JPH10313874A - 腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質ｔｒ５ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＴＲ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法を提
供する。 【解決手段】 配列番号２のＴＲ５ポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０
％同一であり、かつＴＲ５ポリペプチドの活性を有する
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはこ
のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列
を含んでなるポリヌクレオチドを単離する。 【効果】 ＴＲ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
は炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患、移植拒絶反
応、移植片対宿主病、感染症、卒中、虚血、急性呼吸器
疾患症候群、乾癬、再狭窄、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾
患、癌、アテローム性動脈硬化症およびアルツハイマー
病を含む機能障害または疾病の治療と、このような症状
の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドは腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）関連タンパク質
（以後ＴＲ５と記す）に関する。本発明はまた、このよ
うなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの作用を阻害
または活性化することに関する。

【０００２】

【従来の技術】多くの生物学的作用、例えばある種の刺
激への応答や天然の生物学的プロセス、はサイトカイン
のような因子により制御されている。多数のサイトカイ
ンの作用は受容体と結合して細胞内応答を引き出すこと
により該受容体を介して行われる。例えば、腫瘍壊死因
子（ＴＮＦ）αおよびβは、感染からの防御やショック
および炎症疾患の誘導を含めて、さまざまな生物学的プ
ロセスを調節するようにＴＮＦ受容体を介して働くサイ
トカインである。ＴＮＦ分子は「ＴＮＦリガンド」スー
パーファミリーに属し、それらの受容体または対向リガ
ンド(counterligand) である「ＴＮＦ受容体」スーパー
ファミリーと一緒になって作用する。今までのところ、
ＴＮＦリガンドスーパーファミリーでは９つのメンバー
が同定されており、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーで
は１０のメンバーが特性付けられている。

【０００３】前記リガンドとしては、ＴＮＦ−α、リン
ホトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても知られ
ている）、ＬＴ−β（ヘテロ三量体ＬＴ−α２−β中に
見いだせる）、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、Ｃ
Ｄ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌおよび神経成長因
子（ＨＧＦ）が挙げられる。ＴＮＦ受容体スーパーファ
ミリーには、ｐ５５ＴＮＦ受容体、ｐ７５ＴＮＦ受容
体、ＴＮＦ受容体関連タンパク質、Ｆａｓ抗原またはＡ
ＰＯ−１、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、４−１Ｂ
Ｂ、ＯＸ４０、低親和性ｐ７５およびＮＧＦ受容体が含
まれる(Meager, A.,Biologicals, 22:291-295 (199
4))。

【０００４】ＴＮＦリガンドスーパーファミリーの多く
のメンバーは活性化されたＴ細胞により発現されるが、
このことは細胞の個体発生(ontogeny)および機能の根底
にある他の細胞型とＴ細胞との相互作用にとってそれら
が必要であることを示唆する( Meager, A., 前掲) 。

【０００５】ＴＮＦ受容体タンパク質の発現を阻止した
突然変異体を作製し同定することにより、ＴＮＦ受容体
ファミリーのいくつかのメンバーの本質的な特性をかな
り把握することができた。例えば、Ｆａｓ抗原とそのリ
ガンドの天然に存在する突然変異はリンパ球増殖性疾患
を引き起こしたが(Watanabe-Fukunaga, R.ら, Nature35
6:314 (1992))、おそらくこれはプログラムされた細胞
死の失敗を反映するのだろう。ＣＤ４０リガンドの突然
変異は、血漿中の高レベルの免疫グロブリンＭと低レベ
ルの免疫グロブリンＧにより特徴付けられるＸ連鎖性免
疫不全状態を引き起こし、このことは不完全なＴ細胞依
存性Ｂ細胞活性化を示している(Allen,R.C.ら, Science
259:990 (1993)) 。低親和性神経成長因子受容体の標
的突然変異は、末梢構造の不完全な感覚イノベーション
により特徴付けられる障害を引き起こす(Lee, K.F.ら,
Cell 69:737 (1992)) 。

【０００６】ＴＮＦおよびＬＴ−αは２つのＴＮＦ受容
体（５５ｋｄと７５ｋｄのＴＮＦ受容体）に結合するこ
とができる。ＴＮＦとＬＴ−αにより誘起される、それ
らの受容体を介した多くの生物学的作用として、移植し
た腫瘍の出血性の壊死、細胞傷害作用、内毒素ショック
におけるある種の役割、炎症、免疫調節、増殖および抗
ウイルス応答、並びに電離放射線の有害作用からの防御
が挙げられる。ＴＮＦおよびＬＴ−αは、内毒素ショッ
ク、大脳マラリア、腫瘍、自己免疫疾患、ＡＩＤＳおよ
び移植−宿主拒絶反応を含めて、さまざまな疾病の原因
に関係がある(Beutler, B. and Von Huffel, C., Scien
ce 264:667-668 (1994))。ｐ５５受容体の突然変異は微
生物感染に対する感受性を増大させる。

【０００７】さらに、ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＦａ
ｓのＣ末端近傍の約８０個のアミノ酸からなるドメイン
は、プログラムされた細胞死のシグナル伝達に関与して
いる「細胞死誘導領域」(death domain)であると報告さ
れた(Tartagliaら, Cell 74:845 (1993)) 。ＴＮＦファ
ミリーリガンドとＴＮＦファミリー受容体の作用は多様
であり、哺乳動物系の生物学的プロセスにおいて多くの
正常機能と異常機能の両方に影響を与える。それゆえ、
正常状態でまたは疾病状態で生物学的活性に影響を与え
るこの種の受容体およびリガンドを同定し特性付ける必
要性が確かに存在している。とりわけ、ＴＮＦ受容体フ
ァミリーの新規なメンバーを単離し、その特性を決定す
る必要がある。こうしたことは、これらの腫瘍壊死因子
受容体（ＴＮＦ−Ｒ）に治療用ターゲットとしての確立
され実証された歴史があることを示している。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性
腸疾患、乾癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染
症、卒中、虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損
傷、ＡＩＤＳ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾
患）、アテローム性動脈硬化症およびアルツハイマー病
を含むがこれらに限らない、機能障害または疾病を予防
し、改善し、治療する上である種の役割を果たし得る腫
瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）ファミリーの新たなメ
ンバーを同定して特性付ける必要性が存在している。本
発明はこのようなメンバーを提供するものである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、ＴＲ５ポリペプチドおよび組換え物質、並びに
その生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はＴＲ
５ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関
する。こうした使用には、とりわけ、慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性腸疾
患、乾癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染症、
卒中、虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損傷、
ＡＩＤＳ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾患）、ア
テローム性動脈硬化症およびアルツハイマー病の治療が
含まれる。他の態様では、本発明は、本発明により提供
される物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを
同定する方法、並びに同定された化合物を用いてＴＲ５
の不均衡と関連した状態を治療することに関する。本発
明のさらに他の態様は、不適当なＴＲ５活性またはＴＲ
５レベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイ
に関する。

【００１０】定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「ＴＲ５」とは、一
般的に配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドまたはそのアレリック変異体を意味する。「Ｔ
Ｒ５活性もしくはＴＲ５ポリペプチド活性」または「Ｔ
Ｒ５もしくはＴＲ５ポリペプチドの生物学的活性」と
は、類似の活性、向上した活性、または望ましくない副
作用が低下したこれらの活性を含めて、ＴＲ５の代謝的
または生理的機能を意味する。さらに、前記ＴＲ５の抗
原的および免疫原的活性も含まれる。「ＴＲ５ポリペプ
チド」とは、ＴＲ５配列と十分に類似したアミノ酸配列
を有するポリペプチドを指し、少なくとも一つのＴＲ５
の生物学的活性を示すものが好ましい。「ＴＲ５遺伝
子」とは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列を有
するポリヌクレオチドまたはそのアレリック変異体およ
び／またはそれらの相補体を意味する。

【００１１】「ＴＲ５ポリヌクレオチド」とは、ＴＲ５
ポリペプチドもしくはその断片をコードするヌクレオチ
ド配列、または配列番号２のポリペプチドもしくはその
対応する断片をコードするヌクレオチド配列と少なくと
も８０％同一であるヌクレオチド配列、または増幅反応
に使用できる条件下でまたはプローブもしくはマーカー
として使用できる条件下でハイブリダイズするのに十分
な配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性
をもつヌクレオチド配列を指す。本明細書中で用いる
「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗
体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａ
ｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの産物を
含むＦａｂフラグメントが含まれる。「単離された」と
は、天然の状態から「人間の手によって」改変されたこ
とを意味する。「単離された」組成物または物質が天然
に存在するのであれば、それはそのもとの環境から変化
しているか移動しており、またはその両方である。例え
ば、生存している動物の体内に自然界で存在するポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドは「単離された」もので
はないが、その天然状態の共存物質から分離されたポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書中で用い
られるように、「単離された」ものである。

【００１２】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドを指し、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１３】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, "Analysis for protein modificati
ons and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (1990)
182:626-646; および Rattan ら, "Protein Synthesi
s: Posttranslational Modifications and Aging",Ann
NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【００１４】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１５】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１６】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 本発明のＴＲ５ポリペプチドには、配列番号２のポリペ
プチド（特に成熟ポリペプチド）だけでなく、配列番号
２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、配列番号２のア
ミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
８５％、より好ましくは少なくとも９０％、さらに好ま
しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
ポリペプチドも含まれる。

【００１７】ＴＲ５ポリペプチドは「成熟」タンパク質
の形であっても、融合タンパク質のような、より大きい
タンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のア
ミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミ
ノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ配
列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、ま
たは組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列など
がある。

【００１８】また、ＴＲ５ポリペプチドの生物学的に活
性な断片も本発明に含まれる。こうした断片は全体的に
前記ＴＲ５ポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一で
あるが、全部とは同一でないアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドである。ＴＲ５ポリペプチドと同様に、断片は
「フリースタンディング」（それ自体で独立）していて
も、より大きいポリペプチド内に含まれていてもよく、
つまりその大きいポリペプチドの一部または一領域、最
も好ましくは一つの連続領域、を断片が構成していても
よい。本発明のポリペプチド断片の代表的な例として、
およその見当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４
１−６０、６１−８０、８１−１００、および１０１か
らＴＲ５ポリペプチドの末端までの断片が挙げられる。
ここで、「およそ」とは、上記の範囲の一端または両端
で数個、５個、４個、３個、２個または１個のアミノ酸
が増えたり減ったりした範囲を含むものである。

【００１９】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、Ｔ
Ｒ５ポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケーシ
ョン(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、αヘ
リックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシート
形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル形
成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β
両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合領
域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造的
または機能的特性により特徴づけられる断片も好適であ
る。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、
その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減
少した断片を含めて、ＴＲ５活性を媒介するものであ
る。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫
原性がある断片も含まれる。

【００２０】かくして、本発明のポリペプチドには、配
列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である
アミノ酸配列を有するポリペプチド、または配列番号２
の対応する断片と少なくとも８０％同一であるその断片
が含まれる。これらのポリペプチドはどれも、抗原活性
を含めたＴＲ５の生物学的活性を保持することが好まし
い。特定された配列および断片の変異型もこのグループ
に含まれる。好適な変異型は同類アミノ酸置換により対
象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様の性質の
他の残基で置換されているものである。典型的なこうし
た置換は、Ala,Val, Leu と Ileの間；Ser とThr の
間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGlnの間；塩基性
残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr の間
で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個または１
〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失または付
加されている変異型が好適である。

【００２１】本発明のＴＲ５ポリペプチドは任意の適当
な方法で製造することができる。このようなポリペプチ
ドには、単離された天然に存在するポリペプチド、組換
え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造されたポ
リペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造さ
れたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチド
の製造のための手段は当業界でよく理解されている。

【００２２】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの態様はＴＲ５ポリペプチドをコード
する単離されたポリヌクレオチド、およびこれらと密接
に関連したポリヌクレオチドに関する。本発明のＴＲ５
は、ヒトＴＲ５をコードするｃＤＮＡの塩基配列決定の
結果から明らかなように、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ
−Ｒ）の他のタンパク質と構造的に関連している。この
ｃＤＮＡ配列は推定分子量が３１．８ｋＤａである２９
９個のアミノ酸からなるタンパク質をコードするオープ
ンリーディングフレームを含んでいる。図１〜３のＴＲ
５（配列番号２）は２７４個のアミノ酸残基においてヒ
ト低親和性神経成長因子受容体（ＬＮＧＦ−Ｒ）(SWISS
PROT Accession:NGFR HUMAN; D. Johnson ら, Cell 47:
545-554 (1986)) と約２５．６％同一である（(GCG sui
te of Programsからの)BESTFIT使用）。さらに、ＴＲ５
（配列番号２）は２８１個のアミノ酸残基においてラッ
ト低親和性神経成長因子受容体(SWISSPROT Accession:
NGFR RAT; M.J. Radekeら, Nature 325:593-597 (198
7))と２２．４％同一である。図１〜３のＴＲ５遺伝子
（配列番号１）は３７個のヌクレオチド残基においてホ
モサピエンスＣｐＧ島ＤＮＡゲノムＭｓｅＩ断片 (Genb
ank Accession Z54987; S.H. Crossら, Nature Genet.
6:236-244 (1994)) と約８９％同一である（BLAST 使
用）。さらに、ＴＲ５は１９５個のヌクレオチド残基に
おいてO. cuniculus KAP4C ｍＲＮＡ (Genbank Accessi
on X80035; B.C.Powell ら, Differentiation 58:227-2
32 (1995))と５２％同一である。

【００２３】ＴＲ５をコードする本発明の一つのポリヌ
クレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニ
ングにより、前立腺、内皮細胞、ＩＬ−１βで処理した
平滑筋細胞、胎児肝臓脾臓細胞および妊娠子宮の細胞中
のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、
発現配列タグ（expressed sequence tag: EST)分析 (Ad
ams, M.D. ら, Science (1991) 252:1651-1656; Adams,
M.D. ら, Nature (1992) 355:632-634; Adams, M.D.
ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174) を用いて得ること
ができる。また、本発明のポリヌクレオチドはゲノムＤ
ＮＡライブラリーのような天然源から得ることができ、
商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成することも
できる。

【００２４】かくして、ＴＲ５ポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列は、その全長において図１〜３中の
コード配列（配列番号１）と同一であっても、配列番号
２のポリペプチドをコードする該ヌクレオチド配列の縮
重型であっても、配列番号２のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列と高度に同一であってもよい。好ま
しくは、本発明のポリヌクレオチドとして、ＴＲ５ポリ
ペプチドをコードするヌクレオチド配列と高度に同一で
あって少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列、
または図１〜３に示したコードヌクレオチド配列（配列
番号１）と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配
列、または配列番号２のポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチ
ド配列が含まれる。

【００２５】本発明のポリヌクレオチドをＴＲ５ポリペ
プチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌク
レオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列またはそ
の断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもしく
は分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパ
ク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするも
の）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプ
チドのコード配列またはその断片が含まれる。例えば、
融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコ
ードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例とし
て、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)に
より提供されかつGentz ら, Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ−ヒス
チジンペプチド、またはＨＡタグである。また、このポ
リヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例えば、転
写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポ
リアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、およびｍ
ＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２６】本発明の特に好適な具体例は、図１〜３に
示したアミノ酸配列（配列番号２）を有するＴＲ５ポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドおよびその変異
体である。さらに好適な具体例は、数個、５〜１０個、
１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミノ酸
残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されてい
る、図１〜３のＴＲ５ポリペプチドのアミノ酸配列（配
列番号２）を有するＴＲ５変異体をコードするポリヌク
レオチドである。

【００２７】本発明のさらに好適な具体例は、図１〜３
に示したアミノ酸配列（配列番号２）を有するＴＲ５ポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドと全長におい
て少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド、およ
び該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドであ
る。ここで、前記ＴＲ５ポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドと全長において８０％以上同一であるポリ
ヌクレオチドがより好ましく、特に９０％以上同一であ
るものが好ましい。さらに、９７％以上同一であるもの
が非常に好ましく、９８〜９９％同一であるものがさら
に好ましく、９９％以上同一であるものが最も好まし
い。

【００２８】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に９５％以上、好ましくは９７％以上の同一
性があるときだけハイブリダイゼーションが起こる条件
を指す。

【００２９】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
と実質的に同一である本発明のポリヌクレオチドは、Ｔ
Ｒ５ポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノ
ムクローンを単離するために、また、ＴＲ５遺伝子との
配列類似性が高い他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムク
ローンを単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ
のハイブリダイゼーションプローブとして用いることが
できる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業
者には公知である。一般的に、これらのヌクレオチド配
列は対象物のヌクレオチド配列と７０％、好ましくは８
０％、より好ましくは９０％同一である。プローブはた
いてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましくは３
０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを有してい
てもよい。特に好ましいプローブは３０〜５０個の範囲
のヌクレオチドを有するものである。本発明のポリヌク
レオチドおよびポリペプチドは、動物およびヒトの疾病
に対する治療薬および診断薬を探索するための研究用の
試薬および材料として利用することができる。

【００３０】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３１】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレイ
プローディング(scrape loading)、射出導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３２】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３３】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００３４】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００３５】スクリーニングアッセイで使用するためＴ
Ｒ５ポリペプチドを発現させようとする場合、そのポリ
ペプチドを細胞の表面に産生させることが好適である。
この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立っ
て細胞を回収する。ＴＲ５ポリペプチドが培地に分泌さ
れる場合は、そのポリペプチドを回収し精製するために
培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞
をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必要が
ある。

【００３６】組換え細胞培養物からＴＲ５ポリペプチド
を回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタノ
ール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマ
トグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、
疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティーク
ロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグ
ラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公
知の方法を用いることができる。最も好ましくは、高速
液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリペプ
チドが単離および／または精製中に変性されるときは、
タンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活
性のあるコンフォメーションを復元することが可能であ
る。

【００３７】診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのＴＲ５ポリヌクレオチド
の使用に関する。機能障害と関連したＴＲ５遺伝子の変
異型の検出は、ＴＲ５の過少発現、過剰発現または変化
した発現により生ずる疾病またはその罹病性の診断に追
加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツールを提
供するだろう。ＴＲ５遺伝子に変異がある個体を、さま
ざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができ
る。

【００３８】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ＴＲ５ヌ
クレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定でき
る。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とはＲ
Ｎアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別
できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いるも
しくは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度
の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても検
出できる（例えば、Myers ら, Science (1985) 230:124
2 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレアー
ゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよび
Ｓ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確
認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (19
85) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様では、
例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行う
ため、ＴＲ５ヌクレオチド配列またはその断片を含むオ
リゴヌクレオチドプローブのアレイを構築することがで
きる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有
し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含め
た分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用い
られている（例えば、M. Chee ら, Science, Vol.274,
pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００３９】診断アッセイは、前記の方法によりＴＲ５
遺伝子の変異を検出することで、慢性および急性炎症、
関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性腸疾患、乾
癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染症、卒中、
虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損傷、ＡＩＤ
Ｓ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾患）、アテロー
ム性動脈硬化症およびアルツハイマー病への罹りやすさ
を診断または判定する方法を提供する。

【００４０】さらに、被験者から得られたサンプルから
ＴＲ５ポリペプチドまたはＴＲ５ｍＲＮＡのレベルの異
常な低下または増加を測定する方法により、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性
腸疾患、乾癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染
症、卒中、虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損
傷、ＡＩＤＳ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾
患）、アテローム性動脈硬化症およびアルツハイマー病
の診断を下すことができる。発現の低下または増加は、
当技術分野で公知のポリヌクレオチド定量法のいずれ
か、例えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテク
ション、ノーザンブロット、その他のハイブリダイゼー
ション法によりＲＮＡレベルで測定することができる。
宿主から得られたサンプル中のＴＲ５ポリペプチドのよ
うなタンパク質のレベルを測定するためのアッセイ法は
当業者によく知られている。こうしたアッセイ法とし
て、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエス
タンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４１】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。

【００４２】ＴＲ５の遺伝子は第８染色体のトップ（ｐ
末端）から約４２〜６０ｃＭの遺伝子座８ｐ１２と８ｐ
２２の間に位置することが確認された。患者と正常個体
とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることがで
きる。患者の一部または全部に変異が観察されるが、ど
の正常個体にも観察されない場合は、その変異が疾病の
原因である可能性がある。

【００４３】抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、ＴＲ５ポリペプチドに
免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使用
することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従
来技術における他の関連ポリペプチドに対するその親和
性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い親
和性を有することを意味する。

【００４４】ＴＲ５ポリペプチドに対する抗体は、慣用
のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外）
に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類似体
もしくは細胞を投与することにより得られる。モノクロ
ーナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により産生
される抗体をもたらす任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.お
よびMilstein, C., Nature (1975) 256:495-497)、トリ
オーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AN
D CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 19
85) などがある。

【００４５】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。ＴＲ５ポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、慢
性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患
（例：炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶反応、移植片対
宿主病、感染症、卒中、虚血、急性呼吸器疾患症候群、
再狭窄、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患、癌（例：リンパ球
増殖性疾患）、アテローム性動脈硬化症およびアルツハ
イマー病の治療に使用できる可能性がある。

【００４６】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性および急性
炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性腸疾
患、乾癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染症、
卒中、虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損傷、
ＡＩＤＳ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾患）、ア
テローム性動脈硬化症およびアルツハイマー病から前記
動物を防御するための抗体および／またはＴ細胞免疫応
答を生ずるのに十分なＴＲ５ポリペプチドまたはその断
片を哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を疾病から防御する抗体を産
生させるような免疫学的応答を引き出すために、in viv
o でＴＲ５ポリヌクレオチドの発現を指令するベクター
を介してＴＲ５ポリペプチドを供給することを含んでな
る、哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関
する。

【００４７】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてＴＲ５ポリペプチド
に対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製
剤（組成物）に関し、この組成物はＴＲ５ポリペプチド
またはＴＲ５遺伝子を含有する。ワクチン製剤は適当な
担体をさらに含んでいてもよい。ＴＲ５ポリペプチドは
胃の中で分解されうるので、非経口的（皮下、筋肉内、
静脈内、皮内等への注射を含む）に投与することが好ま
しい。非経口投与に適した製剤としては、酸化防止剤、
緩衝剤、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等張に
する溶質を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並
びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる水性および非水性
の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量容器または
数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で
提供することができ、また、使用直前に無菌の液状担体
を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管することもで
きる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するた
めのアジュバント系、例えば水中油型のアジュバント系
や当技術分野で公知の他のアジュバント系を含んでいて
もよい。投与量はワクチンの比活性で変化し、ルーチン
な実験操作により簡単に決定できる。

【００４８】スクリーニングアッセイ 本発明者らは、今回、配列番号３のＴＬ２（ＴＲＡＩＬ
としても知られている；TWiley SR ら, Immunity (6):6
73-682 (1995))がＴＲ５のリガンドであることを見いだ
した。したがって、本発明のＴＲ５ポリペプチドとその
リガンドの一つＴＬ２は、本発明の受容体ポリペプチド
またはそのリガンドＴＬ２と結合して該受容体ポリペプ
チドまたはそのリガンドを活性化する化合物（アゴニス
ト）またはその活性を阻害する化合物（アンタゴニス
ト）のスクリーニング法において使用することができ
る。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細
胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産
物の混合物中の小分子基質およびリガンドの結合を評価
するためにも用いられる。これらの基質およびリガンド
は天然の基質またはリガンドであっても、構造的または
機能的な模擬物（ミメティック）であってもよい（Coli
gan ら, Current Protocols in Immunology 1(2):Chapt
er 5 (1991)を参照のこと）。

【００４９】ＴＲ５ポリペプチドは多くの病理を含めて
多様な生物学的機能に関与している。したがって、一方
ではＴＲ５ポリペプチドを刺激し、他方ではＴＲ５ポリ
ペプチドの機能を阻害するまたはＴＲ５ポリペプチドを
発現している細胞を除去する化合物および薬物を見つけ
出すことが望まれる。アンタゴニスト、またはＴＲ５発
現細胞を除去する薬物は、慢性および急性炎症、関節
炎、敗血症、自己免疫疾患（例：炎症性腸疾患、乾
癬）、移植拒絶反応、移植片対宿主病、感染症、卒中、
虚血、急性呼吸器疾患症候群、再狭窄、脳損傷、ＡＩＤ
Ｓ、骨疾患、癌（例：リンパ球増殖性疾患）、アテロー
ム性動脈硬化症およびアルツハイマー病のような症状の
治療および予防目的で用いられる。アゴニストはＴ細胞
および免疫系の他の成分の活性化に応答する症状、例え
ば癌やＡＩＤＳ、の治療および予防目的で使用しうる。
しかし、アゴニストは免疫活性のダウンモジュレーショ
ンにむすびつくＴ細胞と免疫系の他の成分の不適切な刺
激のために、慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自
己免疫疾患（例：炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶反
応、移植片対宿主病、感染症、卒中、虚血、急性呼吸器
疾患症候群、再狭窄、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患、癌
（例：リンパ球増殖性疾患）、アテローム性動脈硬化症
およびアルツハイマー病のような症状の治療または予防
目的で使用できる。

【００５０】候補化合物はＴＬ２のＴＲ５への結合を阻
害する化合物を検出する無細胞系または細胞系のアッセ
イを用いて同定することができる。適当な無細胞系アッ
セイは当業者が簡単に設定しうる。例えば、ＴＲ５の細
胞外ドメインを含む精製ＴＲ５または精製ＴＲ５誘導体
を適当な表面に直接的または間接的に（例えば、ＴＲ５
に対する抗体を介して）固定化し、精製ＴＬ２のＴＲ５
への結合をブロックする能力により候補化合物を同定す
るＥＬＩＳＡフォーマットを使用できる。ＴＬ２のＴＲ
５への結合はＴＬ２に直接的または間接的に結合させた
標識を用いることで検出できる。適当な検出系として
は、ストレプトアビジン・ホースラディッシュペルオキ
シダーゼ結合体、またはタグ（例：フルオレセイン）に
よる直接結合がある。反対に、精製ＴＬ２を適当な表面
に固定化して、精製ＴＲ５のＴＬ２への結合をブロック
する能力により候補化合物を同定することもできる。Ｔ
Ｒ５のＴＬ２への結合はＴＲ５に直接的または間接的に
結合させた標識を用いることで検出できる。ＴＲ５タン
パク質とそのリガンドを用いる他の多くのアッセイフォ
ーマットも使用可能である。

【００５１】適当な細胞系アッセイも当業者が簡単に設
定しうる。一般に、このようなスクリーニング法では、
細胞表面に本発明の受容体ポリペプチドを発現する適切
な細胞を作製することが必要である。かかる細胞として
哺乳動物、酵母、ショウジョウバエまたは大腸菌に由来
する細胞が挙げられる。次いで、該受容体を発現する細
胞（または発現した受容体を含む細胞膜）をＴＬ２のよ
うな既知のリガンドまたは試験化合物と接触させて、そ
の結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察す
る。これらのアッセイでは候補化合物の結合を簡単に試
験することができ、そこでは候補化合物に直接的または
間接的に結合された標識により、または標識した競合物
質（例えば、リガンドＴＬ２）との競合を用いるアッセ
イにより、該受容体を担持する細胞への付着が検出され
る。さらに、これらのアッセイでは、その表面に該受容
体もしくはそのリガンドまたはその融合タンパク質を担
持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物が該受
容体またはそのリガンド（例：ＴＬ２）の活性化により
生ずるシグナルを結果的にもたらすか否かを試験するこ
とができる。典型的な融合相手としては、該受容体また
はリガンドの細胞外ドメインと第２受容体の細胞内チロ
シンキナーゼドメインとの融合がある。一般的に、活性
化の阻害剤はリガンドＴＬ２のような既知のアゴニスト
の存在下でアッセイされ、そして候補化合物の存在がア
ゴニストによる活性化に与える影響が調べられる。この
ようなスクリーニングアッセイを行うための標準的な方
法は当業界でよく理解されている。

【００５２】ＴＲ５の潜在的なアンタゴニストの例とし
ては、抗体、ある場合には、ＴＲ５のリガンドと密接な
関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例
えば、リガンドＴＬ２の断片）、または該受容体もしく
はそのリガンドと結合するが応答を誘導しない（それゆ
え該受容体の活性を妨げる）小分子などがある。ＴＲ５
の潜在的なアゴニストの例としては、ＴＲ５、そのリガ
ンド（例：ＴＬ２）またはその誘導体と結合する抗体、
およびＴＲ５と結合する小分子がある。これらのアゴニ
ストは天然リガンドとの接触により誘起される応答の全
体または一部によく似た応答を引き出すだろう。

【００５３】また、ＴＲ５の全部または一部を適当な結
合相手ペプチド（その検出試薬が入手可能なもの）と融
合させた融合体（例えば、ＴＲ５−ＩｇＧ融合体）を含
めて、ＴＲ５を可溶性のタンパク質として発現させて、
固相または液相結合アッセイで用いることができる。例
えば、可溶性ＴＲ５を用いて、表面プラズモン共鳴、核
磁気共鳴分光、沈降、熱量測定のような実験的に検出可
能な変化により、直接的にアゴニストまたはアンタゴニ
ストの結合を検出することができる。また、可溶性ＴＲ
５を用いて、候補アゴニストまたはアンタゴニストとリ
ガンド（その結合が検出可能）との競合を調べること
で、アゴニストまたはアンタゴニストの結合を間接的に
検出することもできる。リガンドの検出法として、抗体
認識、放射性標識化によるリガンドの修飾、化学的修飾
（例：ビオチン化）、エピトープタグへの融合などがあ
る。方法としては、ＥＬＩＳＡに基づくアッセイ、免疫
沈降およびシンチレーション近接などがある。

【００５４】可溶性のＴＲ５または膜結合型のＴＲ５を
用いる上記方法と類似したアッセイにより、ＴＲ５の１
種以上のリガンドを同定し精製することもできる。これ
らのリガンドは該受容体のアゴニストまたはアンタゴニ
ストでありうる。ＴＲ５の潜在的なアンタゴニストの例
としては、抗体、ある場合には、ＴＲ５ポリペプチドの
リガンド、基質、受容体など（場合による）と密接な関
係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例え
ば、リガンド、基質、受容体の断片）、または本発明の
ポリペプチドと結合するが応答を誘導しない（それゆえ
該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子などがある。

【００５５】ＴＲ５のｃＤＮＡ、タンパク質または該タ
ンパク質に対する抗体を用いて、細胞におけるＴＲ５ｍ
ＲＮＡおよびタンパク質の生産に及ぼす添加化合物の効
果を検出するためのアッセイを構築することができる。
例えば、当技術分野で公知の標準的な方法により、モノ
クローナルまたはポリクローナル抗体を用いてＴＲ５タ
ンパク質の分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定する
ＥＬＩＳＡを構築し、これを安定に遺伝子操作した細胞
または組織からのＴＲ５の生産を抑制または増強する薬
物（すなわち、アンタゴニストまたはアゴニスト）を探
索するために用いることができる。

【００５６】予防および治療法 本発明は、ＴＲ５ポリペプチド活性の過剰量と不足量の
どちらにも関係した異常な状態の治療法を提供する。Ｔ
Ｒ５ポリペプチドの活性が過剰である場合は、いくつか
のアプローチが利用可能である。一つのアプローチは、
ＴＲ５ポリペプチドに対するリガンドの結合をブロック
することにより、または第２のシグナルを抑制すること
で異常な状態を軽減することにより、活性を阻害するの
に有効な量で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）
を製剤学上許容される担体とともに患者に投与すること
を含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のＴ
Ｒ５ポリペプチドとの競合状態でリガンドと結合する能
力がまだある可溶性形態のＴＲ５ポリペプチドを投与す
ることができる。このような競合物質の典型的な例はＴ
Ｒ５ポリペプチドの断片である。

【００５７】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ＴＲ５ポリペプチドをコードする遺伝子の
発現を抑制することができる。こうした公知技術は、体
内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列の
使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleotides as
Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRC Pres
s, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neurochem
(1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、この遺伝
子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供
給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic Acids
Res (1979) 6:3073; Cooney ら, Science (1988) 241:4
56; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照のこ
と。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することもで
きるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させることも
できる。

【００５８】ＴＲ５およびその活性の過少発現に関係し
た異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプローチ
を取ることができる。一つのアプローチは、治療上有効
な量のＴＲ５を活性化する化合物（すなわち、前記のア
ゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに患者に投
与して、異常な状態を緩和することを含んでなる。別法
として、患者の関連細胞においてＴＲ５を内因的に産生
させるために遺伝子治療を用いることができる。例え
ば、上で述べたような複製欠損レトロウイルスベクター
による発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺伝子
操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離し、本
発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有するレト
ロウイルスプラスミドベクターで形質導入されたパッケ
ージング細胞に導入する。その結果、パッケージング細
胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイルス粒子を産
生するようになる。in vivo での細胞処理およびin viv
o でのポリペプチド発現のために、これらの産生細胞を
患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Human
Molecular Genetics, T Strachanand A P Read, BIOSSc
ientific Publishers Ltd (1996) 中のChapter 20, Gen
e Therapy and otherMolecular Genetic-based Therape
utic Approaches(およびその中の引用文献)を参照のこ
と。

【００５９】製剤および投与 可溶性形態のＴＲ５ポリペプチドのようなペプチド、ア
ゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分子
は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化すること
ができる。このような製剤は治療上有効な量のポリペプ
チドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または賦
形剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生理
食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノー
ル、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らな
い。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当
技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記
の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器
を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００６０】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００６１】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００６２】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００６３】

【実施例】以下の実施例は、詳細に記載したところを除
けば、当業者に公知で慣用の標準技法を用いて実施し
た。これらの実施例は本発明を例示するもので、限定す
るものではない。実施例１ ヒト前立腺から作製されたｃＤＮＡライブラリーに由来
し、市販のＥＳＴデータベースに保管されたＥＳＴ（Ｅ
ＳＴ＃213397; Project ID HPRCB54) がヒトＴＮＦ受容
体との配列類似性をもつことがわかった。いくつかのオ
ーバーラップするＥＳＴを検索したところ、それがこの
アセンブリーの5'側の大部分のＥＳＴを表すことがわか
り、その配列を完全に解析した。１４１０個のヌクレオ
チドからなるｃＤＮＡ配列の解析から、これがＴＮＦ受
容体スーパーファミリーの新規なメンバーの完全なオー
プンリーディングフレームをコードすることがわかり、
これをＴＲ５と命名した。想定されたタンパク質は長さ
が３００アミノ酸で、分泌に必要とされるアミノ末端の
疎水性シグナル配列を含有する。アミノ酸番号６５／６
６結合部で切断が起こると推定された。これは、シグナ
ル配列がアミノ酸１−６５（または４１位の第２メチオ
ニンで翻訳が開始するのであればアミノ酸４１−６５）
であり、成熟タンパク質はアミノ酸６６−２９９である
（すなわち２３４個のアミノ酸からなる）ことを意味す
る。どちらの開始部位が使われるのかは不明である。さ
らに、このタンパク質はカルボキシ末端の疎水性領域を
含むが、細胞質テイルを欠失しており、これは開裂を受
けてグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）
結合により細胞外膜表面につながれるタンパク質に特徴
的である。細胞の表面に見いだされることに加えて、Ｇ
ＰＩ結合型タンパク質はまたＧＰＩ結合の開裂により分
泌タンパク質として細胞から酵素的に放出され得る。Ｔ
Ｒ５と他のＴＮＦ受容体ファミリータンパク質を比較し
たところ、ＴＲ５はこのファミリーの細胞外ドメインに
特徴的なシステインに富む反復配列の完全なコピーを少
なくとも２つと部分的なコピーを一つもつことが判明し
た。ＴＮＦ受容体ファミリーのリガンド結合ドメインに
特徴的なこれらの反復領域とそのカルボキシ末端の間に
は、グルタミン酸（Ｅ）、トレオニン（Ｔ）、セリン
（Ｓ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）およびグリシ
ン（Ｇ）に富む約１５アミノ酸からなる反復配列が５つ
存在する。このような配列は一般にセリンおよびトレオ
ニン上のＯ−グリコシル化に富む領域と関連がある。Ｔ
Ｒ５は、やはり膜に近接したＯ−グリコシル化領域をも
つ低親和性ＮＧＦ受容体の細胞外ドメインに最も類似し
ている。

【００６４】染色体位置 上で得られた完全なＴＲ５ｃＤＮＡをGenbank に対して
検索し、3'非翻訳領域（3'ＵＴＲ）と配列標識部位 (Se
quence Tagged Site：STS) (Genbank Accession #G2317
8;ヒトSTS WI-11701）との間の正確な一致（マッチ）を
確認した。ＳＴＳ配列はランダムに配列決定された3'Ｕ
ＴＲからしばしば選択されるＰＣＲプライマー対から誘
導され、続いて放射線ハイブリッドマッピングや他の物
理的マッピング法によりその染色体位置をマップする目
的で用いられる。このＳＴＳは第８染色体の特定領域８
ｐ１２と８ｐ２２の間（第８染色体のトップから４２−
６０ｃＭでマーカーＤ８Ｓ２９８とＤ８Ｓ５０５の間）
にすでに位置確認されている。この染色体領域にマップ
された既知のＴＮＦ受容体ファミリーメンバーは全く知
られていない。

【００６５】ＴＲ５のノーザンブロット 各種の組織および細胞系をノーザンブロットによりｍＲ
ＮＡ発現についてスクリーニングした。Tri-Reagent (M
olecular Research Center Inc., Cincinnati,OH)を用
いて細胞および細胞系からＲＮＡを調製し、変性アガロ
ースゲルで電気泳動を行い (Sambrookら, Molecular Cl
oning: a laboratory manual, 2^nd Ed,Cold Spring Har
bor Lab Press, NY (1988)) 、25mM NaOH 中、90分の減
圧ブロッティングによりZeta-プローブナイロン膜 (Bio
rad, Hercules, CA) に移行させた。3M NaCl を含有す
る1M Tris-HCl, pH 7.5 で５〜10分中和した後、ブロッ
トを 50%ホルムアミド、8%デキストラン硫酸、6 x SSP
E、0.1% SDSおよび100mg/mlの剪断・変性サケ精子ＤＮ
Ａと少なくとも30分、42℃でプレハイブリダイズさせ
た。ｃＤＮＡプローブをランダムプライミング (Strata
gene, La Jolla, CA)により³²Ｐ−ＣＴＰで標識し、0.2
5M NaOHで短時間変性し、プレハイブリダイゼーション
溶液に加えた。42℃で少なくとも24時間さらにインキュ
ベートした後、ブロットを高ストリンジェンシー条件下
で洗い、Ｘ線フィルムに露出した。

【００６６】ＴＲ５は休止中のＣＤ19⁺ Ｂリンパ球とＣ
Ｄ８⁺ およびＣＤ４⁺ Ｔリンパ球において発現してい
た。しかし、ＣＤ８⁺ およびＣＤ４⁺ Ｔリンパ球のＰＨ
Ａ＋ＰＭＡによる活性化の48時間後にＲＮＡは検出でき
なかった。ＴＲ５メッセージの最高の発現が骨髄で見ら
れた。また、高い発現が単球および大動脈内皮細胞にお
いても検出された。ＲＮＡはＫＧｌａ造血細胞系、ＤＭ
ＳＯ処理（顆粒球の分化をもたらす）後のＨＬ６０細
胞、およびＰＭＡ処理（単球の分化をもたらす）後のＵ
９３７およびＴＨＰ１細胞中に存在していた。また、Ｈ
ｅＬａ細胞中でもＲＮＡが検出できた。大きさが1.6 kb
から5 kbまでの複数（４）の形態のＲＮＡが検出され
た。リンパ球で発現された主な形態は大きさが1.6 kbと
2.5 kbであった。内皮細胞で発現された主な形態は大き
さが1.6 kb、3.5 kbおよび5 kbのＲＮＡであった。

【００６７】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１４１０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CACGAGCCTC TCCACGCGCA CGAACTCAGC CAACGATTTC TGATAGATTT TTGGGAGTTT 60 GACCAGAGAT GCAAGGGGTG AAGGAGCGCT TCCTACCGTT AGGGAACTCT GGGGACAGAG 120 CGCCCCGGCC GCCTGATGGC CGAGGCAGGG TGCGACCCAG GACCCAGGAC GGCGTCGGGA 180 ACCATACCAT GGCCCGGATC CCCAAGACCC TAAAGTTCGT CGTCGTCATC GTCGCGGTCC 240 TGCTGCCAGT CCTAGCTTAC TCTGCCACCA CTGCCCGGCA GGAGGAAGTT CCCCAGCAGA 300 CAGTGGCCCC ACAGCAACAG AGGCACAGCT TCAAGGGGGA GGAGTGTCCA GCAGGATCTC 360 ATAGATCAGA ACATACTGGA GCCTGTAACC CGTGCACAGA GGGTGTGGAT TACACCAACG 420 CTTCCAACAA TGAACCTTCT TGCTTCCCAT GTACAGTTTG TAAATCAGAT CAAAAACATA 480 AAAGTTCCTG CACCATGACC AGAGACACAG TGTGTCAGTG TAAAGAAGGC ACCTTCCGGA 540 ATGAAAACTC CCCAGAGATG TGCCGGAAGT GTAGCAGGTG CCCTAGTGGG GAAGTCCAAG 600 TCAGTAATTG TACGTCCTGG GATGATATCC AGTGTGTTGA AGAATTTGGT GCCAATGCCA 660 CTGTGGAAAC CCCAGCTGCT GAAGAGACAA TGAACACCAG CCCGGGGACT CCTGCCCCAG 720 CTGCTGAAGA GACAATGAAC ACCAGCCCAG GGACTCCTGC CCCAGCTGCT GAAGAGACAA 780 TGACCACCAG CCCGGGGACT CCTGCCCCAG CTGCTGAAGA GACAATGACC ACCAGCCCGG 840 GGACTCCTGC CCCAGCTGCT GAAGAGACAA TGACCACCAG CCCGGGGACT CCTGCCTCTT 900 CTCATTACCT CTCATGCACC ATCGTAGGGA TCATAGTTCT AATTGTGCTT CTGATTGTGT 960 TTGTTTGAAA GACTTCACTG TGGAAGAAAT TCCTTCCTTA CCTGAAAGGT TCAGGTAGGC 1020 GCTGGCTGAG GGCGGGGGGC GCTGGACACT CTCTGCCCTG CCTCCCTCTG CTGTGTTCCC 1080 ACAGACAGAA ACGCCTGCCC CTGCCCCAAG TCCTGGTGTC TCCAGCCTGG CTCTATCTTC 1140 CTCCTTGTGA TCGTCCCATC CCCACATCCC GTGCACCCCC CAGGACCCTG GTCTCATCAG 1200 TCCCTCTCCT GGAGCTGGGG GTCCACACAT CTCCCAGCCA AGTCCAAGAG GGCAGGGCCA 1260 GTTCCTCCCA TCTTCAGGCC CAGCCAGGCA GGGGGCAGTC GGCTCCTCAA CTGGGTGACA 1320 AGGGTGAGGA TGAGAAGTGG TCACGGGATT TATTCAGCCT TGGTCAGAGC AGAACACAGA 1380 GATTTTCCGT GAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1410

【００６８】配列番号：２ 配列の長さ：２９９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Gln Gly Val Lys Glu Arg Phe Leu Pro Leu Gly Asn Ser Gly Asp 1 5 10 15 Arg Ala Pro Arg Pro Pro Asp Gly Arg Gly Arg Val Arg Pro Arg Thr 20 25 30 Gln Asp Gly Val Gly Asn His Thr Met Ala Arg Ile Pro Lys Thr Leu 35 40 45 Lys Phe Val Val Val Ile Val Ala Val Leu Leu Pro Val Leu Ala Tyr 50 55 60 Ser Ala Thr Thr Ala Arg Gln Glu Glu Val Pro Gln Gln Thr Val Ala 65 70 75 80 Pro Gln Gln Gln Arg His Ser Phe Lys Gly Glu Glu Cys Pro Ala Gly 85 90 95 Ser His Arg Ser Glu His Thr Gly Ala Cys Asn Pro Cys Thr Glu Gly 100 105 110 Val Asp Tyr Thr Asn Ala Ser Asn Asn Glu Pro Ser Cys Phe Pro Cys 115 120 125 Thr Val Cys Lys Ser Asp Gln Lys His Lys Ser Ser Cys Thr Met Thr 130 135 140 Arg Asp Thr Val Cys Gln Cys Lys Glu Gly Thr Phe Arg Asn Glu Asn 145 150 155 160 Ser Pro Glu Met Cys Arg Lys Cys Ser Arg Cys Pro Ser Gly Glu Val 165 170 175 Gln Val Ser Asn Cys Thr Ser Trp Asp Asp Ile Gln Cys Val Glu Glu 180 185 190 Phe Gly Ala Asn Ala Thr Val Glu Thr Pro Ala Ala Glu Glu Thr Met 195 200 205 Asn Thr Ser Pro Gly Thr Pro Ala Pro Ala Ala Glu Glu Thr Met Asn 210 215 220 Thr Ser Pro Gly Thr Pro Ala Pro Ala Ala Glu Glu Thr Met Thr Thr 225 230 235 240 Ser Pro Gly Thr Pro Ala Pro Ala Ala Glu Glu Thr Met Thr Thr Ser 245 250 255 Pro Gly Thr Pro Ala Pro Ala Ala Glu Glu Thr Met Thr Thr Ser Pro 260 265 270 Gly Thr Pro Ala Ser Ser His Tyr Leu Ser Cys Thr Ile Val Gly Ile 275 280 285 Ile Val Leu Ile Val Leu Leu Ile Val Phe Val 290 295

【００６９】配列番号：３ 配列の長さ：２７９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys Val Leu 1 5 10 15 Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala Val Thr 20 25 30 Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys Tyr Ser 35 40 45 Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr Trp Asp 50 55 60 Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val Lys Trp 65 70 75 80 Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser Glu Glu 85 90 95 Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro Leu Val 100 105 110 Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly Thr Arg 115 120 125 Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu Lys Ala 130 135 140 Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly His Ser 145 150 155 160 Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile His Glu 165 170 175 Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu 180 185 190 Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile 195 200 205 Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala 210 215 220 Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile 225 230 235 240 Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val 245 250 255 Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe 260 265 270 Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly 275

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒトＴＲ５のヌクレオチド配列（配列番号１）
および推定アミノ酸配列（配列番号２）のアミノ末端側
を示した図である。

【図２】図１に続くヒトＴＲ５のヌクレオチド配列およ
び推定アミノ酸配列を示した図である。

【図３】図２に続くヒトＴＲ５のヌクレオチド配列およ
び推定アミノ酸配列を示した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＢＥ Ｃ１２Ｎ 1/15 ＡＤＵ 1/19 Ｃ０７Ｋ 14/47 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＭ 1/21 ＡＢＮ 5/10 ＡＤＹ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 コング ビー．タン アメリカ合衆国 19143 ペンシルバニア 州， フィラデルフィア，チェスター ア ベニュー 4500 (72)発明者 アレムセグド トルネー アメリカ合衆国 19382 ペンシルバニア 州， ウェスト チェスター，ストーンハ ム ドライブ 1008 (72)発明者 サリー ドリーン パトリシア リン アメリカ合衆国 19380 ペンシルバニア 州， ウェスト チェスター，ハンプトン コート 134−ビー.

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のポリペプチドをコードする
   ヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であり、かつ
   配列番号２のポリペプチドの活性を有するポリペプチド
   をコードするヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチ
   ド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる
   単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記ヌクレオチド配列が配列番号１中に
   含まれるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であ
   る、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 前記ヌクレオチド配列が配列番号１中に
   含まれるものである、請求項３に記載のポリヌクレオチ
   ド。
5. 【請求項５】 前記ヌクレオチド配列が配列番号２のポ
   リペプチドまたはその断片をコードしている、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のポリペプチドのアミノ酸配
   列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、欠失また
   は置換されており、かつ該ポリペプチドの活性を有する
   アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含んでな
   るポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 請求項３に記載のポリヌクレオチドの少
   なくとも１５の連続ヌクレオチドを含んでなるポリヌク
   レオチドプローブまたはプライマー。
8. 【請求項８】 配列番号２のポリペプチドまたはその断
   片をコードするヌクレオチド配列と少なくとも８０％同
   一であるヌクレオチド配列を含んでなり、下記発現系が
   適合性の宿主細胞内に存在するときＴＲ５ポリペプチド
   またはその断片を産生することができる発現系を含んで
   なるＤＮＡまたはＲＮＡ分子。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
10. 【請求項１０】 ＴＲ５ポリペプチドまたはその断片を
    産生させるのに十分な条件下で請求項９に記載の宿主細
    胞を培養することを含んでなる、ＴＲ５ポリペプチドま
    たはその断片の産生方法。
11. 【請求項１１】 前記ポリペプチドまたは断片が前記細
    胞の表面に発現される、請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 請求項１０に記載の方法により得られ
    る細胞。
13. 【請求項１３】 前記培養物から前記ポリペプチドまた
    は断片を回収することをさらに含む、請求項９に記載の
    方法。
14. 【請求項１４】 宿主細胞が適当な培養条件下でＴＲ５
    ポリペプチドまたはその断片を産生するように、請求項
    ８に記載の発現系を用いて宿主細胞を形質転換またはト
    ランスフェクションすることを含んでなる、ＴＲ５ポリ
    ペプチドまたはその断片を産生する細胞の作製方法。
15. 【請求項１５】 配列番号２中に含まれるアミノ酸配列
    と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含んでな
    るＴＲ５ポリペプチドまたはその断片。
16. 【請求項１６】 配列番号２のアミノ酸配列またはその
    断片を含む、請求項１５に記載のポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１３に記載の方法により産生さ
    れたＴＲ５ポリペプチドまたはその断片。
18. 【請求項１８】 請求項１５に記載のＴＲ５ポリペプチ
    ドに免疫特異的な抗体。
19. 【請求項１９】 ＴＲ５ポリペプチドの活性を増加する
    必要がある患者を治療するための医薬組成物であって、
    治療上有効な量の、 (a) 該ポリペプチドに対するアゴニスト、および／また
    は(b) 該ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたらす形
    のＴＲ５ポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
20. 【請求項２０】 ＴＲ５ポリペプチドの活性を抑制する
    必要がある患者を治療するための医薬組成物であって、
    治療上有効な量の、 (a) 該ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および／
    または(b) 該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配
    列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c) 該ポ
    リペプチドとそのリガンド、基質または受容体について
    競合するポリペプチド、を含んでなる医薬組成物。
21. 【請求項２１】 ＴＲ５ポリペプチドの発現または活性
    と関連した被験者の疾病またはその罹病性の検出方法で
    あって、 (a) 該被験者由来のゲノム中のＴＲ５ポリペプチドをコ
    ードするヌクレオチド配列に突然変異があるかどうかを
    調べる、および／または(b) 該被験者から得られたサン
    プル中のＴＲ５ポリペプチドの発現の存在または量を分
    析する、ことを含んでなる方法。
22. 【請求項２２】 ＴＲ５ポリペプチドと結合する化合物
    の同定方法であって、 (a) 請求項１２に記載の細胞と候補化合物とを接触さ
    せ、そして(b) 該候補化合物が該細胞と結合できるかど
    うかを評価する、ことを含んでなる方法。
23. 【請求項２３】 前記候補化合物が前記細胞の表面にあ
    るＴＲ５ポリペプチドを活性化させることによりシグナ
    ルを発生させるかどうかを判定し、シグナルを発生させ
    る候補化合物をアゴニストとして同定することをさらに
    含んでなる、請求項２２に記載の方法。
24. 【請求項２４】 請求項２３に記載の方法により同定さ
    れたアゴニスト。
25. 【請求項２５】 前記細胞をＴＲ５ポリペプチドの既知
    アゴニストと接触させ、該アゴニストにより発生したシ
    グナルが前記候補化合物の存在下で消失するかどうかを
    判定し、シグナルを消失させる候補化合物をＴＲ５ポリ
    ペプチドのアンタゴニストとして同定することをさらに
    含んでなる、請求項２２に記載の方法。
26. 【請求項２６】 請求項２５に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。