JPH09511913A - 植物性タンパク質の溶解度を改善する方法 - Google Patents

植物性タンパク質の溶解度を改善する方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、植物性タンパク質の溶解度を改善する方法に関する。更に詳しくは、本発明は植物性タンパク質源中のタンパク質の溶解のための方法に関し、この方法は植物性タンパク質源を、有効量の1種以上のフィターゼ酵素で処理しそして植物性タンパク質源を、1種以上のタンパク質分解酵素で処理することを含んでなる。もう一つの面において、本発明はフィターゼおよび1種以上のタンパク質分解酵素を含んでなる動物飼料添加剤を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 植物性タンパク質の溶解度を改善する方法 技術分野 本発明は、植物性タンパク質の溶解度を改善する方法に関する。更に詳しくは 、植物性タンパク質源中のタンパク質を可溶化する方法に関し、この方法は植物 性タンパク質源を有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ(Phytase)酵素で処理 し、次いで植物性タンパク質源を有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵 素で処理することを含んでなる。もう一つの面において、本発明はフィターゼお よび1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を含んでなる動物飼料添加剤を含ん でなる。 背景技術 タンパク質は、a.o.哺乳動物およびレヤー(layers)に対する必須栄養因 子である。大抵の家畜および多くの人々は、植物性タンパク質源から必要なタン パク質を得ている。重要な植物タンパク質源は、例えは穀物植物、マメ科植物お よび脂肪種子作物である。 加水分解された植物性タンパク質、例えば大豆タンパク質加水分解物は栄養素 として、例えば食物および飲料に対する栄養添加物としてその適用が見出される 。加水分解されたタンパク質は、未加水分解タンパク質よりもより容易に吸収さ れる;何故ならタンパク質加水分解物は最も高い栄養価を有するものと考えられ るからである。タンパク質加水分解物を製造する幾つかの方法は公知でありそし て文献例えば米国特許4,324,805および国際公開(WO)92/15696に記載されてい る。 植物起源の本質的に全ての食物および飼料物質は、貯蔵リン源としてフィテー ト(phytate)およびフィチン酸を含有する〔注、review in E.Graft.(編)、ph ytic Acid,Chemistry and Applications 、ミネアポリス、米国、1986〕。穀物 植物中の約75−78%のリンがフィチン酸として結合している。フィテートは、全 ての堅果、穀物植物、脂肪種子、胞子および花粉の1−3%を含んでなる。フィ チン酸の錯塩は、フィチン(phytin)と称されている。 フィチン酸キレート鉱物例えばカルシウム、亜鉛、マグネシウムおよび鉄(こ れにより、天然に重要な鉱物の生物適合性を減少する)は、一般に抗栄養因子と して考えられる。インビトロの研究ではフィチン酸は幾つかの動物タンパク質の ペプシン消化を阻害し、一方トリプシン消化は影響されなかった〔注、Knuckles 等、Journal of Food Science,1989 54 1348−1350〕。 フィターゼは、フィテートをイノシトールおよび無機リンへの変換を触媒する 酵素である。フィターゼは、例えばバシラス(Bacillus)、シュードモナス(Pseud omonas)、サッカロマイセス(Saccharomyces)およびアスペルギルス(Aspergillus )から得られてきた。 米国特許3,297,548において、飼料に無機リンを加えることを避けるため単胃 動物の飼料に微生物フィターゼを加えることが提案された。 フィターゼを大豆の加工において用いられることが考案された。従って、ヨー ロッパ公開特許0420358は、大豆ミル高レベルの抗栄養因子フィテートを含有し 、このフィテートはこのタンパク質源を乳児食物並びに魚、子牛および他の非反 すう動物においてこのタンパク質源を不適当ならしめる;何故ならフィテートは その中に存在する必須の鉱物とキレート形成するからである。 要約すると、植物性タンパク質源中に存在するフィテート/フィ チン酸中に結合せしめられたリンを利用するため、又はフィチン酸錯体中で結合 せしめられた天然に重要な鉱物を利用するため、フィターゼ酵素を利用すること が先に提案された。 しかし、植物源、例えば穀物植物、マメ科植物および脂肪種子穀物中に存在す るタンパク質の有効性を改善する必要がある、何故なら増加せしめられた有効性 は、タンパク質加水分解プロセスの高収率並びに栄養上の利点、すなわち改善さ れたタンパク質の利用を導くからである。 発明の要約 今や以下の内容が見出された;すなわち、植物起源中に存在するタンパク質の 溶解性は、植物起源を有効量のフィターゼ酵素で処理することにより増加できる 。タンパク質分解プロセス中にフィターゼを添加することにより、より高程度の 加水分解およい改善せしめられたタンパク質溶解性が得られ、そして収率が改善 する。 従って、本発明は植物性タンパク質中のタンパク質を可溶化するための方法を 提供し、その方法は有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を用いて植物性 タンパク質源を処理し;次いで有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素 を用いて植物性タンパク質源を処理することを含んでなる。 発明の詳細な開示 植物性タンパク質の可溶化 本発明は、植物性タンパク質源中のタンパク質の可溶化のための方法を提供し 、これによりタンパク質加水分解物を得る。 前記方法は、次の工程: (a)有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を用いて植物 性タンパク質源を処理し;次いで (b)有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用いて植物性タンパ ク質源を処理することを含んでなる。 タンパク質加水分解物を得るための公知方法と比較して、本発明方法はタンパ ク質の有効性を改善し、これにより増加せしめられた抽出、高収率および改善さ れたタンパク質の利用を導びく。 本発明方法に委ねられる植物性タンパク質源は全ての植物性タンパク質、特に マメ科植物、穀物植物、キク科植物又は十字花科植物である。好ましくは、マメ 科植物は大豆、豆、えんどうおよびルピナス(ルピナスアルバス(Lupinus albus ))から選ばれ、より好ましくはマメ科植物は大豆である。好ましくは、穀物植 物は、小麦、とうもろこし、大麦、ライ麦、からす麦、米、モロコシの類ごま( サザマムインジカム(Sesamum indicum))およびきび(パニカムミリアセウム(Pa nicum miliaceum)から成る群から選ばれる。有用なキク科植物の例は、サンフラ ワー(ヘリアンタス(Helianthus))であり、そして有用な十字花科植物の例は、 西洋あぶらな(なたね、例えばブラシカナパス(Brassica napus)である。 植物性タンパク質源は好ましくは大豆である。 本発明方法に委ねられる植物性タンパク質は、「加工された形」を含む、あら ゆる形をとることができ、ここにおいて乾燥物質のタンパク質含量は、タンパク 質を本発明方法に委ねる前に増加される。例えば大豆タンパク質原料は、大豆、 脂肪大豆フレーク、大豆あらびき粉、大豆濃縮物又は大豆単離物として得られ得 る。このようなタンパク質原料は、典型的には約42%ないし約95%のタンパク質 を含有する。 タンパク質源は、本発明方法に委ねる前に常法で予備処理されてもよい。特に 、タンパク質源を乾燥しおよび/又は粉砕し、すなわ ちあらびき粉又はフレーク(例えば大豆あらびき粉又はフレーク)に加工される 。 本発明方法の2工程、(a)および(b)は、連続工程として行うことができ 、又は2つの行程を同時に行なうことができる。 また、植物性タンパク質源を、1種以上のフィターゼ酵素および1種以上のタ ンパク質分解酵素を含んでなる1種の酵素調製品で処理され、又は植物性タンパ ク質源は1種以上のフィターゼ酵素および/又はタンパク質分解酵素を含んでな る2種以上の酵素で処理できる。 現在次のように考えられている;すなわち本発明方法は約pH3〜約pH9、より 好ましくは約pH4〜約pH9の懸濁液のpHで好ましく行なわれる。 また、次のように企図される;すなわち本発明方法は約10℃〜約70℃、より好 ましくは約35℃〜約65℃の温度で好ましく行なわれる。 より特異的態様において、本発明方法は、 (i)植物性タンパク質源を水中に懸濁させ; (ii)水性懸濁液を、1種又はそれ以上のフィターゼ酵素および1種又はそれ 以上のタンパク質分解酵素を用いて酵素処理に委ねることによりタンパク質をタ ンパク加水分解し; (iii)酵素を失活させ;次いで所望により (iv)可溶化タンパク質を水性懸濁液から分離する連続工程を含んでなる。 酵素の失活は、酵素を失活させる常法により、例えば熱処理により、すなわち 加水分解懸濁液又は混合物の温度を酵素が変性する温度、典型的には85℃超の温 度に上げることにより行うことができる。 分離工程は、懸濁液から加水分解されたタンパク質を常法により、例えばタン パク質加水分解物を含有する懸濁液を遠心分離又は膜濾過により行うことができ る。 一般的に、本発明方法は米国特許4,324,805、米国特許4,100,024およびWO92/ 15696(これらの公報はその番号を引用して本明細書に加えられる)に記載の如く 、タンパク質加水分解物を得る常法に類似の方法で行うことができる。 フィターゼ酵素 植物性タンパク質源中のタンパク質を可溶化するための本発明方法は、植物性 タンパク質源を有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素で処理することを含 んでなる。 本発明に関連して、フィターゼ酵素は種々のミオイノシトール(myoinositol) ホスフェートから無機リンの除去を触媒する酵素である。フィターゼ酵素は、好 ましくは微生物源、例えば細菌、菌類および酵母から由来しそして植物起源であ ってもよい。 好ましい態様において、フィターゼ酵素は菌類、菌株、特にアスペルギルス(A spergillus)菌株、好ましくはアスペルギルスニガー(Aspergillus niger)菌株、 アスペルギルスフィクム(Aspergillus ficuum)菌株、アスペルギルスアワモリ(A spergillus awamori)菌株、アスペルギルスオリゼ(Aspergillus oryzae)菌株 、アスペルギルステレウス(Aspergillus terreus)菌株およびアスペルギルスニ ドランス(Aspergillus nidulans)菌株から由来する。 アスペルギルスニガー菌株又はアスペルギルスオリゼ菌株から由来するフィタ ーゼ酵素が最も好ましい。 もう一つの好ましい態様において、フィターゼ酵素は細菌菌株、特にバシラス (Bacillus)菌株又はシュードモナス(Pseudomonas)菌株から由来する。 更にもう一つの好ましい態様において、フィターゼ酵素は酵母、特にクルベロ マイセス(Kluveromyces)菌株又はサッカロマイセス(Saccharomyces)菌株から 由来する。好ましくは、フィターゼ酵素はサツカロマイセスセレビシエ(Saccha romyces cerevisiae)の菌株から由来する。 本発明に関連し、「由来する酵素」は、特定の菌株により天然に生産される酵 素又は、特定の菌株から単離されたDNA配列によりコードされそして該DNA配列で 形質転換された宿主生物体内で生産される酵素を含む。 フィターゼ酵素は、好適な技術を用い対照の微生物から由来できる。特に、フ ィターゼ酵素は、好適な栄養培地内でフィターゼ生産微生物を発酵し、次いで公 知方法で酵素を単離することにより得られる。 培養して用いられるブロス又は倍地は、対象の宿主細胞の増殖に好適な全ての 好都合の培地であってよく、そして従来技術の原則に従って構成され得る。培地 は、好ましくは炭素および窒素源並びに他の無機塩を含有する。適当な培地、例 えば最少又は複合培地は商業上の供給者から入手可能であるか、又は出版された レシート(receipts)、例えばアメリカン タイプ カルチア コレクション( ATCC)菌株カタログに従って生産できる。 培養後、フィターゼ酵素は培養ブロスからタンパク質の単離および精製のため の常法により回収される。周知の精製手順には、遠心又は濾過により培地からの 細胞の分離、硫酸アンモニウムの如き塩により培地のタンパク質成分の沈殿、お よびクロマトグラフィー法例えば、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過ク ロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等により培地から細胞を分 離することが含まれる。 択一的に、フィターゼ酵素は例えばヨーロッパ特許公開420358(この公報はそ の番号を引用して本明細書に加えられる)に記載される如く、組換えDNA工学を 用い多量に好ましく生産される。 好ましくは、種アスペルギルス フィクム(Aspergillus ficuum)又はアスペ ルギルスニガー(Aspergillus niger)から得られるフィターゼコード遺伝子で形 質転換された種アスペルギルスの菌類を、ヨ−ロッパ特許公開420358に記載の如 きフィターゼコード遺伝子の発現を助成する条件下で培養される。 フィターゼ含有発酵ブロスを、本発明の(調合物)において使用される前にブ ロス濾過および限外濾過により好ましく処理される。 現在次のように考えられている;すなわち、植物性タンパク質の溶解度を改善 するために有効なフィターゼの量は、1kgのタンパク質源当たり、約2〜約5000 0FYT(後に定義する如き)、好ましくは1kgのタンパク質源当たり約50〜約3000 0FYT、最も好ましくは1kgのタンパク質源当たり約100〜約10000FYTの量に相当 する。 タンパク質分解酵素 植物性タンパク質源中のタンパク質の可溶化のための本発明方法はまた、植物 性タンパク質源を有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素で処理するこ とを含んでなる。 タンパク質分解酵素は、微生物酵素、好ましくは細菌又は菌類菌株から由来す るプロテアーゼであってよく、又はタンパク質分解酵素はバシラス菌株、好まし くはバシラススブチリス(Bacillus subtilis)菌株又はバシラスリケニホルミス (Bacillus licheniformis)菌株から由来する細菌プロテアーゼである。商業的 に入手可能なバシラスプロテアーゼは、アルカラーゼ(Alcalase)(商標)およ びニュートラーゼ(Newtrase)(商標)(ノボノルディスクA/S、デンマーク )である。もう一つの好ましい態様において、タンパク質分 解酵素は、アスペルギルス(Aspergillus)菌株、好ましくはアスペルギルスアク レタス(Aspergillus aculeatus)菌株、アスペルギルスニガー(Aspergillus nige r)菌株、アスペルギルスオリゼ(Aspergillus oryzae)菌株から由来する菌類プロ テアーゼである。商業的に入手可能なアスペルギルスプロテアーゼはフレーバー ザイム(Flavourzyme)(商標)(ノボノルディスクA/S、デンマーク)であ る。 現在次のように考えられている;すなわち、植物性タンパク質の溶解度を改善 するために有効なタンパク質分解酵素の量は、1kgのタンパク質源当たり約0.00 01〜約0.5AU(後に定義する如き)、好ましくは1kgのタンパク質源当たり約0.0 01〜約0.05AU、より好ましくは1kgのタンパク質当たり約0.005〜約0.03AUの量 に相当する。 追加酵素 前記の如く、本発明は植物性タンパク質中のタンパク質を可溶化するための方 法を提供し、この方法は次の工程: (a)有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を用いて植物性タンパク質 源を処理し;次いで (b)有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用いて植物性タンパ ク質源を処理することを含んでなる。 本発明の2つの工程、(a)および(b)は、連続工程として行うことができ 、又は2つの工程は同時に行うこともできる。 好ましい態様において、本発明は更に、(c)脂肪分解酵素およびグルコシダ ーゼ酵素から成る群から選ばれる1種又はそれ以上の酵素の有効量を用い植物性 タンパク質源を処理する工程を含んでなる。 本発明方法の3つの工程、(a),(b)および(c)は、連続工程として行 うことができ、又は3つの工程は同時に行うことができ る。又は本発明方法の2つの工程、(a)および(b)は同時に行うことができ 、ついで工程(c)を行う。 工程(c)のタンパク質分解酵素は、あらゆるトリアシルグリセロールリパー ゼ(EC3.1.1.3)であってよい。 工程(c)のグリコシダーゼ酵素は、あらゆるグリコシダーゼ酵素(EC3.2 、カルボヒドラーゼとして公知)であってよい。好ましくは、グルコシダーゼ酵 素は、アミラーゼ特にα−アミラーゼもしくはβ−アミラーゼ、セルラーゼ、特 にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.4)又はエンド−1,3 −β−グルカナーゼ(3.2.1.6)、キシラナーゼ、特にエンド−1,4− β−グルカナーゼ(EC3.2.1.8)又はキシラン−エンド−1,3−β−キ シロシダーゼ(EC3.2.1.32)、α−ガラクトシダーゼ(EC3.2.1.22 )、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セルロース−1,4−β−セ ロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、エンドグルカナーゼ、特にエンド−1, 6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナー ゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1. 39)又はエンド−1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である。 より好ましい態様において、グルコシダーゼ酵素は、ポリガラクツロナーゼ( EC3.2.1.15)、セルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2. 1.91)、又はエンドグルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6−β−グルカナ ーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1 .71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド− 1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である。 産業上の適用 植物性タンパク質源におけるタンパク質の可溶化のための本発明方法は、種々 の産業においてその適用が見出される。特に、本発明方法は栄養素として、例え ば食品および飲料に対する栄養添加物としてタンパク質加水分解物の製造に対す る適用を見出す。 従って、もう一つの面において、本発明は本発明方法によって植物性タンパク 質源から得られるタンパク質加水分解物を提供する。 本発明のタンパク質加水分解物は、食品又は飲料に添加でき、これにより栄養 価を増加させる。 特に、本発明のタンパク質加水分解物は、動物飼料、例えば単胃動物用飼料材 料に添加できる。 動物飼料添加剤 本発明は、1種以上のフィターゼ酵素および1種以上のタンパク質分解酵素を 含んでなる動物飼料添加剤を提供する。 動物飼料に添加するとき、1種以上のフィターゼ酵素および1種以上のタンパ ク質分解酵素の組合わせは、植物起源の動物飼料中に存在するタンパク質の有効 性を改善し、これにより植物性タンパク質の増加せしめられた抽出、高タンパク 質収率および改善されたタンパク質利用性が導びかれる。これにより、窒素消化 能およびまぐさの栄養価が高まり、そして動物の成長比および/又は飼料変換比 (すなわち、重量増加に対する消化された飼料の重量)が改善される。 本発明に関連して、動物飼料添加剤は1種以上のフィターゼ酵素および1種以 上のタンパク質分解酵素および適当な担体および/又は賦形剤を含んでなる酵素 調製品であり、そしてこの酵素調製品は動物飼料に添加されるのに適した形で提 供される。本発明の動物飼料添加剤は、当業者に公知の方法により製造されそし て乾燥又は液 体調製品の形であってよい。調製品に含まれる酵素は、当業者に公知方法で所望 により安定化される。 特異態様において、本発明の動物飼料添加剤は粒状酵素製品でありこれは飼料 成分と容易に混合され、又はより好ましくはプレミックスの成分を形成する。粒 状酵素製品は、被覆され又は被覆されなくてよい。酵素粒質物の粒径は、飼料お よびプレミックス成分のそれに匹敵する。これは酵素を飼料に配合する安全かつ 好都合な手段を提供する。 もう一つの特異的態様において、本発明の動物飼料添加剤は、安定化液体組成 物であり、これは水性又はオイル基材スラリーであってよい。 更にもう一つの特異的態様において、1種以上の酵素が飼料のペレット化もし くは押出前又はペレット化もしくは押後に適用される。 本発明の動物飼料添加剤は、(飼料成分を改変することにより)インビトロで 又はインビボでその効果を発現する。本発明の飼料添加物は高量の植物性タンパ ク質、特にマメ科植物、穀物植物、キク科植物又は十字花科植物を含有する動物 飼料組成物への添加に特に適している。好ましくは、マメ科植物は大豆、ファバ ビーン(fababean)、えんどうおよび/又はルピナス(Lupinus albus)である。最 も好ましくはマメ科植物は大豆である。好ましくは、穀物は、小麦、とうもろこ し、大麦、ライ麦、からす麦、米、ごま(Sesamum indicum)およびきび(Panicum miliaceum)である。キク花植物の例は、ひまわり(Helianthus)であり、そして 有用な十字花科植物の例は西洋あぶらな(なたね、例えばBrassica napus)であ る。 もう一つの好ましい態様において、本発明は脂肪分解酵素およびグルコシダー ゼ酵素から成る群から選ばれる1種以上の追加の酵素 を含んでなる動物飼料添加剤を提供する。 脂肪分解酵素はトリアシルグリセロールリパーゼ(EC3.1.1.3)であっ てよい。 グリコシダーゼ酵素は、全てのグリコシダーゼ酵素(EC3.2、カルボヒドラ ーゼとして公知)であってよい。好ましくは、グルコシダーゼ酵素は、アミラー ゼ特にα−アミラーゼもしくはβ−アミラーゼ、セルラーゼ、特にエンド−1, 4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.4)又はエンド−1,3−β−グルカナ ーゼ(3.2.1.6)、キシラナーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナー ゼ(EC3.2.1.8)又はキシラン−エンド−1,3−β−キシロシダーゼ( EC3.2.1.32)、α−ガラクトシダーゼ(EC3.2.1.22)、ポリガラク ツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ (EC3.2.1.91)、エンドグルカナーゼ、特にエンド−1,6−β−グルカ ナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2. 1.71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド −1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である。 より好ましい態様において、グルコシダーゼ酵素は、ポリガラクツロナーゼ( EC3.2.1.15)、セルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2. 1.91)、又はエンドグルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6−β−グルカナ ーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1 .71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド− 1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である。 現在次のように考えられている;すなわち動物飼料添加剤のpHは数pH2〜約pH 8の範囲内にあるべきである。 現在次のように考えられる;すなわち動物飼料添加剤中のフィターゼ活性の量 は、全組成物1g当たり約200〜約50000FYT(以下に定義)の範囲内、好ましく は全組成物1g当たり約500〜約10000FYTの範囲内、最も好ましくは全組成物1 g当たり約2000〜約6000FYTの範囲内にあるべきである。 好ましくは、動物飼料に添加される添加物の量は、飼料1kg当たり少なくとも 50FYT、より好ましくは飼料1kg当たり約100〜約2000FYTを含有する飼料組成物 を提供するために十分である。 次のように理解されるべきである;すなわち、栄養価、すなわち窒素消化能を 高めるため飼料に添加されるべきフィターゼ単位の実際量は、飼料それ自身の組 成に依存するであろう。高量のフィチン酸を含有する飼料は、一般により高量の フィターゼ活性の付加を要求するであろう。必要量のフィターゼは当業者により 容易に測定されるであろう。 フィターゼ活性(FYT) フィターゼ活性は基質としてフィチン酸ナトリウムを用いて測定され得る。フ ィターゼの作用に委ねるとき、無機リンはフィチン酸ナトリウムから放出される 。鉄/モリブデン含有試剤においてホスホラウス(phosphorous)(PO4)は錯体を形 成し、これは750nmで分光測定により監視できる。 1フィターゼ単位(FYT)は、標準条件下(すなわち、pH5.5,37℃で、50mMのフ ィチン酸ナトリウムの基質温度そして30分の反応時間)、毎分1μmolを遊離す る酵素の量として定義される。 この分析方法をより詳しく記載する標準操作手順EAL-SM-0403.01は、ノボノル ディスクA/S(デンマーク)に要求により入手可能であり、この出版物はその 番号を引用して本明細書に加入される。 プロテアーゼ活性(AU) タンパク質分解活性は、基質として変性ヘモグロビンを用いて測定できる。タ ンパク質分解活性を測定するアンソン−ヘモグロビン法において、変性ヘモグロ ビンを消化され、そして未消化ヘモグロビンは三塩化酢酸(TCA)で沈殿する。TCA 可溶性生成物の量は、フェノール試薬で測定され、これはチロシンおよびトリプ トファンで青色を与える。 1アンソン単位(AU)は、標準条件下(すなわち、25℃、pH7.5および10分間 の反応時間)、チロシンの1ミリ当量としてフェノール試剤で同じ色を与えるTC A可溶性生成物を毎分当たり遊離するような初期速度でヘモグロビンを消化する 酵素の量として定義される。 分析方法をより詳しく記載する折りたたんだ印刷物は、ノボノルディスクA/ S(デンマーク)に要求することにより入手可能であり、これは番号を利用して 本明細書に加えられる。 実施例 本発明を更に次の実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に制限さ れるものではない。 例1 大豆タンパク質加水分解 濃縮大豆タンパク質(Unico 75,Loders Crooklaan,NL)を50℃で脱イオン水 に懸濁させた。 混合物を85℃で3分間加熱し次いで55℃加水分解の温度に冷却した。4NのNa OHを用いpHを8.5に調節した。 混合物を3つの比較実験のため3つの容器に分割した: 1)アルカラーゼ(商標) 2.4l、用量2w/w%のタンパク質含量、 ニュートラーゼ(商標)0.5l、用量1w/w%のタンパク質含量、 フィターゼノボ(商標)(アスペルギルスフィターゼ、6900FYT/g)、用量 1mg/g大豆コンセントレートを用いて加水分解する。 フィターゼはpH<6.6のとき加える。 2)アルカラーゼ(商標)2.4l、用量2w/w%のタンパク質含量ニュート ラーゼ(商標)0.5l、用量1w/w%のタンパク質含量を用いて加水分解する 。 3)pHをHClを用いて6.2に調節する。フィターゼノボ(商標)(アスパラギル スフィターゼ、6900FYT/g)、用量1mg/g大豆コンセントレート 3種の加水分解は、加水分解の程度および浸透圧モル濃度を監視することによ り行った。結果を以下の表1および表2に示す。 加水分解の程度(% DH)の双方の測定は、基質の増加せしめられた分解を示す 。実験1は実験2(77.3%)と比較してより多くの可溶化したタンパク質(78.8 %)を生成した。 例2 大豆ミールのインビトロN−消化率 2種のサンプルを調製した: サンプルA: 1gの大豆ミール サンプルB: 0.032gのフィターゼノボ(商標)(アスペルギルスフィターゼ、5000FYT/g )を添加した1gの大豆ミール 各サンプルを、ペプシンと共にpH2.4で2時間インキュベートし次いでパンク レアチンと共にpH6.8で16時間と共にインキュベートした。消化されていないが 懸濁したタンパク質をスルホサリチル酸で沈殿させた。未消化タンパク質(並び に他の未消化成分)を濾過により集めそして乾燥した。フィルターケーキおよび サンプルの乾燥物質を測定し、次いで窒素(N)の量をケールダール法により測 定した。 N消化率を次のように計算した: タンパク質消化率を、窒素(N)消化率に、6.25を乗ずることによって計算し た。 次のタンパク質消化率結果を得た: サンプルA(フィターゼなし):88.4% サンプルB(フィターゼあり):89.9% 例3 見掛け窒素消化率に対するフィターゼの効果並びに豚における窒素利用 大豆−小麦−大豆ダイエットに関する豚(体重46−52kg)に対するバシラス試 験 食物組成: 大 麦 50.8% 小 麦 20.0% 大 豆 24.0% 動物脂肪 2.0% メラシー(Melasse) 1.0% ミネラル、ビタミンおよびアミノ酸 2.2% 食物への無機ホスフェートの添加なし。食物を60℃超の温度でペレット化した 。 バランス試験を、5日の適合期間および7日の採取期間により行なった。 12匹の豚を2つの群に分けた。第1の群に食物を与えそして第2の群に同じ食 物を与えたが但し20.3g/100kg フィード(feed)のフィターゼノボ(商標)( アスパルギルスフィターゼ、7370FYT/g )を添加した。 食物、排せつ物および尿中の窒素の含量を測定しそして見掛け窒素消化率およ び窒素利用を計算した。 結果を以下の表3に示す。
【手続補正書】特許法第184条の7第1項 【提出日】1995年9月21日 【補正内容】 請求の範囲 1.植物性タンパク質源中のタンパク質を可溶化するための方法であって、次 の工程: (a)有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を用いて植物性タンパク質源 を処理し; (b)有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用いて植物性タンパク 質源を処理し;次いで (c)有効量の1種又はそれ以上の脂肪分解酵素(EC3.1.1.3)および1 種又はそれ以上のグリコシダーゼ酵素(EC3.2)を用いて植物性タンパク質源 を処理することを含んでなる、前記方法。 2.工程(c)のグルコシダーゼ酵素が、アミラーゼ特にα−アミラーゼもし くはβ−アミラーゼ、セルラーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC 3.2.1.4)又はエンド−1,3−β−グルカナーゼ(3.2.1.6)、 キシラナーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.8)又 はキシラン−エンド−1,3−β−キシロシダーゼ(EC3.2.1.32)、α− ガラクトシダーゼ(EC3.2.1.22)、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2. 1.15)、セルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、 エンドグルカナーゼ、特にエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1. 75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1, 3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナ ーゼ(EC3.2.1.59)である、請求の範囲第1項記載の方法。 3.工程(c)のグルコシダーゼ酵素が、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2. 1.15)、セルロース−1,4−β−セロビオシダー ゼ(EC3.2.1.91)、又はエンドグルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6 −β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ (EC3.2.1.71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39 )又はエンド−1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である、請求の 範囲第1項記載の方法。 4.工程(a),(b)および(c)を同時に行う、請求の範囲第1〜3項の いずれか1項に記載の方法。 5.工程(a)のフィターゼが、植物フィターゼ、菌類フィターゼ、細菌フィ ターゼ又は酵母により生産可能なフィターゼである、請求の範囲第1〜4項のい ずれか1項に記載の方法。 6.菌類フィターゼが、アスペルギルス(Aspergillus)菌株、好ましくはアス ペルギルス ニガー(Aspergillus niger)菌株、アスペルギルス フィクム(Asp ergillus ficuum)菌株、アスペルギルス アワモリ(Aspergillus awamori)菌 株、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株、アスペルギルス テ レウス(Aspergillus terreus)菌株、又はアスペルギルス ニドランス(Asperg illus nidulans)菌株から由来する、請求の範囲第5項記載の方法。 7.細菌フィターゼが、バシラス(Bacillus)菌株又はシュードモナス(Pseudom onas)菌株、好ましくはバシラス スブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由来 する、請求の範囲第5項記載の方法。 8.フィターゼが属クルベロマイセス(Kluveromyces)又はサッカロマイセス (Saccharomyces)の酵母、好ましくはサッカロマイセス セレビシエ(Saccharom yces cerevisiae)菌株から由来する、請求の範囲第5項記載の方法。 9.植物性タンパク質源を、1kgのタンパク質源当たり約2〜約50000フィタ ーゼ単位(FYT)、好ましくは1kgのタンパク質源当たり約50〜約30000FYT、最も 好ましくは1kgのタンパク質源当たり約100〜約10000FYTの量で工程(a)のフ ィターゼを用いて処理する、請求の範囲第1〜8項のいずれか1項に記載の方法 。 10.工程(b)のタンパク質分解酵素が、微生物プロテアーゼ、菌類プロテア ーゼ、又はペプシンもしくはトリプシンである、請求の範囲第1〜9項のいずれ か1項に記載の方法。 11.微生物プロテアーゼが、バシラス(Bacillus)菌株、好ましくはバシラス リケニホルミス(Bacillus licheniformis)菌株、および/又はバシラス ス ブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由来する、請求の範囲第10項記載の方法 。 12.菌類プロテアーゼが、アスペルギルス菌株、好ましくはアスペルギルス アクレタス(Aspergillus aculeatus)菌株、アスペルギルス ニガー(Aspergillu s niger)菌株、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株から由来す る、請求の範囲第10項に記載の方法。 13.1kgのタンパク質源当たり約0.0001〜約0.5AU、好ましくは1kgのタンパ ク質源当たり約0.001〜約0.05AU、より好ましくは1kgのタンパク質当たり約0.0 05〜約0.03AUの量で工程(b)の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用い て植物性タンパク質源を処理する、請求の範囲第1〜12項のいずれか1項に記載 の方法。 14.植物性タンパク質源が、マメ科植物、キク科植物、十字花科植物、又は穀 物植物又はそれらの混合物である、請求の範囲第1〜13項のいずれか1項に記載 の方法。 15.植物性タンパク質源が大豆である、請求の範囲第1〜13項のいずれか1項 に記載の方法。 16.酵素処理を、3〜9のpH、好ましくは4〜7のpHで行なう、請求の範囲第 1〜15項のいずれか1項に記載の方法。 17.酵素処理を、約10〜約70℃の温度、好ましくは約35℃〜約65℃の温度で行 なう、請求の範囲第1〜16項のいずれか1項に記載の方法。 18.フィターゼ、タンパク質分解酵素並びに脂肪分解酵素(EC3.1.1.3 )およびグリコシダーゼ酵素(EC3.2)からなる群から選ばれる1種又はそれ 以上の追加の酵素を含んでなる動物飼料添加剤。 19.グルコシダーゼ酵素が、アミラーゼ特にα−アミラーゼもしくはβ−アミ ラーゼ、セルラーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1. 4)又はエンド−1,3−β−グルカナーゼ(3.2.1.6)、キシラナーゼ 、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.8)又はキシラン− エンド−1,3−β−キシロシダーゼ(EC3.2.1.32)、α−ガラクトシダ ーゼ(EC3.2.1.22)、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セル ロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、エンドグルカナ ーゼ、特にエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド− 1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3−β−グルカ ナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2 .1.59)である、請求の範囲第18項記載の動物飼料添加剤。 20.グルコシダーゼ酵素が、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セ ルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、又はエンドグ ルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75 )、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3 −β−グルカ ナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2 .1.59)である、請求の範囲第18項記載の動物飼料添加剤。 21.フィターゼが、植物フィターゼ、菌類フィターゼ、細菌フィターゼ又は酵 母により生産可能なフィターゼである、請求の範囲第18〜20項のいずれか1項に 記載の動物飼料添加剤。 22.菌類フィターゼが、アスペルギルス(Aspergillus)菌株、好ましくはアス ペルギルス ニガー(Aspergillus niger)菌株、アスペルギルス フィクム(Asp ergillus ficuum)菌株、アスペルギルス アワモリ(Aspergillus awamori)菌株 、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株、アスペルギルス テレ ウス(Aspergillus terreus)菌株、又はアスペルギルス ニドランス(Aspergil lus nidulans)菌株から由来する、請求の範囲第21項記載の動物飼料添加剤。 23.細菌フィターゼが、バシラス(Bacillus)菌株又はシュードモナス(Pseud omonas)菌株、好ましくはバシラス スブチリス(Bacillus subtilis)菌株から 由来する、請求の範囲第21項記載の動物飼料添加剤。 24.フィターゼが、属クルベロマイセス(Kluveromyces)又はサッカロマイセ ス(Saccharomyces)の酵母、好ましくはサッカロマイセス セレビシエ(Sacchar omyces cerevisiae)菌株から由来する、請求の範囲第21項記載の動物飼料添加 剤。 25.組成物1g当たり約200〜約50000フィターゼ単位(FYT)、好ましくは、組 成物1g当たり約500〜約10000FYT、より好ましくは組成物1g当たり約2000〜 約6000FYTに相当する量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を含んでなる、請 求の範囲第18〜24項のいずれか1項に記載の動物飼料添加剤。 26.タンパク質分解酵素が、微生物プロテアーゼ、菌類プロテアーゼ、又はペ プシンもしくはトリプシンである、請求の範囲第18〜25項のいずれか1項に記載 の動物飼料添加剤。 27.微生物プロテアーゼが、バシラス(Bacillus)菌株、好ましくはバシラス リケニホルミス(Bacillus licheniformls)菌株、および/又はバシラス ス ブチリス(Bacillus Subtilis)菌株から由来する、請求の範囲第26項記載の動物 飼料添加剤。 28.菌類プロテアーゼが、アスペルギルス菌株、好ましくはアスペルギルス アクレタス(Aspergillus aculeatus)菌株、アスペルギルス ニガー(Aspergillu s niger)菌株、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株から由来す る、請求の範囲第26項に記載の動物飼料添加剤。 29.組成物1g当たり約0.01〜約20AU(アンソン単位)、好ましくは組成物1 g当たり約0.1〜約10AU、より好ましくは組成物1g当たり約0.2〜約5AUに相当 する量のタンパク質分解酵素を含んでなる、請求の範囲第18〜28項のいずれか1 項に記載の動物飼料添加剤。 30.1種又はそれ以上の酵素が、粉末、無粉塵性粒質物、安定化液体、スラリ ー又は保護された酵素の形で提供される、請求の範囲第18〜29項のいずれか1項 に記載の動物飼料添加剤。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 EP(AT,BE,CH,DE, DK,ES,FR,GB,GR,IE,IT,LU,M C,NL,PT,SE),OA(BF,BJ,CF,CG ,CI,CM,GA,GN,ML,MR,NE,SN, TD,TG),AP(KE,MW,SD,SZ,UG), AM,AT,AU,BB,BG,BR,BY,CA,C H,CN,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,GB ,GE,HU,IS,JP,KE,KG,KP,KR, KZ,LK,LR,LT,LU,LV,MD,MG,M N,MW,MX,NO,NZ,PL,PT,RO,RU ,SD,SE,SG,SI,SK,TJ,TM,TT, UA,UG,US,UZ,VN

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1.植物性タンパク質源中のタンパク質を可溶化するための方法であって、次 の工程: (a)有効量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を用いて植物性タンパク質源 を処理し;次いで (b)有効量の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用いて植物性タンパク 質源を処理することを含んでなる、前記方法。 2.工程(a)および工程(b)を同時に行なう、請求の範囲第1項記載の方 法。 3.更に(c)有効量の1種又はそれ以上の脂肪分解酵素(EC3.1.1.3 )および1種又はそれ以上のグリコシダーゼ酵素(EC3.2)を用いて植物性タ ンパク質源を処理する工程を含んでなる、請求の範囲第1又は2項記載の方法。 4.グルコシダーゼ酵素が、アミラーゼ特にα−アミラーゼもしくはβ−アミ ラーゼ、セルラーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1. 4)又はエンド−1,3−β−グルカナーゼ(3.2.1.6)、キシラナーゼ 、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.8)又はキシラン− エンド−1,3−β−キシロシダーゼ(EC3.2.1.32)、α−ガラクトシダ ーゼ(EC3.2.1.22)、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セル ロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、エンドグルカナ ーゼ、特にエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド− 1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3−β−グルカ ナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2 .1.59)である、請求の範囲第3項記載の方法。 5.グルコシダーゼ酵素が、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セ ルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、又はエンドグ ルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75 )、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3 −β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナー ゼ(EC3.2.1.59)である、請求の範囲第3項記載の方法。 6.工程(a),(b)および(c)を同時に行なう、請求の範囲第3〜5項 のいずれか1項に記載の方法。 7.工程(a)のフィターゼが、植物フィターゼ、菌類フィターゼ、細菌フィ ターゼ又は酵母により生産可能なフィターゼである、請求の範囲第1〜6項のい ずれか1項に記載の方法。 8.菌類フィターゼが、アスペルギルス(Aspergillus)菌株、好ましくはアス ペルギルス ニガー(Aspergillus niger)菌株、アスペルギルス フィクム(Asp ergillus ficuum)菌株、アスペルギルス アワモリ(Aspergillus awamori)菌株 、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株、アスペルギルス テレ ウス(Aspergillus terreus)菌株、又はアスペルギルス ニドランス(Aspergill us nidulans)菌株から由来する、請求の範囲第7項記載の方法。 9.細菌フィターゼが、バシラス(Bacillus)菌株又はシュードモナス(Pseud omonas)菌株、好ましくはバシラス スブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由 来する、請求の範囲第7項記載の方法。 10.フィターゼが属クルベロマイセス(Kluveromyces)又はサッカロマイセス (Saccharomyces)の酵母、好ましくはサッカロマイセス セレビシエ(Saccharom yces cerevisiae)菌株から由来する、 請求の範囲第7項記載の方法。 11.植物性タンパク質源を、1kgのタンパク質源当たり約2〜約50000フィタ ーゼ単位(FYT)、好ましくは1kgのタンパク質源当たり約50〜約30000FYT、最も 好ましくは1kgのタンパク質源当たり約100〜約10000FYTの量で工程(a)のフ ィターゼを用いて処理する、請求の範囲第1〜10項のいずれか1項に記載の方法 。 12.工程(b)のタンパク質分解酵素が、微生物プロテアーゼ、菌類プロテア ーゼ、又はペプシンもしくはトリプシンである、請求の範囲第1〜11項のいずれ か1項に記載の方法。 13.微生物プロテアーゼが、バシラス(Bacillus)菌株、好ましくはバシラス リケニホルミス(Bacillus licheniformis)菌株、および/又はバシラス ス ブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由来する、請求の範囲第12項記載の方法 。 14.菌類プロテアーゼが、アスペルギルス菌株、好ましくはアスペルギルス アクレタス(Aspergillus aculeatus)菌株、アスペルギルス ニガー(Aspergillu s niger)菌株、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株から由来す る、請求の範囲第12項に記載の方法。 15.1kgのタンパク質源当たり約0.0001〜約0.5AU、好ましくは1kgのタンパ ク質源当たり約0.001〜約0.05AU、より好ましくは1kgのタンパク質当たり約0.0 05〜約0.03AUの量で工程(b)の1種又はそれ以上のタンパク質分解酵素を用い て植物性タンパク質源を処理する、請求の範囲第1〜14項のいずれか1項に記載 の方法。 16.植物性タンパク質源が、マメ科植物、キク科植物、十字花科植物、又は穀 物植物又はそれらの混合物である、請求の範囲第1〜15項のいずれか1項に記載 の方法。 17.植物性タンパク質源が大豆である、請求の範囲第1〜15項のい ずれか1項に記載の方法。 18.酵素処理を、3〜9のpH、好ましくは4〜7のpHで行なう、請求の範囲第 1〜17項のいずれか1項に記載の方法。 19.酵素処理を、約10〜約70℃の温度、好ましくは約35℃〜約65℃の温度で行 なう、請求の範囲第1〜18項のいずれか1項に記載の方法。 20.i)植物性タンパク質源を水中に懸濁し; ii)工程1)の水性懸濁液を、フィターゼおよびタンパク質分解酵素を用いて 酵素処理し; (iii)工程ii)の酵素を失活させ;次いで所望により (iv)可溶化タンパク質を水性懸濁液から分離する 工程を含んでなる、請求の範囲第1〜19項のいずれか1項に記載の方法。 21.フィターゼおよびタンパク質分解酵素を含んでなる、動物飼料添加剤。 22.脂肪分解酵素(EC3.1.1.3)およびグリコシダーゼ酵素(EC3.2 )から成る群から選ばれる1種又はそれ以上の追加の酵素を含んでなる、請求の 範囲第22項記載の動物飼料添加剤。 23.グルコシダーゼ酵素が、アミラーゼ特にα−アミラーゼもしくはβ−アミ ラーゼ、セルラーゼ、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1. 4)又はエンド−1,3−β−グルカナーゼ(3.2.1.6)、キシラナーゼ 、特にエンド−1,4−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.8)又はキシラン− エンド−1,3−β−キシロシダーゼ(EC3.2.1.32)、α−ガラクトシダ ーゼ(EC3.2.1.22)、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セル ロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、エンドグルカナ ーゼ、特にエンド−1,6−β−グルカ ナーゼ(EC3.2.1.75)、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2. 1.71)、エンド−1,3−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド −1,3−α−グルカナーゼ(EC3.2.1.59)である、請求の範囲第22項記 載の動物飼料添加剤。 24.グルコシダーゼ酵素が、ポリガラクツロナーゼ(EC3.2.1.15)、セ ルロース−1,4−β−セロビオシダーゼ(EC3.2.1.91)、又はエンドグ ルカナーゼ、好ましくはエンド−1,6−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.75 )、エンド−1,2−β−グルカナーゼ(EC3.2.1.71)、エンド−1,3 −β−グルカナーゼ(EC3.2.1.39)又はエンド−1,3−α−グルカナー ゼ(EC3.2.1.59)である、請求の範囲第22項記載の動物飼料添加剤。 25.フィターゼが、植物フィターゼ、菌類フィターゼ、細菌フィターゼ又は酵 母により生産可能なフィターゼである、請求の範囲第21〜24項のいずれか1項に 記載の動物飼料添加剤。 26.菌類フィターゼが、アスペルギルス(Aspergillus)菌株、好ましくはアス ペルギルス ニガー(Aspergillus niger)菌株、アスペルギルス フィクム(Asp ergillus ficuum)菌株、アスペルギルス アワモリ(Aspergillus awamori)菌株 、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株、アスペルギルス テレ ウス(Aspergillus terreus)菌株、又はアスペルギルス ニドランス(Aspergil lus nidulans)菌株から由来する、請求の範囲第25項記載の動物飼料添加剤。 27.細菌フィターゼが、バシラス(Bacillus)菌株又はシュードモナス(Pseud omonas)菌株、好ましくはバシラス スブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由 来する、請求の範囲第25項記載の動物飼料添加剤。 28.フィターゼが、属クルベロマイセス(Kluveromyces)又はサッカロマイセ ス(Saccharomyces)の酵母、好ましくはサッカロマイセス セレビシエ(Sacchar omyces cerevisiae)菌株から由来する、請求の範囲第25項記載の動物飼料添加 剤。 29.組成物1g当たり約200〜約50000フィターゼ単位(FYT)、好ましくは、組 成物1g当たり約500〜約10000FYT、より好ましくは組成物1g当たり約2000〜 約6000FYTに相当する量の1種又はそれ以上のフィターゼ酵素を含んでなる、請 求の範囲第21〜28項のいずれか1項に記載の動物飼料添加剤。 30.タンパク質分解酵素が、微生物プロテアーゼ、菌類プロテアーゼ、又はペ プシンもしくはトリプシンである、請求の範囲第21〜29項のいずれか1項に記載 の動物飼料添加剤。 31.微生物プロテアーゼが、バシラス(Bacillus)菌株、好ましくはバシラス リケニホルミス(Bacillus licheniformis)菌株、および/又はバシラス ス ブチリス(Bacillus subtilis)菌株から由来する、請求の範囲第30項記載の動物 飼料添加剤。 32.菌類プロテアーゼが、アスペルギルス菌株、好ましくはアスペルギルス アクレタス(Aspergillus aculeatus)菌株、アスペルギルス ニガー(Aspergillu s niger)菌株、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)菌株から由来す る、請求の範囲第30項に記載の動物飼料添加剤。 33.組成物1g当たり約0.01〜約20AU(アンソン単位)、好ましくは組成物1 g当たり約0.1〜約10AU、より好ましくは組成物1g当たり約0.2〜約5AUに相当 する量のタンパク質分解酵素を含んでなる、請求の範囲第21〜32項のいずれか1 項に記載の動物飼料添加剤。 34.1種又はそれ以上の酵素が、粉末、無粉塵性粒質物、安定化 液体、スラリー又は保護された酵素の形で提供される、請求の範囲第21〜23項の いずれか1項に記載の動物飼料添加剤。
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