JPH1014589A - キャンディダ・リポリティカｈｎａ−１１０株及び２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸の製造方法 - Google Patents

キャンディダ・リポリティカｈｎａ−１１０株及び２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸の製造方法

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JPH1014589A
JPH1014589A JP17768696A JP17768696A JPH1014589A JP H1014589 A JPH1014589 A JP H1014589A JP 17768696 A JP17768696 A JP 17768696A JP 17768696 A JP17768696 A JP 17768696A JP H1014589 A JPH1014589 A JP H1014589A
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JP
Japan
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naphthoic acid
dihydroxy
strain
hna
candida
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JP17768696A
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Satoshi Kawanaka
聡 川中
Kazutsugu Kitahata
千嗣 北畠
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Unitika Ltd
Original Assignee
Unitika Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 優れた２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ
酸産生能を有するキャンディダ・リポリティカ（Candid
a lipolytica）に属する新規な酵母及び２，６−ジヒド
ロキシ−３−ナフトエ酸を高収率で、かつ、高純度で製
造することのできる２，６−ジヒドロキシ−３−ナフト
エ酸の製造方法を提供する。 【解決手段】 ２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸
産生能を有すること特徴とするキャンディダ・リポリテ
ィカ（Candida lipolytica）ＨＮＡ−１１０株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５６１３）。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、２−ヒドロキシ−
３−ナフトエ酸（以下、２Ｈ３ＮＡと略す）から２，６
−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸（以下、２，６ＤＨ３
ＮＡと略す）を産生する能力を有する酵母キャンディダ
・リポリティカ（Candida lipolytica）ＨＮＡ−１１０
株及び２，６ＤＨ３ＮＡの製造方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】２，６ＤＨ３ＮＡは、医薬品前駆体、農
薬、顔料分散体、感熱記録体、金属防食体として有用な
化合物であり、さらに、特開平４−３６４１５６号公報
には、そのアミド化された化合物がロイコトリエン類の
産生抑制作用、ヒスタミン拮抗作用を有することから、
優れた抗アレルギー活性化合物であることが報告されて
いる。従来、２，６ＤＨ３ＮＡは公知の有機合成法によ
り、ナフタレンあるいは２Ｈ３ＮＡを原料として、複雑
な反応条件下で合成及び製造されていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、有機合成法で
は、位置選択的に合成することができないため、精製収
率が非常に低く、また、純度的にも満足できるものでは
なかった。本発明は、優れた２，６ＤＨ３ＮＡ産生能を
有するキャンディダ・リポリティカ（Candida lipolyti
ca）に属する新規な酵母を提供することを目的とするも
のである。また、本発明は２，６ＤＨ３ＮＡを高収率
で、かつ、高純度で製造することのできる２，６ＤＨ３
ＮＡの製造方法を提供することを目的とするものであ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、このよう
な状況に鑑み、既知及び未知の微生物を京都府下の土壌
からスクリーニングした結果、キャンディダ・リポリテ
ィカ（Candida lipolytica）に属する酵母が２Ｈ３ＮＡ
から２，６ＤＨ３ＮＡを高収率で産生するということを
見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、第一の
発明は、２，６ＤＨ３ＮＡ産生能を有することを特徴と
するキャンディダ・リポリティカ（Candida lipolytic
a）ＨＮＡ−１１０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５６１３）を
要旨とするものである。また、第二の発明は、２Ｈ３Ｎ
Ａにキャンディダ（Candida ）属に属する酵母を作用さ
せることを特徴とする２，６ＤＨ３ＮＡの製造方法を要
旨とするものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
まず、本発明のキャンディダ・リポリティカ（Candida
lipolytica）ＨＮＡ−１１０株について説明すると、こ
の菌株は京都府下の土壌から分離されたもので、以下の
ような菌学的性質を有している。
【０００６】（ａ）培養的・形態的性質 栄養細胞の形態は球〜卵形で、増殖形式は多極出芽であ
る。２５℃で３日間の振盪液体培養においては、細胞の
沈澱及び培地表面に皮膜の形成が確認できた。偽菌糸及
び真菌糸の形成は認められた。
【０００７】（ｂ）胞子の形成 子嚢胞子はアダムス、ゴロドバ、麦芽、ＹＭ、Ｖ−８、
ポテトデキストロースの各培地で形成は認められなかっ
た。
【０００８】 （Ｃ）生理学的・化学分類学的性質 (1)生育至適温度 ２２〜２８℃ (2)硝酸塩の資化 − (3)尿素分解 ＋ (4)ビタミン要求性 − (5)リパーゼ ＋ (6)プロテアーゼ ＋ (7)資化性の有無 資化性 発酵性 Ｌ−アラビノース − Ｄ−リボース − Ｄ−キシロース − グルコース ＋ − ガラクトース − − Ｌ−ラムノース − マルトース − − シュークロース − − ラクトース − − メリビオース − セロビオース − トレハロース − ラフィノース − − メレチトース − スターチ − エリスリトール ＋ イノシトール − Ｄ−マンニトール ＋ 乳酸塩 ＋ コハク酸塩 ＋ クエン酸塩 ＋ グリセロール ＋ リビトール −
【０００９】以上の結果から、エヌ・ジェイ・ダブル・
クレガーバン・リジ（N.J.W.Kreger-van Rij）のザ・イ
ースト１９８４年（The Yeast 1984,Elsevier Science
Publishers B.V.)を用いて検討したところ、この菌株は
キャンディダ・リポリティカ（Candida lipolytica）で
あると同定した。なお、キャンディダ・リポリティカ
（Candida lipolytica）はサッカロマイコプシス・リポ
リティカ（Saccharomycopsis lipolytica ）の不完全世
代であり、サッカロマイコプシス・リポリティカ（Sacc
haromycopsis lipolytica ）は１９８０年にヤロウウィ
ア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica ）に移行され
ている。この菌株は、２Ｈ３ＮＡから２，６ＤＨ３ＮＡ
の変換率が９０％以上と特に高いことから新菌株と判断
されるため、キャンディダ・リポリティカ（Candida li
polytica）ＨＮＡ−１１０株と命名し、工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託した。その寄託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５６１３である。次に、本発明の２，６ＤＨ
３ＮＡの製造方法について説明する。
【００１０】本発明に用いられる微生物としては、キャ
ンディダ（Candida ）属に属し、２Ｈ３ＮＡから２，６
ＤＨ３ＮＡを産生できる酵母であればいかなる菌株でも
よく、例えばキャンディダ・リポリティカ（Candida li
polytica）ＩＦＯ−０７１７、０７４６、１１９５、１
２０９、１４５７、１５４２、１５４８、１５４９、１
５５０、１５５１、１６０１、１６３２、１６５８、１
６５９、１７４１、１７４２、１７４６、１００７３株
等が挙げられるが、その中でも２，６ＤＨ３ＮＡの産生
能が高い点からキャンディダ・リポリティカ（Candida
lipolytica）ＨＮＡ−１１０株を用いることが好まし
い。
【００１１】本発明においては、このような微生物を２
Ｈ３ＮＡを含む培地で培養することにより２，６ＤＨ３
ＮＡを製造することができる。このときの培地中の２Ｈ
３ＮＡの濃度としては、１０〜５０，０００ｍｇ／リッ
トルであることが好ましく、特に５０〜１０，０００ｍ
ｇ／リットルであることが好ましい。なお、２Ｈ３ＮＡ
は比較的疎水性であるために、弱酸性あるいは中性の培
地に５０ｍｇ／リットル以上の濃度で添加すると、培地
表面あるいは培地中に微粒子として浮遊する場合がある
が、変換反応が進むにつれて徐々に溶解し、２，６ＤＨ
３ＮＡに変換されるので問題はないが、ツイン８０やト
リトンＸ１００のような公知の界面活性剤を培地に添加
して反応を促進させることもできる。
【００１２】培地の炭素源としては、グルコース、Ｄ−
マンニトールのような炭水化物類、グリセリンのような
有機物類、クエン酸、乳酸、コハク酸のような有機酸が
挙げられるが、好ましくはグルコースのような炭水化物
である。窒素源としては、特に限定されるものではない
が、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、尿素等の無機窒素源、カゼイン、ポリペプトン
や肉エキスのような有機窒素源が利用できる。また、有
機窒素源は有機炭素源としても利用することができる。
無機塩類としては、各種のリン酸塩、硫酸マグネシウム
等が利用できる。さらに、微量の無機重金属塩（鉄塩、
マンガン塩等）あるいはビタミン類を添加してもよく、
イーストエキスのような有機物を微量金属源、ビタミン
類源として添加してもよい。
【００１３】培養方法としては、振盪培養、通気撹拌培
養等の公知の一般的な微生物の培養方法を適用すること
ができる。培養温度としては、１５〜３５℃が好まし
く、特に好ましくは２２〜２８℃である。培養時のｐＨ
としては、３〜９が好ましく、特に好ましくは５〜７で
ある。培養日数としては、２，６ＤＨ３ＮＡの変換率に
応じて適宜設定すればよいが、８〜１５日間が好まし
い。また、本発明においては、菌体をあらかじめ炭水化
物と有機窒素源を含むような培地で大量に培養してお
き、回収した培養菌体を２Ｈ３ＮＡ水溶液と混合、撹拌
することにより２，６ＤＨ３ＮＡを製造することもでき
る。
【００１４】さらに、本発明においては、繊維状担体、
プラスチック製担体、ＦＲＰ担体、シリコン製担体等の
公知の微生物担体に固定化したり、ＰＶＡ、ポリアクリ
ルアミドゲル、寒天、コラーゲン、アルギン酸塩等の高
分子ゲルに菌体を包括した菌体固定化物を用いることも
可能であり、例えば、菌体固定化物を反応塔に充填し、
２Ｈ３ＮＡを含有する培地を通水して回分的あるいは連
続的にバイオリアクターとして使用することも可能であ
る。
【００１５】上記の方法で得られた２，６ＤＨ３ＮＡ
は、酢酸エチル、ジエチルエーテル等の有機溶媒による
抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィーや陰イオン
カラムクロマトグラフィー等の公知の手法によって精製
することができる。
【００１６】なお、本発明で使用する２Ｈ３ＮＡはナフ
タレンから工業的に製造されている安価な原料であり、
容易に入手することができる。本発明においては、２Ｈ
３ＮＡとしては、ジメチルスルホキシド溶液等の形態の
ものも使用することができる。
【００１７】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。 実施例１ 無機液体培地（硫酸アンモニウム ２．５ｇ／リット
ル、硫酸マグネシウム７水和物 ２５０ｍｇ／リット
ル、リン酸二水素カリウム ５００ｍｇ／リットル、塩
化カルシウム２水和物 １０ｍｇ／リットル、塩化ナト
リウム ５００ｍｇ／リットル、ｐＨ６．５）４００ミ
リリットルに、２Ｈ３ＮＡのジメチルスルホキシド溶液
（２０ｍｇ／ミリリットル）２ミリリットルを添加した
後、あらかじめサブロー培地（グルコース ４重量％、
ペプトン １重量％）で培養しておいたキャンディダ・
リポリティカ（Candida lipolytica）ＨＮＡ−１１０株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５６１３）菌体５００ｍｇを添加し
て、２８℃で２０日間振盪培養した。この間の培地中の
２Ｈ３ＮＡ及び２，６ＤＨ３ＮＡを高速液体クロマトグ
ラフィー（以下、ＨＰＬＣと略す）により定量した。Ｈ
ＰＬＣの分析条件としては、カラムはＣ18μBondapack
（ウォーターズ社製）を用い、溶出は７ｍＭのリン酸水
溶液からメタノールへのリニアグラジェント溶出を流速
１ミリリットル／分で行い、検出はＵＶ254 の吸収によ
り行った。
【００１８】その結果を図１に示す。図１は、２，６Ｄ
Ｈ３ＮＡの生成量及び２Ｈ３ＮＡの残存量の経時変化を
示す図であり、縦軸に２，６ＤＨ３ＮＡ及び２Ｈ３ＮＡ
の量を、横軸に培養時間を示している。図１からわかる
ように培養２０日後には２Ｈ３ＮＡの９９．９％が２，
６ＤＨ３ＮＡに変換されていた。このときの純度は９
６．２％であった。
【００１９】さらに、この培養液４００ミリリットルを
塩酸によりｐＨを４．０付近に調整し、酢酸エチル４０
０ミリリットルにより、３回抽出し、ロータリーエバポ
レーター（３０℃）で溶媒を除去することにより２，６
ＤＨ３ＮＡの乾固物４３．２ｍｇを得た。このときの回
収率は９８．０％であった。
【００２０】実施例２〜７ 本発明のキャンディダ・リポリティカ（Candida lipoly
tica）ＨＮＡ−１１０株（実施例２）、キャンディダ・
リポリティカ（Candida lipolytica）ＩＦＯ−０７１７
株（実施例３）、１１９５株（実施例４）、１４５７株
（実施例５）、１６５８株（実施例６）、１００７３株
（実施例７）を用いて、２Ｈ３ＮＡから２，６ＤＨ３Ｎ
Ａを以下のようにして製造した。
【００２１】無機液体培地４０ミリリットルに２Ｈ３Ｎ
Ａのジメチルスルホキシド溶液（２０ｍｇ／ミリリット
ル）を０．５ミリリットル添加し、これに、あらかじめ
サブロー培地において２日間培養しておいた湿菌体１０
０ｍｇを添加し、２８℃で振盪培養した。培養８日後、
培地中の２，６ＤＨ３ＮＡを実施例１と同様にして定量
した。その結果を表１に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】表１からわかるように、キャンディダ属に
属する酵母を用いることにより２Ｈ３ＮＡから２，６Ｄ
Ｈ３ＮＡを製造することができた。さらに、本発明のキ
ャンディダ・リポリティカ（Candida lipolytica）ＨＮ
Ａ−１１０株を用いることにより最も効率よく２，６Ｄ
Ｈ３ＮＡを製造することができた。
【００２４】実施例８ 約２重量％のアルギン酸ナトリウム溶液５０ミリリット
ルにあらかじめサブロー培地で培養しておいたキャンデ
ィダ・リポリティカ（Candida lipolytica）ＨＮＡ−１
１０株菌体５ｇと水２５ミリリットルとを混合し、均一
になるまで攪拌した。次いで、５重量％の塩化カルシウ
ム溶液４００ミリリットルに上記菌液を少量づつゆっく
りと滴下し、一晩４℃で放置した後、ろ過してアルギン
酸ゲル包括菌体を得た。このアルギン酸ゲル包括菌体を
筒上のプラスチック製カラム２００ミリリットル内に生
体触媒充填率２０〜４０容量％で充填した。そこに、２
Ｈ３ＮＡ５０ｍｇ／リットルを含む無機液体培地液を滞
留時間２０時間で約１ヶ月間通水した。この結果、平均
変換率９５．３％、純度９２．４％で２，６ＤＨ３ＮＡ
を得ることができた。
【００２５】
【発明の効果】本発明の菌株は、優れた２，６ＤＨ３Ｎ
Ａ産生能を有している。このため、２，６ＤＨ３ＮＡの
製造に有用である。また、本発明の製造方法によれば、
複雑な反応や精製方法を用いることなく、温和な条件下
において高収率で、かつ、高純度で２Ｈ３ＮＡから２，
６ＤＨ３ＮＡを製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のキャンディダ・リポリティカ（Candid
a lipolytica）ＨＮＡ−１１０株を用いて２，６ＤＨ３
ＮＡを製造したときの、２，６ＤＨ３ＮＡの生成量及び
２Ｈ３ＮＡの残存量の経時変化を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:73）

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸
    産生能を有することと特徴とするキャンディダ・リポリ
    ティカ（Candida lipolytica）ＨＮＡ−１１０株（ＦＥ
    ＲＭ Ｐ−１５６１３）。
  2. 【請求項２】 ２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸にキャ
    ンディダ（Candida）属に属する酵母を作用させること
    を特徴とする２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸の
    製造方法。
JP17768696A 1996-07-08 1996-07-08 キャンディダ・リポリティカｈｎａ−１１０株及び２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸の製造方法 Pending JPH1014589A (ja)

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JP17768696A JPH1014589A (ja) 1996-07-08 1996-07-08 キャンディダ・リポリティカｈｎａ−１１０株及び２，６−ジヒドロキシ−３−ナフトエ酸の製造方法

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2003016544A1 (fr) * 2001-08-10 2003-02-27 Meiji Dairies Corporation Procede d'elaboration d'acide 1,4-dihydroxy-2-naphtoique
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