JPH1057093A - Ｌｌ−ｅ３３２８８抗生物質の類縁体 - Google Patents
Ｌｌ−ｅ３３２８８抗生物質の類縁体Info
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- JPH1057093A JPH1057093A JP9149925A JP14992597A JPH1057093A JP H1057093 A JPH1057093 A JP H1057093A JP 9149925 A JP9149925 A JP 9149925A JP 14992597 A JP14992597 A JP 14992597A JP H1057093 A JPH1057093 A JP H1057093A
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- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
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- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12R2001/29—Micromonospora
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規抗バクテリア作用物質の提供。
【解決手段】 抗生物質ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９０
０４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９、Ｐ
Ｄ１１５０２４、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７
Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−１
７２４のプソイドアグリコンあるいはジヒドロ誘導体。
０４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９、Ｐ
Ｄ１１５０２４、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７
Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−１
７２４のプソイドアグリコンあるいはジヒドロ誘導体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＬＬ−Ｅ３３２８
８抗生物質類の発酵により製造方法並びにそれらの類縁
抗生物質のプソイドアグリコン及びジヒドロ誘導体に関
する。本発明は、粗製濃縮物として、種々の成分の複合
物(complex)又は全成分の複合物として希薄な形態にあ
る抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤、個々の成分として純粋
な形態にある抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤及びミクロモ
ノスポーラ属(Micromonospora)の新規な株をその範囲内
に包含する。
８抗生物質類の発酵により製造方法並びにそれらの類縁
抗生物質のプソイドアグリコン及びジヒドロ誘導体に関
する。本発明は、粗製濃縮物として、種々の成分の複合
物(complex)又は全成分の複合物として希薄な形態にあ
る抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤、個々の成分として純粋
な形態にある抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤及びミクロモ
ノスポーラ属(Micromonospora)の新規な株をその範囲内
に包含する。
【０００２】
【発明の記述】ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質は密接に関
連した化合物である。１４種の抗生物質は発酵から回収
されそして混合物、以後ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８ヨード複合物又はＬＬ−Ｅ３３２８８
ブロム複合物と呼ぶ、として最初に得られる。一般に、
ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質のヨウ素含有成分（例え
ば、α1−Ｉ、α2−Ｉ、α3−Ｉ、β1−Ｉ、β2−Ｉ、
γ1−Ｉ及びδ1−Ｉ）は、無機又は有機ヨウ化物を含有
する培地を使用する発酵においてのみ見出され、一方臭
素含有成分（例えば、α1−Ｂｒ、α2−Ｂｒ、α3−Ｂ
ｒ、α4−Ｂｒ、β1−Ｂｒ、β2−Ｂｒ及びγ1−Ｂｒ）
は、無機又は有機臭化物を含有する培地を使用する発酵
においてのみ見出だされる。ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体
中の成分の比は臭化物含有抗生物質及びヨウ化物含有抗
生物質の発酵に依存して変わるが、ＬＬ−Ｅ３３２８８
β1、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ
1−Ｉは一般に、合わせて複合物の約９０％の割合を占
める主成分であるが、ＬＬ−Ｅ３３２８８α1、ＬＬ−
Ｅ３３２８８α2、ＬＬ−Ｅ３３２８８α3、ＬＬ−Ｅ３
３２８８α4及びＬＬ−Ｅ３３２８８β2は、合わせて複
合物の約１０％の割合を占める少量成分である。
連した化合物である。１４種の抗生物質は発酵から回収
されそして混合物、以後ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８ヨード複合物又はＬＬ−Ｅ３３２８８
ブロム複合物と呼ぶ、として最初に得られる。一般に、
ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質のヨウ素含有成分（例え
ば、α1−Ｉ、α2−Ｉ、α3−Ｉ、β1−Ｉ、β2−Ｉ、
γ1−Ｉ及びδ1−Ｉ）は、無機又は有機ヨウ化物を含有
する培地を使用する発酵においてのみ見出され、一方臭
素含有成分（例えば、α1−Ｂｒ、α2−Ｂｒ、α3−Ｂ
ｒ、α4−Ｂｒ、β1−Ｂｒ、β2−Ｂｒ及びγ1−Ｂｒ）
は、無機又は有機臭化物を含有する培地を使用する発酵
においてのみ見出だされる。ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体
中の成分の比は臭化物含有抗生物質及びヨウ化物含有抗
生物質の発酵に依存して変わるが、ＬＬ−Ｅ３３２８８
β1、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ
1−Ｉは一般に、合わせて複合物の約９０％の割合を占
める主成分であるが、ＬＬ−Ｅ３３２８８α1、ＬＬ−
Ｅ３３２８８α2、ＬＬ−Ｅ３３２８８α3、ＬＬ−Ｅ３
３２８８α4及びＬＬ−Ｅ３３２８８β2は、合わせて複
合物の約１０％の割合を占める少量成分である。
【０００３】ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質はグラム陽性
菌及びグラム陰性菌に対して活性である。成分の各々
は、試薬の直接又は間接にＤＮＡ損傷を開始する能力を
特定的に測定する試験である、生化学的誘発アッセイ(B
iochemical Induction Assay)の改変［エルスプル・ア
ール及びヤルモリンスキー・エム、環境的突然変異誘
発、第１巻、６５ー７８（１９７８）(Elespuru, R. an
d Yarmolinsky, M., Environmental Mutagenesis, 1, 6
5ー78 (1978)］においても活性であることが見出され
た。このアッセイにおいては、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1
−Ｉ及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉの両者共１×１０
-6ｍｃｇ／ｍlより低い濃度で活性であつた。
菌及びグラム陰性菌に対して活性である。成分の各々
は、試薬の直接又は間接にＤＮＡ損傷を開始する能力を
特定的に測定する試験である、生化学的誘発アッセイ(B
iochemical Induction Assay)の改変［エルスプル・ア
ール及びヤルモリンスキー・エム、環境的突然変異誘
発、第１巻、６５ー７８（１９７８）(Elespuru, R. an
d Yarmolinsky, M., Environmental Mutagenesis, 1, 6
5ー78 (1978)］においても活性であることが見出され
た。このアッセイにおいては、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1
−Ｉ及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉの両者共１×１０
-6ｍｃｇ／ｍlより低い濃度で活性であつた。
【０００４】ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質のいくつかの
ものの提唱された構造式を下記に開示する。
ものの提唱された構造式を下記に開示する。
【０００５】
【化１】
【０００６】 ジヒドロ−ＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコンは
下記の提唱された構造、
下記の提唱された構造、
【０００７】
【化２】
【０００８】を有しそして下記の物理化学的特徴を有す
る。
る。
【０００９】ａ）分子量：１０５２、ＦＡＢーＭＳによ
り決定した、 ｂ）紫外線吸収スペクトル：図１（メタノール）に示さ
れている、 ｃ）赤外吸収スペクトル：図２（ＫＢｒディスク）に示
されている、 ｄ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図３（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｅ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図４（７５ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている。
り決定した、 ｂ）紫外線吸収スペクトル：図１（メタノール）に示さ
れている、 ｃ）赤外吸収スペクトル：図２（ＫＢｒディスク）に示
されている、 ｄ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図３（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｅ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図４（７５ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている。
【００１０】ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉの如きヨウ素
化されたＬＬ−Ｅ３３２８８成分の希薄なメタノール性
溶液をダウエックス(Dowex)（Ｒ）５０ＷーＸ８（Ｈ
形）の如きカチオン交換樹脂で処理すると、下記の物理
化学的特徴及び提唱された構造を持った生物学的に活性
なプソイドアグリコンが得られる。
化されたＬＬ−Ｅ３３２８８成分の希薄なメタノール性
溶液をダウエックス(Dowex)（Ｒ）５０ＷーＸ８（Ｈ
形）の如きカチオン交換樹脂で処理すると、下記の物理
化学的特徴及び提唱された構造を持った生物学的に活性
なプソイドアグリコンが得られる。
【００１１】ａ）分子量：１０５０、ＦＡＢーＭＳによ
り決定した、 ｂ）分子式：Ｃ40Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4、Ｍ＋Ｎａの正確な
質量は、Ｃ40Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4Ｎａについて１０７３．
０８１０であることが高分解能ＦＡＢーＭＳｔにより決
定された。
り決定した、 ｂ）分子式：Ｃ40Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4、Ｍ＋Ｎａの正確な
質量は、Ｃ40Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4Ｎａについて１０７３．
０８１０であることが高分解能ＦＡＢーＭＳｔにより決
定された。
【００１２】ｃ）紫外線吸収スペクトル：図５（メタノ
ール、０.１ＮＨＣｌ、０.１ＮＮａＯＨ）に示されてい
る、 ｄ）赤外吸収スペクトル：図６（ＫＢｒディスク）に示
されている、 ｅ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図７（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｆ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図８（７５.４３
ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3、ＴＭＳからのｐｐｍ）に示されて
いる。有意なピークは表Iに記載のとおりである。
ール、０.１ＮＨＣｌ、０.１ＮＮａＯＨ）に示されてい
る、 ｄ）赤外吸収スペクトル：図６（ＫＢｒディスク）に示
されている、 ｅ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図７（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｆ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図８（７５.４３
ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3、ＴＭＳからのｐｐｍ）に示されて
いる。有意なピークは表Iに記載のとおりである。
【００１３】
【００１４】
【化３】
【００１５】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
をジクロルメタンとメタノールの混合物中でトリフェニ
ルホスフィンと反応させると、下記の物理化学的特徴及
び提唱された構造を持った抗バクテリア的に不活性な化
合物が得られる。
をジクロルメタンとメタノールの混合物中でトリフェニ
ルホスフィンと反応させると、下記の物理化学的特徴及
び提唱された構造を持った抗バクテリア的に不活性な化
合物が得られる。
【００１６】ａ）分子量：９７４、ＦＡＢーＭＳにより
決定した、 ｂ）分子式：Ｃ39Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4、Ｍ＋Ｎａの正確な
質量は、Ｃ39Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4Ｎａについて９９７．１
３７０であることが高分解能ＦＡＢーＭＳにより決定さ
れた。
決定した、 ｂ）分子式：Ｃ39Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4、Ｍ＋Ｎａの正確な
質量は、Ｃ39Ｈ47Ｎ2Ｏ15ＩＳ4Ｎａについて９９７．１
３７０であることが高分解能ＦＡＢーＭＳにより決定さ
れた。
【００１７】ｃ）紫外線吸収スペクトル：図９（メタノ
ール、０.１ＮＨＣｌ、０.１ＮＮａＯＨ）に示されてい
る、 ｄ）赤外吸収スペクトル：図１０（ＫＢｒディスクむに
示されている、 ｅ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図１１（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｆ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図１２（７５.４
３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3、ＴＭＳからのｐｐｍ）に示され
ている。有意なピークは下記のとおりである。
ール、０.１ＮＨＣｌ、０.１ＮＮａＯＨ）に示されてい
る、 ｄ）赤外吸収スペクトル：図１０（ＫＢｒディスクむに
示されている、 ｅ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図１１（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3）に示されている、 ｆ）炭素ー１３磁気共鳴スペクトル：図１２（７５.４
３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3、ＴＭＳからのｐｐｍ）に示され
ている。有意なピークは下記のとおりである。
【００１８】
【００１９】
【化４】
【００２０】ジクロルメタンとメタノールの混合物中で
ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドフグリコンをトリフェニ
ルホスフィンと反応させることから誘導される生成物を
先ず最初炭酸カリウムのメタノール性溶液と反応させ、
次いで過剰の無水酢酸と反応させると、下記の物理化学
的特徴と構造を持った化合物が得られる。この化合物は
結晶性でありそしてその化学的構造はＸ線結晶学により
決定された。
ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドフグリコンをトリフェニ
ルホスフィンと反応させることから誘導される生成物を
先ず最初炭酸カリウムのメタノール性溶液と反応させ、
次いで過剰の無水酢酸と反応させると、下記の物理化学
的特徴と構造を持った化合物が得られる。この化合物は
結晶性でありそしてその化学的構造はＸ線結晶学により
決定された。
【００２１】ａ）紫外線吸収スペクトル：図１３（メタ
ノール、０．１ＮＨＣｌ、０．１ＮＮａＯＨ）に示され
ている、 ｂ）赤外吸収スペクトル：図１４（ＫＢｒディスク）に
示されている、 ｃ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図１５（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3、痕跡の酢酸エチルを含有する）に示さ
れている、 ｄ）分子式：Ｃ36Ｈ40ＮＯ13ＩＳ2、化学構造から計算
した。
ノール、０．１ＮＨＣｌ、０．１ＮＮａＯＨ）に示され
ている、 ｂ）赤外吸収スペクトル：図１４（ＫＢｒディスク）に
示されている、 ｃ）プロトン磁気共鳴スペクトル：図１５（３００ＭＨ
ｚ、ＣＤＣｌ3、痕跡の酢酸エチルを含有する）に示さ
れている、 ｄ）分子式：Ｃ36Ｈ40ＮＯ13ＩＳ2、化学構造から計算
した。
【００２２】
【化５】
【００２３】ＮＲＲＬ−１５８３９及び１５９７５によ
り生産された前記ＬＬ−Ｅ３３２８８成分のすべては、
ＬＬ−Ｅ−３３２８８−ＵＶ７８４と命名された新規に
誘導された突然変異体によってはるかに高い収率で生産
されることも見出された。
り生産された前記ＬＬ−Ｅ３３２８８成分のすべては、
ＬＬ−Ｅ−３３２８８−ＵＶ７８４と命名された新規に
誘導された突然変異体によってはるかに高い収率で生産
されることも見出された。
【００２４】突然変異体ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８
４の誘導 分離体(isolate)ＵＶ６１０（３）（下記のダイアグラ
ム参照）からの栄養生長物(vegetative growth)を発酵
のために使用される如く調製し、これを使用して、ペプ
トン、デキストロ−ス、糖密及び水から成る培地のフラ
スコに接種した。この培地にＬＬ−Ｅ３３２８８β1−
Ｂｒを８μｇ／ｍlの濃度で補充した。このフラスコか
ら多数の平板培養を行い、７日目に耐性集団が得られ
た。総数９７コロニー（Ｒ１乃至Ｒ９７）を分離した。
分離体Ｒ６６はＮＲＲＬ−１５９７５となった。分離体
Ｒ８０はその生合成ポテンシャルにおいてＲ６６に本質
的に類似している。
４の誘導 分離体(isolate)ＵＶ６１０（３）（下記のダイアグラ
ム参照）からの栄養生長物(vegetative growth)を発酵
のために使用される如く調製し、これを使用して、ペプ
トン、デキストロ−ス、糖密及び水から成る培地のフラ
スコに接種した。この培地にＬＬ−Ｅ３３２８８β1−
Ｂｒを８μｇ／ｍlの濃度で補充した。このフラスコか
ら多数の平板培養を行い、７日目に耐性集団が得られ
た。総数９７コロニー（Ｒ１乃至Ｒ９７）を分離した。
分離体Ｒ６６はＮＲＲＬ−１５９７５となった。分離体
Ｒ８０はその生合成ポテンシャルにおいてＲ６６に本質
的に類似している。
【００２５】次いで、分離体Ｒ８０を出発カルチャーと
して使用し、それから胞子懸濁液を調製しそして比較的
高濃度のＬＬ−Ｅ３３２８８複合物にさらした。その目
的はＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質に耐性の分離体を得、
それにより生産収率を改良することであった。
して使用し、それから胞子懸濁液を調製しそして比較的
高濃度のＬＬ−Ｅ３３２８８複合物にさらした。その目
的はＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質に耐性の分離体を得、
それにより生産収率を改良することであった。
【００２６】Ｔ2のラベルを付けられた１つの生存菌は
フラスコでの発酵においてより大きい収率のＬＬ−Ｅ３
３２８８β1−Ｂｒ及びＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉを生
産した。Ｔ2の胞子懸濁液を調製しそしてＵＶ照射にさ
らした。次いで総計１３１のコロニーを分離し（ＵＶ７
０３乃至ＵＶ８３４）、発酵させそしてアッセイした。
この群から、フラスコ発酵におけるその活性のために分
離体ＵＶ７８４が選ばれた。分離体ＵＶ７８４は、ヨウ
素含有培地内で発酵させると、Ｒ６６（ＮＲＲＬ−１５
９７５）の収率の約２倍を生産した。
フラスコでの発酵においてより大きい収率のＬＬ−Ｅ３
３２８８β1−Ｂｒ及びＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉを生
産した。Ｔ2の胞子懸濁液を調製しそしてＵＶ照射にさ
らした。次いで総計１３１のコロニーを分離し（ＵＶ７
０３乃至ＵＶ８３４）、発酵させそしてアッセイした。
この群から、フラスコ発酵におけるその活性のために分
離体ＵＶ７８４が選ばれた。分離体ＵＶ７８４は、ヨウ
素含有培地内で発酵させると、Ｒ６６（ＮＲＲＬ−１５
９７５）の収率の約２倍を生産した。
【００２７】
【化６】
【００２８】突然変異体ＬＬ−Ｅ３３２８８ＵＶ７８４
は、ニューヨーク州、パールリバー、アメリカンシアナ
ミド社、医薬研究部門(Medical Research Division)の
カルチャーコレクションにその番号で維持されている。
この微生物の生育可能なカルチャーを、イリノイ州、ピ
オーニア市、アメリカ合衆国商務省、北部区域研究セン
ター、カルチャー・コレクション・ラボラトリー(Cultu
re Collection Labolatory, Northern Regional Resear
ch Center, U.S. Department of Agriculture,Peoria,
Illinois)に１９８６年１２月３日に寄託しそしてその
恒久的コレクションに加えられた。このカルチャーの入
手は、本出願の係属期間中は、菌株名ＮＲＲＬ−１８１
４９の下に、特許商標局長官によってＣ．Ｆ．Ｒ．§
１．１４及び３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２２の下にその資格
があると決定された人に入手可能であり、このような公
に入手可能であることに対するすべての制限は本出願に
対して米国特許が付与されると最終的に取り除かれるで
あろう。
は、ニューヨーク州、パールリバー、アメリカンシアナ
ミド社、医薬研究部門(Medical Research Division)の
カルチャーコレクションにその番号で維持されている。
この微生物の生育可能なカルチャーを、イリノイ州、ピ
オーニア市、アメリカ合衆国商務省、北部区域研究セン
ター、カルチャー・コレクション・ラボラトリー(Cultu
re Collection Labolatory, Northern Regional Resear
ch Center, U.S. Department of Agriculture,Peoria,
Illinois)に１９８６年１２月３日に寄託しそしてその
恒久的コレクションに加えられた。このカルチャーの入
手は、本出願の係属期間中は、菌株名ＮＲＲＬ−１８１
４９の下に、特許商標局長官によってＣ．Ｆ．Ｒ．§
１．１４及び３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２２の下にその資格
があると決定された人に入手可能であり、このような公
に入手可能であることに対するすべての制限は本出願に
対して米国特許が付与されると最終的に取り除かれるで
あろう。
【００２９】これらの新規な抗バクテリア剤及び抗腫瘍
剤の製造のために、本発明は、この特定の生物又は説明
の目的でのみ与えられた上記生育顕微鏡的特徴に完全に
答える生物に限定されないことが理解されるべきであ
る。事実、Ｘ線照射、紫外線照射、Ｎ′ーメチルーＮー
ニトロ−Ｎーニトロソグアニジン、アクチノファージ及
び同様なものにさらすというような種々の手段によりこ
れらの生物から生成した突然変異体の使用を包含するこ
とを所望しそして意図する。
剤の製造のために、本発明は、この特定の生物又は説明
の目的でのみ与えられた上記生育顕微鏡的特徴に完全に
答える生物に限定されないことが理解されるべきであ
る。事実、Ｘ線照射、紫外線照射、Ｎ′ーメチルーＮー
ニトロ−Ｎーニトロソグアニジン、アクチノファージ及
び同様なものにさらすというような種々の手段によりこ
れらの生物から生成した突然変異体の使用を包含するこ
とを所望しそして意図する。
【００３０】ジヒドロＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉの生
体外(in vitro)抗バクテリア活性は、標準寒天希釈法に
よるグラム陽性菌及びグラム陰性菌のスペクトルに対し
て決定された。２倍ずつ減少していく濃度の抗バクテリ
ア剤を含有するミューラーーヒントン寒天(Mueller-Hin
ton agar)をペトリプレートに注いだ。寒天表面にスチ
ール製レプリケーティング装置によって１−５×１０4
コロニー形成単位のバクテリアを接種した。約３５℃で
約１８時間のインキュベーションの後、バクテリア菌株
の生育を抑制するＬＬ−Ｅ３３２８８成分の最低濃度を
その菌株に対する最小阻止濃度（ＭＩＣ）として記録し
た。この結果を表ＩＩに要約する。
体外(in vitro)抗バクテリア活性は、標準寒天希釈法に
よるグラム陽性菌及びグラム陰性菌のスペクトルに対し
て決定された。２倍ずつ減少していく濃度の抗バクテリ
ア剤を含有するミューラーーヒントン寒天(Mueller-Hin
ton agar)をペトリプレートに注いだ。寒天表面にスチ
ール製レプリケーティング装置によって１−５×１０4
コロニー形成単位のバクテリアを接種した。約３５℃で
約１８時間のインキュベーションの後、バクテリア菌株
の生育を抑制するＬＬ−Ｅ３３２８８成分の最低濃度を
その菌株に対する最小阻止濃度（ＭＩＣ）として記録し
た。この結果を表ＩＩに要約する。
【００３１】 表 ＩＩ 最小阻止濃度(mcg/ml) 生 物 ジヒドロ‐ＬＬ‐ Ｅ３３２８８γ1‐ＩＥscherichia coli ＣＭＣ ８４‐１１ ２Ｅscherichia coli Ｎo. ３１１（ＭＰ） ２Ｅscherichia coli ＡＴＣＣ ２５９２２ １Ｋlebsiella pneumoniae ＣＭＣ ８４‐５ ＞２Ｋlebsiella pneumoniae ＡＤ（ＭＰ） １Ｅnterobacter cloacae ＣＭＣ ８４‐４ ２Ｅnterobacter aerogenes ＩＯ ８３‐４４ ２Ｓerratia marcescens ＣＭＣ ８３‐２７ ２Ｓerratia marcescens Ｆ‐３５（ＭＰ） ２Ｍorganella morganii ＩＯ ８３‐１８ １Ｐrovidencia stuartii ＣＭＣ ８３‐８２ ２Ｃitrobacter diversus Ｋ‐８２‐２４ ２Ｃitrobacter freundii ＩＯ ８３‐１３ ２Ａcinetobacter sp ＣＭＣ ８３‐８９ ２Ａcinetobacter sp ＩＯ ８３‐４９ ＞２Ｐseudomonas aeruginosa １２‐４‐４（ＭＰ） ２Ｐseudomonas aeruginosa ＡＴＣＣ ２７８５３ ２Ｓtaphylococcus aureus Ｓmith（ＭＰ） ０.００４Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２１ ０.００４Ｓtaphylococcus aureus ＡＴＣＣ ２５９２３ ０.０６Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２０ ０.０６Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２３ ０.００８Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２４ ０.００２Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐５４ ０.０６Ｓtaphylococcus epidermidis ＣＭＣ ８３‐１３３ ０.０１５Ｓtaphylococcus epidermidis ＡＴＣＣ １２２２８ ０.０１５Ｓtreptococcus faecalis ＡＴＣＣ ２９２１２ ０.００１Ｓterptococcus faecalis ＣＭＣ ８３‐５３ ０.０１５Ｓtreptococcus faecalis ＩＯ ８３‐２８ ０.０１５ 一般的発酵条件 ミクロモノスポーラ・エキノスポーラ(Micromonospora
echinospora)ＮＲＲＬ−１５８３９又はＮＲＲＬ−１５
９７５の培養を広範な種類の液体培養培地で行うことが
できる。これらの新規な抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤の
生産に有用な培地には、デンプン、糖、糖密(molasse
s)、グリセロ−ル等の如き同化可能な炭素源、タンパク
質、タンパク質加水分解物、ポリペプチド、アミノ酸、
コーン・スティープ・リカー等の如き同化可能な窒素
源、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、硫酸塩、炭酸塩、リン酸塩、塩化物等の如き無機ア
ニオン及びカチオン及び臭素（臭化ナトリウム）又はヨ
ウ素（ヨウ化カリウム）のソースが包含される。ホウ
素、モリブデン、銅等の如き痕跡元素が培地の不純物又
は他の成分として供給される。タンク及びびんでの通気
は、発酵培地の表面に無菌の空気を通すことにより供給
される。タンクでの更なる撹拌は機械的インペラーによ
り与えられる。シリコーンの如き発泡防止剤を必要に応
じて加えることができる。
echinospora)ＮＲＲＬ−１５８３９又はＮＲＲＬ−１５
９７５の培養を広範な種類の液体培養培地で行うことが
できる。これらの新規な抗バクテリア剤及び抗腫瘍剤の
生産に有用な培地には、デンプン、糖、糖密(molasse
s)、グリセロ−ル等の如き同化可能な炭素源、タンパク
質、タンパク質加水分解物、ポリペプチド、アミノ酸、
コーン・スティープ・リカー等の如き同化可能な窒素
源、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、硫酸塩、炭酸塩、リン酸塩、塩化物等の如き無機ア
ニオン及びカチオン及び臭素（臭化ナトリウム）又はヨ
ウ素（ヨウ化カリウム）のソースが包含される。ホウ
素、モリブデン、銅等の如き痕跡元素が培地の不純物又
は他の成分として供給される。タンク及びびんでの通気
は、発酵培地の表面に無菌の空気を通すことにより供給
される。タンクでの更なる撹拌は機械的インペラーによ
り与えられる。シリコーンの如き発泡防止剤を必要に応
じて加えることができる。
【００３２】抗生物質−ＬＬ−Ｅ３３２８８の単離及び
分離の一般的方法 ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質は、全モロミ(whole mas
h）を酢酸エチル又はジクロルメタンの如き有機溶媒で
抽出することによって発酵液(fermentation broth)から
回収される。有機抽出物に含まれる抗生物質複合物は低
級炭化水素からの選択的沈澱により更に精製される。こ
のようにして得られた粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質
複合物は更に精製されそしてシリカゲル、セファデック
ス(Sephadex)RＬＨー２０（ファーマシア・ファイン・
ケミカル社）及びＣ18結合シリカ(C18 bonded silica)
を使用して一連のカラムクロマトグラフィーにより個々
の成分に分離される。
分離の一般的方法 ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質は、全モロミ(whole mas
h）を酢酸エチル又はジクロルメタンの如き有機溶媒で
抽出することによって発酵液(fermentation broth)から
回収される。有機抽出物に含まれる抗生物質複合物は低
級炭化水素からの選択的沈澱により更に精製される。こ
のようにして得られた粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質
複合物は更に精製されそしてシリカゲル、セファデック
ス(Sephadex)RＬＨー２０（ファーマシア・ファイン・
ケミカル社）及びＣ18結合シリカ(C18 bonded silica)
を使用して一連のカラムクロマトグラフィーにより個々
の成分に分離される。
【００３３】本発明を下記の非限定的な特定の実施例に
よって更に詳細に説明する。
よって更に詳細に説明する。
【００３４】実施例 １ ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４、ＮＲＲＬ−１８１４
９からのＬＬ−Ｅ３３２８８複合物の小規模製造 ミクロモノスポーラ・エキノスポーラ・エスエスピー・
カリヘンシス、ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４(Micro
monospora echinospora ssp. calichensis, ＬＬ−E332
88ーUV 784)（ＮＲＲＬ−１８１４９）の培養斜面(slan
t)から、水５ー８ｍlを加えそしてこの斜面の表面を掻
き取ることにより、胞子及び菌糸体(mycelia)を含む懸
濁液を調製した。この懸濁液を使用して下記の組成の無
菌培地５０ｍlに接種した 酵母エキス ０.５％ 肉エキス(beef extract) ０.３％ トリプトース（Ｔryptose） ０.５％ デキストリン ２.４％ デキストロース ０.５％ 炭酸カルシウム ０.４％ 水 １００％ とするのに十分な量 上記培地を２５０ｍlのエルレンマイヤーフラスコ中
で、回転シェーカー上で２００ｒｐｍで２８℃にて３−
４日間インキュベーションし、かくして段階Ｉ接種物を
得た。
９からのＬＬ−Ｅ３３２８８複合物の小規模製造 ミクロモノスポーラ・エキノスポーラ・エスエスピー・
カリヘンシス、ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４(Micro
monospora echinospora ssp. calichensis, ＬＬ−E332
88ーUV 784)（ＮＲＲＬ−１８１４９）の培養斜面(slan
t)から、水５ー８ｍlを加えそしてこの斜面の表面を掻
き取ることにより、胞子及び菌糸体(mycelia)を含む懸
濁液を調製した。この懸濁液を使用して下記の組成の無
菌培地５０ｍlに接種した 酵母エキス ０.５％ 肉エキス(beef extract) ０.３％ トリプトース（Ｔryptose） ０.５％ デキストリン ２.４％ デキストロース ０.５％ 炭酸カルシウム ０.４％ 水 １００％ とするのに十分な量 上記培地を２５０ｍlのエルレンマイヤーフラスコ中
で、回転シェーカー上で２００ｒｐｍで２８℃にて３−
４日間インキュベーションし、かくして段階Ｉ接種物を
得た。
【００３５】段階Ｉ接種物を使用して２５０ｍlのバッ
フル付きフラスコ中の同じ無菌培地に接種しそして回転
シェーカー上で２５０ｒｐｍで２８℃にて２日間インキ
ュベーションし、かくして段階ＩＩ接種物を得た。
フル付きフラスコ中の同じ無菌培地に接種しそして回転
シェーカー上で２５０ｒｐｍで２８℃にて２日間インキ
ュベーションし、かくして段階ＩＩ接種物を得た。
【００３６】段階ＩＩ接種物を使用して下記の組成の無
菌発酵培地１００ｍlに接種した。
菌発酵培地１００ｍlに接種した。
【００３７】 スクロース ２.０％ 硫酸第一鉄７水塩 ０.０１％ 硫酸マグネシウム７水塩 ０.０２％ 炭酸カルシウム ０.２５％ ペプトン ０.４％ 糖密 ０.２５％ ヨウ化カリウム＊ ０.０１％ 水 １００％ とするのに十分な量 ＊臭化カリウムで代替してブロム類似体を製造すること
ができる。
ができる。
【００３８】５００ｍlのバッフル付きフラスコ中の上
記培地を回転シェーカー上で２５０ｒｐｍで２８−３０
℃にて６日間インキュベーションし、その時点で発酵物
を回収した。
記培地を回転シェーカー上で２５０ｒｐｍで２８−３０
℃にて６日間インキュベーションし、その時点で発酵物
を回収した。
【００３９】実施例 ２ ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４を使用するＬＬ−Ｅ３
３２８８複合物の大規模醗酵 ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４（ＮＲＲＬ−１８１４
９）のカルチャーを使用して３段階接種物を調製した。
接種物培地は下記の配合であった。
３２８８複合物の大規模醗酵 ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶ７８４（ＮＲＲＬ−１８１４
９）のカルチャーを使用して３段階接種物を調製した。
接種物培地は下記の配合であった。
【００４０】成分 ｌ当たりの量 炭酸カルシウム ４ｇ ホダッグ(Hodag)RＦＤ８２＊ １ｍl デキストリン ２４ｇ グルコース ５ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトン（Ｔruptone） ５ｇ 肉エキス ３ｇ 水 十分な量 ＊ホダッグRＦＤ８２はシリコーン発泡防止剤である。
【００４１】５００ｍlのフラスコ中の上記無菌の培地
１００ｍlから成る第１段階を３２℃及び２００ｒｐｍ
で２日間インキュベーションした。この第１段階を使用
して上記無菌の培地１０lから成る第２段階に接種し、
これを分当たりもろみ１容量当たり１容量の空気（ＶＶ
Ｍ）の無菌の空気流を使用して小さな発酵槽で３２℃及
び４５０ｒｐｍで２日間生育させた。この第２段階を使
用して上記無菌の培地３００lから成る第３段階に接種
し、これをタンク発酵槽で０.６７ＶＶＭの無菌の空気
流で、３２℃、２００−２５０ｒｐｍで２日間生育させ
た。
１００ｍlから成る第１段階を３２℃及び２００ｒｐｍ
で２日間インキュベーションした。この第１段階を使用
して上記無菌の培地１０lから成る第２段階に接種し、
これを分当たりもろみ１容量当たり１容量の空気（ＶＶ
Ｍ）の無菌の空気流を使用して小さな発酵槽で３２℃及
び４５０ｒｐｍで２日間生育させた。この第２段階を使
用して上記無菌の培地３００lから成る第３段階に接種
し、これをタンク発酵槽で０.６７ＶＶＭの無菌の空気
流で、３２℃、２００−２５０ｒｐｍで２日間生育させ
た。
【００４２】この段階３接種物１５０lを使用して下記
の組成の無菌の１５００lの発酵培地に接種した。
の組成の無菌の１５００lの発酵培地に接種した。
【００４３】成分 ｌ当たりの量 スクロース ２０.０ｇ 硫酸第一鉄７水塩 ０.１ｇ 硫酸マグネシウム７水塩 ０.２ｇ ペプトン ５.０ｇ 糖密 ５.０ｇ ヨウ化カリウム＊ ０.５ｇ 炭酸カルシウム ５.０ｇ ホダッグRＦＤ８２ ５.０ｍl 水 十分な量 ＊臭化カリウムで代替してブロム類似体を生成させるこ
とができる。
とができる。
【００４４】３０℃、０.７５ＶＶＭの無菌の空気流、
８ｐｓｉｇの背圧、１２０ｒｐｍで駆動されるインペラ
ーによる撹拌で５−６日間発酵を行い、この時点でもろ
みを回収した。
８ｐｓｉｇの背圧、１２０ｒｐｍで駆動されるインペラ
ーによる撹拌で５−６日間発酵を行い、この時点でもろ
みを回収した。
【００４５】実施例 ３ ＬＬ−Ｅ３３２８８ーＵＶー７８４（ＮＲＲＬ−１８１
４９）の醗酵からの粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｉ、
ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−
Ｉ及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉの単離 本質的に実施例２に記載の如くして行なわれた ＬＬ−
Ｅ３３２８８γ1−Ｉ１２.４ｇ及びＬＬ−Ｅ３３２８８
δ1−Ｉ１０.５ｇを含有する全回収もろみ(whole harve
st mash)１５００lを、酢酸エチル１５００lと共に３時
間完全に混合し、次いでろ過助剤を加えそして混合物を
ろ過した。有機相を分離し、１００lに濃縮し、２Ｎ水
酸化ナトリウムによりｐＨ６ー７に調節し、水性相をす
てた。有機相を更に２０lに濃縮し、水性相及び界面の
脂肪を除去した。有機相を最終的にゴールデンイエロー
(golden yellow)のシロップになるまで濃縮し、このシ
ロップをその容量の７−８倍の迅速に撹拌されているヘ
キサンにゆっくりと注いだ。ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物
質を含むヘキサン不溶性ゴムを集め、酢酸エチル３lに
再溶解しそして無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥し
た酢酸エチル溶液を小さな容量に濃縮しそしてエーテル
及びヘキサンの添加により沈澱させて、γ1−Ｉ４.９
ｇ、δ1−Ｉ２.８ｇ及び少量のα3−Ｉ及びβ1−Ｉを含
む粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物５３ｇが得られた。
４９）の醗酵からの粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｉ、
ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−
Ｉ及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉの単離 本質的に実施例２に記載の如くして行なわれた ＬＬ−
Ｅ３３２８８γ1−Ｉ１２.４ｇ及びＬＬ−Ｅ３３２８８
δ1−Ｉ１０.５ｇを含有する全回収もろみ(whole harve
st mash)１５００lを、酢酸エチル１５００lと共に３時
間完全に混合し、次いでろ過助剤を加えそして混合物を
ろ過した。有機相を分離し、１００lに濃縮し、２Ｎ水
酸化ナトリウムによりｐＨ６ー７に調節し、水性相をす
てた。有機相を更に２０lに濃縮し、水性相及び界面の
脂肪を除去した。有機相を最終的にゴールデンイエロー
(golden yellow)のシロップになるまで濃縮し、このシ
ロップをその容量の７−８倍の迅速に撹拌されているヘ
キサンにゆっくりと注いだ。ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物
質を含むヘキサン不溶性ゴムを集め、酢酸エチル３lに
再溶解しそして無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥し
た酢酸エチル溶液を小さな容量に濃縮しそしてエーテル
及びヘキサンの添加により沈澱させて、γ1−Ｉ４.９
ｇ、δ1−Ｉ２.８ｇ及び少量のα3−Ｉ及びβ1−Ｉを含
む粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物５３ｇが得られた。
【００４６】実施例 ４ ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｉ、γ1−Ｉ、δ1−Ｉ及びα3
−Ｉの分離 実施例３からの粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物７.２ｇ
を、２つのセプラライト(Sepralyte)Ｃー１８（３５ー
６５ｍl）カラム（２.５×２３ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけ、アセトニトリル：０.２Ｍ水性酢酸アンモ
ニウム（４５：５５）１２ｍl／分で溶出させ、各カラ
ムから６０の２４ｍlの画分を集めた。各画分を、ＴＬ
Ｃ（ＥＭシリカゲル６０Ｆ254プレコートしたアルミニ
ウムシート、０.１ＭＫＨ2ＰＯ4で飽和された酢酸エチ
ル中の３％イソプロパノール溶出、ＵＶ254ｎｍ消光(qu
enchimg)及びＢＩＡによるバイオオートグラフィーによ
り検出）により分析しそして、γ1−Ｉを含む画分をプ
ールし、回転蒸発器で濃縮してアセトニトリルを除去し
た。水性混合物を等容量の酢酸エチルで２回抽出し、酢
酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮しそ
してヘキサンの添加により沈澱させて、β1−Ｉを含む
部分的に精製したＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ（６０％
純度）５０４ｍｇを得た。
−Ｉの分離 実施例３からの粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８複合物７.２ｇ
を、２つのセプラライト(Sepralyte)Ｃー１８（３５ー
６５ｍl）カラム（２.５×２３ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけ、アセトニトリル：０.２Ｍ水性酢酸アンモ
ニウム（４５：５５）１２ｍl／分で溶出させ、各カラ
ムから６０の２４ｍlの画分を集めた。各画分を、ＴＬ
Ｃ（ＥＭシリカゲル６０Ｆ254プレコートしたアルミニ
ウムシート、０.１ＭＫＨ2ＰＯ4で飽和された酢酸エチ
ル中の３％イソプロパノール溶出、ＵＶ254ｎｍ消光(qu
enchimg)及びＢＩＡによるバイオオートグラフィーによ
り検出）により分析しそして、γ1−Ｉを含む画分をプ
ールし、回転蒸発器で濃縮してアセトニトリルを除去し
た。水性混合物を等容量の酢酸エチルで２回抽出し、酢
酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮しそ
してヘキサンの添加により沈澱させて、β1−Ｉを含む
部分的に精製したＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ（６０％
純度）５０４ｍｇを得た。
【００４７】γ1−Ｉより先にカラムから溶出されるα3
−Ｉ及びδ1−Ｉを含む画分を別々にプールしそして処
理して、部分的に精製したα3−Ｉ（１２％純度）８１
２ｍｇと、δ1−Ｉ及びγ1−Ｉの部分的に精製された混
合物１３３６ｍｇ（２２％δ1−Ｉ、２０％γ1−Ｉ）を
得た。
−Ｉ及びδ1−Ｉを含む画分を別々にプールしそして処
理して、部分的に精製したα3−Ｉ（１２％純度）８１
２ｍｇと、δ1−Ｉ及びγ1−Ｉの部分的に精製された混
合物１３３６ｍｇ（２２％δ1−Ｉ、２０％γ1−Ｉ）を
得た。
【００４８】実施例 ５ ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉの精製 部分的に精製したγ1−Ｉ（６６％純度）３０９ｍｇ
を、ヘキサン：ジクロルメタン：エタノール（２：１：
１）と平衡化されたセファデックス(Sephadex)RＬＨー
２０（ヒドロキシプロピル化デキストラン）カラム
（１.５×９０ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけた。
カラムを同じ溶媒系で１.５ｍl／分で溶出し、２５ｍl
の画分を集めそして前記の如くして分析した。純粋なγ
1−Ｉを含む画分をプールしそして前記の如くして淡黄
色(light yellow)残留物となるまで濃縮した。この残留
物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの添加により
沈澱させて、純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ１９４
ｍｇを得た。
を、ヘキサン：ジクロルメタン：エタノール（２：１：
１）と平衡化されたセファデックス(Sephadex)RＬＨー
２０（ヒドロキシプロピル化デキストラン）カラム
（１.５×９０ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけた。
カラムを同じ溶媒系で１.５ｍl／分で溶出し、２５ｍl
の画分を集めそして前記の如くして分析した。純粋なγ
1−Ｉを含む画分をプールしそして前記の如くして淡黄
色(light yellow)残留物となるまで濃縮した。この残留
物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの添加により
沈澱させて、純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ１９４
ｍｇを得た。
【００４９】実施例 ６ ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｉの精製 β1−Ｉを含む部分的に精製したγ1−Ｉ（６１％γ1−
Ｉ、１０％β1−Ｉ）１.０５ｇを、酢酸エチルを充填し
そして酢酸エチルと平衡化されたウォエルム(Woelm)シ
リカ（３２ー６３μ）カラム（１.５×４５ｃｍ）でク
ロマトグラフィーにかけた。このカラムを酢酸エチルに
より３.６ｍl／分で１時間溶出し、次いで溶出剤を酢酸
エチル：メタノール（９７：３）に変え、溶出を２時間
続けた。全溶出の間に１８ｍlの画分を集めた。各画分
を前記の如くして分析し、β1−Ｉを含む画分をプール
しそして処理して８６％純度のＬＬ−Ｅ３３２８８β1
−Ｉ５６ｍｇを得た。
Ｉ、１０％β1−Ｉ）１.０５ｇを、酢酸エチルを充填し
そして酢酸エチルと平衡化されたウォエルム(Woelm)シ
リカ（３２ー６３μ）カラム（１.５×４５ｃｍ）でク
ロマトグラフィーにかけた。このカラムを酢酸エチルに
より３.６ｍl／分で１時間溶出し、次いで溶出剤を酢酸
エチル：メタノール（９７：３）に変え、溶出を２時間
続けた。全溶出の間に１８ｍlの画分を集めた。各画分
を前記の如くして分析し、β1−Ｉを含む画分をプール
しそして処理して８６％純度のＬＬ−Ｅ３３２８８β1
−Ｉ５６ｍｇを得た。
【００５０】γ1−Ｉを含む画分も処理して７４％純度
のＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ３８５ｍｇを得た。
のＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ３８５ｍｇを得た。
【００５１】実施例 ７ ＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉの精製 δ1−Ｉ及びγ1−Ｉの部分的に精製した混合物（γ1−
Ｉ６８４ｍｇ及びδ1−Ｉ５４０ｍｇを含む１.８ｇ）
を、酢酸エチルを充填されそして酢酸エチルと平衡化さ
れたウォエルムシリカ（３２−６３μ）カラム（１.５
×４５ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけた。カラムを
酢酸エチルで３ｍl／分で１時間溶出し、次いで溶出剤
を酢酸エチル：メタノール（９７：３）に変えそして溶
出を２時間続けた。全溶出の間１５ｍlの画分を集め
た。各画分を前記の如くして分析しそして純粋なδ1−
Ｉを含む画分をプールしそして処理して、純粋なＬＬ−
Ｅ３３２８８δ1−Ｉ３６７ｍｇを得た。
Ｉ６８４ｍｇ及びδ1−Ｉ５４０ｍｇを含む１.８ｇ）
を、酢酸エチルを充填されそして酢酸エチルと平衡化さ
れたウォエルムシリカ（３２−６３μ）カラム（１.５
×４５ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけた。カラムを
酢酸エチルで３ｍl／分で１時間溶出し、次いで溶出剤
を酢酸エチル：メタノール（９７：３）に変えそして溶
出を２時間続けた。全溶出の間１５ｍlの画分を集め
た。各画分を前記の如くして分析しそして純粋なδ1−
Ｉを含む画分をプールしそして処理して、純粋なＬＬ−
Ｅ３３２８８δ1−Ｉ３６７ｍｇを得た。
【００５２】γ1−Ｉを含む画分も処理して６５％純度
のＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ５７４ｍｇを得た。
のＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ５７４ｍｇを得た。
【００５３】実施例 ８ ＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｉの精製 α3−Ｉの部分的に精製した試料（α3−Ｉ３１０ｍｇを
含む１.８ｇ）を、ヘキサン：ジクロルメタン：エタノ
ール（２：１：１）と平衡化されたセファデックスRＬ
Ｈー２０カラム（１.５×９０ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけた。カラムを同じ溶媒系で４ｍl／分で溶出
しそして４５の２０ｍlの画分を集め、前記の如くして
分析した。純粋なα3−Ｉを含む画分をプールしそして
前記の如くして濃縮して、淡黄色残留物を得、これを酢
酸エチルに再溶解し、ヘキサンの添加により沈澱させ
て、純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｉ２８９ｍｇを得
た。
含む１.８ｇ）を、ヘキサン：ジクロルメタン：エタノ
ール（２：１：１）と平衡化されたセファデックスRＬ
Ｈー２０カラム（１.５×９０ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけた。カラムを同じ溶媒系で４ｍl／分で溶出
しそして４５の２０ｍlの画分を集め、前記の如くして
分析した。純粋なα3−Ｉを含む画分をプールしそして
前記の如くして濃縮して、淡黄色残留物を得、これを酢
酸エチルに再溶解し、ヘキサンの添加により沈澱させ
て、純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｉ２８９ｍｇを得
た。
【００５４】実施例 ９ ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−ＩからのＬＬ−Ｅ３３２８８
α2−Ｉの製造 部分的に精製したγ1−Ｉ３００ｍｇ（６０％純度）を
メタノール中の２％塩化水素６０ｍlに溶解し、溶液を
室温で６時間放置した。次いで反応混合物を炭酸カリウ
ムの飽和メタノール性溶液の添加により中和した。沈澱
した塩化カリウムろ別し、溶液を濃縮乾固した。残留物
の酢酸エチル可溶性部分を濃縮しそしてヘキサンから沈
澱させて、粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉ１３５ｍｇ
を得た。
α2−Ｉの製造 部分的に精製したγ1−Ｉ３００ｍｇ（６０％純度）を
メタノール中の２％塩化水素６０ｍlに溶解し、溶液を
室温で６時間放置した。次いで反応混合物を炭酸カリウ
ムの飽和メタノール性溶液の添加により中和した。沈澱
した塩化カリウムろ別し、溶液を濃縮乾固した。残留物
の酢酸エチル可溶性部分を濃縮しそしてヘキサンから沈
澱させて、粗製ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉ１３５ｍｇ
を得た。
【００５５】この粗製α2−Ｉをバイオシル(BioーSil)R
（２０ー４０μ）カラム（１.５×２０ｃｍ）でクロマ
トグラフィーにかけ、ジクロルメタン：メタノール（９
６：４）で溶出して、分析的に純粋なＬＬ−Ｅ３３２８
８α2−Ｉ３４ｍｇを得た。ＮＲＲＬ−１５８３９の発
酵から先に単離された少量のＬＬ−Ｅ３３２８８α2−
Ｉは、ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析によればこの実施例に記
載の如くして製造したＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉと同
一であった。
（２０ー４０μ）カラム（１.５×２０ｃｍ）でクロマ
トグラフィーにかけ、ジクロルメタン：メタノール（９
６：４）で溶出して、分析的に純粋なＬＬ−Ｅ３３２８
８α2−Ｉ３４ｍｇを得た。ＮＲＲＬ−１５８３９の発
酵から先に単離された少量のＬＬ−Ｅ３３２８８α2−
Ｉは、ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析によればこの実施例に記
載の如くして製造したＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉと同
一であった。
【００５６】ＬＬ−Ｅ３３２８８、ＢＢＭ−１６７５、
ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１
４７５９、ＰＤ−１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、Ｃ
Ｌ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ
及びＣＬ−１７２４抗生物質／抗腫瘍剤のプソイドアグ
リコンと呼ぶ分解生成物は開示されそして説明されてい
る。
ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１
４７５９、ＰＤ−１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、Ｃ
Ｌ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ
及びＣＬ−１７２４抗生物質／抗腫瘍剤のプソイドアグ
リコンと呼ぶ分解生成物は開示されそして説明されてい
る。
【００５７】或る種の他の抗生物質は本発明に適切であ
る。即ち、 １）エスペラマイシン(Esperamicin)ＢＢＭ−１６７
５、新規な種類の効力のある抗腫瘍性抗生物質。Ｉ．物
理化学的データ及び部分的構造、エム・コニシ等、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、１６０５
（１９８５）［M.Konishi, et al., J. Antibiotics, 3
81，1605 (1985)］。新規な抗腫瘍性抗生物質複合物、
エム・コニシ等、英国特許出願ＧＢ２,１４１,４２５
Ａ、１９８４年５月１５日。
る。即ち、 １）エスペラマイシン(Esperamicin)ＢＢＭ−１６７
５、新規な種類の効力のある抗腫瘍性抗生物質。Ｉ．物
理化学的データ及び部分的構造、エム・コニシ等、ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、１６０５
（１９８５）［M.Konishi, et al., J. Antibiotics, 3
81，1605 (1985)］。新規な抗腫瘍性抗生物質複合物、
エム・コニシ等、英国特許出願ＧＢ２,１４１,４２５
Ａ、１９８４年５月１５日。
【００５８】２）新規な抗腫瘍性抗生物質、ＦＲ−９０
０４０５及びＦＲ−９００４０６。 I、生産菌株の分類、エム・イワミ(M.Iwami)等、ジャー
ナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、８３５（１
９８５）。新規な抗腫瘍性抗生物質ＦＲ−９００４０５
及びＦＲ−９００４０６。ＩＩ、キヨト(S. Kiyoto)
等、ジャーナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、
８４０（１９８５）。 ３）ＰＤ１１４７５９及びＰＤ
１１５０２８、驚くべき効力を持った新規な抗腫瘍性抗
生物質。Ｉ、単離及び特徴付け。アール・エイチ・バン
ジ(R. H. Bunge, et al)等、ジャーナル・オブ・アンチ
バイオチックス、３７、１５６６（１９８４）。
０４０５及びＦＲ−９００４０６。 I、生産菌株の分類、エム・イワミ(M.Iwami)等、ジャー
ナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、８３５（１
９８５）。新規な抗腫瘍性抗生物質ＦＲ−９００４０５
及びＦＲ−９００４０６。ＩＩ、キヨト(S. Kiyoto)
等、ジャーナル・オブ・アンチバイオチックス、３８、
８４０（１９８５）。 ３）ＰＤ１１４７５９及びＰＤ
１１５０２８、驚くべき効力を持った新規な抗腫瘍性抗
生物質。Ｉ、単離及び特徴付け。アール・エイチ・バン
ジ(R. H. Bunge, et al)等、ジャーナル・オブ・アンチ
バイオチックス、３７、１５６６（１９８４）。
【００５９】新規な抗腫瘍性抗生物質ＰＤ１１４７５９
及び関連した誘導体の生物学的活性及び生化学的活性。
デー・ダブリュ・フライ等、インベスティゲーショナル
・ニュー・ドラッグス、４、３（１９８６）［D. W. Fr
y, et al., InvestigationalNew Drugs, 4, 3 (198
6)］。
及び関連した誘導体の生物学的活性及び生化学的活性。
デー・ダブリュ・フライ等、インベスティゲーショナル
・ニュー・ドラッグス、４、３（１９８６）［D. W. Fr
y, et al., InvestigationalNew Drugs, 4, 3 (198
6)］。
【００６０】４）ストレプトミセス エスピー・ＡＴＣ
Ｃ３９３６３（Streptomyces sp. ATCC 39363)により生
産された新規な抗生物質複合物ＣＬ−１５７７Ａ及びＣ
Ｌ−１５７７Ｂ。ヨーロッパ特許出願０,１３２,０８
２,Ａ２。
Ｃ３９３６３（Streptomyces sp. ATCC 39363)により生
産された新規な抗生物質複合物ＣＬ−１５７７Ａ及びＣ
Ｌ−１５７７Ｂ。ヨーロッパ特許出願０,１３２,０８
２,Ａ２。
【００６１】５）ＣＬ−１５７７Ｄ及びＣＬ−１５７７
Ｅ抗生物質抗腫瘍性化合物、それらの製造及び使用。米
国特許第４,５３９,２０３号。
Ｅ抗生物質抗腫瘍性化合物、それらの製造及び使用。米
国特許第４,５３９,２０３号。
【００６２】６）ＣＬ−１７２４抗生物質化合物、それ
らの製造及び使用。米国特許第４,５５４,１６２号。
らの製造及び使用。米国特許第４,５５４,１６２号。
【００６３】上記引用に含まれたＢＢＭ−１６７５、Ｆ
Ｒ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７
５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１
５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ及びＣ
Ｌ−１７２４に関する情報のすべては引照によりここに
加入する。
Ｒ−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７
５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１
５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ及びＣ
Ｌ−１７２４に関する情報のすべては引照によりここに
加入する。
【００６４】本発明は、ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質の
分解生成物及び本発明の背景で言及した抗生物質ＢＢＭ
−１６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０
６、ＰＤ１１４７５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５
７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−
１５７７Ｅ及びＣＬ−１７２４の分解生成物にも関す
る。それらのすべては同じようにして誘導されそしてプ
ソイドアグリコンとして記載される。
分解生成物及び本発明の背景で言及した抗生物質ＢＢＭ
−１６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９００４０
６、ＰＤ１１４７５９、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５
７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−
１５７７Ｅ及びＣＬ−１７２４の分解生成物にも関す
る。それらのすべては同じようにして誘導されそしてプ
ソイドアグリコンとして記載される。
【００６５】これらのプソイドアグリコンはすべて抗バ
クテリア剤及び抗腫瘍剤として活性であり、同じ一般的
方法により誘導される。分かりやすくするために、その
方法及び活性をヨウ素化されたＬＬ−Ｅ３３２８８抗生
物質に関して説明する。しかしながら、同様な方法及び
活性を抗生物質の他の改変、例えば、臭素化されたＬＬ
−Ｅ３３２８８抗生物質について述べることができるこ
とは当業者には明らかである。
クテリア剤及び抗腫瘍剤として活性であり、同じ一般的
方法により誘導される。分かりやすくするために、その
方法及び活性をヨウ素化されたＬＬ−Ｅ３３２８８抗生
物質に関して説明する。しかしながら、同様な方法及び
活性を抗生物質の他の改変、例えば、臭素化されたＬＬ
−Ｅ３３２８８抗生物質について述べることができるこ
とは当業者には明らかである。
【００６６】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
は標準寒天希釈法により試験すると、抗バクテリア剤と
して活性である。この活性はグラム陽性菌及びグラム陰
性菌のスペクトルに対して決定された。２倍ずつ減少し
ていく濃度のプソイドアグリコンを含有するミューラー
ーヒントン寒天をペトリプレートに注いだ。この寒天表
面に、鋼製のレプリケーティング装置によりバクテリア
の１ー５×１０6個のコロニー形成単位を接種した。約
３５℃で約１８時間のインキュベーションの後バクテリ
ア菌株の生育を抑制するｍｃｇ／ｍlで表したプソイド
アグリコンの最低濃度を、その菌株についての最小阻止
濃度（ＭＩＣ）として記録した。結果を表ＩＩＩに示
す。
は標準寒天希釈法により試験すると、抗バクテリア剤と
して活性である。この活性はグラム陽性菌及びグラム陰
性菌のスペクトルに対して決定された。２倍ずつ減少し
ていく濃度のプソイドアグリコンを含有するミューラー
ーヒントン寒天をペトリプレートに注いだ。この寒天表
面に、鋼製のレプリケーティング装置によりバクテリア
の１ー５×１０6個のコロニー形成単位を接種した。約
３５℃で約１８時間のインキュベーションの後バクテリ
ア菌株の生育を抑制するｍｃｇ／ｍlで表したプソイド
アグリコンの最低濃度を、その菌株についての最小阻止
濃度（ＭＩＣ）として記録した。結果を表ＩＩＩに示
す。
【００６７】 表 ＩＩＩ 生 物 最小阻止濃度 (mcg/ml)Ｅscherichia coli ＣＭＣ ８４‐１１ ２Ｅscherichia coli Ｎo. ３１１（ＭＰ） １Ｅscherichia coli ＡＴＣＣ ２５９２２ １Ｋlebsiella pneumoniae ＣＭＣ ８４‐５ ２Ｋlebsiella pneumoniae ＡＤ（ＭＰ） ０.５Ｅnterobacter cloacae ＣＭＣ ８４‐４ ４Ｅnterobacter aerogenes ＩＯ ８３‐４４ ４Ｓerratia marcescens ＣＭＣ ８３‐２７ １Ｓerratia marcescens Ｆ‐３５（ＭＰ） ２Ｍorganella morganii ＩＯ ８３‐１８ １Ｐrovidencia stuartii ＣＭＣ ８３‐８２ ２Ｃitrobacter diversus Ｋ‐８２‐２４ ２Ｃitrobacter freundii ＩＯ ８３‐１３ １Ａcinetobacter sp. ＣＭＣ ８３‐８９ ２Ａcinetobacter sp ＩＯ ８３‐４９ ４Ｐseudomonas aeruginosa １２‐４‐４（ＭＰ） ２Ｐseudomonas aeruginosa ＡＴＣＣ ２７８５３ １Ｓtaphylococcus aureus Ｓmith（ＭＰ） ０.０３Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２１ ０.１２Ｓtaphylococcus aureus ＡＴＣＣ ２５９２３ ０.２５Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２０ ０.２５Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２３ ０.１２Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐２４ ０.０３Ｓtaphylococcus aureus ＳＳＣ ８２‐５４ ０.１２Ｓtaphylococcus epidermidis ＣＭＣ ８３‐１３３ ０.００８Ｓtaphylococcus epidermidis ＡＴＣＣ １２２２８ ０.０１５Ｓtreptococcus faecalis ＡＴＣＣ ２９２１２ ０.１２Ｓterptococcus faecalis ＣＭＣ ８３‐５３ ０.５Ｓtreptococcus faecalis ＩＯ ８３‐２８ ０.１２ このプソイドアグリコンは生化学的誘発分析 （Biochemical Induction Assay）（BIA）で決定して抗
腫瘍剤としても活性である。この生化学的誘発アッセイ
は、試薬が直接又は間接にＤＮＡ損傷を開始する能力を
特定的に測定するバクテリアアッセイシステム（bacter
ial assay system）である。この試験のためのインディ
ケータ生物はＤＮＡ損傷事象（DNA damaging event）が
酵素βーガラクトシダーゼのための遺伝子の発現をもた
らすような遺伝学的構成の、大腸菌λ溶原（E. coli-la
mda lysogen）である。この酵素はＤＮＡ損傷が起こっ
たことの指示として生化学的アッセイにより定性的に又
は定量的に決定することができる。
腫瘍剤としても活性である。この生化学的誘発アッセイ
は、試薬が直接又は間接にＤＮＡ損傷を開始する能力を
特定的に測定するバクテリアアッセイシステム（bacter
ial assay system）である。この試験のためのインディ
ケータ生物はＤＮＡ損傷事象（DNA damaging event）が
酵素βーガラクトシダーゼのための遺伝子の発現をもた
らすような遺伝学的構成の、大腸菌λ溶原（E. coli-la
mda lysogen）である。この酵素はＤＮＡ損傷が起こっ
たことの指示として生化学的アッセイにより定性的に又
は定量的に決定することができる。
【００６８】エルスプル・アール及びヤルモリンスキー
・エム、エンビロンメンタル・ムタジェネシス、１、６
５（１９７９）［（Elespuru,R.and Yarmolinsky, M.,
Environmental Mutagenesis, 1, 65 (1979)］により開
示された定量的液体ＢＩＡの改変された変法を使用して
これらの化合物を評価した。
・エム、エンビロンメンタル・ムタジェネシス、１、６
５（１９７９）［（Elespuru,R.and Yarmolinsky, M.,
Environmental Mutagenesis, 1, 65 (1979)］により開
示された定量的液体ＢＩＡの改変された変法を使用して
これらの化合物を評価した。
【００６９】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
の抗腫瘍剤活性は下記の試験により更に証明された。
の抗腫瘍剤活性は下記の試験により更に証明された。
【００７０】リンパ性白血病Ｐ３８８試験(Lymphocytic
leukemia P388 TEST) 使用した動物は、すべて１つの性であり、体重が最小で
１７ｇであり、その差はすべて３ｇの範囲内にあるＢＤ
ＦＬ マウスであった。試験群当たり５または６匹を使
用した。腫瘍移植は、リンパ性白血病Ｐ３８８の細胞１
０6個を含有する希釈腹水（dilute ascitic fluid）０.
５ｍlの腹腔内注入によった。試験化合物は、標準生理
食塩水中の０.２％クルーセル(Klucel)において０.５ｍ
lの容量で指示された用量で、腫瘍移植の日から１、
５、９日目に腹腔内に投与した。動物の体重を測りそし
て生存動物を３０日間規則的に記録した。寿命の百分率
増加を、処理マウス／未処理マウスの生存時間の比から
計算した。結果を表ＩＶに示す。
leukemia P388 TEST) 使用した動物は、すべて１つの性であり、体重が最小で
１７ｇであり、その差はすべて３ｇの範囲内にあるＢＤ
ＦＬ マウスであった。試験群当たり５または６匹を使
用した。腫瘍移植は、リンパ性白血病Ｐ３８８の細胞１
０6個を含有する希釈腹水（dilute ascitic fluid）０.
５ｍlの腹腔内注入によった。試験化合物は、標準生理
食塩水中の０.２％クルーセル(Klucel)において０.５ｍ
lの容量で指示された用量で、腫瘍移植の日から１、
５、９日目に腹腔内に投与した。動物の体重を測りそし
て生存動物を３０日間規則的に記録した。寿命の百分率
増加を、処理マウス／未処理マウスの生存時間の比から
計算した。結果を表ＩＶに示す。
【００７１】 表 ＩＶ リンパ性白血病 Ｐ３８８試験 化合物 投与量(mg／kg) ％ 寿命増加 ＬＬ‐Ｅ３３２８８のプソイド ２００ １６４ アグリコン １６０ １７８ ８０ １５７ ４０ １５４ ２０ １５４ １０ １４６ ５ １２５ ２.５ １２７ １.２ １１４実施例 １０ ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの製造 部分的に生成したＬＬ−Ｅ３３２８８γ1ーＩ（４０８
ｍｇ、６５％純度、５ｍl中）のメタノール性溶液を、
ジクロルメタン及びメタノールで予め洗浄されそしてメ
タノールと平衡化されたダウエックス(Dowex)R５０Ｗ−
Ｘ８（５０−１００メッシュ、水素形）を充填したカラ
ム（１.５×３０ｃｍ）にゆっくりと通した。カラム流
出液をＴＬＣ［ホワットマンＬＨＰーＫＰリニアーＫ高
性能シリカゲルプレコーテッドガラスプレート（Whatma
n LHPーKP Linear-k high performance silica gel prec
oated glass plates）、ｐＨ７で緩衝化された０.１Ｍ
リン酸塩で飽和した酢酸エチル溶出、ＵＶ254ｎｍ消光
及び８％水性リン酸中＃５酢酸第二銅の溶液を噴霧した
後のチャーリング(charring)により検出］により監視し
そしてγ1−Ｉが検出されなくなるまでカラムに再循環
して戻した。カラムをメタノール４lで一夜溶出し、溶
出液を集めそして真空内で濃縮乾固した。淡黄色の残留
物をｔーブチルメチルエーテルで摩砕し（triturate）
そして不溶物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの
添加により沈澱させて、８２％純度のＬＬ−Ｅ３３２８
８のプソイドアグリコン１２１ｍｇを得た。
ｍｇ、６５％純度、５ｍl中）のメタノール性溶液を、
ジクロルメタン及びメタノールで予め洗浄されそしてメ
タノールと平衡化されたダウエックス(Dowex)R５０Ｗ−
Ｘ８（５０−１００メッシュ、水素形）を充填したカラ
ム（１.５×３０ｃｍ）にゆっくりと通した。カラム流
出液をＴＬＣ［ホワットマンＬＨＰーＫＰリニアーＫ高
性能シリカゲルプレコーテッドガラスプレート（Whatma
n LHPーKP Linear-k high performance silica gel prec
oated glass plates）、ｐＨ７で緩衝化された０.１Ｍ
リン酸塩で飽和した酢酸エチル溶出、ＵＶ254ｎｍ消光
及び８％水性リン酸中＃５酢酸第二銅の溶液を噴霧した
後のチャーリング(charring)により検出］により監視し
そしてγ1−Ｉが検出されなくなるまでカラムに再循環
して戻した。カラムをメタノール４lで一夜溶出し、溶
出液を集めそして真空内で濃縮乾固した。淡黄色の残留
物をｔーブチルメチルエーテルで摩砕し（triturate）
そして不溶物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの
添加により沈澱させて、８２％純度のＬＬ−Ｅ３３２８
８のプソイドアグリコン１２１ｍｇを得た。
【００７２】８２％純度のＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイ
ドアグリコンを、ジクロルメタン：メタノール（９５：
５）で溶出するバイオシルRＡ（２０−４４μ）カラム
（０.９×２５ｃｍ）でのクロマトグラフィーにより更
に精製して、分析的に純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８のプソ
イドアグリコン７３ｍｇを得た。
ドアグリコンを、ジクロルメタン：メタノール（９５：
５）で溶出するバイオシルRＡ（２０−４４μ）カラム
（０.９×２５ｃｍ）でのクロマトグラフィーにより更
に精製して、分析的に純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８のプソ
イドアグリコン７３ｍｇを得た。
【００７３】実施例 １１ ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンのトリフェニ
ルホスフィン反応生成物の製造 ８０％純度のＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
の試料２７９ｍｇを、ジクロルメタン４０ｍlとメタノ
ール２０ｍlの混合物に溶解した。トリフェニルホスフ
ィン１４０ｍｇを加えそして反応混合物をアルゴン下に
３時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮乾固した。残留
物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの添加により
沈澱させた。沈澱をジクロルメタン：メタノール（９
５：５）で溶出する、ウォエルムシリカ（３２−６３
μ）カラムでのクロマトグラフィーにかけた。所望の物
質を含む画分［Ｒf ０.２３、ホワットマンＬＨＰーＫ
ＰリニアーＫ高性能シリカゲルプレコーテッドガラスプ
レート、ジクロルメタン：メタノール（９４：６）溶
出］をプールしそして濃縮及び沈澱により処理して、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの９０％純度の
トリフェニルホスフィン反応生成物６７ｍｇを得た。
ルホスフィン反応生成物の製造 ８０％純度のＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
の試料２７９ｍｇを、ジクロルメタン４０ｍlとメタノ
ール２０ｍlの混合物に溶解した。トリフェニルホスフ
ィン１４０ｍｇを加えそして反応混合物をアルゴン下に
３時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮乾固した。残留
物を酢酸エチルに再溶解しそしてヘキサンの添加により
沈澱させた。沈澱をジクロルメタン：メタノール（９
５：５）で溶出する、ウォエルムシリカ（３２−６３
μ）カラムでのクロマトグラフィーにかけた。所望の物
質を含む画分［Ｒf ０.２３、ホワットマンＬＨＰーＫ
ＰリニアーＫ高性能シリカゲルプレコーテッドガラスプ
レート、ジクロルメタン：メタノール（９４：６）溶
出］をプールしそして濃縮及び沈澱により処理して、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの９０％純度の
トリフェニルホスフィン反応生成物６７ｍｇを得た。
【００７４】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコン
の９０％純度トリフェニルホスフィン反応生成物を、ｐ
Ｈ７の０．１Ｍリン酸塩緩衝剤で飽和した酢酸エチルで
溶出する、２つのアナルテック(Analtech）、２０×２
０ｃｍ、２０００μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッド
プレートによる調整用ＴＬＣにより更に精製した。主Ｕ
Ｖ254ｎｍ消光バンド（Ｒf０.４）を処理して、ＬＬ−
Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの分析的に純粋なト
リフェニルホスフィン反応生成物４９ｍｇを得た。
の９０％純度トリフェニルホスフィン反応生成物を、ｐ
Ｈ７の０．１Ｍリン酸塩緩衝剤で飽和した酢酸エチルで
溶出する、２つのアナルテック(Analtech）、２０×２
０ｃｍ、２０００μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッド
プレートによる調整用ＴＬＣにより更に精製した。主Ｕ
Ｖ254ｎｍ消光バンド（Ｒf０.４）を処理して、ＬＬ−
Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの分析的に純粋なト
リフェニルホスフィン反応生成物４９ｍｇを得た。
【００７５】実施例 １２ ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンをトリフェニ
ルホスフィンと反応させることから誘導された生成物の
メタノール性炭酸カリウム、次いで過剰の無水酢酸との
反応生成物の製造 ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの９０％純度
トリフェニルホスフィン反応生成物の試料４６ｍｇを、
メタノール４ｍlに溶解しそして炭酸カリウムの飽和メ
タノール性溶液４ｍlを加えた。反応混合物を室温で５
分間放置し、次いで無水酢酸４００μlで処理しそして
４℃で２時間放置した。メタノール性炭酸カリウムによ
る中和の後、反応混合物を真空中で濃縮乾固した。残留
物を、ジクロルメタン：メタノール（９４：６）で溶出
する、２つのアナルテック、２０×２０ｃｍ、２０００
μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッドプレートでのクロ
マトグラフィーにかけた。お互いに近接してクロマトグ
ラフされる２つの主ＵＶ254ｎｍ消光、ＵＶ366ｎｍ青色
蛍光バンドを一緒に処理し、そして混合物を、同じ溶媒
系で溶出する、４つのアナルテック、２０×２０ｃｍ、
２０００μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッドプレート
でのクロマトグラフィーにかけて結晶性化合物７．５ｍ
ｇを得、これをメタノールとクロロホルムの混合物から
再結晶させて、Ｘ線結晶学に好適な結晶を得た。
ルホスフィンと反応させることから誘導された生成物の
メタノール性炭酸カリウム、次いで過剰の無水酢酸との
反応生成物の製造 ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの９０％純度
トリフェニルホスフィン反応生成物の試料４６ｍｇを、
メタノール４ｍlに溶解しそして炭酸カリウムの飽和メ
タノール性溶液４ｍlを加えた。反応混合物を室温で５
分間放置し、次いで無水酢酸４００μlで処理しそして
４℃で２時間放置した。メタノール性炭酸カリウムによ
る中和の後、反応混合物を真空中で濃縮乾固した。残留
物を、ジクロルメタン：メタノール（９４：６）で溶出
する、２つのアナルテック、２０×２０ｃｍ、２０００
μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッドプレートでのクロ
マトグラフィーにかけた。お互いに近接してクロマトグ
ラフされる２つの主ＵＶ254ｎｍ消光、ＵＶ366ｎｍ青色
蛍光バンドを一緒に処理し、そして混合物を、同じ溶媒
系で溶出する、４つのアナルテック、２０×２０ｃｍ、
２０００μ層、シリカゲルＧＦプレコーテッドプレート
でのクロマトグラフィーにかけて結晶性化合物７．５ｍ
ｇを得、これをメタノールとクロロホルムの混合物から
再結晶させて、Ｘ線結晶学に好適な結晶を得た。
【００７６】実施例 １３ ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉの製造 ヨウ化メチル１０ｍlをエタノール２５ｍl中のＬＬ−Ｅ
３３２８８γ1ーＩ１２６ｍｇの溶液に加えそして混合
物を氷／水浴で冷却した。これに水素化ホウ素ナトリウ
ムの０．１Ｍエタノール性溶液１２ｍlを２ｍlずつ加え
た。反応が終了すると、ボレート錯体を酢酸の４Ｍエタ
ノール性溶液１．２ｍlの添加により分解した。次いで
反応混合物をゴールデンイエロー(golden yellow)の残
留物になるまで濃縮し、これを酢酸エチルに再溶解し、
次いで再濃縮乾固した。この残留物を酢酸エチルに再溶
解し、不溶物をろ別し、ろ液を小容量になるまで濃縮し
そしてヘキサンの添加により沈澱させた。粗製ジヒドロ
ーＬＬ−Ｅ３３２８８γ1ーＩ３０１ｍｇを、ジクロル
メタン：メタノール（９２：８）で溶出する、バイオシ
ルＡ（２０−４４μ）カラムでのクロマトグラフィーに
より精製して、２つのレジオ異性体（regio isomer)の
３０：７０混合物として純粋なジヒドローＬＬ−Ｅ３３
２８８γ1−Ｉ５７ｍｇを得た。
３３２８８γ1ーＩ１２６ｍｇの溶液に加えそして混合
物を氷／水浴で冷却した。これに水素化ホウ素ナトリウ
ムの０．１Ｍエタノール性溶液１２ｍlを２ｍlずつ加え
た。反応が終了すると、ボレート錯体を酢酸の４Ｍエタ
ノール性溶液１．２ｍlの添加により分解した。次いで
反応混合物をゴールデンイエロー(golden yellow)の残
留物になるまで濃縮し、これを酢酸エチルに再溶解し、
次いで再濃縮乾固した。この残留物を酢酸エチルに再溶
解し、不溶物をろ別し、ろ液を小容量になるまで濃縮し
そしてヘキサンの添加により沈澱させた。粗製ジヒドロ
ーＬＬ−Ｅ３３２８８γ1ーＩ３０１ｍｇを、ジクロル
メタン：メタノール（９２：８）で溶出する、バイオシ
ルＡ（２０−４４μ）カラムでのクロマトグラフィーに
より精製して、２つのレジオ異性体（regio isomer)の
３０：７０混合物として純粋なジヒドローＬＬ−Ｅ３３
２８８γ1−Ｉ５７ｍｇを得た。
【００７７】実施例 １４ ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコンの
製造 ヨウ化メチル１０ｍlをエタノール２５ｍl中のＬＬ−Ｅ
３３２８８ープソイドアグリコン１１２ｍｇの溶液に加
えそしてこの混合物を氷／水浴で冷却した。これに０.
０２５Ｍエタノール性水素化ホウ素ナトリウム１２ｍl
を２ｍlずつ加えた。反応が終了すると、ボレート錯体
を酢酸の１Ｍエタノール性溶液の添加により分解した。
次いで反応混合物をゴールデンイエロー（golden yello
w）の残留物になるまで濃縮し、酢酸エチルに再溶解
し、次いで再濃縮乾固した。この残留物を酢酸エチルに
再溶解し、不溶物をろ別し、ろ液を小容量になるまで濃
縮しそしてヘキサンの添加により沈澱させた。粗製ジヒ
ドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコン１２８
ｍｇを、ジクロルメタン：メタノール（９７：３）で溶
出する、バイオシルＡ（２０−４４μ）カラムでのクロ
マトグラフィーにより精製して、純粋なジヒドローＬＬ
−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコン４２ｍｇを得た。
製造 ヨウ化メチル１０ｍlをエタノール２５ｍl中のＬＬ−Ｅ
３３２８８ープソイドアグリコン１１２ｍｇの溶液に加
えそしてこの混合物を氷／水浴で冷却した。これに０.
０２５Ｍエタノール性水素化ホウ素ナトリウム１２ｍl
を２ｍlずつ加えた。反応が終了すると、ボレート錯体
を酢酸の１Ｍエタノール性溶液の添加により分解した。
次いで反応混合物をゴールデンイエロー（golden yello
w）の残留物になるまで濃縮し、酢酸エチルに再溶解
し、次いで再濃縮乾固した。この残留物を酢酸エチルに
再溶解し、不溶物をろ別し、ろ液を小容量になるまで濃
縮しそしてヘキサンの添加により沈澱させた。粗製ジヒ
ドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコン１２８
ｍｇを、ジクロルメタン：メタノール（９７：３）で溶
出する、バイオシルＡ（２０−４４μ）カラムでのクロ
マトグラフィーにより精製して、純粋なジヒドローＬＬ
−Ｅ３３２８８ープソイドアグリコン４２ｍｇを得た。
【図１】ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグ
リコンの紫外線吸収スペクトル図である。
リコンの紫外線吸収スペクトル図である。
【図２】ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグ
リコンの赤外線吸収スペクトルである。
リコンの赤外線吸収スペクトルである。
【図３】ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグ
リコンのプロトン磁気共鳴スペクトルである。
リコンのプロトン磁気共鳴スペクトルである。
【図４】ジヒドローＬＬ−Ｅ３３２８８ープソイドアグ
リコンの炭素13磁気共鳴スペクトルである。
リコンの炭素13磁気共鳴スペクトルである。
【図５】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの紫
外線吸収スペクトルである。
外線吸収スペクトルである。
【図６】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの赤
外線吸収スペクトルである。
外線吸収スペクトルである。
【図７】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンのプ
ロトン磁気共鳴スペクトルである。
ロトン磁気共鳴スペクトルである。
【図８】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンの炭
素13磁気共鳴スペクトルである。
素13磁気共鳴スペクトルである。
【図９】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンとト
リフェニルホスフィンとの反応生成物の紫外線吸収スペ
クトルである。
リフェニルホスフィンとの反応生成物の紫外線吸収スペ
クトルである。
【図１０】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンと
トリフェニルホスフィンの反応生成物の赤外線吸収スペ
クトルである。
トリフェニルホスフィンの反応生成物の赤外線吸収スペ
クトルである。
【図１１】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンと
トリフェニルホスフィンの反応生成物のプロトン磁気共
鳴スペクトルである。
トリフェニルホスフィンの反応生成物のプロトン磁気共
鳴スペクトルである。
【図１２】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンと
トリフェニルホスフィンの反応生成物の炭素13磁気共鳴
スペクトルである。
トリフェニルホスフィンの反応生成物の炭素13磁気共鳴
スペクトルである。
【図１３】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンを
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物の紫外線吸収スペクトルである。
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物の紫外線吸収スペクトルである。
【図１４】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンを
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物の赤外線吸収スペクトルである。
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物の赤外線吸収スペクトルである。
【図１５】ＬＬ−Ｅ３３２８８のプソイドアグリコンを
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物のプロトン磁気共鳴スペクトルであ
る。
トリフェニルホスフィンと反応させ、次いで炭酸ナトリ
ウムのメタノール性溶液及び過剰の無水酢酸と反応させ
て得られた生成物のプロトン磁気共鳴スペクトルであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｈ 15/26 Ｃ０７Ｈ 15/26 //(Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:29） (72)発明者 マイケル・グリーンスタイン アメリカ合衆国ニユーヨーク州10901サフ アーン・ローナレイン45 (72)発明者 デビツド・ポール・ラベダ アメリカ合衆国イリノイ州61614ペオリ ア・ウエストピントウラコート2320 (72)発明者 アメデオ・アレクサンダー・フアンチーニ アメリカ合衆国ニユーヨーク州10956ニユ ーシテイ・ザグレン２
Claims (10)
- 【請求項１】 化合物ジヒドロ−ＢＢＭ−１６７５、ジ
ヒドロ−ＦＲ−９００４０５、ジヒドロ−ＦＲ−９００
４０６、ジヒドロ−ＰＤ−１１４７５９、ジヒドロ−Ｐ
Ｄ−１１５０２８、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ａ、ジヒ
ドロ−ＣＬ−１５７７Ｂ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７
Ｄ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｅ又はジヒドロ−ＣＬ−
１７２４。 - 【請求項２】 エタノール中のＢＢＭ−１６７５、ＦＲ
−９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１４７
５９、ＰＤ−１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−
１５７７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又は
ＣＬ−１７２４の溶液及びヨウ化アルキルを０℃で水素
化ホウ素ナトリウムで処理し、酢酸で分解し、酢酸エチ
ル溶液からヘキサンで沈澱させ、そしてクロマトグラフ
ィーにより精製してジヒドロ−ＢＢＭ−１６７５、ジヒ
ドロ−ＦＲ−９００４０５、ジヒドロ−ＦＲ−９００４
０６、ジヒドロ−ＰＤ−１１４７５９、ジヒドロ−ＰＤ
−１１５０２８、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ａ、ジヒド
ロ−ＣＬ−１５７７Ｂ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｄ、
ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｅ又はジヒドロ−ＣＬ−１７
２４を得ることにより製造された化合物ジヒドロ−ＢＢ
Ｍ−１６７５、ジヒドロ−ＦＲ−９００４０５、ジヒド
ロ−ＦＲ−９００４０６、ジヒドロ−ＰＤ−１１４７５
９、ジヒドロ−ＰＤ−１１５０２８、ジヒドロ−ＣＬ−
１５７７Ａ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｂ、ジヒドロ−
ＣＬ−１５７７Ｄ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｅ又はジ
ヒドロ−ＣＬ−１７２４。 - 【請求項３】 化合物、ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９０
０４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１４７５９、
ＰＤ−１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７
７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−
１７２４のプソイドアグリコン。 - 【請求項４】 炭素、窒素、臭素及び無機塩の同化可能
なソースを含有する液体培地中で、該培地に実質的な抗
生物質活性が付与されるまで、生物、ＮＲＲＬ−１５８
３９のミクロモノスポーラ・エキノスポーラ・エスエス
ピー・カリヘンシス突然変異体ＮＲＲＬ−１８１４９
（Micromonospora echinospora ssp. calichensis muta
nt NRRＬ−18149)又はＮＲＲＬ−１８１４９の突然変異
体を好気的に発酵させ、次いでそれから下記の抗生物質
を回収することより成る、抗生物質ＬＬ−Ｅ３３２８８
α1−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３
３２８８α3−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α4−Ｂｒ、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８β1−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β2−
Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｂｒを製造する方法。 - 【請求項５】 生物、ＮＲＲＬ−１５８３９のミクロモ
ノスポーラ・エキノスポーラ・エスエスピー・カリヘン
シス・突然変異体ＮＲＲＬ−１８１４９（Micromonospo
ra echinospora ssp. calichensis mutant NRRＬ−1814
9)又はＮＲＲＬ−１８１４９の突然変異体の生育可能な
カルチャーを接種された、炭素、窒素、臭素及び無機塩
の同化可能なソースを含有する液体培地を好気的に発酵
させ、この発酵カルチャーを約９０ー２００時間の期間
約２４ー３２℃の温度に維持し、もろみを回収しそして
下記抗生物質を抽出することより成る、抗生物質ＬＬ−
Ｅ３３２８８α1−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｂ
ｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α3−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８
８α4−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ
３３２８８β2−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｂｒを
製造する方法。 - 【請求項６】 炭素、窒素、ヨウ素及び無機塩の同化可
能なソースを含有する液体培地中で、該培地に実質的な
抗生物質活性が付与されるまで、生物、ＮＲＲＬ−１５
８３９のミクロモノスポーラ・エキノスポーラ・エスエ
スピー・カリヘンシス突然変異体ＮＲＲＬ−１８１４９
（Micromonospora echinospora ssp.calichensis mutan
t NRRＬ−18149)又はＮＲＲＬ−１８１４９の突然変異
体を好気的に発酵させ、次いでそれから下記の抗生物質
を回収することより成る、抗生物質ＬＬ−Ｅ３３２８８
α1−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２
８８α3−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３
３２８８β2−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ1−Ｉ及びＬＬ
−Ｅ３３２８８δ1−Ｉを製造する方法。 - 【請求項７】 生物、ＮＲＲＬ−１５８３９のミクロモ
ノスポーラ・エキノスポーラ・エスエスピー・カリヘン
シス突然変異体ＮＲＲＬ−１８１４９（Micromonospora
echinospora ssp. calichensis mutant NRRＬ−18149)
又はＮＲＲＬ−１８１４９の突然変異体の生育可能なカ
ルチャーを接種された、炭素、窒素、ヨウ素及び無機塩
の同化可能なソースを含有する液体培地を好気的に発酵
させ、この発酵カルチャーを約９０−２００時間の期間
約２４−３２℃の温度に維持し、もろみを回収しそして
下記抗生物質を抽出することより成る、抗生物質ＬＬ−
Ｅ３３２８８α1−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α2−Ｉ、Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８α3−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β1−
Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β2−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８
γ1−Ｉ及びＬＬ−Ｅ３３２８８δ1−Ｉを製造する方
法。 - 【請求項８】 ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９００４０
５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１４７５９、ＰＤ−
１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、
ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−１７２
４のエタノール性溶液にヨウ化アルキルを加え、この溶
液を氷浴温度に冷却し、水素化ホウ素ナトリウムのエタ
ノール性溶液を加え、酢酸の添加によりボレート錯体を
分解し、酢酸エチル溶液からヘキサンの添加により沈澱
させそしてクロマトグラフィーにより精製することより
成る、ジヒドロ−ＢＢＭ−１６７５、ジヒドロ−ＦＲ−
９００４０５、ジヒドロ−ＦＲ−９００４０６、ジヒド
ロ−ＰＤ−１１４７５９、ジヒドロ−ＰＤ−１１５０２
８、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ａ、ジヒドロ−ＣＬ−１
５７７Ｂ、ジヒドロ−ＣＬ−１５７７Ｄ、ジヒドロ−Ｃ
Ｌ−１５７７Ｅ又はジヒドロ−ＣＬ−１７２４を製造す
る方法。 - 【請求項９】 ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９００４０
５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ−１１４７５９、ＰＤ−
１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、
ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−１７２
４のメタノール性溶液をカチオン交換樹脂と反応させ、
次いでクロマトグラフィーにより精製することより成
る、ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−９００４０５、ＦＲ−９
００４０６、ＰＤ−１１４７５９、ＰＤ−１１５０２
８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７７Ｂ、ＣＬ−１５
７７Ｄ、ＣＬ−１５７７Ｅ又はＣＬ−１７２４のプソイ
ドアグリコンを製造する方法。 - 【請求項１０】 請求項１〜３のいずれかに記載された
少なくとも１種の化合物を有効成分として含む、温血動
物のバクテリア感染症の処置剤。
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