JPH0952822A - 口腔用組成物 - Google Patents
口腔用組成物Info
- Publication number
- JPH0952822A JPH0952822A JP7225685A JP22568595A JPH0952822A JP H0952822 A JPH0952822 A JP H0952822A JP 7225685 A JP7225685 A JP 7225685A JP 22568595 A JP22568595 A JP 22568595A JP H0952822 A JPH0952822 A JP H0952822A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- synthetic peptide
- antibody
- antigen
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 アクチノバチルス・アクチノマイセテム
コミタンスの線毛を構成するアミノ酸配列由来のフラグ
メントに対応する合成ペプチドを抗原とし、これを動物
に免疫することによって得られる抗体を含有してなるこ
とを特徴とする口腔用組成物。 【効果】 本発明の口腔用組成物は、上記抗原を動物に
免疫することによって得られる抗体を配合したことによ
り、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
の口腔内への定着を有効に阻止し、歯周疾患を効果的に
予防あるいは治療することができる。しかも、前記抗体
は特定の抗原に対するものでその安全性も高いものであ
る。
コミタンスの線毛を構成するアミノ酸配列由来のフラグ
メントに対応する合成ペプチドを抗原とし、これを動物
に免疫することによって得られる抗体を含有してなるこ
とを特徴とする口腔用組成物。 【効果】 本発明の口腔用組成物は、上記抗原を動物に
免疫することによって得られる抗体を配合したことによ
り、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
の口腔内への定着を有効に阻止し、歯周疾患を効果的に
予防あるいは治療することができる。しかも、前記抗体
は特定の抗原に対するものでその安全性も高いものであ
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、歯周疾患の原因菌
の一つであるアクチノバチルス・アクチノマイセテムコ
ミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎ
ｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）の口腔内への定着
を抑制し、歯周疾患を予防することができる口腔用組成
物に関する。
の一つであるアクチノバチルス・アクチノマイセテムコ
ミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎ
ｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）の口腔内への定着
を抑制し、歯周疾患を予防することができる口腔用組成
物に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】アクチ
ノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスは若年性歯
周炎の最も有力な原因菌と考えられているが、近年、成
人性歯周炎患者の歯周ポケットからも高頻度で検出、分
離されるようになり、歯周疾患の発症と進展に関与する
細菌としてより一層の注目を集めるようになってきてい
る。
ノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスは若年性歯
周炎の最も有力な原因菌と考えられているが、近年、成
人性歯周炎患者の歯周ポケットからも高頻度で検出、分
離されるようになり、歯周疾患の発症と進展に関与する
細菌としてより一層の注目を集めるようになってきてい
る。
【０００３】歯周疾患の予防には、原因菌の口腔内への
定着を抑制することが有効であり、従来からアクチノバ
チルス・アクチノマイセテムコミタンスの全菌体又は菌
体成分で哺乳動物或いは家禽を免疫して得られる抗体を
口腔用組成物中に配合し、該菌の口腔内への定着を抑制
して口腔疾患を予防することは知られている（特開昭６
０−１４６８３４号公報、特開平２−５３７１６号公
報）。
定着を抑制することが有効であり、従来からアクチノバ
チルス・アクチノマイセテムコミタンスの全菌体又は菌
体成分で哺乳動物或いは家禽を免疫して得られる抗体を
口腔用組成物中に配合し、該菌の口腔内への定着を抑制
して口腔疾患を予防することは知られている（特開昭６
０−１４６８３４号公報、特開平２−５３７１６号公
報）。
【０００４】しかし、一般的に細菌の全菌体又は複数の
蛋白質を含む分画物を抗原とした場合、得られる抗体の
均一性或いは安全性に問題がある。また該菌の特定の蛋
白質を抗原とした場合、抗原の調製に労力を要し、更に
量産性にも問題があり、実用化には程遠いレベルにあ
る。
蛋白質を含む分画物を抗原とした場合、得られる抗体の
均一性或いは安全性に問題がある。また該菌の特定の蛋
白質を抗原とした場合、抗原の調製に労力を要し、更に
量産性にも問題があり、実用化には程遠いレベルにあ
る。
【０００５】本発明は上記事情に鑑みなされたもので、
大量生産が可能な合成ペプチド抗原を用いることで効率
よく得られる均一性の高い抗体を配合することにより、
実用性に優れ、有効性、安全性の共に高い、歯周疾患予
防・治療に有効な口腔用組成物を提供することを目的と
するものである。
大量生産が可能な合成ペプチド抗原を用いることで効率
よく得られる均一性の高い抗体を配合することにより、
実用性に優れ、有効性、安全性の共に高い、歯周疾患予
防・治療に有効な口腔用組成物を提供することを目的と
するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者は、上記要望に応えるため鋭意検討を進めた結
果、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
線毛を構成するアミノ酸配列由来のフラグメントに対応
する合成ペプチド又はこれにポリマーリジンを結合した
ものを抗原として動物（哺乳動物或いは家禽）に免疫し
た場合、得られる血中抗体、乳汁中抗体、卵中抗体がア
クチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの口腔
内定着を顕著に抑制し、従って、これら抗体を口腔用組
成物に配合することにより歯周疾患の効果的な予防・治
療が行えることを知見した。特に、本発明者は、アクチ
ノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの菌体から
得られた線毛蛋白のＮ末端から４１番目までのアミノ酸
配列を解読した結果、そのアミノ酸配列が下記の通りで
あることを見出した。
発明者は、上記要望に応えるため鋭意検討を進めた結
果、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
線毛を構成するアミノ酸配列由来のフラグメントに対応
する合成ペプチド又はこれにポリマーリジンを結合した
ものを抗原として動物（哺乳動物或いは家禽）に免疫し
た場合、得られる血中抗体、乳汁中抗体、卵中抗体がア
クチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの口腔
内定着を顕著に抑制し、従って、これら抗体を口腔用組
成物に配合することにより歯周疾患の効果的な予防・治
療が行えることを知見した。特に、本発明者は、アクチ
ノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの菌体から
得られた線毛蛋白のＮ末端から４１番目までのアミノ酸
配列を解読した結果、そのアミノ酸配列が下記の通りで
あることを見出した。
【０００７】
【配列表１】
【０００８】この場合、上記配列のうち、Ｎ末端から第
１８番目より第３８番目までのアミノ酸配列、即ち下記
のアミノ酸配列のオリゴペプチドが抗原性が強く、かか
るアミノ酸配列の合成ペプチドを抗原として用いること
により、歯周疾患に有効な抗体を得ることができること
を知見し、本発明をなすに至ったものである。 〔アミノ酸配列〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
１８番目より第３８番目までのアミノ酸配列、即ち下記
のアミノ酸配列のオリゴペプチドが抗原性が強く、かか
るアミノ酸配列の合成ペプチドを抗原として用いること
により、歯周疾患に有効な抗体を得ることができること
を知見し、本発明をなすに至ったものである。 〔アミノ酸配列〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
【０００９】以下、本発明につき更に詳しく説明する
と、本発明の口腔用組成物は、アクチノバチルス・アク
チノマイセテムコミタンスの線毛蛋白に由来する合成ペ
プチド、好ましくはこの合成ペプチドをポリマーリジン
と結合したものを抗原とし、これを動物に免疫すること
によって得られる抗体を配合したものである。
と、本発明の口腔用組成物は、アクチノバチルス・アク
チノマイセテムコミタンスの線毛蛋白に由来する合成ペ
プチド、好ましくはこの合成ペプチドをポリマーリジン
と結合したものを抗原とし、これを動物に免疫すること
によって得られる抗体を配合したものである。
【００１０】ここで、合成ペプチドとしては、上記した
〔アミノ酸配列〕を有する合成ペプチドが好適である。
この場合、合成ペプチドは、公知の方法に従い、Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（４３０Ａ，Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔ
ｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて合成することができ
る。
〔アミノ酸配列〕を有する合成ペプチドが好適である。
この場合、合成ペプチドは、公知の方法に従い、Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（４３０Ａ，Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔ
ｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて合成することができ
る。
【００１１】また、上記合成ペプチドの抗原性を高める
ためにポリマーリジンと結合させる方法は、Ｎａｒｄｅ
ｌｌｉ等のポリマーリジン法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
１４８，９１２−９２０，１９９２）により行うことが
できる。
ためにポリマーリジンと結合させる方法は、Ｎａｒｄｅ
ｌｌｉ等のポリマーリジン法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
１４８，９１２−９２０，１９９２）により行うことが
できる。
【００１２】上記抗原を動物に免疫する方法としては、
皮下注射、筋肉注射、口腔内注射、静脈注射、経鼻投
与、経口投与、経口腔粘膜投与などの公知の方法を採用
できる。また、抗体力価を上げるために、フロイントの
コンプリートアジュバント、インコンプリートアジュバ
ント、コレラトキシンＢサブユニットなどのアジュバン
トと共に免疫する方法も適宜利用できる。免疫される動
物としては、ウサギ，ヤギ，ヒツジ，ウシ，ウマ等の哺
乳動物やニワトリ，カモ，ダチョウ，アヒル，ウズラ等
の家禽類が挙げられる。
皮下注射、筋肉注射、口腔内注射、静脈注射、経鼻投
与、経口投与、経口腔粘膜投与などの公知の方法を採用
できる。また、抗体力価を上げるために、フロイントの
コンプリートアジュバント、インコンプリートアジュバ
ント、コレラトキシンＢサブユニットなどのアジュバン
トと共に免疫する方法も適宜利用できる。免疫される動
物としては、ウサギ，ヤギ，ヒツジ，ウシ，ウマ等の哺
乳動物やニワトリ，カモ，ダチョウ，アヒル，ウズラ等
の家禽類が挙げられる。
【００１３】本発明の口腔用組成物は、このようにして
得られる血中抗体又は乳汁中抗体、或いは家禽に免疫す
ることによって得られる卵中抗体を含有してなるもので
あるが、これにはかかる抗体を含有する抗血清、乳汁、
卵をそのまま配合してもよく、又は通常の精製法に従
い、血清、乳汁、卵から分離した精製抗体を配合するよ
うにしてもよい。ここで、抗体精製法としては、塩析
法、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー、アフ
ィニティクロマトグラフィーなどを用いることができ
る。
得られる血中抗体又は乳汁中抗体、或いは家禽に免疫す
ることによって得られる卵中抗体を含有してなるもので
あるが、これにはかかる抗体を含有する抗血清、乳汁、
卵をそのまま配合してもよく、又は通常の精製法に従
い、血清、乳汁、卵から分離した精製抗体を配合するよ
うにしてもよい。ここで、抗体精製法としては、塩析
法、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー、アフ
ィニティクロマトグラフィーなどを用いることができ
る。
【００１４】上記抗体の投与量は０．０００１〜５０ｇ
／ｋｇ／日とすることが好ましく、この場合抗体は組成
物全体の０．０００２〜１０％（重量％、以下同じ）、
特に０．００２〜５％の配合量とすることが好ましい。
／ｋｇ／日とすることが好ましく、この場合抗体は組成
物全体の０．０００２〜１０％（重量％、以下同じ）、
特に０．００２〜５％の配合量とすることが好ましい。
【００１５】本発明の口腔用組成物は、練歯磨、粉歯
磨、液状歯磨等の歯磨類、マウスウオッシュ等の液状清
涼剤、トローチ、口腔用パスタ、歯肉用マッサージクリ
ーム、うがい用溶液、チューインガム、キャンデー、乳
製品などとして用いられるものであり、本発明の口腔用
組成物のその他の成分としては、口腔用組成物の種類等
に応じた適宜な成分が用いられる。
磨、液状歯磨等の歯磨類、マウスウオッシュ等の液状清
涼剤、トローチ、口腔用パスタ、歯肉用マッサージクリ
ーム、うがい用溶液、チューインガム、キャンデー、乳
製品などとして用いられるものであり、本発明の口腔用
組成物のその他の成分としては、口腔用組成物の種類等
に応じた適宜な成分が用いられる。
【００１６】例えば練歯磨の場合であれば、第２リン酸
カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、
不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、結晶質シ
リカ、アルミノシリケート、酸化アルミニウム、水酸化
アルミニウム、レジン等の研磨剤、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸
塩、カラゲナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール
等の粘結剤、ポリエチレングリコール、ソルビトール、
グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤、ラウリ
ル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリド、モノ
硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−
ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタ
ミン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等の発泡剤、それにペ
パーミント、スペアミント等の精油、ｌ−メントール、
カルボン、オイゲノール、アネトール等の香料素材など
の香料、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ネオ
ヘスペリジルジヒドロカルコン、グリチルリチン、ペリ
ラルチン、ｐ−メトキシシンナミックアルデヒドなどの
甘味剤、防腐剤などの成分を水と混和し、常法に従って
製造する。また、マウスウオッシュ等の口腔洗浄剤その
他においても、製品の性状に応じた成分が適宜配合され
る。
カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、
不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、結晶質シ
リカ、アルミノシリケート、酸化アルミニウム、水酸化
アルミニウム、レジン等の研磨剤、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸
塩、カラゲナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール
等の粘結剤、ポリエチレングリコール、ソルビトール、
グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤、ラウリ
ル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリド、モノ
硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−
ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタ
ミン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等の発泡剤、それにペ
パーミント、スペアミント等の精油、ｌ−メントール、
カルボン、オイゲノール、アネトール等の香料素材など
の香料、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ネオ
ヘスペリジルジヒドロカルコン、グリチルリチン、ペリ
ラルチン、ｐ−メトキシシンナミックアルデヒドなどの
甘味剤、防腐剤などの成分を水と混和し、常法に従って
製造する。また、マウスウオッシュ等の口腔洗浄剤その
他においても、製品の性状に応じた成分が適宜配合され
る。
【００１７】なお、本発明においては、デキストラナー
ゼ、ムタナーゼ、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ヒノ
キチオール、セチルピリジニウムクロライド、アルキル
グリシン、アルキルジアミノエチルグリシン塩、アラン
トイン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アズ
レン、ビタミンＥ、水溶性第一もしくは第二リン酸塩、
第四級アンモニウム化合物、塩化ナトリウム、生薬抽出
物などの有効成分を配合することもできる。
ゼ、ムタナーゼ、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ヒノ
キチオール、セチルピリジニウムクロライド、アルキル
グリシン、アルキルジアミノエチルグリシン塩、アラン
トイン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アズ
レン、ビタミンＥ、水溶性第一もしくは第二リン酸塩、
第四級アンモニウム化合物、塩化ナトリウム、生薬抽出
物などの有効成分を配合することもできる。
【００１８】
【発明の効果】本発明の口腔用組成物は、上記抗原を動
物に免疫することによって得られる抗体を配合したこと
により、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタ
ンスの口腔内への定着を有効に阻止し、歯周疾患を効果
的に予防あるいは治療することができる。しかも、前記
抗体は特定の抗原に対するものでその安全性も高いもの
である。
物に免疫することによって得られる抗体を配合したこと
により、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタ
ンスの口腔内への定着を有効に阻止し、歯周疾患を効果
的に予防あるいは治療することができる。しかも、前記
抗体は特定の抗原に対するものでその安全性も高いもの
である。
【００１９】
【実施例】以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではな
い。
するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではな
い。
【００２０】〔実験例〕 （１）抗原の調製 アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス３１
０−ａ株をトッド・ヘビット培地を用いてＣＯ2条件下
で３７℃において７２時間培養した。次に、井上等の方
法（ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，６
９，１３−１７，１９９０）によって線毛抗原を調製し
た。ガラス壁に付着している生育細菌をポリスマンによ
って掻き取り、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ，ｐＨ
７．２）に懸濁させ、１２，０００×ｇで遠心分離し
た。集めた細菌を０．１５Ｍエタノールアミン−塩酸緩
衝液（ｐＨ１０．５）に懸濁し、ブレンダーで氷上にお
いて３０分ホモナイズした。１０，０００×ｇで２０
分、次いで２５，０００×ｇで３０分遠心分離して細菌
破片を除去し、上澄液に飽和硫酸アンモニウム溶液を４
℃で最終濃度が１０％に達するまで滴下した。沈澱（粗
線毛）をエタノールアミン−塩酸緩衝液に再度懸濁し、
２５，０００×ｇで遠心して細胞膜に付着している成分
を除去した。この上澄塩析操作を同条件で繰り返した。
沈澱をデオキシコール酸ナトリウム５％を含む２０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．２）に溶解し、ローリング
スターラー中で室温において３０分ホモナイズした。１
０，０００×ｇ，３０分の遠心で沈澱の不溶解分を除去
した。０．７％ｎ−オクチル−β−グルコピラノサイド
を含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液を用いて同様の操作を
繰り返し、最後に沈澱をトリス塩酸緩衝液に懸濁した。
この懸濁液を線毛調製物として使用した。調製した線毛
は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより１本鎖であることを確認し
た。
０−ａ株をトッド・ヘビット培地を用いてＣＯ2条件下
で３７℃において７２時間培養した。次に、井上等の方
法（ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，６
９，１３−１７，１９９０）によって線毛抗原を調製し
た。ガラス壁に付着している生育細菌をポリスマンによ
って掻き取り、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ，ｐＨ
７．２）に懸濁させ、１２，０００×ｇで遠心分離し
た。集めた細菌を０．１５Ｍエタノールアミン−塩酸緩
衝液（ｐＨ１０．５）に懸濁し、ブレンダーで氷上にお
いて３０分ホモナイズした。１０，０００×ｇで２０
分、次いで２５，０００×ｇで３０分遠心分離して細菌
破片を除去し、上澄液に飽和硫酸アンモニウム溶液を４
℃で最終濃度が１０％に達するまで滴下した。沈澱（粗
線毛）をエタノールアミン−塩酸緩衝液に再度懸濁し、
２５，０００×ｇで遠心して細胞膜に付着している成分
を除去した。この上澄塩析操作を同条件で繰り返した。
沈澱をデオキシコール酸ナトリウム５％を含む２０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．２）に溶解し、ローリング
スターラー中で室温において３０分ホモナイズした。１
０，０００×ｇ，３０分の遠心で沈澱の不溶解分を除去
した。０．７％ｎ−オクチル−β−グルコピラノサイド
を含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液を用いて同様の操作を
繰り返し、最後に沈澱をトリス塩酸緩衝液に懸濁した。
この懸濁液を線毛調製物として使用した。調製した線毛
は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより１本鎖であることを確認し
た。
【００２１】線毛調製物からトリス塩酸緩衝液を濾過及
び凍結乾燥によって除去した後、精製線毛をプロティン
シーケンサー（ＰＳＱ−１０、島津製作所）に供した。
Ｎ末端から第４１番目までのアミノ酸配列をヘウィック
等によって改良されたエドマン反応（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．，２５６，７９９０−７９９７，１９８１）に
よって解読された結果は下記の通りであった。なお、上
記線毛の分子量は約５４，０００であった。
び凍結乾燥によって除去した後、精製線毛をプロティン
シーケンサー（ＰＳＱ−１０、島津製作所）に供した。
Ｎ末端から第４１番目までのアミノ酸配列をヘウィック
等によって改良されたエドマン反応（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．，２５６，７９９０−７９９７，１９８１）に
よって解読された結果は下記の通りであった。なお、上
記線毛の分子量は約５４，０００であった。
【００２２】
【配列表２】
【００２３】次に、上記アミノ酸配列をもとに数種のオ
リゴペプチドをＰｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ
ｒ（４３０Ａ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて
合成した。それらの抗原性について検討した結果、下記
の配列に強い抗原性が認められた。 〔アミノ酸配列〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
リゴペプチドをＰｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ
ｒ（４３０Ａ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて
合成した。それらの抗原性について検討した結果、下記
の配列に強い抗原性が認められた。 〔アミノ酸配列〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
【００２４】また、抗原性を高める目的でこのアミノ酸
配列を有する合成ペプチドの分子量をＮａｒｄｅｌｌｉ
等によるポリマーリジン法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
４８，９１２−９２０，１９９２）によって増大した。
分岐リジンポリマー樹脂を脱保護試薬で処理して樹脂を
除去した。増大ポリペプチドを２Ｎ酢酸ナトリウムで抽
出し、蒸留水で透析し、凍結乾燥した。
配列を有する合成ペプチドの分子量をＮａｒｄｅｌｌｉ
等によるポリマーリジン法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
４８，９１２−９２０，１９９２）によって増大した。
分岐リジンポリマー樹脂を脱保護試薬で処理して樹脂を
除去した。増大ポリペプチドを２Ｎ酢酸ナトリウムで抽
出し、蒸留水で透析し、凍結乾燥した。
【００２５】（２）抗体の調製 抗体の調製は、通常行われれている免疫方法に準じて行
った。初回免疫は、リジン結合オリゴペプチド５０ｍｇ
をフロイントインコンプリートアジュバントと共にニュ
ージーランド産白兎（雄）に皮下注射した。初回免疫か
ら２週間後、３週間後に同抗原を皮下注射し、最終免疫
は抗原をリン酸緩衝液に懸濁して耳静脈注射により行
い、その後常法に従って抗体を調製した（以下、これを
合成ペプチド抗体という）。
った。初回免疫は、リジン結合オリゴペプチド５０ｍｇ
をフロイントインコンプリートアジュバントと共にニュ
ージーランド産白兎（雄）に皮下注射した。初回免疫か
ら２週間後、３週間後に同抗原を皮下注射し、最終免疫
は抗原をリン酸緩衝液に懸濁して耳静脈注射により行
い、その後常法に従って抗体を調製した（以下、これを
合成ペプチド抗体という）。
【００２６】得られた抗体は、アクチノバチルス・アク
チノマイセテムコミタンス３１０−ａ株の線毛だけでな
く、他の供試菌株、即ち歯周病患者から採取したＡＳ９
００１７株、ＡＳ９００７０７株、ＡＳ９００３２２
株、Ｋｍ−１株の線毛と反応することを確認した。
チノマイセテムコミタンス３１０−ａ株の線毛だけでな
く、他の供試菌株、即ち歯周病患者から採取したＡＳ９
００１７株、ＡＳ９００７０７株、ＡＳ９００３２２
株、Ｋｍ−１株の線毛と反応することを確認した。
【００２７】（３）家兎血清抗体によるアクチノバチル
ス・アクチノマイセテムコミタンスのヒト頬粘膜上皮へ
の付着阻止効果 実験はＧｉｂｂｏｎｓ等の方法に準じて行った。即ち、
ヒト頬粘膜細胞を採取し、リン酸緩衝液に懸濁し、１４
μｍのミリポアーで処理後、目的とする細胞を得た。最
終的にリン酸緩衝液１ｍｌ中に細胞数が１０5になるよ
うに調製した（Ａ液）。一方、希釈合成ペプチド抗体又
はコントロール血清含有のリン酸緩衝液１ｍｌ中にアク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス３１０−
ａ株が１０8になるように調製した（Ｂ液）。
ス・アクチノマイセテムコミタンスのヒト頬粘膜上皮へ
の付着阻止効果 実験はＧｉｂｂｏｎｓ等の方法に準じて行った。即ち、
ヒト頬粘膜細胞を採取し、リン酸緩衝液に懸濁し、１４
μｍのミリポアーで処理後、目的とする細胞を得た。最
終的にリン酸緩衝液１ｍｌ中に細胞数が１０5になるよ
うに調製した（Ａ液）。一方、希釈合成ペプチド抗体又
はコントロール血清含有のリン酸緩衝液１ｍｌ中にアク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス３１０−
ａ株が１０8になるように調製した（Ｂ液）。
【００２８】Ａ液とＢ液を混合し、３７℃で３０分間反
応させた。頬粘膜細胞に付着した細菌数を２％クリスタ
ルバイオレットで染色後、顕微鏡でカウントした。結果
を図１に示す。
応させた。頬粘膜細胞に付着した細菌数を２％クリスタ
ルバイオレットで染色後、顕微鏡でカウントした。結果
を図１に示す。
【００２９】この結果より、抗体を１００倍に希釈して
もコントロール血清と比較してアクチノバチルス・アク
チノマイセテムコミタンスの頬粘膜細胞への付着を約８
５％抑制することが認められた。
もコントロール血清と比較してアクチノバチルス・アク
チノマイセテムコミタンスの頬粘膜細胞への付着を約８
５％抑制することが認められた。
【００３０】（４）家兎血清抗体によるアクチノバチル
ス・アクチノマイセテムコミタンスの唾液処理ハイドロ
キシアパタイトビーズへの付着阻止効果 唾液処理ハイドロキシアパタイトビーズ（以下、Ｓ−Ｈ
Ａという）の調製は、Ｃｌａｒｋ等の方法（Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９，８４６−８５３，１９７８）に
準じて行った。即ち、遠心（１２，０００×ｇ，１５分
間）上清後の混合唾液を６０℃で１時間処理して酸素を
不活化した。その後遠心分離（３，０００×ｇ，５分
間）して、上清（実験唾液）を得た。５ｍｇのハイドロ
キシアパタイトビーズに１０ｍｌの唾液を加え、室温で
２４時間インキュベーションしてＳ−ＨＡを得た。アク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスは、放射
線物質，トリチウムチミジンで標識し、最終的に牛血清
アルブミンを含有するＫＣｌ緩衝液（５ｍｇ／ｍｌ）で
２×１０8／ｍｌになるように調製した。
ス・アクチノマイセテムコミタンスの唾液処理ハイドロ
キシアパタイトビーズへの付着阻止効果 唾液処理ハイドロキシアパタイトビーズ（以下、Ｓ−Ｈ
Ａという）の調製は、Ｃｌａｒｋ等の方法（Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９，８４６−８５３，１９７８）に
準じて行った。即ち、遠心（１２，０００×ｇ，１５分
間）上清後の混合唾液を６０℃で１時間処理して酸素を
不活化した。その後遠心分離（３，０００×ｇ，５分
間）して、上清（実験唾液）を得た。５ｍｇのハイドロ
キシアパタイトビーズに１０ｍｌの唾液を加え、室温で
２４時間インキュベーションしてＳ−ＨＡを得た。アク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスは、放射
線物質，トリチウムチミジンで標識し、最終的に牛血清
アルブミンを含有するＫＣｌ緩衝液（５ｍｇ／ｍｌ）で
２×１０8／ｍｌになるように調製した。
【００３１】付着阻止実験は、Ｓ−ＨＡと放射性標識し
たアクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス及
び合成ペプチド抗体を３７℃，１時間インキュベーショ
ンした後、Ｓ−ＨＡに付着した細菌をシンチュレーショ
ンカウンターで測定することによって行った。結果を図
２に示す。
たアクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス及
び合成ペプチド抗体を３７℃，１時間インキュベーショ
ンした後、Ｓ−ＨＡに付着した細菌をシンチュレーショ
ンカウンターで測定することによって行った。結果を図
２に示す。
【００３２】図２の結果から、合成ペプチド抗体はコン
トロール血清と比較してアクチノバチルス・アクチノマ
イセテムコミタンスのＳ−ＨＡへの付着を特異的にかつ
濃度依存的に阻止することが認められた。
トロール血清と比較してアクチノバチルス・アクチノマ
イセテムコミタンスのＳ−ＨＡへの付着を特異的にかつ
濃度依存的に阻止することが認められた。
【００３３】次に、実施例を示す。なお、下記例におい
て、抗体、抗血清の調製で合成ペプチドとしては上記
（１）の〔アミノ酸配列〕を有するものを使用し、各種
動物に上記（２）と同様にして常法に従って免疫、調製
したものを用いた。また、下記例で％は重量％を示す。
て、抗体、抗血清の調製で合成ペプチドとしては上記
（１）の〔アミノ酸配列〕を有するものを使用し、各種
動物に上記（２）と同様にして常法に従って免疫、調製
したものを用いた。また、下記例で％は重量％を示す。
【００３４】 〔実施例１〕練歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 ５０．０％ グリセリン ２０．０ カルボキシメチルセルロース １．０ ソジウムラウリルサルフェート １．５ ソジウムラウロイルザルコシネート ０．５ 香料 １．０ サッカリン ０．１ デキストラナーゼ ０．０１ 馬抗合成ペプチド血清 ０．１水 残 計 １００．０％
【００３５】 〔実施例２〕練歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 ４７．０％ ソルビット １０．０ グリセリン １０．０ カルボキシメチルセルロース １．０ ソジウムラウリルサルフェート ２．０ 香料 １．０ サッカリン ０．１ エタノール ２．０ クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．０１ ムタナーゼ ０．１ 鶏卵抗合成ペプチド抗体 ０．１水 残 計 １００．０％
【００３６】 〔実施例３〕練歯磨 炭酸カルシウム ４６．０％ グリセリン ２０．０ カラゲナン ０．５ カルボキシメチルセルロース １．０ ラウリルジエタノールアマイド １．０ ショ糖モノラウレート ２．０ 香料 １．０ トラネキサム酸 ０．０５ サッカリン ０．１ 牛抗合成ペプチド母乳 ０．０５水 残 計 １００．０％
【００３７】 〔実施例４〕練歯磨 水酸化アルミニウム ５０．０％ グリセリン ２０．０ カルボキシメチルセルロース ２．０ ソジウムラウリルサルフェート ２．０ 香料 １．０ サッカリン ０．１ 山羊抗合成ペプチド血清 ０．１水 残 計 １００．０％
【００３８】 〔実施例５〕粉歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 ５０．０％ 炭酸カルシウム ３０．０ グリセリン １０．０ α−オレフィンスルフォネート １．０ 香料 １．０ サッカリン ０．１ デキストラン ０．５ 兎抗合成ペプチド血清 ０．０５水 残 計 １００．０％
【００３９】 〔実施例６〕液状歯磨 ポリアクリル酸ナトリウム ５０．０％ グリセリン ３０．０ 香料 ０．９ サッカリン ０．１ エタノール ３．０ 塩化セチルピリジニウム ０．０５ リノール酸 ０．０５ 山羊抗合成ペプチド母乳 ０．０１水 残 計 １００．０％
【００４０】 〔実施例７〕マウスウオッシュ エタノール ２０．０％ 香料 １．０ サッカリン ０．０５ ラウリルジエタノールアマイド ０．３ 山羊抗合成ペプチド血清 ０．１水 残 計 １００．０％
【００４１】 〔実施例８〕うがい用錠剤 炭酸水素ナトリウム ５４．０％ 第２リン酸ナトリウム １０．０ ポリエチレングリコール ３．０ クエン酸 １７．０ 硫酸ナトリウム（無水） １３．６ 香料 ２．０ クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．０５ オレイン酸 ０．１ 兎抗合成ペプチド血清 ０．１水 残 計 １００．０％
【００４２】 〔実施例９〕歯肉マッサージクリーム 白色ワセリン ８．０％ プロピレングリコール ４．０ ステアリルアルコール ８．０ ポリエチレングリコール４０００ ２５．０ ポリエチレングリコール４００ ３７．０ 酢酸トコフェロール ０．１ ショ糖ステアリン酸エステル ０．５ 牛抗合成ペプチド血清 ０．５水 残 計 １００．０％
【００４３】 〔実施例１０〕チューインガム ガムベース ４３．８５％ 炭酸カルシウム ２．０ 水アメ １５．０ 砂糖 ３０．０ ショ糖パルミテート １．０ フルクトース ４．０ マルトース １．０ 香料 １．０ 鶏卵抗合成ペプチド抗体 ０．１ 計 １００．０％
【００４４】 〔実施例１１〕トローチ アラビアゴム ６．０％ ブドウ糖 ７２．０ ゼラチン ３．０ 香料 ０．２ ｌ−メントール ０．１ スペアミント油 ０．１ アスコルビン酸ナトリウム ０．１ 山羊抗合成ペプチド−カゼイン母乳 ０．０５水 残 計 １００．０％
【００４５】 〔実施例１２〕口腔用パスタ ポリオキシエチレンモノステアレート ２．０％ ソルビタンモノオレエート ２．０ セチルアルコール ２．０ パルミチルアルコール ３．０ プロピレングリコール １５．０ カルボキシメチルセルロース ５．０ ゼラチン １．０ サッカリン ０．２ ペハーミント油 ０．５ スペアミント油 ０．５ 馬抗合成ペプチド血清 ０．０５ 塩化リゾチーム ５０００単位／ｇ 水 残 計 １００．０％
【００４６】 〔実施例１３〕口腔用パスタ グリセリルモノラウレート ３．０％ オレイルアルコール ５．０ ポリエチレングリコール １５．０ 白色ワセリン ３．０ Ｎ−パルミトイルグルタミン酸モノナトリウム ０．５ ヒドロキシエチルセルロース ５．０ 酢酸トコフェロール ０．１ サッカリンナトリウム ０．２ 和ハッカ油 ０．７ カルボン ０．５ アネトール ０．３ オイゲノール ０．１ 鶏卵抗合成ペプチド−卵白アルブミン抗体 ０．０５水 残 計 １００．０％
【００４７】 〔実施例１４〕アイスクリーム クリーム（脂肪率５０％） １６．８４％ 牛乳（脂肪率３．７％）＊ ４２．６５ 無糖脱脂練乳 ２４．２４ 砂糖 １１．２５ コーンシロップ ４．６５安定剤 ０．３５ 計 １００．０％ ＊牛抗合成ペプチド母乳０．５％を含有
【００４８】 〔実施例１５〕ヨーグルト 脱脂乳 ３２０ｋｇ 加糖練乳＊＊ ５６ 砂糖 ２３ 以上の成分を常法により発酵する。 ＊＊牛抗合成ペプチド母乳１０％を含有
【００４９】 〔実施例１６〕ババロア生地 牛乳＊＊＊ ３７５ｃｃ 砂糖 ６０ｇ バニラのサヤ １本 卵黄 ５個 ゼラチン ２０ｇ 生クリーム ７５ｃｃ ＊＊＊牛抗合成ペプチド母乳５％を含有
【図１】合成ペプチド抗体希釈倍率と付着細菌数との関
係を示すグラフである。
係を示すグラフである。
【図２】合成ペプチド抗体希釈倍率と細菌付着阻止率と
の関係を示すグラフである。
の関係を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ Ｒ Ｃ０７Ｋ 14/195 ＺＮＡ 8517−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 14/195 ＺＮＡ
Claims (3)
- 【請求項１】 アクチノバチルス・アクチノマイセテム
コミタンスの線毛を構成するアミノ酸配列由来のフラグ
メントに対応する合成ペプチドを抗原とし、これを動物
に免疫することによって得られる抗体を含有してなるこ
とを特徴とする口腔用組成物。 - 【請求項２】 上記合成ペプチドをポリマーリジンと結
合したものを抗原とした請求項１記載の口腔用組成物。 - 【請求項３】 上記合成ペプチドが下記アミノ酸配列を
有するものである請求項１又は２記載の口腔用組成物。 〔アミノ酸配列〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7225685A JPH0952822A (ja) | 1995-08-10 | 1995-08-10 | 口腔用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7225685A JPH0952822A (ja) | 1995-08-10 | 1995-08-10 | 口腔用組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0952822A true JPH0952822A (ja) | 1997-02-25 |
Family
ID=16833193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7225685A Pending JPH0952822A (ja) | 1995-08-10 | 1995-08-10 | 口腔用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0952822A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6537550B1 (en) * | 1997-03-20 | 2003-03-25 | Immun System I.M.S. Ab | Use of avian antibodies |
-
1995
- 1995-08-10 JP JP7225685A patent/JPH0952822A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6537550B1 (en) * | 1997-03-20 | 2003-03-25 | Immun System I.M.S. Ab | Use of avian antibodies |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4689221A (en) | Oral composition containing antibodies to Bacteroides gingivalis | |
| US4693888A (en) | Caries-preventive composition | |
| GB2167299A (en) | Dental caries-preventive composition | |
| US4714612A (en) | Composition for oral application | |
| US6962706B1 (en) | Synthetic peptides containing protective epitopes for the treatment and prevention of periodontitis associated with porphyromonas gingivalis | |
| CA2407603C (en) | Porphyromonas gingivalis recombinant proteins and truncations | |
| US4911918A (en) | Oral composition containing stabilized antibody | |
| US5759544A (en) | Antibody-containing oral composition for suppression of periodontal disease | |
| CA2550581C (en) | Antimicrobial composition comprising a peptide derived from k-casein and a divalent cation | |
| JPH0253716A (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPS61112029A (ja) | う蝕予防剤 | |
| JPH0421648B2 (ja) | ||
| JPH0952822A (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPS62417A (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPH0798738B2 (ja) | 口腔用組成物 | |
| JP4982629B2 (ja) | 抗体、及び抗体を含む抗歯周病組成物 | |
| JP2666212B2 (ja) | 抗体およびそれを有効成分とする齲蝕予防剤の製造方法 | |
| JPH0640871A (ja) | 口腔用組成物 | |
| JP3114929B2 (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPH0768110B2 (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPH0640869A (ja) | 口腔用組成物 | |
| JPH0641426B2 (ja) | う蝕予防剤 | |
| JPH05268980A (ja) | 抗体の製造法および抗体配合う蝕予防剤 | |
| JPH0640870A (ja) | 口腔用組成物 | |
| AU2001252042B2 (en) | Porphyromonas gingivalis recombinant proteins and truncations |