃである。プラスミドｐＣ３ｏｒｉ−は、挿入断片３を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｃである。追加的にｐＣ３ｏｒｉ＋もしくはｐＣ３ｏｒｉ−のいずれかはインテグラーゼを含んで各々ｐＣ３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋およびｐＣ３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋を生じることがある。プラスミドｐＣ３ｏｒｉ＋、ｐＣ３ｏｒｉ−、ｐＣ３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋、およびｐＣ３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋は逆転写酵素（ＲＴ）遺伝子を機能的に欠失させることにより更に改変を受けて、各々ｐＣ３ｏｒｉ＋ＲＴ−、ｐＣ３ｏｒｉ −ＲＴ−、ｐＣ３ｏｒｉ＋ｉｎｔ＋ＲＴ−、およびｐＣ３ｏｒｉ−ｉｎｔ＋ＲＴ −を生じることがある。幾つかの態様では、主鎖Ｄが挿入断片４と共に用いられる。このような構築物は場合によってはＳＶ４０の複製起点を含む。プラスミドｐＤ４ｏｒｉ＋は、挿入断片４０およびＳＶ４０の複製起点を含む主鎖Ｄである。プラスミドｐＤ４ｏｒｉ−は、挿入断片４を含み、ＳＶ４０の複製起点は含まない主鎖Ｄである。実施例３７幾つかの態様では、ＨＩＶ蛋白質のエピトープと同一であるか、もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを有するペプチドをコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む単一発現単位／単一接種物遺伝子ワクチンが提供される。このコーディング配列はＣＭＶの前初期プロモーターおよびＳＶ４０のマイナーポリアデニル化シグナルの調節制御下に存在する。幾つかの態様では、少なくとも一つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む単一発現単位／単一接種物遺伝子ワクチンが提供される。このコーディング配列はＣＭＶの前初期プロモーターおよびＳＶ４０のマイナーポリアデニル化シグナルの調節制御下に存在する。ＨＩＶ蛋白質は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖからなる群より選択される。幾つかの態様では、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはそれらの断片からなる群より選択される少なくとも２つのＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましい。幾つかの態様では、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはそれらの断片からなる群より選択される少なくとも３つのＨＩＶ蛋白質もしくはそれらの断片をコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましい。幾つかの態様では、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはそれらの断片をコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましい。幾つかの態様では、各々が、ＨＩＶ蛋白質のエピトープと同一であるか、もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを有するペプチドをコードするコーディング配列を含む２つの発現単位を含む遺伝子構築物を含む二重発現単位／単一接種物遺伝子ワクチンが提供される。このコーディング配列はＣＭＶの前初期プロモーターおよびＳＶ４０のマイナーポリアデニル化シグナルの調節制御下に存在する。これら２つの発現単位は互いに反対方向にコードされる。幾つかの態様では、各々が、少なくとも一つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードするコーディング配列を含む２つの発現単位を含む遺伝子構築物を含む二重発現単位／単一接種物遺伝子ワクチンが提供される。各発現単位はＣＭＶ前初期プロモーターおよびＳＶ４０マイナーポリアデニル化シグナルの調節制御下にあるコーディング配列を含む。ＨＩＶ蛋白質は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖからなる群より選択される。幾つかの態様では、２つの発現単位を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましく、その２つの発現単位の内の一つはｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはその断片からなる群より選択される少なくとも２つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードするコーディング配列を含み、かつもう一方の発現単位はｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはその断片からなる群より選択される少なくとも一つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片を含む。幾つかの態様では、２つの発現単位を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましく、その２つの発現単位の内の少なくとも一つはｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはその断片からなる群より選択される少なくとも３つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片をコードするコーディング配列を含み、かつもう一方の発現単位はｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはその断片からなる群より選択される少なくとも一つのＨＩＶ蛋白質もしくはその断片を含む。幾つかの態様では、２つの発現単位を含み、かつｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、およびｒｅｖ、もしくはその断片をコードするコーディング配列を含む遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンが提供されることが好ましい。実施例３８遺伝子構築物であるプラスミドｐＣＭＮ１６０Δ１６を、抗−ＨＩＶ薬剤学的キットもしくは薬剤学的組成物における使用のために作製した。ｐＣＭＮ１６０ Δ１６は以下の要領で構築した：段階１：プライマー（配列番号３１および配列番号３０）をＨＩＶ／ＭＮゲノムＤＮＡからのＰＣＲ断片用に用いた。段階２：プライマー（配列番号２９および配列番号３２）をＨＩＶ／ＭＮゲノムＤＮＡからのＰＣＲ断片用に用いた。段階３：プライマー（配列番号３１および配列番号３２）を段階１および２からの２μｌの反応物質と合わせた。段階４：段階３からの反応産物をＮｏｔ１およびＭｌｕ１で切断し、そして実施例３６に記載され、Ｎｏｔ１およびＭｌｕ１で切断された主鎖Ａ内に挿入した。ｒｅｖ領域と共にＭＮ株のＥＮＶ蛋白質をコードするコーディング領域を主鎖Ａ内への挿入断片として含み、かつＨＬＡ−ＤＢ領域を有するｎｅｆの半分がＨＩＶ−２に変化しているプラスミドｐＣＭＮ１６０Δ１６はこのようにして形成される。実施例３９プラスミドｐＧＡＧＰＯＬ．ｒｅｖ２は以下の要領で作製した。最初に主鎖を作製した。その後にＨＩＶｇａｇおよびｐｏｌを含む挿入断片を作製し、そしてその主鎖内に挿入した。その主鎖は以下の要領で調製した。段階１．ｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社）をＢｇｌ１で消化する。ポリメラーゼＩのクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片での充填を実施する。ＨｉｎｄＩＩＩで切断する。１７６３ｂｐの断片をゲル精製する。段階２．プラスミドｐＪ４Ωｋａｎ＊からのＫａｎ^R遺伝子（ＰｈａｒｍａｃｉａＩｎｃ．社から取得され、ＩｍｐｅｒｉａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄＵＫからの供与物として取得されたｐＪ４Ω内へクローン化されたカナマイシン耐性遺伝子；ｐＪ４ΩはもともとはＭｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ，Ｊ．Ｐ．ａｎｄＨ．Ｌａｎｄ、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１８（４）：１０６８、により構築および報告され、この引用文献は引用により本明細書に取り込まれる）をオリゴヌクレオチド（配列番号３３および配列番号３４）を用いて増幅させる。ＰＣＲ産物の末端平滑化を実施する。ＨｉｎｄＩＩＩでの切断を実施する。ＰＣＲ産物をゲル精製する。段階３．ｐＭＡＭｎｅｏから作製され、かつ段階１に記載されるベクター主鎖を、Ｋａｎ^R遺伝子をコードしかつ段階２に記載されるＰＣＲ産物と連結させる。Ｋａｎ^R遺伝子および細菌性複製起点をを含むプラスミドを単離する。段階４．得られるプラスミドをＭｌｕＩで消化し、ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片での充填を実施する。ＳａｃＩＩリンカー（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ社）と連結させる。段階５．段階４で取得されるプラスミドをＡｓｅＩおよびＳｓｐＩで消化する。段階６．プライマー（配列番号３５および配列番号３６）を用いる段階３に記載されるプラスミドからのＫａｎ^R遺伝子のＰＣＲパート。ＰＣＲ産物をＳｓｐＩおよびＡｓｅＩで切断する。段階７．段階５において取得される最大断片を段階６において取得されるＰＣＲ産物と連結させる。段階８．段階７で取得された連結産物／プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩで切断する。ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片での末端平滑化を実施する。段階９．ｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）をＳａｌＩで切断して、ＣＭＶプロモーター、ポリリンカー、およびＳＶ４０ポリＡ部位を含むＤＮＡ断片を放出させる。この断片を精製し、そしてＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片での末端平滑化を実施する。段階１０．段階８で取得されたプラスミドと段階９で取得された断片とを連結させる。細菌性複製起点、Ｋａｎ^R遺伝子、ＲＳＶエンハンサー、ＣＭＶプロモーター、ポリリンカー、およびＳＶ４０ポリＡ部位を含むプラスミドを単離する。段階１１．段階１０で取得されたプラスミドをＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩで切断する。段階１２．オリゴヌクレオチド（配列番号３７および配列番号３８）をアニールする。段階１３．段階１０で取得されたプラスミドと段階１２で取得されたアニール化オリゴヌクレオチドとを連結させる。段階１２で取得されたアダプターを含むプラスミドを単離する。段階１４．段階１３で取得されたプラスミドをＳａｌＩおよびＭｌｕＩで消化する。段階１５．ＢＢＧ３５（ＲＤＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．社、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ；これはｐＵＣ１９内にＨＩＶ株ＨＸ３Ｂからのｒｅｖのためのコーディング領域を含む）を鋳型とし、そしてプライマー（配列番号３９および配列番号４０）を用いてｒｅｖ読み取り枠をＰＣＲ増幅させる。このＰＣＲ産物をＳａｌＩおよびＭｌｕＩで消化する。段階１６．段階１４で取得されたプラスミドを段階１５で産生されたＰＣＲ産物と連結する。ｒｅｖコーディング領域を含むプラスミドを単離する。段階１．Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）内にクローン化されたＨＩＶ−１（ＨＸＢ２）ゲノムの部分のサブクローン化。ＨＩＶ−１のサブクローンは全５’ＬＴＲ、およびＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔのＸｂａＩおよびＳａｌＩ部位内にクローン化されたヌクレオチド５７９５（Ｇｅｎｂａｎｋ社による番号付に従う）までのＨＩＶ−１ゲノムの残りを含む。このＨＩＶ−１配列はＨＸＢ２Ｄプラスミド（ＡＩＤＳＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙ社）から取得される。段階２．段階１に記載されるプラスミド（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ内にクローン化されるＨＩＶ−１ＨＸＢ２ゲノムの部分のサブクローン）の読み取り枠からのｇａｇコーディング領域の、プライマー（配列番号４１および配列番号４２）を用いるＰＣＲ部分。段階３．段階１に記載されるプラスミド（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ内にクローン化されるＨＩＶ−１ＨＸＢ２ゲノムの部分のサブクローン）をＥｃｏＲＩで消化する。ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ主鎖、５’ＨＩＶ−１ＬＴＲ、ｇａｇコーディング領域、およびｐｏｌコーディング領域の部分を含むプラスミドを精製し、そして再連結させる。段階４．段階３で取得されるプラスミドをＮｏｔＩおよびＳｐｅＩで切断し、そして段階２に記載されるＰＣＲ断片と、その断片をＮｏｔＩおよびＳｐｅＩで消化させた後に連結させる。５’ＨＩＶ−１ＬＴＲを含むもともとのＮｏｔＩ／ＳｐｅＩ断片の代わりにそのＰＣＲ断片を含むプラスミドを単離する。段階５．段階４で取得されるプラスミドをＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩで消化する。段階６．オリゴヌクレオチド（配列番号４３および配列番号４４）をアニールする。段階７．段階５で取得されたプラスミドを段階６で取得されたアダプターと連結させる。ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ部位内にクローン化されたアダプターを含むプラスミドを単離する。段階８．段階７で取得されたプラスミドをＮｄｅＩおよびＥｃｏＲＩで消化する。段階９．ＲｅｖＲｅｓｐｏｎｓｅＥｌｅｍｅｎｔ（ＲＲＥ）をＨＸＶ− １株ＨＩＢ２からのＲＲＥ配列を含むプラスミドから、プライマー（配列番号４５および配列番号４６）を用いてＰＣＲ増幅する。そのＰＣＲ産物をＮｄｅＩおよびＥｃｏＲＩで消化する。段階１０．段階８で取得されたプラスミドと段階９で取得されたＰＣＲ産物とを連結させる。ＲＲＥ配列を伴う挿入断片を含むプラスミドを単離する。段階１１．段階１０で取得されたプラスミドをＮｏｔＩおよびＳａｌＩで消化し、そしてｇａｇコーディング領域、改変化ｐｏｌコーデォング領域、およびＲＲＥ配列を含む断片を単離する。段階１２．先に記載される主鎖を調製するためのプロトコールの段階１６で取得されたプラスミドをＮｏｔＩおよびＳａｌＩで消化する。段階１３．段階１２で取得されたプラスミドと段階１１で取得された挿入断片とを連結させる。ｇａｇコーディング領域、改変化ｐｏｌコーディング領域、およびＲＲＥ配列を含む挿入断片を含むプラスミドを単離する。段階１４．段階１３で取得されたプラスミドをＸｂａＩおよびＮｈｅＩで消化し、末端の平滑化を行い、そして再連結させる。段階１３で取得されたプラスミド中のＸｂａＩおよびＮｈｅＩ部位の間に存在するＫｐｎＩ部位を喪失しているプラスミドを単離する。段階１５．段階１４で取得されたプラスミドをＫｐｎＩで消化し、そして最大断片を単離する。段階１６．オリゴヌクレオチド（配列番号４７および４８）をアニールする。段階１７．段階１５で取得された精製化プラスミド断片を段階１６で取得されるアダプターと連結させる。段階１５で取得されたプラスミドのＫｐｎＩ部位に挿入されたアダプター断片を含むプラスミドを単離する。実施例４０調節蛋白質のための遺伝子での遺伝子免疫化ＨＩＶと戦うことの難しさの一部は、そのウイルスの卓越した変異性および新規の形態に迅速に突然変異するその能力により生じる。全体としてのヒト集団において見いだされるＨＩＶ単離物中に実質的な蛋白質配列変異が存在するばかりでなく、そのウイルスはあまりに迅速に突然変異を生じるためＨＩＶ感染化各個体は実際に多数の関連性ＨＩＶミクロ変異体を宿してもいる。そのようなＨＩＶ単離物は様々な複製効率、指向性、中和に対する感受性、および薬剤耐性を呈する。薬剤耐性突然変異体が出現する際には薬剤療法の恩恵が消失する。ＡＺＴに関しては、薬剤耐性は典型的には療法の初年の内に生じる。エスケープ突然変異体の定常的産生は、ウイルスが長期間抑制された後に、宿主の防御機構を最終的に打ち負かしてしまうＨＩＶの能力における一部の役割を担っているのかもしれない。この突然変異的変化は、Ｖ３ループの主要中和用ドメインを初めとするｇｐ１２０エンベロープ糖蛋白質の様々な領域において、ならびにＨＩＶコア蛋白質においても同様に既に報告されている。ＨＩＶ調節蛋白質は構造蛋白質と比較するとその保存率が一層高く、かつ更には長期にわたってもより低めの突然変異的変化を示す。従って調節蛋白質は抗ウイルス攻撃のための魅力的な標的となる。ＨＩＶは調節蛋白質対構造蛋白質の発現の顕著な一過性調節を呈する。ウイルス複製の初期段階では調節蛋白質Ｔａｔ、Ｒｅｖ、およびＮｅｆをコードするｍＲＮＡが優位を占める一方で、後期段階では、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、およびＥｎｖ前駆体を初めとする構造蛋白質、ならびに多くのアクセサリー蛋白質をコードするｍＲＮＡの発現がより多く存在する。初期段階から後期段階へのこの変化は、Ｒｅｖ蛋白質が特別なレベルに到達する時点で開始される。ウイルス複製周期の初期でのＴａｔ、Ｒｅｖ、およびＮｅｆの優位性によっても、これらの蛋白質が抗ウイルス攻撃の好適標的となる。このことは特に、ＨＩＶ遺伝子発現の転写および翻訳後調節において絶対不可欠な役割を担い、かつウイルス複製周期の初期、ウイルス構造蛋白質の転写以前、および感染性ウイルス粒子産生の際に優位を占めるｔａｔおよびｒｅｖにとっては確かなことである。ＨＩＶ複製において明らかに本質的な役割を担うｔａｔおよびｒｅｖとは対称的に、例えばｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｉｆ、およびｖｐｕのような他の調節蛋白質は時としては「アクセサリー」蛋白質として引用される。これらの機能はあまり詳細には理解されてはおらず、かつ特別な機能の喪失によりウイルス複製が弱められる程度はかなりの変化に富み、そしてそれは感染される宿主細胞に依存することがある。それにもかかわらず、広範囲にわたる様々なＨＩＶ単離物、ならびに他の霊長類免疫不全性ウイルスの中でもそのような機能の強い保存性により、天然の感染過程におけるそれら「アクセサリー」機能の重要性が示唆される（一般的には、Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ，Ｅ．Ｆ．、（１９９２）ＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｖｉｅｗｓ２：３−２７、Ｗ．Ｃ．Ｋｏｆｆ、Ｆ．Ｗｏｎｇ− Ｓｔａａｌ、およびＲ．Ｃ．Ｋｅｎｎｅｄｙ、ｅｄｓ．（ＮｅｗＹｏｒｋ：ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．社、を参照されたい）。実際のところ、ｖｐｒ、ｎｅｆ、もしくはｖｉｆのいずれかを欠損する霊長類組換えウイルスはインビボでは非病原性であり、このことにより更に、ウイルスの生命環におけるこれらアクセサリー遺伝子の重要性が示される。ＨＩＶに対するより高レベルでより防御的な免疫応答は、ＨＩＶ遺伝子の全集合体よりはむしろ選択された少数の調節性および／または酵素性蛋白質を呈示することにより達成され得ることの証拠が幾つか存在する。従って焦点が当てられている免疫化手法は、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｒ、ｎｅｆ、ｖｐｕ、もしくはｖｉｆを初めとする一つもしくは複数の調節性非構造的ＨＩＶ蛋白質のためのコーディング配列を用いる遺伝子の免疫化を必要とすることが所望される場合がある。ｖｐｒのみがウイルス粒子と結合することが見いだされている一方で、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、およびｖｐｕを初めとする他の調節性蛋白質はビリオン結合性ではない。調節遺伝子を用いるＨＩＶに対する遺伝子免疫化の幾つかの態様では、一つもしくは複数のｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、およびｖｐｕ遺伝子が実施例３７に記載される主鎖Ａ内に挿入される。ｔａｔおよび／またはｒｅｖが用いられることが好ましい。幾つかの態様では、ｔａｔもしくはｒｅｖが、実施例３７に記載される主鎖Ａ内に挿入される。次に幾つかの態様では、標的としての所望性が小さくなる順は、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｉｆ、およびｖｐｕである。一つを上回る調節遺伝子（これらは、ｔａｔおよびｒｅｖ；ｔａｔ、ｒｅｖ、およびｎｅｆ；ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、およびｖｐｒ；ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、およびｖｉｆ；ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｉｆ、およびｖｐｕ；ならびにそれらの組み合わせ物を初めとする）、および場合によってはｔｅｖのような追加的調節遺伝子が利用されるであろうことが好ましい。Ｔａｔ蛋白質はＬＴＲにより指令される遺伝子発現のトランス調節因子である。これはＨＩＶ複製には絶対不可欠である。Ｔａｔはウイルス複製周期の初期に産生され、かつ機能的ＴａｔがＧａｇ、Ｐｏｌ、Ｅｎｖ、およびＶｐｒの発現に必要とされる。Ｔａｔの優位性形態は２つのエクソンｍＲＮＡに由来する８６− アミノ酸蛋白質である。トランス活性化作用にとってはアミノ末端の５８のアミノ酸で十分であるものの、その活性は低くなる。Ｔａｔはｔａｒと称されるシス作用性配列上で作用してＬＴＲ稼働性遺伝子発現の画期的増加を引き起こす。Ｔａｔは一部ではＲＮＡ合成の増加を通して作用し、そして一部ではＲＮＡ転写物当たりについて合成される蛋白質量の増加により作用することがある。最近になるまではＴａｔはＨＩＶ−１ＬＴＲにおいてのみ作用するものと考えられていた。しかしながら、ＪＣウイルスの後期プロモーターからのＴａｔ活性化発現も更に報告されている。Ｔａｔは外因性因子として細胞増殖をも刺激化することがあり、かつＨＩＶ感染化個体におけるカポジ肉腫（Ｋａｐｏｓｉ’ｓＳａｒｃｏｍａ）の成長を亢進させる際の助成的役割を担うことがある。ＨＩＶ感染化個体および非感染化個体の両方におけるこのような有害な効果の可能性がために、遺伝子免疫化に利用される好ましいｔａｔ構築物を改変して非機能性Ｔａｔのみが発現されるようにする。それに加え、ＴａｔもしくはＲｅｖを不活化することが可能な突然変異体はトランス優位性突然変異体として作用することができ、このことによりＨＩＶ感染化個体内で発現されるいずれかの機能性Ｔａｔを不活化させることの可能性が生じる。Ｒｅｖはウイルス複製に必須なＨＩＶの第二調節蛋白質である。これは多重スプライシングを受けたｍＲＮＡ内に見いだされる２つのコーディングエキソンから発現される１９ｋＤ（１１６アミノ酸）の蛋白質である。２つの異なるドメインは既に同定されており、これらは転写物を含むＲＲＥ（Ｒｅｖ−応答性−因子）に対する結合に関わる基本的領域、および結合の結果として転写物の核輸送を誘導する「活性化」ドメインである。天然のウイルス感染の過程ではＲｅｖは、ＨＩＶ構造蛋白質Ｇａｇ、Ｐｏｌ、およびＥｎｖ、ならびにＶｐｒの発現を必要とする。Ｖｐｒは大半のＨＩＶ−１株においては１５ｋＤの蛋白質（９６のアミノ酸）であるものの、Ｖｐｒ読み取り枠は細胞培養物中で長期にわたり継代された多くのウイルス株中では広範囲にわたる切断を受ける。このｖｐｒ読み取り枠は更に、ＨＩＶ−２および大半のＳＩＶ単離物中にも存在する。ＶｐｒはＨＩＶウイルス粒子と結合することが見いだされた最初のレトロウイルス調節蛋白質である。ＨＩＶビリオン中のその存在により、Ｖｐｒはウイルス複製周期における幾つかの初期の時点での機能因子として作用することがあることが示唆される。ＶｐｒはＨＩＶ複製を加速させるが、それは特に感染の初期において行われる。ＶｐｒはＨＩＶＬＴＲに関連する発現もしくはレポーター遺伝子のレベルを約３倍増加させる。更に、ＶｐｒおよびＴａｔはＬＴＲ−関連性遺伝子に関しては相乗的に作用するように思われる。ＶｐｒはＨＩＶ感染化個体の血清から単離することができ、かつそのウイルスが新しい細胞を感染する能力を増加させるように思われる。Ｖｐｒは更に、細胞増殖を阻害し、かつ細胞分化を誘導することも見いだされており（Ｌｅｖｙ，Ｄ．Ｎ．ｅｔａｌ．、Ｃｅｌｌ（１９９３）７２：１− ２０）、この所見は初代単球／マクロファージはインビトロでのみ感染可能である一方で分化を受けるという報告の点では重要であるかもしれない（Ｓｃｈｕｉｔｅｍａｋｅｒ，Ｈ．ｅｔａｌ．、（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８９：１１５４−１１６０）。ＨＩＶ複製を支援することが不可能な細胞でさえも、Ｖｐｒの効果により脱調節化されることがある。例えば、ＶｐｒはＡＩＤＳ患者に頻繁に観察される筋肉消耗の原因であることがある。Ｖｐｒの活性が有害である可能性があるため、遺伝子免疫化は非機能性Ｖｐｒ蛋白質を発現するであろう改変化ｖｐｒ構築物を用いて実施されることが好ましいはずである。Ｎｅｆ（より古い刊行物では３’ｏｒｆとも称される）は２５〜２７ｋＤの蛋白質である。ＮｅｆはＣＤ４＋Ｔリンパ球の負の方向の調節に関わっているかもしれないことが既に示唆されている。それに加えＮｅｆは細胞のシグナル伝達におけるある役割を担っているかもしれない。ＮｅｆはインビボでのＨＩＶ感染の確立にとって重要であるらしい。Ｎｅｆ−特異的ＣＴＬはインビボでのＨＩＶ感染を制御するのに重要であると考えられている。Ｖｉｆは「ウイルス感染性因子」として表記される２３ｋＤの細胞質蛋白質である。Ｖｉｆ−欠損性突然変異体ウイルスは細胞から細胞への伝達に関しては低下傾向は示さないものの、それらのウイルスは多くのＣＤ４＋細胞株を感染する能力の多大な低下を呈する。Ｖｉｆなしではウイルスの出芽が減少し、かつ感染性も減少する。霊長類での研究ではＶｉｆ欠損突然変異体はインビボでの感染を確立する能力の重度の低下を呈する。これらの研究により、宿主内でのウイルス複製におけるＶｉｆの臨床的役割が示唆される。Ｖｐｕは１５〜２０ｋＤ（８１のアミノ酸）の蛋白質である。Ｖｐｕ（＋）およびＶｐｕ（−）ウイルスが同量のウイルス性蛋白質を産生するにも拘わらず、後者はウイルス性蛋白質の細胞内蓄積の増加と共に細胞外ウイルスの減少を示す。このことによりＶｐｕはウイルス粒子の構築および／または放出に関わることがあることが示唆される。例えばマウスおよび鳥類のウイルスイのような単純なレトロウイルスは、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、およびＳＩＶ調節蛋白質に類似する蛋白質を欠損している。このような動物ではレトロウイルス感染は、自己抑制的でウイルスは体内から排除され病原性が低くなる傾向がある。同様に、Ｔａｘ（ほとんどＴａｔの様に作用し、かつｖｐｒ−様活性も示す）およびＲｅｘ（ほとんどＲｅｖの様に作用する）のみを含むに過ぎないＨＴＬＶ−１は多くの個体において浄化される。調節性遺伝子での遺伝子免疫化はＨＩＶにのみ関連するのではなく、例えばＨＢＶ（Ｘ遺伝子産物）およびＨＣＶ、ならびにＨＴＬＶ−１（Ｔａｘ）および（Ｒｅｘ）にも関連するものと見なされている。これら全てのウイルスでは調節性遺伝子は、ウイルスの生命環および感染の確立における重要な役割を担っているものと考えられる。実施例４１ＨＩＶ−１調節プラスミドｐＲＥＧの構築ｐＲＥＧプラスミドは段階的様式で構築され、かつ各中間体を、構築を継続する前に蛋白質の発現について検査することができる。ｔａｔおよびｒｅｖの発現を支援する発現ベクターは二段階を介して構築される。第一に、５’ＮｈｅＩ部位、ＨＩＶ−１主要スプライスドナー部位、ｔａｔコーディング領域の大部分、ｒｅｖ蛋白質のアミノ末端領域をコードする領域、およびＡｖａＩＩ部位を含む増幅産物を合成鋳型から増幅させる。この合成鋳型はＧｅｎＢａｎｋＤａｔａｂａｓｅから取得されるＨＩＶ−１のＨＸＢ２株の公開配列を用いて作製され、かつｔａｔ蛋白質の位置２２および３０のシステイン残基が突然変異を生じるように変化させる。これらの突然変異がｔａｔに非機能性を付与することが既に示されている（Ｋｕｐｐｕｓｗａｍｙ，ｅｔａｌ．（１９８９）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１７（９）：３５５１−３５６１）。このＰＣＲ産物を、ＮｈｅＩおよびＡｖａＩＩ消化され、かつカナマイシン耐性遺伝子およびｐＢＲ３２２の複製起点を含むベクター内に連結させる。それに加え、このプラスミドはサイトメガロウイルスのプロモーター、ラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルスのエンハンサー、ｒｅｖコーディング配列、およびＳＶ４０のポリアデニル化シグナルを含む。このプラスミド中に存在するｒｅｖ配列はＨＩＶ−１ＩＩＩ_Bのプロウイルス性クローンに由来する。このことにより、完全ではあるが突然変異を生じているｔａｔコーディング領域および完全なｒｅｖコーディング配列を含む発現ベクターが作製されるであろう。後続段階を実施して、その５’末端にＡｖａＩＩ部位、ｒｅｖのアミノ酸位置８１に一つの突然変異、約３０％のｒｅｖコーディング領域、約３０％のｎｅｆコーディング領域、および３’末端にＭｌｕＩ部位を含むＰＣＲ産物を作製する。位置８１でのアミノ酸変化によりｒｅｖ機能が除去されることが既に示されており、そしてその結果、得られるプラスミドは非機能性ｒｅｖ蛋白質の産生をもたらすであろう（Ｂｏｇａｒｄ，Ｈ．ａｎｄＧｒｅｅｎ，Ｗ．Ｃ．（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７（５）：２４９６−２５０２）。ｎｅｆコーディング領域の主要な欠損により非機能性ｎｅｆ蛋白質の産生がもたらされるであろうことが推測される。５’ＡｖａＩＩ部位、およびｒｅｖ蛋白質のアミノ酸位置８１での突然変異は、ＡｖａＩＩ部位およびアミノ酸８１をコードするヌクレオチドの両方を含むｒｅｖのコーディング領域に相補的な５’ＰＣＲプライマー上に組込まれる。アミノ酸位置６３でのＮｅｆの停止をもたらす停止コドン、および３ ’コーディングクローニング部位、ＭｌｕＩは３’ＰＣＲプライマーにより組込まれるであろう。このＰＣＲ増幅のための鋳型は、ＨＩＶ−１のＭＮ株からのｒｅｖおよびｎｅｆコーディング領域を含むプラスミドもしくは合成鋳型である。得られるＰＣＲ産物はＡｖａＩＩおよびＭｌｕＩで消化され、そしてより小さなＡｖａＩＩ−ＭｌｕＩ断片（これはＡｖａＩＩおよびＭｌｕＩに関する前述の文節に記載されるｔａｔ−ｒｅｖプラスミドの消化後に得られる）を置換するのに用いられるであろう。場合によっては、ｖｐｒを一つもしくは二つの部位でこのプラスミドに添加することができる。ある研究方法ではｖｐｒを、ｖｐｒ翻訳開始コドンにまたがる配列の上流のＭｌｕＩ部位を含む５’ＰＣＲプライマー、ならびにｖｐｒ停止コドンに相補的な３’ＰＣＲプライマー、およびそのストップコドンをフランクしかつ更にＭｌｕＩクローニング部位を含む配列を含む５’ＰＶＲプライマーを用いて増幅することができる。開始コドンの上流の配列はスプライスアダプターを含む。このＰＣＲ産物をＭｌｕＩで消化し、そして先に記載されるｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆプラスミド内に、そのプラスミドをＭｌｕＩで消化させた後に挿入することができる。別法ではｖｐｒ増幅を類似の様式で実施することができるが、ＰＣＲプライマーは他のベクター内へのクローニングに適合する制限部位を含むことがあり、そのためこのプライマーは第二真核生物プロモーターの制御下で発現される。第二プロモーター、およびその後のｖｐｒコーディング領域、およびその後のポリＡ配列を含む、このプラスミドに由来するカセットは、そのカセットをフランクするが、その内部での切断は行われない制限酵素での消化により放出され得る。得られるＤＮＡ断片は、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｒの発現に必要な領域の外側に存在するｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｒプラスミドの非反復部位内にクローン化されるであろう。このような様式で２つの発現単位を有するプラスミドが形成される。実施例４２ＨＣＶおよびＨＴＬＶ−１プラスミドの構築類似の研究方法を用いて、ウイルスの生活周期および／またはこれらのウイルスの調節蛋白質に必要な酵素機能を有する蛋白質をコードするＨＴＬＶ−１もしくはＨＣＶを発現するプラスミドを作製することができる。ＨＴＬＶ−１に関しては、調節蛋白質ＴＡＸをコードするプラスミドを、プラスミド主鎖および先に記載されるものに類似するクローニング手法を用いて作製する。このような酵素蛋白質をコードするＨＣＶ遺伝子には、ＲＮＡ−依存的ＲＮＡポリメラーゼ、すなわちヘリカーゼ／プロテアーゼ機能を有する蛋白質が含まれる。必要とされる蛋白質は公表されており、そしてＧｅｎＢａｎｋを通して利用可能である。ＨＴＬＶ−１およびＨＣＶのウイルスの構成は、各々、Ｃａｎｎ，Ａ．Ｊ．ａｎｄＣｈｅｎ，Ｉ．Ｓ．Ｙ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ、（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｄｄｒ編集）、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９９０、およびＢｒａｄｌｅｙ，Ｄ．Ｗ．ＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｖｉｅｗｓ，１（２）：９３−１０２、１９９２に公表されている。実施例４３酵素遺伝子での遺伝子免疫化酵素機能を有する蛋白質をコードする遺伝子（例えばＨＩＶｐｏｌ遺伝子）での遺伝子免疫化もやはり重要な抗ウイルス手法であることがあり得、それはＰｏｌのような酵素が生きたウイルスの産生に必要であるためである。ポリメラーゼもしくはその構成成分の機能の内のいずれかがなければＨＩＶは非病原性かつ非感染性となる。同様に他のウイルスの酵素遺伝子（例えば、ＨＢＶポリメラーゼ）は遺伝子免疫化の魅力ある標的である。例えば、Ｒａｄｚｉｗｉｌｌｅｔａｌ．、ＭｕｔａｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＨｅｐａｔｉｔｉｓＢＶｉｒｕｓＰＧｅｎｅＰｒｏｄｕｃｔ：ＤｏｍａｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＲＮａｓｅＨＡｃｔｉｖｉｔｙ、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４（２）：６１３−６２０（１９９０）、を参照されたい。免疫学的標的としてのウイルス酵素の魅力の一つの理由は、それらのアミノ酸配列を突然変異させ、かつ依然としてそれらの酵素機能を維持するというその酵素の限られた能力である。例えばＨＩＶ−１に関しては、Ｐｏｌは、例えばＡＺＴのようなヌクレオチドアナログに対する耐性に関連する限られた数の「エスケープ」突然変異を示す。しかしながらこの蛋白質内の免疫学的標的の大多数は薬剤エスケープ突然変異体においてさえも保存されている。実施例４４ＨＢＶポリメラーゼプラスミドの構築刊行物において報告される実験により、ＨＢＶポリメラーゼ発現は、コアおよびポリメラーゼ読み取り枠の両方がｍＲＮＡ分子内に存在する際に組織培養細胞中で達成することが可能であること示される。更にこのような状況下では、コアＡＴＧの突然変異はポリメラーゼ発現に影響を及ぼさないことが既に証明されている。ＨＢＶゲノムはＡＤＷＨＢＶ株のヘッド−テイル二量体を含むプラスミドから増幅される。ポリメラーゼのみの発現が所望され、かつコアの発現は所望されないため、５’ＰＣＲプライマーは、プレコアおよびコア翻訳開始コドンを突然変異させるように設計される。それに加え、このプライマーは更に、複製−コンピテントＨＢＶゲノムＲＮＡの作製の可能性を除去するための突然変異ＤＲ１配列をも組込んでいる。このＰＣＲ産物は、カナマイシン耐性遺伝子およびｐＢＲ３２２の複製起点を含むプラスミド内に配置される。それに加え、このプラスミドはサイトメガロウイルスのプロモーター、ラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルスのエンハンサー、およびＳＶ４０のポリアデニル化シグナルを含む。表面抗原およびＸコーディング領域の産物のための翻訳開始コドンを突然変異させてＨＢＳおよびＸ遺伝子産物の発現を阻止する。ＨＢＶポリメラーゼの発現を達成するための他の研究方法に従うと、全ポリメラーゼコーディング領域をコードするＰＣＲ産物を増幅させ、そしてそれをカナミシン耐性遺伝子およびｐＢＲ３２２の複製起点を含むベクター内にクローン化する。それに加え、このプラスミドはサイトメガロウイルスのプロモーター、ラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルスのエンハンサー、およびＳＶ４０のポリアデニル化シグナルを含む。この増幅のための５’ＰＣＲプライマーはクローニング部位を含み、かつポリメラーゼ遺伝子の翻訳開始コドンにまたがる。３’ＰＣＲ産物は発現ベクター内への挿入断片のクローニングのための制限部位を含み、かつ更にはＨＢＶポリメラーゼ遺伝子の通常の停止コドンおよびその停止コドンをフランクする配列に相補的である。このＰＣＲ産物の、カナマイシン耐性遺伝子、ｐＢＲ３２２の複製起点、サイトメガロウイルスのプロモーター、ラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルスのエンハンサー、およびＳＶ４０のポリアデニル化シグナルを含むプラスミド内への連結後には、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原およびＸ遺伝子のための翻訳開始コドンを突然変異させてこれらの遺伝子産物の発現を阻止する。先に記載されるものに類似する別の手法が用いられるが、この事例では３’ＰＣＲプライマーはＨＢＶポリＡシグナル、およびこのシグナルをフランクする配列を含む。このＨＢＶポリＡシグナルを含みおよび／または取り囲む配列が発現にとって重要である事例においては３’プライマーが用いられる。突然変異分析により、ＨＢＶポリメラーゼ遺伝子産物の機能は特別なヌクレオチド変化により除去することができることが既に証明されている（Ｒａｄｚｉｗｅｌｌ，Ｇ．ｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４（２）：６１３−６２０）。先に記載される要領で構築されるプラスミドを利用する前に、発現されたポリメラーゼをこれらの突然変異もしくは類似する他の突然変異の内の一つの組込みにより突然変異させることができる。実施例４５顆粒球−マクロファージコロニー刺激化因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、好中球、単球／マクロファージ、および好酸球を初めとする多様な細胞株における刺激的効果を示す。ＧＭ−ＣＳＦの効果により、それらの細胞株は魅力的な治療モデルとなる。ＧＭ−ＣＳＦはＦＤＡ（米国食料医薬局）により自己骨髄移植の際の使用については認可されており、かつ様々な好中球減少症の治療における効果を検査するための臨床試験が既に着手されている。現在ではＧＭ−ＣＳＦは、複数回用量で投与されることが通常必要である蛋白質として投与されている。蛋白質を産生および精製する必要がある。ＧＭ−ＣＳＦ蛋白質の使用を達成するための別の方法は、ＧＭ−ＣＳＦをコードする遺伝子を含む遺伝子構築物の、．．．の投与と組み合わせた直接投与である。この遺伝子構築物は、シグナル配列を含むＧＭ−ＣＳＦ遺伝子のＰＣＲにより構築される。この遺伝子構築物が、カナマイシン耐性遺伝子（アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ遺伝子）、細菌性の複製起源、ＧＭ−ＣＳＦコーディング領域の発現を支援する配列を、そのプラスミドが実施例３６に主鎖として記載されるベクター内に組込まれる細胞内に含むことが好ましい。このプラスミドが、．．．投与に関連する細胞性複製により組み込まれる哺乳類の複製起点を含むことが好ましい。ＥＢＶの複製起点が用いられる場合には、核抗原ＥＢＮＡ−１をコードする配列も適切な調節配列と共に含まれる。その挿入断片のＰＣＲ増幅のためのプライマーは発現ベクター内へのクローニングを可能にさせる制限酵素部位を含み、かつＧＭ−ＣＳＦコーディング配列の５’および３’ 末端に相補的である。このＰＣＲ反応は、Ｌｅｅｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ８２：４３６０−４３６４に記載される要領でｃＤＮＡクローンを用いて実施される。実施例４６慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）はフィラデルフィア（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）染色体に関連する造血幹細胞のクローン性骨髄増殖性障害であり；染色体異常は染色体９と２２との間の転座により生じる。染色体２２の切断点は切断点クラスター領域（ＢＣＲ）と称される６ｋｂの領域内にクラスターを生じている一方で、染色体９については、その切断点はｃ−ａｂｌエキソン２から上流の９０ｋｂ領域全体に散在している。生じる様々な９：２２転座は以下の２つのタイプに分類することができ、それらは：Ｋ２８転座およびＬ６転座である。ｂｃｒ−ａｂｌ転座を介する転写は融合ｍＲＮＡの産生をもたらす。そのｍＲＮＡのｂｃｒ −ａｂｌ連結点を標的とするアンチセンスは、ＣＭＬ患者から取得される造血細胞がコロニーを形成する能力を低減させることが既に示されている。実施例４７ＨＢＶに対するワクチン接種およびその治療のための薬剤学的キットおよび組成物に有用な遺伝子構築物は、実施例３６に主鎖として記載されるベクターを用いて構築される。このプラスミドはＨＢＶ構造遺伝子、特にＨＢＶ表面抗原および／またはＨＢＶコア抗原のコアおよび／またはＨＢＶプレコア抗原をコードする遺伝子を含む。実施例４８ＨＣＶに対するワクチン接種およびその治療のための薬剤学的キットおよび組成物に有用な遺伝子構築物は、実施例３６に主鎖として記載されるベクターを用いて構築される。このプラスミドはＨＣＶ構造遺伝子、特にＨＣＶ表面抗原および／またはＨＣＶエンベロープ蛋白質をコードする遺伝子を含む。実施例４９唯一の標的蛋白質としてＨＩＶｒｅｖをコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物ｐＲＥＶを設計した。ｒｅｖのコーディング配列を、ｐＵＣ１９内にＨＩＶ株ＨＸ３Ｂからのｒｅｖのコーディング領域を含むＢＢＧ３５（ＲＤＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．社、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）からの実施例３６に記載される主鎖Ａ内にクローン化する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｈ 21/04 9637−4ＢＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ // Ｃ１２Ｐ 21/02 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＹ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims

【特許請求の範囲】１．個体の細胞内に遺伝子物質を導入する方法において、ａ）前記個体の細胞と、陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤とを接触させ；そして、ｂ）前記個体の細胞に核酸分子を投与する段階を含み；前記核酸分子がレトロウイルス粒子を含まない上記方法。２．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリン酸およびオレイン酸の塩、ラウリン酸およびオレイン酸、ラウリルアルコールおよびセチルアルコールのエステル、ならびにスルホネート：からなる群より選択される陰イオン性脂質である、請求項１の方法。３．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウムおよびオレイン酸：からなる群より選択される陰イオン性脂質である、請求項１の方法。４．前記遺伝子ワクチン促進剤が、サポナリン、サルメントシマリン、およびサポゲニン：からなる群より選択されるサポニンである、請求項１の方法。５．前記遺伝子ワクチン促進剤が、サルメントゲニン、サラササポゲニン、およびサルベロゲニン：からなる群より選択されるサポニンである、請求項１の方法。６．前記遺伝子ワクチン促進剤が、コンカナバリンＡ、アブリン、ダイズの凝集素、および小麦胚芽の凝集素：からなる群より選択されるレクチンである、請求項１の方法。７．前記遺伝子ワクチン促進剤が、コンカナバリンＡ：からなる群より選択されるレクチンである、請求項１の方法。８．前記遺伝子ワクチン促進剤がβ−エストラジオールである、請求項１の方法。９．前記遺伝子ワクチン促進剤が、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、およびｎ−ブタノール：からなる群より選択される、請求項１の方法。１０．前記遺伝子ワクチン促進剤がジメチルスルホキシドである、請求項１の方法。１１．前記遺伝子ワクチン促進剤が尿素である、請求項１の方法。１２．前記核酸分子が蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含み、かつ調節配列に機能的に連結されている、請求項１の方法。１３．前記核酸配列が、免疫応答が所望される抗原のエピトープと同一もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列が調節配列に機能的に連結されている、請求項１の方法。１４．病原体に対して個体を免疫化する方法において、ａ）前記個体の細胞と、陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤とを接触させ；そして、ｂ）前記個体の細胞に、病原体抗原のエピトープと同一もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を投与し、前記ヌクレオチド配列が調節配列に機能的に連結されている段階を含み、前記核酸分子がレトロウイルス粒子を含まず、かつ前記ヌクレオチド配列が前記細胞中で発現されることが可能である上記方法。１５．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；オレイン酸；サポナリン；サルメントシマリン；サポゲニン；サルメントゲニン；サルササポゲニン；サルベロゲニン；コンカナバリンＡ；β−エストラジオール；エタノール；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される、請求項１４の方法。１６．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項１４の方法。１７．前記蛋白質が病原体抗原もしくはその断片である、請求項１４の方法。１８．前記核酸分子が筋肉内的に投与される、請求項１４の方法。１９．前記病原体が、ヒト免疫不全症ウイルス、ＨＩＶ；ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ＨＴＬＶ；インフルエンザウイルス；Ａ型肝炎ウイルス、ＨＡＶ；Ｂ型肝炎ウイルス、ＨＢＶ：Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ；ヒトパピローマウイルス、ＨＰＶ；単純疱疹ウイルス１型、ＨＳＶ１；単純疱疹ウイルス２型、ＨＳＶ２；サイトメガロウイルス、ＣＭＶ；エプスタイン−バールウイルス、ＥＢＶ；リノウイルス；およびコロナウイルス：からなる群より選択される、請求項１４の方法。２０．少なくとも２つもしくはそれを上回る異なる核酸分子が、個体の異なる細胞に投与され；前記異なる各核酸分子が前記病原体の一つもしくは複数の病原体抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１４の方法。２１．前記遺伝子ワクチン促進剤および前記核酸分子が同時に投与される、請求項１４の方法。２２．個体を、疾患に対して免疫化する方法において、ａ）前記個体の細胞と、陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤とを接触させ；そして、ｂ）前記個体の細胞に、前記疾患を特徴とする細胞に付随する蛋白質のエピトープと同一もしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む標的蛋白質をコードし、調節配列に機能的に連結されているヌクレオチド配列を含む核酸分子を投与する段階を含み、前記核酸分子がレトロウイルス粒子を含まず、かつ前記細胞中で発現されることが可能である上記方法。２３．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；オレイン酸；サポナリン；サルメントシマリン；サポゲニン；サルメントゲニン；サルササポゲニン：サルベロゲニン；コンカナバリンＡ；β−エストラジオール；エタノール；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される、請求項２２の方法。２４．前記疾患が増殖亢進性細胞を特徴とする、請求項２２の方法。２５．前記疾患が自己免疫性疾患である、請求項２２の方法。２６．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項２２の方法。２７．前記核酸分子が筋肉内的に投与される、請求項２２の方法。２８．前記核酸分子が、癌遺伝子ｍｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎ、ｒａｓ、ｓａｒｃ、ｎｅｕ、およびｔｒｋの蛋白質産物；転座遺伝子ｂｃｌ／ａｂｌの蛋白質産物；Ｐ５３；ＥＧＲＦ；Ｂ細胞リンパ腫により作製される抗体の可変領域；ならびにＴ細胞リンパ腫のＴ細胞レセプターの可変領域：からなる群より選択される標的蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項２２の方法。２９．前記蛋白質が、Ｂ細胞媒介性自己免疫性疾患に関する抗体の可変領域；およびＴ細胞媒介性自己免疫疾患に関与するＴ細胞レセプターの可変領域からなる群より選択される、請求項２２の方法。３０．疾患を患うことが疑われる個体を治療する方法において、ａ）前記個体の細胞と、陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤とを接触させ；そして、ｂ）前記個体の細胞に、損失されているか、非機能化されているか、もしくは部分的にしか機能していない蛋白質を補うため、あるいは前記個体に治療的効果を生じさせるための蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を投与し、その際前記ヌクレオチド配列は調節配列に機能的に連結されている段階を含み、前記核酸分子がレトロウイルス粒子を含まず、かつ前記細胞内で発現されることが可能な上記方法。３１．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；オレイン酸；サポナリン；サルメントシマリン；サポゲニン；サルメントゲニン；サルササポゲニン；サルベロゲニン；コンカナバリンＡ；β−エストラジオール；エタノール；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される、請求項３０の方法。３２．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項３０の方法。３３．前記核酸分子が筋肉内的に投与される、請求項３０の方法。３４．前記核酸分子が、酵素、構造蛋白質、サイトカイン、リンホカイン、および成長因子：からなる群より選択される蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３０の方法。３５．ｉ）病原性抗体のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む蛋白質；増殖亢進性細胞に付随する蛋白質のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似するエピトープを含む蛋白質；自己免疫性疾患を特徴とする細胞に付随する蛋白質のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似するエピトープを含む蛋白質；個体中で損失されているか、非機能化されているか、もしくは部分的にしか機能していない蛋白質を補うであろう蛋白質；ならびに個体に治療的効果を生じる蛋白質：からなる群より選択される蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子；ならびにｉｉ）陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤、を含む薬剤学的組成物であって、前記薬剤学的組成物がレトロウイルス粒子を含まない薬剤学的組成物。３６．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；オレイン酸；サポナリン；サルメントシマリン；サポゲニン；サルメントゲニン；サルササポゲニン；サルベロゲニン；コンカナバリンＡ；β−エストラジオール；エタノール；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される、請求項３５に記載の組成物。３７．ｉ）病原性抗体のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似する少なくとも一つのエピトープを含む蛋白質；増殖亢進性細胞に付随する蛋白質のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似するエピトープを含む蛋白質；自己免疫性疾患を特徴とする細胞に付随する蛋白質のエピトープと同一であるかもしくは実質的に類似するエピトープを含む蛋白質；個体中で損失されているか、非機能化されているか、もしくは部分的にしか機能していない蛋白質を補うであろう蛋白質；ならびに個体に治療的効果を生じる蛋白質：からなる群より選択される蛋白質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む容器；ならびにｉｉ）陰イオン性脂質；サポニン；レクチン；エストロゲン性化合物；ヒドロキシル化低級アルキル；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される遺伝子ワクチン促進剤を含む容器：を含み、レトロウイルスの粒子を含まない薬剤学的キット。３８．前記遺伝子ワクチン促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；オレイン酸；サポナリン；サルメントシマリン；サポゲニン：サルメントゲニン；サルササポゲニン；サルベロゲニン；コンカナバリンＡ；β−エストラジオール；エタノール；ジメチルスルホキシド；および尿素：からなる群より選択される、請求項３７のキット。