JPH10510267A - スフィンゴ脂質の投与に適したエマルジョン及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 水相に分散された脂質、カチオン性スフィンゴ脂質、安定化する量の非イオン性界面活性剤及びコレステロールからなる酸性のエマルジョン、並びに、前記エマルジョンを投与する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 スフィンゴ脂質の投与に適したエマルジョン及びその使用 技術分野 本発明は、スフィンゴ脂質を投与するための輸送系に関し、特に、スフィンゴ 脂質を含有する安定なＯ／Ｗ型エマルジョンに関する。本発明はさらに、経口及 び静脈注射による投与を含んだ、スフィンゴ脂質を必要とする患者に上記エマル ジョンを投与する方法にも関する。 発明の背景 スフィンゴ脂質は、主鎖としてスフィンゴシン又はその類似塩基を含有する複 合脂質である。植物及び動物細胞のいずれにも含まれるこれらの重要な膜成分は 、現在、細胞の成長及び分化において重要な調節役を果たすものと信じられてい る。これらの分子は、「脂質第二メッセンジャー」として機能し、循環している 広範囲の外部刺激からシグナルを伝達する生化学的事象のカスケードの一部であ り、最終的に細胞核内部で事象を引き起こす。「第一メッセンジャー」と考えら れるこれら外部刺激は、成長因子、ホルモン、及び、神経伝達物質を含む。この シグナル変換カスケードは、さらに、ある種の鍵となる細胞内酵素の活性を調節 することをも伴う。プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）は、このような調節酵素グ ループの中の一例である。 ＰＫＣは、細胞成長障害や炎症などの病気における治療介入の主要な標的とし て進展してきた。ある種のスフィンゴ脂質誘導体は現在、ＰＫＣの活性に対する 強力な阻害剤として知られており、そのため新規治療薬の候補と考えられている 。現在評価されている主要な臨床での適用では、細胞内におけるＰＫＣ調節「ド ラッグポンプ」を阻害（抑制）することで、ある種のガンが持つ多数の薬品に対 する耐性を克服している。 ある種のスフィンゴ脂質を可能性がある薬品として使用するための開発・試験を 行ううち、動物及び最終的には人間に、安全な静脈注射による投与を行うことが 出来るよう、薬学的に許容される分散媒を用いる必要性が出てきた。 スフィンゴ脂質は、スフィンゴシン分子又はその誘導体若しくは異性体の１つ を含む。尾部であるスフィンゴ脂質の一方の末端は、親油性で長鎖の脂肪酸を有 する。頭部である他方の末端は、親水性基である（図１参照）。スフィンゴシン は第１級アミン基を有し、生理的ｐＨ（ｐＫａ〜６．５）においてカチオン性（ 塩基性）である。この分子は、非極性で親油性の尾部及び極性で親水性の頭部を 有しているために、油相と水相の間の界面に向かう傾向があるので、両親媒性で 界面活性であると考えられている。 スフィンゴ脂質は水溶性に乏しく、水性の環境にこれだけを加えると、大きな 凝集体を形成する傾向がある。そのため、Ｏ／Ｗ型エマルジョンのような脂質を ベースとする輸送系において、スフィンゴ脂質を用いることができるのは望まし い。しかし、本出願の発明者は、従来の大豆油エマルジョンにスフィンゴ脂質を 加え、卵黄から精製したリン脂質を混合して安定化させることを試みたが、不成 功に終わった。大豆油や卵黄から精製したリン脂質は、非経口的栄養摂取のため やデザインされた脂質ベースの薬品輸送のため等の静脈投与を目的とするＯ／Ｗ 型エマルジョンに対して、選択すべき安定剤であるので、この結果は非常に残念 なことである。通常、実効表面負電荷はもちろん、会合した水分子層によって、 これらエマルジョン中に分散した油滴は安定化される。実際、リン脂質混合物中 の主要成分であるホスファチジルコリンは、双性イオンの形状を持ち、広いｐＨ 範囲に渡って中性である。それ故に、ゼータ電位としても知られているこの表面 電荷は、実際、高温での殺菌処理によ って乳化剤及び／又は油相が加水分解され生じるごく微量の遊離脂肪酸だけでは なく、リン脂質混合物中の少量の天然イオン化脂質にも由来する。 上述したタイプのリン脂質により安定化した脂肪エマルジョンは、非経口的栄 養摂取、又は、非イオン性の親油性薬品の静脈輸送に好適であ ゼパムを含有するディザック（Dizac）^TM、及び、麻酔性のプロポホルを輸送す るディプリバン（Diprivan）^TMがある。薬剤が生理的ｐＨにおいて陰イオン性の 官能基を含有する場合は、エマルジョン小滴のゼータ電位がさらに負となる可能 性を持ち、このことが時に物理的安定性の向上につながる。しかしながら、出願 人は、スフィンゴ脂質を含有する、リン脂質により安定化した脂肪エマルジョン を製造しようと幾度も試みたが、失敗に終わった。 発明の要約 従って、本発明の目的は、カチオン性スフィンゴ脂質を輸送することのできる 、脂質ベースの安定な製剤を提供することにある。本発明により、コレステロー ルを含み約２〜約６のｐＨ値を示すＯ／Ｗ型エマルジョンは、カチオン性スフィ ンゴ脂質を輸送することのできる、脂質ベースの安定な製剤を、患者に提供する ことが見いだされた。 特に、本発明は、カチオン性スフィンゴ脂質を必要とする患者に投与するため のエマルジョンで、親水相に分散された疎水相としての薬学的に許容される脂質 、有効量の上記カチオン性スフィンゴ脂質、及び、上記エマルジョンを安定化さ せるために充分な量のコレステスールを含有することを特徴とするエマルジョン に関する。上記エマルジョンは、約２〜約６のｐＨ値を示す。 本発明は、さらに、上述のエマルジョンを必要とする患者に投与することによ る治療にも関する。 図面の要約 図１は、スフィンゴシン及びジヒドロスフィンゴシンの構造式である。 発明を実施するための最良かつ種々の形態 本発明で用いられるスフィンゴ脂質はスフィンゴシン塩基であり、スフィンゴ シン〔４−スフィンゲニン〕、ジヒドロスフィンゴシン〔スフィンガニン〕、そ の異性体であるＤ、Ｌ、又は、ＤＬ−トレオ−ジヒドロスフィンゴシン、リソス フィンゴ脂質、及び、薬学的に許容されるそれらの酸性塩が挙げられる。 その疎水性成分は、植物性又は動物性の油脂又は脂肪などの薬学的に許容され るトリグリセリドからなり、好ましくは、大豆油、紅花油、魚油、ひまわり油、 コーン油、クロスグリ種子油、ルリチシャ油、ヤシ油、綿実油、オリーブ油、又 は、ココナッツ油抽出物（中程度の鎖長のトリグリセリド、通常Ｃ₈〜Ｃ₁₀）か ら成る群より選択される。所望により、油脂の混合物を用いることもできる。 本発明のエマルジョンは、通常、脂肪又は油脂の含量が約５〜約５０（ｗ／ｖ ）％であり、好ましくは、約１０〜約３０ｇ／１００ｍｌである。代表的な例は 、エマルジョンの約２０ｇ／１００ｍｌである。 さらに、上記エマルジョンは約２〜約６、好ましくは約４のｐＨ値を示さなく てはならない。必要であれば、上記ｐＨ値は、塩酸、リン酸又は硫酸などの薬学 的に許容される酸を添加して、所望の値に調整することができる。 上記エマルジョンは、また、所望の体積を与えるために必要な量の水をも含む 。 所望によって、上記エマルジョンは、非イオン性界面活性剤、等張剤、酸化防 止剤、栄養剤、微量元素及びビタミンなどの補助成分を含んでいてもよい。上記 エマルジョンは、動物や植物由来のリン脂質を完全ではなくとも、少なくとも実 質的には含まないものが好ましい。 補助的な非イオン性界面活性剤が存在する時は、それは通常、約 ０．１０〜約５ｇ／１００ｍｌ、好ましくは約０．５〜約２ｇ／１００ｍｌとい う量で用いられ、その例として約１ｇ／１００ｍｌである。 好ましい非イオン界面活性剤は、ポロキソマー（Poloxamer）としても知られ る、ポリオキシプロピレン及びポリオキシエチレンのブロック共重合体である。 これらは、商品名プルロニクス（Pluronics）（ＢＡＳＦ社、パーシパニー、ニ ュージャージー）が入手できる。これらの界面活性剤は、血漿内におけるエマル ジョン小滴の循環時間を引き延ばす傾向がある。 非イオン性界面活性剤の他の例としては、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル として分類されているものを含む。このグループの中では、ポリソルベート８０ 、又は、トゥイーン（Tween）８０（ＩＣＩアメリカ、ウィルミントン、デラウ ェア）としても知られるモノオレイン酸ソルビタンポリオキシエチレンが最も有 用である。 等張剤を用いるときには、通常約０．８〜約８ｇ／１００ｍｌ、好ましくは約 １〜約３グラム／１００ｍｌという量が用いられ、その例としては約２グラム／ １００ｍｌである。これらの物質は、浸透圧を調整し、エマルジョンを血液と等 圧にする。 等張剤の例としては、グリセリン、並びに、キシリトール、ソルビトール及び マニトールなどの糖アルコールがある。他の例は、アラニンなどの非極性アミノ 酸、ヒスチジンなどの塩基性アミノ酸、及び／又は、グリシンなどの電荷を持た ない極性アミノ酸である。 酸化防止剤を用いて、上記エマルジョンの安定性を高めることができる。適切 な親油性酸化防止剤の例としては、α−トコフェロール、ブチル化ヒドロキシト ルエン（ＢＨＴ）及び６−パルミチン酸Ｌ−アスコルビン酸などがある。これを 用いるときには約０．００２〜約０．２ｇ／１００ｍｌ、好ましくは約０．０１ 〜約０．１０グラム／１００ｍｌと いう量で用いられ、その例としては、約０．０２グラム／１００ｍｌである。 本発明のエマルジョンは、経口、並びに、静脈、筋肉及び皮下に行うような非 経口等の従来技術を用いて投与することができる。血管の中に投与又は導入され る時、上記エマルジョンの粒子は約５ミクロン未満であり、さらに好ましくは約 ０．５ミクロン以下である。 本発明のエマルジョンは、安定かつ薬学的に適切な、脂質ベースの輸送系の必 要性を満たすと同時に、生体内での薬効を保持するために必要な一定の条件を満 たしている。本発明で用いられる分散媒組成物はとりわけ、薬学的に好ましくな い有機溶媒、可溶化剤、油脂又は乳化剤を回避しているので、注入に適するもの である。 本発明のエマルジョンは、最終段階において、蒸気オートクレーブ内の標準条 件下で加熱殺菌を行うことができる。これらのエマルジョンは４〜８℃で少なく とも１８ヶ月の保存期間中、相当の物理的及び化学的安定性を保持する。 用いられるスフィンゴ脂質は、実際、それ自身の共界面活性剤として作用し、 上記エマルジョンを安定化させる。実際のところ、薬のスフィンゴ脂質を用いな い以外は全く同じようにして作られた対照分散媒は、低品質であり、極めて不安 定である。対照分散媒について最終段階における加熱殺菌を試みると、エマルジ ョンが破損、つまり乳化されていない表面に浮いた油が大量に生成する。 本発明のエマルジョンは、正電荷を帯びた酸性のエマルジョンであるため、こ れを静脈内に安全に投与できるということは非常に驚くべきことである。一般に は、カチオン性エマルジョンの小滴は、細胞膜に付着して血小板を活性化する傾 向があり、これが静脈内の凝固や血栓につながるものと信じられている。 本発明で用いられる分散媒組成物は、混ぜ合わされるスフィンゴ脂質に対して 、化学的に不活性である。これは、臨床的に許容される注入量となるのに充分な 濃度で、選択されたスフィンゴ脂質を輸送する。さらに、用いられる分散媒は、 例えばプラスチック製の注入セット上に吸着されるため、投与する際にスフィン ゴ脂質が失われることになるのを防ぎ、かつ、表面が活性なスフィンゴ脂質の強 い毒性（例：溶血活性）を、溶媒製剤と比較すると最小限度に抑制する。 上記製剤は、生体外で５％デキストロースに希釈する際、又は、人間の血液と 混合する際に、凝集や合体をすることなく安定な状態にあることは明記した。本 発明で用いられる分散媒中のスフィンゴ脂質に関する薬物速度及び組織分布は、 有効に作用するための必要条件（例：最小マクロファージ補集）と一致する。 （２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−１，３−オクタデカンジオール即ちサフィンゴ ールとしても知られるＬ−トレオ−ジヒドロスフィンゴシンなどの、本発明の組 成物で用いられるスフィンゴ脂質は、生体内及び生体外のいずれにおいても、プ ロテインキナーゼＣの強力な阻害剤である。これらは、ある種の耐薬剤性ガンの 治療で用いられるドキソルビシン及びシスプラチンなどより抜きの化学療法剤の 薬効を向上させるのに有用である。本発明はまた、例えばある種の炎症状態を治 療することを目的とした、他の薬学的に活性なスフィンゴ脂質を輸送するために も用いることができる。 本発明の好ましいサフィンゴールの服用量は、本発明により記述された製剤で 投与すると、体表面１平方メートル当たり１２０ｍｇ、又は、平均的な大人の患 者１人当たり約２００ｍｇである。注射するにあたり、殺菌したエマルジョンを まず５％デキストロースを用いて簡便な薬品濃度（代表的なものは約０．５ｍｇ ／ｍｌ）に希釈する。シスプラチンや ドキソルビシンなどの標準的な化学療法剤を、約１時間にわたってサフィンゴー ルと共に溶かす。この治療は、１４〜２１日ごとに安全に繰り返すことができる 。本発明を用いて上述のように投与すると、上記サフィンゴールは強い毒性を示 さない。一方、動物が同じ量のサフィンゴール又は他のスフィンゴ脂質を服用す ると、有機溶媒と水性分散媒のどちらで投与したかに関わらず、許容され得ない 強い毒性が観察される。このような毒性は、血管内溶血及び肺塞栓症を引き起こ す可能性がある。 以下の実施例により、本発明をさらに詳しく説明するが、発明の範囲を限定す るものではない。 実施例１ 高剪断攪拌機（ウルトラトラックス（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）Ｔ２５；テ クマー（Ｔｅｋｍａｒ）社.,シンシナティー、ＯＨ）を用いて処理しながら、約 ４０〜６０℃の水層に約４０〜６０℃の油層を加えることにより、約２０重量％ の大豆油、約５ｍｇ／ｍｌのサフィンゴール、約０．３重量％のコレステロール 、約１重量％のプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８（ＢＡＳＦ社）、約０ ．０２％のα−トコフェロール、及び、ｐＨを約４に調整するためのＨＣｌを含 むＷ／Ｏ型エマルジョンを調製し、均一な「前混合物」又は「前エマルジョン」 を形成させた。 油層は、大豆油、サフィンゴール、コレステロール及びα−トコフェロールか ら成る。水層は、グリセリン、プルロニックＦ６８、α−トコフェロール、ｐＨ の調整のための塩酸及び水から成る。高圧ベンチ−トップホモジナイザー（ＡＰ Ｖラニー（ＡＰＶ Ｒａｎｎｉｅ）社.,セントポール，ミネソタ；Ｍｏｄｅｌ ＭＩＮＩ−ＬＡＢ ８．３０Ｈ）へ上述の前混合物を移し、８０００〜１０００ ０ｐｓｉ、４０〜６０℃で 乳化を行った。生成物をホウケイ酸ビンの中へろ過（ゲルマンアクロ（Ｇｅｌｍ ａｎ Ａｃｒｏ）５０Ａ、５μｍ）し、その後、加圧下の蒸気オートクレーブで 殺菌した。 殺菌後のエマルジョンの物理的及び化学的評価は、以下のようにして行った。 ・外観：目視による検査、及び、位相差顕微鏡 ・ｐＨ：標準水素イオン電極 ・滴径分布：マーベルンマスターサイザー（Malvern MasterSizer）を用いた レーザー光散乱法 ・ゼータ電位：マーベルンゼータサイザー（Malvern ZetaSizer）２ｃを用い て、５ｍＭ酢酸緩衝液のｐＨ４で測定した電気泳動移動度 ・サフィンゴール濃度：Ｃ１８カラム（ＯＤＳ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ）、メタノ ール：水（９：１）移動相、及び、蒸発式光散乱質量検出器（ブァレックス（Ｖ ａｒｅｘ）社）を用いた逆相系によるＨＰＬＣ分析。 サフィンゴールの薬学的活性は、ホルベールエステルによって誘導された耳の炎 症を持ったマウスのモデルを用いて、検査することができる。結果は、炎症に抗 する５０％最大有効量（ＥＤ₅₀）をｍｇ／体重ｋｇで報告する。 この製法で乳化された小滴は、体積平均粒径が０．４２μｍであり、粒子の９ ０％が０．６６μｍ未満である。ゼータ電位は＋５５ｍＶである。回収されたサ フィンゴールの量は９２％ｗ／ｖであり、その生体有効性（ＥＤ₅₀）は１５ｍｇ ／ｋｇである。 実施例２ 上記油が、１３％大豆油と７％オレイン酸エチルエステルの混合物であり、α −トコフェロールの量が０．１％である以外は、例１を繰り返した。殺菌後、エ マルジョンのｐＨは５．５１である。エマルジョンの粒子は、体積平均粒径が０ ．２９μｍであり、大きさ（９０パーセンタイル）は０．６０μｍである。ゼー タ電位は＋５５ｍＶである。回収されたサフィンゴールの量は９４％ｗ／ｖであ り、ＥＤ₅₀は２２ｍｇ／ｋｇである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．カチオン性スフィンゴ脂質を必要とする患者に投与するためのエマルジョン で、親水相に分散された疎水相としての薬学的に許容される脂質、有効量の前記 スフィンゴ脂質、前記エマルジョンを安定化させるために充分な量の非イオン性 界面活性剤及びコレステロールを含有し、約２〜約６のｐＨ値を示すことを特徴 とするエマルジョン。 ２．スフィンゴ脂質は、Ｌ−トレオ−ジヒドロスフィンゴシン即ちサフィンゴー ルである請求項１記載のエマルジョン。 ３．脂質は、大豆油、紅花油、魚油、ひまわり油、コーン油、クロスグリ種子油 、ルリチシャ油、ヤシ油、綿実油、オリーブ油又はココナッツ油抽出物（中程度 の鎖長のトリグリセリド）、及び、それらの混合物から成る群から選択される請 求項１記載のエマルジョン。 ４．脂質は、大豆油である請求項１記載のエマルジョン。 ５．粒子は、５ミクロン未満の流体力学的平均半径を持つ請求項１記載のエマル ジョン。 ６．平均半径は、０．５μｍ以下である請求項１記載のエマルジョン。 ７．スフィンゴ脂質の量は、約０．１〜約１ｇ／１００ｍｌであり、脂質の量が 約５〜約３０ｇ／１００ｍｌであり、コレステロールの量が約０．１〜約１ｇ／ １００ｍｌである請求項１記載のエマルジョン。 ８．さらに非イオン性界面活性剤を含有する請求項１記載のエマルジョン。 ９．非イオン性界面活性剤の量は、約０．１〜約５ｇ／１００ｍｌである請求項 ８記載のエマルジョン。 １０．非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン のブロック共重合体である請求項９記載のエマルジョン。 １１．ブロック共重合体は、ポロオキソマー１８８である請求項１記載のエマル ジョン。 １２．さらに等張剤を含有する請求項１記載のエマルジョン。 １３．等張剤は、約１〜約３ｇ／１００ｍｌの量で存在する請求項１１記載のエ マルジョン。 １４．等張剤は、グリセリンである請求項１１記載のエマルジョン。 １５．さらに酸化防止剤を含有する請求項１記載のエマルジョン。 １６．酸化防止剤は、約０．００２〜約０．２ｇ／１００ｍｌの量で存在する請 求項１４記載のエマルジョン。 １７．酸化防止剤は、α−トコフェロールである請求項１記載のエマルジョン。 １８．請求項１記載のエマルジョンを、患者に有効量投与することを特徴とする 、スフィンゴ脂質を用いる前記患者の治療方法。 １９．投与は、静脈注射である請求項１８記載の方法。 ２０．投与は、経口である請求項１８記載の方法。