JPH10194975A - 肝疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 肝疾患患者の症状、特に高アンモニア血症の
改善を行うことが可能であり、副作用の少ない肝疾患治
療剤を提供する。 【解決手段】 高純度ラフィノースを有効成分として含
有する肝疾患治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、高純度ラフィノー
スを有効成分として含有する肝疾患治療剤であり、主と
して肝疾患に伴う高アンモニア血症の改善を目的として
投与される薬剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】肝臓は門脈を介して消化管からの血流を
集めており、肝血流の３／４は門脈血流が占めている。
肝臓は種々の重要な機能を果たしているが、特に消化管
と関連する主要な機能として、消化管から吸収された栄
養素を肝臓が保持し、生体に必要な物質に代謝する機能
があげられる。また、消化管から吸収された不必要な物
質及び有害な物質は、肝細胞に摂取された後、親水性物
質に代謝され、胆道系又は腎臓から体外に排泄される。
更に、肝臓はアンモニアを尿素回路で処理し、尿素とす
る等の解毒機能も有している。

【０００３】肝硬変は全ての肝疾患の終末像であり、肝
細胞機能障害とともに門脈血流の異常が起こり、特に肝
硬変の非代償期では消化管起源の中毒性物質（アンモニ
ア、低級脂肪酸、メルカプタン、インドール化合物等）
の解毒機能は著しく阻害され、これに基づいて肝性脳症
等の諸症状が発症する。

【０００４】一方、腸内菌叢は食事の消化吸収に関与す
るとともに、種々の有害物質の生成及び吸収に関与して
おり、肝臓の役割と腸内菌叢との関連は極めて大きいこ
とが知られている（社団法人日本ビフィズス菌センター
編、「腸内菌叢と代謝」、第３８〜５６ページ、第７回
研修テキスト、１９９１年）。

【０００５】例えば、肝疾患患者と健常者との腸内菌叢
の比較実験から、肝硬変患者では健常者に比較して糞便
中の嫌気性菌数が著増し、その主な菌種はバクテロイデ
スであることが知られている（日本消化器病学会誌、第
７７巻、第１０号、第２８〜３６ページ、１９８０
年）。また、嫌気性菌の中には腸管内のアンモニア産生
に関与するウレアーゼ活性を有する細菌が多く、前記バ
クテロイデスはその主要菌として知られている（消化器
臨床生理、第５巻、第７１〜９０ページ、１９８１
年）。

【０００６】これらの知見に対して、重症肝疾患の治療
の目的のため古くから種々の方法が試みられ、非代償性
肝硬変に認められる肝性脳症に対する治療法は著しく進
歩し、肝機能の改善をも期待できるようになった。例え
ば、非代償性肝硬変を主とした肝不全に対する高分岐鎖
アミノ酸製剤の投与等が知られている（渡辺明治及び沖
田美佐子著、「肝臓病と治療栄養」、第一出版、１９９
２年）。更に、腸内菌叢改善を意図して、肝性脳症、高
アンモニア血症の治療にラクチュロース製剤が広く用い
られている（日本医薬品情報センター編、「日本医薬品
集」、薬業時報社、１９９６年）。

【０００７】以上のとおり、従来、肝疾患と腸内細菌叢
との関連及び肝疾患の治療における症状改善を目的とし
た薬剤等が知られているが、ラクチュロースはビフィズ
ス菌に幅広く資化性を有する非消化性のオリゴ糖であ
り、同様のオリゴ糖として各種ガラクトオリゴ糖、各種
フラクトオリゴ糖、ラフィノース等が知られている。こ
れらのオリゴ糖は、ビフィズス菌増殖因子として腸内環
境の改善、便性の改善、腸内腐敗産物の産生抑制等の効
果を有し、主として食品分野で幅広く利用されている
（月刊フードケミカル、第１０巻、第７９〜８４ペー
ジ、１９８６年）。

【０００８】しかしながら、従来これらのオリゴ糖のう
ち肝疾患の治療に用いられている薬剤は、肝性脳症及び
高アンモニア血症改善用のラクチュロース及びラクチト
ールのみであった（日本臨床、第５２巻、第１号、第１
１０〜１１８ページ、１９９４年）。

【０００９】ラクチュロースは広範なビフィズス菌種に
対する資化性を有し、ビフィズス菌を増殖させるととも
に、代謝されて有機酸となり腸管内のｐＨを低下させ、
腐敗菌により産生されるアンモニアの腸管からの吸収を
阻害し、腸管の蠕動運動を促進して腸管内容物の腸管内
滞留時間を短縮し、排便を促進することが知られている
（日本臨床、第４６巻増刊、第１０７７〜１０８３ペー
ジ、１９８８年）。これらの作用により、アンモニアを
はじめとする各種毒性物質の腸管からの吸収を抑制する
とともに、最近では腸管によるアンモニア産生を抑制す
るという報告もなされている［ヘパトロジー（Hepatolo
gy）、第６巻、第１１３３ページ、１９８６年］。

【００１０】しかしながら、ラクチュロースは、大腸
菌、クロストリジウム菌等にも資化され、ビフィズス菌
等の有用菌の選択利用性にやや難点を示す場合がある。
また、投与量によっては下痢の誘発、腹部膨満感を惹起
しやすい。更に、ラクチュロースは、甘味が強く、人に
よっては多量の摂取を行なうことが困難な場合がある等
の難点があった。

【００１１】一方、ラクチトールは糖アルコールに属す
る物質であるが、その性質はオリゴ糖の性質に類似し、
ラクチュロースと同様に肝性脳症、高アンモニア血症の
治療にも用いられている（臨床医薬、第１１巻、第７
号、第１４３９〜１４７３ページ、１９９５年）。しか
しながら、ラクチトールは、ヒト由来の各種ビフィズス
菌に対する資化性がそれ程広くないという欠点があり
（ビフィズス、第９巻、第１号、第１９〜２６ページ、
１９９５年）、腸内菌叢の改善が不充分となり、患者に
よっては効果が得られない場合がある。

【００１２】このように、従来公知の肝疾患治療剤とし
て知られているラクチュロース、ラクチトールには、肝
疾患の症状の改善を目的とした腸内環境改善作用等にお
いて未だ改良の余地があり、特に実用上の点から更に望
ましい肝疾患治療剤の開発が期待されていた。

【００１３】次に、従来公知の前記肝疾患治療剤以外
に、近年腸内環境改善の面から研究されている糖類とし
てラフィノースがある。ラフィノースは、ラクチュロー
ス程の広いビフィズス菌資化性は有していないが、腐敗
菌、アンモニア産生菌には資化され難く、ビフィズス菌
の生育に対する選択的糖源として優れたオリゴ糖である
ことが知られており、腸内腐敗産物の生成抑制、便性改
善効果についても明らかにされている［ビフィドバクテ
リア・アンド・マイクロフローラ(Bifidobacteria and
Microflora) 、第６巻、第２号、第３４〜４０ページ、
１９９３年］。

【００１４】しかしながら、従来ラフィノースの利用
は、加工特性を利用した食品、吸湿性を利用した可食性
脱水剤、移植臓器の輸送液の安定剤、生菌剤の安定化等
への用途が主流であった（ジャパンフードサイエンス、
第９号、第３４〜４０ページ、１９９３年）。

【００１５】その他に、腸内環境改善用組成物として、
ラフィノース、スタキオース等のガラクトオリゴ糖と食
物繊維を併用した組成物が、肝性脳症、大腸癌の治療及
び予防に効果のあることが知られている（特開平３−１
５１８５４号公報）が、該組成物の効果は腸内腐敗産物
量の減少に止まり、肝疾患に対する効果は明確でなく、
本格的に肝疾患用の医薬品として用いることを意図され
たものではなかった。また、該公報には、オリゴ糖のみ
を投与しても、腸内菌叢改善効果が見い出せないことが
明記されている。また、ラフィノースをはじめとする難
消化性オリゴ糖とポリデキストロースを含有する流動性
食品が、便通改善作用を有することも知られていた（特
開昭６２−２２０１６９号公報）が、該流動性食品も便
通への効果に止まったものであった。更に、ラフィノー
スを含むオリゴ糖と可食性食物繊維との糖類混合物を主
成分とする食品が、整腸作用を有し、健康増進に効果の
あることが知られていた（特開昭６３−６３３６６号公
報）が、該食品も肝臓疾患に対する効果については全く
知られていなかった。

【００１６】以上の他にも、公知の各種オリゴ糖が、腸
内環境を改善し、腐敗菌による有害物質の生成を抑制す
ることにより、身体の健康に寄与する研究は多数知られ
ているが（ビフィズス、第７巻、第１号、第１〜１２ペ
ージ、１９９３年）、腸管以外の臓器の機能に与える影
響について、前記ラクチュロース、ラクチトール以外の
オリゴ糖の研究は行なわれておらず、明確な評価もなさ
れていなかった。

【００１７】ラットを用いて、ガラクトサミン肝障害の
発症に及ぼす飼料中の各種オリゴ糖の影響について検討
を行い、ガラクトースを含むラクチュロース、ラフィノ
ース、２種のガラクトオリゴ糖、ガラクトース、ラクト
ース及びガラクトサミンによる肝障害の発症抑制効果が
報告されているが（日本栄養食糧学会誌、第４８巻、第
３号、第１８１〜１８７ページ、１９９５年）、この実
験結果は、ラットに特異的に起こるガラクトサミン肝障
害の発症抑制にオリゴ糖、又は単糖としてガラクトース
が深く関与していることを明らかにしたのみであり、ヒ
トの高アンモニア血症改善効果についてのオリゴ糖の効
果を何ら示唆していない。

【００１８】本発明者らは、ラフィノースが腸内環境を
改善することを見い出し、ラフィノースを含有する肝疾
患患者用食品組成物を発明し、既に特許出願した（平成
８年１２月２６日出願。整理番号Ｐ００００１０８２
９。以下先願と記載する。）。しかしながら、先願の発
明は、医薬品による治療を受けている肝疾患患者が摂取
する食品等に係るものであり、医薬品による治療を側面
から援助するものである。更に、先願の発明において
は、ラフィノースは溶解度が低いこと、食品の他の成分
とのバランスの関係等から、肝疾患を直接的に治療する
ために有効な量を投与し得ないという難点があった。

【００１９】以上のとおり、従来公知の肝疾患治療剤に
は、真に腸内環境改善を主体とした、肝疾患の症状改善
効果を発現する薬剤はなく、肝疾患の症状改善、特に高
アンモニア血症の改善に使用されるオリゴ糖として、副
作用が少なく、効果的な、また、飲用、摂取しやすいオ
リゴ糖を主成分とする薬剤が待望されていた。

【００２０】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、前記従
来技術に鑑みて、先願出願後先願よりも多量のラフィノ
ースの投与が肝疾患患者の肝機能に及ぼす効果について
詳細な研究を行った。その結果、高純度ラフィノースを
有効成分として含有する薬剤が、肝疾患患者の症状改
善、特に高アンモニア血症の改善に有効であること、及
び高純度ラフィノースを有効成分として含有する薬剤
は、肝疾患患者の腸内環境を顕著に改善し、かつ副作用
の心配が少ないことを見い出し、本発明を完成した。

【００２１】本発明の目的は、肝疾患患者の症状、特に
高アンモニア血症の改善を行うことが可能であり、副作
用の少ない肝疾患治療剤を提供することにある。

【００２２】

【課題を解決するための手段】前記の課題を解決する本
発明は、高純度ラフィノースを有効成分として含有する
肝疾患治療剤であり、ラフィノースが、１日体重１ｋｇ
当たり０．３〜０．９ｇの割合で投与されることを望ま
しい態様としてもいる。

【００２３】次に本発明について詳細に説明する。

【００２４】

【発明の実施の形態】本発明に使用するラフィノースと
しては、市販品であってもよく、公知の方法（例えば、
特開昭５４−４９３４５号公報記載の方法等）により甜
菜根から製造されたラフィノース、大豆ホエーから公知
の方法（例えば、特開昭５９−１７９０６４号公報記載
の方法等）により製造したラフィノースであってもよ
い。また、大豆オリゴ糖として製造されるオリゴ糖混合
物から、クロマトグラフィー等の公知の方法により、ラ
フィノース含量を増加させたもの、又は純粋に分離した
ものを利用することもできるが、可及的に高純度のもの
を使用するのが望ましい。

【００２５】また、本発明の肝疾患治療剤は、前記ラフ
ィノース粉末そのものでも良いが、必須成分であるラフ
ィノースの他に、保存性を高めるため、剤形を整えるた
め等の目的から、公知の賦形剤、保形剤、増量剤、乳化
剤、香料、着色料、防腐剤等を添加し、常法により液
状、粉末状、顆粒状等に加工することができる。

【００２６】また、これらのラフィノースの肝疾患患者
への有効投与量は、患者の症状、年齢等により異なる
が、後記する試験例から明らかなとおり、１日体重１ｋ
ｇ当り０．３〜０．９ｇの範囲で投与することが望まし
い。

【００２７】本発明の肝疾患治療剤を、公知の肝疾患治
療剤と併用することもできる。肝疾患に対する公知の薬
剤として、例えば、各種アミノ酸、各種必須脂肪酸、ラ
クチュロース、ラクチトール及びその他の各種オリゴ
糖、ビタミン類（例えばビタミンＡ、Ｄ、Ｋ等）、ミネ
ラル類（例えば亜鉛製剤等）、を例示することができ
る。特にラクチュロースと併用する場合は、ラフィノー
ス１部（重量。以下特に断りのない限り同じ）に対して
ラクチュロース１／６〜２部の割合が最も望ましい。
尚、ラフィノースは甘味度がショ糖の約１／１０以下で
あり、飲用、摂取が容易であるという利点も有してい
る。

【００２８】以上のようにして製造された本発明の肝疾
患治療剤は、後記のとおり肝疾患の諸症状、特に高アン
モニア血症、の改善に有効である。

【００２９】次に試験例を示して本発明を詳細に説明す
る。従来、肝疾患治療剤の主成分であるオリゴ糖を開発
するために行なわれてきた試験の問題点は、肝疾患患者
の腸内環境を十分に把握、反映して行われておらず、前
記のとおり、従来のオリゴ糖製剤による肝疾患の諸症状
の改善効果は、この点において不充分であった。

【００３０】本発明者らは、前記のとおり嫌気性のアン
モニア産生菌が、腸内に多く存在し、腸内環境の悪化し
た肝疾患患者の腸管内を想定して製剤中のオリゴ糖を選
定する場合、 腸内の主要な構成ビフィズス菌に幅広く資化性があ
り、かつ生育速度が速く、添加したオリゴ糖が他の腐敗
菌等に利用されることが少ないこと。 添加されたオリゴ糖が、ビフィズス菌等の有用菌に十
二分に利用された結果として、腸管内の酸生成量が高い
こと。 添加されたオリゴ糖が、ビフィズス菌等の有用菌に十
二分に利用された結果として、腸管内のｐＨ値が可能な
限り低下していること。 が、悪化した腸内環境を迅速に改善し、肝疾患の諸症状
の改善効果を高めるために重要な要素であると考えた。

【００３１】前記〜の条件が満たされた場合、腸管
内の腐敗菌等によるアンモニア、インドール、スカトー
ル等の毒性物質の産生も早期に、確実に、かつ効果的に
抑制することが可能であり、肝機能負担の軽減により、
肝疾患の諸症状の確実な改善効果を具現するものと考え
られる。従って、本発明者らは、これら３点に可能な限
り近い条件での予備試験を実施した。

【００３２】実験方法としては、肝疾患患者に最も適合
した条件下で所望のオリゴ糖製剤を的確に試験するため
に、各種オリゴ糖による腸内の主要ビフィズス混合菌の
資化性と増殖速度、酸生成、ｐＨ値の各指標を総合的に
評価する方法を採用した。 予備試験 この試験は、ヒトの腸管内に高頻度に検出されるビフィ
ズス各菌の混合培養の系に対し、添加されたオリゴ糖の
増殖促進効果を判定することにより、肝疾患患者の症状
改善を図るために投与する製剤中のオリゴ糖を選別する
ために行った。尚、この試験は、使用する菌株を変更し
たことを除き、前記先願の予備試験１と同一の方法によ
り実施したが、その試験方法の概略は次のとおりであ
る。

【００３３】我国の成人、老人に検出される頻度の高い
ビフィズス菌株として、ビフィドバクテリウム・アドレ
ッセンティス（Bifidobacterium adolescentis）ＡＴＣ
Ｃ１５７０３、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bi
fidobacterium bifidum ）ＡＴＣＣ２９５２１、ビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）
ＡＴＣＣ１５７０７の３種の菌株を選択し、腸内菌叢を
想定してこれら３菌種の混合系を用いた。

【００３４】試験方法における基礎培地［酵母エキス
０．５％（重量。以下特に断りのない限り同じ）、肉エ
キス０．５％、グルコース２％、リン酸一カリウム０．
１％、リン酸二カリウム０．１％、無水酢酸ナトリウム
０．２％、シスチン０．０５％、ツィーン８０（Ｔｗｅ
ｅｎ８０）０．０５％、精製水（イオン交換水）９６．
５％からなる］、この基礎培地により前記３菌種の混合
系を培養した前培養液及び基礎培地に添加するグルコー
スの代りに表１に示す各種オリゴ糖を２％添加した試験
培地を調製した。この試験培地により前記３菌種の混合
系を培養し、試験を行った。

【００３５】試験培地におけるビフィズス菌混合培養の
系に対して、各種オリゴ糖類の効果を総合的に評価する
ため、増殖速度、培地の酸度及び培地ｐＨの３点から、
次式により生育活性値を算出し、評価検討を行った。

【００３６】生育活性値＝（培地の濁度増加）×（培地
の酸度）／（培地のｐＨ） この式において「培地の濁度増加」は、主要ビフィズス
菌の速やかな増殖の程度を、「培地の酸度」は添加オリ
ゴ糖に対する酸生成力を、「培地のｐＨ」は添加オリゴ
糖の利用によるｐＨ低下力を、それぞれ意味するもので
あり、生育活性値は、前記の式によってこれら３要因の
影響を総合的に判断するためにまとめたものである。

【００３７】この試験結果は表１に示すとおりである。
表１から、ラフィノースが最も生育活性値が高く、ラク
チュロースがそれに続き、ラクチトール、ガラクトオリ
ゴ糖の生育活性値は低いことが判明した。

【００３８】また、その他の公知のオリゴ糖であるフラ
クトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ラクトスクロース、イ
ソマルトオリゴ糖等のいずれのオリゴ糖でも、その値、
効果ともにラフィノース及びラクチュロースに及ばなか
った。

【００３９】

【表１】

【００４０】試験例１ 本発明の有効成分であるラフィノースについて、ラット
を用いて急性経口毒性試験を行った。

【００４１】（１）試験方法 ４週齢のウィスター系ラット（日本エスエルシー社から
購入）雌雄各５匹を、通常のラット用固形飼料で１週間
予備飼育を行い、健康に異常がないことを確認し、のち
約１３時間絶食させて体重を測定した。各ラットに、ラ
フィノース粉末（日本甜菜製糖社製）を精製水と混合
し、４００ｍｇ／ｍｌとした溶液を、体重ｋｇ当たり
６，０００ｍｇの割合で胃ゾンデを用いて強制単回投与
した後、投与日は頻回観察を行い、更に１３日間１日１
回の観察を行った。また、投与後１週ごとに体重を測定
し、観察終了時には全てのラットを解剖し、異常の有無
を肉眼により観察した。

【００４２】（２）試験結果 試験に用いた全てのラットとも、観察期間中に死亡例は
認められず、臨床的にも全てのラットにおいて異常は認
められなかった。

【００４３】投与後１週及び２週後の体重測定の結果を
表２に示したが、雌雄ともに体重増加抑制は認められな
かった。また、観察終了後の剖検においても、全てのラ
ットともに主要臓器に異常は認められなかった。

【００４４】従って、本発明の有効成分であるラフィノ
ースの、ラットにおける単回経口投与における致死量
は、雌雄ともに６，０００ｍｇ／ｋｇ以上であることが
判明した。

【００４５】

【表２】

【００４６】試験例２ 本発明の有効成分であるラフィノースの突然変異誘起性
について、Escherichia coli WP2 uvrA 株、並びに、Sa
lmonella typhimurium TA 系４株を用いて、代謝活性化
法を含む復帰変異試験（エームス試験）を行った。

【００４７】（１）試験方法 １）供試菌株 Escherichia coli WP2 uvrA 株、Salmonella typhimuri
um TA100、TA1535、TA98及びTA1537の５菌株を用いた。

【００４８】試験に際しては、Nutrient broth No.2
（ＯＸＯＩＤ社製）１０ｍｌを分注したＬ字型試験管
に、−８０℃で凍結保存した各菌株を接種し、３７℃で
約７時間振とう培養し、得られた菌懸濁液を試験に用い
た。

【００４９】２）試験液の調製 ラフィノース（日本甜菜製糖社製）を精秤し、高圧蒸気
滅菌（１２１℃、２０分間）した純水（以下「滅菌水」
と記載する。）を添加し、試験管ミキサーによる攪拌を
行い、５０ｍｇ／ｍｌの溶液を調製した。これを試験原
液として、滅菌水を用いて適宜希釈し、試験に供した。

【００５０】３）試験濃度 ラフィノースの濃度は、最高濃度を５，０００μｇ／平
板とし、２，５００、１，２５０、６２５、３１３及び
１５６μｇ／平板の６段階で試験を実施した。

【００５１】４）試験操作の方法 プレインキュベーション法（代謝活性化法によらない場
合及び代謝活性化法による場合の両条件）により次のと
おり試験を行った。

【００５２】所定の濃度に調製した試験液０．１ｍｌを
滅菌した小試験管に秤取し、次の組成のＳ９Ｍｉｘ又は
０．１ＭＮａ−リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）０．５ｍｌ
及び各菌懸濁液０．１ｍｌを順次添加した。各小試験管
を３７℃の恒温槽中で２０分間振とう（プレインキュベ
ーション）し、のち次のトップアガー２ｍｌを添加して
混合し、最少グルコース寒天平板培地（日清製粉社製。
直径１００ｍｍ、３０ｍｌ）シャーレ上に均一に広げて
固化させた。このシャーレを３７℃の恒温器中で４８時
間培養し、復帰突然変異により生じたコロニー数を計数
した。尚、試験液、及びＳ９Ｍｉｘは雑菌の混入のない
ことを確認した。

【００５３】また、ＡＦ−２［2-(2-furyl)-3-(5-nitro
-2-furyl)acrylamide ］、ＥＮＮＧ［N-ethyl-N'-nitro
-N-nitrosoguanidine ］、９−ＡＡ［9-aminoacridine
］（以上、Ｓ９Ｍｉｘ非存在）、２−ＡＡ［2-aminoac
ridine ］（Ｓ９Ｍｉｘ存在）、を用いて陽性対照試験
を行った。

【００５４】 ［Ｓ９Ｍｉｘの組成］ Ｓ９（キッコーマン社製） ０．１ｍｌ （／ｍｌ） ＭｇＣｌ₂ ８μｍｏｌ ＫＣｌ ３３μｍｏｌ グルコース−６−リン酸 ５μｍｏｌ ＮＡＤＰＨ ４μｍｏｌ ＮＡＤＨ ４μｍｏｌ Ｎａ−リン酸緩衝液（ｐＨ７．４） １００μｍｏｌ ［トップアガー］Bacto agar（ＤＩＦＣＯ社製）０．６
％及びＮａＣｌ０．５％からなる培地を高圧蒸気滅菌
後、S. typhimurium TA 系４株については、別に滅菌し
た０．５ｍＭヒスチジン−ビオチン溶液を１／１０倍
量、E. coli WP2 uvrA株については、０．５ｍＭトリプ
トファン溶液を１／１０倍量添加して混合した。

【００５５】（２）試験結果 代謝活性化法によらない場合（Ｓ９Ｍｉｘ非存在）の結
果は表３に、代謝活性化法による場合（Ｓ９Ｍｉｘ存
在）の結果は表４に、それぞれ示すとおりである。

【００５６】いずれの場合においても、陽性対照として
用いた化合物では、溶媒対照と比較して顕著な復帰変異
コロニー数の増加が認められたが、ラフィノースについ
ては、６段階の全ての濃度において、溶媒対照と比較し
て復帰変異コロニー数の増加は認められなかった。

【００５７】以上の結果から、本試験条件下において本
発明の有効成分であるラフィノースの突然変異誘起性は
陰性であることが明らかである。

【００５８】

【表３】

【００５９】

【表４】 試験例３ この試験は、本発明の肝疾患治療剤の有効投与量を検討
するために行った。

【００６０】（１）試験方法 ７〜９週齢の３９匹のＳＤ系雄ラットを、１週間予備飼
育して飼育環境に馴化させ、健康状態に問題のないこと
を確認して試験に供した。尚、予備飼育、試験期間中
は、水道水、及び市販の固形飼料を自由摂取させた。

【００６１】３９匹を無作為に１群１８匹ずつ２群（Ａ
群及びＢ群）及び対照群３匹に分け、Ａ群及びＢ群のラ
ットは、更に無作為に３匹ずつ６群に分けた。

【００６２】Ａ群のラットには、実施例１に記載した肝
疾患治療剤を、ラフィノースとして１日体重１ｋｇ当た
り０．５、１．０、１．５、２．０、３．０及び６．０
ｇを、１日２回等量に分けて７日間反復経口投与した。

【００６３】一方、Ｂ群のラットには、ラクチュロース
シロップ（森永乳業社製。ラクチュロース含量５０％）
を、ラクチュロース量として１日体重１ｋｇ当たり０．
５、１．０、１．５、２．０、３．０及び６．０ｇを、
１日２回等量に分けて７日間反復経口投与した。

【００６４】対照群は、無処置のまま７日間予備飼育と
同一環境下に飼育を係属した。７日目の最終投与終了か
ら数時間後に、全てのラットから麻酔下で門脈血を採取
し、遠心分離により血漿を分離した後、門脈血中のアン
モニア濃度を測定キット（和光純薬工業社製）を用いて
測定した。

【００６５】（２）試験結果 この試験結果を表５に、それぞれ各群３匹の平均値で示
した。表５から、Ａ群ではラフィノースの投与量０．５
及び１．０ｇ／ｋｇ／日では、対照群と比較して門脈血
中のアンモニア濃度に有意な変化は認められなかった
が、１．５ｇ／ｋｇ／日以上の投与量では、用量に依存
してアンモニア濃度が低下した。一方、Ｂ群では、１．
５ｇ／ｋｇ／日以下の投与量では効果が認められず、
２．０ｇ／ｋｇ／日以上の投与量で、用量に依存してア
ンモニア濃度が低下した。尚、Ａ群、Ｂ群とも、試験し
た最大投与量６．０ｇ／ｋｇ／日の投与群においても、
糞便の軟便化、摂餌量の低下等の副作用は何ら認められ
なかった。

【００６６】以上の結果から、ラフィノースを有効成分
として含有する製剤が、体内に吸収されるアンモニア量
を顕著に減少させ、肝疾患患者の高アンモニア血症の改
善に有用であることが明らかである。また、ラフィノー
スの有効投与量としては、ラクチュロース投与量の約３
／４倍で同等の効果を示しているので、ラクチュロース
の臨床使用量が２０〜６０ｇ［６５％シロップとして、
３０〜９０ｍｌ（胆肝膵、第２６巻、第２号、第２９７
〜３０３ページ、１９９３年）］であることから、標準
体重５０ｋｇとしてラフィノースの有効投与量は、１日
体重ｋｇ当たり０．３〜０．９ｇと算出される。

【００６７】尚、ラフィノースの種類を変更して試験し
て有効投与量を算出したが、ほぼ同様の結果が得られ
た。

【００６８】

【表５】

【００６９】試験例２ この試験は、本発明の肝疾患治療剤の、慢性肝不全モデ
ル動物に対する高アンモニア血症改善効果を検討するた
めに行った。

【００７０】（１）試験方法 ９週齢の１２匹のＳＤ系雄ラットを、１週間予備飼育し
て飼育環境に馴化させ、健康状態に問題のないことを確
認した後、門脈下大静脈吻合手術（ＰＣＳ形成手術）を
行い慢性肝不全モデルラットとした。尚、予備飼育、試
験期間中は、水道水、及び市販の固形飼料を自由摂取さ
せた。

【００７１】術後７日目に、１２匹を無作為に１群３匹
ずつ４群に分け、実施例１に記載した肝疾患治療剤を、
ラフィノースとして１日体重１ｋｇ当たり０（対照
群）、２．０、３．０及び４．０ｇを、１日２回等量に
分けて７日間反復経口投与した。

【００７２】７日目の最終投与終了から数時間後に、全
てのラットから麻酔下で腹部大静脈より血液を採取し、
遠心分離により血漿を分離した後、血中のアンモニア濃
度を測定キット（和光純薬工業社製）を用いて測定し、
各群の平均値を算出して試験した。

【００７３】（２）試験結果 この試験の結果、静脈血のアンモニア濃度（μｇ／ｄ
ｌ）は、対照群の平均が１６２であるのに対して、２．
０ｇ／ｋｇ／日投与群の平均が１３２、３．０ｇ／ｋｇ
／日投与群の平均が１２２、４．０ｇ／ｋｇ／日投与群
の平均が１１８であった。従って、慢性肝不全モデルラ
ットにおいて、ラフィノースとして２．０〜４．０ｇ／
ｋｇ／日の用量で本発明の肝疾患治療剤を投与すること
により、血中のアンモニア濃度が顕著に低下し、本発明
の肝疾患治療剤が、慢性肝不全患者に発生する高アンモ
ニア血症の改善に有用であることが明らかである。

【００７４】尚、実施例１記載の肝疾患治療剤に代え
て、実施例２記載の肝疾患治療剤を用いて同様の試験を
行ったが、ほぼ同様の効果が確認された。更に、ヒトに
おける予備臨床試験においても、同様の効果が確認され
ている。

【００７５】

【実施例】次に、実施例を示して本発明を更に詳細に説
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。

【００７６】実施例１ ラフィノース（日本甜菜製糖社製）２０ｋｇ及び精製水
（イオン交換水）８０ｋｇを混合し、滅菌し、のち２０
０ｇずつ滅菌したポリエチレン製容器に分注し、シロッ
プ状の肝疾患治療用剤４９０個を得た。

【００７７】実施例２ ラフィノース（日本甜菜製糖社製）１６ｋｇ、及びラク
チュロース・シロップ（森永乳業社製。ラクチュロース
含量５０％）３２ｋｇ及び精製水（イオン交換水）５２
ｋｇを混合し、滅菌し、２００ｇずつ滅菌したポリエチ
レン製容器に分注し、シロップ状の肝疾患治療剤４９０
個を得た。

【００７８】実施例３ ラフィノース（日本甜菜製糖社製）４０ｋｇ及び賦形剤
としてデキストリン６０ｋｇを均一に混合し、２０ｇず
つアルミ箔製の袋に充填し、密封し、粉末状の肝疾患治
療剤４，８００個を得た。

【００７９】

【発明の効果】以上詳記したとおり、本発明は、ラフィ
ノースを有効成分として含有する肝疾患治療剤に関する
ものであり、本発明により奏せられる効果は、次のとお
りである。 １）本発明の肝疾患治療剤は、肝疾患患者の腸内環境を
早期にかつ効果的に改善することにより、肝臓機能の負
担の軽減化を図ることができる。 ２）本発明の肝疾患治療剤は、ビフィズス菌を増殖させ
アンモニア産生菌を抑制することにより、腸管内でのア
ンモニア等毒性物質の発生、並びに、腸管から体内への
毒性物質の吸収を抑制し、肝性脳症、高アンモニア血症
の予防、及び治療に有効である。 ３）本発明の肝疾患治療剤は、下痢、軟便、腹部膨満感
等の副作用の心配が少ない。 ４）本発明の肝疾患治療剤は、甘味が少なく、飲用、摂
取しやい製剤である。

フロントページの続き (72)発明者 大橋 俊夫 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内 (72)発明者 川瀬 興三 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内 (72)発明者 中村 浩彦 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内 (72)発明者 佐山 晃司 北海道帯広市稲田町南九線西十三番地 日 本甜菜製糖株式会社総合研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 高純度ラフィノースを有効成分として含
   有する肝疾患治療剤。
2. 【請求項２】 該ラフィノースが、１日体重１ｋｇ当た
   り０．３〜０．９ｇの割合で投与される請求項１に記載
   の肝疾患治療剤。