JPH1057085A - オメガ９系高度不飽和脂肪酸及びそれを含有する脂質の製造方法 - Google Patents
オメガ９系高度不飽和脂肪酸及びそれを含有する脂質の製造方法Info
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- JPH1057085A JPH1057085A JP8222612A JP22261296A JPH1057085A JP H1057085 A JPH1057085 A JP H1057085A JP 8222612 A JP8222612 A JP 8222612A JP 22261296 A JP22261296 A JP 22261296A JP H1057085 A JPH1057085 A JP H1057085A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 オメガ９系高度不飽和脂肪酸、又はそれを含
有する脂質の新規な製造方法の提供。 【解決手段】 モルティエレラ（Mortierella ）属など
に属しアラキドン酸生産能を有する微生物に変異処理を
施して得られる、Δ１２不飽和化活性が低下または欠失
し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び／又
は鎖長延長活性の少なくとも一つがより高められた変異
株を培地中で培養し、その培養物からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を含有する脂質を採取することを特徴とする
オメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質の製造方
法、並びに前記の培養物又は脂質からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を採取することを特徴とするオメガ９系高度
不飽和脂肪酸の製造方法。
有する脂質の新規な製造方法の提供。 【解決手段】 モルティエレラ（Mortierella ）属など
に属しアラキドン酸生産能を有する微生物に変異処理を
施して得られる、Δ１２不飽和化活性が低下または欠失
し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び／又
は鎖長延長活性の少なくとも一つがより高められた変異
株を培地中で培養し、その培養物からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を含有する脂質を採取することを特徴とする
オメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質の製造方
法、並びに前記の培養物又は脂質からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を採取することを特徴とするオメガ９系高度
不飽和脂肪酸の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はΔ１２不飽和化活性
が低下または欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つがよ
り高められた変異株を用いて醗酵法により、オメガ９系
高度不飽和脂肪酸又はそれを含有する脂質を製造する方
法に関する。
が低下または欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つがよ
り高められた変異株を用いて醗酵法により、オメガ９系
高度不飽和脂肪酸又はそれを含有する脂質を製造する方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】オメガ９系高度不飽和脂肪酸、例えば
５，８，１１−エイコサトリエン酸（以下「ミード酸」
ともいう）及び８，１１−エイコサジエン酸は、必須脂
肪酸欠乏に陥った動物組織の構成脂肪酸のひとつとして
存在することが知られている。しかしながら、その含量
はわずかであるため単離精製は大変困難であった。これ
らの高度不飽和脂肪酸は生体内でロイコトリエン３グル
ープの前駆体になることが可能で、その生理活性が大い
に期待されており、最近、抗炎症、抗アレルギー及び抗
リウマチ作用が報告されている（特開平７−４１４２
１）。
５，８，１１−エイコサトリエン酸（以下「ミード酸」
ともいう）及び８，１１−エイコサジエン酸は、必須脂
肪酸欠乏に陥った動物組織の構成脂肪酸のひとつとして
存在することが知られている。しかしながら、その含量
はわずかであるため単離精製は大変困難であった。これ
らの高度不飽和脂肪酸は生体内でロイコトリエン３グル
ープの前駆体になることが可能で、その生理活性が大い
に期待されており、最近、抗炎症、抗アレルギー及び抗
リウマチ作用が報告されている（特開平７−４１４２
１）。
【０００３】このためオメガ９系高度不飽和脂肪酸を大
量に製造する方法を開発することが強く望まれており、
以前、アラキドン酸生産能を有する微生物に変異処理を
行いΔ１２不飽和化活性の低下または欠失した微生物を
単離して、オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含
有する脂質の製造方法を完成した（特開平５−９１８８
８）。しかしながら、今まで全く製造方法のなかったオ
メガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質に
ついて、その製造方法が開発されたことは画期的なこと
であり意義があるが、収量の面でまだまだ改良する余地
があった。このためオメガ９系高度不飽和脂肪酸をより
大量に製造する方法を開発することが強く望まれてい
る。
量に製造する方法を開発することが強く望まれており、
以前、アラキドン酸生産能を有する微生物に変異処理を
行いΔ１２不飽和化活性の低下または欠失した微生物を
単離して、オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含
有する脂質の製造方法を完成した（特開平５−９１８８
８）。しかしながら、今まで全く製造方法のなかったオ
メガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質に
ついて、その製造方法が開発されたことは画期的なこと
であり意義があるが、収量の面でまだまだ改良する余地
があった。このためオメガ９系高度不飽和脂肪酸をより
大量に製造する方法を開発することが強く望まれてい
る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、安価
な常用の培地を用いてより大量にオメガ９系高度不飽和
脂肪酸又はそれを含有する脂質を製造することができる
方法を提供しようとするものである。
な常用の培地を用いてより大量にオメガ９系高度不飽和
脂肪酸又はそれを含有する脂質を製造することができる
方法を提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記の目
的を達成するための種々研究の結果、Δ１２不飽和化活
性が低下又は欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つが高
められた変異株を見い出し本発明を完成した。
的を達成するための種々研究の結果、Δ１２不飽和化活
性が低下又は欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つが高
められた変異株を見い出し本発明を完成した。
【０００６】従って本発明は、モルティエレラ（Mortie
rella ）属、コニディオボラス（Conidiobolus）属、フ
ィチウム（Pythium ）属、フィトフトラ（Phytophthor
a）属、ペニシリューム（Penicillium ）属、クラドス
ポリューム（Cladosporium）属、ムコール（Mucor ）
属、フザリューム（Fusarium）属、アスペルギルス（As
pergillus ）属、ロードトルラ（Rhodotorula ）属、エ
ントモフトラ（Entomophthora ）属、エキノスポランジ
ウム（Echinosporangium）属、サプロレグニア（Saprol
egnia ）属に属しアラキドン酸生産能を有する微生物
に、変異処理を施して得られる、Δ１２不飽和化活性が
低下または欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和
化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つがより
高められた変異株を培地中で培養し、その培養物からオ
メガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質を採取するこ
とを特徴とするオメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する
脂質の製造方法を提供する。本発明はさらに、前記の方
法により得られる培養物又は脂質からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を採取することを特徴とするオメガ９系高度
不飽和脂肪酸の製造方法を提供する。
rella ）属、コニディオボラス（Conidiobolus）属、フ
ィチウム（Pythium ）属、フィトフトラ（Phytophthor
a）属、ペニシリューム（Penicillium ）属、クラドス
ポリューム（Cladosporium）属、ムコール（Mucor ）
属、フザリューム（Fusarium）属、アスペルギルス（As
pergillus ）属、ロードトルラ（Rhodotorula ）属、エ
ントモフトラ（Entomophthora ）属、エキノスポランジ
ウム（Echinosporangium）属、サプロレグニア（Saprol
egnia ）属に属しアラキドン酸生産能を有する微生物
に、変異処理を施して得られる、Δ１２不飽和化活性が
低下または欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和
化活性及び／又は鎖長延長活性の少なくとも一つがより
高められた変異株を培地中で培養し、その培養物からオ
メガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質を採取するこ
とを特徴とするオメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する
脂質の製造方法を提供する。本発明はさらに、前記の方
法により得られる培養物又は脂質からオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を採取することを特徴とするオメガ９系高度
不飽和脂肪酸の製造方法を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明において、変異処理に用い
る微生物（以下「親株」ともいう）は、モルティエレラ
（Mortierella ）属、コニディオボラス（Conidiobolu
s）属、フィチウム（Pythium ）属、フィトフトラ（Phy
tophthora）属、ペニシリューム（Penicillium ）属、
クラドスポリューム（Cladosporium）属、ムコール（Mu
cor ）属、フザリューム（Fusarium）属、アスペルギル
ス（Aspergillus ）属、ロードトルラ（Rhodotorula ）
属、エントモフトラ（Entomophthora ）属、エキノスポ
ランジウム（Echinosporangium）属、サプロレグニア
（Saprolegnia ）属に属しアラキドン酸生産能を有する
微生物である。
る微生物（以下「親株」ともいう）は、モルティエレラ
（Mortierella ）属、コニディオボラス（Conidiobolu
s）属、フィチウム（Pythium ）属、フィトフトラ（Phy
tophthora）属、ペニシリューム（Penicillium ）属、
クラドスポリューム（Cladosporium）属、ムコール（Mu
cor ）属、フザリューム（Fusarium）属、アスペルギル
ス（Aspergillus ）属、ロードトルラ（Rhodotorula ）
属、エントモフトラ（Entomophthora ）属、エキノスポ
ランジウム（Echinosporangium）属、サプロレグニア
（Saprolegnia ）属に属しアラキドン酸生産能を有する
微生物である。
【０００８】これらの微生物では、ステアリン酸はΔ９
不飽和化酵素によってオレイン酸に、オレイン酸はΔ１
２不飽和化酵素によってリノール酸に、リノール酸はΔ
６不飽和化酵素によってγ−リノレン酸に、γ−リノレ
ン酸は鎖長延長酵素によってジホモ−γ−リノレン酸
に、ジホモ−γ−リノレン酸はΔ５不飽和化酵素によっ
てアラキドン酸に変換される。またこれらの微生物は、
Δ１２不飽和化活性が阻害されると、Δ６不飽和化酵素
によってオレイン酸から６，９−オクタデカジエン酸
が、鎖長延長酵素によって６，９−オクタデカジエン酸
から８，１１−エイコサジエン酸が、そしてΔ５不飽和
化酵素によって８，１１−エイコサジエン酸からミード
酸が生合成される。
不飽和化酵素によってオレイン酸に、オレイン酸はΔ１
２不飽和化酵素によってリノール酸に、リノール酸はΔ
６不飽和化酵素によってγ−リノレン酸に、γ−リノレ
ン酸は鎖長延長酵素によってジホモ−γ−リノレン酸
に、ジホモ−γ−リノレン酸はΔ５不飽和化酵素によっ
てアラキドン酸に変換される。またこれらの微生物は、
Δ１２不飽和化活性が阻害されると、Δ６不飽和化酵素
によってオレイン酸から６，９−オクタデカジエン酸
が、鎖長延長酵素によって６，９−オクタデカジエン酸
から８，１１−エイコサジエン酸が、そしてΔ５不飽和
化酵素によって８，１１−エイコサジエン酸からミード
酸が生合成される。
【０００９】本発明に用いる親株としては、アラキドン
酸の生産性に優れているモルティエレラ属のモルティエ
レラ亜属に属する微生物が好ましく、例えば、モルティ
エレラ・エロンガタ（Mortierella elongata）ＩＦＯ
８５７０、モルティエレラ・エキシグア（Mortierella
exigua）ＩＦＯ８５７１、モルティエレラ・フィグリ
フィラ（Mortierella hygrophila）ＩＦＯ５９４１、
モルティエレラ・アルピナ（Mortierella alpina）Ｉ
ＦＯ８５６８、ＡＴＣＣ１６２６６、ＡＴＣＣ３２２２
１、ＡＴＣＣ４２４３０、ＣＢＳ２１９．３５、ＣＢＳ
２２４．３７、ＣＢＳ２５０．５３、ＣＢＳ３４３．６
６、ＣＢＳ５２７．７２、ＣＢＳ５２９．７２、ＣＢＳ
６０８．７０、ＣＢＳ７５４．６８等の菌株を挙げるこ
とができる。
酸の生産性に優れているモルティエレラ属のモルティエ
レラ亜属に属する微生物が好ましく、例えば、モルティ
エレラ・エロンガタ（Mortierella elongata）ＩＦＯ
８５７０、モルティエレラ・エキシグア（Mortierella
exigua）ＩＦＯ８５７１、モルティエレラ・フィグリ
フィラ（Mortierella hygrophila）ＩＦＯ５９４１、
モルティエレラ・アルピナ（Mortierella alpina）Ｉ
ＦＯ８５６８、ＡＴＣＣ１６２６６、ＡＴＣＣ３２２２
１、ＡＴＣＣ４２４３０、ＣＢＳ２１９．３５、ＣＢＳ
２２４．３７、ＣＢＳ２５０．５３、ＣＢＳ３４３．６
６、ＣＢＳ５２７．７２、ＣＢＳ５２９．７２、ＣＢＳ
６０８．７０、ＣＢＳ７５４．６８等の菌株を挙げるこ
とができる。
【００１０】これらの菌株はいずれも、大阪市の財団法
人醗酵研究所（ＩＦＯ）、及び米国のアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（American Type Cultur
e Collection，ＡＴＣＣ），及びCentrralbureau voor
Schimmelcultures（ＣＢＳ）からなんら制限なく入手す
ることができる。また、本発明らが土壌から分離した菌
株モルティエレラ・エロンガタＳＡＭ０２１９（微工研
菌寄第８７０３号）（微工研条寄第１２３９号）を使用
することもできる。
人醗酵研究所（ＩＦＯ）、及び米国のアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（American Type Cultur
e Collection，ＡＴＣＣ），及びCentrralbureau voor
Schimmelcultures（ＣＢＳ）からなんら制限なく入手す
ることができる。また、本発明らが土壌から分離した菌
株モルティエレラ・エロンガタＳＡＭ０２１９（微工研
菌寄第８７０３号）（微工研条寄第１２３９号）を使用
することもできる。
【００１１】また本発明に用いる親株は、上記のアラキ
ドン酸生産能を有する微生物（野性株）の変異株又は組
換え株、即ち、同じ基質を用いて培養したときに、元の
野性株が産生する量と比べて、油脂中のオメガ９系高度
不飽和脂肪酸含量が多くなるように、または総油脂量が
多くなるように、あるいはその両方を意図して設計され
たものが含まれる。さらに費用効果の優れた基質を効率
よく用いて、対応する野性株と同量のオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を産生するように設計された微生物も含まれ
る。
ドン酸生産能を有する微生物（野性株）の変異株又は組
換え株、即ち、同じ基質を用いて培養したときに、元の
野性株が産生する量と比べて、油脂中のオメガ９系高度
不飽和脂肪酸含量が多くなるように、または総油脂量が
多くなるように、あるいはその両方を意図して設計され
たものが含まれる。さらに費用効果の優れた基質を効率
よく用いて、対応する野性株と同量のオメガ９系高度不
飽和脂肪酸を産生するように設計された微生物も含まれ
る。
【００１２】本発明のΔ１２不飽和化活性の低下または
欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び
／又は鎖長延長活性の少なくとも一つが強化された変異
株を得るには、上記のアラキドン酸生産能を有する微生
物に変異処理を行い、まずΔ１２不飽和化活性の低下ま
たは欠失した変異株を得、さらにこの変異株に変異処理
を行うことにより、Δ１２不飽和化活性の低下または欠
失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び／
又は鎖長延長活性の少なくとも一つが強化された変異株
を得ることができる。Δ１２不飽和化活性の欠失した変
異株として、例えばモルティエレラ・アルピナＳＡＭ１
８６１（微工研条寄第３５９０号、ＦＥＲＭ ＢＰ−３
５９０）を使用することができる。
欠失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び
／又は鎖長延長活性の少なくとも一つが強化された変異
株を得るには、上記のアラキドン酸生産能を有する微生
物に変異処理を行い、まずΔ１２不飽和化活性の低下ま
たは欠失した変異株を得、さらにこの変異株に変異処理
を行うことにより、Δ１２不飽和化活性の低下または欠
失し、かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び／
又は鎖長延長活性の少なくとも一つが強化された変異株
を得ることができる。Δ１２不飽和化活性の欠失した変
異株として、例えばモルティエレラ・アルピナＳＡＭ１
８６１（微工研条寄第３５９０号、ＦＥＲＭ ＢＰ−３
５９０）を使用することができる。
【００１３】本発明の変異株において、親株としてΔ１
２不飽和化活性の低下または欠失している微生物、好ま
しくはΔ１２不飽和化活性が欠失している微生物を用い
ることにより、そのΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活
性、鎖長延長活性が高められているかどうかは容易に評
価することができる。
２不飽和化活性の低下または欠失している微生物、好ま
しくはΔ１２不飽和化活性が欠失している微生物を用い
ることにより、そのΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活
性、鎖長延長活性が高められているかどうかは容易に評
価することができる。
【００１４】具体的には、Δ１２不飽和化活性の低下ま
たは欠失している微生物の場合、そもそも菌体内にオメ
ガ６系不飽和脂肪酸、例えばリノール酸、γ−リノレン
酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸が存在しな
いか、存在してもわずかであるため、培養後に得られた
休止菌体とリノール酸を反応させればΔ６不飽和化酵素
によりγ−リノレン酸が生成し、ジホモ−γ−リノレン
酸を反応させればΔ５不飽和化酵素によりアラキドン酸
が生成し、またγ−リノレン酸を反応させれば鎖長延長
酵素によりジホモ−γ−リノレン酸が生成し、各酵素活
性を容易に測定することができ、親株との比較により、
変異処理により得られる微生物のもつΔ５不飽和化活
性、Δ６不飽和化活性および鎖長延長活性を評価するこ
とができる。
たは欠失している微生物の場合、そもそも菌体内にオメ
ガ６系不飽和脂肪酸、例えばリノール酸、γ−リノレン
酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸が存在しな
いか、存在してもわずかであるため、培養後に得られた
休止菌体とリノール酸を反応させればΔ６不飽和化酵素
によりγ−リノレン酸が生成し、ジホモ−γ−リノレン
酸を反応させればΔ５不飽和化酵素によりアラキドン酸
が生成し、またγ−リノレン酸を反応させれば鎖長延長
酵素によりジホモ−γ−リノレン酸が生成し、各酵素活
性を容易に測定することができ、親株との比較により、
変異処理により得られる微生物のもつΔ５不飽和化活
性、Δ６不飽和化活性および鎖長延長活性を評価するこ
とができる。
【００１５】本発明の具体的な変異株として、例えば、
Δ１２不飽和化活性の欠失している微生物、モルティエ
レラ・アルピナＳＡＭ１８６１から本発明者らが誘導し
たΔ６不飽和化活性が上昇したモルティエレラ・アルピ
ナＳＡＭ２０８６（８生寄文第１２３５号、ＦＥＲＭ
Ｐ−１５７６６）を使用することができるが、この菌株
に限定しているわけではなく、Δ１２不飽和化活性の低
下又は欠失している親株のΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性又は鎖長延長活性を１として、これらの活性の
内、少なくともひとつが１を越える活性を示す変異株を
すべて使用することができる。
Δ１２不飽和化活性の欠失している微生物、モルティエ
レラ・アルピナＳＡＭ１８６１から本発明者らが誘導し
たΔ６不飽和化活性が上昇したモルティエレラ・アルピ
ナＳＡＭ２０８６（８生寄文第１２３５号、ＦＥＲＭ
Ｐ−１５７６６）を使用することができるが、この菌株
に限定しているわけではなく、Δ１２不飽和化活性の低
下又は欠失している親株のΔ５不飽和化活性、Δ６不飽
和化活性又は鎖長延長活性を１として、これらの活性の
内、少なくともひとつが１を越える活性を示す変異株を
すべて使用することができる。
【００１６】本発明の変異株を培養して得られるオメガ
９系高度不飽和脂肪酸は、例えば６，９−オクタデカジ
エン酸、８，１１−エイコサジエン酸、５，８，１１−
エイコサトリエン酸等を挙げることができる。本発明で
は、特にΔ１２不飽和化活性が欠失し、かつΔ５不飽和
化活性及びΔ６不飽和化活性が強化された変異株を用い
ることによって、ミード酸を大量に製造することができ
る。
９系高度不飽和脂肪酸は、例えば６，９−オクタデカジ
エン酸、８，１１−エイコサジエン酸、５，８，１１−
エイコサトリエン酸等を挙げることができる。本発明で
は、特にΔ１２不飽和化活性が欠失し、かつΔ５不飽和
化活性及びΔ６不飽和化活性が強化された変異株を用い
ることによって、ミード酸を大量に製造することができ
る。
【００１７】突然変異を誘発させるためには、放射線
（Ｘ線、γ線、中性子線）照射や紫外線照射、高熱処理
等を行ったり、また微生物を適当なバッファー中などに
懸濁し、変異源を加えて一定時間インキュベート後、適
当に希釈して寒天培地に植菌し、変異株のコロニーを得
るといった一般的な突然変異操作を行うこともできる。
変異源としては、ナイトロジェンマスタード、メチルメ
タンサルホネート（ＭＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等のアルキル化剤
や、５−ブロモウラシル等の塩基類似体や、マイトマイ
シンＣ等の抗生物質や、６−メルカプトプリン等の塩基
合成阻害剤や、プロフラビン等の色素類（その他の誘導
体）や、４−ニトロキノリン−Ｎ−オキシド等のある種
の発がん剤や塩化マンガン、ホルムアルデヒド等のその
他の化合物を挙げることができる。また親株は、生育菌
体（菌糸など）でも良いし、胞子でも良い。
（Ｘ線、γ線、中性子線）照射や紫外線照射、高熱処理
等を行ったり、また微生物を適当なバッファー中などに
懸濁し、変異源を加えて一定時間インキュベート後、適
当に希釈して寒天培地に植菌し、変異株のコロニーを得
るといった一般的な突然変異操作を行うこともできる。
変異源としては、ナイトロジェンマスタード、メチルメ
タンサルホネート（ＭＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等のアルキル化剤
や、５−ブロモウラシル等の塩基類似体や、マイトマイ
シンＣ等の抗生物質や、６−メルカプトプリン等の塩基
合成阻害剤や、プロフラビン等の色素類（その他の誘導
体）や、４−ニトロキノリン−Ｎ−オキシド等のある種
の発がん剤や塩化マンガン、ホルムアルデヒド等のその
他の化合物を挙げることができる。また親株は、生育菌
体（菌糸など）でも良いし、胞子でも良い。
【００１８】本発明の製造方法において変異株を培養す
る為には、その菌株の胞子、菌糸、又は予め培養して得
られた前培養液を、液体培地又は固体培地に接種し培養
する。液体培地の場合に、炭素源としてはグルコース、
フラクトース、キシロース、サッカロース、マルトー
ス、可溶性デンプン、糖蜜、グリセロール、マンニトー
ル、クエン酸等の一般的に使用されているものが、いず
れも使用できるが、特にグルコース、マルトース、糖
蜜、グリセロール等が好ましい。
る為には、その菌株の胞子、菌糸、又は予め培養して得
られた前培養液を、液体培地又は固体培地に接種し培養
する。液体培地の場合に、炭素源としてはグルコース、
フラクトース、キシロース、サッカロース、マルトー
ス、可溶性デンプン、糖蜜、グリセロール、マンニトー
ル、クエン酸等の一般的に使用されているものが、いず
れも使用できるが、特にグルコース、マルトース、糖
蜜、グリセロール等が好ましい。
【００１９】また窒素源としてはペプトン、酵母エキ
ス、麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンスティ
ープリカー、尿素等の有機窒素源、ならびに硝酸ナトリ
ウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無機窒
素源を用いることができる。この他必要に応じリン酸カ
リウム、リン酸二水素カリウム等のリン酸塩、硫酸アン
モニウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸
鉄、硫酸銅、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等の無
機塩類及びビタミン等も微量栄養源として使用できる。
ス、麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンスティ
ープリカー、尿素等の有機窒素源、ならびに硝酸ナトリ
ウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無機窒
素源を用いることができる。この他必要に応じリン酸カ
リウム、リン酸二水素カリウム等のリン酸塩、硫酸アン
モニウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸
鉄、硫酸銅、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等の無
機塩類及びビタミン等も微量栄養源として使用できる。
【００２０】これらの培地成分は微生物の成育を害しな
い濃度であれば特に制限はない。実用上一般に、炭素源
は０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１５重量％、窒
素源は０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重
量％の濃度とするのが良い。培養温度は５〜４０℃、好
ましくは２０〜３０℃とし、また２０〜３０℃にて培養
して菌体を増殖せしめた後５〜２０℃にて培養を続けて
オメガ９系高度不飽和脂肪酸を生産せしめることもでき
る。このような温度管理により、生成脂肪酸中のオメガ
９系高度不飽和脂肪酸の生成量を上昇せしめることがで
きる。培地のｐＨは４〜１０、好ましくは５〜８として
通気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。培養は
通常２〜２０日間好ましくは５〜２０日間、より好まし
くは５〜１５日間行う。
い濃度であれば特に制限はない。実用上一般に、炭素源
は０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１５重量％、窒
素源は０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重
量％の濃度とするのが良い。培養温度は５〜４０℃、好
ましくは２０〜３０℃とし、また２０〜３０℃にて培養
して菌体を増殖せしめた後５〜２０℃にて培養を続けて
オメガ９系高度不飽和脂肪酸を生産せしめることもでき
る。このような温度管理により、生成脂肪酸中のオメガ
９系高度不飽和脂肪酸の生成量を上昇せしめることがで
きる。培地のｐＨは４〜１０、好ましくは５〜８として
通気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。培養は
通常２〜２０日間好ましくは５〜２０日間、より好まし
くは５〜１５日間行う。
【００２１】固体培養で培養する場合は、固形物重量に
対して５０〜１００重量％の水を加えたふすま、もみが
ら、米ぬか等を用い、５〜４０℃、好ましくは２０〜３
０℃の温度において、３〜１４日間培養を行う。この場
合に必要に応じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養
源を加えることができる。また、本発明においては、培
地中にオメガ９系高度不飽和脂肪酸の基質を添加して培
養することにより、オメガ９系高度不飽和脂肪酸の蓄積
を促進することもできる。
対して５０〜１００重量％の水を加えたふすま、もみが
ら、米ぬか等を用い、５〜４０℃、好ましくは２０〜３
０℃の温度において、３〜１４日間培養を行う。この場
合に必要に応じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養
源を加えることができる。また、本発明においては、培
地中にオメガ９系高度不飽和脂肪酸の基質を添加して培
養することにより、オメガ９系高度不飽和脂肪酸の蓄積
を促進することもできる。
【００２２】テトラデカン、ヘキサデカン、オクタデカ
ン等の炭化水素、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オ
クタデカン酸等の脂肪酸又はその塩（例えばナトリウム
塩、カリウム塩等）もしくはエステル、又は脂肪酸が構
成成分として含まれる油脂（例えば、オリーブ油、ヤシ
油、パーム油）等を挙げることができるが、これらに限
られるものではない。基質の総添加量は培地に対して
０．００１〜１０重量％、好ましくは０．５〜１０重量
％である。またこれらの基質を唯一の炭素源として培養
してもよい。これらの炭素源、窒素源、無機塩類、ビタ
ミン又は基質は、生産微生物を接種する前又はその直後
に加えてもよく、又は培養を開始した後に加えてもよ
く、あるいは両時点で加えてもよい。培養開始後の添加
は１回でもよく、又は複数回に分けて間欠的に添加して
もよい。あるいは、連続的に添加することもできる。
ン等の炭化水素、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オ
クタデカン酸等の脂肪酸又はその塩（例えばナトリウム
塩、カリウム塩等）もしくはエステル、又は脂肪酸が構
成成分として含まれる油脂（例えば、オリーブ油、ヤシ
油、パーム油）等を挙げることができるが、これらに限
られるものではない。基質の総添加量は培地に対して
０．００１〜１０重量％、好ましくは０．５〜１０重量
％である。またこれらの基質を唯一の炭素源として培養
してもよい。これらの炭素源、窒素源、無機塩類、ビタ
ミン又は基質は、生産微生物を接種する前又はその直後
に加えてもよく、又は培養を開始した後に加えてもよ
く、あるいは両時点で加えてもよい。培養開始後の添加
は１回でもよく、又は複数回に分けて間欠的に添加して
もよい。あるいは、連続的に添加することもできる。
【００２３】このようにして培養して、菌体内にオメガ
９系高度不飽和脂肪酸を大量に含有する脂質が生成蓄積
される。液体培地を使用した場合には、菌体培養によっ
て油脂を製造する途中の培養液もしくはその殺菌した培
養液、または培養終了時の培養液もしくはその殺菌した
培養液、またはそれぞれから集菌した培養菌体もしくは
その乾燥物からオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有脂質を
採取する。例えば培養菌体からは次のようにしてオメガ
９系高度不飽和脂肪酸含有脂質の採取、及びオメガ９系
高度不飽和脂肪酸の単離を行う。
９系高度不飽和脂肪酸を大量に含有する脂質が生成蓄積
される。液体培地を使用した場合には、菌体培養によっ
て油脂を製造する途中の培養液もしくはその殺菌した培
養液、または培養終了時の培養液もしくはその殺菌した
培養液、またはそれぞれから集菌した培養菌体もしくは
その乾燥物からオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有脂質を
採取する。例えば培養菌体からは次のようにしてオメガ
９系高度不飽和脂肪酸含有脂質の採取、及びオメガ９系
高度不飽和脂肪酸の単離を行う。
【００２４】培養終了後、培養液より遠心分離及び／又
は濾過等の常用の固液分離手段により培養菌体を得る。
菌体は好ましくは水洗、破砕、乾燥する。乾燥は凍結乾
燥、風乾等によって行うことができる。乾燥菌体は、好
ましくは窒素気流下で有機溶媒によって抽出処理する。
有機溶媒としてはエーテル、ヘキサン、メタノール、エ
タノール、クロロホルム、ジクロロメタン、石油エーテ
ル等を用いることができ、又メタノールと石油エーテル
の交互抽出やクロロホルム−メタノール−水の一層系の
溶媒を用いた抽出によっても良好な結果を得ることがで
きる。抽出物から減圧下で有機溶媒を留去することによ
り、高濃度にオメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有した脂
質が得られる。
は濾過等の常用の固液分離手段により培養菌体を得る。
菌体は好ましくは水洗、破砕、乾燥する。乾燥は凍結乾
燥、風乾等によって行うことができる。乾燥菌体は、好
ましくは窒素気流下で有機溶媒によって抽出処理する。
有機溶媒としてはエーテル、ヘキサン、メタノール、エ
タノール、クロロホルム、ジクロロメタン、石油エーテ
ル等を用いることができ、又メタノールと石油エーテル
の交互抽出やクロロホルム−メタノール−水の一層系の
溶媒を用いた抽出によっても良好な結果を得ることがで
きる。抽出物から減圧下で有機溶媒を留去することによ
り、高濃度にオメガ９系高度不飽和脂肪酸を含有した脂
質が得られる。
【００２５】また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて
抽出を行うことができる。この場合にはメタノール、エ
タノール等の水に対して相溶性の溶媒、又はこれらと水
及び／又は他の溶媒とから成る水に対して相溶性の混合
溶媒を使用する。その他の手順は上記と同様である。上
記のようにして得られた脂質中には、各種オメガ９系高
度不飽和脂肪酸がトリグリセリドやフォスファチジルコ
リン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファ
チジルイノシトールに結合した状態で存在している。培
養物から採取したオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有脂質
からオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有トリグリセリドの
精製は、常法により、ヘキサン抽出後、脱酸、脱色、脱
臭、脱ガム処理あるいは冷却分離などにより行うことが
できる。
抽出を行うことができる。この場合にはメタノール、エ
タノール等の水に対して相溶性の溶媒、又はこれらと水
及び／又は他の溶媒とから成る水に対して相溶性の混合
溶媒を使用する。その他の手順は上記と同様である。上
記のようにして得られた脂質中には、各種オメガ９系高
度不飽和脂肪酸がトリグリセリドやフォスファチジルコ
リン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファ
チジルイノシトールに結合した状態で存在している。培
養物から採取したオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有脂質
からオメガ９系高度不飽和脂肪酸含有トリグリセリドの
精製は、常法により、ヘキサン抽出後、脱酸、脱色、脱
臭、脱ガム処理あるいは冷却分離などにより行うことが
できる。
【００２６】また上記のようにして得られた脂質中に
は、各種オメガ９系高度不飽和脂肪酸が脂質化合物、例
えば脂肪の構成成分として含まれている。これらを直接
分離することもできるが、低級アルコールとのエステ
ル、例えば８，１１−エイコサジエン酸メチル、６，９
−オクタデカジエン酸メチル、ミード酸メチル等として
分離するのが好ましい。このようなエステルにすること
により、他の脂質成分から容易に分離することができ、
また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミチン
酸、オレイン酸等（これらも、オメガ９系高度不飽和脂
肪酸のエステル化に際してエステル化される）から容易
に分離することができる。例えば、オメガ９系高度不飽
和脂肪酸のメチルエステルを得るには、前記の抽出脂質
を無水メタノールー塩酸５〜１０％、ＢＦ３ーメタノー
ル１０〜５０％等により、室温にて１〜２４時間処理す
るのが好ましい。
は、各種オメガ９系高度不飽和脂肪酸が脂質化合物、例
えば脂肪の構成成分として含まれている。これらを直接
分離することもできるが、低級アルコールとのエステ
ル、例えば８，１１−エイコサジエン酸メチル、６，９
−オクタデカジエン酸メチル、ミード酸メチル等として
分離するのが好ましい。このようなエステルにすること
により、他の脂質成分から容易に分離することができ、
また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミチン
酸、オレイン酸等（これらも、オメガ９系高度不飽和脂
肪酸のエステル化に際してエステル化される）から容易
に分離することができる。例えば、オメガ９系高度不飽
和脂肪酸のメチルエステルを得るには、前記の抽出脂質
を無水メタノールー塩酸５〜１０％、ＢＦ３ーメタノー
ル１０〜５０％等により、室温にて１〜２４時間処理す
るのが好ましい。
【００２７】前記の処理液からオメガ９系高度不飽和脂
肪酸メチルエステルを回収するにはヘキサン、エーテ
ル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出するのが好ましい。
次に、この抽出液を無水硫酸ナトリウム等により乾燥
し、有機溶媒を好ましくは減圧下で留去することにより
主として脂肪酸エステルからなる混合物が得られる。こ
の混合物には、目的とするオメガ９系高度不飽和脂肪酸
メチルエステルの他に、パルミチン酸メチルエステル、
ステアリン酸メチルエステル、オレイン酸メチルエステ
ル等の脂肪酸メチルエステルが含まれている。これらの
脂肪酸メチルエステル混合物からオメガ９系高度不飽和
脂肪酸メチルエステルを単離するには、カラムクロマト
グラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々交流分配
クロマトグラフィー等を単独で、又は組み合わせて使用
することができる。
肪酸メチルエステルを回収するにはヘキサン、エーテ
ル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出するのが好ましい。
次に、この抽出液を無水硫酸ナトリウム等により乾燥
し、有機溶媒を好ましくは減圧下で留去することにより
主として脂肪酸エステルからなる混合物が得られる。こ
の混合物には、目的とするオメガ９系高度不飽和脂肪酸
メチルエステルの他に、パルミチン酸メチルエステル、
ステアリン酸メチルエステル、オレイン酸メチルエステ
ル等の脂肪酸メチルエステルが含まれている。これらの
脂肪酸メチルエステル混合物からオメガ９系高度不飽和
脂肪酸メチルエステルを単離するには、カラムクロマト
グラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々交流分配
クロマトグラフィー等を単独で、又は組み合わせて使用
することができる。
【００２８】こうして単離された各種オメガ９系高度不
飽和脂肪酸メチルからオメガ９系高度不飽和脂肪酸を得
るには、アルカリで加水分解した後、エーテル、酢酸エ
チル等の有機溶媒で抽出すればよい。又、オメガ９系高
度不飽和脂肪酸をそのメチルエステルを経ないで採取す
るには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば５％水
酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した後、こ
の分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されている方
法により抽出・精製することができる。
飽和脂肪酸メチルからオメガ９系高度不飽和脂肪酸を得
るには、アルカリで加水分解した後、エーテル、酢酸エ
チル等の有機溶媒で抽出すればよい。又、オメガ９系高
度不飽和脂肪酸をそのメチルエステルを経ないで採取す
るには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば５％水
酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した後、こ
の分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されている方
法により抽出・精製することができる。
【００２９】
【実施例】次に、実施例により、本発明をさらに具体的
に説明する。実施例１ Czapek寒天培地（０．２％NaNO3 、０．１％K2HPO4、
０．０５％MgSO4 、０．０５％ KCl、０．００１％FeSO
4 、３％Sucrose 、２％寒天、ｐＨ６．０）に、Δ１２
不飽和化活性を欠失している変異株であるモルティエレ
ラ・アルピナ（Mortierella alpina）ＳＡＭ１８６１
を植菌し胞子形成させ、胞子溶液（５０mMTris／malate
緩衝溶液（ｐＨ７．５）、１ x１０6 spores／ml）を調
製した。得られた胞子溶液１．０mlに１００mM Tris ／
malate緩衝溶液（ｐＨ７．５）０．５mlを加え、ＮＴＧ
溶液（N-Methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine ５mg／脱
イオン水１ml）５００μl 加えて、２８℃で１５分間イ
ンキュベートして変異処理を施した。
に説明する。実施例１ Czapek寒天培地（０．２％NaNO3 、０．１％K2HPO4、
０．０５％MgSO4 、０．０５％ KCl、０．００１％FeSO
4 、３％Sucrose 、２％寒天、ｐＨ６．０）に、Δ１２
不飽和化活性を欠失している変異株であるモルティエレ
ラ・アルピナ（Mortierella alpina）ＳＡＭ１８６１
を植菌し胞子形成させ、胞子溶液（５０mMTris／malate
緩衝溶液（ｐＨ７．５）、１ x１０6 spores／ml）を調
製した。得られた胞子溶液１．０mlに１００mM Tris ／
malate緩衝溶液（ｐＨ７．５）０．５mlを加え、ＮＴＧ
溶液（N-Methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine ５mg／脱
イオン水１ml）５００μl 加えて、２８℃で１５分間イ
ンキュベートして変異処理を施した。
【００３０】ＮＴＧ処理された胞子懸濁液は、１０-3〜
１０-4程度に希釈し、ＧＹ寒天プレート（１％グルコー
ス、０．５％酵母エキス、０．００５％トリトン（Trit
on）X −１００、１．５％寒天、ｐＨ６．０）に塗布し
た。２８℃で培養し、コロニーが出現したものからラン
ダムに新しいプレートにピックアップした。ピックアッ
プした保存コロニーを、ＧＹ寒天プレートで２８℃で２
日間、１２℃で２日間培養し、寒天ごとくりぬいて１０
０℃で乾燥させた。
１０-4程度に希釈し、ＧＹ寒天プレート（１％グルコー
ス、０．５％酵母エキス、０．００５％トリトン（Trit
on）X −１００、１．５％寒天、ｐＨ６．０）に塗布し
た。２８℃で培養し、コロニーが出現したものからラン
ダムに新しいプレートにピックアップした。ピックアッ
プした保存コロニーを、ＧＹ寒天プレートで２８℃で２
日間、１２℃で２日間培養し、寒天ごとくりぬいて１０
０℃で乾燥させた。
【００３１】得られた乾燥菌体をねじ口試験管（１６．
５mmφ）に入れ、塩化メチレン１ml、無水メタノール-
塩酸（１０％）２mlを加え、５０℃で３時間処理するこ
とによってメチルエステル化し、ｎ−ヘキサン４ml、水
１mlを加えて、２回抽出し、抽出液の溶媒を遠心エバポ
レーター（４０℃、１時間）で留去した後、得られた脂
肪酸メチルエステルをキャピラリーガスクロマトグラフ
ィーで分析した。そして、スクリーニングの結果、親株
であるモルティエレラ・アルピナ（Mortierella alpi
na) ＳＡＭ１８６１よりミード酸の生産性の高いモルテ
ィエレラ・アルピナＳＡＭ２０８６（ＦＥＲＭ Ｐ−１
５７６６）が得られた。さらにこのＳＡＭ２０８６を親
株として上記と同様の変異処理を行ない、モルティエレ
ラ・アルピナＳＡＭ２１０４が得られた。
５mmφ）に入れ、塩化メチレン１ml、無水メタノール-
塩酸（１０％）２mlを加え、５０℃で３時間処理するこ
とによってメチルエステル化し、ｎ−ヘキサン４ml、水
１mlを加えて、２回抽出し、抽出液の溶媒を遠心エバポ
レーター（４０℃、１時間）で留去した後、得られた脂
肪酸メチルエステルをキャピラリーガスクロマトグラフ
ィーで分析した。そして、スクリーニングの結果、親株
であるモルティエレラ・アルピナ（Mortierella alpi
na) ＳＡＭ１８６１よりミード酸の生産性の高いモルテ
ィエレラ・アルピナＳＡＭ２０８６（ＦＥＲＭ Ｐ−１
５７６６）が得られた。さらにこのＳＡＭ２０８６を親
株として上記と同様の変異処理を行ない、モルティエレ
ラ・アルピナＳＡＭ２１０４が得られた。
【００３２】実施例２ グルコース４％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ
６．０）５Ｌを１０Ｌジャーファーメンターに入れ、１
２０℃で３０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ
（Mortierella alpina）の突然変異株ＳＡＭ１８６１
またはＳＡＭ２０８６の前培養液１００mlを接種し、通
気量１vvm 、撹伴数３００rpm 、８日間の通気攪拌培養
を行った。培養温度は、培養開始時は２８℃で、培養２
日目より２０℃に下げて行った。培養１日目から４日目
まで毎日１％のグルコースを添加した。培養終了後、濾
過により各々の菌体を回収し、十分水洗した後、得られ
た湿菌体を凍結乾燥し、乾燥菌体をそれぞれ９９．７
ｇ、９２．５ｇ得た。
６．０）５Ｌを１０Ｌジャーファーメンターに入れ、１
２０℃で３０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ
（Mortierella alpina）の突然変異株ＳＡＭ１８６１
またはＳＡＭ２０８６の前培養液１００mlを接種し、通
気量１vvm 、撹伴数３００rpm 、８日間の通気攪拌培養
を行った。培養温度は、培養開始時は２８℃で、培養２
日目より２０℃に下げて行った。培養１日目から４日目
まで毎日１％のグルコースを添加した。培養終了後、濾
過により各々の菌体を回収し、十分水洗した後、得られ
た湿菌体を凍結乾燥し、乾燥菌体をそれぞれ９９．７
ｇ、９２．５ｇ得た。
【００３３】この菌体より、クロロホルム−メタノール
−水の一層系の溶媒を用いるBlight& Dyer の抽出法に
よって脂質を抽出したところ、それぞれ４８．９２ｇ、
４４．１７ｇの脂質が得られた。油脂の脂肪酸組成を確
認するためこの油脂１０mgをねじ口試験管に入れ、塩化
メチレン１ml、無水メタノール−塩酸（１０％）２mlを
加え、５０℃で３時間処理することによってメチルエス
テル化し、ｎ−ヘキサン４ml、水１mlを加え、２回抽出
し、抽出液の溶媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時
間）で留去した後、得られた脂肪酸メチルエステルをガ
スクロマトグラフィーで分析した。表１にその結果を示
す。ＳＡＭ１８６１から変異処理により誘導したＳＡＭ
２０８６は、ミード酸の生産性並びに含有率両面におい
て優れた変異株であることが明かとなった。
−水の一層系の溶媒を用いるBlight& Dyer の抽出法に
よって脂質を抽出したところ、それぞれ４８．９２ｇ、
４４．１７ｇの脂質が得られた。油脂の脂肪酸組成を確
認するためこの油脂１０mgをねじ口試験管に入れ、塩化
メチレン１ml、無水メタノール−塩酸（１０％）２mlを
加え、５０℃で３時間処理することによってメチルエス
テル化し、ｎ−ヘキサン４ml、水１mlを加え、２回抽出
し、抽出液の溶媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時
間）で留去した後、得られた脂肪酸メチルエステルをガ
スクロマトグラフィーで分析した。表１にその結果を示
す。ＳＡＭ１８６１から変異処理により誘導したＳＡＭ
２０８６は、ミード酸の生産性並びに含有率両面におい
て優れた変異株であることが明かとなった。
【００３４】
【表１】
【００３５】実施例３ ねじ口試験管（１６．５mmφ）に０．１Ｍリン酸緩衝溶
液（ｐＨ７．４）１ml、モルティエレラ・アルピナ（Mo
rtierella alpina）の突然変異株ＳＡＭ１８６１また
はＳＡＭ２０８６の実施例２で得た湿菌体３０mg、ＢＳ
Ａ懸濁基質溶液（リノール酸、γ−リノレン酸、または
ジホモ−γ−リノレン酸を２０mgを５％牛血清アルブミ
ン（脂肪酸フリーＢＳＡ、シグマ社製）溶液２mlに混合
し、約２０分間ソニックにかけ懸濁したもの）１００μ
l を加え、シリコ栓をして、２８℃、１２０rpm で振盪
した。０、２、６、２０時間後に４mlエタノールを加え
て反応を止めた。
液（ｐＨ７．４）１ml、モルティエレラ・アルピナ（Mo
rtierella alpina）の突然変異株ＳＡＭ１８６１また
はＳＡＭ２０８６の実施例２で得た湿菌体３０mg、ＢＳ
Ａ懸濁基質溶液（リノール酸、γ−リノレン酸、または
ジホモ−γ−リノレン酸を２０mgを５％牛血清アルブミ
ン（脂肪酸フリーＢＳＡ、シグマ社製）溶液２mlに混合
し、約２０分間ソニックにかけ懸濁したもの）１００μ
l を加え、シリコ栓をして、２８℃、１２０rpm で振盪
した。０、２、６、２０時間後に４mlエタノールを加え
て反応を止めた。
【００３６】そして、遠心エバポレーター（４０℃、１
時間）で乾燥した後、実施例２と同様にメチルエステル
化を行い、得られた脂肪酸メチルエステル（基質及び反
応生成物）をキャピラリーガスクロマトグラフィーで分
析した。なお、コントロールには同量の５％ＢＳＡ溶液
を添加した。したがって、基質にジホモ−γ−リノレン
酸を用いれば反応生成物であるアラキドン酸量よりΔ５
不飽和化活性が求まり、基質にγ−リノレン酸を用いれ
ば反応生成物であるジホモ−γ−リノレン酸量より鎖長
延長活性が、アラキドン酸量よりΔ５不飽和化活性が求
まり、そして、基質にリノール酸を用いれば反応生成物
であるγ−リノレン酸量よりΔ６不飽和化活性が、ジホ
モ−γ−リノレン酸量より鎖長延長活性が、アラキドン
酸量よりΔ５不飽和化活性が求まる。表２にその結果を
示す。
時間）で乾燥した後、実施例２と同様にメチルエステル
化を行い、得られた脂肪酸メチルエステル（基質及び反
応生成物）をキャピラリーガスクロマトグラフィーで分
析した。なお、コントロールには同量の５％ＢＳＡ溶液
を添加した。したがって、基質にジホモ−γ−リノレン
酸を用いれば反応生成物であるアラキドン酸量よりΔ５
不飽和化活性が求まり、基質にγ−リノレン酸を用いれ
ば反応生成物であるジホモ−γ−リノレン酸量より鎖長
延長活性が、アラキドン酸量よりΔ５不飽和化活性が求
まり、そして、基質にリノール酸を用いれば反応生成物
であるγ−リノレン酸量よりΔ６不飽和化活性が、ジホ
モ−γ−リノレン酸量より鎖長延長活性が、アラキドン
酸量よりΔ５不飽和化活性が求まる。表２にその結果を
示す。
【００３７】基質にジホモ−γ−リノレン酸を用いたΔ
５不飽和化活性でＳＡＭ１８６１の活性を１とした場
合、ＳＡＭ２０８６の活性は１．７４となり、基質にリ
ノール酸を用いたΔ６不飽和化活性でＳＡＭ１８６１の
活性を１とした場合、ＳＡＭ２０８６の活性は１．４２
となり、実施例２のＳＡＭ１８６１から変異処理により
誘導したＳＡＭ２０８６のミード酸の生産性並びに含有
率の上昇はΔ５不飽和化活性並びにΔ６不飽和化活性の
強化によることが明かとなった。
５不飽和化活性でＳＡＭ１８６１の活性を１とした場
合、ＳＡＭ２０８６の活性は１．７４となり、基質にリ
ノール酸を用いたΔ６不飽和化活性でＳＡＭ１８６１の
活性を１とした場合、ＳＡＭ２０８６の活性は１．４２
となり、実施例２のＳＡＭ１８６１から変異処理により
誘導したＳＡＭ２０８６のミード酸の生産性並びに含有
率の上昇はΔ５不飽和化活性並びにΔ６不飽和化活性の
強化によることが明かとなった。
【００３８】
【表２】
【００３９】実施例４ グルコース２％、酵母エキス１％に、表３に示したオメ
ガ９系高度不飽和脂肪酸の前駆体またはそれを含む油脂
をそれぞれ０．５％添加した培地（ｐＨ６．０）２mlを
１０mlのエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で
２０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ（Mortie
rella alpina）の突然変異株ＳＡＭ２０８６を培地に
一白金耳接種し、レシプロシェーカー（１１０ rpm）に
より、２８℃で８日間培養した。表３にその結果を示
す。
ガ９系高度不飽和脂肪酸の前駆体またはそれを含む油脂
をそれぞれ０．５％添加した培地（ｐＨ６．０）２mlを
１０mlのエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で
２０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ（Mortie
rella alpina）の突然変異株ＳＡＭ２０８６を培地に
一白金耳接種し、レシプロシェーカー（１１０ rpm）に
より、２８℃で８日間培養した。表３にその結果を示
す。
【００４０】
【表３】
【００４１】実施例５ グルコース２％、酵母エキス１％、オリブ油０．１％及
びアデカノール０．０１％を含む培地（ｐＨ６．０）５
L を１０L ジャーファーメンターに入れ、１２０℃で３
０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ（Mortiere
lla alpina)ＳＡＭ２１０４の前培養液１００mlを摂
取し、通気量１vvm 、撹伴数３００rpm、８日間の通気
攪拌培養を行った。培養温度は、培養開始時は２８℃
で、培養２日目より２０℃に下げて行った。培養２日目
及び培養３日目に１．５％グルコースを添加した。培養
終了後、実施例２と同様の操作により、培地１Ｌ当り１
５．８０ｇの乾燥菌体を得た。実施例２と同様に脂質を
抽出し、該脂質をメチルエステル化し、得られた脂肪酸
メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。
ミード酸、８，１１−エイコサジエン酸、６，９−オク
デカジエン酸の生産量（ｇ／Ｌ）及び全脂肪酸に対する
割合（％）は、ミード酸が１．７６ｇ／Ｌ、２３．７６
％；８，１１−エイコサジエン酸が０．３５ｇ／Ｌ、
４．７５％；６．９−オクタデカジエン酸が０．８４ｇ
／Ｌ、１１．３５％であった。
びアデカノール０．０１％を含む培地（ｐＨ６．０）５
L を１０L ジャーファーメンターに入れ、１２０℃で３
０分間殺菌した。モルティエレラ・アルピナ（Mortiere
lla alpina)ＳＡＭ２１０４の前培養液１００mlを摂
取し、通気量１vvm 、撹伴数３００rpm、８日間の通気
攪拌培養を行った。培養温度は、培養開始時は２８℃
で、培養２日目より２０℃に下げて行った。培養２日目
及び培養３日目に１．５％グルコースを添加した。培養
終了後、実施例２と同様の操作により、培地１Ｌ当り１
５．８０ｇの乾燥菌体を得た。実施例２と同様に脂質を
抽出し、該脂質をメチルエステル化し、得られた脂肪酸
メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。
ミード酸、８，１１−エイコサジエン酸、６，９−オク
デカジエン酸の生産量（ｇ／Ｌ）及び全脂肪酸に対する
割合（％）は、ミード酸が１．７６ｇ／Ｌ、２３．７６
％；８，１１−エイコサジエン酸が０．３５ｇ／Ｌ、
４．７５％；６．９−オクタデカジエン酸が０．８４ｇ
／Ｌ、１１．３５％であった。
Claims (3)
- 【請求項１】 モルティエレラ（Mortierella ）属、コ
ニディオボラス（Conidiobolus）属、フィチウム（Pyth
ium ）属、フィトフトラ（Phytophthora）属、ペニシリ
ューム（Penicillium ）属、クラドスポリューム（Clad
osporium）属、ムコール（Mucor ）属、フザリューム
（Fusarium）属、アスペルギルス（Aspergillus ）属、
ロードトルラ（Rhodotorula ）属、エントモフトラ（En
tomophthora ）属、エキノスポランジウム（Echinospor
angium）属又はサプロレグニア（Saprolegnia ）属に属
しアラキドン酸生産能を有する微生物に変異処理を施し
て得られる、Δ１２不飽和化活性が低下または欠失し、
かつΔ５不飽和化活性、Δ６不飽和化活性及び／又は鎖
長延長活性の少なくとも一つがより高められた変異株を
培地中で培養し、その培養物からオメガ９系高度不飽和
脂肪酸を含有する脂質を採取することを特徴とするオメ
ガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質の製造方法。 - 【請求項２】 前記オメガ９系高度不飽和脂肪酸が、
６，９−オクタデカジエン酸、８，１１−エイコサジエ
ン酸及び／又は５，８，１１−エイコサトリエン酸の少
なくとも一つであることを特徴とする請求項１記載のオ
メガ９系高度不飽和脂肪酸を含有する脂質の製造方法。 - 【請求項３】 請求項１又は２に記載の培養物又は脂質
からオメガ９系高度不飽和脂肪酸を採取することを特徴
とするオメガ９系高度不飽和脂肪酸の製造方法。
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| DE69728481T DE69728481T2 (de) | 1996-08-23 | 1997-08-26 | Verfahren zur Herstellung von omega-9 hochungesättigten Fettsäuren und diese enthaltendes Lipid |
| ES97306494T ES2214593T3 (es) | 1996-08-23 | 1997-08-26 | Procedimiento para producir acido graso poliinsaturado omega-9 y lipido que lo contiene. |
| PT97306494T PT825263E (pt) | 1996-08-23 | 1997-08-26 | Processo para a producao de um acido gordo altamente insaturado omega-9 e de um lipido contendo o mesmo |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1057085A true JPH1057085A (ja) | 1998-03-03 |
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| PT (1) | PT825263E (ja) |
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| JP2008509660A (ja) * | 2004-08-12 | 2008-04-03 | サントリー株式会社 | 新規な菌株保存技術を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
| EP2333094A1 (en) | 2005-02-08 | 2011-06-15 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Production of polyunsaturated fatty acids using novel cell treatment method |
| US7972855B2 (en) | 1999-08-13 | 2011-07-05 | Suntory Holdings Limited | Microorganisms that extracellularly secrete lipids and methods of producing lipid and lipid vesicles encapsulating lipids using said microorganisms |
| EP2966172A1 (en) | 2002-10-11 | 2016-01-13 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Process for producing microbial fat or oil having lowered unsaponifiable matter content and said fat or oil |
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| AU2004290051A1 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-26 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Delta-15 desaturases suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oilseed plants and oleaginous yeast |
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|---|---|---|---|---|
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| US5034321A (en) * | 1987-08-19 | 1991-07-23 | Idemitsu Petrochemical Co., Ltd. | Method for the production of lipids containing bis-homo-γ-linolenic acid |
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-
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2000
- 2000-08-08 US US09/634,851 patent/US6812020B1/en not_active Expired - Lifetime
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