JPH0640871A

JPH0640871A - 口腔用組成物

Info

Publication number: JPH0640871A
Application number: JP21715692A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiro Harada; 慶宏原田
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1992-07-23
Filing date: 1992-07-23
Publication date: 1994-02-15

Abstract

(57)【要約】【目的】歯周疾患原因菌の口腔内への定着を有効に阻
止し、歯周疾患を効果的に予防、治療することができる
口腔用組成物。【構成】歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖を抗原と
して動物に免疫することによって得られる抗体を配合す
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、歯周疾患原因菌の口腔
内への定着を抑制し、歯周疾患を予防あるいは治療する
ことができる口腔用組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】歯周疾
患を予防するには、原因菌の口腔内への定着を阻止し、
増殖を抑えることが有効である。従来、このような観点
より、歯周疾患の原因菌に対する抗体を配合した口腔用
組成物や抗歯周病組成物に関する提案がなされている
（特開昭６０−１４２９１５号公報，特開平１−３１３
４３８号公報）。しかしながら、これらの抗体は、免疫
抗原が全菌体であったり、菌体抽出物のような混合物で
あったりするため、他の菌種との交差反応が否定できな
い。また、実際的な有効性の面でも十分満足し得るもの
ではなかった。

【０００３】このため、歯周疾患原因菌の口腔内への定
着をより有利に抑制し、歯周疾患を効果的に予防し得る
有効成分の開発が望まれていた。

【０００４】

【課題を解決するための手段及び作用】本発明者は、上
記要望に応えるため鋭意検討を進めた結果、歯周疾患原
因菌の菌体表層由来多糖を調製し、これを抗原として動
物（哺乳動物あるいは家禽）に免疫した場合、得られる
血中抗体、乳汁中抗体、卵中抗体が該菌の口腔内への定
着を顕著に抑制し、従って、これら抗体を口腔用組成物
に配合することにより歯周疾患の効果的な予防・治療が
行えることを知見し、本発明をなすに至った。

【０００５】従って、本発明は、歯周疾患原因菌の菌体
表層由来多糖を抗原として動物に免疫することによって
得られる抗体を含有してなる口腔用組成物を提供する。

【０００６】以下、本発明につき更に詳述すると、本発
明の口腔用組成物に配合される抗体を得るために用いら
れる抗原は、歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖であ
る。

【０００７】ここで、歯周疾患原因菌としては、一般的
に歯周疾患と病因論的因果関係が深いと考えられている
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス，ポ
ルフィロモナス・ジンジバリス，プレボテーラ・インタ
ーメディア，フゾバクテリウム・ヌクレアタム，キャプ
ノサイトファガ属菌種，オイケネラ・コローデンス，ボ
リネラ・レクタ，バクテロイデス・フォーサイサス，ト
レポネーマ・デンティコーラなどのスピロヘータ等を用
いることができる。

【０００８】これら歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖
は、周知の方法で調製することができる。例えば培養し
た菌体をオートクレーブ処理する方法、菌体に亜硝酸を
作用させて抽出する方法、菌体からフェノール・水抽出
する方法などが利用できる。

【０００９】上記歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖を
抗原として動物に免疫する方法としては、皮下注射、筋
肉注射、口腔内注射、静脈注射、経鼻投与、経口投与、
経口腔粘膜投与などの方法を採用できる。また、抗体力
価を上げるために、フロイントのコンプリートアジュバ
ント、インコンプリートアジュバント、コレラトキシン
Ｂサブユニットなどのアジュバントと共に免疫する方法
も適宜利用できる。免疫される動物としては、ウサギ，
ヤギ，ヒツジ，ウシ，ウマ等の哺乳動物やニワトリ，カ
モ，ダチョウ，アヒル，ウズラ等の家禽類が挙げられ
る。また、免疫する抗原は上述した抗原の１種を単独で
用いても、あるいは２種以上を組み合わせて使用するこ
とも可能である。

【００１０】本発明の口腔用組成物は、このように歯周
疾患原因菌の菌体表層多糖を抗原とし、これを哺乳動物
に免疫することによって得られる血中抗体又は乳汁中抗
体、あるいは家禽に免疫することによって得られる卵中
抗体を含有してなるものであるが、これにはかかる抗体
を含有する抗血清、乳汁、卵をそのまま配合してもよ
く、又は通常の精製法に従い、血清、乳汁、卵から分離
した精製抗体を配合するようにしてもよい。ここで、抗
体の精製は通常の精製法に従い、血清や乳汁、あるいは
卵から分離することができる。抗体精製法としては、塩
析法、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー、ア
フィニティクロマトグラフィーなどを用いることができ
る。

【００１１】本発明の口腔用組成物においては、前記抗
体の１種を単独で配合してもよく、２種以上を併用して
もよい。また、前記抗体の投与量は０．０００１〜５０
ｇ／ｋｇ／日とすることが好ましく、この場合抗体は組
成物全体の０．０００２〜１０％（重量％、以下同
じ）、特に０．００２〜５％の配合量とすることが好ま
しい。

【００１２】本発明の口腔用組成物は、練歯磨、粉歯
磨、液状歯磨等の歯磨類、マウスウオッシュ等の液状清
涼剤、トローチ、口腔用パスタ、歯肉用マッサージクリ
ーム、うがい用溶液、チューインガム、キャンデー、乳
製品などとして用いられるものであり、本発明の口腔用
組成物のその他の成分としては、口腔用組成物の種類等
に応じた適宜な成分が用いられる。

【００１３】例えば練歯磨の場合であれば、第２リン酸
カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、
不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、結晶質シ
リカ、アルミノシリケート、酸化アルミニウム、水酸化
アルミニウム、レジン等の研磨剤、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸
塩、カラゲナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール
等の粘結剤、ポリエチレングリコール、ソルビトール、
グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤、ラウリ
ル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリド、モノ
硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−
ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタ
ミン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等の発泡剤、それにペ
パーミント、スペアミント等の精油、ｌ−メントール、
カルボン、オイゲノール、アネトール等の香料素材など
の香料、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ネオ
ヘスペリジルジヒドロカルコン、グリチルリチン、ペリ
ラルチン、ｐ−メトキシシンナミックアルデヒドなどの
甘味剤、防腐剤などの成分を水と混和し、常法に従って
製造する。また、マウスウオッシュ等の口腔洗浄剤その
他においても、製品の性状に応じた成分が適宜配合され
る。

【００１４】なお、本発明においては、デキストラナー
ゼ、ムタナーゼ、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ヒノ
キチオール、セチルピリジニウムクロライド、アルキル
グリシン、アルキルジアミノエチルグリシン塩、アラン
トイン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アズ
レン、ビタミンＥ、水溶性第一もしくは第二リン酸塩、
第四級アンモニウム化合物、塩化ナトリウム、生薬抽出
物などの有効成分を配合することもできる。

【００１５】

【発明の効果】本発明の口腔用組成物は、歯周疾患原因
菌の菌体表層由来多糖を抗原として動物に免疫すること
によって得られる抗体を配合したことにより、該原因菌
の口腔内への定着を有効に阻止し、歯周疾患を効果的に
予防あるいは治療することができるものであり、またこ
の抗体は歯周疾患原因菌に対する特異性が高いものであ
る。

【００１６】

〔実験例〕

（１）菌体表層多糖の調製アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスＹ４
菌株を１％酵母エキスを加えたトッドヘビットブロスに
接種し、５％ＣＯ₂を含むインキュベーター中で３７
℃，３日間培養した。集菌後、生理食塩水で３回洗浄し
て生理食塩水に懸濁し、１２１℃，１５分間オートクレ
ーブ処理を行った。冷却後、１０，０００×ｇで２０分
間遠心して上清を分取し、沈渣には再度生理食塩水を加
えて上述の抽出操作を繰り返した。得られた上清を集
め、蒸留水に対して十分透析し、凍結乾燥した。これを
菌体表層多糖とした。

【００１７】また、ポルフィロモナス・ジンジバリス３
８１株をヘミン及びメナジオンを加えたトッドヘビット
ブロスで２日間培養後、集菌し、上記アクチノバチルス
・アクチノマイセテムコミタンスと同様の方法で菌体表
層多糖を調製した。

【００１８】（２）抗体の調製前記調製した多糖抗原を家兎に免疫して抗体を得た。免
疫の方法は通常行われている方法に準じて行った。即
ち、初回免疫は、多糖抗原１ｍｇをフロイントコンプリ
ートアジュバントと共に皮下注射した。その後７日毎に
計４回多糖抗原２ｍｇを耳静脈内に投与した。得られた
抗血清は５０％硫安で２回塩析後、生理食塩水で透析
し、抗体標品とした。

【００１９】（３）抗体の評価（ｉ）菌体表層多糖免疫家兎血清抗体の菌体凝集活性前記のように調製した各種抗体標品の菌体凝集活性を測
定した。アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタ
ンスＹ４株、ポルフィロモナス・ジンジバリス３８１
株、ストレプトコッカス・サンギス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓｓａｎｇｕｉｓ）ＡＴＣＣ１０５５６株、
ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ１３４１
９株をそれぞれ対数増殖期後期まで培養し、集菌後、生
理食塩水で３回洗浄して、濁度がＯＤ_550nm＝１．０と
なるように生理食塩水に懸濁した。一方、各種抗体標品
は、タンパク質濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるように生理食
塩水で調製し、これを菌体凝集活性の検定抗体標品とし
た。各検定抗体標品は、生理食塩水で順次２ⁿ倍希釈し
た。各希釈液に等量の菌体懸濁液を加え、よく撹拌後、
室温で一晩放置し、菌の凝集の有無を観察した。結果を
表１に示す。

【００２０】

【表１】

【００２１】表１の結果から明らかなように、菌体表層
多糖を抗原として免疫して得られた抗体は、口腔内常在
細菌であるストレプトコッカス・サンギス、ストレプト
コッカス・サリバリウス等に対する反応性が低く、特異
性が高い抗体であることが認められた。

【００２２】（ｉｉ）Ｙ４菌体表層多糖免疫家兎血清抗
体によるアクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタ
ンスのハムスター口腔内定着阻止効果３日間培養したアクチノバチルス・アクチノマイセテム
コミタンスＹ４株を１ｍＭリン酸緩衝液に濁度がＯＤ
_550nm＝１．０となるように懸濁し、抗Ｙ４表層多糖抗
体と容量比１：１で混合し、３７℃で３０分間反応させ
た。対照群として抗体液の代わりにリン酸緩衝液と混合
したものを使用した。

【００２３】各郡８匹のハムスターに、上記の各処理菌
液を０．１ｍｌずつ連続５日間接種した。その１週間後
に、滅菌した綿球にて歯肉辺縁部をスワッブし、アクチ
ノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス菌数及び全
菌数を測定した。全菌数に対するアクチノバチルス・ア
クチノマイセテムコミタンスの菌数の比率を求め、アク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの定着率
とした。結果を表２に示す。

【００２４】

【表２】

【００２５】表２の結果から明らかなように、本発明抗
体である抗Ｙ４表層多糖抗体は、対照群に比較してアク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスの口腔内
定着を有意に阻止することが認められた。

【００２６】（ｉｉｉ）３８１菌体表層多糖免疫家兎血
清抗体によるポルフィロモナス・ジンジバリスのハムス
ター口腔内定着阻止効果３日間培養したポルフィロモナス・ジンジバリス３８１
株を１ｍＭリン酸緩衝液に濁度がＯＤ_550nm＝１．０と
なるように懸濁し、抗３８１表層多糖抗体と容量比１：
１で混合し、３７℃で３０分間反応させた。対照群とし
て抗体液の代わりにリン酸緩衝液と混合したものを使用
した。

【００２７】各郡８匹のハムスターの下顎第一臼歯にあ
らかじめ木綿糸を結紮し、上記の各処理液を０．１ｍｌ
ずつ連続５日間接種した。その１週間後に結紮糸を取り
出し、結紮糸中のポルフィロモナス・ジンジバリス菌数
及び全嫌気性菌数を測定した。全嫌気性菌数に対するポ
ルフィロモナス・ジンジバリスの比率を求め、ポルフィ
ロモナス・ジンジバリスの定着率とした。結果を表３に
示す。

【００２８】

【表３】

【００２９】表３の結果から明らかなように、本発明抗
体である抗３８１表層多糖抗体は、対照群に比較してポ
ルフィロモナス・ジンジバリスの口腔内定着を著しく阻
止する効果が認められた。

【００３０】以下、実施例を示す。なお、％はいずれも
重量％を示す。また、Ａ．ａ．はアクチノバチルス・ア
クチノマイセテムコミタンス、Ｐ．ｇ．はポルフィロモ
ナス・ジンジバリス、Ｐ．ｉ．はプレボテーラ・インタ
ーメディア、Ｆ．ｎ．はフゾバクテリウム・ヌクレアタ
ム、Ｗ．ｒ．はボリネラ・レクタ、Ｂ．ｆ．はバクテロ
イデス・フォーサイサス、Ｔ．ｄ．はトレポネーマ・デ
ンティコーラを示す。

【００３１】〔実施例１〕練歯磨第２リン酸カルシウム・２水和物５０．０％グリセリン２０．０カルボキシメチルセルロース１．０ソジウムラウリルサルフェート１．５ソジウムラウロイルザルコシネート０．５香料１．０サッカリン０．１デキストラナーゼ０．０１兎抗Ａ．ａ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００３２】〔実施例２〕練歯磨第２リン酸カルシウム・２水和物４７．０％ソルビット１０．０グリセリン１０．０カルボキシメチルセルロース１．０ソジウムラウリルサルフェート２．０香料１．０サッカリン０．１エタノール２．０クロルヘキシジングルコン酸塩０．０１ムタナーゼ０．１鶏卵抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００３３】〔実施例３〕練歯磨炭酸カルシウム４８．０％グリセリン２０．０カラゲナン０．５カルボキシメチルセルロース１．０ラウリルジエタノールアマイド１．０ショ糖モノラウレート２．０香料１．０トラネキサム酸０．０５サッカリン０．１牛抗Ａ．ａ．菌体表層多糖母乳０．０５水残計１００．０％

【００３４】〔実施例４〕練歯磨水酸化アルミニウム５０．０％グリセリン２０．０カルボキシメチルセルロース２．０ソジウムラウリルサルフェート２．０香料１．０サッカリン０．１山羊抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００３５】〔実施例５〕練歯磨無水ケイ酸３０．０％グリセリン３０．０ソルビット２０．０カルボキシメチルセルロース１．０ソジウムラウリルサルフェート２．０香料１．０サッカリン０．１フッ化ナトリウム０．１エタノール２．０鶏卵抗Ｐ．ｉ．菌体表層多糖抗体０．１水残計１００．０％

【００３６】〔実施例６〕粉歯磨第２リン酸カルシウム・２水和物５０．０％炭酸カルシウム３０．０グリセリン１０．０ α−オレフィンスルフォネート１．０香料１．０サッカリン０．１デキストラン０．５馬抗Ｆ．ｎ．菌体表層多糖血清０．０５水残計１００．０％

【００３７】〔実施例７〕液状歯磨ポリアクリル酸ナトリウム５０．０％グリセリン３０．０香料０．９サッカリン０．１エタノール３．０塩化セチルピリジニウム０．０５リノール酸０．０５山羊抗Ａ．ａ．菌体表層多糖母乳０．１水残計１００．０％

【００３８】〔実施例８〕マウスウオッシュエタノール２０．０％香料１．０サッカリン０．０５ラウリルジエタノールアミイド０．３山羊抗Ｗ．ｒ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００３９】〔実施例９〕うがい用錠剤炭酸水素ナトリウム５４．０％第２リン酸ナトリウム１０．０ポリエチレングリコール３．０クエン酸１７．０硫酸ナトリウム（無水）１３．６香料２．０クロルヘキシジングルコン酸塩０．０５オレイン酸０．１兎抗Ｂ．ｆ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００４０】〔実施例１０〕歯肉マッサージクリーム白色ワセリン８．０％プロピレングリコール４．０ステアリルアルコール８．０ポリエチレングリコール４０００２５．０ポリエチレングリコール４００３７．０酢酸トコフェロール０．１ショ糖ステアリン酸エステル０．５牛抗Ｔ．ｄ．菌体表層多糖血清０．１水残計１００．０％

【００４１】〔実施例１１〕チューインガムガムベース４３．８５％炭酸カルシウム２．０水アメ１５．０砂糖３０．０ショ糖パルミテート１．０フルクトース４．０マルトース１．０香料１．０鶏卵抗Ａ．ａ．菌体表層多糖抗体０．１計１００．０％

【００４２】〔実施例１２〕トローチアラビアゴム６．０％ブドウ糖７２．０ゼラチン３．０香料０．２ｌ−メントール０．１スペアミント油０．１アルコルビン酸ナトリウム０．１山羊抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖母乳０．０５水残計１００．０％

【００４３】〔実施例１３〕口腔用パスタポリオキシエチレンモノステアレート２．０％ソルビタンモノオレエート２．０セチルアルコール２．０パルミチルアルコール３．０プロピレングリコール１５．０カルボキシメチルセルロース５．０ゼラチン１．０サッカリン０．２ペハーミント油０．５スペアミント油０．５馬抗Ａ．ａ．菌体表層多糖血清０．０５塩化リゾチーム５０００単位／ｇ水残計１００．０％

【００４４】〔実施例１４〕口腔用パスタグリセリルモノラウレート３．０％オレイルアルコール５．０ポリエチレングリコール１５．０白色ワセリン３．０Ｎ−パルミトイルグルタミン酸モノナトリウム０．５ヒドロキシエチルセルロース５．０酢酸トコフェロール０．１サッカリンナトリウム０．２和種ハッカ油０．７カルボン０．５アネトール０．３オイゲノール０．１鶏卵抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖抗体０．０５水残計１００．０％

【００４５】〔実施例１５〕アイスクリームクリーム（脂肪率５０％）１６．８４％牛乳（脂肪率３．７％）＊４２．６５無糖脱脂練乳２４．２４砂糖１１．２５コーンシロップ４．６５安定剤０．３５計１００．０％＊牛抗Ａ．ａ．菌体表層多糖母乳５％を含有

【００４６】〔実施例１６〕アイスクリームクリーム（脂肪率４０％）３１．５４％牛乳（脂肪率３．７％）＊＊３７．１６無糖脱脂練乳１５．０８砂糖１１．２５コーンシロップ４．６７安定剤０．３０計１００．０％＊＊牛抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖母乳５％を含有

【００４７】〔実施例１７〕ヨーグルト脱脂乳３２０ｋｇ加糖練乳＊＊＊５６砂糖２３以上の成分を常法により発酵する。＊＊＊牛抗Ａ．ａ．菌体表層多糖母乳１０％を含有

【００４８】〔実施例１８〕ババロア生地牛乳＊＊＊＊３７５ｃｃ砂糖６０ｇバニラのサヤ１本卵黄５個ゼラチン２０ｇ生クリーム７５ｃｃ＊＊＊＊牛抗Ｐ．ｇ．菌体表層多糖母乳５％を含有

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖を抗
原として動物に免疫することによって得られる抗体を含
有してなることを特徴とする口腔用組成物。