JPH1156376A

JPH1156376A - ヒトＩκＢ−β

Info

Publication number: JPH1156376A
Application number: JP10005514A
Authority: JP
Inventors: M C Chabot-Fletcher; シー．チャボット−フレッチャーマリー
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1997-07-31
Filing date: 1998-01-14
Publication date: 1999-03-02
Also published as: JP2003210183A; EP0894855A3; US5952483A; EP0894855A2

Abstract

(57)【要約】【課題】ＩκＢ−βポリペプチドおよびポリヌクレオ
チド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法
を提供する。【解決手段】配列番号２のＩκＢ−βポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
９０％同一であり、かつＩκＢ−βポリペプチドの活性
を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
チド配列を含んでなるポリヌクレオチドを単離する。【効果】ＩκＢ−βポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは慢性関節リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎
症性腸疾患、自己免疫疾患、組織および／または臓器の
拒絶反応、アルツハイマー病、卒中、アテローム硬化
症、再狭窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変
形性関節症、骨粗しょう症および毛細管拡張性運動失調
を含むがこれらに限らない炎症状態の治療と、このよう
な症状の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドは以後ＩκＢ−βと称するＩκＢファミリーに関す
る。本発明はまた、このようなポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの作用を阻害または活性化することに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】転写因子ＮＦ−κＢは免疫および炎症過
程に関係した多くの遺伝子の発現を調節する上で重要な
因子である。大部分の細胞では、ＮＦ−κＢはＩκＢフ
ァミリーのタンパク質のメンバーと複合体を形成して細
胞質中に存在している。ＩκＢはもともと、指令された
タンパク質−タンパク質相互作用によりＮＦ−κＢの活
性を抑制する不安定な因子として同定されたものであ
る。ヒト胎盤の細胞質ゾル画分からこのタンパク質の２
つの形態ＩκＢ−αとＩκＢ−βが精製されており(Zab
el and Baeuerle, Cell 61:255-265, 1990)、さらにＩ
κＢファミリーの少なくとも３種類の追加のメンバーが
開示されている (Miyamoto and Verma, Adv.Cancer Re
s. 66:255-292, 1995)。細胞活性化の際のＮＦ−κＢの
活性化は、その分解に先立って新規なキナーゼによる２
つのＮ末端セリン上でのＩκＢファミリーメンバーの誘
導可能なリン酸化を伴い、それにより遊離のＮＦ−κＢ
を核内に移行させ、そこでＮＦ−κＢは標的遺伝子のそ
の共通モチーフに結合すると考えられている。ＩκＢの
リン酸化またはその分解を抑制すると、ＮＦ−κＢの活
性化が阻害され、その結果多くの免疫および炎症性メデ
ィエーターの発現が抑制されることが知られている。こ
うしたことは、ＩκＢファミリーに治療用ターゲットと
しての確立され実証された歴史があることを示してい
る。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性関節リ
ウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自己
免疫疾患、組織および／または臓器の拒絶反応、アルツ
ハイマー病、卒中、アテローム硬化症、再狭窄、癌、ウ
イルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節症、骨粗し
ょう症、毛細管拡張性運動失調などの炎症状態を含むが
これらに限らない、機能障害または疾病を予防し、改善
し、治療する上で何らかの役割を果たすＩκＢファミリ
ーの新たなメンバーを同定して特性付ける必要性が存在
している。本発明はこのようなメンバーを提供するもの
である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、ＩκＢ−βポリペプチドおよび組換え物質、並
びにその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様は
ＩκＢ−βポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用
方法に関する。こうした使用には、とりわけ、慢性関節
リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自
己免疫疾患、組織および／または臓器の拒絶反応、アル
ツハイマー病、卒中、アテローム硬化症、再狭窄、癌、
ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節症、骨粗
しょう症、および毛細管拡張性運動失調を含むがこれら
に限らない、炎症状態の治療が含まれる。他の態様で
は、本発明は、本発明により提供される物質を用いてア
ゴニストおよびアンタゴニストを同定する方法、並びに
同定された化合物を用いてＩκＢ−βの不均衡と関連し
た状態を治療することに関する。本発明のさらに他の態
様は、不適当なＩκＢ−β活性またはＩκＢ−βレベル
と関連した疾病を検出するための診断アッセイに関す
る。

【０００５】定義下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「ＩκＢ−β」と
は、特に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配
列を有するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を
意味する。「ＩκＢ−β活性もしくはＩκＢ−βポリペ
プチド活性」または「ＩκＢ−βもしくはＩκＢ−βポ
リペプチドの生物学的活性」とは、類似の活性、向上し
た活性、または望ましくない副作用が低下したこれらの
活性を含めて、ＩκＢ−βの代謝的または生理的機能を
意味する。さらに、前記ＩκＢ−βの抗原的および免疫
原的活性も含まれる。「ＩκＢ−β遺伝子」とは、配列
番号１で表されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレ
オチドまたはそのアレリック変異体および／またはそれ
らの相補体を意味する。

【０００６】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【０００７】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【０００８】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, "Analysis for protein modificati
ons and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (1990)
182:626-646; および Rattan ら, "Protein Synthesi
s: Posttranslational Modifications and Aging",Ann
NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【０００９】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１０】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１１】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１２】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド一つの態様において、本発明はＩκＢ−βポリペプチド
（またはＩκＢ−βタンパク質）に関する。このＩκＢ
−βポリペプチドには、配列番号２のポリペプチドだけ
でなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列と少な
くとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ま
しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
ポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９
９％同一であるものが非常に好適である。また、その全
長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドもＩκＢ−βポリペプチド
に含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一であ
るものが非常に好適である。ＩκＢ−βポリペプチドは
ＩκＢ−βの少なくとも１つの生物学的活性を示すこと
が好ましい。

【００１４】ＩκＢ−βポリペプチドは「成熟」タンパ
ク質の形であっても、融合タンパク質のような、より大
きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加
のアミノ酸配列を含めることが有利であり、このような
アミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プ
ロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配
列、または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配
列などがある。

【００１５】また、ＩκＢ−βポリペプチドの断片も本
発明に含まれる。こうした断片は全体的に前記ＩκＢ−
βポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、
全部とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチド
である。ＩκＢ−βポリペプチドと同様に、断片は「フ
リースタンディング」（それ自体で独立）していても、
より大きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つま
りその大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好
ましくは一つの連続領域、を断片が構成していてもよ
い。本発明のポリペプチド断片の代表的な例として、お
よその見当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１
−６０、６１−８０、８１−１００、および１０１から
ＩκＢ−βポリペプチドの末端までの断片が挙げられ
る。ここで、「およそ」とは、上記の範囲の一端または
両端で数個、５個、４個、３個、２個または１個のアミ
ノ酸が増えたり減ったりした範囲を含むものである。

【００１６】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、Ｉ
κＢ−βポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケ
ーション(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、
αヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシ
ート形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイ
ル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領
域、β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質
結合領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、
構造的または機能的特性により特徴づけられる断片も好
適である。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片
である。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断
片、その活性が向上した断片、または望ましくない活性
が減少した断片を含めて、ＩκＢ−β活性を媒介するも
のである。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性また
は免疫原性がある断片も含まれる。

【００１７】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたＩκＢ−βの生物学的活性を保持すること
が好ましい。特定された配列および断片の変異型も本発
明の一部を構成する。好適な変異型は同類アミノ酸置換
により対象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様
の性質の他の残基で置換されているものである。典型的
なこうした置換は、Ala, Val, Leu と Ileの間；Ser と
Thr の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；
塩基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個ま
たは１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失ま
たは付加されている変異型が好適である。

【００１８】本発明のＩκＢ−βポリペプチドは任意の
適当な方法で製造することができる。このようなポリペ
プチドには、単離された天然に存在するポリペプチド、
組換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造され
たポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製
造されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプ
チドの製造のための手段は当業界でよく理解されてい
る。

【００１９】本発明のポリヌクレオチド本発明のもう一つの態様はＩκＢ−βポリヌクレオチド
に関する。ＩκＢ−βポリヌクレオチドには、ＩκＢ−
βポリペプチドおよび断片をコードする単離されたポリ
ヌクレオチド、並びにこれらと密接に関連したポリヌク
レオチドが含まれる。さらに特定すると、本発明のＩκ
Ｂ−βポリヌクレオチドとしては、配列番号２のＩκＢ
−βポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれる
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列
番号１の特定配列を有するポリヌクレオチドがある。さ
らに、ＩκＢ−βポリヌクレオチドには、配列番号２の
ＩκＢ−βポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
と全長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１のヌ
クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
あるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関連して、少なくとも９０％同一であるポリ
ヌクレオチドが好適であり、特に少なくとも９５％同一
であるものが好適である。さらに、少なくとも９７％同
一であるものがより好ましく、少なくとも９８〜９９％
同一であるものがより一層好ましく、少なくとも９９％
同一であるものが最も好ましい。また、増幅反応に使用
できる条件下、またはプローブやマーカーとして使用で
きる条件下でハイブリダイズするのに十分な、配列番号
１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性を有するヌ
クレオチド配列もＩκＢ−βポリヌクレオチドに含まれ
る。本発明はまた、このようなＩκＢ−βポリヌクレオ
チドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２０】本発明のＩκＢ−βは、ヒトＩκＢ−βを
コードする表１のｃＤＮＡ（配列番号１）の配列決定の
結果により示されるように、ＩκＢファミリーの他のタ
ンパク質と構造的に関連している。配列番号１のｃＤＮ
Ａ配列は配列番号２の３５６個のアミノ酸からなるポリ
ペプチドをコードするオープンリーディングフレーム
（ヌクレオチド番号７０−１１４０）を含んでいる。表
２のアミノ酸配列（配列番号２）は３５６個のアミノ酸
残基においてＴｒｉｐ９ (J.W. Leeら, Mol. Endocrino
l. 9:243-254, 1995) と約９６．１５％同一である（Ｇ
ＡＰ使用）。さらに、ＩκＢ−β（配列番号２）は３６
０個のアミノ酸残基においてマウスＩκＢ−βと８４．
３％同一である (Thompsonら, Cell 80:573-582, 199
5)。表１のヌクレオチド配列（配列番号１）は１２２７
個のヌクレオチド残基においてホモサピエンス甲状腺受
容体相互作用タンパク質−９ (J.W. Leeら, Mol. Endoc
rinol.9:243-254, 1995) と約８８．８％同一である
（ＧＡＰ使用）。さらに、ＩκＢ−β（配列番号１）は
１２４２個のヌクレオチド残基においてマウスＩκＢ−
βと８０．２％同一である (Thompson J.E. ら, Cell 8
0:573-582, 1995)。したがって、本発明のＩκＢ−βポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それ
らの相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の
生物学的機能／特性をもつことが予測され、それらの有
用性は当業者には自明である。

【００２１】ヒトＩκＢ−βのヌクレオチド配列（配列
番号１）

【表１】

【００２２】ヒトＩκＢ−βのアミノ酸配列（配列番号
２）

【表２】

【００２３】ＩκＢ−βをコードする本発明の一つのポ
リヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリ
ーニングにより、ヒトの海馬、滑膜肉腫、Ｔリンパ球、
好中球および膵島の細胞中のｍＲＮＡから誘導されたｃ
ＤＮＡライブラリーから、発現配列タグ（expressed se
quence tag: EST)分析 (Adams, M.D. ら, Science (199
1) 252:1651-1656; Adams, M.D. ら, Nature (1992) 35
5:632-634; Adams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3
-174) を用いて得ることができる。また、本発明のポリ
ヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然
源から得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法
を用いて合成することもできる。

【００２４】配列番号２のＩκＢ−βポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペ
プチドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号７０
−１１４０）と同一であっても、遺伝子コードの重複性
（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコ
ードする配列であってもよい。

【００２５】本発明のポリヌクレオチドをＩκＢ−βポ
リペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリ
ヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列また
はその断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーも
しくは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タ
ンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードす
るもの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリ
ペプチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc.Natl. Acad. Sc
i. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ−
ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、こ
のポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２６】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のＩκＢ−βポリペプチドのアミノ酸配列
（配列番号２）を含むＩκＢ−β変異型をコードするポ
リヌクレオチドである。

【００２７】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００２８】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、ＩκＢ−βポリペプチドをコ
ードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する
ために、また、ＩκＢ−β遺伝子との配列類似性が高い
他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオー
ソログ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤ
ＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡ
およびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブ
として用いることができる。このようなハイブリダイゼ
ーション技法は当業者には公知である。一般的に、これ
らのヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８
０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一で
ある。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを
含み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌク
レオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは
３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものであ
る。

【００２９】一実施態様において、ＩκＢ−βポリペプ
チド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ
体を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ること
は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリ
ーニングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んで
なる。かくして、もう一つの態様では、本発明のＩκＢ
−βポリヌクレオチドはさらに、配列番号１のヌクレオ
チド配列またはその断片とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズするヌクレオチド配列を含んでなるヌク
レオチド配列を含むものである。ＩκＢ−βポリペプチ
ドも、前記のハイブリダイゼーション条件により得られ
たヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を
含んでなるポリペプチドを含む。このようなハイブリダ
イゼーション技法は当業者に公知である。ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件は上で定義したとお
りであるか、または、50% ホルムアミド、５×SSC (150
mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナ
トリウム (pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラ
ン硫酸および20μg/mlの変性し剪断したサケ精子ＤＮＡ
を含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次
いでフィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄する条件
である。

【００３０】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００３１】ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３２】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３３】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３４】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００３５】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００３６】スクリーニングアッセイで使用するためＩ
κＢ−βポリペプチドを発現させようとする場合、その
ポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。ＩκＢ−βポリペプチドが培地
に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製す
るために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、
その細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収す
る必要がある。

【００３７】組換え細胞培養物からＩκＢ−βポリペプ
チドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエ
タノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換ク
ロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００３８】診断アッセイ本発明はまた、診断薬としてのＩκＢ−βポリヌクレオ
チドの使用に関する。機能障害と関連したＩκＢ−β遺
伝子の変異型の検出は、ＩκＢ−βの過少発現、過剰発
現または変化した発現により生ずる疾病またはその罹病
性の診断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断
用ツールを提供するだろう。ＩκＢ−β遺伝子に変異が
ある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つ
け出すことができる。

【００３９】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ＩκＢ−
βヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定
できる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖と
はＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により
区別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用い
るもしくは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移
動度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によって
も検出できる（例えば、Myers ら,Science (1985) 230:
1242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレ
アーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼお
よびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によって
も確認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
(1985) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様で
は、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを
行うため、ＩκＢ−βヌクレオチド配列またはその断片
を含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築する
ことができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能
性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性
を含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすため
に用いられている（例えば、M. Chee ら, Science, Vo
l.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４０】診断アッセイは、前記の方法によりＩκＢ
−β遺伝子の変異を検出することで、慢性関節リウマ
チ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自己免疫
疾患、組織および／または臓器の拒絶反応、アルツハイ
マー病、卒中、アテローム硬化症、再狭窄、癌、ウイル
ス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節症、骨粗しょう
症、および毛細管拡張性運動失調を含むがこれらに限ら
ない炎症状態への罹りやすさを診断または判定する方法
を提供する。

【００４１】さらに、被験者から得られたサンプルから
ＩκＢ−βポリペプチドまたはＩκＢ−βｍＲＮＡのレ
ベルの異常な低下または増加を測定する方法により、慢
性関節リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾
患、自己免疫疾患、組織および／または臓器の拒絶反
応、アルツハイマー病、卒中、アテローム硬化症、再狭
窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節
症、骨粗しょう症、および毛細管拡張性運動失調を含む
がこれらに限らない炎症状態の診断を下すことができ
る。発現の低下または増加は、当技術分野で公知のポリ
ヌクレオチド定量法のいずれか、例えばＰＣＲ、ＲＴ−
ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッ
ト、その他のハイブリダイゼーション法によりＲＮＡレ
ベルで測定することができる。宿主から得られたサンプ
ル中のＩκＢ−βポリペプチドのようなタンパク質のレ
ベルを測定するためのアッセイ法は当業者によく知られ
ている。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッ
セイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、Ｅ
ＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４２】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病、特に慢性関節リウマチ、皮膚病（例えば、
乾癬）、炎症性腸疾患、自己免疫疾患、組織および／ま
たは臓器の拒絶反応、アルツハイマー病、卒中、アテロ
ーム硬化症、再狭窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤＳを含
む）、変形性関節症、骨粗しょう症、および毛細管拡張
性運動失調を含むがこれらに限らない炎症状態、または
このような疾病への罹りやすさを診断するためのキット
に関し、このキットは、(a) ＩκＢ−βポリヌクレオチ
ド（好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列）もし
くはその断片、(b) (a) のヌクレオチド配列に相補的な
ヌクレオチド配列、(c) ＩκＢ−βポリペプチド（好ま
しくは、配列番号２のポリペプチド）もしくはその断
片、または(d) ＩκＢ−βポリペプチド（好ましくは、
配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、を含んでな
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。

【００４３】染色体アッセイ本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。

【００４４】患者と正常個体とのｃＤＮＡまたはゲノム
配列の差異も調べることができる。患者の一部または全
部に変異が観察されるが、どの正常個体にも観察されな
い場合は、その変異が疾病の原因である可能性がある。

【００４５】抗体本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、ＩκＢ−βポリペプチ
ドに免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても
使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体
が従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその
親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高
い親和性を有することを意味する。

【００４６】ＩκＢ−βポリペプチドに対する抗体は、
慣用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C.,Nature (1975) 256:495-497)、ト
リオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法(Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AN
D CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R.Liss, Inc., 198
5) などがある。

【００４７】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。ＩκＢ−βポリペプチドに対する抗体は、とりわ
け、慢性関節リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症
性腸疾患、自己免疫疾患、組織および／または臓器の拒
絶反応、アルツハイマー病、卒中、アテローム硬化症、
再狭窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性
関節症、骨粗しょう症、および毛細管拡張性運動失調を
含むがこれらに限らない炎症状態の治療に使用できる可
能性がある。

【００４８】ワクチン本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性関節リウマ
チ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自己免疫
疾患、組織および／または臓器の拒絶反応、アルツハイ
マー病、卒中、アテローム硬化症、再狭窄、癌、ウイル
ス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節症、骨粗しょう
症、および毛細管拡張性運動失調を含むがこれらに限ら
ない炎症状態から前記動物を防御するための抗体および
／またはＴ細胞免疫応答を生ずるのに十分なＩκＢ−β
ポリペプチドまたはその断片を哺乳動物に接種すること
を含んでなる。本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を
疾病から防御する抗体を産生させるような免疫学的応答
を引き出すために、in vivo でＩκＢ−βポリヌクレオ
チドの発現を指令するベクターを介してＩκＢ−βポリ
ペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物におい
て免疫学的応答を引き出す方法に関する。

【００４９】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてＩκＢ−βポリペプ
チドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチ
ン製剤（組成物）に関し、この組成物はＩκＢ−βポリ
ペプチドまたはＩκＢ−β遺伝子を含有する。ワクチン
製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ＩκＢ−
βポリペプチドは胃の中で分解されうるので、非経口的
（皮下、筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投
与することが好ましい。非経口投与に適した製剤として
は、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容
者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および非水性
の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる
水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は
１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルお
よびバイアル）で提供することができ、また、使用直前
に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫
原性を増強するためのアジュバント系、例えば水中油型
のアジュバント系や当技術分野で公知の他のアジュバン
ト系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で
変化し、ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５０】スクリーニングアッセイ本発明のＩκＢ−βポリペプチドは、このポリペプチド
を活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻
害する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともい
う）のスクリーニング法において使用することができ
る。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細
胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産
物の混合物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価
し同定するためにも用いられる。これらのアゴニストま
たはアンタゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合
によって、天然のまたは修飾された基質、リガンド、受
容体、酵素などであってよく、また、本発明のポリペプ
チドの構造的または機能的な模擬物であってもよい（Co
ligan ら, Current Protocols in Immunology 1(2): Ch
apter 5 (1991)を参照のこと）。

【００５１】ＩκＢ−βポリペプチドは多くの病理を含
めて多数の生物学的機能に関与している。したがって、
一方ではＩκＢ−βポリペプチドを刺激し、他方ではＩ
κＢ−βポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および
薬物を見つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニス
トは慢性関節リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症
性腸疾患、自己免疫疾患、組織および／または臓器の拒
絶反応、アルツハイマー病、卒中、アテローム硬化症、
再狭窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性
関節症、骨粗しょう症、および毛細管拡張性運動失調を
含むがこれらに限らない炎症状態のような症状の治療お
よび予防目的で用いられる。アンタゴニストも慢性関節
リウマチ、皮膚病（例えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自
己免疫疾患、組織および／または臓器の拒絶反応、アル
ツハイマー病、卒中、アテローム硬化症、再狭窄、癌、
ウイルス感染（ＡＩＤＳを含む）、変形性関節症、骨粗
しょう症、および毛細管拡張性運動失調を含むがこれら
に限らない炎症状態のような症状のさまざまな治療およ
び予防目的で使用しうる。

【００５２】一般に、こうしたスクリーニング法はＩκ
Ｂ−βポリペプチドを発現する適当な細胞、またはＩκ
Ｂ−βポリペプチドに応答する適当な細胞を用いるもの
である。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョ
ウバエ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次い
で、ＩκＢ−βポリペプチドを発現する細胞（もしくは
発現されたポリペプチドを含む細胞膜）またはＩκＢ−
βポリペプチドに応答する細胞を試験化合物と接触させ
て、その結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観
察する。候補化合物と接触させた細胞の能力を、接触さ
せなかった同一細胞とＩκＢ−β活性に関して比較す
る。

【００５３】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、ＩκＢ−βポ
リペプチドを担持する細胞への付着が検出される。さら
に、これらのアッセイでは、ＩκＢ−βポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物がＩ
κＢ−βポリペプチドの活性化により生ずるシグナルを
結果的にもたらすか否かを試験することができる。一般
的に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でア
ッセイされ、そして候補化合物の存在がアゴニストによ
る活性化に与える影響が調べられる。

【００５４】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とＩκＢ−βポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて
混合物をつくり、この混合物中のＩκＢ−β活性を測定
し、そしてこの混合物のＩκＢ−β活性を標準と比較す
る各ステップを単に含むだけでよい。

【００５５】また、ＩκＢ−βのｃＤＮＡ、タンパク質
またはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内で
のＩκＢ−βｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす
添加化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立て
ることができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法
によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用い
て、ＩκＢ−βタンパク質の分泌レベルまたは細胞結合
レベルを測定するためのＥＬＩＳＡを構築することがで
き、これは適切に操作された細胞または組織からのＩκ
Ｂ−βの生産を抑制または増強する物質（それぞれアン
タゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用いる
ことができる。

【００５６】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにＩκＢ−βタ
ンパク質を用いることができる。こうした受容体結合法
には、限定するものではないが、リガンド結合および架
橋アッセイがあり、このアッセイでは、ＩκＢ−βを放
射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に
修飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適
したペプチド配列に融合させ、そして推定上の受容体源
（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など）と
インキュベートする。その他の方法としては、表面プラ
ズモン共鳴および分光学のような生物物理的方法があ
る。受容体の精製およびクローニングに用いることに加
えて、これらの結合アッセイは、もし存在するのであれ
ば、ＩκＢ−βのその受容体への結合と競合するＩκＢ
−βのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するため
に用いることもできる。スクリーニングアッセイを行う
ための標準的な方法は当技術分野でよく理解されてい
る。

【００５７】ＩκＢ−βポリペプチドの潜在的なアンタ
ゴニストの例としては、抗体、ある場合には、ＩκＢ−
βポリペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと
密接な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク
質（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断
片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を
誘導しない（それゆえポリペプチドの活性を妨げる）小
分子などがある。

【００５８】かくして、他の態様において、本発明は、
ＩκＢ−βポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニス
ト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはＩκＢ
−βポリペプチドの生産を低下または増加させる化合物
を同定するためのスクリーニングキットに関し、このキ
ットは、(a) ＩκＢ−βポリペプチド（好ましくは、配
列番号２のポリペプチド）(b) ＩκＢ−βポリペプチド
（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）を発現する
組換え細胞、(c) ＩκＢ−βポリペプチド（好ましく
は、配列番号２のポリペプチド）を発現している細胞
膜、または(d) ＩκＢ−βポリペプチド（好ましくは、
配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、を含んでな
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。

【００５９】予防および治療法本発明は、ＩκＢ−βポリペプチド活性の過剰量と不足
量のどちらにも関係した慢性関節リウマチ、皮膚病（例
えば、乾癬）、炎症性腸疾患、自己免疫疾患、組織およ
び／または臓器の拒絶反応、アルツハイマー病、卒中、
アテローム硬化症、再狭窄、癌、ウイルス感染（ＡＩＤ
Ｓを含む）、変形性関節症、骨粗しょう症、および毛細
管拡張性運動失調を含むがこれらに限らない炎症状態な
どの異常な状態の治療法を提供する。ＩκＢ−βポリペ
プチドの活性が過剰である場合は、いくつかのアプロー
チが利用可能である。一つのアプローチは、例えば、リ
ガンド、基質、受容体、酵素などの結合をブロックする
ことにより、または第２のシグナルを抑制することで異
常な状態を軽減することにより、ＩκＢ−βポリペプチ
ドの機能を阻害するのに有効な量で、前記の阻害剤化合
物（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体ととも
に患者に投与することを含んでなる。もう一つのアプロ
ーチでは、リガンド、基質、酵素、受容体などと結合す
る能力がまだある可溶性形態のＩκＢ−βポリペプチド
を、内因性のＩκＢ−βポリペプチドとの競合状態で投
与する。このような競合剤の典型的な例はＩκＢ−βポ
リペプチドの断片である。

【００６０】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ＩκＢ−βポリペプチドをコードする遺伝
子の発現を抑制することができる。こうした公知技術
は、体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス
配列の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleoti
des as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CR
C Press, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neur
ochem (1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、こ
の遺伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチ
ドを供給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic
Acids Res (1979)6:3073; Cooney ら, Science (1988)
241:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照
のこと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与すること
もできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させるこ
ともできる。

【００６１】ＩκＢ−βおよびその活性の過少発現に関
係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロ
ーチを取ることができる。一つのアプローチは、治療上
有効な量のＩκＢ−βポリペプチドを活性化する化合物
（すなわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される
担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和するこ
とを含んでなる。別法として、患者の関連細胞において
ＩκＢ−βを内因的に産生させるために遺伝子治療を用
いることができる。例えば、上で述べたような複製欠損
レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポ
リヌクレオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス
発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードす
るＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクター
で形質導入されたパッケージング細胞に導入する。その
結果、パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感
染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo で
の細胞処理およびin vivo でのポリペプチド発現のため
に、これらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の
概論に関しては、Human Molecular Genetics, T Strach
anand A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (19
96) 中のChapter 20, Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches(およびその
中の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは
治療量のＩκＢ−βポリペプチドを適当な製剤学上の担
体とともに投与することである。

【００６２】製剤および投与可溶性形態のＩκＢ−βポリペプチドのようなペプチ
ド、アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または
小分子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化す
ることができる。このような製剤は治療上有効な量のポ
リペプチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩
水、生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、
エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これらに
限らない。製剤は投与様式に適合させるべきであり、こ
れは当技術分野の技量の範囲内である。本発明はさら
に、前記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以
上の容器を含んでなる医薬用パックおよびキットに関す
る。本発明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使
用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使
用してもよい。

【００６３】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００６４】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００６５】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００６６】

【実施例】以下の実施例は、特に明記しない限り、当技
術分野で日常的に用いられる公知の標準技法を用いて実
施した。これらの実施例は本発明を例示するためのもの
で、本発明を制限するものではない。実施例１ｃＤＮＡライブラリーのランダムスクリーニングにより
測定した、さまざまなヒト組織および細胞の遺伝子発現
プロフィールを、ウイスコンシン大学ＧＣＧソフトウェ
アパッケージのＦＡＳＴＡアルゴリズムを用いてマウス
ｃＤＮＡとの相同性を有する発現配列タグ（ＥＳＴ）に
関して検索した。この比較によりいくつかの遺伝子「ヒ
ット」(hit) が得られた。全ｃＤＮＡクローンの重複二
方向配列決定を可能にするように選ばれたプライマーを
使って、全長クローンに対してチェーンターミネーショ
ン配列決定法を実施した。

【００６７】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００６８】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１２２７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡ配列 CGGGTCGACC CACGCGTCCG CCCAGCTACA GGCGGGCGAC TGCGGGGGGC CCCTGAGGCG 60 GCGGGGGCCA TGGCTGGGGT CGCGTGCTTG GGAAAAGCTG CCGACGCAGA TGAATGGTGC 120 GACAGCGGCC TGGGCTCCCT GGGTCCGGAC GCAGCGGCCC CCGGAGGACC TGGGTTGGGC 180 GCGGAGTTGG GCCCGGGGCT GTCGTGGGCT CCCCTCGTCT TCGGCTACGT CACTGAGGAT 240 GGGGACACGG CACTGCACTT GGCTGTGATT CATCAGCATG AACCCTTCCT GGATTTTCTT 300 CTAGGCTTCT CGGCCGGCAC TGAGTACATG GACCTGCAGA ATGACCTAGG CCAGACAGCC 360 CTGCACCTGG CAGCCATCCT GGGGGAGACA TCCACGGTGG AGAAGCTGTA CGCAGCAGGC 420 GCCGGGCTGT GTGTGGCGGA GCGTAGGGGC CACACGGCGC TGCACCTGGC CTGCCGTGTG 480 GGGGCACACG CCTGTGCCCG TGCCCTGCTT CAGCCCCGCC CCCGGCGCCC CAGGGAAGCC 540 CCCGACACCT ACCTCGCTCA GGGCCCTGAC CGTACTCCCG ACACCAACCA TACCCCTGTC 600 GCCTTGTACC CCGATTCCGA CTTGGAGAAG GAAGAAGAGG AGAGTGAGGA GGACTGGAAG 660 CTGCAGCTGG AGGCTGAAAA CTACGAGGGC CACACCCCAC TCCACGTGGC CGTTATCCAC 720 AAAGATGTGG AGATGGTCCG GCTGCTCCGA GATGCTGGAG CTGACCTTGA CAAACCGGAG 780 CCCACGTGCG GCCGGAGCCC CCTTCATTTG GCAGTGGAGG CCCAGGCAGC CGATGTGCTG 840 GAGCTTCTCC TGAGGGCAGG CGCGAACCCT GCTGCCCGCA TGTACGGTGG CCGCACCCCA 900 CTCGGCAGTG CCATGCTCCG GCCCAACCCC ATCCTCGCCC GCCTCCTCCG TGCACACGGA 960 GCCCCTGAGC CCGAGGGCGA GGACGAGAAA TCCGGCCCCT GCAGCAGCAG TAGCGACAGC 1020 GACAGCGGAG ACGAGGGCGA TGAATACGAC GACATTGTGG TTCACAGCAG CCGCAGCCAA 1080 ACCCGGCTGC CTCCCACCCC AGCCTCAAAA CCTCTTCCTG ACGACCCCCG CCCCGTGTGA 1140 TTTGTTTCAT TGTTAATATA ATTTCCAGTT TAATAAACAA AACCCTAGTT CTGACAACCA 1200 GGAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAA 1227

【００６９】配列番号：２配列の長さ：３５６配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Met Ala Gly Val Ala Cys Leu Gly Lys Ala Ala Asp Ala Asp Glu Trp 1 5 10 15 Cys Asp Ser Gly Leu Gly Ser Leu Gly Pro Asp Ala Ala Ala Pro Gly 20 25 30 Gly Pro Gly Leu Gly Ala Glu Leu Gly Pro Gly Leu Ser Trp Ala Pro 35 40 45 Leu Val Phe Gly Tyr Val Thr Glu Asp Gly Asp Thr Ala Leu His Leu 50 55 60 Ala Val Ile His Gln His Glu Pro Phe Leu Asp Phe Leu Leu Gly Phe 65 70 75 80 Ser Ala Gly Thr Glu Tyr Met Asp Leu Gln Asn Asp Leu Gly Gln Thr 85 90 95 Ala Leu His Leu Ala Ala Ile Leu Gly Glu Thr Ser Thr Val Glu Lys 100 105 110 Leu Tyr Ala Ala Gly Ala Gly Leu Cys Val Ala Glu Arg Arg Gly His 115 120 125 Thr Ala Leu His Leu Ala Cys Arg Val Gly Ala His Ala Cys Ala Arg 130 135 140 Ala Leu Leu Gln Pro Arg Pro Arg Arg Pro Arg Glu Ala Pro Asp Thr 145 150 155 160 Tyr Leu Ala Gln Gly Pro Asp Arg Thr Pro Asp Thr Asn His Thr Pro 165 170 175 Val Ala Leu Tyr Pro Asp Ser Asp Leu Glu Lys Glu Glu Glu Glu Ser 180 185 190 Glu Glu Asp Trp Lys Leu Gln Leu Glu Ala Glu Asn Tyr Glu Gly His 195 200 205 Thr Pro Leu His Val Ala Val Ile His Lys Asp Val Glu Met Val Arg 210 215 220 Leu Leu Arg Asp Ala Gly Ala Asp Leu Asp Lys Pro Glu Pro Thr Cys 225 230 235 240 Gly Arg Ser Pro Leu His Leu Ala Val Glu Ala Gln Ala Ala Asp Val 245 250 255 Leu Glu Leu Leu Leu Arg Ala Gly Ala Asn Pro Ala Ala Arg Met Tyr 260 265 270 Gly Gly Arg Thr Pro Leu Gly Ser Ala Met Leu Arg Pro Asn Pro Ile 275 280 285 Leu Ala Arg Leu Leu Arg Ala His Gly Ala Pro Glu Pro Glu Gly Glu 290 295 300 Asp Glu Lys Ser Gly Pro Cys Ser Ser Ser Ser Asp Ser Asp Ser Gly 305 310 315 320 Asp Glu Gly Asp Glu Tyr Asp Asp Ile Val Val His Ser Ser Arg Ser 325 330 335 Gln Thr Arg Leu Pro Pro Thr Pro Ala Ser Lys Pro Leu Pro Asp Asp 340 345 350 Pro Arg Pro Val 355

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｐ 21/02 33/50 ＴＧ０１Ｎ 33/15 Ｐ 33/50 33/68 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＡ 33/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２のＩκＢ−βポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
９０％同一であり、かつＩκＢ−βポリペプチドの活性
を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
チド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
のＩκＢ−βポリペプチドをコードする配列番号１中に
含まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記
載のポリヌクレオチド。
【請求項３】前記のポリヌクレオチドが、その全長に
おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９０
％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】配列番号１のポリヌクレオチドである、
請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】配列番号２のＩκＢ−βポリペプチドの
アミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付
加、欠失または置換されており、かつＩκＢ−βポリペ
プチドの活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレ
オチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
【請求項７】下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも９７％
同一であるアミノ酸配列を含むＩκＢ−βポリペプチド
を産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまた
はＲＮＡ分子。
【請求項８】請求項７に記載の発現系を含有する宿主
細胞。
【請求項９】ＩκＢ−βポリペプチドを産生させるの
に十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、
この培養物から前記ポリペプチドを回収することを含ん
でなる、ＩκＢ−βポリペプチドの産生方法。
【請求項１０】宿主細胞が適当な培養条件下でＩκＢ
−βポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の
発現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェ
クションすることを含んでなる、ＩκＢ−βポリペプチ
ドを産生する細胞の作製方法。
【請求項１１】全長において配列番号２のアミノ酸配
列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含んで
なるＩκＢ−βポリペプチド。
【請求項１２】配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】請求項１１に記載のＩκＢ−βポリペ
プチドに免疫特異的な抗体。
【請求項１４】請求項１１に記載のＩκＢ−βポリペ
プチドの活性増加または発現増加を必要としている患者
を治療するための医薬組成物であって、治療に有効な量
の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
たは(b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたら
す形の、配列番号２のＩκＢ−βポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列と全長において少なくとも９０％
同一であるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド
配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単
離されたポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】請求項１１に記載のＩκＢ−βポリペ
プチドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治
療するための医薬組成物であって、治療に有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
／または(b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c)
前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に関し
て前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含んで
なる医薬組成物。
【請求項１６】請求項１１に記載のＩκＢ−βポリペ
プチドの発現または活性と関連した被験者の疾病または
その罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者のゲノム中にＩκＢ−βポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列の突然変異があるかどうか
を調べる、および／または(b) 前記被験者から得られた
サンプル中のＩκＢ−βポリペプチド発現の存在または
量を分析する、ことを含んでなる方法。
【請求項１７】請求項１１に記載のＩκＢ−βポリペ
プチドを阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方
法であって、 (a) ＩκＢ−βポリペプチドを発現している細胞（もし
くはＩκＢ−βポリペプチドを発現している細胞膜）ま
たはＩκＢ−βポリペプチドに応答する細胞と候補化合
物とを接触させ、そして(b) その結合、または機能的応
答の刺激もしくは抑制を観察するか、または候補化合物
と接触させた細胞（または細胞膜）の能力を、接触させ
なかった同一の細胞と、ＩκＢ−βポリペプチド活性に
関して比較する、ことを含んでなる方法。
【請求項１８】請求項１７に記載の方法により同定さ
れたアゴニスト。
【請求項１９】請求項１７に記載の方法により同定さ
れたアンタゴニスト。
【請求項２０】請求項１０に記載の方法により作製さ
れた組換え宿主細胞、またはＩκＢ−βポリペプチドを
発現しているその膜。