JPH10298098A - リポキシゲナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アラキドン酸代謝に関与する５−リポキシゲ
ナーゼおよび１２−リポキシゲナーゼの優れた阻害作用
を有し、アレルギー性疾患、炎症、さらには循環器系疾
患や癌の転移などを予防および治療し得る天然物由来の
リポキシゲナーゼ活性阻害剤を提供する。 【解決手段】 本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤は、ル
テオリンまたはクリソエリオールを有効成分とすること
を特徴とする。また、ルテオリン、クリソエリオール、
ロスマリン酸、ロスマリン酸メチルエステルおよびアピ
ゲニンから選ばれる１種または２種以上を含むエゴマ種
子のアルコール抽出物を配合してなることを特徴とす
る。さらに、前記アルコール抽出物を酢酸エチルと水に
分配し、この酢酸エチル層から得られる酢酸エチル分配
物を配合してなることを特徴とする。前記エゴマ種子
は、脱脂エゴマ種子を用いるのが望ましい。前記エゴマ
種子に代えて、シソ種子を用いてもよい。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、リポキシゲナーゼ
阻害剤に関し、例えば、アレルギー性疾患や炎症等を予
防および治療する医薬品、医薬部外品、化粧品、あるい
は食品素材等に適用されるものである。

【０００２】

【従来の技術】必須脂肪酸であるアラキドン酸は、生体
内においては細胞膜の構成成分として存在し、ある刺激
を受けるとホスホリパーゼの作用でリン脂質より遊離さ
れる。遊離したアラキドン酸は、アラキドン酸代謝酵素
（リポキシゲナーゼ等）によって代謝され、炎症等に関
与するプロスタグランジン（ＰＧ）類、血栓の形成等に
関与するトロンボキサン（ＴＸ）類、アレルギーを誘発
するロイコトリエン（ＬＴ）類、リポキシン（ＬＸ）類
などの物質に変換される（図１参照）。このように、ア
ラキドン酸代謝酵素は、循環器系疾患、アレルギー性疾
患や炎症などに関与する原因物質を生成する。そこで、
これらの疾患の予防や治療のためには酵素によるアラキ
ドン酸代謝を特異的に阻害することが有効であると考え
られる。

【０００３】アラキドン酸代謝系に関与している代表的
な酵素としては、５−リポキシゲナーゼ、１２−リポキ
シゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼ等がある。５−リポ
キシゲナーゼは、アラキドン酸を、５−hydroxy−６,
８,１０,１４−eicosatetraenoic acid（５−ＨＥＴ
Ｅ）に代謝し、アレルギー性疾患や、炎症、喘息に関与
するロイコトリエン（ＬＴ）類を誘導する酵素である。
また、１２−リポキシゲナーゼは、アラキドン酸を基質
として、動脈硬化やアレルギー性疾患、さらに癌の転移
に関与する１２−hydroxy−５,８,１０,１４−eicosate
traenoic acid（１２−ＨＥＴＥ）に代謝する酵素であ
る。

【０００４】従来、リポキシゲナーゼを阻害する天然物
としては、例えば、５−リポキシゲナーゼ阻害作用を有
するカフェー酸やケルセチン等が知られる。しかしなが
ら、これらの物質は、酵素阻害剤としては未だ実用化さ
れていない。一方、１２−リポキシゲナーゼを阻害する
物質としては、有効な活性を示すものがほとんど知られ
ていない。その他のポリフェノール類の中にもリポキシ
ゲナーゼの阻害作用を有する天然物が存在するが、いず
れも、抽出物の抑制効果は緩慢で、疾患等の防止に対し
て十分な効果を期待できないのが現状である。また、天
然物からの酵素阻害剤の精製は、コストの問題からも実
用化は困難となっている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、アラ
キドン酸代謝に関与する５−リポキシゲナーゼおよび１
２−リポキシゲナーゼの優れた阻害作用を有し、アレル
ギー性疾患、炎症、さらには循環器系疾患や癌の転移な
どを予防および治療し得る天然物由来のリポキシゲナー
ゼ活性阻害剤を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
の本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤は、ルテオリンを有
効成分とすることを特徴とする。また、本発明のリポキ
シゲナーゼ阻害剤は、クリソエリオールを有効成分とす
ることを特徴とする。また、本発明のリポキシゲナーゼ
阻害剤は、ルテオリン、クリソエリオール、ロスマリン
酸、ロスマリン酸メチルエステルおよびアピゲニンから
選ばれる１種または２種以上を含むエゴマ種子のアルコ
ール抽出物を配合してなることを特徴とする。さらに、
本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤は、ルテオリン、クリ
ソエリオール、ロスマリン酸、ロスマリン酸メチルエス
テルおよびアピゲニンから選ばれる１種または２種以上
を含むエゴマ種子のアルコール抽出物を酢酸エチルと水
に分配し、この酢酸エチル層から得られる酢酸エチル分
配物を配合してなることを特徴とする。

【０００７】前記エゴマ種子としては、脱脂エゴマ種子
を用いるのが望ましい。前記エゴマ種子に代えて、シソ
種子を用いてもよい。

【０００８】本発明者らは、エゴマ種子の抽出物につい
て各種実験を行い、エゴマ種子のエタノール抽出物に５
−リポキシゲナーゼおよび１２−リポキシゲナーゼの強
い阻害作用を発見するに至った。そして、鋭意研究の結
果、エゴマ種子のアルコール抽出物に含まれるルテオリ
ン、クリソエリオール、ロスマリン酸、ロスマリン酸メ
チルエステルおよびアピゲニンに強いリポキシゲナーゼ
阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至っ
たものである。特に、ルテオリンについては、従来には
ないきわめて優れたリポキシゲナーゼ阻害作用を示すも
のである。

【０００９】エゴマは、東アジア原産の一年草シソ科の
油料作物である。全体にシソに似ており、茎は方形で、
卵円形の葉を対生し、夏に白い小花をつける。種子はシ
ソよりやや大きく、秋に収穫される。エゴマ種子からと
れる油は、エゴマ油または荏の油として知られ、食用、
ペイントの原料に用いられる。また、油かすは肥料、飼
料として利用されている。従来、エゴマの葉に含まれる
生理活性物質の報告は存在するが、種子についての報告
はほとんどない。

【００１０】発明者らの調査の結果、エゴマ種子の抽出
物に含まれるリポキシゲナーゼ阻害物質（ルテオリン、
クリソエリオール、ロスマリン酸、ロスマリン酸メチル
エステルおよびアピゲニン）のうち、ロスマリン酸、ロ
スマリン酸メチルエステルについては、既に、特開平１
−１２１２１７号公報に、シソ科植物の新鮮葉から抽出
されるロスマリン酸またはその誘導体の５−リポキシゲ
ナーゼ阻害作用が開示されることが判明した。また、ア
ピゲニンについては、特表平８−５１０７３５号公報
に、５−リポキシゲナーゼ抑制作用が記載される。しか
しながら、これらの物質のうち、最も阻害作用が大きい
ルテオリンのリポキシゲナーゼ阻害作用については従来
から知られるところでなく、また、クリソエリオールの
リポキシゲナーゼ阻害作用についても、今回の研究によ
って明らかにされたものである。

【００１１】また、本発明者らは、エゴマ種子と同じシ
ソ科であるシソの種子についても、種々の実験を行った
ところ、シソ種子のアルコール抽出物にもリポキシゲナ
ーゼ阻害物質（ルテオリン、クリソエリオール、ロスマ
リン酸、ロスマリン酸メチルエステルおよびアピゲニ
ン）が含まれることを確認した。

【００１２】ルテオリンの構造式は、以下に示すとおり
である。

【化１】 ルテオリンは、一般にマメ科の植物（ジギタリス等）中
に配糖体として存在することが知られる。ルテオリンの
生理活性については、抗酸化活性、ヒアルロニダーゼ阻
害活性等が知られている。本発明において、ルテオリン
をリポキシゲナーゼ阻害剤の有効成分としてを使用する
場合には、エゴマおよびシソの種子および葉から抽出・
精製する他、柑橘系の果皮等からも抽出・精製すること
が可能である。ただし、エゴマおよびシソの葉に含まれ
るルテオリンは微量であり、工業化に際しては、これらの
種子を用いるのが望ましい。

【００１３】クリソエリオールの構造式は、以下に示す
とおりである。

【化２】 クリソエリオールの生理活性については、抗癌性、抗菌
性を有するとの報告がわずかにある程度である。本発明
において、クリソエリオールをリポキシゲナーゼ阻害剤
の有効成分として使用する場合、エゴマまたはシソの種
子および葉から抽出・精製することが可能である。

【００１４】エゴマ種子およびシソ種子を原料として、
ルテオリン、クリソエリオールを抽出するために用いる
溶媒は、エタノールを用いるのが望ましい。エタノール
を用いると、有効成分が効率よく抽出されると同時に外
用、食用のいずれの用途であっても使用することができ
るからである。また、外用剤として使用する場合は、エ
タノールの他、酢酸エチル、アセトン、メタノール、ブ
タノール等を用いることも可能である。アルコール濃度
については、７０〜８５％（v／v）に調製するのが望ま
しい。７０％（v／v）未満であると、有効成分の抽出量
が不十分になり、また、８５％（v／v）を超えると、エ
ゴマ種子の油分がアルコール中に溶け出しやすくなるか
らである。なお、アルコール抽出は、有効成分の含有率
を向上させるため、種々の濃度で繰り返して行うのが望
ましい。

【００１５】エゴマ種子およびシソ種子のアルコール抽
出物には、通常、リポキシゲナーゼ阻害物質として、ル
テオリン、クリソエリオール、ロスマリン酸、ロスマリ
ン酸メチルエステルおよびアピゲニンがすべて含まれ
る。しかしながら、抽出条件等によりいずれかの物質が
存在しなくとも、これらのうち少なくとも１種または２
種以上が含まれていれば足りる。

【００１６】エゴマ種子またはシソ種子のアルコール抽
出物を酢酸エチルと水により分配するのは、これらの分
配により有効成分の濃度を大幅に上昇させることができ
るからである。分配層のうち、酢酸エチル層にはルテオ
リン、クリソエリオール、ロスマリン酸、ロスマリン酸
メチルエステルおよびアピゲニンが高濃度に含有され、
水層には、配糖体等の不活性成分が移行する。したがっ
て、この酢酸エチル層を分取することで、有効成分を効
率よく濃縮することが可能になる。

【００１７】前記アルコール抽出物および酢酸エチル分
配物は、そのままでもリポキシゲナーゼ阻害剤に配合す
ることができるが、これらに含まれる有効成分を精製す
ることが可能である。例えば、ルテオリンを精製する場
合、酢酸エチル層をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーに付し（クロロホルム：メタノール＝１０：１）、最
も活性の高いフラクションを回収し、混合溶媒（クロロ
ホルム：メタノール＝１５：１）の不溶性画分よりルテ
オリンを単離することができる。

【００１８】本発明において、エゴマ種子またはシソ種
子を用いる場合、これらの脱脂物を用いてアルコール抽
出すると、有効成分の濃度を大幅に上昇させることがで
きる。すなわち、エゴマ種子およびシソ種子の油分を有
機溶剤により抽出すると、油分にはルテオリン、クリソ
エリオール等の生理活性成分が殆ど含まれず、脱脂粕中
に有効成分が濃縮されるためである。脱脂用の有機溶剤
としては、例えばヘキサンを用いるとよい。抽出油分を
食用油として使用できるとともに、脱脂エゴマからの抽
出物を食品素材等として使用できるためである。また、
脱脂エゴマからの抽出物を外用剤（主に食品以外の用
途）として用いる場合は、ヘキサンに限ることなく、そ
の他の非極性溶媒を用いることも可能である。

【００１９】本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤の用途に
ついては、医薬品、医薬部外品、化粧料、食品素材等が
挙げられる。特に、本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤を
抗アレルギー剤または抗炎症剤として用いる場合、リポ
キシゲナーゼ活性阻害に起因する優れた抗アレルギー作
用および抗炎症作用を得ることが可能になる。

【００２０】本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤の投与方
法については、経口または非経口投与のいずれでもよ
い。経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤または錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与するがことがで
き、非経口投与する場合は、注射剤、点滴剤および固体
状または懸濁粘稠液として持続的な粘膜吸収が維持でき
るように坐薬のような剤型による投与の他、局所組織内
投与、皮内、皮下、筋肉内および静脈内注射、局所への
塗布、噴霧、坐剤、膀胱内注射などの外用的投与法も用
いることができる。投与量は、投与方法と病気の悪性
度、患者の年齢、病状や一般状態、病気の進行度等によ
って変化し得るが、大人では、通常、１日当たり有効成
分として０．５〜５０００ｍｇ、子供では通常０．５〜
３０００ｍｇが適当である。リポキシゲナーゼ阻害剤の
有効成分濃度については、剤型によって適宜変更するこ
とが可能であるが、通常、経口または粘膜吸収により投
与される場合は約０．３〜１５．０ｗ％、非経口投与に
よる場合は、０．０１〜１０ｗ％程度にするとよい。な
お、上記投与量については、一例であり、種々の状況に応
じて適宜変更可能である。

【００２１】本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤を医薬
品、医薬部外品または化粧料として用いる場合、医薬品
等に一般的に用いられる各種成分と併用することが可能
である。例えば、油分（動植物油、鉱物油、エステル
油、ワックス油、シリコン油、高級アルコール、リン脂
質類、脂肪酸類等）、界面活性剤（アニオン性、カチオ
ン性、両性または非イオン性界面活性剤）、ビタミン類
（ビタミンＡ群、ビタミンＢ群、葉酸類、ニコチン酸
類、パントテン酸類、ビオチン類、ビタミンＣ群、ビタ
ミンＤ群、ビタミンＥ群、その他フェルラ酸、γ−オリ
ザノール等）、紫外線吸収剤（ｐ−アミノ安息香酸、ア
ントラニル、サルチル酸、クマリン、ベンゾトリアゾー
ル、テトラゾール、イミダゾリン、ピリミジン、ジオキ
サン、フラン、ピロン、カンファー、核酸、アラントイ
ンおよびそれらの誘導体、アミノ酸系化合物、シコニ
ン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン等）、抗酸
化剤（ステアリン酸エステル、ノルジヒドログアセレテ
ン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシ
アニソール、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロ
ピル、セサモール、セサモリン、ゴシポール等）、増粘
剤（ヒドキシエチルセルロール、エチルセルロース、カ
ルボキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロール、カルボキシメチルセルロースナ
トリウム、ヒドキシプロピルセルロース、ニトロセルロ
ース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテ
ル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレー
ト、ポリアクリル酸塩、カルボキシビニルポリマー、ア
ラビアゴム、トラガントゴム、寒天、カゼイン、デキス
トリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、アルギン酸お
よびその塩等）、保湿剤（プロピレングリコール、１，
３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、グ
リセリン、コンドロイチン硫酸およびその塩、ヒアルロ
ン酸およびその塩、乳酸ナトリウム等）、その他、低級
アルコール、多価アルコール、水溶性高分子、ｐＨ調製
剤、防腐・防バイ剤、着色料、香料、清涼剤、安定化
剤、動・植物抽出物、動・植物性蛋白質およびその分解
物、動・植物性多糖類およびその分解物、動・植物性糖
蛋白質およびその分解物、微生物培養代謝成分、血流促
進剤、消炎剤、細胞賦活剤、アミノ酸およびその塩、角
質溶解剤、収斂剤、創傷治療剤、増泡剤、口腔用剤、消
臭・脱臭剤とともに配合して用いることができる。

【００２２】なお、これらの医薬品、医薬部外品または
化粧料として用いる場合の形態は、任意に選択すること
ができ、例えば、クリーム、軟膏、化粧水、ローショ
ン、乳液、パック、オイル、石鹸（薬用石鹸も含む）、
洗顔料、浴用剤、シャンプー、リンス、スプレー等の形
態とすることができる。その他、衛生綿類、ウェットテ
ィッシュ等の不織布に、口内炎等による口腔用組成物と
しても利用可能である。

【００２３】また、本発明のリポキシゲナーゼ阻害剤を
食品素材として用いる場合は、菓子類、麺類、スープ、
飲料等をはじめとする一般食品および、健康食品、栄養
補助食品等に応用することができる。例えば、リポキシ
ゲナーゼ阻害剤を粉末セルロースとともにスプレードラ
イまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または
溶液にすることで容易に食品に混入させることが可能に
なる。

【００２４】

【発明の効果】５−リポキシゲナーゼの代謝産物である
５−ＨＥＴＥはロイコトリエン類を生成し、アレルギー
や炎症反応を誘発し、１２−リポキシゲナーゼのアラキ
ドン酸代謝物である１２−ＨＥＴＥは、動脈硬化や癌の
転移に関与する生理活性物質と言われている。したがっ
て、本発明によれば、これらの生成を選択的に抑制する
ことにより、アレルギー性疾患、炎症、循環器系疾患、
癌、などを効果的に予防および治療することができる。
また、本発明によれば、エゴマ種子等の天然物から、優
れたリポキシゲナーゼ阻害物質を抽出することができ、
アレルギーやそれらに伴う炎症を抑制する食品素材等と
して有効に利用することができる。さらに、本発明によ
れば、エゴマ種子の食用油回収後の脱脂エゴマからリポ
キシゲナーゼ阻害剤を得ることができ、脱脂エゴマの新
たな用途を提供するものとなる。

【００２５】

【実施例】以下、本発明の実施例を説明する。 ［リポキシゲナーゼ阻害剤の調製］図２に示すように、
まず、エゴマ種子を破砕したものをヘキサンで還流し、
次いで、その残渣（脱脂エゴマ）を８０％（v／v）エタ
ノールで還流した。次に、８０％（v／v）エタノール還
流により得られたエタノールエキスをヘキサンと８０％
（v／v）メタノールで分配し、このメタノール層の溶媒
溜去後、さらに酢酸エチルと水で分配した。酢酸エチル
層と水層とを分離後、酢酸エチル層の溶媒を溜去し、酢
酸エチル分配物を得た。

【００２６】次いで、この酢酸エチル分配物をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノー
ル＝１０：１）に付し、フラクション１〜３に区分し
た。このうち、最初に溶出されてくるフラクション１を
混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝２０：１）に懸
濁し、その不溶性画分よりクレソエリオールを単離し
た。また、次に溶出されるフラクション２については、
混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１５：１）に懸
濁してその不溶性画分よりルテオリンを単離した。

【００２７】このようにエゴマ種子から単離されたルテ
オリン精製物を実施例１とし、クリソエリオール精製物
を実施例２とした。また、図２に示すエタノールエキス
を溶媒溜去して得られたエタノール抽出物を実施例３と
し、エタノール抽出物の分配による酢酸エチル層を溶媒
溜去して得られた酢酸エチル分配物を実施例４とした。

【００２８】［５−リポキシゲナーゼの阻害試験］次
に、実施例１〜実施例４のリポキシゲナーゼ阻害剤につ
いて、以下に示すように、５−リポキシゲナーゼの阻害
試験を行った。 (1)５−リポキシゲナーゼ酵素液の調製 Wister−King系正常ラット（１５０〜４００ｇ）に５％
（w／v）グリコーゲン（２０ｍｌ／ｋｇ）を腹腔内投与
し、その腹腔内液を回収した。遠心して得られた多形核
白血球の５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）の懸濁液
をホモジネートした後、遠心上清を５−リポキシゲナー
ゼの酵素液とした。

【００２９】(2)５−リポキシゲナーゼ活性阻害の測定 まず、実施例１〜実施例４について、それぞれ異なる濃
度のサンプル（４〜６種）を作成し、酵素液（２ｍｇ p
rotein／ｍｌ）０．０２ｍｌと［１−¹⁴Ｃ］アラキドン
酸（０．０５μＣi）を、各サンプル（０．０２ｍｌ）
およびＣａ²⁺、ＡＴＰの存在下、３７℃で５分インキュ
ベートした。その後、０．２ｍｌの０．５Ｎギ酸で反応
を停止し、代謝産物を３ｍｌの酢酸エチルで抽出した。
この抽出液を４℃でＴＬＣに付した後（石油エーテル：
エーテル：酢酸＝５０：５０：１（v／v））、オートラ
ジオグラフィーで代謝物を定量し、５−リポキシゲナー
ゼ阻害活性を求めた。なお、５−リポキシゲナーゼ阻害
活性は、サンプルの非共存下に得られた放射活性をコン
トロールとして求めた。

【００３０】比較例として、図２に示すフラクション３
を精製して得られたロスマリン酸（比較例１）およびロ
スマリン酸メチルエステル（比較例２）、エタノールエ
キスのヘキサン分配層を溶媒溜去して得られるヘキサン
分配物（比較例３）、並びに酢酸エチル／水分配の水層
を溶媒溜去して得られる水分配物（比較例４）について
も、同様な方法で５−リポキシゲナーゼ阻害活性を測定
した。結果を図３〜図５、図７および図８に示す。

【００３１】結果は、実施例１〜実施例４ともに優れた
５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示すものであった。特
に、図３に示す実施例１（ルテオリン）については、従
来より５−リポキシゲナーゼ阻害作用の報告がある比較
例１（ロスマリン酸）および比較例２（ロスマリン酸メ
チルエステル）よりも強い阻害活性を有するものであっ
た。。また、図５に示すように、実施例４（酢酸エチル
分配物）は、実施例３（エタノール抽出物）よりも優れ
た阻害活性を示したが、これは、エタノール抽出物から
活性の低い水溶性、油溶性の物質を除いた結果、活性成
分が酢酸エチル層に濃縮されためと考えられる。なお、
実施例３（エタノール抽出物）および実施例４（酢酸エ
チル分配物）の阻害活性は、ルテオリンの含有量に相関
するものと思われる。

【００３２】ここで、実施例１（ルテオリン）および実
施例２（クリソエリオール）と比較例１（ロスマリン
酸）および比較例２（ロスマリン酸メチルエステル）に
ついて、５−リポキシゲナーゼのＩＣ₅₀（５０％阻害濃
度）を求めた結果を表１に示す。なお、比較例５（カフ
ェー酸）および比較例６（ケルセチン）についても、同
様な方法によりＩＣ₅₀を求めたので合わせて表１に示
す。

【表１】 表１に示すように、実施例１（ルテオリン）のＩＣ
₅₀は、０．１μＭであり、他のものに比べきわめて高
い、優れた５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示す結果と
なった。

【００３３】［１２−リポキシゲナーゼの阻害試験］次
に、実施例１〜実施例４について、以下に示すように、
１２−リポキシゲナーゼ阻害試験を行った。 (1)１２−リポキシゲナーゼ酵素液の調製 Wister−King系正常ラット（１５０〜４００ｇ）から血
液を採取し、０．５ｍＭのＥＤＴＡを抗凝固剤として加
えた。この遠心上清（１２００ｒ．ｐ．ｍ．、１０分）
をさらに遠心（３０００ｒ．ｐ．ｍ．、１０分）し、沈
殿した血小板を２５ｍＭのTris−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
７．４）／１ｍＭ ＥＤＴＡ／１３０ｍＭＮａＣｌで洗
浄した。得られた血小板１ｍＭ ＥＤＴＡ懸濁液のホモ
ジネートを１２−リポキシゲナーゼ酵素液とした。

【００３４】(2)１２−リポキシゲナーゼの活性阻害の
測定 実施例１〜実施例４について、それぞれ異なる濃度のサ
ンプル（４〜６種）を作成し、酵素液（２ｍｇ protein
／ｍｌ）０．１３ｍｌと［１−¹⁴Ｃ］アラキドン酸
（０．０５μＣi）を、サンプル（０．０２ｍｌ）の共
存下で、３７℃、５分間インキュベートした。その後、
０．２ｍｌの０．５Ｎギ酸で反応を停止し、代謝産物を
３ｍｌの酢酸エチルで抽出した。この抽出物を室温でＴ
ＬＣに付した後（クロロホルム：メタノール：酢酸：水
＝９０：８：１：０．８（v／v））、オートラジオグラ
フィーで代謝物を定量し、１２−リポキシゲナーゼ阻害
活性を求めた。なお、１２−リポキシゲナーゼ阻害活性
は、リポキシゲナーゼ阻害剤の非共存下に得られた放射
活性をコントロールとして求めた。

【００３５】比較例として、図２に示すフラクション３
を精製して得られたロスマリン酸（比較例１）およびロ
スマリン酸メチルエステル（比較例２）、ヘキサン／８
０％メタノール分配のヘキサン層を溶媒溜去して得られ
るヘキサン分配物（比較例３）、並びに酢酸エチル／水
分配の水層を溶媒溜去して得られる水分配物（比較例
４）についても、同様な方法で５−リポキシゲナーゼ阻
害活性を測定した。結果を図３、図４および図６〜図８
に示す。

【００３６】結果は、実施例１〜実施例４ともに優れた
１２−リポキシゲナーゼ阻害活性を示すものであった。
特に、実施例１（ルテオリン）については、５−リポキ
シゲナーゼの阻害活性と同様に、きわめて強い阻害活性
を有するものであった。また、図６に示すように、実施
例４（酢酸エチル分配物）は、エタノール抽出物中の有
効成分が酢酸エチル分配物中に濃縮されるため、エタノ
ール抽出物（実施例３）よりも強い阻害活性を示した。

【００３７】［マウスのＴＰＡ誘導耳介浮腫に対する炎
症抑制試験］次に、実施例１、実施例３および実施例４
について、ＴＰＡ誘導耳介浮腫に対する炎症抑制作用を
試験した。 (1)経皮投与 所定量に調製したサンプル（実施例１、実施例３、実施
例４）を、ＴＰＡ（０．８μｇ／２０μｌ／ｅａｒ）の
アセトン溶液とともにマウス（ＩＣＲ系、５週齢、クレ
ア）の右耳介に塗布した。投与４時間後に左右の耳介片
重量を測定し、左耳介片に対する右耳介片の腫脹率を算
出し、さらにコントロール群に対する腫脹抑制率を求め
た。なお、コントロールとは、サンプルを投与していな
い群について同様の条件で試験を行ったものである。ま
た、比較例として、ＮＤＧＡ（比較例７）についても報
告されているデータを表２に記載した。

【表２】

【００３８】表２に示すように、５−リポキシゲナーゼ
阻害物質である比較例７（ＮＤＧＡ）が０．５ｍｇ／ｅ
ａｒで４０％の抑制率であるのに対し、実施例１（ルテ
オリン）が０．３ｍｇ／ｅａｒで１００％、実施例３
（エタノール抽出物）が１ｍｇ／ｅａｒで２５％、実施
例４（酢酸エチル分配物）が０．３ｍｇ／ｅａｒで４５
％、ＴＰＡによる耳介の浮腫を抑制した。すなわち、実
施例１、実施例３および実施例４ともに優れた腫脹抑制
率を示すことが判る。また、実施例１については、ルテ
オリンの濃度に相関する抗炎症作用が認められた。

【００３９】(2)経口投与 サンプルとして実施例４（エタノール抽出物）を１％餌
に混入し、１日当たり５ｇ、４週間投与した後、ＴＰＡ
アセトン溶液（０.８μｇ／２０μｌ／ｅａｒ）をマウ
ス（ＩＣＲ系、５週齢、クレア）の右耳介に塗布した。
投与４時間後に左右の耳介片重量を測定し、左耳介片に
対する右耳介片の腫脹率を算出し、さらにコントロール
群に対する腫脹抑制率を求めた。なお、コントロールと
は、サンプルを投与していない群について同様の条件で
試験を行ったものである。結果を表２に示す。

【００４０】表２に示すように、実施例４（エタノール
抽出物）の１％餌混入による腫脹抑制率は２０％であ
り、経口投与においても優れた抗炎症作用が認められ
た。なお、コントロール群と比較して体重の増減は認め
られなかった。

【００４１】［マウスのオキサゾロン誘導耳介浮腫に対
するアレルギー抑制試験］次に、実施例１および実施例
３について、オキサゾロン誘導耳介浮腫に対する抗炎症
作用を試験した。 (1)経皮投与 ネンブタールによる麻酔下、マウス（ＩＣＲ系、５週
齢、クレア）の腹部をバリカンで剃毛し、オキサゾロン
エタノール溶液（５００μｇ／１００μｌ）を塗布した
（感作）。感作５日後、右耳介に所定量のサンプル（実
施例１）を添加したオキサゾロンアセトン溶液（１００
μｇ／２０μｌ）を塗布し（チャレンジ）、４８時間後
の左右耳介片重量を測定した。左耳介片に対する右耳介
片の重量比を腫脹率として、コントロール群に対する腫
脹抑制率を求めた。なお、コントロールとはサンプルを
投与していない群について同様の条件で試験を行ったも
のである。また、比較例として、ＮＤＧＡ（比較例７）
ケトプロフェン（比較例８）、フェニドン（比較例
９）、メピラミン（比較例10）についても、報告されて
いるデータを表３に記載した。

【表３】

【００４２】表３に示すように、実施例１は、比較例７
〜１０に対し、より少ない投与量で高い腫脹抑制率を示
すものであった。すなわち、有効成分であるルテオリン
が優れた抗アレルギー作用を発揮していることが判る。 (2)経口投与 投与開始から耳介重量測定までの期間、サンプル（実施
例３）を１％餌に混入し、１日当たり５ｇ与えた。投与
開始８日後、剃毛した腹部にオキサゾロンエタノール溶
液による感作を行い、さらにその５日後、右耳介にオキ
サゾロンアセトン溶液を塗布し（チャレンジ）、４８時
間後の左右耳介片重量を測定した。左耳介片に対する右
耳介片の重量比を腫脹率として、コントロール群に対す
る腫脹抑制率を求めた。なお、コントロールとはサンプ
ルを投与していない群について同様の条件で試験を行っ
たものである。結果を表３に示す。

【００４３】表３に示すように、実施例３は、１％餌混
入でオキサゾロン誘導による耳介浮腫を３４％抑制し
た。すなわち、経口投与でも抗アレルギー作用が認めら
れた。なお、実施例３を投与したマウスについて、コン
トロール群と比較して体重の増減は認められなかった。

【図面の簡単な説明】

【図１】アラキドン酸代謝酵素の生理活性を説明するた
めの作用説明図である。

【図２】本発明の実施例によるリポキシゲナーゼ阻害剤
の調製方法を説明するための工程図である。

【図３】本発明の実施例によるルテオリン精製物の濃度
と、５−リポキシゲナーゼおよび１２−リポキシゲナー
ゼ阻害活性との関係を示す特性図である。

【図４】本発明の実施例によるクリソエリオール精製物
の濃度と、５−リポキシゲナーゼおよび１２−リポキシ
ゲナーゼ阻害活性との関係を示す特性図である。

【図５】本発明の実施例によるエタノール抽出物および
酢酸エチル分配物の濃度と、５−リポキシゲナーゼ阻害
活性との関係を示す特性図である。

【図６】本発明の実施例によるエタノール抽出物および
酢酸エチル分配物の濃度と、１２−リポキシゲナーゼ阻
害活性との関係を示す特性図である。

【図７】本発明の比較例によるロスマリン酸精製物の濃
度と、５−リポキシゲナーゼおよび１２−リポキシゲナ
ーゼ阻害活性との関係を示す特性図である。

【図８】本発明の比較例によるロスマリン酸メチルエス
テル精製物の濃度と、５−リポキシゲナーゼおよび１２
−リポキシゲナーゼ阻害活性との関係を示す特性図であ
る。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ルテオリンを有効成分とするリポキシゲ
   ナーゼ阻害剤。
2. 【請求項２】 クリソエリオールを有効成分とするリポ
   キシゲナーゼ阻害剤。
3. 【請求項３】 ルテオリン、クリソエリオール、ロスマ
   リン酸、ロスマリン酸メチルエステルおよびアピゲニン
   から選ばれる１種または２種以上を含むエゴマ種子のア
   ルコール抽出物を配合してなるリポキシゲナーゼ阻害
   剤。
4. 【請求項４】 ルテオリン、クリソエリオール、ロスマ
   リン酸、ロスマリン酸メチルエステルおよびアピゲニン
   から選ばれる１種または２種以上を含むエゴマ種子のア
   ルコール抽出物を酢酸エチルと水に分配し、この酢酸エ
   チル層から得られる酢酸エチル分配物を配合してなるリ
   ポキシゲナーゼ阻害剤。
5. 【請求項５】 前記エゴマ種子に脱脂エゴマ種子を用い
   る請求項３または４記載のリポキシゲナーゼ阻害剤。
6. 【請求項６】 前記エゴマ種子に代えて、シソ種子を用
   いる請求項３、４または５に記載のリポキシゲナーゼ阻
   害剤。
7. 【請求項７】 前記請求項１〜６のいずれか１項に記載
   のリポキシゲナーゼ阻害剤を含む抗アレルギー剤。
8. 【請求項８】 前記請求項１〜６のいずれか１項に記載
   のリポキシゲナーゼ阻害剤を含む抗炎症剤。