JPH10323194A - Ｔｎｆの相同体ｔｌ５ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 TL5ポリペプチドおよびポリヌクレオチド並
びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法を提供
する。 【解決手段】 配列番号２のTL5ポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列と全長において少なくとも80％同
一であり、かつTL5ポリペプチドの活性を有するポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列、またはこのヌク
レオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含ん
でなるポリヌクレオチドを単離する。 【効果】 TL5ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは
慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患
(例えば炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片
対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候
群、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリ
ンパ球増殖性障害)、アテローム性動脈硬化症、および
アルツハイマー病を含む機能障害または疾病の治療と、
このような症状の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはTNFファミリーに関し、以後これをTL5と記す。本発
明はまた、このようなポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドの作用を阻害または活性化することに関する。

【０００２】

【従来の技術】多くの生物学的作用(例えば、ある刺激
への応答)および自然界の生物学的プロセスはサイトカ
インのような因子群により制御されている。多くのサイ
トカインは受容体を介して作用し、該受容体と結合する
ことで細胞内応答を引き起こす。例えば、腫瘍壊死因子
(TNF)αおよびβはTNF受容体を介して作用し、感染防御
ならびにショックおよび炎症性疾患の誘導を含む様々な
生物学的プロセスを調節するサイトカインである。TNF
分子は「TNFリガンド」スーパーファミリーに属し、そ
れらの受容体、つまり対向リガンド(counter-ligand)で
ある「TNF受容体」スーパーファミリーと共に作用す
る。これまでに、９種のTNFリガンドスーパーファミリ
ーメンバーが同定され、10種のTNF受容体スーパーファ
ミリーメンバーが特性付けられた。

【０００３】前記リガンドにはTNF−α、リンホトキシ
ン−α(LT−α、TNF−βとしても知られる)、LT−β
（複合ヘテロ三量体LT−α2−β中に存在）、FasL、CD4
0L、CD27L、CD30L、4−1BBL、OX40LおよびTRAILが含ま
れる。TNF受容体スーパーファミリーにはp55TNF受容
体、p75TNF受容体、TNF受容体関連タンパク質、FAS抗原
すなわちAPO−1、CD40、CD27、CD30、4−1BB、OX40、低
親和性p75およびNGF受容体（Meager,A., Biologicals,
22：291−295(1994)）が含まれる。TNFリガンドスーパ
ーファミリーの多くのメンバーは活性化Ｔ細胞により発
現され、このことはこれらのメンバーがＴ細胞と細胞の
個体発生および機能の基礎をなす他の細胞型との相互作
用にとって必要であることを示唆する(Meager,Ａ.,上
掲）。

【０００４】TNFファミリーのいくつかのメンバーの本
質的な機能についての洞察が、これらのタンパク質の発
現を停止させる突然変異体の同定および作製から得られ
ている。例えば、FAS抗原およびそのリガンド中に自然
界で起こる突然変異はリンパ球増殖性疾患を引き起こし
（Watanabe−Fukunaga,R.ら、Nature 356：314（199
2））、これはおそらくプログラムされた細胞死に支障
をきたしたことを表している。CD40リガンドの突然変異
は血漿における高レベルの免疫グロブリンMと低レベル
の免疫グロブリンGを特徴とするＸ連鎖性免疫不全状態
を引き起こし、これは誤ったＴ細胞依存性のＢ細胞活性
化が行われていることを示す( Allen,R.C.ら、Science
259:990(1993))。低親和性神経成長因子受容体の標的突
然変異は末梢構造の誤った感覚イノベーション(sensory
innovation)を特徴とする障害を引き起こす( Lee, K.
F.ら、Cell 69：737(1992))。

【０００５】TNFおよびLT−αは２種のTNF受容体(55kd
および75kdのTNF受容体)に結合する能力をもつ。TNFお
よびLT−αがそれらの受容体を介して引き起こす多くの
生物学的作用には、移植腫瘍の出血性壊死、細胞毒性、
内毒素性ショックにおける役割、炎症、免疫調節、増殖
およびに抗ウイルス応答、ならびに電離放射線の有害作
用からの防御が含まれる。TNFおよびLT−αは内毒素性
ショック、脳性マラリア、腫瘍、自己免疫疾患、AIDSお
よび移植片−宿主拒絶反応を含む広範囲の疾患の病因と
される( Beutler,B.およびVon Huffel,C., Science 26
4：667−668(1994))。p55受容体における突然変異は微
生物感染に対する感受性を増大させる。

【０００６】さらに、TNFR1(p55)およびFasのＣ末端付
近の約80個のアミノ酸からなるドメインは「細胞死誘導
領域」と称され、プログラムされた細胞死に関するシグ
ナルを伝達する役割を担っている( Tartagliaら、Cell
74：845(1993))。TNFファミリーリガンドおよびTNFファ
ミリー受容体の作用は様々であり、哺乳動物系の生物学
的プロセスにおいて非常に多くの正常なまたは異常な機
能に影響を及ぼす。従って、正常なまたは病的な状態で
生物活性に影響を及ぼす前記受容体およびリガンドの同
定および特性付けが明らかに必要である。特に、TNFフ
ァミリーの新規メンバーを単離し特性付けることが必要
である。こうしたことは、TNFファミリーに治療用ター
ゲットとしての確立され実証された歴史があることを示
している。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症
性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、
感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄
症、脳損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性
障害)、アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマ
ー病を含むがこれらに限らない、機能障害または疾病を
予防し、改善し、治療する上で何らかの役割を果たすTN
Fファミリーの新たなメンバーを同定して特性づける必
要性が存在している。本発明はかかるメンバーを提供す
るものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、TL5ポリペプチドおよび組換え物質、並びにそ
の生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はTL5ポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関す
る。こうした使用には、とりわけ、慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾
患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、感染、
卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳
損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、
アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病の治
療が含まれる。他の態様では、本発明は、本発明により
提供される物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニス
トを同定する方法、並びに同定された化合物を用いてTL
5の不均衡と関連した状態を治療することに関する。本
発明のさらに他の態様は、不適当なTL5活性またはTL5レ
ベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに関
する。

【０００９】定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「TL5」とは、特
に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配列を有
するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を意味す
る。「TL5活性またはTL5ポリペプチド活性」または「TL
5またはTL5ポリペプチドの生物学的活性」とは、類似の
活性、向上した活性、または望ましくない副作用が低下
したこれらの活性を含めて、TL5の代謝的または生理的
機能を意味する。さらに、前記TL5の抗原的および免疫
原的活性も含まれる。「TL5遺伝子」とは、配列番号１
で表されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
またはそのアレリック変異体および／またはそれらの相
補体を意味する。

【００１０】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【００１１】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１２】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646;および Rattan ら, “Protein Synthes
is: Posttranslational Modifications and Aging",Ann
NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【００１３】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１４】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１５】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１６】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１７】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 一つの態様において、本発明はTL5ポリペプチド（また
はTL5タンパク質）に関する。このTL5ポリペプチドに
は、配列番号２および４のポリペプチドだけでなく、配
列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、その全長
において配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０
％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少な
くとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチ
ドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一で
あるものが特に好適である。また、その全長において配
列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと少なく
とも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好まし
くは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する
ポリペプチドもTL5ポリペプチドに含まれる。さらに、
少なくとも９７〜９９％同一であるものが特に好適であ
る。TL5ポリペプチドはTL5の少なくとも１つの生物学的
活性を示すことが好ましい。

【００１８】TL5ポリペプチドは「成熟」タンパク質の
形であっても、融合タンパク質のような、より大きいタ
ンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のアミ
ノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミノ
酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ配
列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、ま
たは組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列など
がある。

【００１９】また、TL5ポリペプチドの断片も本発明に
含まれる。こうした断片は全体的に前記TL5ポリペプチ
ドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、全部とは同一
でないアミノ酸配列を有するポリペプチドである。TL5
ポリペプチドと同様に、断片は「フリースタンディン
グ」（それ自体で独立）していても、より大きいポリペ
プチド内に含まれていてもよく、つまりその大きいポリ
ペプチドの一部または一領域、最も好ましくは一つの連
続領域、を断片が構成していてもよい。本発明のポリペ
プチド断片の代表的な例として、およその見当でアミノ
酸番号１−２０、２１−４０、４１−６０、６１−８
０、８１−１００、および１０１からTL5ポリペプチド
の末端までの断片が挙げられる。ここで、「およそ」と
は、上記の範囲の一端または両端で数個、５個、４個、
３個、２個または１個のアミノ酸が増えたり減ったりし
た範囲を含むものである。

【００２０】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、TL
5ポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケーショ
ン(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、αヘリ
ックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシート形
成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル形成
領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両
親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合領
域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造的
または機能的特性により特徴づけられる断片も好適であ
る。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片であ
る。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、
その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減
少した断片を含めて、TL5活性を媒介するものである。
さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫原性
がある断片も含まれる。

【００２１】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたTL5の生物学的活性を保持することが好ま
しい。中でも、最も好ましい断片は配列番号４のアミノ
酸配列を有するものである。特定された配列および断片
の変異型も本発明の一部を構成する。好適な変異型は同
類アミノ酸置換により対象物と異なるもの、すなわち、
ある残基が同様の性質の他の残基で置換されているもの
である。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Leu と I
leの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGluの間；Asn
とGln の間；塩基性残基 LysとArg の間；または芳香
族残基 PheとTyr の間で起こる。特に、数個、５〜１０
個、１〜５個または１〜２個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異型が好適であ
る。

【００２２】本発明のTL5ポリペプチドは任意の適当な
方法で製造することができる。このようなポリペプチド
には、単離された天然に存在するポリペプチド、組換え
的に生産されたポリペプチド、合成的に製造されたポリ
ペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造され
たポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチドの
製造のための手段は当業界でよく理解されている。

【００２３】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの態様はTL5ポリヌクレオチドに関す
る。TL5ポリヌクレオチドには、TL5ポリペプチドおよび
断片をコードする単離されたポリヌクレオチド、並びに
これらと密接に関連したポリヌクレオチドが含まれる。
さらに特定すると、本発明のTL5ポリヌクレオチドとし
ては、配列番号２のTL5ポリペプチドをコードする配列
番号１中に含まれるヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
オチド、および配列番号１および３の特定配列を有する
ポリヌクレオチドがある。さらに、TL5ポリヌクレオチ
ドには、配列番号２のTL5ポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
あるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および
配列番号１のヌクレオチド配列と全長において少なくと
も８０％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
オチドが含まれる。これに関連して、少なくとも９０％
同一であるポリヌクレオチドが好適であり、特に少なく
とも９５％同一であるものが好適である。さらに、少な
くとも９７％同一であるものがより好ましく、少なくと
も９８〜９９％同一であるものがより一層好ましく、少
なくとも９９％同一であるものが最も好ましい。また、
増幅反応に使用できる条件下、またはプローブやマーカ
ーとして使用できる条件下でハイブリダイズするのに十
分な、配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列との同
一性を有するヌクレオチド配列もTL5ポリヌクレオチド
に含まれる。本発明はまた、このようなTL5ポリヌクレ
オチドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２４】本発明のTL5は、ヒトTL5をコードするｃＤ
ＮＡの配列決定の結果により示されるように、TNFファ
ミリーの他のタンパク質と構造的に関連している。配列
番号１のｃＤＮＡ配列は配列番号２の285個のアミノ酸
からなるポリペプチドをコードするオープンリーディン
グフレーム（ヌクレオチド番号154−1008）を含んでい
る。表２のアミノ酸配列（配列番号２）は35個のアミノ
酸残基においてカニス・ファミリアリス( Canis famili
aris )TNF(Swissprot受託番号P51742／TNFA#CANFA)と約
34％同一である（BLAST使用）。表１のヌクレオチド配
列（配列番号１）は376個のヌクレオチド残基において
ホモ・サピエンスｃＤＮＡクローン593690 3'(Genbank
受託番号AA166695)と約99％同一である（BLAST使用）。
さらに、TL5(配列番号1)はヒトSTS SHGC−36171 (Genba
nk受託番号G30081)と290個のヌクレオチド塩基残基にお
いて97％同一である。したがって、本発明のTL5ポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それらの
相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物
学的機能／特性をもつことが予測され、それらの有用性
は当業者には自明である。

【００２５】ヒトTL5のヌクレオチド配列（配列番号
１）

【表１】 1 CACGAGAAAA TTCAGGATAA CTCTCCTGAG GGGTGAGCCA AGCCCTGCCA 51 TGTAGTGCAC GCAGGACATC AACAAACACA GATAACAGGA AATGATCCAT 101 TCCCTGTGGT CACTTATTCT AAAGGCCCCA ACCTTCAAAG TTCAAGTAGT 151 GATATGGATG ACTCCACAGA AAGGGAGCAG TCACGCCTTA CTTCTTGCCT 201 TAAGAAAAGA GAAGAAATGA AACTGAAGGA GTGTGTTTCC ATCCTCCCAC 251 GGAAGGAAAG CCCCTCTGTC CGATCCTCCA AAGACGGAAA GCTGCTGGCT 301 GCAACCTTGC TGCTGGCACT GCTGTCTTGC TGCCTCACGG TGGTGTCTTT 351 CTACCAGGTG GCCGCCCTGC AAGGGGACCT GGCCAGCCTC CGGGCAGAGC 401 TGCAGGGCCA CCACGCGGAG AAGCTGCCAG CAGGAGCAGG AGCCCCCAAG 451 GCCGGCCTGG AGGAAGCTCC AGCTGTCACC GCGGGACTGA AAATCTTTGA 501 ACCACCAGCT CCAGGAGAAG GCAACTCCAG TCAGAACAGC AGAAATAAGC 551 GTGCCGTTCA GGGTCCAGAA GAAACAGTCA CTCAAGACTG CTTGCAACTG 601 ATTGCAGACA GTGAAACACC AACTATACAA AAAGGATCTT ACACATTTGT 651 TCCATGGCTT CTCAGCTTTA AAAGGGGAAG TGCCCTAGAA GAAAAAGAGA 701 ATAAAATATT GGTCAAAGAA ACTGGTTACT TTTTTATATA TGGTCAgGTT 751 TTATATACTG ATAAGACCTA CGCCATGGGA CATCTAATTC AGAGGAAGAA 801 GGTCCATGTC TTTGGGGATG AATTGAGTCT GGTGACTTTG TTTCGATGTA 851 TTCAAAATAT GCCTGAAACA CTACCCAATA ATTCCTGCTA TTCAGCTGGC 901 ATTGCAAAAC TGGAAGAAGG AGATGAACTC CAACTTGCAA TACCAAGAGA 951 AAATGCACAA ATATCACTGG ATGGAGATGT CACATTTTTT GGTGCATTGA 1001 AACTGCTGTG ACCTACTTAC ACCATGTCTG TAGCTATTTT CCTCCCTTTC 1051 TCTGTACCTC TAAGAAGAAA GAATCTAACT GAAAATACCA AAA

【００２６】ヒトTL5のアミノ酸配列（配列番号２）

【表２】 1 MDDSTEREQS RLTSCLKKRE EMKLKECVSI LPRKESPSVR SSKDGKLLAA 51 TLLLALLSCC LTVVSFYQVA ALQGDLASLR AELQGHHAEK LPAGAGAPKA 101 GLEEAPAVTA GLKIFEPPAP GEGNSSQNSR NKRAVQGPEE TVTQDCLQLI 151 ADSETPTIQK GSYTFVPWLL SFKRGSALEE KENKILVKET GYFFIYGQVL 201 YTDKTYAMGH LIQRKKVHVF GDELSLVTLF RCIQNMPETL PNNSCYSAGI 251 AKLEEGDELQ LAIPRENAQI SLDGDVTFFG ALKLL

【００２７】TL5をコードする本発明の一つのポリヌク
レオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニン
グにより、ヒト胎児肝脾、慢性リンパ性白血病脾、卵巣
癌、胃癌、平滑筋細胞、好中球、PMA刺激Ｔ細胞、酸化
ＬＤＬ刺激マクロファージ、樹状細胞、骨髄細胞とその
細胞系、およびCD34⁺コ臍帯血の細胞中のｍＲＮＡから
誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、エクスプレスド
・シークエンス・タグ（expressed sequence tag: EST)
分析 (Adams, M.D. ら, Science (1991) 252:1651-165
6; Adams, M.D. ら, Nature (1992) 355:632-634; Adam
s, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174) を用いて
得ることができる。また、本発明のポリヌクレオチドは
ゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得ること
ができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成す
ることもできる。

【００２８】配列番号２のTL5ポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペプチド
コード配列（配列番号１のヌクレオチド番号154−100
8）と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮重）
のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコードする
配列であってもよい。

【００２９】本発明のポリヌクレオチドをTL5ポリペプ
チドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌクレ
オチドには、成熟ポリペプチドのコード配列またはその
断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもしくは
分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク
質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするも
の）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプ
チドのコード配列またはその断片が含まれる。例えば、
融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコ
ードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例とし
て、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)に
より提供されかつGentz ら, Proc. Natl.Acad. Sci. US
A (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ−ヒス
チジンペプチド、またはＨＡタグである。また、このポ
リヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例えば、転
写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポ
リアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、およびｍ
ＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００３０】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のTL5ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番
号２）を含むTL5変異型をコードするポリヌクレオチド
である。中でも、本発明の好ましいポリヌクレオチドは
表４のアミノ酸配列（配列番号４）をコードする表３
（配列番号３）中に含まれるポリヌクレオチドである。

【００３１】ヒトTL5の部分ヌクレオチド配列（配列番
号３）

【表３】 1 GGGAGAAGGC AACTCCAGTC AGAACAGCAG AAATAAGCGT GCCGTTCAGG 51 GTCCAGAAGA AACAGGATCT TACGAGACAT TTGTTCCATG GCTTCTCAGC 101 TTTAAAAGGG GAAGTGCCCT AGAAGAAAAA GAGAATAAAA TATTGGTCAA 151 AGAAACTGGT TACTTTTTTA TATATGGTCA GGTTTTATAT ACTGATAAGA 201 CCTACGCCAT GGGACATCTA ATTCAGAGGA AGAAGGTCCA TGTCTTTGGG 251 GATGAATTGA GTCTGGTGAC TTTGTTTCGA TGTATTCAAA ATATGCCTGA 301 AACACTACCC AATAATTCCT GCTATTCAGC TGGCATTGCA AAACTGGAAG 351 AAGGAGATGA ACTCCAACTT GCAATACCAA GAGAAAATGC ACAAATATCA 401 CTGGATGGAG ATGTCACATT TTTTGGTGCA TTGAAACTGC TGTGACCTAC 451 TTACACCATG TCTGTAGCTA TTTTCCTCCC TTTCTCTGTA CCTCTAAGAA 501 GAAAGAATCT AACTGAAAAT ACCAAAAAAA

【００３２】ヒトTL5の部分アミノ酸配列（配列番号
４）

【表４】 1 GEGNSSQNSR NKRAVQGPEE TGSYETFVPW LLSFKRGSAL EEKENKILVK 51 ETGYFFIYGQ VLYTDKTYAM GHLIQRKKVH VFGDELSLVT LFRCIQNMPE 101 TLPNNSCYSA GIAKLEEGDE LQLAIPRENA QISLDGDVTF FGALKLL

【００３３】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００３４】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、TL5ポリペプチドをコードす
る全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するため
に、また、TL5遺伝子との配列類似性が高い他の遺伝子
（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体(o
rtholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよび
ゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノ
ムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして用い
ることができる。このようなハイブリダイゼーション技
法は当業者には公知である。一般的に、これらのヌクレ
オチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８０％、好ま
しくは９０％、より好ましくは９５％同一である。プロ
ーブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ま
しくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを
有していてもよい。特に好ましいプローブは３０〜５０
個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００３５】一実施態様において、TL5ポリペプチド
（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体を
含む）をコードするポリヌクレオチドを得ることは、配
列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有する標
識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニン
グし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる。
このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に公知
である。かくして、もう一つの態様では、本発明のTL5
ポリヌクレオチドはさらに、配列番号１のヌクレオチド
配列またはその断片（配列番号３の断片を含む）とスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチ
ド配列を含んでなるヌクレオチド配列を含むものであ
る。TL5ポリペプチドも、前記のハイブリダイゼーショ
ン条件により得られたヌクレオチド配列によりコードさ
れるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを含む。ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件は上で定
義したとおりであるか、または、50% ホルムアミド、５
×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50
mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５×Denhardt溶液、10%
デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪断したサケ
精子ＤＮＡを含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベ
ートし、次いでフィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗
浄する条件である。

【００３６】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００３７】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３８】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、射出導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３９】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００４０】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００４１】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００４２】スクリーニングアッセイで使用するためTL
5ポリペプチドを発現させようとする場合、そのポリペ
プチドを細胞の表面に産生させることが好適である。こ
の場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立って
細胞を回収する。TL5ポリペプチドが培地に分泌される
場合は、そのポリペプチドを回収し精製するために培地
を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞をま
ず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必要があ
る。

【００４３】組換え細胞培養物からTL5ポリペプチドを
回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタノー
ル沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマト
グラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎
水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロ
マトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラ
フィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公知
の方法を用いることができる。最も好ましくは、高速液
体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリペプチ
ドが単離および／または精製中に変性されるときは、タ
ンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活性
のあるコンフォメーションを復元することが可能であ
る。

【００４４】診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのTL5ポリヌクレオチドの
使用に関する。機能障害と関連したTL5遺伝子の変異型
の検出は、TL5の過少発現、過剰発現または変化した発
現により生ずる疾病またはその罹病性の診断に追加しう
る、またはその診断を下しうる診断用ツールを提供する
だろう。TL5遺伝子に変異がある個体を、さまざまな技
法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。

【００４５】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識TL5ヌク
レオチド配列とハイブリダイズさせることで同定でき
る。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とはＲ
Ｎアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別
できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いるま
たは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の
変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても検出
できる（例えば、Myers ら, Science(1985) 230:1242
を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼ
プロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ
１プロテクション）または化学的開裂法によっても確認
できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (198
5) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様では、
例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行う
ため、TL5ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリ
ゴヌクレオチドプローブのアレイを構築することができ
る。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、
遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分
子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられ
ている（例えば、M. Chee ら, Science, Vol.274, pp.6
10-613 (1996) を参照のこと）。

【００４６】診断アッセイは、前記の方法によりTL5遺
伝子の変異を検出することで、慢性および急性炎症、関
節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾患、乾
癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、
虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、
AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、アテロ
ーム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病への罹りや
すさを診断または判定する方法を提供する。

【００４７】さらに、被験者から得られたサンプルから
TL5ポリペプチドまたはTL5ｍＲＮＡのレベルの異常な低
下または増加を測定する方法により、慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾
患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、感染、
卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳
損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、
アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病の診
断を下すことができる。発現の低下または増加は、当技
術分野で公知のポリヌクレオチド定量法のいずれか、例
えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクショ
ン、ノーザンブロット、その他のハイブリダイゼーショ
ン法によりＲＮＡレベルで測定することができる。宿主
から得られたサンプル中のTL5ポリペプチドのようなタ
ンパク質のレベルを測定するためのアッセイ法は当業者
によく知られている。こうしたアッセイ法として、ラジ
オイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロ
ット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４８】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病、特に慢性および急性炎症、関節炎、敗血
症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾患、乾癬)、移植組
織片拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼
吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、骨疾
患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、アテローム性動脈
硬化症、およびアルツハイマー病または該疾病への罹り
やすさを診断するためのキットに関し、このキットは、
(a) TL5ポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１の
ヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b) (a) のヌク
レオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、(c) TL5ポ
リペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）
もしくはその断片、または(d) TL5ポリペプチド（好ま
しくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、を
含んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、
(c) または (d)が実質的な構成成分であることが理解さ
れよう。

【００４９】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。患者と正常個
体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることが
できる。患者の一部または全部に変異が観察されて、ど
の正常個体にも観察されない場合は、その変異が疾病の
原因である可能性がある。TL5に対応する遺伝子の位置
は第13染色体に決定された。

【００５０】抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、TL5ポリペプチドに免
疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使用す
ることができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従来
技術における他の関連ポリペプチドに対するその親和性
よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い親和
性を有することを意味する。

【００５１】TL5ポリペプチドに対する抗体は、慣用の
プロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外）に
該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類似体も
しくは細胞を投与することにより得られる。モノクロー
ナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により産生さ
れる抗体をもたらす任意の技法を用いることができる。
例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.および
Milstein, C., Nature(1975) 256:495-497)、トリオー
マ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozborら, Im
munology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハイブリ
ドーマ技法 (Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANC
ER THERAPY, pp.77-96, Alan R. Liss,Inc., 1985) な
どがある。

【００５２】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。TL5ポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、慢性
および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例え
ば炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿
主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再
発狭窄症、脳損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球
増殖性障害)、アテローム性動脈硬化症、およびアルツ
ハイマー病の治療に使用できる可能性がある。

【００５３】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性および急性
炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸
疾患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、感
染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄
症、脳損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性
障害)、アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマ
ー病から前記動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分なTL5ポリペプチドま
たはその断片を哺乳動物に接種することを含んでなる。
本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を疾病から防御す
る抗体を産生させるような免疫学的応答を引き出すため
に、in vivo でTL5ポリヌクレオチドの発現を指令する
ベクターを介してTL5ポリペプチドを供給することを含
んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方
法に関する。

【００５４】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてTL5ポリペプチドに
対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製剤
（組成物）に関し、この組成物はTL5ポリペプチドまた
はTL5遺伝子を含有する。ワクチン製剤は適当な担体を
さらに含んでいてもよい。TL5ポリペプチドは胃の中で
分解されうるので、非経口的（皮下、筋肉内、静脈内、
皮内等への注射を含む）に投与することが好ましい。非
経口投与に適した製剤としては、酸化防止剤、緩衝液、
静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等張にする溶質
を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並びに懸濁
化剤または増粘剤を含みうる水性および非水性の無菌懸
濁液がある。こうした製剤は１回量容器または数回量容
器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で提供する
ことができ、また、使用直前に無菌の液状担体を添加す
るだけでよい凍結乾燥状態で保管することもできる。ワ
クチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するためのアジ
ュバント系、例えば水中油型のアジュバント系や当技術
分野で公知の他のアジュバント系を含んでいてもよい。
投与量はワクチンの比活性で変化し、ルーチンな実験操
作により簡単に決定できる。

【００５５】スクリーニングアッセイ 本発明のTL5ポリペプチドは、このポリペプチドの結
合、合成または作用を刺激する化合物（アゴニスト）ま
たは阻害する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤と
もいう）のスクリーニング法において使用することがで
きる。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細
胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産
物の混合物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価
し同定するためにも用いられる。これらのアゴニストま
たはアンタゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合
によって、天然の基質、リガンド、受容体などであって
よく、また、本発明のポリペプチドの構造的または機能
的な模擬物であってもよい（Coligan ら, Current Prot
ocols in Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)を参照の
こと）。

【００５６】TL5ポリペプチドは多くの病理を含めて多
数の生物学的機能に関与している。したがって、一方で
はTL5ポリペプチドを刺激し、他方ではTL5ポリペプチド
の機能を阻害し得る化合物および薬物を見つけ出すこと
が望まれる。一般的に、アゴニストは慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾
患、乾癬)、移植組織片拒絶、移植片対宿主病、感染、
卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳
損傷、AIDS、骨疾患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、
アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病のよ
うな症状の治療および予防目的で用いられる。アンタゴ
ニストは慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免
疫疾患(例えば炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶、
移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患
症候群、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、骨疾患、癌(例え
ばリンパ球増殖性障害)、アテローム性動脈硬化症、お
よびアルツハイマー病のような症状のさまざまな治療お
よび予防目的で使用しうる。

【００５７】一般に、こうしたスクリーニング法はTL5
ポリペプチドを発現する適当な細胞、またはTL5ポリペ
プチドに応答する適当な細胞を用いるものである。この
種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョウバエ由来の
細胞または大腸菌細胞が含まれる。次いで、TL5ポリペ
プチドを発現する細胞（もしくは発現されたポリペプチ
ドを含む細胞膜）またはTL5ポリペプチドに応答する細
胞を試験化合物と接触させて、その結合または機能的応
答の刺激もしくは阻害を観察する。候補化合物と接触さ
せた細胞の能力を、接触させなかった同一細胞とTL5活
性に関して比較する。

【００５８】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、TL5ポリペプ
チドを担持する細胞への付着が検出される。さらに、こ
れらのアッセイでは、TL5ポリペプチドを担持する細胞
に適した検出系を用いて、候補化合物がTL5ポリペプチ
ドの活性化により生ずるシグナルを結果的にもたらすか
否かを試験することができる。一般的に、活性化の阻害
剤は既知のアゴニストの存在下でアッセイされ、そして
候補化合物の存在がアゴニストによる活性化に与える影
響が調べられる。

【００５９】また、簡便な他の相手ペプチド(その検出
試薬を入手できるもの)にTL5の全てまたは一部を融合さ
せたもの(例えばTL5−IgG融合体)を含めて、可溶性タン
パク質としてTL5を発現させ、固相または液相結合アッ
セイで使用することができる。例えば、曲面プラズモン
共鳴、核磁気共鳴分光測定、沈降、熱量測定などで実験
的に検出できる変化を通して直接アゴニストまたはアン
タゴニストの結合を検出するために可溶性TL5を使用し
てもよい。また、候補アゴニストまたはアンタゴニスト
と受容体(その結合を検出できるもの)との競合を探すこ
とにより直接アゴニストまたはアンタゴニストの結合を
検出するために可溶性TL5を使用してもよい。受容体検
出法には抗体認識、放射性標識による受容体の修飾、化
学修飾(例えばビオチン化)、エピトープタグへの融合な
どがある。こうした方法はELISAベースのアッセイ、免
疫沈降法およびシンチレーション近接法を含む。受容体
は天然の供給源(例えば細胞、細胞膜および細胞上清)か
らも得られるが、これらの場合、抗体認識、放射性標識
によるTL5の修飾、TL5の化学修飾(例えばビオチン化)、
TL5のエピトープタグへの融合を含む方法を用いてTL5の
結合を検出することが好ましいだろう。

【００６０】また、TL5のｃＤＮＡ、タンパク質または
このタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内でのTL5
ｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす添加化合物の
作用を検出するためのアッセイを組み立てることができ
る。例えば、当技術分野で公知の標準方法によりモノク
ローナルまたはポリクローナル抗体を用いて、TL5タン
パク質の分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するた
めのＥＬＩＳＡを構築することができ、これは適切に操
作された細胞または組織からのTL5の生産を抑制または
増強する物質（それぞれアンタゴニストまたはアゴニス
トともいう）の探索に用いることができる。

【００６１】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにTL5タンパク
質を用いることができる。こうした受容体結合法には、
限定するものではないが、リガンド結合および架橋アッ
セイがあり、このアッセイでは、TL5を放射性アイソト
ープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修飾（例：ビ
オチン化）するか、または検出や精製に適したペプチド
配列に融合させ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞
膜、細胞上清、組織抽出物、体液など）とインキュベー
トする。その他の方法としては、表面プラズモン共鳴お
よび分光学のような生物物理的方法がある。受容体の精
製およびクローニングに用いることに加えて、これらの
結合アッセイは、もし存在するのであれば、TL5のその
受容体への結合と競合するTL5のアゴニストまたはアン
タゴニストを同定するために用いることもできる。スク
リーニングアッセイを行うための標準的な方法は当技術
分野でよく理解されている。

【００６２】TL5ポリペプチドの潜在的なアンタゴニス
トの例としては、抗体、ある場合には、TL5ポリペプチ
ドの、場合により、リガンド、基質、受容体、酵素など
と密接な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパ
ク質（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断
片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を
誘導しない（それゆえポリペプチドの活性を妨げる）小
分子などがある。

【００６３】かくして、他の態様において、本発明は、
TL5ポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、リガ
ンド、受容体、基質、酵素など、またはTL5ポリペプチ
ドの生産を低下または増加させる化合物を同定するため
のスクリーニングキットに関し、このキットは、 (a) TL5ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリ
ペプチド） (b) TL5ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリ
ペプチド）を発現する組換え細胞、 (c) TL5ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリ
ペプチド）を発現する細胞膜、または (d) TL5ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリ
ペプチド）に対する抗体、 を含んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、(b)
、(c) または (d)が実質的な構成成分であることが理
解されよう。

【００６４】予防および治療法 本発明は、TL5ポリペプチド活性の過剰量と不足量のど
ちらにも関係した慢性および急性炎症、関節炎、敗血
症、自己免疫疾患(例えば炎症性腸疾患、乾癬)、移植組
織片拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼
吸器系疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、骨疾
患、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、アテローム性動脈
硬化症、およびアルツハイマー病などの異常な状態の治
療法を提供する。TL5ポリペプチドの活性が過剰である
場合は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つ
のアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵
素などの結合をブロックすることにより、または第２の
シグナルを抑制することで異常な状態を軽減することに
より、TL5ポリペプチドの機能を阻害するのに有効な量
で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）を製剤学上
許容される担体とともに患者に投与することを含んでな
る。もう一つのアプローチでは、内因性のTL5ポリペプ
チドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体など
と結合する能力がまだある可溶性形態のTL5ポリペプチ
ドを投与することができる。このような競合剤の典型的
な例はTL5ポリペプチドの断片である。

【００６５】別のアプローチでは、内因性のTL5ポリペ
プチドとの競合状態でリガンドと結合する能力がまだあ
る可溶性形態のTL5ポリペプチドを投与することができ
る。このような競合剤の典型的な例はTL5ポリペプチド
の断片である。

【００６６】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性TL5ポリペプチドをコードする遺伝子の発
現を抑制することができる。こうした公知技術は、体内
で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列の使
用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleotides as A
ntisense Inhibitors of Gene Expression, CRC Press,
Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neurochem (1
991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、この遺伝子
と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供給
することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic Acids Re
s (1979) 6:3073; Cooney ら, Science (1988) 241:45
6; Dervanら, Science (1991) 251:1360を参照のこと。
これらのオリゴマーはそれ自体を投与することもできる
し、関連オリゴマーをin vivo で発現させることもでき
る。

【００６７】TL5およびその活性の過少発現に関係した
異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプローチを
取ることができる。一つのアプローチは、治療上有効な
量のTL5ポリペプチドを活性化する化合物（すなわち、
前記のアゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに
患者に投与して、異常な状態を緩和することを含んでな
る。別法として、患者の関連細胞においてTL5を内因的
に産生させるために遺伝子治療を用いることができる。
例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイルスベク
ターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺
伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離
し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有す
るレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入された
パッケージング細胞に導入する。その結果、パッケージ
ング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイルス粒
子を産生するようになる。in vivo での細胞処理および
in vivo でのポリペプチド発現のために、これらの産生
細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、
Human Molecular Genetics, T Strachanand A P Read,
BIOS Scientific Publishers Ltd (1996) 中のChapter
20, Gene Therapy andother Molecular Genetic-based
Therapeutic Approaches(およびその中の引用文献) を
参照のこと。もう一つのアプローチは治療量のTL5ポリ
ペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与すること
である。

【００６８】製剤および投与 可溶性形態のTL5ポリペプチドのようなペプチド、アゴ
ニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分子は
適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化することが
できる。このような製剤は治療上有効な量のポリペプチ
ドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または賦形
剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生理食
塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノー
ル、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らな
い。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当
技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記
の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器
を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００６９】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００７０】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００７１】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００７２】

【実施例】ヒトTNFに類似した配列を有するEST( EST＃1
557446 )は市販のESTデータベースで発見された。この
部分的ｃＤＮＡの530ヌクレオチド配列の分析によりこ
の配列がTNFスーパーファミリーの新規メンバーのオー
プンリーディングフレームをコードしていることが示さ
れ、TL5と名付けられた。このｃＤＮＡによりコードさ
れていると予想される部分タンパク質は147アミノ酸の
長さであった。このｃＤＮＡ配列を用いてTL5ｃＤＮＡ
の5'末端をコードしているであろう別のESTを同定し
た。一つのそうしたESTが1093ヌクレオチドからなるｃ
ＤＮＡ由来の285アミノ酸からなる完全なオープンリー
ディングフレームをコードしていた。推定されたタンパ
ク質は、46アミノ酸からなる細胞質ドメインと、約21ア
ミノ酸からなる疎水性膜貫通架橋領域とその後にTNFフ
ァミリーのメンバーと有意な配列同一性を有し、おそら
くこの分子の受容体結合部分をコードしている218アミ
ノ酸からなる細胞外ドメインを有するII型膜タンパク質
をコードしている。TL5ｃＤＮＡの3'非翻訳配列の一部
はプライマー対SHGC−36171から作製されたヒトSTS Ｄ
ＮＡ配列（配列標識部位：STS）と同一であった。この
フラグメントは第13染色体に局在しており、従って、こ
の染色体にTL5の遺伝子が存在している。

【００７３】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００７４】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１０９３ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CACGAGAAAA TTCAGGATAA CTCTCCTGAG GGGTGAGCCA AGCCCTGCCA TGTAGTGCAC 60 GCAGGACATC AACAAACACA GATAACAGGA AATGATCCAT TCCCTGTGGT CACTTATTCT 120 AAAGGCCCCA ACCTTCAAAG TTCAAGTAGT GATATGGATG ACTCCACAGA AAGGGAGCAG 180 TCACGCCTTA CTTCTTGCCT TAAGAAAAGA GAAGAAATGA AACTGAAGGA GTGTGTTTCC 240 ATCCTCCCAC GGAAGGAAAG CCCCTCTGTC CGATCCTCCA AAGACGGAAA GCTGCTGGCT 300 GCAACCTTGC TGCTGGCACT GCTGTCTTGC TGCCTCACGG TGGTGTCTTT CTACCAGGTG 360 GCCGCCCTGC AAGGGGACCT GGCCAGCCTC CGGGCAGAGC TGCAGGGCCA CCACGCGGAG 420 AAGCTGCCAG CAGGAGCAGG AGCCCCCAAG GCCGGCCTGG AGGAAGCTCC AGCTGTCACC 480 GCGGGACTGA AAATCTTTGA ACCACCAGCT CCAGGAGAAG GCAACTCCAG TCAGAACAGC 540 AGAAATAAGC GTGCCGTTCA GGGTCCAGAA GAAACAGTCA CTCAAGACTG CTTGCAACTG 600 ATTGCAGACA GTGAAACACC AACTATACAA AAAGGATCTT ACACATTTGT TCCATGGCTT 660 CTCAGCTTTA AAAGGGGAAG TGCCCTAGAA GAAAAAGAGA ATAAAATATT GGTCAAAGAA 720 ACTGGTTACT TTTTTATATA TGGTCAGGTT TTATATACTG ATAAGACCTA CGCCATGGGA 780 CATCTAATTC AGAGGAAGAA GGTCCATGTC TTTGGGGATG AATTGAGTCT GGTGACTTTG 840 TTTCGATGTA TTCAAAATAT GCCTGAAACA CTACCCAATA ATTCCTGCTA TTCAGCTGGC 900 ATTGCAAAAC TGGAAGAAGG AGATGAACTC CAACTTGCAA TACCAAGAGA AAATGCACAA 960 ATATCACTGG ATGGAGATGT CACATTTTTT GGTGCATTGA AACTGCTGTG ACCTACTTAC 1020 ACCATGTCTG TAGCTATTTT CCTCCCTTTC TCTGTACCTC TAAGAAGAAA GAATCTAACT 1080 GAAAATACCA AAA 1093

【００７５】配列番号：２ 配列の長さ：２８５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Asp Asp Ser Thr Glu Arg Glu Gln Ser Arg Leu Thr Ser Cys Leu 1 5 10 15 Lys Lys Arg Glu Glu Met Lys Leu Lys Glu Cys Val Ser Ile Leu Pro 20 25 30 Arg Lys Glu Ser Pro Ser Val Arg Ser Ser Lys Asp Gly Lys Leu Leu 35 40 45 Ala Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Cys Leu Thr Val Val 50 55 60 Ser Phe Tyr Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser Leu Arg 65 70 75 80 Ala Glu Leu Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly Ala Gly 85 90 95 Ala Pro Lys Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala Gly Leu 100 105 110 Lys Ile Phe Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn 115 120 125 Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln 130 135 140 Asp Cys Leu Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys 145 150 155 160 Gly Ser Tyr Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser 165 170 175 Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr 180 185 190 Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met 195 200 205 Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu 210 215 220 Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu 225 230 235 240 Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly 245 250 255 Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu 260 265 270 Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu 275 280 285

【００７６】配列番号：３ 配列の長さ：５３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GGGAGAAGGC AACTCCAGTC AGAACAGCAG AAATAAGCGT GCCGTTCAGG GTCCAGAAGA 60 AACAGGATCT TACGAGACAT TTGTTCCATG GCTTCTCAGC TTTAAAAGGG GAAGTGCCCT 120 AGAAGAAAAA GAGAATAAAA TATTGGTCAA AGAAACTGGT TACTTTTTTA TATATGGTCA 180 GGTTTTATAT ACTGATAAGA CCTACGCCAT GGGACATCTA ATTCAGAGGA AGAAGGTCCA 240 TGTCTTTGGG GATGAATTGA GTCTGGTGAC TTTGTTTCGA TGTATTCAAA ATATGCCTGA 300 AACACTACCC AATAATTCCT GCTATTCAGC TGGCATTGCA AAACTGGAAG AAGGAGATGA 360 ACTCCAACTT GCAATACCAA GAGAAAATGC ACAAATATCA CTGGATGGAG ATGTCACATT 420 TTTTGGTGCA TTGAAACTGC TGTGACCTAC TTACACCATG TCTGTAGCTA TTTTCCTCCC 480 TTTCTCTGTA CCTCTAAGAA GAAAGAATCT AACTGAAAAT ACCAAAAAAA 530

【００７７】配列番号：４ 配列の長さ：１４７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln 1 5 10 15 Gly Pro Glu Glu Thr Gly Ser Tyr Glu Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu 20 25 30 Ser Phe Lys Arg Gly Ser Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu 35 40 45 Val Lys Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr 50 55 60 Asp Lys Thr Tyr Ala Met Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His 65 70 75 80 Val Phe Gly Asp Glu Leu Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln 85 90 95 Asn Met Pro Glu Thr Leu Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile 100 105 110 Ala Lys Leu Glu Glu Gly Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu 115 120 125 Asn Ala Gln Ile Ser Leu Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu 130 135 140 Lys Leu Leu 145

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＪ Ｃ０７Ｋ 16/18 39/395 ＡＢＳ Ｃ１２Ｎ 1/15 ＡＤＵ 1/19 48/00 1/21 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 16/18 21/08 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/19 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 1/21 33/531 Ａ 5/10 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/02 33/577 Ｂ 21/08 Ｃ０７Ｋ 14/525 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/53 ＡＡＮ 33/531 ＡＢＢ 33/566 ＡＢＥ 33/577 ＡＢＪ // Ｃ０７Ｋ 14/525 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ (72)発明者 ピーター アール．ヤング アメリカ合衆国 08648 ニュージャージ ー州， ローレンスビル，ヘンドリクソン ロード 32

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のTL5ポリペプチドをコード
   するヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％
   同一であり、かつTL5ポリペプチドの活性を有するポリ
   ペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはこのヌ
   クレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含
   んでなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
   のTL5ポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれ
   るヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載のポ
   リヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記のポリヌクレオチドが、その全長に
   おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０
   ％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１のポリヌクレオチドである、
   請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のＴＬ5ポリペプチドのアミ
   ノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、欠
   失または置換されており、かつTL5ポリペプチドの活性
   を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を
   含んでなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも８０％
   同一であるアミノ酸配列を含むTL5ポリペプチドを産生
   することができる発現系を含んでなるＤＮＡまたはＲＮ
   Ａ分子。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
9. 【請求項９】 TL5ポリペプチドを産生させるのに十分
   な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、この培
   養物から前記ポリペプチドを回収することを含んでな
   る、TL5ポリペプチドの産生方法。
10. 【請求項１０】 宿主細胞が適当な培養条件下でTL5ポ
    リペプチドを産生するように、請求項７に記載の発現系
    を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェクショ
    ンすることを含んでなる、TL5ポリペプチドを産生する
    細胞の作製方法。
11. 【請求項１１】 全長において配列番号２のアミノ酸配
    列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含んで
    なるTL5ポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
    求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のTL5ポリペプチド
    に免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のTL5ポリペプチド
    の活性増加または発現増加を必要としている患者を治療
    するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
    たは(b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたら
    す形の、配列番号２のTL5ポリペプチドをコードするヌ
    クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
    あるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配列に
    対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離され
    たポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載のTL5ポリペプチド
    の活性または発現を抑制する必要がある患者を治療する
    ための医薬組成物であって、治療上有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
    ／または(b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチ
    ド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c)
    前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に関し
    て前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含んで
    なる医薬組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載のTL5ポリペプチド
    の発現または活性と関連した被験者の疾病またはその罹
    病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者由来のゲノム中にTL5ポリペプチドをコ
    ードするヌクレオチド配列の突然変異があるかどうかを
    調べる、および／または(b) 前記被験者から得られたサ
    ンプル中のTL5ポリペプチド発現の存在または量を分析
    する、ことを含んでなる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のTL5ポリペプチド
    を阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方法であ
    って、 (a) TL5ポリペプチドを発現している細胞（もしくはTL5
    ポリペプチドを発現している細胞膜）またはTL5ポリペ
    プチドに応答する細胞と候補化合物とを接触させ、そし
    て(b) その結合、または機能的応答の刺激もしくは抑制
    を観察するか、または候補化合物と接触させた細胞（ま
    たは細胞膜）の能力を、接触させなかった同一の細胞
    と、TL5ポリペプチド活性に関して比較する、ことを含
    んでなる方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアゴニスト。
19. 【請求項１９】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。
20. 【請求項２０】 請求項１０に記載の方法により作製さ
    れた組換え宿主細胞、またはTL5ポリペプチドを発現し
    ているその膜。