JPH10501149A - 食物不耐性／アレルギーを確認する診断方法及び該方法実施時に用いる装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 アレルギーの疑いが有る患者の大腸粘膜を疑わしいアレルギーの原因とされるアレルゲンで経直腸反応誘発した後に該患者の大腸から経直腸採取した試料を分析することを含むアレルギー診断方法。この方法は、（ａ）大腸の内腔において試料を採取し、（ｂ）試料中の炎症マーカーを測定し、（ｃ）マーカー量の増大（放出量増大）を、患者が当該アレルゲンに対してアレルギーであることの指標と看做すことを特徴とする。本発明は、直腸へ経直腸挿入する装置にも係わる。本発明の装置は、膨張可能部分を有し、この部分は該部分の各々の側で開口する中心チャネルと、装置を直腸内に適用した時に膨張可能部分の外壁が直腸の粘膜と直接接触するように膨張部分の膨張を制御することを可能にする分離チャネルとを囲繞し、膨張可能部分の外側を規定する面上には拡散性アレルゲンが存在し、場合によっては炎症マーカーの受容体も存在することを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】 食物不耐性／アレルギーを確認する診断方法及び 該方法実施時に用いる装置 本発明は、アレルギー、特に食物不耐性／アレルギーを診断する新規な方法に 係わり、アレルゲンによる大腸粘膜の反応誘発（ｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎ）後に 大腸において放出される炎症媒介因子（マーカー）の分析に基づく。本発明はま た、上記のような診断において大腸粘膜の反応誘発に用い得る新規な装置にも係 わる。好ましい具体例によれば、上記装置は粘膜の反応誘発と同時に、放出され た媒介因子（マーカー）の収集にも用い得る。 本発明との関連で「アレルゲン」という語は、食物不耐性／アレルギーの形態 の不快と関係付けられる。即ち、この語はＩｇＥによって媒介される不快と必ず しも関係付けられるものではない。 「大腸」という語は結腸及び直腸を意味する。食物不耐性／アレルギーを診断する公知方法及び関連する問題点 食物不耐性／アレルギーが疑われる状態を診断する現行方法は限られた有用性 しか有せず、及び／または時間が掛 かる。グルテン不耐性の場合、該診断方法は小腸内での絨毛萎縮の確認、及び食 事からグルテンを排除すると絨毛萎縮が回復（ｒｅｖｅｒｓｅ）することの確認 に基づく。前記診断方法のガイドラインは、グルテンに対する血清抗体の存在に 見出される。絨毛萎縮以外の形態の食物不耐性／アレルギーに関する診断方法は 甚だ不十分である。グルテンの経口摂取（ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ）が小腸内で局所 的炎症反応を助長することは生検試験から知られているが、その過程は詳細には 解明されていない。以前の研究では、セリアック病（ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅ ａｓｅ）患者の局所的炎症応答を、グルテンで反応誘発した小腸の連続灌流によ って調べる試みが為された。その結果は、僅かだが重 ｔ ３１， ｐｐ． １５３−１５７， １９９０； Ｂ． ａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ９９， ｐｐ．７０３−７０７， １９９０ ）。しかし、小腸灌流の実施は技術的に要求されるものが多く困難であり、臨床 診断には実際上不適当である。 セリアック病患者の直腸反応誘発を生検試験と組み合わせて実施することが以 前に開示されている（Ｄｏｂｂｉｎｓ等， Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ４７， ｐｐ．４７１−４７９， １９６４； Ａｕｓｔｉｎ等，Ｇｕｔ ２ ９， ｐｐ．２００−２０５， １９８８；Ｌｏｆｔ等， Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ ｅｒｏｌｏｇｙ ９７，ｐｐ．２９−３７， １９８９；及びＬｏｆｔ等， Ｌ ａｎｃｅｔ ３３５， ｐｐ． １２９３−１２９５， １９９０）。 潰瘍性大腸炎、直腸炎、クローン病、及び他の非特異的結腸疾患の患者の基礎 的な（ｂａｓａｌ）、即ち反応誘発されていない時の炎症媒介因子放出について の研究も為されている（Ｙ． Ｒａａｂ等， Ａｍ． Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎ ｔｅｒｏｌｏｇｙ ８７， ｐｐ． １４５３−１４５９， １９９２； Ｙ． Ｒａａｂ等， Ｇｕｔ ３４， ｐｐ． １２０３−１２０６， １９９３； 及びＹ．Ｒａａｂ等， Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎｓ ５５， ｐｐ．４４−４９， １９９４）。試料は結腸及び直腸の分節（ｓｅｇｍｅｎｔａｌ）灌流によって採 取された。腸の結腸直腸部分内に適用されるカテーテルを用いる研究も可能と なった（Ｋｒｏｇ等の国際特許出願公開第９１０８０１３号）。上記カテーテル は反応誘発機能を有するとされているが、この反応誘発の方法及び目的は明示さ れていない。 従って、特定の食物に対する食物不耐性／アレルギーを簡単、迅速かつ明確に 確認し得る試験システムが緊急に求められている。図面の簡単な説明 第１図は本発明と組み合わせて用いる得る公知装置（カテーテル）を示す説明 図である（Ｋｒｏｇ等の上掲国際特許出願公開）。 第２ａ図及び第２ｂ図は第１図に示した公知装置（カテーテル）の別の具体例 を示す、装置を腸内で適所に保持するべく企図された部分の断面図も含む説明図 である（Ｋｒｏｇ等の上掲国際特許出願公開）。 第３図はアレルゲンでの反応誘発、及び／または放出されたマーカーの収集の ために大腸内に適用された第１図の装置（Ｋｒｏｇ等の上掲国際特許出願公開） を示す説明図である。 第４ａ図〜第４ｃ図は本発明の装置の一具体例を示す説明図である。 第５図は直腸内に適用された第４図の装置を示す説明図である。 異なる図に示した部分で機能上対応するものには同じ参照符号を付した。第４ 図及び第５図に示した装置は成人に適した大きさを有する。発明の詳細な説明 本発明者は今や、アレルゲンで直腸からの反応誘発（ｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎ ｐｅｒ ｒｅｃｔｕｍ）を行なうと、当該アレルゲンに対して感作された（ｓ ｅｎｓｉｂｉｌｉｚｅｄ）アレルギー患者、特に食物不耐性／アレルギー患者で はその大腸粘膜から大腸内腔への炎症媒介因子の盛んでかつ特異的な局所的放出 が惹起されることを発見した。健康な個体では対応する放出はみられない。 上記発見から本発明者は、アレルギー、特に食物アレルギーの疑いが有る患者 の大腸（結腸または直腸）粘膜を疑わしいアレルギーの原因とされるアレルゲン で経直腸（ｒｅｃｔａｌｌｙ）反応誘発した後に、前記患者の大腸（結腸または 直腸）から経直腸採取した試料を分析することを含む診断方法に到達した。本発 明の最も広い構成において本発明の方法は、（ａ）試料を大腸（結腸及び／また は直 腸）の内腔から採取すること、（ｂ）試料中の炎症マーカーを測定すること、及 び（ｃ）試料中のマーカー量の増大（放出量増大）を、患者が当該アレルゲンに 対してアレルギーであることの指標と看做すことを特徴とする。 健康個体の正常値との比較、または同じ方法で、ただし同時に行なわれる反応 誘発は行なわずに試験した被検者の値との比較を行なう。 適当な炎症マーカーは、例えば好中球、好酸球、肥満細胞／好塩基球に由来す る物質である。特定例には、サイトカイン（ＩＬ−６及びＩＬ−８など）及びミ エロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ）塩基性 タンパク質（ＥＣＰ）、好酸球タンパク質Ｘ（ＥＰＸ）、ヒスタミン、カテプシ ンＧ、ラクトフェリン、リゾチーム及びエラスターゼ並びにプロスタグランジン が有る。血漿タンパク質（例えばアルブミン）が内腔内に存在することもマーカ ーと看做すことができ、なぜなら前記存在は内腔への漏出を示すからである。 試料採取は、大腸の直腸内にのみ、または結腸内にまで経直腸挿入する装置を 用いて行なう。この装置は、放出されたマーカーを収集し、かつ場合によっては 灌流を可能と し、及び／または直腸／結腸粘膜へのアレルゲンの接触実現（ｐｒｅｓｅｎｔａ ｔｉｏｎ）も可能にする手段８を含む。 設置する前記手段は、直腸／結腸の所与の部分（例えば分節）の灌流及び反応 誘発を可能にし、かつ内腔へと放出された炎症マーカーの前記直腸／結腸部分か らの収集を可能にするように設計し得る。装置を直腸／結腸内で確実に適所に保 持するべく、好ましくは上記装置に、直腸／結腸の装置上方に位置する部分を装 置下方に位置する部分と連絡する貫通チャネル２を設ける。チャネル２は周囲圧 力と腸内圧力とを平衡させる（ｅｑｕａｌｉｚｅ）べく、及び腸の内容物の排出 を可能にするべく機能する。収集、灌流及び接触実現手段８は装置上で、内括約 筋の上方に位置するように配置する。 この点に関して適当な装置は、（上掲国際特許出願公開に）Ｋｒｏｇ等によっ て開示された公知のカテーテルである（第１図〜第３図）。この装置は、患者の 結腸及び直腸の一部を灌流することによって分節の反応誘発と、放出された炎症 マーカーの収集とを行なうのに良く適する。装置の重要な構成要素の一つにカテ ーテル管１が有り、この管 １を貫通して、該管１の両端において開口するチャネル２が伸長する。チャネル ２は腸内圧力と周囲圧力とを先に述べたように平衡させるべく機能する。カテー テルの、肛門外口を通過して伸長する部分を囲繞して１個以上の膨張可能デバイ ス３及び３′が設置されており、これらのデバイス３、３′は肛門においてカテ ーテルを固定する。カテーテルを囲繞する更に別の膨張可能デバイス４ａ、４ｂ 、４ｃ及び４ｄも該カテーテル沿いに設置されており、これらは直腸／結腸内で 膨張すると直腸／結腸分節の範囲（５）を規定する。カテーテルはまた、カテー テル壁内で、またはカテーテル壁沿いに伸長する複数のチャネル６も含み、各チ ャネル６の一方の開口部はカテーテルの、カテーテル使用時に身体外部に位置す る部分に位置し、他方の開口部はカテーテル管１に沿って配置された膨張可能デ バイス４のうちのいずれか１個の中に位置する。チャネル６は膨張可能デバイス ４の膨張を制御する手段として機能する。カテーテルは１個以上の分離チャネル ７も含み、各チャネル７の一方の開口部はカテーテルの外部に位置し、他方の開 口部は直腸／結腸分節の範囲を規定するべく企図された膨張可能デバイス同士の 間に位置する。チャネル７は、灌流 液を２個の膨張可能デバイス（第１図では３′及び４ａ、第２ａ図ではそれそれ ４ａ及び４ｂ、並びに４ｃ及び４ｄ）によって規定された腸分節５へ導入する／ 前記腸分節５から導出することを可能にする。即ち、上記２個の膨張可能デバイ スは、１個以上のチャネル開口部を伴い上記デバイス間に位置するカテーテル分 節と共に、灌流、アレルゲンの付与（ａｌｌｅｒｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉ ｏｎ）、及び放出された炎症マーカーの収集に用い得る手段８を構成する。大抵 のアレルゲンの場合、灌流液をアレルゲンの投与と放出された炎症マーカーの収 集との両方に用い得る。幾つかのアレルゲン、例えばペースト状で粘稠なグルテ ンの場合は、反応誘発は好ましくは装置を直腸／結腸から取り出して別個に行な う。後段を参照されたい。１個の膨張可能デバイス（第１図及び第２ａ図の４ｄ ）とこれに関連する制御チャネルとは常にカテーテルの、直腸／結腸内へ最も深 く挿入されるべき端部に設置されるべきである。 膨張可能デバイスは、ガスで膨らむ（ｉｎｆｌａｔａｂｌｅ）バルーンの形態 を有し得る。 カテーテル壁内を伸長するチャネル（６及び７）は、カ テーテル壁の内側面または外側面に、または前記内側面内または外側面内に多少 とも強固に固定されたホースまたは管の形態を有することも可能である。 第２図に示したように、直腸／結腸分節５を規定するべく企図された膨張可能 デバイス（４ａ及び４ｂ）を、カテーテル管１上に押し被せ得る管９上に配置す れば、直腸／結腸の灌流／反応誘発するべき部分に関してより高い可撓性を達成 することができる。この場合、膨張可能デバイスまで伸長するチャネル６及び膨 張可能デバイス同士の間隙まで伸長するチャネル７は好ましくは、中心チャネル の外壁に沿って軸線方向に移動可能なホースまたは管の形態を有する。可能であ れば、それらチャネルは着脱可能な管内に多少とも強固に固定してもよい。 第１図及び第２図に示した装置は、直腸／結腸（その全体または一部）をまず アレルゲン非含有緩衝液で灌流すること、直腸／結腸反応誘発用の水性アレルゲ ン組成物を適用すること、前記アレルゲン組成物を直腸／結腸から除去すること 、及び直腸／結腸の反応誘発部分をアレルゲン非含有緩衝液で灌流すること（２ 回目の灌流）を含む方法と共に用い得る。少なくとも最後の灌流過程の間に灌流 液を 回収し、これを炎症マーカーに関して分析する。得られた値を、健康な個体にお いて得られた値と比較する。値の甚だしい増大が観察される場合、これを、当該 個体が反応誘発アレルゲンに対して食物不耐性／アレルギーであることの指標と 看做す。本発明の方法のこの変形例では装置を、１回目の灌流ステップと反応誘 発ステップとの間で結腸から取り出し、２回目の灌流ステップの前に戻す。 別の実施態様では、アレルゲンを灌流緩衝液中に存在させる。この場合、最初 に行なう１回目の灌流ステップにおいて、腸の灌流するべき部分を清浄化する。 このステップでは、灌流溶液はアレルゲンを含有しない。次に腸を、アレルゲン 含有灌流溶液で灌流する。最後に、アレルゲン無含有灌流溶液で腸を還流する。 この方法を実施する場合、異なる灌流ステップ間で灌流装置を腸から取り出す必 要は無い。 上述の実施態様のいずれを実施する場合も、最初の灌流ステップから回収した 灌流液を最後の灌流ステップから回収した灌流液において分析したのと同じマー カーに関して分析し、得られた値同士を比較することも有益である。後の灌流ス テップの値の方が大きいことが、当該アレルゲン に対するアレルギーの指標となる。 灌流液／灌流溶液は通常、例えば生理学的に許容可能なＰＢＳなどの緩衝液で 処理する。灌流溶液中には、該溶液を直腸／結腸粘膜に対して親和性（ｆｒｉｅ ｎｄｌｙ）とする塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、グルコース、 ポリエチレングリコールまたは他の公知物質も存在させ得る。 本発明に関連して、本発明者は直腸反応誘発及び試料採取過程を簡略化する新 規な装置を開発した。第４図及び第５図に示したこの装置は、膨張可能部分／デ バイス１０を有し、この部分１０は該部分１０の各々の側で開口する第一のチャ ネル２と、装置を直腸内に経直腸適用し（て膨張可能部分１０を膨張させ）た時 に該部分１０の外壁が直腸粘膜と直接接触するように該部分１０の膨張を制御す ることを可能にする第二のチャネル１１とを囲繞すること、及び膨張可能部分１ ０の外側を規定する面は拡散性（ｄｉｆｆｕｓｉｂｌｅ）アレルゲンを保持し、 かつ好ましい実施態様では炎症マーカーの受容体も任意に保持することを特徴と する。膨張可能デバイス１０は、装置の取り扱いを容易にする挿入ロッド１２上 に配置し得る。膨張可能デバイ スの両側で開口するチャネル２は、周囲圧力と腸内圧力とを平衡させるべく機能 する。膨張可能部分１０は、第４ａ図には非膨張状態で、第４ｃ図には膨張状態 で示す。 拡散性アレルゲンは通常、膨張可能デバイス１０の外側を規定する面の全体に か、または第４ｂ図及び第４ｃ図に示した前記面のサブエリア（１３ａ）に吸着 もしくは吸収により結合させる。膨張可能デバイス１０に、炎症マーカーを捕捉 することを特異的に企図する受容体も結合させる場合は、受容体とアレルゲンと を互いに同じサブエリア（１３ａ及び１３ｂ）に存在させるか、または受容体を アレルゲンとは異なるサブエリア（１３ｂ）に存在させる。受容体はそのサブエ リアに、直腸内で優勢な諸条件に耐え得る結合、通常は共有結合で結合させる。 受容体の例には、捕捉／測定（アッセイ）するべきマーカーに特異的な抗体が有 る。 別の一実施態様によれば、上記外側規定面は１種の炎症マーカーに対する受容 体のみを保持する。この場合、拡散性アレルゲンは用いない。 本発明の装置の膨張可能デバイスの構成材料は、第１図及び第２図の膨張可能 デバイスの構成材料と同様のもので あり得る（Ｋｒｏｇ等の上掲国際特許出願公開参照）。即ち、膨張可能デバイス １０は、例えばラテックスゴムから成る、ガスで膨らむバルーンの形態を有し得 る。バルーン様の膨張可能デバイスを膨張させ、また該デバイスからガスを抜く （ｅｍｐｔｙ）のには弾性ゴム球１４を用い得る。 本発明の装置は肛門から容易に、膨張可能デバイスが内括約筋を通り越すよう に挿入できる。実際的な理由から、本発明の装置は、直腸が右曲がりで結腸へと 続く部位を越えて挿入するべきでない。非膨張状態に有る時の膨張可能デバイス の直径は、好ましくは肛門の直径より小さく、即ち１５〜２０ｍｍを下回り、そ の際最適の最小直径値は５ｍｍである。膨張可能デバイスの外側規定面は、膨張 状態では直腸の粘膜に届き、このことは前記デバイスが直径２０〜７０ｍｍまで 膨張し得ることを意味する。先に述べたように、膨張可能デバイスはガスで膨ら むバルーンであり得る。本発明の装置はしばしば挿入ロッド１２を含み、このロ ッドの前端に膨張可能デバイス１０が配置される。ロッド１２の長さは様々とし 得るが、直腸の十分奥まで到達させるためには好ましくは最短で１８０ｍｍとし 、更に直腸内に挿入する必要のない５０〜１００ｍｍを付加する。 挿入ロッド１２は先に述べた圧力平衡化チャネル２と、膨張可能デバイスの膨張 を制御するべく企図された制御チャネル１１とを含む。ロッド１２は、ＰＶＣプ ラスチックまたは何らかの同様材料から成り得る。 本発明の装置は、膨張可能デバイスが膨張していない状態で患者の直腸内の適 当な位置に挿入する。アレルゲンが直腸粘膜に拡散し、当該個体がこのアレルゲ ンに対してアレルギーであれば該アレルゲンは炎症マーカーの放出を惹起し、炎 症マーカー自体は内腔に拡散し、そこで受容体によって捕捉（結合）される。マ ーカーが放出され、かつ膨張可能デバイスに結合した後、前記デバイスを取り出 して結合したマーカーに関し分析する。正常値より大きい値は、膨張可能デバイ ス上に存在させたアレルゲンに対して患者がアレルギーであることを示す。上記 正常値は、拡散性アレルゲンを用いない点以外同様の装置で得られた値であり得 る。正常値を、健康で正常な集団に該当する値とすることも可能である。本発明実施の最良形態 本発明の装置の優先権主張日時点における本発明実施の最良形態を第４図に示 す。本発明の診断方法が有効である ことを最も良く証明した実施態様を、本明細書の「実験」の項に説明する。本発 明者は、本発明の方法の最も実際的な実施態様では、反応誘発と、内腔へ放出さ れたマーカーの収集とを同一装置で行なうものであると考える。実験 患者 試験には９人のセリアック病患者を用いた。診断基準は次のとおりとした。 ａ） 診断の際に小腸の生検において、ほぼ全体的な、または部分的な絨毛萎 縮を示す。 ｂ） グルテン無含有食事の後に組織病理学的回復が認められる。 生検は総て、１人の同じ病理学者が、一切の予備知識を持たずに試験した。 ５人の患者を新たにセリアック病と診断し、通常の食事を摂らせた。残りの４ 人の患者にはグルテン無含有の食事を摂らせた。健康な有志、即ち胃腸病に罹患 したことのない４人の男性及び１人の女性を対照個体として用いた。対照個体の 平均年齢は３７才であった（年齢範囲は２８〜５２才）。 直腸灌流 灌流技術としては、Ｒａａｂ等が教示している技術（Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． ８７， ｐｐ． １４５３−１４５９， １９９２）に、装置を直腸使用に適 応させるための改変を幾つか加えて用いた。手短に言えば、内径１０ｍｍ、外径 １６ｍｍ及び全長３８ｃｍの６チャネルＰＶＣホースを用いた。このホースにガ スで膨らむバルーン３個を、長さ８ｃｍの直腸灌流分節が得られるように固定し た。６個のチャネルは、バルーンを膨らませたり、分節を還流したり、ホース先 端に色素マーカーを供給したりするのに用いた。各個体に対して同じ日のうちに ２回の直腸灌流、即ち基礎的な灌流と、グルテン導入の３時間後の灌流とを行な った（後段参照）。被検者は１７時間絶食させた後に試 ＫＡ， Ｌｕｎｄ， Ｓｗｅｄｅｎ）を浣腸剤として用い 腸及びＳ状結腸の内視鏡検査によって腸を調べ、上記ホースは内視鏡（Ｏｌｙｍ ｐｕｓ胃鏡Ｐ２）に重ねて配置した。内視鏡を適所に配置し、これを用いてホー スを直腸内へと 導いた。ホースをその所望位置まで挿入したところで内視鏡を引き出し、バルー ンを空気で満たした。用いる空気の体積は被検者の反応も見て決定した。患者が 腸内に軽い圧力を感じたら、空気の供給を中断した。最後に、ホースの位置を蛍 光透視検査装置で確認した。 灌流はシリンジポンプ（Ｍｏｄｅｌ ３５５； Ｓａｇｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅ ｎｔｓ， Ｏｒｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ， ＭＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を用いて、３ｍｌ／分の流量で開始した。灌流緩衝液 には、１２０ｍＭのＮａＣｌと、５．４ｎＭのＫＣｌと、２ｎＭのＮａ₂ＨＰＯ₄ と、１０ｍＭのグルコースと、３５ｍＭのマンニトールと、１ｇ／Ｌのポリエチ レングリコール（ＰＥＧ； 分子量４ｋＤ）とを含有させた。この緩衝溶液は７ ．２０〜７．２５の最終ｐＨと、２９０ｍｏｓｍ／Ｌの浸透圧重量モル濃度とを 有した。灌流ステップの間、緩衝溶液を３７℃の温度に維持した。液が澄明とな った直後に試料採取を開始した。試料は２０分間隔で８０分間にわたり採取した 。灌流液には、回収率測定マーカーとして¹⁴Ｃ標識ＰＥＧ（分子量４ｋＤ； Ａ ｍｅｒｓｈａｍ Ｌａｂ．， Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈ ｉｒｅ， Ｅｎｇｌａｎｄ）を、最終濃度２．３ｍＣｉ／Ｌで添加した。灌流緩 衝液１Ｌ当たり１０ｍｌのアプロチリン（ａｐｒｏｔｉｌｉｎ； １０，０００ ＫＩＵ／ｍｌ）を添加して、タンパク質分解活性を抑制した。結腸から灌流分節 内への漏れを生起させないように、前記分節の近位にフェノールレッド溶液（生 理的食塩溶液中に５０ｍｇ／Ｌ）を一定流量（０．５ｍｌ／分）で注入した。 基礎的灌流過程終了後、バルーンを凋ませ、ホースを引き出し、被検者を化粧 室へ行かせてからグルテン含有浣腸剤を投与した。グルテン導入の１３５〜１５ ０分後、直腸をグルテン及び退廃物から清浄化するべく直腸−Ｓ状結腸（ｓｉｇ ｍｏｄｅｕｍ）を５００ｍｌの灌流緩衝液で濯ぎ、その後灌流ホースを再挿入し た。２回目の直腸灌流はグルテン反応誘発の１８０分後に開始し、１８０分間継 続した。 グルテンでの反応誘発 小麦グルテン（６．２〜６．５ｇ； 非精製小麦グルテン； Ｓｉｇｍａ Ｃ ｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， Ｍｉｓｓｏｕｒｉ， Ｕ．Ｓ ．Ａ．）を２５ｍｌの灌流緩衝液中に懸濁させた。得られた懸濁液を、左向きに 横たわらせた被検者の直腸内へ、６０ｍｌ容シリ ンジを用いて注入した。その後、被検者をできるだけ動き回らせ、かつ被検者に 浣腸剤を６０分間保持するように指示した。 化学分析 試料を総て氷上に取り、各灌流液試料（６０ｍｌ）に１ｍｌのアプロチリン（ １０，０００ＫＩＵ／ｍｌ）を添加してタンパク質分解活性を抑制した。すぐに 分析しない試料は−７０℃で冷凍した。試料（１ｍｌ）の液体シンチレーション 計数（１０分間）によって¹⁴Ｃを測定した。目視確認時に試料が赤色であった場 合は、ｐＨ１１にアルカリ性化後、５２０ｎｍでの分光光度測定によってフェノ ールレッドを測定した。ＥＣＰ、ヒスタミン、ＭＰＯ及びアルブミンはラジオイ ムノアッセイ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｕｐｐｓａｌ ａ， Ｓｗｅｄｅｎ）によって二重に測定した。プロスタグランジンＥ₂はラジ オイムノアッセイ（ＤｕＰｏｎｔ， Ｄｒｅｉｃｈ， Ｇｅｒｍａｎｙ）によっ て二重に測定し、ＩＬ−６及びＩＬ−８はエンザイムイムノアッセイ（Ｍｅｄｇ ｅｎｉｘ， Ｂｒｕｓｓｅｌｓ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）によって測定した。 統計分析 結果を、平均値±ＳＤ及び９５％信頼区間として求めた。統計的計算は、Ｍａ ｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定で行なった。直腸から採取した液体のＭＰＯ、Ｅ ＣＰ、ヒスタミン、ＰＧＥ₂、ＩＬ−６またはＩＬ−８濃度がそれぞれの検出方 法の検出レベルを下回る場合は、計算上の濃度を前記検出レベルより僅かに高く 設定した（ＭＰＯ＝７．９μｇ／Ｌ； ＥＣＰ＝１．９μｇ／Ｌ； ヒスタミン ＝０．９μｇ／Ｌ； ＰＧＥ₂＝１μｇ／Ｌ； ＩＬ−６＝１μｇ／Ｌ； 及び ＩＬ−８＝１μｇ／Ｌ）。結果 いずれの被検者も直腸灌流を受け容れることができ、かついずれの被検者もグ ルテン反応誘発に起因する症状を現わさなかった。反応誘発は炎症マーカーの放 出量増大を惹起し、この増大は、好中球由来のマーカー（例えばミエロペルオキ シダーゼ）の場合は２５倍、（好酸球由来の）好酸球塩基性タンパク質の場合、 及びＰＧＥ₂の場合は平均で３倍、サイトカイン（例えばＩＬ−６及びＩＬ−８ ）の場合は平均で７倍であり、ヒスタミン（肥満細胞／好塩基球由来のマーカー ）の場合は数人の被検者で２０倍にも達 した。セリアック病に罹患した被検者／患者の場合、直腸内でのグルテン反応誘 発は、直腸内腔への血漿タンパク質（アルブミン）の放出と定義される粘液漏出 を４倍を越えて増加させた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 8014−4Ｃ Ａ６１Ｍ 3/00 Ｂ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．アレルギーの疑いが有る患者の大腸粘膜を疑わしいアレルギーの原因とされ るアレルゲンで経直腸反応誘発すること、前記患者の大腸から試料を経直腸採取 すること、及び採取した試料を分析することを含むアレルギー診断方法であって 、 （ａ）試料を大腸の内腔から採取すること、 （ｂ）試料中の炎症マーカーを測定すること、及び （ｃ）マーカー量の増大（放出量増大）を、前記患者が当該アレルゲンに対して アレルギーであることの指標と看做すこと を特徴とする方法。 ２．アッセイするマーカーが好中球、好酸球、肥満細胞／好塩基球に由来し、ま たはサイトカイン、プロスタグランジン、もしくはアルブミンなどの血漿タンパ ク質であることを特徴とする請求項１に記載の方法。 ３．アッセイするマーカーがミエロペルオキシダーゼ、好酸球塩基性タンパク質 、ヒスタミン、及び／またはサイトカイン（例えばＩＬ−６及び／またはＩＬ− ８）またはプロスタグランジン（例えばＰＧＥ₂）であることを特徴と する請求項１または２に記載の方法。 ４．大腸の一部のみを反応誘発することを特徴とする請求項１から３のいずれか １項に記載の方法。 ５．試料採取を大腸へ経直腸挿入する装置を用いて行ない、前記装置は、放出さ れたマーカーの収集を可能にし、場合によっては大腸の灌流、及び／または大腸 粘膜の一部へのアレルゲンの接触実現も可能にする手段を含むことを特徴とする 請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。 ６．（ａ）前記装置が大腸の全体または一部の灌流を可能にし、かつ放出された マーカーの収集を可能にする手段を含むこと、及び （ｂ）前記装置を大腸内に適用し、大腸の一部をまずアレルゲン非含有緩衝液で 灌流し、装置を取り出し、反応誘発用の水性アレルゲン組成物を大腸内に適用し 、前記アレルゲン組成物を大腸から除去し、前記装置を大腸内に再度適用し、か つ大腸の反応誘発部分をアレルゲン非含有緩衝液で灌流する（２回目の灌流）こ とによって試料を採取し、前記諸段階において少なくとも２回目の灌流に用いた 灌流溶液を炎症マーカーに関して分析するべく回収することを特徴とする請求項 ５に記載の方法。 ７．（ａ）前記装置が放出されたマーカーの収集、大腸の灌流、及び大脳粘膜の 一部へのアレルゲンの接触実現のための手段を含むこと、及び （ｂ）前記装置を大腸内に適用し、最初に大腸の一部をアレルゲン非含有緩衝液 で灌流し、同じ大腸部分に、大腸での反応誘発用の水性アレルゲン組成物で２回 目の灌流を行ない、かつ最後に同じ大腸部分にアレルゲン非含有緩衝液で３回目 の灌流を行なうことによって試料を採取し、前記諸段階において少なくとも３回 目の灌流に用いた灌流溶液を炎症マーカーに関して分析するべく回収すること を特徴とする請求項５に記載の方法。 ８．灌流液を最初の灌流操作と最後の灌流操作とから別個の試料として回収して 炎症マーカーに関して分析し、その際同じマーカーについて最後の灌流操作から 得た灌流液中の濃度が最初の灌流操作から得た灌流液中の濃度より高いことを、 灌流を受けた患者が用いた反応誘発アレルゲンに対して不耐性／アレルギーであ ることの指標と看做すことを特徴とする請求項６または７に記載の方法。 ９．前記装置が膨張可能部分を有し、この部分は該部分の各々の側で開口する中 心チャネルと、装置を大腸内に経直 腸適用した時に膨張可能部分の外壁が大腸、好ましくは直腸の粘膜と直接接触す るように膨張部分の膨張を制御することを可能にするチャネルとを囲繞し、膨張 可能部分の外側を規定する面上には拡散性アレルゲンが存在し、場合によっては 炎症マーカーの受容体も存在することを特徴とする請求項５に記載の方法。 １０．アレルゲンが膨張可能部分の外側面において幾つかの部分面上に存在し、 炎症マーカーの受容体は膨張可能部分の外側面において前記以外の部分面上に存 在することを特徴とする請求項９に記載の方法。 １１．直腸へ経直腸挿入する装置であって、膨張可能部分を有し、この部分は該 部分の各々の側で開口する中心チャネルと、装置を直腸内に適用した時に膨張可 能部分の外壁が直腸の粘膜と直接接触するように膨張部分の膨張を制御すること を可能にする分離チャネルとを囲繞し、膨張可能部分の外側を規定する面上には 拡散性アレルゲンが存在し、場合によっては炎症マーカーの受容体も存在するこ とを特徴とする装置。 １２．アレルゲンが動物及び植物タンパク質またはその部分加水分解アレルゲン フラグメント、例えばグリアジンな どのグルテン、乳タンパク質などの牛タンパク質、大豆タンパク質等の中から選 択されることを特徴とする請求項１１に記載の装置。 １３．受容体が、好中球由来、好酸球由来、肥満細胞／好塩基球由来の炎症マー カー、またはサイトカイン（例えばＩＬ−６及びＩＬ−８）及び血漿タンパク質 などのマーカーの中から選択された物質の受容体であることを特徴とする請求項 １１または１２に記載の装置。 １４．受容体がミエロペルオキシダーゼ、好酸球塩基性タンパク質、ヒスタミン 、サイトカイン（ＩＬ−６またはＩＬ−８など）、ＰＧＥ₂などのプロスタグラ ンジン、またはアルブミンなどの血漿タンパク質の受容体であることを特徴とす る請求項１０または１１に記載の装置。